CN114903918B - 女性微生态抑菌修复凝胶及制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种女性微生态抑菌修复凝胶，按质量百分比由以下物料组成：去离子水40‑56％、海藻糖4‑8％、玻尿酸0.1‑0.6％、1、3丁二醇5‑10％、甘油2.4‑4％、羟丙基甲基纤维素2.8‑4％、水杨酸0.8‑1.5％，NL‑50保湿因子6‑14％，成纤维细胞条件培养液15‑30％，以上物料质量百分比之和为100％。本发明还公开了女性微生态抑菌修复凝胶的制备方法及应用，本发明消弱攻击阴道粘膜的“矛”，即减少支原体、细菌和真菌的数量，同时巩固加强阴道壁粘膜的“盾”，即利用成纤维细胞条件培养液补充胶原等ECM，维持阴道弱酸性，重建微生态环境，旨在解决现有女性抗菌凝胶治疗效果不理想的问题。
Description
技术领域
本发明属于女性卫生护理用品技术领域，具体涉及一种女性微生态抑菌修复凝胶，本发明还涉及一种女性微生态抑菌修复凝胶的制备方法及应用。
背景技术
随着经济社会的发展，妇科感染性疾病如阴道炎等作为一类常见病和多发病，严重困扰广大女性，影响人类的生殖健康。正常女性阴道内存在大量的不致病微生物，称为正常微生态体系。这些阴道内的微生态菌群与人体处于共生状态。一旦各菌群相互制约、相互协调的关系被打破，就会出现一系列的变化，最终导致阴道感染和炎症。因此维持阴道微生态的平衡已经成为防治生殖道感染的关键。
阴道微生物的种类涉及病毒：人乳头瘤病毒(HPV)、支原体、细菌(正常的乳酸菌、条件致病菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、类杆菌、消化球菌)和真菌(白色念珠菌)等。在正常的光滑的阴道粘膜，病毒、支原体、细菌和真菌是无法附着和存活的。
在众多致病菌中，哪种微生物是第一位的入侵者？研究认为支原体能够穿跨细胞膜，进入细胞内部，通过感染阴道壁的成纤维细胞，使细胞分泌胶原等细胞外基质的能力下降，直接导致阴道壁弹性下降，从而在阴道反复扩张中出现很多微裂纹，粘膜受损，从而为细菌、真菌、病毒的侵入创造了可能。因此强调了对支原体的首当其冲的杀灭作用。
不仅应该认识到杀灭上述微生物的重要性，同时应该认识到重建修复受损阴道粘膜的重要性，那么就需要很好的修复材料。
人成纤维细胞条件培养液(Human Fibroblast Conditioned Medium)是随着细胞生物技术诞生一种新的生物材料。皮肤真皮作为结缔组织，包括细胞和非细胞两部分组成。非细胞部分即细胞外基质(ECM，ExrtaCellular Matrix)，主要包括胶原纤维(Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白)和弹性纤维、纤维粘连蛋白等。细胞成分主要是成纤维细胞，是生成真皮ECM中所有组分、维持ECM微环境稳定、参与ECM的更新和重建。体外扩增的细胞产生大量的培养上清液即成纤维细胞条件培养液。这其中除了含有上述ECM外，还含有碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子-β(TGF-β)等生长因子。因此将成纤维细胞条件培养液加入凝胶中，将对受损的粘膜起到很好的修复作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种女性微生态抑菌修复凝胶，目的在于削弱攻击阴道粘膜的“矛”，即减少支原体、细菌和真菌的数量，同时巩固加强阴道壁粘膜的“盾”，即利用成纤维细胞条件培养液补充胶原等ECM，维持持阴道弱酸性，重建微生态环境，旨在解决现有女性抗菌凝胶治疗效果不理想的问题。
本发明的另一目的是提供一种女性微生态抑菌修复凝胶的制备方法。
本发明的第三个目的是提供一种女性微生态抑菌修复凝胶的应用。
本发明所采用的第一技术方案是，女性微生态抑菌修复凝胶，按质量百分比由以下物料组成：去离子水40-56％、海藻糖4-8％、玻尿酸0.1-0.6％、1、3丁二醇5-10％、甘油2.4-4％、羟丙基甲基纤维素2.8-4％、水杨酸0.8-1.5％，NL-50保湿因子6-14％，成纤维细胞条件培养液15-30％，以上物料质量百分比之和为100％。
