CN110393697A - 一种冻肽精华及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种冻肽精华及其制备方法，涉及生物细胞护肤品技术领域，包括间充质干细胞冻肽溶液以及混合植物提取物溶液，混合植物提取物溶液包括一定配比的烟酰胺、马齿苋提取物、积雪草提取物、泛醇、透明质酸钠以及浮游物提取物，提取物冻干粉使得干细胞提取物的活性及功能得到了保存和利用，有效延长其作用效果，并且通过与相应配比的烟酰胺、马齿苋提取物、积雪草提取物、泛醇、透明质酸钠、浮游物提取物在适当温度环境进行混合，从而使得冻肽精华达到有效保湿、淡化色斑、去皱等修复皮肤问题的疗效。

Description

一种冻肽精华及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物细胞护肤品技术领域，尤其涉及一种冻肽精华及其制备方法。
背景技术
干细胞对于女性的皮肤至关重要，皮肤保持年轻、完整以及出现问题以后的修复都要靠干细胞，而且很多顽固性的皮肤问题一般的护肤品解决不了，如果从根本上解决相应的皮肤问题主要依赖于修复皮肤，间充质干细胞的皮肤修复能力就很强，而且近几年在皮肤损伤领域的研究也越来越广泛，商业应用效果也很显著。
间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSC)属于多能干细胞，具有多向分化、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控等多种功能，主要存在于胎盘、脐带、脂肪和骨髓中；间充质干细胞在生长过程中会分泌几百种细胞因子，这些细胞因子能够促进皮肤组织分化、血管新生以及肉芽组织的生长，从而促进损伤皮肤组织的结构重建与再生修复，减少疤痕组织的产生。用于各种急慢性皮肤损伤、湿疹、过敏及溃疡的修复。而且能够调节局部组织的免疫功能，减少创面组织的细菌感染及炎症反应。
提取物包括细胞分泌的直径为30～150nm的小囊泡，内含来源于细胞相关的蛋白质与核苷酸等生物分子，在细胞交流间起重要作用。提取物是细胞分泌的小生物膜囊泡，与间充质干细胞相比，提取物体积更小、复杂性更低，易于生产和存储，间充质干细胞提取物富含生物活性分子，如蛋白质和RNA，存在于提取物中的许多蛋白质都属于酶类，具有催化活性。但是目前普遍存在的一个问题是细胞因子和提取物的生物活性难以持续作用，造成其作用效果持久力较低，因此如何能够延长细胞因子及提取物生物活性的保存并将其与其他有效成分组合成精华应用到皮肤修复中成为了本领域技术人员亟待解决的问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中存在的不足，提供一种冻肽精华及其制备方法，该冻肽精华能够实现保湿、淡化色斑、去皱等修复皮肤的疗效。
本发明是通过以下技术方案予以实现：一种冻肽精华，按体积份数比，包括5-20份间充质干细胞冻肽溶液、80-95份混合植物提取物溶液，按质量分数比，间充质干细胞冻肽溶液包括10-50份提取物冻干粉以及50-90份蒸馏水，按质量份数比，混合植物提取物溶液包括1-3份烟酰胺、0.5-2份马齿苋提取物、0.5-2份积雪草提取物、0.5-2份泛醇、1-5份透明质酸钠、1-3份浮游物提取物以及91-97.5份蒸馏水，提取物冻干粉通过间充质干细胞饥饿培养处理制得，间充质干细胞为提取自羊胎盘的间充质干细胞，按照正常培养的方法进行培养制得。
