WO2022117230A1 - Composition cosmetique a base de cellules de rhodiola rosea - Google Patents

Composition cosmetique a base de cellules de rhodiola rosea Download PDF

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WO2022117230A1
WO2022117230A1 PCT/EP2021/025471 EP2021025471W WO2022117230A1 WO 2022117230 A1 WO2022117230 A1 WO 2022117230A1 EP 2021025471 W EP2021025471 W EP 2021025471W WO 2022117230 A1 WO2022117230 A1 WO 2022117230A1
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xylitol
cells
callus
dedifferentiated
weight
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PCT/EP2021/025471
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Inventor
Rachid Ennamany
Original Assignee
De Klebnikoff, Nicolas
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    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]

Definitions

  • the subject of the present invention is a cosmetic composition based on Rhodiola Rosea cells and Xilytol, in particular for improving and/or regulating the microbiological balance of the cutaneous flora of an area of the human skin area.
  • Improving and controlling the cutaneous flora is an essential problem in cosmetics because it makes it possible to obtain a smoother and more youthful rendering of the skin.
  • the skin is a complex barrier organ which hosts many microorganisms on its surface (bacteria, fungi, viruses). This microflora colonizing the stratum corneum constitutes the cutaneous microbiota. It is acquired at birth and evolves to reach a state of equilibrium. in adulthood. Its composition and abundance are influenced by genetics and lifestyle. This guarantees the uniqueness of the microbiota between individuals, which can thus be called a microbiological fingerprint. Microorganisms and their host live in perfect harmony. A balanced microbiota is harmless and beneficial for its host.
  • the microbiota participates in the development and maintenance of the balance of its host. Microorganisms and the skin barrier act in synergy to protect the skin from external aggressions.
  • the cutaneous flora plays a fundamental role since it gives the skin immunity and protection against potential pathogenic colonizers.
  • the cutaneous microbiota is today considered as a real functional unit of the skin which contributes to its health and its beauty. However, this balance is constantly threatened by various factors, intrinsic and extrinsic, which can alter the composition of the microbiota and the barrier function of the skin. This microbiota imbalance, or dysbiosis, disrupts microbe-microbe and microbe-host cooperation and can lead to skin disorders. It is therefore essential to maintain the balance of the cutaneous ecosystem in order to display skin of exceptional quality.”
  • Rhodiola extract in cosmetics has already been proposed.
  • document JP2000/128729 describes a cosmetic composition that moisturizes and gives a "clear" effect to the skin comprises an extract of a plant of the Rhodiola family, of which the species Kiringen Keikeiten (Rhodiola algida/Aomi, Haibei, Kaisei), Karako Redkeiten (Rhodiola algida var.
  • Rhodiola plant cells enriched with Xylitol there is no mention in this document of the use of Rhodiola plant cells enriched with Xylitol, in particular to control the skin microbiota.
  • Anti-wrinkle compositions comprising an extract of Rhodiola Rosea as an anti-wrinkle agent to be used in combination with others are for example taught in CN103784376, CN103690406, CN105456114, etc. These documents show that the extracts of Rhodiola Rosea are not considered as such as sufficient to treat the problem of wrinkles.
  • Rhodiola Rosea extract is therefore only considered effective in combination with another extract for anti-wrinkle treatment.
  • the biological material is treated in a deep eutectic solvent (DES).
  • DES deep eutectic solvent
  • the eutectic solvent is for example the combination of a natural organic acid (such as citric acid, lactic acid, etc.) and a sugar or sugar alcohol (such as sucrose, glucose, sorbitol, xylitol, etc.) .
  • a natural organic acid such as citric acid, lactic acid, etc.
  • a sugar or sugar alcohol such as sucrose, glucose, sorbitol, xylitol, etc.
  • the solvents comprise at least choline in molar excess and by weight relative to xylitol, and a large molar excess of water relative to the molar quantity of Xylitol.
  • the process of extraction by deep eutectic solvent amounts to dissolving metabolites which are little or not soluble in water, this extraction step then requiring a large excess of NADES with respect to the quantity of metabolites to be dissolved.
  • An extraction step goes against a step of enriching plant cells with xylitol, which allows a controlled application of the metabolites and of the xylitol present in the cells of Rhodiola rosea.
  • Document CN106520665 describes the in vitro culture of Rhodolia Rosea cells in culture media enriched with plant hormones. This culture medium is then subjected to an extraction step using a solvent of the alcohol type. The product thus obtained is also an alcoholic extract.
  • Document CN110037980 discloses an anti-wrinkle composition
  • an anti-wrinkle composition comprising an extract of human stem cells, enriched with a lysate of Rhodiola rosea cells and a lysate of plum blossom cells. Lysates are prepared by membrane disruption and lyophilization. The anti-wrinkle composition does not contain uncrushed Rhodiola rosea cells. Comparative examples 1 to 6 of this document show the importance of the presence of all the ingredients in order to obtain good anti-oxidant properties and good anti-aging properties.
  • the product "Super Moisture Balm” marketed in 2011 by Clarins Laboratories is a super moisturizing balm based on calcium hyaluronate and bison grass.
  • the aqueous composition includes many compounds, including xylitol, glycerol and Rhodiola rosea root extracts.
  • the subject of the invention is an at least partially aqueous cosmetic composition containing at least (a) dedifferentiated cells of Rhodiola Rosea unground enriched at least in xylitol and having in their internal volume defined by their cell wall xylitol, and (b) a carrier for cosmetic application.
  • This composition is for topical application.
  • the composition has one or more of the following characteristics:
  • the composition contains at least (a) dedifferentiated and elicited unground Rhodiola Rosea cells enriched at least in xylitol in their internal volume defined by their cell wall, (b) xylitol outside the internal volume of the cells, (c) glycerin and (d) a carrier for cosmetic application.
  • the Xylitol/glycerin weight ratio of the composition is from 1:5 to 1:25, preferably from 1:10 to 1:20.
  • the composition also contains (e) a homogenate of dedifferentiated and elicited cells of Rhodiola Rosea.
  • the ground material of dedifferentiated and elicited Rhodiola Rosea cells is a ground material of Rhodiola Rosea cells made in the presence of Xylitol and glycerin, the Xylitol/glycerin weight ratio being advantageously from 1:5 to 1:25, preferably from 1:10 to 1:20.
  • the weight ratio between the unground, dedifferentiated and elicited cells of Rhodiola Rosea enriched at least in xylitol in their internal volume, and the ground material of dedifferentiated and elicited cells of Rhodiola Rosea is between 1:10 and 10:1.
  • the dedifferentiated and elicited cells of unground Rhodiola Rosea enriched at least in xylitol in their internal volume defined by their cell wall present on their "cell wall at least one or more zones comprising xylitol and glycerin.
  • the dedifferentiated and elicited cells of unground Rhodiola Rosea enriched at least in xylitol in their internal volume defined by their cell wall comprise at least phytoalexins and xylitol, the xylitol weight ratio! phytoalexins in the internal volume of the cells defined by their cell wall being greater than 0.3, advantageously greater than 0.5, preferably greater than 1.
  • the dedifferentiated, and advantageously elicited, cells of unground Rhodiola Rosea enriched at least in Xylitol and having in their internal volume defined by their cell wall Xylitol are cells prepared by separating from their culture medium, a callus comprising dedifferentiated cells , and advantageously elicited, and by mixing this Rhodiola Rosea cell callus with xylitol or an aqueous liquid composition containing xylitol, the aqueous callus weight ratio!
