CN110037980A - 一种含有干细胞提取物的抗衰老组合物 - Google Patents

一种含有干细胞提取物的抗衰老组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN110037980A
CN110037980A CN201910362364.7A CN201910362364A CN110037980A CN 110037980 A CN110037980 A CN 110037980A CN 201910362364 A CN201910362364 A CN 201910362364A CN 110037980 A CN110037980 A CN 110037980A
Authority
CN
China
Prior art keywords
stem cell
cell extract
extract
plant
plum blossom
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910362364.7A
Other languages
English (en)
Inventor
徐智峰
张新
洪加津
李智耀
黄智斌
张磊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Shaai Biological Technology Co ltd
Original Assignee
Guangzhou Shaai Biological Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou Shaai Biological Technology Co ltd filed Critical Guangzhou Shaai Biological Technology Co ltd
Priority to CN201910362364.7A priority Critical patent/CN110037980A/zh
Publication of CN110037980A publication Critical patent/CN110037980A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/41—Crassulaceae (Stonecrop family)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/73—Rosaceae (Rose family), e.g. strawberry, chokeberry, blackberry, pear or firethorn
    • A61K36/736—Prunus, e.g. plum, cherry, peach, apricot or almond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/18—Antioxidants, e.g. antiradicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/59—Mixtures
    • A61K2800/592—Mixtures of compounds complementing their respective functions
    • A61K2800/5922—At least two compounds being classified in the same subclass of A61K8/18
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/805—Corresponding aspects not provided for by any of codes A61K2800/81 - A61K2800/95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/84—Products or compounds obtained by lyophilisation, freeze-drying

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

本发明公开了一种抗衰老组合物，包括人体干细胞提取物和植物干细胞提取物，所述人体干细胞包括脂肪干细胞和淋巴干细胞；所述植物干细胞包括红景天干细胞和梅花干细胞。本发明抗衰老组合包含人体干细胞分泌的细胞因子和植物干细胞的活性成分，人体干细胞提取物与植物提取物复配，发挥两种干细胞的功能作用，可以有效阻断自由基对皮肤的损伤作用，增加皮肤中的水分含量和提高皮肤的弹性，发挥协同增效的抗衰老、抗氧化的效果。