本发明第一技术方案的特点还在于，
成纤维细胞条件培养液制备方法如下：
S1.传代人皮肤成纤维细胞至第4代，在细胞工厂进行体外扩增；
S2.细胞培养采用8％胎牛血清+专用成纤维培养基；或者使用无血清间充质细胞培养基进行培养；
S3.待铺满覆盖率≥90％收集无菌的成纤维细胞上清液；
S4.将S3中收集的成纤维细胞上清液收集汇总后，按100毫升成纤维细胞上清液加入注射用活性炭1克，搅拌6～10分钟，依次经0.45um、0.22um微孔滤膜进行过滤，除色及异味澄清淡黄色、透明液体，按每1000毫升上清液加入40毫升戊二醇，进行防腐，即为成纤维细胞条件培养液，加入最终原料中使用。
本发明所采用的第二技术方案是，女性微生态抑菌修复凝胶的制备方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、将去离子水、海藻糖、玻尿酸、1、3丁二醇、甘油充分混合，搅拌，煮沸；
步骤2、静止冷却后，边加入羟丙基甲基纤维素边搅拌；
步骤3、加入水杨酸搅拌溶解；
步骤4、加入NL-50保湿因子继续搅拌；
步骤5、加入成纤维细胞条件培养液，继续搅拌；
步骤6、静置后，继续搅拌；
步骤7、静置后过滤，分装至阴道给药器后，铝箔袋包装，进行25KGray的辐照灭菌。
本发明第二技术方案的特点还在于，
步骤1中在60～100℃的温度下煮沸20～60分钟。
步骤2中静止冷却至20-30℃，搅拌速度为每分钟搅拌1000～5000转，搅拌时长为0.5～1.5小时。
步骤3中水杨酸浓度为0.5～1.5％，搅拌时间为5～15分钟。
步骤4中搅拌时间为10～30分钟；所述步骤5中调节PH值为5-6；
步骤6中静置10～14小时后，以1000～5000转每分钟的转速搅拌0.5～1.5小时；
步骤7中静置10～50分钟后以30目不锈钢筛过滤。
本发明所采用的第三技术方案是，一种女性微生态抑菌修复凝胶，用于女性阴道清洁、重建微生态平衡。
本发明的有益效果是，一种女性微生态抑菌修复凝胶，消弱攻击阴道粘膜的“矛”(减少支原体、细菌和真菌的数量)，发挥抑菌作用，又通过补充ECM起到修复阴道壁粘膜、加强“盾”的作用，二者携手共同重建微生态环境。本发明的材料与现有的材料相比，突出强调了对支原体的首当其冲的杀灭作用，加入新型的生物材料---成纤维细胞条件培养液，对受损阴道壁的修复作用，维持弱酸性，重建阴道的微生态平衡。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。
本发明女性微生态抑菌修复凝胶，按质量百分比由以下物料组成：去离子水40-56％、海藻糖4-8％、玻尿酸0.1-0.6％、1、3丁二醇5-10％、甘油2.4-4％、羟丙基甲基纤维素2.8-4％、水杨酸0.8-1.5％，NL-50保湿因子6-14％，成纤维细胞条件培养液15-30％，以上物料质量百分比之和为100％。
成纤维细胞条件培养液制备方法如下：
S1.传代人皮肤成纤维细胞至第4代，在细胞工厂进行体外扩增；
S2.细胞培养采用8％胎牛血清+专用成纤维培养基；或者使用无血清间充质细胞培养基进行培养；
S3.待铺满覆盖率≥90％收集无菌的成纤维细胞上清液；
S4.将S3中收集的成纤维细胞上清液收集汇总后，按100毫升成纤维细胞上清液加入注射用活性炭1克，搅拌6～10分钟，依次经0.45um、0.22um微孔滤膜进行过滤，除色及异味澄清淡黄色、透明液体，按每1000毫升上清液加入40毫升戊二醇，进行防腐，即为成纤维细胞条件培养液，加入最终原料中使用。
女性微生态抑菌修复凝胶的制备方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、将去离子水、海藻糖、玻尿酸和1、3丁二醇、甘油充分混合，搅拌，在60～100℃的温度下煮沸20～60分钟；
步骤2、静止冷却至20-30℃，边加入羟丙基甲基纤维素边搅拌，搅拌速度为每分钟搅拌1000～5000转，搅拌时长为0.5～1.5小时；
步骤3、加入水杨酸搅拌溶解，水杨酸浓度为0.5～1.5％，搅拌时间为5～15分钟，这里强调是水溶性包裹性水杨酸。
步骤4、加入NL-50保湿因子继续搅拌，搅拌时间为10～30分钟；