  • Xylitol being greater than 1:1 (advantageously greater than 2:1, preferably between 5:1 and 10:1) and being adapted to the water content of the callus to avoid any crystallization of the xylitol mixed with the callus at a temperature between 15 and 40°C.
  • the callus is mixed with powdered xylitol, with an aqueous callus/xylitol weight ratio adapted to ensure the total dissolution of the xylitol at a temperature of between 15 and 40° C. in the water contained in the callus.
  • the callus after mixing with xylitol and glycerol is subjected to partial crushing, so that at least 50% by weight of the dedifferentiated cells of Rhodiola Rosea have a cell wall in an uncrushed state.
  • the callus of dedifferentiated and advantageously elicitated cells optionally subjected to grinding, advantageously mixed with glycerol, is subjected to elicitation at atmospheric pressure, at a temperature of 20 to 40° C., and in air with a rate relative humidity of more than 50%, advantageously more than 75% enriched in CO2 so that its CO2 content is between 3 and 10% by volume, comprising at least two illumination stages in the length range of waves between 400 and 720 nm each with a duration of 20 to 120 minutes with an intensity of more than 1000 lux, advantageously more than 10,000 lux and separated from each other by a period of darkness of less than lOOlux of duration between 20 and 60 minutes.
  • the callus of dedifferentiated and elicited cells of Rhodiola Rosea after drying at - 40°C and under a pressure of 100 Pa or less than 100 Pa, to obtain a dried callus having a moisture content of less than 0.5% by weight , contains more than 0.5% by weight of mixture of tyrosol and Salidroside based on the weight of the callus after drying.
  • the dried callus contains more than 0.5% by weight of salidroside, preferably from 0.6% to 1.2% by weight, and more than 0.1% by weight of tyrosol, preferably from 0.2 % to 0.6% by weight, based on the weight of the callus after drying or dried callus.
  • the composition contains a remainder of culture medium comprising vitamins, advantageously a B vitamin, in particular vitamin B7 and/or vitamin B1 and/or vitamin B3 and/or vitamin B4 and/or vitamin B6 and/or a mixture of such vitamins.
  • vitamins advantageously a B vitamin, in particular vitamin B7 and/or vitamin B1 and/or vitamin B3 and/or vitamin B4 and/or vitamin B6 and/or a mixture of such vitamins.
  • the composition contains from 0.1 to 10% by weight of dedifferentiated cells of unground Rhodiola Rosea enriched at least in xylitol and having in their internal volume defined by their cell wall xylitol.
  • the dedifferentiated cells of Rhodiola Rosea before mixing with xylitol, are subjected to an elicitation cycle in their growth medium, said elicitation cycle comprises, and advantageously elicited, optionally subjected to grinding, advantageously mixed with glycerol is subjected to elicitation at atmospheric pressure, at a temperature of 20 to 40° C., and in air with a relative humidity rate of more than 50%, advantageously 75% or more than 75% enriched in CO2 so that its CO2 content is between 3 and 10% by volume, comprising at least two illumination stages in the wavelength range between 400 and 720nm each with a duration of 20 to 120 minutes with an intensity of more than 1000 lux, advantageously of more than 10,000 lux and separated from each other by a period of
  • the composition is suitable for ensuring an improvement in the microbiological balance of the cutaneous flora, while advantageously ensuring an anti-aging or anti-aging action and/or a protective action against UV rays and/or an antioxidant and/or antibacterial activity .
  • a further subject of the invention is a cosmetic, non-therapeutic treatment of an area of the skin of a human being in order to improve and/or regulate the microbiological balance of the cutaneous flora of this area, in which one applies to said zone a cosmetic composition according to the invention as described above.
  • This cosmetic treatment also advantageously provides an anti-aging or anti-aging cosmetic treatment and/or a cosmetic protective action against UV rays and/or an antioxidant cosmetic activity and/or an antibacterial cosmetic activity.
  • Dedifferentiated plant cells of Rhodiola Rosea can be obtained from plant material derived from whole plant or plant part such as leaves, stems, flowers, petals, roots, fruits, their skin, the covering covering them, the seeds, the anthers, the sap, the thorns, the buds, the bark, the berries, and mixtures of these.
  • the dedifferentiated plant cells preferably come from roots of Rhodiola Rosea, in particular from rootlets of Rhodiola Rosea.
  • the dedifferentiated plant cells that can be used according to the invention can be obtained from plants obtained by in vivo culture or derived from in vitro culture.
  • in vivo culture any culture of the conventional type, that is to say in soil in the open air or in a greenhouse or else above ground or in a hydroponic medium.
  • in vitro culture all the techniques known to those skilled in the art which artificially make it possible to obtain a plant or part of a plant.
  • the selection pressure imposed by the physicochemical conditions during the growth of plant cells in vitro makes it possible to obtain standardized plant material, free of contamination and available throughout the year, unlike plants cultivated in vivo.
  • dedifferentiated plant cells obtained from in vitro culture are used.
  • the elicitation of the cells is preferably carried out with the cells in a culture medium.
  • the dedifferentiated plant cells that can be used according to the invention can be obtained by any method known from the prior art. In this respect, mention may be made of the methods described by E.F. George and P.D. Sherrington in Plant Propagation by tissue culture, handbook and directory of commercial laboratories (Exegetics Ltd 1984).
  • the culture media which can be used according to the invention are those generally known to those skilled in the art. We can cite as examples the media of Gamborg, Murashige and Skoog, Heller, White etc.... We will find in "Plant Culture Media: formulations and uses” by EF George, DJM Puttock and HJ George (Exegetics Ltd 1987, volumes 1 & 2) for comprehensive descriptions of these media.
  • the dedifferentiated plant cells cultured on Gamborg medium are prepared.
  • Rhodiola Rosea cells were used.
  • Step 1 Preparation of dedifferentiated Rhodiola Rosea cells cultured in a Gamborg-type in vitro culture medium.
  • Rhodiola Rosea rootlet cells (rootlets with a diameter of less than 2 mm) were taken. This stage of preparation of dedifferentiated cells of Rhodiola Rosea was carried out in a conventional manner, with successive stages of transplanting, from rootlets.
  • the culture medium used is a complete Gamborg B5 medium (G5893) marketed by Sigma-Aldrich (Germany). Other culture media are possible.
  • Stage 2 subculture of the dedifferentiated cells of stage 1 in an in vitro culture medium for the development and congratulation of the cells.
  • the development with elicitation of the cells of stage 1 was carried out in an in vitro medium (Gamborg B5) under a gaseous atmosphere containing oxygen and CO 2 (air enriched with CO 2 so that its CO 2 content is 8% by volume) according to a cycle comprising 100 periods of low light with a light level of less than 10 lux (from 1 to 5 lux) for 30 minutes in an atmosphere consisting of humid air (relative humidity of 85%) enriched with CO 2 (so that the CO 2 content is 8% by volume) and having a temperature of 30° C., these periods of development/elicitation under weak (or even without) light being separated from each other by a luminosity period of more than 100,000 lux (wavelength range between 400 and 720nm) for 1 hour in an atmosphere consisting of humid air (relative humidity of 85%) enriched with CO 2 (so that the CO content
  • Stage 3 Extraction of the callus from the dedifferentiated and elicited cells in in vitro culture medium, by filtration of the culture medium followed by several stages of washing with water, carried out so as not to destroy the structure of the cell membranes. The washed callus was drained for 45 minutes.
  • This cal (named CAL 1) will be used in part for the preparation of a comparative composition.
  • a part of this callus was subjected to drying by lyophilization at ⁇ 40° C. for determination of the saliroside and tyrosol content of the callus after drying by UPLC chromatography (high performance liquid chromatography).