Description

一种含有干细胞提取物的抗衰老组合物
技术领域
本发明涉及一种抗衰老组合物，具体涉及一种含有人体干细胞和植物干细胞提取物的抗衰老组合物。
背景技术
皮肤老化是由自然因素或非自然因素造成的皮肤衰老现象。人出生后皮肤组织日益发达，功能逐渐活跃，当到达某种年龄就会开始退化，这种退化往往在人们不知不觉中慢慢进行。皮肤组织的成长期一般结束于25岁左右，有人称此期为“皮肤的弯角”，自此后生长与老化同时进行，皮肤弹力纤维渐渐变粗，40～50岁初老期，皮肤的老化慢慢明显，尽管老化程度会因人而异。
人的面部衰老比其他部位的衰老更加突出，最突出的症状是皱纹逐渐增多，造成皮肤衰老的原因主要有：1)紫外线的照射导致胶原蛋白流失，从而加速皮肤老化；2)体内氧自由基的攻击导致皮肤损伤；3)皮肤中的成纤维细胞自然老化。
人们皮肤的老化有两个因素：一是角质层水和能力降低，皮肤表面水脂乳化物含量减少；二是真皮胶原纤维合成减少和弹力纤维变性。因此需要使用一些具有抗衰老功效的产品来减少岁月的痕迹，延缓衰老的速度。在市面上的抗衰老护肤品，具有突释效应，在很短时间内完全释放或者释放出大部分活性成分，缓释效果较差，不具备持久抗衰老的效果，而且抗衰老护肤品有效成分的突释往往导致皮肤负担过重，浪费活性成分；另一方面，抗衰老护肤品中成分单一，抗衰老性能有限。
人体干细胞可以分泌大量的细胞因子，如血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、干细胞生长因子(SCF)等，这些因子具有对抗氧化应激、修复创伤、调节皮肤色素代谢等作用，同时干细胞可以通过旁分泌和细胞接触调节皮肤真皮干细胞的分化，因此干细胞分泌产物具有抗衰老和美容护肤作用。
植物干细胞是存在于茎端分生组织和根尖分生组织中的一类特殊细胞群，具有自我更新能力，又能产生具有持续分裂能力的子细胞，这些特殊细胞是植物根、茎、叶和花等器官的发生的源泉。植物干细胞技术是以植物的伤口复原机制为基础，先令植物形成伤口从而诱导复原组织细胞的形成，复原组织包含了未分化的细胞即干细胞，将这些复原组织细胞收集起来并在培养液中培养，富集获得植物干细胞。
近年来干细胞美容技术及其相关产品近两年受到美容界专家及业内人士的广泛关注。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种含人体干细胞和植物干细胞提取物的抗衰老组合物。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种含有干细胞提取物的抗衰老组合物，包括人体干细胞提取物和植物干细胞提取物，所述人体干细胞包括脂肪干细胞和淋巴干细胞；所述植物干细胞包括红景天干细胞和梅花干细胞。
优选地，所述人体干细胞提取物与植物干细胞提取物的重量之比为：人体干细胞提取物：植物干细胞提取物＝2:1～4。
优选地，所述人体干细胞提取物与植物干细胞提取物的重量之比为：人体干细胞提取物：植物干细胞提取物＝2:3。
优选地，所述抗衰老组合物包括以下重量份的组分：脂肪干细胞提取物3-15份、淋巴干细胞提取物5-15份、红景天干细胞提取物5-30份、梅花干细胞提取物10-40份。
优选地，所述抗衰老组合物包括以下重量份的组分：脂肪干细胞提取物7份、淋巴干细胞提取物14份、红景天干细胞提取物14份、梅花干细胞提取物28份。
优选地，所述脂肪干细胞提取物与淋巴干细胞提取物的重量之比为：脂肪干细胞提取物：淋巴干细胞提取物＝1:1～4。
优选地，所述脂肪干细胞提取物与淋巴干细胞提取物的重量之比为：脂肪干细胞提取物：淋巴干细胞提取物＝1:2。
优选地，所述红景天干细胞提取物与梅花干细胞提取物的重量之比为：红景天细胞提取物：梅花干细胞提取物＝1:1～3。
优选地，所述红景天干细胞提取物与梅花干细胞提取物的重量之比为：红景天细胞提取物：梅花干细胞提取物＝1:2。
本发明抗衰老组合物所用主要成分以及功效如下：
脂肪干细胞脂肪组织是一种可再生的干细胞来源，多数脂肪干细胞来源于脂肪组织中的纤维组织和血管壁，少数游离于脂肪间。释放重要的生长因子、细胞因子来促进伤口愈合、调节炎症反应、减少瘢痕形成和抗衰老。在抗衰老应用中，脂肪干细胞不仅可以作为填充剂，还可成为永久性的再生剂，其分化能力强，因而抗衰老效果明显，疗效持久。