步骤5、加入成纤维细胞条件培养液，调节PH值为5-6，继续搅拌；
步骤6、静置10～14小时后，以1000～5000转每分钟的转速搅拌0.5～1.5小时；
步骤7、静置10～50分钟后以30目不锈钢筛过滤，分装至阴道给药器后，铝箔袋包装，进行25KGray的辐照灭菌。
一种女性微生态抑菌修复凝胶，用于女性阴道清洁、重建微生态平衡。
整个产品设计理念：设计时认为阴道感染第一个致病菌是支原体，因此特别强调了清除支原体。支原体最大的特征是PH≤7就死亡；而水杨酸为脂溶性，易于扩散渗透杀死支原体，所以利用水杨酸调节其PH值介于5-6之间；同时采用水溶性包裹性水杨酸，减少对阴道粘膜的刺激。同时加入成纤维细胞条件培养液，利用富有的I、III型胶原，弹性蛋白、纤维粘连蛋白等细胞外基质，及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子-β(TGF-β)等生长因子，能够修复受损的阴道粘膜，增加粘膜对各种微生物的屏障作用。
另外，本申请中用到的海藻糖具有的非还原性、稳定性、对生物大分子的保护作用，利用它的这个作用来保护成纤维调节培养液中bFGF、EGF、TGF-β各种生长因子的活性。
实施例1
本发明女性微生态抑菌修复凝胶，按质量百分比由以下物料组成：去离子水48.9％、海藻糖4％、玻尿酸0.1％、1、3丁二醇5％、甘油2.4％、羟丙基甲基纤维素2.8％、水杨酸0.8％，NL-50保湿因子6％，成纤维细胞条件培养液30％，以上物料质量百分比之和为100％。
成纤维细胞条件培养液制备方法如下：
S1.传代人皮肤成纤维细胞至第4代，在细胞工厂进行体外扩增；
S2.细胞培养采用8％胎牛血清+专用成纤维培养基；或者使用无血清间充质细胞培养基进行培养；
S3.待铺满覆盖率≥90％收集无菌的成纤维细胞上清液；
S4.将S3中收集的成纤维细胞上清液收集汇总后，按100毫升成纤维细胞上清液加入注射用活性炭1克，搅拌6分钟，依次经0.45um、0.22um微孔滤膜进行过滤，除色及异味澄清淡黄色、透明液体，按每1000毫升上清液加入40毫升戊二醇，进行防腐，即可加入最终原料中使用。
女性微生态抑菌修复凝胶的制备方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、将去离子水、海藻糖、玻尿酸和1、3丁二醇、甘油充分混合，搅拌，在60℃的温度下煮沸20分钟；
步骤2、静止冷却至20℃，边加入羟丙基甲基纤维素边搅拌，搅拌速度为每分钟搅拌1000转，搅拌时长为0.5小时；
步骤3、加入水杨酸搅拌溶解，水杨酸浓度为0.5％，搅拌时间为5分钟，这里强调是水溶性包裹性水杨酸。
步骤4、加入NL-50保湿因子继续搅拌，搅拌时间为10分钟；
步骤5、加入成纤维细胞条件培养液，调节PH值为5，继续搅拌；
步骤6、静置10小时后，以1000转每分钟的转速搅拌0.5小时；
步骤7、静置10分钟后以30目不锈钢筛过滤，分装至阴道给药器后，铝箔袋包装，进行25KGray的辐照灭菌。
实施例2
本发明女性微生态抑菌修复凝胶，按质量百分比由以下物料组成：去离子水43％、海藻糖8％、玻尿酸0.6％、1、3丁二醇10％、甘油4％、羟丙基甲基纤维素4％、水杨酸1.4％，NL-50保湿因子14％，成纤维细胞条件培养液15％，以上物料质量百分比之和为100％。
成纤维细胞条件培养液制备方法如下：
S1.传代人皮肤成纤维细胞至第4代，在细胞工厂进行体外扩增；
S2.细胞培养采用8％胎牛血清+专用成纤维培养基；或者使用无血清间充质细胞培养基进行培养；
S3.待铺满覆盖率≥90％收集无菌的成纤维细胞上清液；
S4.将S3中收集的成纤维细胞上清液收集汇总后，按100毫升成纤维细胞上清液加入注射用活性炭1克，搅拌10分钟，依次经0.45um、0.22um微孔滤膜进行过滤，除色及异味澄清淡黄色、透明液体，按每1000毫升上清液加入40毫升戊二醇，进行防腐，即可加入最终原料中使用。
女性微生态抑菌修复凝胶的制备方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、将去离子水、海藻糖、玻尿酸和1、3丁二醇、甘油充分混合，搅拌，在100℃的温度下煮沸60分钟；
