CN109998985A - 成纤维细胞上清液制备化妆品的方法及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及成纤维细胞上清液制备化妆品的方法及其用于面部皮肤的修复的用途，收集培养的成纤维细胞上清液，用于基底液、面膜、精华液化妆品的制备，在上清液中加入以基底液重量份计5~20%的甘油即制成基底液化妆品，在上清液中加入以精华液重量份计丁二醇量为3~10%、海藻糖量为5~10%即制成精华液化妆品，用上清液10~20ml浸泡面膜纸即制成面膜化妆品，化妆品中含有大量的胶原蛋白、弹性纤维、透明质酸钠及各种生长因子，将促使组织再生，对凹陷性疤痕、组织缺失有特殊功效，达到强力皮肤修复的目的。

Description

成纤维细胞上清液制备化妆品的方法及其用途

技术领域

本发明涉及化妆品领域，具体涉及成纤维细胞上清液制备化妆品的方法及其用于面部皮肤的修复的用途。

背景技术

市场上的美容化妆品种类繁多，大部分化妆品是通过精细化工进行生产制备的，大都含有防腐剂、抑菌剂、香料等可能对肌肤有损害的物质，在使用此类化妆品时，会对部分人群的皮肤造成伤害，甚至会产生色斑、红血丝、过敏等问题。

近年来，化妆品行业还不断推出含细胞生长因子的化妆品，包括干细胞因子、表皮细胞生长因子、神经生长因子以及纤维母细胞生长因子等。但各种细胞因子需要在低温条件下保存，以保持其蛋白活性。然而在化妆品生产过程中，无法保证整个过程均处于低温条件，导致加入的细胞因子的失活和变性，从而失去细胞因子对组织和细胞的修复活性，同时，细胞因子加入到化妆品中，其有效浓度必然被降低，不能保证细胞因子对细胞核组织的修复效果。

成纤维细胞是皮肤真皮层的主要细胞，其可在真皮层产生胶原蛋白、弹性纤维蛋白以及其他细胞外基质，胶原蛋白和弹性蛋白在皮肤组织中的作用就是形成皮肤支架，保持皮肤弹性。吸纳水分，使皮肤细腻、光滑、富有弹性。

本发明就是利用自体皮肤成纤维细胞，通过体外培养，使其在上清液中分泌大量的生长因子、胶原蛋白及透明质酸钠等有效成分，将收集的上清液通过无菌分装后，直接用于面部皮肤，将对皮肤产生最佳的修复、再生、祛斑和抗氧化等美容作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种成纤维细胞上清液制备化妆品的方法，以及制备成的化妆品用于面部皮肤修复的用途。

为了实现此目的，本发明采用了以下的技术方案：

本发明收集培养的成纤维细胞上清液，用于基底液、面膜、精华液化妆品的制备。

其中利用上清液制备基底液化妆品，其步骤是在上清液中加入以基底液重量份计5~20 %的甘油即制成基底液化妆品。

其中利用上清液制备精华液化妆品，其步骤是在上清液中加入以精华液重量份计丁二醇量为3~10%、海藻糖量为5~10%即制成精华液化妆品。

其中利用上清液制备面膜化妆品，其步骤是用上清液10~20ml浸泡面膜纸即制成面膜化妆品。

优选地，在成纤维细胞上清液中加入10%重量份的甘油，制备成的基底液效果最佳。

优选地，将面膜纸用15ml成纤维细胞上清液浸泡后，制备成的面膜效果最佳。

优选地，在成纤维细胞上清液中加入5%重量份丁二醇、10%重量份海藻糖，制备成的精华液效果最佳。

本发明中，以上制备化妆品使用的成纤维细胞上清液制备方法包括如下步骤：

1）无菌条件下，耳后取皮或眼睑取皮，去掉皮下组织血管，按体积比例10:1加入0.5%胰蛋白酶和0.2%EDTA，在37℃下消化2h，再加入1mg/mL的I型胶原蛋白酶，在37℃下消化1h，将上述消化液过200目筛网，吹打过滤获得成纤维细胞。