  • the drying operation is carried out by freeze-drying under vacuum (100 Pa and less if necessary, temperature of -40° C.), to obtain a powdery product with a water content of less than 1.5% by weight. If the texture of the dried product is not optimal, it can be subjected to grinding.
  • 0.3 g of powder is dissolved in 25 ml of a solvent consisting of 90% by weight water and 10% by weight acetonitrile. After dissolution, the solution is filtered through a filter at 0.45 ⁇ m.
  • UPLC chromatography of the Rhodiola extract was analyzed using an ACQUITY UPLC chromatography system marketed by Waters Corporation, 34 Maple Street, Milford, MA 01757, USA.
  • the chromatograph included a BEH C18 column, 100 mm in length, internal diameter of 2.1 mm, spherical packing particles of 1.8 ⁇ m in diameter.
  • the volume of solution to be analyzed injected into the column was 2 ⁇ l.
  • a solvent consisting of water and acetonitrile is then introduced into the column at a flow rate of 0.6 ml/minute at 75° C., for 14 minutes, while gradually increasing the concentration of acetonitrile (concentration varying gradually from 2.5% by weight to 100% by weight over 14 minutes).
  • Tyrosol and salidroside are detected by UV at 221 nm at 30 seconds and 90 seconds. Based on this chromatography, it was possible to calculate a content of 0.8% by weight of salidroside and 0.3% by weight of tyrosol, relative to the dry weight of the callus.
  • Step 4 Mixing with the drained callus of dedifferentiated and elicited cells of Rhodiola Rosea with a quantity of xylitol.
  • the quantity of xylitol added is such that the ratio by weight Xylitol/weight of the drained callus (still moist) is 1:8.
  • the mixture is carried out gently with a spatula until the xylitol has completely dissolved.
  • Step 5 subculturing and elicitation the callus from step 4 is subcultured in a Gamborg B 5 culture medium to be subjected to elicitation.
  • This elicitation was carried out in an in vitro medium (Gamborg B5) under a gaseous atmosphere containing oxygen and CO 2 (air enriched with CO 2 so that its CO 2 content is 8% by volume) comprising a cycle consisting of two radiation elicitation steps in the 400-720 nm range under an atmosphere consisting of humid air (relative humidity 85%) enriched with CO 2 (so that the CO 2 content is 8% by volume) and having a temperature of 30°C, each elicitation step having a duration of 90 minutes with a luminosity of 10000lux, said two elicitation steps being separated from each other by a resting step with a luminosity of 100lux (wave range between 400 and 720nm) for 45 minutes in an atmosphere made up of humid air (relative humidity of 85%) enriched with CO 2 (so
  • Step 6 Extraction of callus from dedifferentiated and elicited cells in the presence of Xylitol in in vitro culture medium, by filtration of the culture medium followed by several washing steps with water, performed so as not to destroy the structure of the cell membranes elicited in the presence of xylitol. The washed callus was drained for 45 minutes.
  • Step 7 Adding glycerol and mixing the callus with the glycerol
  • a quantity of glycerol is added to the callus in the proportion of a quantity corresponding to 15 times the quantity of xylitol added in step 4.
  • Rhodiola cells enriched in xylitol protected by glycerol and/or clusters of such cells protected by glycerol are obtained. This mixture is hereinafter referred to as "Rhodiola G”.
  • Step 8 partial crushing of the callus with xylitol and glycerol.
  • the grinding is partial to obtain a mixture of ground cells and unground cells.
  • This partial grinding can for example be carried out by dividing the callus into two parts, a first part representing 20% by weight of the callus being subjected to grinding, while the second part representing 80% by weight of the callus is not subjected to grinding. .
  • Step 9 addition of a carrier for cosmetic application to obtain a cosmetic composition for topical application.
  • step 4 of the process described above the Xylitol had previously been mixed with choline citrate and water in the molar ratio 1:2:3 (compound XoCH from table 1 of EP 2575993), we would have obtained a mixture of a deep eutectic solvent NADES with a callus of plant cells. By the presence of this NADES solvent, an extraction outside the cells of compounds present in the cells was observed. The cells are thus depleted of active principles, such as phenolic compounds and flavanoids.
  • step 4 does not make it possible to obtain dedifferentiated and elicited cells enriched in xylitol in their internal volume.
  • the cosmetic composition of the invention comprises, for example, from 0.5 to 15% by weight of a mixture of plant cells, ground and unground, of xylitol and of glycerin.
  • a few non-limiting examples of such cosmetic compositions for topical use will be given below.
  • Examples 1A and 1B Dispersion of Rhodiola XG or of Rhodiola G in a cosmetic base
  • Rhodiola X-G or Rhodiola G is dispersed in the following base:
  • Rhodiola X-G or Rhodiola G 2.00% fragrance 0.15% carbomer 0.10 TOTAL 100.00%
  • the composition obtained shows a homogeneous dispersion of the cells in the cream and a very fine texture.
  • the property study showed the absence of germs and fungi as well as a remarkable stability of the composition.
  • Examples 2A and 2B Dispersion of Rhodiola X-G or of Rhodiola G in another cosmetic base
  • Rhodiola X-G or Rhodiola G is dispersed in the following base: - water 46.59% sodium laureth sulfate (25%) 36.40%
  • compositions obtained show a homogeneous dispersion of the cells.
  • the property study showed the absence of germs and fungi as well as a remarkable stability of the compositions.
  • Lotions containing only Rhodiola X-G or Rhodiola G demineralized water, propylene glycol, preservative, fragrance; and active product: Rhodiola X-G or Rhodiola G.
  • Rhodiola X-G or Rhodiola G in the form of a viscous suspension or a gel.
  • compositions for topical use contain the various constituents, the contents of which can be varied in depending on the applications, mixed in the aqueous phase alone, as is usually done by those skilled in the art in this field.
  • Rhodiola X-G or Rhodiola G depends on the nature of the composition for topical use and the desired application. It is advantageously between 0.01 and 5%, but can reach up to 25%.
  • the invention is not limited to the embodiments given above and it is possible to produce the composition for topical use in other forms, such as oil, ointment, lacquers, make-up (foundation, powder , lipstick, pencil, mascara or cosmetic product making it possible to highlight the eyes by coloring the eyelashes and/or giving them more length or apparent thickness, eye shadow) which also come within the scope of the invention.
  • the microbial flora of human skin is very complex, including aerobic, anaerobic, gram positive and gram negative germs, yeasts.
  • the cutaneous flora includes on the one hand the natural, resident and non-pathogenic flora, and on the other hand, an exogenous flora which develops during a weakening of the natural defenses, a wound, an infection, etc.
  • the resident or natural skin flora is composed of several species, including: Staphylococci (S. epidermis, S.hominis, S.haemolyticus, S. aureus), Corynebacteria (C.lipophiles; C.urealyticum; C.minutissimum; C.jeikeium ), Propionibacterium (P. acnes; P.avidum; P. granulosum, P.propionicum), Micrococci (M.luteus; M.varians), Streptococci (groups A, B and G), Brevibacteria.
  • Skin disorders are linked to the disruption of the ecological balance of the resident flora following the colonization of the skin by exogenous germs or the abnormal proliferation of an endogenous strain, this abnormal profiling may be the consequence of use too frequent bactericidal, antimicrobial, anti-virucidal, anti-fungal, antibiotic compositions, etc. non-selective, attacking the pathogenic flora and the resident flora indiscriminately.
  • non-selective compositions is a source of development of resistant exogenous strains.