淋巴细胞干细胞能分泌的多种机体内细胞因子，如表皮细胞生长因子(EGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、酸性和碱性成纤维细胞生长因子(aFGF、bFGF)、神经生长因子(NGF)等生长因子家族成员，可以定向促进各种细胞的生长，促进细胞间基质的形成，促进皮肤损伤组织的修复。TGF-β转化生长因子家族，可促进成纤维细胞等组织细胞的生长，促进细胞外基质如胶原蛋白、纤粘连蛋白的表达。因此，淋巴干细胞在抗衰老领域具有很大的潜力。
红景天干细胞提取物中含有多种亲水性成分，以及黄酮和多酚类物质含量丰富，一方面，所述红景天干细胞提取物本身在一定程度上具有保湿和抗氧化作用，且容易被皮肤吸收；另一方面，所述红景天干细胞提取物还可以促进皮肤对组合物中的其他功效成分的吸收。
梅花干细胞提取物中含有多种活性物质，例如黄酮类：木犀草素-7-葡萄糖甙、艾黄素、荭草素、异荭草素，黄酮类化合物与蛋白质以疏水键和氢键方式发生复合反应，因而使人的皮肤产生收敛。环烯醚萜甙类：桃叶珊瑚甙、淡紫花牡荆甙，具有强抗氧化作用，能抵抗紫外线保护皮肤不受紫外线的侵害。有机酸类：对羟基苯甲酸、5-羟基间苯二酸、3，4-二羟基苯甲酸、原儿茶酸、维生素C、5-氧-异酞，能帮助叶酸和矿物质代谢，摄取葡萄糖和氨基酸；提高白血球机能，提高免疫力。
本发明所述干细胞提取物的制备方法如下：
一、脂肪干细胞提取物的制备
(1)将人体脂肪组织进行匀浆处理，获得液体状的脂肪组织；
(2)将步骤(1)的液体组织离心，弃上清后，在沉淀中加入0.05％的脂肪消化酶与处理，置于水浴恒温振荡器中，于37℃，75r/min，震荡2小时；待脂肪组织溶解95％以上后终止消化，100μm细胞筛过滤，390g离心10min。取细胞接种到DMEM/F12完全培养液(含5％FBS+庆大霉素50U/ml)，调整细胞浓度为5×105/ml，在37℃、5％CO2条件下培养；每隔2～3天进行细胞传代并收集第15天的细胞培养上清；
(3)随机抽取P0-P6代细胞进行流式鉴定，1×106个细胞加入20μL抗体，4℃孵育30min，用1×PBS溶液洗去多余流式抗体，弃上清，再用300μL1×PBS溶液重悬细胞，上机检测；
(4)将步骤(3)培养上清液用1KD超滤膜超滤，去除分子量1000以下的小分子杂质，收集截留液，将截留液冷冻干燥即为脂肪干细胞细胞提取物。
二、淋巴干细胞提取物的制备
(1)采集健康产妇的新生儿脐带血，500-600g离心10min分离出上层血浆，56℃灭活后备用；
(2)向下层沉淀中加入等体积磷酸缓冲液，混匀，经人淋巴细胞分离液密度梯度离心从白膜层分离单个核细胞，加磷酸缓冲液稀释，500g离心15min，弃上清；
(3)取单个核细胞接种到GT-T551无血清培养基，调整细胞浓度为1×105个/ml，添加IL-2(200U/ml)和5％脐带血浆，在37℃、5％CO2条件下培养至第15天离心收集培养上清液，将收集的培养上清液冷冻干燥即得淋巴干细胞细胞提取物。
三、红景天干细胞提取物的制备
(1)红景天形成层干细胞的分离及培养：将红景天的块根经过消毒处理后，切下包括形成层在内的半圆切片；将半圆型切片放置在WPM培养基上，25℃下黑暗培养；两周后将形成层明显增殖的外增殖体取出，分离形成层干细胞并转移到继代培养基中培养，每两周继代一次，得到红景天形成层干细胞；
(2)收集培养红景天形成层干细胞后的培养基，经超滤膜过滤，浓缩滤液，去除培养基中的酚红，保留培养基中的活性成分；将培养基和红景天形成层干细胞的裂解物冷冻干燥，得到红景天干细胞提取物。
四、梅花干细胞提取物的制备
(1)梅花形成层干细胞的分离及培养：将梅花叶片经过消毒处理后，在无菌条件下，将消毒后的梅花叶片切成0.5cm*0.5cm大小，接种在WPM培养基上，使叶背面与WPM培养基接触，在25℃下黑暗培养；两周后将形成层干细胞转移到继代培养基中培养，每两周继代一次，得到梅花形成层干细胞；
(2)收集培养梅花形成层干细胞后的培养基，经超滤膜过滤，浓缩滤液，去除培养基中的酚红，保留培养基中的活性成分；将培养基和梅花形成层干细胞的裂解物冷冻干燥，得到梅花干细胞提取物。
本发明的有益效果：本发明抗衰老组合包含人体干细胞分泌的细胞因子和植物干细胞的活性成分，人体干细胞提取物与植物干细胞提取物复配，发挥两种干细胞各自的功能作用，可以有效阻断自由基对皮肤的损伤作用，增加皮肤中的水分含量和提高皮肤的弹性，发挥协同增效的抗衰老、抗氧化的效果。
具体实施方式
为了更加简洁明了的展示本发明的技术方案、目的和优点，下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细描述。
实施例1-14与对比例1-6抗衰老组合物各组分的重量份，如表1：