步骤2、静止冷却至30℃，边加入羟丙基甲基纤维素边搅拌，搅拌速度为每分钟搅拌5000转，搅拌时长为1.5小时；
步骤3、加入水杨酸搅拌溶解，水杨酸浓度为1.5％，搅拌时间为15分钟，这里强调是水溶性包裹性水杨酸。
步骤4、加入NL-50保湿因子继续搅拌，搅拌时间为30分钟；
步骤5、加入成纤维细胞条件培养液，调节PH值为6，继续搅拌；
步骤6、静置14小时后，以5000转每分钟的转速搅拌1.5小时；
步骤7、静置50分钟后以30目不锈钢筛过滤，分装至阴道给药器后，铝箔袋包装，进行25KGray的辐照灭菌。
实施例3
本发明女性微生态抑菌修复凝胶，按质量百分比由以下物料组成：去离子水27L、海藻糖3.6kg、玻尿酸200g、1、3丁二醇5L、甘油2L、羟丙基甲基纤维素2kg、水杨酸500g，NL-50保湿因子4L，成纤维细胞条件培养液12L。
成纤维细胞条件培养液制备方法如下：
S1.传代人皮肤成纤维细胞至第4代，在细胞工厂进行体外扩增；
S2.细胞培养采用8％胎牛血清+专用成纤维培养基；或者使用无血清间充质细胞培养基进行培养；
S3.待铺满覆盖率≥90％收集无菌的成纤维细胞上清液；
S4.将S3中收集的成纤维细胞上清液收集汇总后，按100毫升成纤维细胞上清液加入注射用活性炭1克，搅拌8分钟，依次经0.45um、0.22um微孔滤膜进行过滤，除色及异味澄清淡黄色、透明液体，按每1000毫升上清液加入40毫升戊二醇，进行防腐，即可加入最终原料中使用。
女性微生态抑菌修复凝胶的制备方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、将去离子水、海藻糖、玻尿酸和1、3丁二醇、甘油充分混合，搅拌，在80℃的温度下煮沸40分钟；
步骤2、静止冷却至25℃，边加入羟丙基甲基纤维素边搅拌，搅拌速度为每分钟搅拌3000转，搅拌时长为1小时；
步骤3、加入水杨酸搅拌溶解，水杨酸浓度为1％，搅拌时间为10分钟，这里强调是水溶性包裹性水杨酸。
步骤4、加入NL-50保湿因子继续搅拌，搅拌时间为20分钟；
步骤5、加入成纤维细胞条件培养液，调节PH值为5.5，继续搅拌；
步骤6、静置12小时后，以3000转每分钟的转速搅拌1小时；
步骤7、静置30分钟后以30目不锈钢筛过滤，分装至阴道给药器后，铝箔袋包装，进行25KGray的辐照灭菌。
临床实验邀请150例受试者，年龄23-55岁，已婚或未婚存在性生活史，符合阴道炎的临床诊断标准，分别使用实施例1、实施例2、实施例3制备的女性微生态抑菌修复凝胶进行治疗。每日一次，使用前清洗双手和外阴部，取本品一支，除去推送管盖帽，屈膝屈髋，将推送管轻轻送入阴道，将液体一次性引到深处，缓慢抽出推送管弃之。4周后进行前后效果评估。
观察指标：粘膜充血消失，白带恢复正常，外阴瘙痒消失及疼痛消失，治疗前后阴道灌洗液行支原体、细菌和霉菌培养。
结果：
实施例1、2、3组效果评估
综上，实施例3为最佳施例。
上面结合具体实施例对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种改进，或未经改进直接应用于其他场合，均在本发明的保护范围之内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
一、支原体抑制试验：
样品名称：女性微生态抑菌修复凝胶
(一)、环境条件：温度：25±3℃，湿度：65±5％RH
(二)、测试步骤：1.试验用菌株：滑液支原体(CVCC2960).2.用无菌吸管吸取0.5ml的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于2支的培养基试管中；取培养后的菌液，按照5％比例传3代，取生长稳定的菌液作为待测菌液，按5％比例接种培养基，置37℃培养箱中培养，培养54h(54h后接种滴度为1.0*108cfu/ml)。3.取培养物1ml，加人等量样品，摇匀，在25℃左右下作用到规定时间，10分钟后取样品进行存活菌的检测，试验重复⒉次。4.测取0.5ml样品接种于4.5ml液体培养基中，每个样品接种三管，置37℃培养7-14天后观察培养基颜色变化(pH下降0.5值)。判定支原体的生长，并于培养的第3-14天，分别从每个接种管中取出0.25ml，取样液接种进行活菌计数培养，计算杀灭对数值。试验重复3次。