  • the proliferation of exogenous strains results in various phenomena, including: the development of body odors, in particular axillary and foot odors (mainly C. xerosis for axillary odors and B.
  • This face lotion was used to prepare the following test lotions:
  • Comparative lotion 1 base lotion added with Xylitol to obtain a Xylitol content of 1% by weight.
  • LCOMP1 base lotion added with Xylitol to obtain a Xylitol content of 1% by weight.
  • xylitol was mixed and ground with CAL 1, with a large excess of xylitol relative to the weight of CALL This mixture was filtered to recover a viscous liquid phase containing xylitol. This liquid phase was used to prepare the base lotion to which xylitol was added to obtain a content of 1% by weight of xylitol in the lotion.
  • Comparative lotion 2 base lotion added with CAL I to obtain a CAL 1 content in the lotion of 8% by weight.
  • LCOMP2 base lotion added with CAL I to obtain a CAL 1 content in the lotion of 8% by weight.
  • Comparative lotion 3 base lotion added with CAL 1 to obtain a content of CAL 1 in the lotion of 8% by weight, and added with glycerine to obtain a content of 15% by weight.
  • Lotion according to invention 1 base lotion added with "Rhodiola XG” in sufficient quantity to obtain a lotion with a content of 1% by weight of Xylitol.
  • Lotion according to the invention 2 base lotion added with "Rhodiola G” in sufficient quantity to obtain a lotion with a content of 0.5% by weight of Xylitol.
  • the face is washed with a pH 7.5 liquid soap, then rinsed and dried.
  • Skin pH is determined using a specific surface electrode. A sample of the microbial flora from the face is taken using agar plates for each volunteer.
  • the volunteers were divided into five groups, the reference group which will be treated with the LR lotion, the comparative group 1 which will be treated with the LCOMP1 lotion, the comparative group 2 which will be treated with the LCOMP2 lotion, the invention group 1 which will be treated with Rhodiola XG lotion, and invention group 2 which will be treated with Rhodiola G lotion.
  • the treated areas were contacted (1 hour after treatment) with exogenous Corynebacterium xerosis strains to determine their proliferation. These exogenous strains after the test were killed by an antibiotic cream.
  • the treated area is limited to 4cm 2 , so as to be able to observe any differences with the untreated area for the same volunteer.
  • Measurements of the pH of the skin before treatment, and then of the treated area, are carried out at various times after treatment, namely 2 hours, 4 hours, 8 hours and 16 hours after treatment.
  • samples of microbes are taken from the treated areas at various times, namely 2, 4, 8 and 16 hours after treatment.
  • washing is carried out with liquid soap of pH 7.5.
  • the time required for the treated area to regain its initial pH is then determined. before treatment. 1, 2 and 4 hours after washing, the skin flora of the washed treated area is examined.
  • the cutaneous microbial flora consisted essentially of the following species: Staphylococci (S. epidermis, S. hominis, S. haemolyticus, S. aureus), Corynebacteria (C. lipophiles; C. urealyticum; C. minutissimum;
  • the cutaneous bacterial flora for the areas that will be subjected to treatment did not include Corynebacterium xerosis.
  • the pH of the treated area increases rapidly by one to two units, moreover a proliferation of the Corynebacterium xerosis strain is visible 4 hours after the start of the treatment.
  • the resident skin microbial flora was disturbed.
  • the test was interrupted and the treated area was subjected to a washing, rinsing and drying step. 3 hours after this washing step, the pH of the treated area returned to a value of 5.2-5.5.
  • the pH of the treated area increases rapidly by one to two units, moreover a proliferation of the Corynebacterium xerosis strain is visible 8 hours after the start of the treatment.
  • the resident skin microbial flora was disturbed.
  • the test was interrupted after 8 hours and the treated area was subjected to a washing, rinsing and drying step. 2 hours after this washing step, the pH of the treated area returned to a value of 5.2-5.5.
  • the treated and washed area was treated with antibiotic cream.
  • the pH of the treated area increases rapidly by one to two units, moreover a proliferation of the Corynebacterium xerosis strain is visible 8 hours after the start of the treatment.
  • the resident skin microbial flora was disturbed.
  • the test was interrupted and the treated area was subjected to a washing, rinsing and drying step. 2 hours after this washing step, the pH of the treated area returned to a value of 5.2-5.5.
  • the treated and washed area was treated with antibiotic cream.
  • the pH of the treated zone increases by one unit. After 16 hours, no proliferation of the Corynebacterium xerosis strain was observed. The resident microbial cutaneous flora remained close to the original flora. The test was interrupted after 16 hours and the treated area was subjected to a washing, rinsing and drying step.
  • the pH of the treated and washed area returned to a value of 5.2-5.5.
  • the lotion according to the invention 1 therefore effectively protects the resident skin flora, while having a protective action against exogenous microorganisms.
  • the pH of the treated zone increases by 0.5 units.
  • a slight proliferation of the Corynebacterium xerosis strain was observed.
  • the resident microbial cutaneous flora remained close to the original flora.
  • the test was interrupted after 12 hours and the treated area was subjected to a washing, rinsing and drying step.
  • the lotion according to the invention 2 therefore effectively protects the resident skin flora, while having a protective action against exogenous microorganisms.
  • the duration of protective action of the lotion according to the invention 2 with Rhodiola G was lower than that of the lotion according to the invention
  • the skin treated with the lotion of invention 1 or 2 had a more supple, softer, more hydrated appearance than the untreated skin, and the treatment did not cause redness and irritation.
  • the inhibitory or non-inhibiting action of the lotions was evaluated on the growth of Corynebacterium germs. xerosis (main germ responsible for bad body odor), Staphylococcus epidermidis (beneficial bacteria of the microbial flora of the skin), and on the Propionibacterium acnes germ (germs present on hyperseborrheic skin - responsible for acne outbreaks).
  • the germs were each placed in an agar culture medium. Wells were operated for each culture dish, each well being intended to receive the same quantity of lotion (LR or LCOMP1 or LCOMP2 or Rhodiola XG. No inhibitory action or a weak inhibitory action was observed on Corynebacterium. xerosis, Staphylococcus epidennidis, and on the Propionibacterium acnes germ, for the LR lotion.
  • Rhodiola G lotion and the Rhodiola X-G lotion a marked and very marked inhibitory effect is observed respectively for Corynebacterium xerosis and Propionibacterium acnes, and no inhibitory effect for Staphylococcus epidermidis. This makes it possible to preserve the resident cutaneous flora, while having an action on Corynebacterium xerosis, and Propionibacterium acnes.
  • skin was reconstituted associated with a mixture of Staphyloccocus aureus, Staphyloccoccus epidennidis, Corynebacterium xerosis and Cutibacterium acnes bacteria.

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Abstract

Composition cosmétique au moins partiellement aqueuse contenant au moins (a) des cellules dédifférentiées de Rhodiola Rosea non broyées enrichies au moins en xylitol et présentant dans leur volume interne défini par leur paroi cellulaire du xylitol, et (b) un support pour application cosmétique.

Description

Composition cosmétique à base de cellules de Rhodiola Rosea
La présente invention a pour objet une composition cosmétique à base de cellules de Rhodiola Rosea et de Xilytol, en particulier pour pour améliorer et/ou réguler l'équilibre microbiologique de la flore cutanée d'une zone de la zone de peau humaine.
Améliorer et contrôler la flore cutanée est un problème essentiel en cosmétique car il permet d'obtenir un rendu de la peau plus lisse et plus jeune.