表1：实施例1-14与对比例1-6抗衰老组合物组分及其重量份
如表1所示，实施例3中人体干细胞提取物与植物干细胞提取物的重量份之比为2:1，实施例4中人体干细胞提取物与植物干细胞提取物的重量份之比为2:2，实施例5中人体干细胞提取物与植物干细胞提取物的重量份之比为2:3，实施例6中人体干细胞提取物与植物干细胞提取物的重量份之比为2:4；实施例7中脂肪干细胞提取物与淋巴干细胞提取物的重量份之比为1:1，实施例8中脂肪干细胞提取物与淋巴干细胞提取物的重量份之比为1:2，实施例9中脂肪干细胞提取物与淋巴干细胞提取物的重量份之比为1:3，实施例10中脂肪干细胞提取物与淋巴干细胞提取物的重量份之比为1:4；实施例11中红景天干细胞提取物与梅花干细胞提取物的重量份之比为1:1，实施例12中红景天干细胞提取物与梅花干细胞提取物的重量份之比为1:2，实施例13中红景天干细胞提取物与梅花干细胞提取物的重量份之比为1:3。
如表1所示，对比例1-6与实施例14的区别在于：对比例1中未添加人体干细胞提取物，对比例2中未添加植物干细胞提取物，对比例3中未添加脂肪干细胞提取物，对比例4中未添加淋巴干细胞提取物，对比例5中未添加红景天干细胞提取物，对比例6中未添加梅花干细胞提取物。
实施例15
本实施例提供一种本发明抗衰老组合物的制备方法，包括以下步骤：
S1.脂肪干细胞提取物的制备
(1)将人体脂肪组织进行匀浆处理，获得液体状的脂肪组织；
(2)将步骤(1)的液体组织离心，弃上清后，在沉淀中加入0.05％的脂肪消化酶与处理，置于水浴恒温振荡器中，于37℃，75r/min，震荡2小时；待脂肪组织溶解95％以上后终止消化，100μm细胞筛过滤，390g离心10min。取细胞接种到DMEM/F12完全培养液(含5％FBS+庆大霉素50U/ml)，调整细胞浓度为5×105/ml，在37℃、5％CO2条件下培养；每隔2～3天进行细胞传代并收集第15天的细胞培养上清；
(3)随机抽取P0-P6代细胞进行流式鉴定，1×106个细胞加入20μL抗体，4℃孵育30min，用1×PBS溶液洗去多余流式抗体，弃上清，再用300μL1×PBS溶液重悬细胞，上机检测；
(4)将步骤(3)培养上清液用1KD超滤膜超滤，去除分子量1000以下的小分子杂质，收集截留液，将截留液保存于4℃备用。
S2.淋巴干细胞提取物的制备
(1)采集健康产妇的新生儿脐带血，500-600g离心10min分离出上层血浆，56℃灭活后备用；
(2)向下层沉淀中加入等体积磷酸缓冲液，混匀，经人淋巴细胞分离液密度梯度离心从白膜层分离单个核细胞，加磷酸缓冲液稀释，500g离心15min，弃上清；
(3)取单个核细胞接种到GT-T551无血清培养基，调整细胞浓度为1×105个/ml，添加IL-2(200U/ml)和5％脐带血浆，在37℃、5％CO2条件下培养至第15天离心收集培养上清液，将收集的培养上清液保存于4℃备用。
S3.红景天干细胞提取物的制备
(1)红景天形成层干细胞的分离及培养：将红景天的块根经过消毒处理后，切下包括形成层在内的半圆切片；将半圆型切片放置在WPM培养基上，25℃下黑暗培养；两周后将形成层明显增殖的外增殖体取出，分离形成层干细胞并转移到继代培养基中培养，每两周继代一次，得到红景天形成层干细胞；
(2)收集培养红景天形成层干细胞后的培养基，经超滤膜过滤，浓缩滤液，去除培养基中的酚红，保留培养基中的活性成分；将培养基和红景天形成层干细胞的裂解物保存于4℃备用。
S4.梅花干细胞提取物的制备
(1)梅花形成层干细胞的分离及培养：将梅花叶片经过消毒处理后，在无菌条件下，将消毒后的梅花叶片切成0.5cm×0.5cm大小，接种在WPM培养基上，使叶背面与WPM培养基接触，在25℃下黑暗培养；两周后将形成层干细胞转移到继代培养基中培养，每两周继代一次，得到梅花形成层干细胞；
(2)收集培养梅花形成层干细胞后的培养基，经超滤膜过滤，浓缩滤液，去除培养基中的酚红，保留培养基中的活性成分；将培养基和梅花形成层干细胞的裂解物保存于4℃备用。
S5.抗衰老组合物的制备
将上述获得的脂肪干细胞提取物截留液、淋巴干细胞培养上清液、红景天以及梅花干细胞的裂解物在35℃水浴10min，混合均匀，将混合液冷冻干燥，获得的冻干粉即为本发明的抗衰老组合物。
试验例1：为了验证本发明所述抗衰老组合物的抗氧化性，对实施例1～14和对比例1～6所述组合物进行抗氧化测试，具体如下：