(三)、检测结果：细菌灭杀试验经3次重复试验，在试验温度为20℃恒温条件下，对支原体灭杀结果如表8所示：
表8支原体灭杀结果
(四)、结果讨论：试验后，在试验温度为20℃恒温条件下，样品制剂处理浓度0.2％，作用10min，样品杀灭有效。
二、杀菌性能实验检验报告：
样品名称：女性微生态抑菌修复凝胶
检验项目：杀菌性能试验
(一)、器材
1.样品名称：女性微生态抑菌修复凝胶。
2.试验菌株名称：大肠杆菌(8099)第9代、金黄葡萄球菌(ATCC 6538)第9代、白色念珠菌(ATCC10231)第10代。
3.仪器设备：电热恒温培养箱D-113,生物安全柜A-006,电子天平D-092。
(二)、方法
1.检验依据：GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录CC3。
2.实验室环境温度：24℃,相对湿度：54％。
3.样品配制：原样品。
(三)、结果
1.细菌中和剂鉴定成分：D/E中和肉汤，结果列于表5-1。
2.真菌中和剂鉴定成分：D/E中和肉汤，结果列于表5-2。
3.杀菌性能试验结果见表5-3。
(四)、结论
该样品作用浓度为原样品，作用时间2min,对大肠杆菌、金黄葡萄球菌、白色念珠菌的杀菌率＞90％,根据GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录CC3判定，该产品有杀菌作用，符合Q/SJSEJS 001-2021《抗菌凝胶》的要求。
表5-1细菌中和剂鉴定试验结果
表5-2真菌中和剂鉴定试验结果
表5-3杀菌性能试验结果
续表5-3杀菌性能试验结果
三、阴道黏膜刺激试验过程及结果：
检验项目：阴道黏膜刺激试验
样品名称：女性微生态抑菌修复凝胶
(一)、器材
1.试验样品：女性抗菌凝胶。
2.试验动物信息：新西兰兔，购于陕西君行生物科技有限公司(实验动物生产许可证号：SCXK(陕)2017-001)，合格证号：61003200000958。饲养在西安国联质量检测技术股份有限公司(实验动物使用许可证号：SYXK(陕)2021-009)普通环境，适应饲养7天，温度：21℃-26℃，相对湿度：47％-65％。饲料来源：青岛康大生物科技有限公司，许可证号：SCXK(鲁)2017-0005，合格证号：370872100003736。
3.仪器设备名称：B-007电子天平，注射器，软胶管。
(二)、方法
1.检测依据：《消毒技术规范》(卫生部2002年版)2.3.5。
2.样品配制：原样品。
3.检测方法：选用健康、初成年雌性家兔6只，分为受试物组和对照组(生理盐水)，每组3只。将家兔固定，暴露会阴和阴道口，用装有约8cm长钝头软胶管的注射器吸取受试液，轻轻插入阴道约4～5cm，缓慢注入2mL受试液，对照组用生理盐水作同样处理。阴道黏膜刺激连续给药1天。24h后采用气栓法处死动物，剖腹取出完整阴道，纵向切开，观察有无充血、水肿，然后放入10％福尔马林液中固定24h以上，选取阴道两端和中央3个部位的组织制片、HE染色，进行病理组织学检查。
4.观察指标：根据《消毒技术规范》(卫生部2002年版)中阴道粘膜刺激反应评分标准，对其病理组织学检查结果进行评分。
(三)、结果受试物组积分均值为2.11，对照组为1.11，刺激指数为1.00，结果列于表1：
表1阴道黏膜刺激试验结果
(四)、结论
该样品的阴道黏膜刺激指数为1.00，根据《消毒技术规范》(卫生部2002年版)2.3.5的阴道黏膜刺激强度分级标准判定，属轻刺激性，符合Q/SJSEJS 001-2021《抗菌凝胶》的要求。
四、实验微生物指标检验报告：
样品名称：女性微生态抑菌修复凝胶
检验项目：微生物指标
(一)、器材
1.样品名称：女性微生态抑菌修复凝胶。
2.仪器设备：电热恒温培养箱YQF-049,生物安全柜YQF-186,生化培养箱YQF-176,霉菌培养箱YQF-062。
(二)、方法
1.检验依据：GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录B。
2.检验环境温度：24℃，相对湿度：53％。
(三)、结果
该样品的微生物指标测定结果列于表4.