Ainsi que stipulé dans WO2019/149754, paragraphes 0056 à 0058:
"La peau est un organe barrière complexe qui héberge à sa surface de nombreux microorganismes (bactéries, champignons, virus). Cette microflore colonisant le stratum corneum constitue le microbiote cutané. Il est acquis à la naissance et évolue pour atteindre un état d'équilibre à l'âge adulte. Sa composition et son abondance sont influencées par la génétique et le mode de vie. Ceci garantit le caractère unique du microbiote entre les individus qui peut ainsi être qualifié d'empreinte microbiologique. Les microorganismes et leur hôte vivent en parfaite harmonie. Un microbiote équilibré est sans danger et bénéfique pour son hôte. Parmi la diversité de la flore cutanée, quatre groupes principaux de bactéries (ou phyla) ont été caractérisés : Actinobacteria, Firmicutes, Proteobacteria, Bacteroidetes avec trois espèces prédominantes : Corynebacteria, Propionibacteria et Staphylococci.
Le microbiote participe au développement et au maintien de l'équilibre de son hôte. Les microorganismes et la barrière cutanée agissent en synergie pour protéger la peau des agressions extérieures. La flore cutanée joue un rôle fondamental puisqu'elle confère à la peau immunité et protection face aux colonisateurs pathogènes potentiels. Le microbiote cutané est aujourd'hui considéré comme une véritable unité fonctionnelle de la peau qui participe à sa santé et à sa beauté. Cependant, cet équilibre est constamment menacé par divers facteurs, intrinsèques et extrinsèques, pouvant altérer la composition du microbiote et la fonction barrière de la peau. Ce déséquilibre du microbiote, ou dysbiose, perturbe les coopérations microbe-microbe et microbe-hôte et peut conduire à des désordres cutanés. Il est donc primordial de maintenir l'équilibre de l’écosystème cutané pour arborer une peau de qualité exceptionnelle."
De nombreuses solutions ont déjà été proposées / suggérées pour assurer un certain contrôle de la flore cutanée, et ainsi contrôler d'une certaine manière les odeurs générées par l'homme.
L'utilisation d'extrait de Rhodiola en cosmétique a déjà été proposée.
Par exemple, le document JP2000/128729 décrit une composition cosmétique hydratante et donnant un effet "clair" à la peau comprend un extrait de plante de la famille Rhodiola, dont les espèces Kiringen Keikeiten (Rhodiola algida/Aomi, Haibei, Kaisei), Karako Redkeiten (Rhodiola algida var. Tangutica/ Aomi, Sichuan), Nishikawa Kokeiten (Rhodiola alsia/Sichuan), Koza Béni Kageten (RHODIOLA dumulosa/Sichuan, Gansu), Kageten (RHODIOLA euryphylla, Tibet), Nagachifukukeiten (RHODIOLA fastigitaa, Tibet), Chorinkokeiten (Rhodiola Gelida/Utenyama), Kageten (RHODIOLA henryi/Gansu, Henan, Hubei, Sichuan, Guizhou), RHODIOLA hetero donta/Xinjiang, Tibet, Kageten (RHODIOLA Kirirowii/Hebei, Shanxi, Yunnan, Sichuan, Tibet), RHODIOLA quadrifida/Gansu, Aomi, Xinjiang, Sichuan, Tibet; , Sekiji Bcnkcitcn (RHODIOLA sacra, Tibet), Zokukeiten (RHODIOLA scabrida/ Sichuan, Tibet), RHODIOLA wallichiana, Yunnan, Tibet, RHODIOLA wallichiana et Rhodiola cholaensis/Aoumi, Tibet, Sichuan, Yunnan.
Il n'est pas fait mention dans ce document à l'utilisation de cellules végétales de Rhodiola enrichies en Xylitol, en particulier pour contrôler le microbiote cutané. Des compositions anti-rides comprenant un extrait de Rhodiola Rosea en tant qu'un agent anti-ride à utiliser en combinaison avec d'autres sont par exemple enseignées dans CN103784376, CN103690406, CN105456114, etc. Ces documents montrent que les extraits de Rhodiola Rosea ne sont pas considérés en tant que tels comme suffisants pour traiter le problème de rides.
L'extrait de Rhodiola Rosea n'est donc considéré comme efficace qu'en combinaison avec un autre extrait pour le traitement anti-ride.
Diverses méthodes d'extractions existent, par exemple en utilisant des étapes de broyage, suivi d'étapes d'extraction en utilisant un ou des solvants.
Un procédé d'extraction particulier applicable à des végétaux est décrit dans le document EP2575993 (qui correspond à WO2011/155829; inventeurs Robert Verpoorte et al), ce procédé utilisant un solvant eutectique puissant un sucre ou un alcool choisi dans une famille comprenant le xylitol, un acide organique, et un composé inorganique. Cette étape d'extraction revient à faire éclater les cellules végétales pour en retirer l'un ou l'autre principe actif.
Dans ce procédé d'extraction de matières d'un matériel biologique, on traite le matériel biologique dans un solvant eutectique profond (DES). Le solvant eutectique est par exemple la combinaison d'un acide organique naturel (tel qu'acide citrique, acide lactique, etc.) et d'un sucre ou alcool de sucre (tel que sucrose, glucose, sorbitol, xylitol, etc.). Dans ce procédé, l'extraction de composés biologiques d'une matière biologique s'opèrent par leur dissolution dans le solvant eutectique. Dans le tableau 1 de ce document, la composition de solvants eutectiques profonds (DES) est donnée. Dans les compositions des deux solvants eutectiques comprenant du xylitol, les solvants comprennent au moins de la choline en excès molaire et en poids par- rapport au xylitol, et un large excès molaire d'eau par rapport à la quantité molaire de Xylitol.
Dans le document "Natural Deep Eutectic Solvent Extraction of Flavanoids of Scutellaria baicalensis as a Replacement for Conventional Organic Solvents", Robert Verpoorte et al, Molecules 2020, 25, 617, il est fait référence que pour assurer une extraction et solubilisation optimale de flavanoîdes avec les NADES (NAtural Deep Eutectic Solvents - Solvants Eutectiques Profonds NAturels), il y a lieu de réduire la viscosité des solvants NADES en ajoutant une quantité d'eau, mais ceci rend alors plus difficile l'étape de récupération des métabolotes présent dans le NADES.
Comme signalé dans l'article "Natural Deep Eutectic Solvents as a New Extraction Media for Phenolic Metabolites in Carthamus tinctorius L.", Robert Verpoorte et al, Analytical Chemistry 2013, 85, 13, 6272-6278, (accessible via le dossier EP2575993 du Registre de l'Office Européen des Brevets), les conditions d'extraction optimale pour les NADES sont 1 heure, rapport entre le poids de matière végétale et le solvant de 30mg/ml. Un très large excès de solvant est donc requis. La matière végétale est transformée en poudre dans un mélangeur à azote liquide.
Le processus d'extraction par solvant eutectique profond revient à dissoudre des métabolites peu ou pas solubles dans l'eau, cette étape d'extraction requérant alors un large excès de NADES par rapport à la quantité de métabolites à dissoudre. Une étape d'extraction va à l'encontre d'une étape d'enrichissement de cellules végétales en xylitol, qui permet une application contrôlée des métabolites et du xylitol présent dans les cellules de Rhodiola rosea.
Le document CN106520665 décrit la culture in- vitro de cellules de Rhodolia Rosea dans des milieux de culture enrichis d'hormones végétales. Ce milieu de culture est soumis ensuite à une étape d'extraction au moyen d'un solvant du type alcool. Le produit ainsi obtenu est également un extrait alcoolique.