1、溶液的配制：将实施例1～14和对比例1～6的抗衰老组合品配制成5.0×10-3g/mL的护肤品溶液；配制浓度为2×10-4g/mL的DPPH的无水乙醇溶液；配制浓度为10mmol/L水杨酸的无水乙醇溶液；配制浓度为10mmol/L的FeSO4溶液；配制浓度为8.8mmol/L的H2O2水溶液；配制pH为8.2的Tris-HCl溶液；配制浓度为10mmol/LHCl溶液；以浓度为10mmol/L的HCl溶液为溶剂配制浓度为5mmol/L的邻苯三酚溶液。
2、对DPPH·自由基的清除率测试
称取待测样品溶液3mL与3mL浓度为2×10-4g/mL的DPPH的无水乙醇溶液混合，静置30min，在517nm波长处测定吸光度Ai；另将3mL去离子水和3mL浓度为2×10-4g/mL的DPPH的无水乙醇溶液混合，半小时后于517nm波长处测定吸光度A0。根据公式：k＝[1-(Ai-A0)/A0]×100％，计算待测样品溶液对DPPH·自由基的清除率。
3、对·OH自由基的清除率测试
将2mL的待测样品溶液、2mL的10mmol/L的水杨酸溶液和2mL的10mmol/L的FeSO4溶液混合，然后加入2mL的浓度为8.8mmol/L的H2O2水溶液，摇匀后于37℃的水浴中反应30min，在510nm波长处测定吸光度Ai；将2mL的待测样品溶液、2mL的10mmol/L的水杨酸溶液和2mL的10mmol/L的FeSO4溶液混合，然后加入2mL的去离子水，摇匀后于37℃的水浴中反应30min，在510nm波长处测定吸光度Aj；将2mL去离子水、2mL的10mmol/L的水杨酸溶液和2mL的10mmol/L的FeSO4溶液混合，然后加入2mL的浓度为8.8mmol/L的H2O2水溶液，摇匀后于37℃的水浴中反应30min，在510nm波长处测定吸光度A0。根据公式：k＝[1-(Ai-Aj)/A0]×100％，计算待测样品溶液对·OH自由基的清除率。
4、对·O2 -自由基的清除率测试
将5mLpH为8.2的Tris-HCl溶液在25℃水浴中预热20min，然后依次加入2mL待测样品溶液和0.5mL浓度为5mmol/L的邻苯三酚溶液，摇匀后于25℃水浴中反应4min，立即测试在320nm处的吸光度Ai；将5mLpH为8.2的Tris-HCl溶液在25℃水浴中预热20min，然后依次加入2mL待测样品溶液和0.5mL浓度为10mmol/L的HCl溶液，摇匀后于25℃水浴中反应4min，立即测试在320nm处的吸光度Aj；将5mLpH为8.2的Tris-HCl溶液在25℃水浴中预热20min，然后依次加入2mL去离子水和0.5mL浓度为5mmol/L的邻苯三酚溶液，摇匀后于25℃水浴中反应4min，立即测试在320nm处的吸光度A0；根据公式：k＝[1-(Ai-Aj)/A0]×100％，计算待测样品溶液对·O2 -自由基的清除率。
每个样品测试设置三组平行试验，取三组实验结果的平均值，测试结果见表2。
表2：实施例1～14和对比例1～6所述组合物对三种自由基的清除率
组别 DPPH·清除率(％) ·OH清除率(％) ·O<sub>2</sub><sup>-</sup>清除率(％)
实施例1 60.8 51.3 61.2
实施例2 63.2 53.6 60.1
实施例3 62.6 50.5 63.4
实施例4 71.5 59.9 70.9
实施例5 75.5 65.5 82.0
实施例6 72.8 59.4 73.5
实施例7 73.1 58.8 70.3
实施例8 78.0 68.5 84.2
实施例9 72.4 58.9 73.8
实施例10 72.0 60.0 70.1
实施例11 75.5 63.2 78.9
实施例12 78.9 69.0 80.3
实施例13 74.6 63.5 78.2
实施例14 81.2 70.1 85.6
对比例1 40.4 30.1 47.3
对比例2 32.8 30.5 43.2
对比例3 49.4 47.8 50.0
对比例4 50.8 45.9 55.2
对比例5 56.6 49.3 60.0
对比例6 51.7 46.2 56.3
从表2的数据可以看出，从实施例1～14的三种自由基清除率可以看出，本发明所述抗衰老组合物能有效清除自由基，具有一定的抗氧化能力。从实施例1～2的自由基清除率可以看出，随着各组分含量的增加实施例2的自由基清除率更高；从实施例3～6可以看出，随着植物干细胞提取物比例的增加，自由基清除率和抗氧化功能增强，但植物干细胞提取物的比例增加到一定程度时，其抗氧化效果和自由基清除率均没有继续增加，说明植物干细胞提取物与人体脂肪干细胞提取物之间有一定的比例效应，经过多次研究，最终确定人体干细胞提取物与植物干细胞提取物的重量比为2:3，其效果最佳。