表4微生物指标测定结果
(四)、结论
该样品的细菌菌落总数，真菌菌落总数＜1cfu/g，大肠菌群、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、溶血性链球菌均未检出，符合Q/SJSEJS 001-2021《抗菌凝胶》的要求。
五、感官检验报告：
样品名称：女性微生态抑菌修复凝胶
检验项目：*感官
(一)、器材
样品名称：女性微生态抑菌修复凝胶。
(二)、方法
1.检验依据：Q/SJSEJS 001-2021《抗菌凝胶》。
2.检验环境温度：25℃,相对湿度：50％。
(三)、结果
该样品的感官指标结果列于表7：
表7感官指标测定结果
(四)、结论
该样品外观为淡黄色透明液体，无肉眼可见外来杂质，具有芳香气味，符合Q/SJSEJS 001-2021《抗菌凝胶》的要求。
六、pH值检验报告：
样品名称：女性微生态抑菌修复凝胶
检验项目：pH值
(一)、器材
1.样品名称：女性微生态抑菌修复凝胶。
2.仪器设备：PH计A-036,电子天平A-066。
(二)、方法
1.检验依据：《消毒技术规范》(卫生部2002年版)2.2.1.4。
2.检验环境温度：25℃,相对湿度：50％。
(三)、结果
该样品pH值结果列于表2.
表2pH值测定结果
(四)、结论
该样品pH值(25.6℃)为5.60，符合Q/SJSEJS 001-2021《抗菌凝胶》的要求。
七、重金属检测检验报告：
样品名称：女性微生态抑菌修复凝胶
检验项目：铅、砷、汞
(一)、器材
1.样品名称：女性微生态抑菌修复凝胶。
2.仪器设备：原子吸收分光光度计E-011,原子荧光分光光度计E-016,分析天平A-066。
(二)、方法
1.检验依据：《化妆品安全技术规范》(2015年版)第四章1.2、1.3、1.4。
2.检验温度：25℃,相对湿度：50％。
(三)、结果
该样品铅、砷、汞结果列于表3。
表3铅、砷、汞指标测定结果
(四)、结论
该样品铅、砷、汞均未检出，符合Q/SJSEJS 001-2021《抗菌凝胶》的要求。
八、稳定性试验检验报告：
样品名称：女性微生态抑菌修复凝胶
检验项目：稳定性试验
(一)、器材
1.样品名称：女性微生态抑菌修复凝胶。
2.试验菌株：白色念珠菌(ATCC 10231)第10代。
3.仪器设备：生物安全柜A-006,电热恒温培养箱D-113,电子天平D-092,恒温恒湿培养箱D-110。
(二)、方法
1.检验依据：《消毒技术规范》(卫生部2002年版)2.1.11.3.4。
评价标准：产品经37℃加速试验3个月，其抗菌率达到规定的标准值，产品的抗菌作用在室温下至少保持两年。
2.加速试验方法：将原包装样品置37℃恒温箱内3个月，保持相对湿度75％,进行抗菌测试。
3.检验环境温度：24℃,相对湿度：56％。
4.样品配制：原样品。
(三)、结果
结果列于表6。
(四)、结论
该样品经37℃放置3个月，作用浓度为原样品，作用时间2min,对白色念珠菌的杀菌率＞90％,根据《消毒技术规范》(卫生部2002年版)2.1.11.3.4判定，该产品的抗菌作用在室温下至少保持两年，符合Q/SJSEJS 001-2021《抗菌凝胶》的要求。
表6杀菌性能试验结果
九、检验报告总结：
样品名称：女性微生态抑菌修复凝胶
检验依据：《化妆品安全技术规范》(2015年版)、《消毒技术规范》(卫生部2002年版)、GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》、Q/SJSEJS001-2021《抗菌凝胶》。
评价依据：Q/SJSEJS001-2021《抗菌凝胶》。