Par le document CN101444456, l'utilisation cosmétique du xylitol en tant qu'agent hydratant est décrite, en combinaison avec un acide gras, un émulsifiant et de l'eau. Par le document "Plant cell culture as emerging technology for production of active cosmetic ingredients", Vasil Georgiev et al, Engineering in Life Sciences, Wiley, volume 18, no 11, pages 779 à 798, on connaît l'utilisation de cultures de cellules végétales pour la préparation d'agents cosmétiques actifs. Dans cet article, il est fait référence à la production d'extrait de cellules de Rhodiola rosea cultivées in-vitro, cet extrait revendiquant des propriétés anti-oxidantes.
Par le document CN110037980, on connaît une composition anti-ride comprenant un extrait de cellules souches humaines, enrichi d'un lysat de cellules de Rhodiola rosea et d'un lysat de cellules de fleur de prunier. Les lysats sont préparés par désintégration des membranes et par lyophilisation. La composition anti-ride ne contient pas de cellules de Rhodiola rosea non broyées. Les exemples comparatifs 1 à 6 de ce document montrent l'importance de la présence tous les ingrédients pour obtenir de bonnes propriétés anti-oxidantes et de bonnes propriétés anti-âges.
Le produit "Super Moisture Balm" commercialisé en 2011 les laboratoires Clarins a pour objet un baume super hydratant à base de hyaluronate de calcium et d'herbe de bison. La compostion aqueuse comprend de nombreux composés, dont du xylitol, du glycérol et des extraits de racines de Rhodiola rosea.
Le demandeur a maintetenant remarqué que l'utilisation de cellules dédifférentiées de Rhodiala Rosea non broyées contenant à l'intérieur de leur enveloppe ou paroi cellulaire du Xylitol permettait en tant que tel d'avoir un effet pour améliorer et /ou contrôler la flore cutanée sur une période de temps de plusieurs jours, tout en assurant un effet hydratant pour les cellules de la peau.
Cette solution n'est ni décrite, ni suggérée dans les solutions proposées dans l'état de la technique.
L'invention a pour objet une composition cosmétique au moins partiellement aqueuse contenant au moins (a) des cellules dédifférentiées de Rhodiola Rosea non broyées enrichies au moins en xylitol et présentant dans leur volume interne défini par leur paroi cellulaire du xylitol, et (b) un support pour application cosmétique. Cette composition est pour une application topique.
Selon des formes avantageuses de la composition suivant l'invention, la composition présente une ou plusieurs des caractéristiques suivantes:
~ la composition contient au moins (a) des cellules dédifférenciées et élicitées de Rhodiola Rosea non broyées enrichies au moins en xylitol dans leur volume interne défini par leur paroi cellulaire, (b) du xylitol hors du volume interne des cellules, (c) de la glycérine et (d) un support pour application cosmétique.
- Avantageusement, le rapport en poids Xylitol / glycérine de la composition est de 1 :5 à 1 :25, de préférence de 1 :10 à 1 :20.
- la composition contient en outre (e) un broyât de cellules dédifférenciées et élicitées de Rhodiola Rosea. Avantageusement, le broyat de cellules dédifférenciées et élicitées de Rhodiola Rosea est un broyât de cellules de rhodiola Rosea effectué en présence de Xylitol et de glycérine, le rapport en poids Xylitol / glycérine étant avantageusement de 1 :5 à 1 :25, de préférence de 1 :10 à 1 :20.
- le rapport en poids entre les cellules non broyées, dédifférenciées et élicitées de Rhodiola Rosea enrichies au moins en xylitol dans leur volume interne, et le broyat de cellules dedifférentiées et élicitées de Rhodiola Rosea est compris entre 1:10 et 10:1.
- les cellules dédifférenciées et élicitées de Rhodiola Rosea non broyées enrichies au moins en xylitol dans leur volume interne défini par leur paroi cellulaire présentent sur leur" paroi cellulaire au moins une ou des zones comprenant du xylitol et de la glycérine. - les cellules dédifférenciées et élicitées de Rhodiola Rosea non broyées enrichies au moins en xylitol dans leur volume interne défini par leur paroi cellulaire comprennent au moins des phytoalexines et du xylitol, le rapport en poids xylitol ! phytoalexines dans le volume interne des cellules défini par leur paroi cellulaire étant supérieur à 0,3, avantageusement supérieur à 0,5, de préférence supérieur à 1.
- les cellules dédifférentiées, et avantageusement élicitées, de Rhodiola Rosea non broyées enrichies au moins en Xylitol et présentant dans leur volume interne défini par leur paroi cellulaire du Xylitol sont des cellules préparées en séparant de leur milieu de culture, un cal comprenant des cellules dédifférentiées, et avantageusement élicitées, et en mélangeant ce cal de cellules de Rhodiola Rosea avec du xylitol ou une composition liquide aqueuse contenant du xylitol, le rapport en poids cal aqueux ! Xylitol étant supérieur à 1 : 1 (avantageusement supérieur à 2 : 1 , de préférence compris entre 5:1 et 10:1) et étant adapté à la teneur en eau du cal pour éviter toute cristallisation du xylitol en mélange avec le cal à une température comprise entre 15 et 40°C.
- le cal est mélangé avec du xylitol en poudre, avec un rapport en poids cal aqueux / xylitol adapté pour assurer la dissolution totale du xylitol à une température comprise entre 15 et 40°C dans l'eau contenue dans le cal.
- le cal après mélange son mélange avec du xylitol, est mélangé à du glycérol, la rapport en poids glycérol / xylitol étant supérieur à 0,5 : 1, avantageusement supérieur à 1 : 1, de préférence supérieur à 10: 1; en particulier compris entre 10:1 et 50:1.
- le cal après mélange avec du xylitol et du glycérol est soumis à un broyage partiel, de manière à ce qu’au moins 50% en poids des cellules dédifférentiées de Rhodiola Rosea aient une paroi cellulaire dans un état non broyé. - le cal de cellules dédifférentiées, et avantageusement élicitées, éventuellement soumise à un broyage, avantageusement mélangé à du glycérol est soumis à une élicitation à pression atmosphérique, à une température de 20 à 40°C, et dans de l'air avec un taux d’humidité relative de plus de 50% , avantageusement de plus de 75% enrichi en CO2 pour que sa teneur en CO2 soit comprise entre 3 et 10% en volume, comprenant au moins deux étapes d'illumination dans la gamme de longueur d'ondes comprise entre 400 et 720nm avec chacune une durée de 20 à 120 minutes avec une intensité de plus de 1000 lux, avantageusement de plus de 10000 lux et séparée entre elles par- une période d'obscurité de moins de lOOlux de durée comprise entre 20 et 60minutes.
- le cal de cellules dédifférentiées et élicitées de Rhodiola Rosea, après séchage à - 40°C et sous une pression de 100 Pa ou inférieure à 100 Pa, pour obtenir un cal séché présentant une teneur en humidité inférieure à 0,5% en poids, contient plus de 0,5% en poids de mélange de tyrosol et de Salidroside par rapport au poids du cal après séchage. Avantageusement, le cal séché contient plus de 0,5% en poids de Salidroside, de préférence de 0,6% à 1,2% en poids, et plus de 0,1% en poids de tyrosol, de préférence de 0,2% à 0,6% en poids, par rapport au poids du cal après séchage ou cal séché.
- la composition contient un reste de milieu de culture comprenant des vitamines, avantageusement une vitamine B, en particulier de la vitamine B7 et/ou de la vitamine B1 et/ou de la vitamine B3 et/ou de la vitamine B4 et/ou de la vitamine B6 et / ou un mélange de telles vitamines.