根据上述技术方案，优选地，按体积份数比，包括8-17份间充质干细胞冻肽溶液、83-92份混合植物提取物溶液，按质量分数比，间充质干细胞冻肽溶液包括15-35份提取物冻干粉以及65-85份蒸馏水，按质量份数比，混合植物提取物溶液包括1-2份烟酰胺、0.7-1.5份马齿苋提取物、0.7-1.8份积雪草提取物、0.8-1.8份泛醇、1.5-4份透明质酸钠、1.2-2.5份浮游物提取物以及93-96.5份蒸馏水，提取物冻干粉通过间充质干细胞饥饿培养处理制得，间充质干细胞为提取自羊胎盘的间充质干细胞，按照正常培养的方法进行培养制得。
根据上述技术方案，优选地，间充质干细胞饥饿培养的时间为12-24小时。
根据上述技术方案，优选地，间充质干细胞正常培养的时间为48-72小时。
根据上述技术方案，优选地，提取物冻干粉中包含有的干细胞因子成分为冻干状态，并且提取物冻干粉置于-20℃保存。
根据上述技术方案，优选地，该冻肽精华主要用于皮肤的保湿、淡化色斑、去皱等修复皮肤问题。
一种冻肽精华的制备方法，包括以下步骤：
间充质干细胞的培养：从羊胎盘中分离出间充质干细胞，用无酚红DMEM/F12和体积比浓度为8％-12％胎牛血清做完全培养基，放入T75细胞培养瓶在35-38℃、3-6％CO2条件下进行培养，培养时间为48-72小时；
提取物冻干粉的制备：待间充质干细胞生长程度达到70％-80％，使用生理盐水清洗间充质干细胞2-3次，用复方电解质注射液对间充质干细胞进行饥饿培养12-24小时，待细胞生长程度达到90％-95％后，对间质干细胞进行离心处理，离心完成后收取细胞培养上清液获取干细胞因子，并采用提取物提取试剂盒对间充质干细胞提取物进行提取，其中间充质干细胞提取物主要为外泌体，然后将提取的干细胞因子和外泌体混合均匀后放入冻干机中进行冻干，形成提取物冻干粉；
混合植物提取物溶液的制备：选取1-3份烟酰胺、0.5-2份马齿苋提取物、0.5-2份积雪草提取物、0.5-2份泛醇、1-5份透明质酸钠，1-3份浮游物提取物以及91-97.5份蒸馏水，搅拌均匀制得；
冻肽精华的制备：按体积份数比，依次选取5-10份提取物冻干粉、85-90份混合植物提取物溶液以及1-4份蒸馏水放入混合装置内，搅拌均匀制得。
本发明的有益效果是：将间充质干细胞分泌的所有细胞因子多肽以及提取物等有效成分全部高效提取并进行冻干，使得干细胞提取物的活性及功能得到了保存和利用，而且存活的时间可以更长，能够延长其作用效果，并且通过与相应配比的烟酰胺、马齿苋提取物、积雪草提取物、泛醇、透明质酸钠、浮游物提取物在常温环境进行混合，从而使得冻肽精华有效实现保湿、淡化色斑、去皱等修复皮肤的疗效。
具体实施方式
为了使本技术领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1：
本发明提供了一种冻肽精华，按体积份数比，包括5份间充质干细胞冻肽溶液、95份混合植物提取物溶液，按质量分数比，间充质干细胞冻肽溶液包括10份提取物冻干粉以及90份蒸馏水，混合植物提取物溶液包括1份烟酰胺，0.5份马齿苋提取物，0.5份积雪草提取物，0.5份泛醇，1份透明质酸钠，1份浮游物提取物以及95.5份蒸馏水，提取物冻干粉通过间充质干细胞饥饿培养处理制得，饥饿培养的时间为12小时，间充质干细胞为提取自羊胎盘的间充质干细胞，按照正常培养的方法进行培养得到，培养时间为48小时。
实施例2：
本发明提供了一种冻肽精华，按体积份数比，包括20份间充质干细胞冻肽溶液、80份混合植物提取物溶液，按质量分数比，间充质干细胞冻肽溶液包括50份提取物冻干粉以及50份蒸馏水，混合植物提取物溶液包括3份烟酰胺，2份马齿苋提取物，2份积雪草提取物，2份泛醇，5份透明质酸钠，3份浮游物提取物以及83份蒸馏水，提取物冻干粉通过间充质干细胞饥饿培养处理制得，饥饿培养的时间为24小时，间充质干细胞为提取自羊胎盘的间充质干细胞，按照正常培养的方法进行培养得到，培养时间为72小时。