2）将上述细胞悬液加入含有KGF、PDGF及富血小板血浆（PRP）的DMEM/F12培养基中，在37℃、5%浓度的二氧化碳培养箱中培养48h，其中KGF活力单位为50U/mL，PDGF活力单位为100U/mL，PRP的浓度为10%。

本发明通过收集成纤维细胞扩增时产生的上清液，而制备基底液、面膜、精华液化妆品。所述化妆品中不但含有自体成纤维细胞分泌的各种胞外基质及生长因子，还含有富含血小板血浆中含有的丰富生长因子，以及在成纤维细胞扩增时添加的生长因子，其中自体富含血小板的血浆含有丰富的生长因子，即血小板衍生生长因子、转化生长因子β1与β2、类胰岛素生长因子、血管内皮生长因子、表皮生长因子、上皮细胞生长因子等，化妆品中含有大量的胶原蛋白、弹性纤维、透明质酸钠及各种生长因子，将促使组织再生，对凹陷性疤痕、组织缺失有特殊功效，达到强力皮肤修复的目的。

具体实施方式

下面通过具体实施方式对本发明做进一步的描述。

在本发明中，若非特指，所有设备和原料均可从市场购得或是本行业常用的，下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域常规方法。

材料

正常耳后取皮或眼睑取皮，均由西安丽樽整形医院提供，采用无菌手术采集0.25平方厘米的皮肤。

胰酶消化液，I型胶原蛋白、PDGF、KGF购自sigma；DMEM/F12，FBS购自Gibco；细胞计数试剂盒购自西安赫特生物科技有限公司；

成纤维细胞的无血清培养基购自STEMCELL；PRP为自体全血经离心后得到的血小板浓缩物。

实施例1

一种成纤维细胞上清液制备化妆品的方法，包括如下步骤：

1）无菌条件下，耳后取皮或眼睑取皮，去掉皮下组织血管，按体积比例10:1加入0.5%胰蛋白酶和0.2%EDTA，在37℃下消化2h，再加入1mg/mL的I型胶原蛋白酶，在37℃下消化1h，将上述消化液过200目筛网，吹打过滤获得成纤维细胞。

2）将上述细胞悬液加入含有KGF、PDGF及PRP的DMEM/F12培养基中，在37℃、5%浓度的二氧化碳培养箱中培养48h，其中KGF活力单位为50U/mL，PDGF活力单位为100U/mL，PRP的浓度为10%；