- la composition contient de 0,1 à 10% en poids de cellules dédifférentiées de Rhodiola Rosea non broyées enrichies au moins en xylitol et présentant dans leur volume interne défini par leur paroi cellulaire du xylitol. - les cellules dédifférentiées de Rhodiola Rosea, avant mélange avec du xylitol, sont soumises à un cycle d’élicitation dans leur milieu de croissance, ledit cycle d'élicitation comprend , et avantageusement élicitées, éventuellement soumise à un broyage, avantageusement mélangé à du glycérol est soumis à une elicitation à pression atmosphérique, à une température de 20 à 40°C, et dans de l'air avec un taux d'humidité relative de plus de 50% , avantageusement de 75% ou de plus de 75% enrichi en CO2 pour que sa teneur en CO2 soit comprise entre 3 et 10% en volume, comprenant au moins deux étapes d'illumination dans la gamme de longueur d'ondes comprise entre 400 et 720nm avec chacune une durée de 20 à 120 minutes avec une intensité de plus de 1000 lux, avantageusement de plus de 10000 lux et séparée entre elles par une période d'obscurité de moins de lOOlux de durée comprise entre 20 et 60 minutes
- la composition est adaptée pour assurer une amélioration de l'équilibre microbiologique de la flore cutanée, tout en assurant avantageusement une action anti-age ou anti viellissement et/ou une action protectrice contre les UV et/ou une activité antioxydante et/ou antibactérienne.
- une combinaison de telles caractéristiques.
L'invention a encore pour objet un traitement cosmétique, non thérapeutique, d'une zone de la peau d'un être humain pour améliorer et/ou réguler l'équilibre microbiologique de la flore cutanée de cette zone, dans lequel on applique sur ladite zone une composition cosmétique selon l'invention telle que décrite ci- avant. Ce traitement cosmétique assure également avantageusement un traitement cosmétique anti-age ou anti viellissement et/ou une action cosniétque protectrice contre les UV et/ou une activité cosmétique antioxydante et/ou une activité cosmétique antibactérienne.
Les cellules végétales dédifférenciées de Rhodiola Rosea peuvent être obtenues à partir de matériel végétal issu de plante entière ou de partie de plante comme les feuilles, les tiges, les fleurs, les pétales, les racines, les fruits, leur peau, l’enveloppe les protégeant, les graines, les anthères, la sève, les épines, les bourgeons, l’écorce, les baies, et des mélanges de ceux-ci. Les celleules végétales dédifférenciées proviennent toutefois de préférence de racines de Rhodiola Rosea, en particulier de radicelles de Rhodiola Rosea.
Les cellules végétales dédifférenciées utilisables selon l'invention peuvent être obtenues à partir de végétaux obtenus par culture in vivo ou issu de culture in vitro.
Par culture in vivo on entend toute culture de type classique c'est à dire en sol à l'air libre ou en serre ou encore hors sol ou en milieu hydroponique.
Par culture in vitro, on entend l'ensemble des techniques connues de l'homme du métier qui permet de manière artificielle l'obtention d'un végétal ou d'une partie d'un végétal. La pression de sélection imposée par les conditions physicochimiques lors de la croissance des cellules végétales in vitro permet d'obtenir un matériel végétal standardisé, exempt de contaminations et disponible tout au long de l'année contrairement aux plantes cultivées in vivo.
Préférentiellement selon l'invention on utilise des cellules végétales dédifférenciées issues de culture in vitro. L'élicitation des cellules est de préférence opérée avec les cellules dans un milieu de culture.
Les cellules végétales dédifférenciées utilisables selon l'invention peuvent être obtenues par toute méthode connue de l’art antérieur. A cet égard on peut citer les méthodes décrites par E.F. George et P.D. Sherrington dans Plant Propagation by tissue culture, handbook and directory of commercial laboratories (Exegetics Ltd 1984).
Les milieux de culture utilisables selon l'invention sont ceux généralement connus de l’homme du métier. On peut citer à titre d'exemples les milieux de Gamborg, Murashige et Skoog, Heller, White etc.... On trouvera dans "Plant Culture Média : formulations and uses" de E.F. George, DJM Puttock et H.J George (Exegetics Ltd 1987, tome 1 & 2) des descriptions complètes de ces milieux.
Préférentiellement selon l'invention on prépare les cellules végétales dédifférenciées cultivées sur milieu de Gamborg.
Des particularités et détails de compositions suivant l'invention ressortiront de la description suivante d'exemples de réalisation donnés à titre d’exemple uniquement,
Des tests démontrant l’efficacité de compositions cosmétiques selon l'invention seront décrits ci-après.
Dans ces exemples, on a utilisé des cellules de Rhodiola Rosea élicitées.
Ces cellules ont été préparées de la manière suivante :
Etape 1 : Préparation de cellules dédifférenciées de Rhodiola Rosea et cultivées dans un milieu de culture in vitro type Gamborg.
On a prélevé des cellules de radicelles de Rhodiola Rosea (radicelles avec un diamètre de moins de 2mm). Cette étape de préparation de cellules dédifférenciées de Rhodiola Rosea a été réalisée de manière classique, avec des étapes successives de repiquage, à partir de radicelles.
Le milieu de culture utilisé est un milieu Gamborg B5 complet (G5893) commercialisé par Sigma-Aldrich (Allemagne). D'autres milieux de culture sont possibles.
Etape 2 : repiquage des cellules dédifférenciées de l'étape 1 dans un milieu de culture in vitro pour le développement et félicitation des cellules. Le développement avec élicitation des cellules de l'étape 1 a été opéré dans un milieu in vitro (Gamborg B5) sous une atmosphère gazeuse contenant de l’oxygène et du CO2 (air enrichi en CO2 pour que sa teneur en CO2 soit de 8% en volume) selon un cycle comprenant 100 périodes de faible luminosité avec une luminosité de moins de 10 lux ( de 1 à 5 lux) pendant 30 minutes sous une atmosphère constituée d'air humide (humidité relative de 85%) enrichi de CO2 (pour que la teneur en CO? soit de 8% en volume) et présentant une température de 30°C, ces périodes de développement/élicitation sous faible (voire sans) luminosité étant séparées l’une de l’autre par une période de luminosité de plus de 100000 lux (gamme de longueur d'ondes comprises entre 400 et 720nm) pendant 1 heure sous une atmosphère constituée d'air humide (humidité relative de 85%) enrichi en CO2 (pour que la teneur en CO2 de l'atmosphère soit de 8% en volume) et présentant une température de 35°C. Le passage d’un état d'obscurité à un état éclairé et inversément est réalisé par le déplacement d'une paroi opaque. Cette culture in vitro sous élicitation est opérée en chambre blanche.
Etape 3 : Extraction du cal des cellules dédifférenciées et élicitées en milieu de culture in vitro, par- filtration du milieu de culture suivi de plusieurs étapes de lavage à l'eau, opérées pour ne pas détruire la structure des membranes des cellules. Le cal lavé a été égoutté pendant 45 minutes.
Ce cal (nommé CAL 1) sera utilisé en partie pour la préparation d'une composition comparative.
Une partie de ce cal a été soumise à séchage par lyophilisation à -4Û“C pour détermination de la teneur en Saliroside et tyrosol du cal après séchage par UPLC chromatographie (chromatographie liquide à haute performance). L'opération de séchage est opérée par liophilisation sous vide (lOOPa et moins si nécessaire, température de -40°C), pour obtenir un produit poudreux avec une teneur en eau de moins de 1,5% en poids. Au cas, où la texture du produit séché n'est pas optimale, il peut être soumis à un broyage. Pour cette chromatographie 0,3 g de poudre est dissous dans 25ml d'un solvant constitué d'eau 90% en poids et d'acétonitrile 10% en poids. Après dissolution, la solution est filtrée sur un filtre à 0,45 i.im.