检验结论：
1.该样品外观为淡黄色透明液体，无肉眼可见外来杂质，具有芳香气味，符合Q/SJSEJS 001-2021《抗菌凝胶》的要求。
2.该样品pH值(25.6℃)为5.60,符合Q/SJSEJS 001-2021《抗菌凝胶》的要求。
3.该样品铅、砷、汞均未检出，符合Q/SJSEJS 001-2021《抗菌凝胶》的要求。
4.该样品的细菌菌落总数、真菌菌落总数＜1cfu/g,大肠菌群、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、溶血性链球菌均未检出，符合Q/SJSEJS 001-2021《抗菌凝胶》的要求。
5.该样品作用浓度为原样品，作用时间2min,对大肠杆菌、金黄葡萄球菌、白色念珠菌的杀菌率＞90％,根据GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录CC3判定，该产品有杀菌作用，符合Q/SJSEJS 001-2021《抗菌凝胶》的要求。
6.该样品经37℃放置3个月，作用浓度为原样品，作用时间2min,对白色念珠菌的杀菌率＞90％,根据《消毒技术规范》(卫生部2002年版)2.1.11.3.4判定，该产品的抗菌作用在室温下至少保持两年，符合Q/SJSEJS 001-2021《抗菌凝胶》的要求。
Claims (2)
1.一种凝胶在制备用于女性阴道清洁、重建微生态平衡的制品的用途，其特征在于，所述凝胶按质量百分比由以下物料组成：去离子水40-56％、海藻糖4-8％、玻尿酸0.1-0.6％、1、3丁二醇5-10％、甘油2.4-4％、羟丙基甲基纤维素2.8-4％、水杨酸0.8-1.5％，NL-50保湿因子6-14％，成纤维细胞条件培养液15-30％，以上物料质量百分比之和为100％；
所述成纤维细胞条件培养液制备方法如下：
S1.传代人皮肤成纤维细胞至第4代，在细胞工厂进行体外扩增；
S2.细胞培养采用8％胎牛血清+专用成纤维培养基；或者使用无血清间充质细胞培养基进行培养；
S3.待铺满覆盖率≥90％收集无菌的成纤维细胞上清液；
S4.将S3中收集的成纤维细胞上清液收集汇总后，按100毫升成纤维细胞上清液加入注射用活性炭1克，搅拌6～10分钟，依次经0.45um、0.22um微孔滤膜进行过滤，除色及异味澄清淡黄色、透明液体，按每1000毫升上清液加入40毫升戊二醇，进行防腐，即可加入最终原料中使用。
2.如权利要求1中所述凝胶的制备方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：
步骤1、将去离子水、海藻糖、玻尿酸和1、3丁二醇、甘油充分混合，搅拌，煮沸；所述步骤1中在60～100℃的温度下煮沸20～60分钟；
步骤2、静止冷却后，边加入羟丙基甲基纤维素边搅拌；所述步骤2中静止冷却至20-30℃，搅拌速度为每分钟搅拌1000～5000转，搅拌时长为0.5～1.5小时；
步骤3、加入水杨酸搅拌溶解；所述步骤3中水杨酸浓度为0.5～1.5％，搅拌时间为5～15分钟；
步骤4、加入NL-50保湿因子继续搅拌；所述步骤4中搅拌时间为10～30分钟；
步骤5、加入成纤维细胞条件培养液，继续搅拌；所述步骤5中调节PH值为5-6；
步骤6、静置后，继续搅拌；所述步骤6中静置10～14小时后，以1000～5000转每分钟的转速搅拌0.5～1.5小时；
步骤7、静置后过滤，分装至阴道给药器后，铝箔袋包装，进行25KGray的辐照灭菌，所述步骤7中静置10～50分钟后以30目不锈钢筛过滤。
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