在确定人体干细胞提取物与植物干细胞提取物的最佳重量比之后，研究脂肪干细胞与淋巴干细胞之间的比例配比，从实施例7～10可以看出，实施例8的清除自由基和抗氧化效果最佳，虽然实施例10的淋巴干细胞提取物含量更高，但是其效果并没有实施例8好，可见两种人体干细胞提取物之间存在一定的比例关系，达到最佳比例才能发挥其最佳的抗氧化效果，因此，最终确定脂肪干细胞提取物与淋巴干细胞提取物之间的重量之比为1:2。
本发明还确定了两种植物干细胞提取物的比例关系，结果如表1所示，从实施例11-12可知，虽然抗氧化效果随着梅花干细提取物含量的增加而递增，但是当梅花干细提取物含量过高时，则抗养化效果并未增加，可见两种植物干细胞提取物之间存在一定的比例关系，达到最佳比例才能发挥其最佳的抗氧化效果，因此，最终确定红景天干细胞提取物与梅花干细胞提取物之间的重量之比为1:2。
从表2可看出，实施例14清除自由基和抗氧化能力最强，最终确定实施例14为本发明的最佳方案。
试验例2：：为了验证本发明所述抗衰老组合物具有促细胞增殖的效果，对实施例1～14和对比例1～6所述组合物进行细胞增殖测试，具体如下：
将对数生长期的HSAS3细胞(人皮肤成纤维细胞)用无血清培养基DMEM+丙酮酸钠+青链霉素混合液，调整细胞浓度为4×104个/200ul，到96孔板，细胞接种量为4×104个/200ul/孔，将实施例1-14、对比例1-6的抗衰老组合物配制成浓度为10％的溶液加到各孔中，设置三复孔，加培养基后培养箱孵育72h观测，加入CCK-8溶液继续培养2h，酶标仪测定细胞于波长450nm处的吸光度值(OD值)，以0％孔为对照孔，计算细胞增殖活性增加百分率。计算公式：(OD实验孔-OD对照孔)/OD对照孔。采用SPSS 19.0统计学软件进行随机单位组方差分析，结果见表3所示。
表3：实施例1～14和对比例1～6所述组合物对HSAS3细胞的促长效果
由表3可知，实施例与对比例相比，实施例中的HSAS3细胞增长率明显提高，均达70％以上，增殖率变化显著(P＜0.01)。由于实施例3-13中的组合物成分之间存在特定比例，因此，其细胞增长率的数据均高于实施例1-2。实施例3-6中，实施例5为人体干细胞提取物与植物干细胞提取物的最佳比例，其促HSAS3细胞增长率明显高于实施例3、4、6。在实施例7-10中，实施例8为脂肪干细胞提取物与淋巴干细胞提取物的最佳比例，其促HSAS3细胞增长率明显高于实施例7、9、10。在实施例11-13中，实施例12为红景天干细胞提取物与梅花干细胞提取物的最佳比例，其促HSAS3细胞增长率明显高于实施例11、13。实施例14综合前述的最佳比例，因此，其促HSAS3细胞增长率效果最佳。
试验例3：为验证本发明所述抗衰老组合物在抗衰老方面的效果，将实施例1、14的抗衰老组合物分别制成护肤品进行皮肤水分含量、胶原蛋白纤维含量和弹性指数，所述护肤品包括以下重量百分含量的组分：实施例1、14的抗衰老组合物15％、PEG-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯1.2％、甲基葡糖倍半硬脂酸酯0.4％、汉生胶0.2％、丙二醇3％、卡波姆0.5％、尼泊金甲酯0.1％、苯氧乙醇0.4％和余量的去离子水。
选择50名身体健康、无护肤品过敏史的志愿者，志愿者为年龄在35～55岁之间，男女不限，分为2组。志愿者每天早晚洁面后，使用实施例1、14所述护肤品，使用方法为取适量涂抹于脸颊，轻轻抹按至完全吸收，连续使用28天。选取志愿者的脸颊皮肤分别测试每天志愿者使用护肤品30min后的皮肤水分含量、胶原蛋白纤维含量和弹性指数。使用皮肤水分测定仪(SG-5D)测定水分值，用智能皮肤检测仪(EH-800U)测定皮肤胶原蛋白纤维含量和弹性指数，每隔7天检测一次，测试结果见表4。
表4：实施例1、14组合物制备的护肤品抗衰老效果
从表4的结果可以看出，在使用实施例1所述护肤品28天后，水分含量增加了51.9％，胶原蛋白纤维含量增加了37.4％，弹性提高67.5％；使用实施例14所述护肤品28天后，水分含量增加了71.9％，胶原蛋白纤维含量增加了67.4％，弹性提高120.5％。测试结果表明实施例1、14所述护肤品具有较强的保湿效果、抗氧化性和增加皮肤弹性的效果。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (9)