实施例3：
本发明提供了一种冻肽精华，按体积份数比，包括10份间充质干细胞冻肽溶液、90份混合植物提取物溶液，按质量分数比，间充质干细胞冻肽溶液包括25份提取物冻干粉以及75份蒸馏水，混合植物提取物溶液包括2份烟酰胺，1份马齿苋提取物，1份积雪草提取物，1份泛醇，2.5份透明质酸钠，2份浮游物提取物以及90.5份蒸馏水，提取物冻干粉通过间充质干细胞饥饿培养处理制得，饥饿培养的时间为16小时，间充质干细胞为提取自羊胎盘的间充质干细胞，按照正常培养的方法进行培养得到，培养时间为56小时。
根据上述技术方案，优选地，提取物冻干粉中包含有的干细胞因子成分为冻干状态，并且提取物冻干粉置于-20℃保存，该温度环境下，能够有效延长提取物冻干粉中干细胞因子的活性和保存时间。
根据上述技术方案，优选地，该冻肽精华主要用于皮肤的保湿、淡化色斑、去皱、修复皮肤问题，该种疗效能够通过测试结果进行清晰判断。
一种冻肽精华的制备方法，包括以下步骤：
间充质干细胞的培养：从羊胎盘中分离出间充质干细胞，用无酚红DMEM/F12和体积比浓度为10％胎牛血清做完全培养基，放入T75细胞培养瓶在37℃、5％CO2条件下进行培养，培养时间为48-72小时；
提取物冻干粉的制备：待间充质干细胞生长程度达到70％-80％，使用生理盐水清洗间充质干细胞2-3次，用复方电解质注射液对间充质干细胞进行饥饿培养12-24小时，待细胞生长程度达到90％-95％后，对间质干细胞进行离心处理，离心完成后收取细胞培养上清液获取干细胞因子，并采用提取物提取试剂盒对间充质干细胞提取物进行提取，其中间充质干细胞提取物主要为外泌体，然后将提取的干细胞因子和外泌体混合均匀后放入冻干机中进行冻干，形成提取物冻干粉；
混合植物提取物溶液的制备：按照相应配比选取烟酰胺、马齿苋提取物、积雪草提取物、泛醇、透明质酸钠、浮游物提取物以及蒸馏水搅拌均匀制得膏状物；
冻肽精华的制备：按体积份数比，依次选取提取物冻干粉、混合植物提取物溶液以及一定量的蒸馏水放入混合装置内，搅拌均匀制得该冻肽精华。
过敏性试验
第一步试验首先在100只小白鼠背面刮毛并涂抹实施例1-3配比生成的冻肽精华，检测人员观察小白鼠背面没有产生红肿、起痘等不良反应；第二部试验，选取60名20-45周岁的成年志愿者进行试验，60名试验人员分为3组每组20人，分别进行上述3组实施例的产品过敏性检测，所有测试人员的左脸不涂抹任何东西，在右脸上涂抹相应的冻肽精华，检测人员随时检测测试人员的脸部皮肤变化，经测试人员和检测人员鉴定所有测试者的右脸均没有出现红肿或者起痘等不良反应，因此该冻肽精华不会对人体产生不良反应。
疗效测试
鉴于女性对于化妆品的鉴别能力，因此选取27-35岁、36-40岁以及41-45岁各60名女性进行测试，三组年龄段的女性再分成3组分别使用实施例1-3的20人测试单元，使用时，测试人员的左脸不涂抹任何东西，仅将右脸涂抹相应实施例的精华，每天一次，每次轻揉20分钟，持续使用一个月，然后使用女性分别对保湿、淡化色斑、去皱三项进行评分，修复皮肤为三项的平均分，每一项的总分为100分，根据与左脸的对比做出评分，0-30分效果不明显、31-60分效果普通、61-80分效果明显、81-100分非常显著并且评分越高效果越好，计算各个测试单元的平均分，得到如表1的测试结果。
表1
经过对表1的数据分析，该冻肽精华对于保湿、淡化色斑、去皱以及修复皮肤有明显疗效，对于保湿性能，各个年龄段的保湿效果接近，但是实施例3的保湿效果明显优于其他两组实施例；对于淡化色斑、去皱以及修复皮肤，在一定范围内随着年龄的增大，效果越明显，并且实施例3的效果明显优于实施例1和实施例2，结合表1得出实施例3为最佳实施例。