3）收集步骤2）成纤维细胞扩增时产生的上清液，将上清液分别制备成基底液、精华液及面膜化妆品。

其中利用上清液制备基底液化妆品，其步骤是在上清液中加入以基底液重量份计5%的甘油即制成基底液化妆品。

其中利用上清液制备精华液化妆品，其步骤是在上清液中加入以精华液重量份计丁二醇量为3%、海藻糖量为5%即制成精华液化妆品。

其中利用上清液制备面膜化妆品，其步骤是用上清液10ml浸泡面膜纸即制成面膜化妆品。

实施例2

采用实施例1的方法制备成纤维细胞上清液，收集培养的成纤维细胞上清液，用于基底液、面膜、精华液化妆品的制备。

其中利用上清液制备基底液化妆品，其步骤是在上清液中加入以基底液重量份计20 %的甘油即制成基底液化妆品。

其中利用上清液制备精华液化妆品，其步骤是在上清液中加入以精华液重量份计丁二醇量为10%、海藻糖量为10%即制成精华液化妆品。

其中利用上清液制备面膜化妆品，其步骤是用上清液20ml浸泡面膜纸即制成面膜化妆品。

实施例3

采用实施例1的方法制备成纤维细胞上清液，收集培养的成纤维细胞上清液，用于基底液、面膜、精华液化妆品的制备。

其中利用上清液制备基底液化妆品，其步骤是在上清液中加入以基底液重量份计10 %的甘油即制成基底液化妆品。

其中利用上清液制备精华液化妆品，其步骤是在上清液中加入以精华液重量份计丁二醇量为5%、海藻糖量为10%即制成精华液化妆品。

其中利用上清液制备面膜化妆品，其步骤是用上清液15ml浸泡面膜纸即制成面膜化妆品。

测试例

对实施例1-3的每种化妆品的面部皮肤修复性能进行评价，以皮肤弹性为测试指标。

皮肤弹性的测定采用吸力法，以恒定负压模式，即测试探头在皮肤表面施加负压将皮肤吸入探针孔，负压消失后皮肤形变恢复，皮肤形变随负压和时间变化可通过测试仪中发射光和接受光的装置测得，该装置可反映皮肤被吸入深度，这样可得到皮肤拉伸长度随时间变化的曲线图，用Uf表示皮肤最大拉伸量，Ue表示恒定负压加到皮肤上0.1秒时皮肤的拉伸量，Ur表示无负压0.15后皮肤恢复量，Uv=Uf-Ue黏弹性部分，Ua表示取消负压到下次连续测试再加负压皮肤的恢复量，R2 = Ua/Uf，R2为一个反映皮肤弹力的参数，R2值越大则皮肤弹性越好，越接近1弹性越好。

选择年龄20-30岁的受试者，男女各半，随机分成3组，每组20名。受试者面部具疤痕、痤疮症状。受试者无严重系统疾病，无活动性过敏性疾病，也没有接受过皮肤治疗、美容以及其他可能影响结果的测试。受试者试验部位测试前2天不能使用任何化妆品或者外用药品。受试者在性别、年龄、病情等方面无显著差异(P>0.05)，具有可比性。

试验方法：早晨起床洗漱后，在受试者脸上涂抹基底液，正常化妆。晚上睡觉前，使用本发明面膜在脸上敷30分钟，然后涂抹精华液。

在使用本发明的化妆品之前，在试验区域用皮肤弹性测试仪(德国CK公司提供，型号为MPA580)检测试验区域弹性值；在连续使用15天后再次分别检测试验区域弹性值。每个试验区域检测5次弹性R2，并取其平均值。

具体测试结果见表

表1：皮肤弹性测试数据表

以上实验中，选择年龄20-30岁的受试者，男女各半，随机分成3组，每组20名，并且受试者面部具疤痕、痤疮症状，除了皮肤弹性实验外，提过观察发现弹性值越高的皮肤，皮肤肤色明显嫩白、光泽，修复效果更好。

以上实验表明，在成纤维细胞上清液中加入10%重量份的甘油，制备成的基底液效果最佳；将面膜纸用15ml成纤维细胞上清液浸泡后，制备成的面膜效果最佳；在成纤维细胞上清液中加入5%重量份丁二醇、10%重量份海藻糖，制备成的精华液效果最佳；可促进皮肤细胞再生，对疤痕、痤疮有特殊功效。

Claims (5)

1.一种成纤维细胞上清液制备化妆品的方法，包括如下步骤：

1）无菌条件下，耳后取皮或眼睑取皮，去掉皮下组织血管，按体积比例10:1加入0.5%胰蛋白酶和0.2%EDTA，在37℃下消化2h，再加入1mg/mL的I型胶原蛋白酶，在37℃下消化1h，将上述消化液过200目筛网，吹打过滤获得成纤维细胞；

2）将上述细胞悬液加入含有KGF、PDGF及PRP的DMEM/F12培养基中，在37℃、5%浓度的二氧化碳培养箱中培养48h，其中KGF活力单位为50U/mL，PDGF活力单位为100U/mL，PRP的浓度为10%；

3）收集步骤2）成纤维细胞扩增时产生的上清液，将上清液分别制备成基底液、精华液及面膜化妆品。

2.根据权利要求1所述的一种成纤维细胞上清液制备化妆品的方法，其特征在于，所述步骤3）中上清液制备成基底液化妆品，其在上清液中加入以基底液重量份计5~20 %的甘油即制成基底液化妆品。

3.根据权利要求1所述的一种成纤维细胞上清液制备化妆品的方法，其特征在于，所述步骤3）中上清液制备成精华液化妆品，其在上清液中加入以精华液重量份计丁二醇量为3~10%、海藻糖量为5~10%即制成精华液化妆品。

4.根据权利要求1所述的一种成纤维细胞上清液制备化妆品的方法，其特征在于，所述步骤3）中上清液制备成面膜化妆品，用上清液10~20ml浸泡面膜纸即制成面膜化妆品。

5.根据权利要求2~4中任意一项所述的化妆品，其用途是用于面部皮肤的修复。