1.一种含有干细胞提取物的抗衰老组合物，其特征在于，包括人体干细胞提取物和植物干细胞提取物，所述人体干细胞包括脂肪干细胞和淋巴干细胞；所述植物干细胞包括红景天干细胞和梅花干细胞。
2.如权利要求1所述的含有干细胞提取物的抗衰老组合物，其特征在于，所述人体干细胞提取物与植物干细胞提取物的重量之比为：人体干细胞提取物：植物干细胞提取物＝2:1～4。
3.如权利要求2所述的含有干细胞提取物的抗衰老组合物，其特征在于，所述人体干细胞提取物与植物干细胞提取物的重量之比为：人体干细胞提取物：植物干细胞提取物＝2:3。
4.如权利要求1所述的含有干细胞提取物的抗衰老组合物，其特征在于，所述抗衰老组合物包括以下重量份的组分：脂肪干细胞提取物3-15份、淋巴干细胞提取物5-15份、红景天干细胞提取物5-30份、梅花干细胞提取物10-40份。
5.如权利要求4所述的含有干细胞提取物的抗衰老组合物，其特征在于，所述抗衰老组合物包括以下重量份的组分：脂肪干细胞提取物7份、淋巴干细胞提取物14份、红景天干细胞提取物14份、梅花干细胞提取物28份。
6.如权利要求4或5所述的含有干细胞提取物的抗衰老组合物，其特征在于，所述脂肪干细胞提取物与淋巴干细胞提取物的重量之比为：脂肪干细胞提取物：淋巴干细胞提取物＝1:1～4。
7.如权利要求6所述的含有干细胞提取物的抗衰老组合物，其特征在于，所述脂肪干细胞提取物与淋巴干细胞提取物的重量之比为：脂肪干细胞提取物：淋巴干细胞提取物＝1:2。
8.如权利要求4或5所述的含有干细胞提取物的抗衰老组合物，其特征在于，所述红景天干细胞提取物与梅花干细胞提取物的重量之比为：红景天细胞提取物：梅花干细胞提取物＝1:1～3。
9.如权利要求8所述的含有干细胞提取物的抗衰老组合物，其特征在于，所述红景天干细胞提取物与梅花干细胞提取物的重量之比为：红景天细胞提取物与梅花干细胞提取物＝1:2。
CN201910362364.7A 2019-04-30 2019-04-30 一种含有干细胞提取物的抗衰老组合物 Pending CN110037980A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910362364.7A CN110037980A (zh) 2019-04-30 2019-04-30 一种含有干细胞提取物的抗衰老组合物