本发明的有益效果是：将间充质干细胞分泌的所有细胞因子多肽以及提取物等有效成分全部高效提取并进行冻干，使得干细胞提取物的活性及功能得到了保存和利用，而且存活的时间可以更长，能够延长其作用效果，并且通过与相应配比的烟酰胺、马齿苋提取物、积雪草提取物、泛醇、透明质酸钠、浮游物提取物在常温环境进行混合，从而使得冻肽精华有效实现保湿、淡化色斑、去皱等修复皮肤的疗效。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种冻肽精华，其特征在于，按体积份数比，包括5-20份间充质干细胞冻肽溶液以及80-95份混合植物提取物溶液，按质量分数比，所述间充质干细胞冻肽溶液包括10-50份提取物冻干粉以及50-90份蒸馏水，按质量份数比，所述混合植物提取物溶液包括1-3份烟酰胺、0.5-2份马齿苋提取物、0.5-2份积雪草提取物、0.5-2份泛醇、1-5份透明质酸钠、1-3份浮游物提取物以及91-97.5份蒸馏水，所述提取物冻干粉通过间充质干细胞饥饿培养处理制得，所述间充质干细胞提取自羊胎盘的间充质干细胞，并按照正常培养的方法进行培养制得。
2.根据权利要求1所述的一种冻肽精华，其特征在于，按体积份数比，包括8-17份间充质干细胞冻肽溶液以及83-92份混合植物提取物溶液，按质量分数比，所述间充质干细胞冻肽溶液包括15-35份提取物冻干粉以及65-85份蒸馏水，按质量份数比，所述混合植物提取物溶液包括1-2份烟酰胺、0.7-1.5份马齿苋提取物、0.7-1.8份积雪草提取物、0.8-1.8份泛醇、1.5-4份透明质酸钠、1.2-2.5份浮游物提取物以及93-96.5份蒸馏水，所述提取物冻干粉通过间充质干细胞饥饿培养处理制得，所述间充质干细胞提取自羊胎盘的间充质干细胞，按照正常培养的方法进行培养制得。
3.根据权利要求2所述的一种冻肽精华，其特征在于，所述间充质干细胞饥饿培养的时间为12-24小时。
4.根据权利要求3所述的一种冻肽精华，其特征在于，所述间充质干细胞正常培养的时间为48-72小时。
5.根据权利要求4所述的一种冻肽精华，其特征在于，所述提取物冻干粉中包含有的干细胞因子成分为冻干状态。
6.根据权利要求5所述的一种冻肽精华，其特征在于，该冻肽精华主要用于皮肤的保湿、淡化色斑以及去皱，此种修复皮肤问题。
7.一种冻肽精华的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
间充质干细胞的培养：从羊胎盘中分离出间充质干细胞，用无酚红DMEM/F12和体积比浓度为8％-12％胎牛血清做完全培养基，放入T75细胞培养瓶在35-38℃、3-6％CO2条件下进行培养，培养时间为48-72小时；
提取物冻干粉的制备：待间充质干细胞生长程度达到70％-80％，使用生理盐水清洗间充质干细胞2-3次，用复方电解质注射液对间充质干细胞进行饥饿培养12-24小时，待细胞生长程度达到90％-95％后，对间质干细胞进行离心处理，离心完成后收取细胞培养上清液获取干细胞因子，并采用提取物提取试剂盒对间充质干细胞提取物进行提取，其中间充质干细胞提取物主要为外泌体，然后将提取的干细胞因子和外泌体混合均匀后放入冻干机中进行冻干，形成提取物冻干粉；
混合植物提取物溶液的制备：选取1-3份烟酰胺、0.5-2份马齿苋提取物、0.5-2份积雪草提取物、0.5-2份泛醇、1-5份透明质酸钠，1-3份浮游物提取物以及91-97.5份蒸馏水，搅拌均匀制得；
冻肽精华的制备：按体积份数比，依次选取5-10份提取物冻干粉、85-90份混合植物提取物溶液以及1-4份蒸馏水放入洁净的混合装置内，常温下搅拌均匀制得。
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