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910362364.7A CN110037980A (zh) 2019-04-30 2019-04-30 一种含有干细胞提取物的抗衰老组合物

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110037980A true CN110037980A (zh) 2019-07-23

Family

ID=67280596

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910362364.7A Pending CN110037980A (zh) 2019-04-30 2019-04-30 一种含有干细胞提取物的抗衰老组合物

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110037980A (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110755362A (zh) * 2019-11-06 2020-02-07 广州远想生物科技有限公司 一种含有酵母细胞提取物的修复嫩肤组合物
CN112089681A (zh) * 2020-09-10 2020-12-18 广东丸美生物技术股份有限公司 一种具有保湿美白抗衰老功效的精华液
CN114053199A (zh) * 2021-12-29 2022-02-18 广州南嘉医药生物科技有限公司 一种植物干细胞美容抗衰制剂的制备方法
WO2022117230A1 (fr) * 2020-12-02 2022-06-09 De Klebnikoff, Nicolas Composition cosmetique a base de cellules de rhodiola rosea
BE1028846B1 (fr) * 2020-12-02 2022-07-05 De Klebnikoff Nicolas Composition cosmétique à base de cellules de Rhodiola Rosea

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107281039A (zh) * 2017-07-27 2017-10-24 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 抗冻护手霜及其制备方法
CN109157501A (zh) * 2018-09-25 2019-01-08 深圳市宝迪生物工程有限公司 一种含干细胞提取物的抗衰老的组合物及应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107281039A (zh) * 2017-07-27 2017-10-24 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 抗冻护手霜及其制备方法
CN109157501A (zh) * 2018-09-25 2019-01-08 深圳市宝迪生物工程有限公司 一种含干细胞提取物的抗衰老的组合物及应用

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110755362A (zh) * 2019-11-06 2020-02-07 广州远想生物科技有限公司 一种含有酵母细胞提取物的修复嫩肤组合物
CN112089681A (zh) * 2020-09-10 2020-12-18 广东丸美生物技术股份有限公司 一种具有保湿美白抗衰老功效的精华液
WO2022117230A1 (fr) * 2020-12-02 2022-06-09 De Klebnikoff, Nicolas Composition cosmetique a base de cellules de rhodiola rosea
BE1028846B1 (fr) * 2020-12-02 2022-07-05 De Klebnikoff Nicolas Composition cosmétique à base de cellules de Rhodiola Rosea
CN114053199A (zh) * 2021-12-29 2022-02-18 广州南嘉医药生物科技有限公司 一种植物干细胞美容抗衰制剂的制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110037980A (zh) 一种含有干细胞提取物的抗衰老组合物
KR102113645B1 (ko) 미세침 분말 및 천연 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 방지 및 모발 성장 촉진용 화장료 조성물
CN112933034A (zh) 一种可去黑眼圈眼部修复护理组合物、精华乳及制备方法
CN112641702A (zh) 一种祛皱抗衰组合物及其制备方法与应用
CN110772454A (zh) 亮肤保湿、舒缓、抗衰老的复合精油、其制备方法及应用
CN112716855B (zh) 一种具有屏障修护、抗衰老功效的组合物及其制备方法和应用
CN110123700A (zh) 一种舒缓眼周皱纹和改善肌肤黯淡的眼霜
KR102473093B1 (ko) 햄프씨드오일, 식물캘러스배양여과물 및 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물
CN108524371A (zh) 一种组合物及其在制备具有抗衰老功能的化妆品中的应用
CN107523532A (zh) 一种去分化植物细胞培养物及其在化妆品中的应用
KR20120092229A (ko) 조직 배양한 유채와 석류, 산삼의 발효 추출물을 유효성분으로 하는 화장료 조성물
CN113384510B (zh) 一种具有抗光老化、舒缓清凉功效的发酵组合物及其制备方法和应用
CN115919709A (zh) 一种具有修护和抗衰老功效的山茶花精华油
CN112933018B (zh) 一种具有屏障修护、抗光老化功效的组合物及其制备方法和应用
CN112057413B (zh) 用于修复敏感肌肤的精华液及其制备方法
CN109288754A (zh) 一种含有柿叶发酵提取物的精华液及制备方法
CN111544309B (zh) 一种生物活性物冻干固体面膜及其制备方法
CN107638377A (zh) 一种含山竹干细胞提取物的控油美白护肤品及其制备方法
KR101571384B1 (ko) 쌀 캘러스 및 복합 추출물을 함유하는 다크서클 예방 및 개선용 화장료 조성물
CN113773910A (zh) 一种促进皮肤细胞新生的青蒿精油、白茶精油及它们的组合物
CN115969759B (zh) 光保护植物提取组合物及其应用
KR102597584B1 (ko) 피부 모공 및 피지 개선 화장품 조성물
KR101741138B1 (ko) 화산석 송이를 함유하는 화장료 조성물
CN107802594A (zh) 一种含有桂花干细胞提取物的抗衰老、净白组合物及其制备方法
CN107789316A (zh) 一种含金盏花干细胞提取物的保湿抗氧化组合物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190723

RJ01 Rejection of invention patent application after publication