La chromatographie UPLC de l'extrait de Rhodiola a été analysée en utilisant un système de chromatographie ACQUITY UPLC commercialisée par Waters Corporation, 34 Maple Street, Milford, MA 01757, Etats-Unis d'Amérique. Le chromato graphe comportait une colonne BEH C18, 100 mm de longueur, de diamètre intérieur de 2,1mm, particules de garnissage sphériques de 1,8μm de diamètre. Le volume de solution à analyser injecté dans la colonne était de 2 μl. on introduit ensuite dans la colonne un solvant constitué d’eau et d'acétonitrile à un débit de 0,6ml/minute à 75°C, pendant 14 minutes, tout en accroissant de manière graduelle la concentration en acétonitrile (concentration variant de manière graduelle de 2,5% en poids à 100% en poids sur 14 minutes).
Le tyrosol et le salidroside sont détectée par UV à 221nm au temps 30 secondes et 90 secondes. Sur base de cette chromatographie il a été possible de calculer une teneur de 0,8% en poids de salidroside et de 0,3% en poids de tyrosol, par rapport au poids sec du cal.
Etape 4 : Mélange au cal égoutté de cellules dédifférenciées et élicitées de Rhodiola Rosea d'une quantité de xylitol.
La quantité de xylitol ajoutée (en poudre) est telle que le rapport en poids Xylitol / poids du cal égoutté (toujours humide) est de 1 : 8. Le mélange est effectué de manière douce avec une spatule jusqu'à solubilisation complète du xylitol.
Etape 5 : repiquage et élicitation le cal de l'étape 4 est repiqué dans un milieu de culture Gamborg B 5 pour être soumis à une élicitation. Cette elicitation a été opérée dans un milieu in vitro (Gamborg B5) sous une atmosphère gazeuse contenant de l’oxygène et du CO2 (air enrichi en CO2 pour que sa teneur en CO2 soit de 8% en volume) comprenant un cycle constitué de deux étapes d'élicitation par rayonnement dans la gamme 400-720 nm sous une atmosphère constituée d'air humide (humidité relative de 85%) enrichi de CO2 (pour que la teneur en CO2 soit de 8% en volume) et présentant une température de 30°C, chaque étape d'élicitation ayant une durée de 90minutes avec une luminosité de 10000lux, lesdites deux étapes d'élicitation étant séparées l'une de l'autre par une étape de repos avec une luminosité de lOOlux (gamme d'ondes entre 400 et 720nm) pendant 45minutes sous une atmosphère constituée d'air humide (humidité relative de 85%) enrichi en CO2 (pour que la teneur en CO2 de l'atmosphère soit de 8% en volume) et présentant une température de 35°C. Le passage d'un état d'obscurité à un état éclairé et inversément est réalisé par le déplacement d'une paroi opaque. Cette culture in vitro sous élicitation est opérée en chambre blanche,
Etape 6 : Extraction du cal des cellules dédifférenciées et élicitées en présence de Xylitol en milieu de culture in vitro, par filtration du milieu de culture suivi de plusieurs étapes de lavage à l'eau, opérées pour ne pas détruire la structure des membranes des cellules élicitées en présence de xylitol. Le cal lavé a été égoutté pendant 45 minutes.
Etape 7 : ajout de glycérol et mélange du cal avec le glycérol
On ajoute une quantité de glycérol au cal à raison d'une quantité correspondant à 15 fois la quantité de xylitol ajoutée à l'étape 4 .
A l'issue de cete étape 7, on obtient des cellules de Rhodiola enrichies en xylitol protégées par du glycérol et/ou des amas de telles cellules protégées par du glycérol. Ce mélange est appelé ci-après "Rhodiola G". Etape 8 : broyage partiel du cal avec xylitol et glycérol.
Le broyage est partiel pour obtenir un mélange de cellules broyées et de cellules non broyées. Ce broyage partiel peut par exemple être opéré en divisant le cal en deux parties, une première partie représentant 20% en poids du cal étant soumise à broyage, tandis que la deuxième partie représentant 80% en poids du cal n'est pas soumise à broyage.
Les deux parties sont ensuite mélangées entre elles de manière douce, pour former un mélange de cellules non broyées et de cellules broyées, contenant du Xylitol et de la glycérine. Ce mélange est nommé ci-après "Rhodiola X-G" dans des exemples de réalisation.
Etape 9 : ajout d'un support pour application cosmétique pour obtenir une composition cosmétique pour application topique.
Si à l'étape 4 du procédé décrit ci-avant, on avait mélangé au préalable le Xylitol à du citrate de choline et de l'eau dans le rapport molaire 1:2:3 (composé XoCH du tableau 1 de EP 2575993), on aurait obtenu un mélange d'un solvant eutectique profond NADES avec un cal de cellules végétales. Par la présence de ce solvant NADES, on a observé une extraction en dehors des cellules, de composés présents dans les cellules. Les cellules se sont ainsi appauvries en principes actifs, tels que composés phénoliques et flavanoïdes. L'utilisation d'un solvant eutectique profond (du type xylitol, citrate de choline et eau) dans l'étape 4 ne permet pas d'obtenir des cellules dédifférenciées et élicitées enrichies en xylitol dans leur volume interne.)
La composition cosmétique de l'invention comprend par exemple de 0,5 à 15% en poids de mélange de cellules végétales, broyées et non broyées, de xylitol et de glycérine. On donnera ci-après quelques exemples, non limitatifs, de telles compositions cosmétiques à usage topique Exemples 1A et 1B : Dispersion de Rhodiola X-G ou de Rhodiola G dans une base cosmétique
Rhodiola X-G ou Rhodiola G est dispersé dans la base suivante :
- Eau déionisée 85, 0 %
Huile minérale 9, 00 % - Alcool cétylique 3, 00 % ceteareth - 20 0, 75 %
Rhodiola X-G ou Rhodiola G 2,00 % fragrance 0, 15 % carbomer 0, 10 TOTAL 100, 00 %
La composition obtenue montre une dispersion homogène des cellules dans la crème et une texture très fine. L’étude de propriété a montré l’absence de germes et champignons ainsi qu’une remarquable stabilité de la composition.
Exemples 2A et 2B : Dispersion de Rhodiola X-G ou de Rhodiola G dans une autre base cosmétique
Le Rhodiola X-G ou Rhodiola G est dispersé dans la base suivante : - eau 46,59 % laureth sulfate de sodium ( 25% ) 36, 40 %
- PEG-7 glyceryl cocoate 2, 00 % laureth-2 1, 50 % laureth- 11 carboxylate de sodium 4, 00 % - cocamidopropyl bétaine & acide benzoique 3, 48 % chlorure de sodium 1, 60 % - parfum 0, 13 %
PEG-40 huile hydrogénée de castor
& propylène glycol & eau 0, 50 % oleth-10 0, 50 % - phosphate de sodium 0, 30 % phosphate dissodique 0, 08 % acide citrique ( 50 % ) 0, 52 % benzoate de sodium 0, 50 % Rhodiola X-G ou Rhodiola G 0, 90 % TOTAL 100, 00 %
Les compositions obtenues montrent une dispersion homogène des cellules. L’étude de propriété a montré l’absence de germes et champignons ainsi qu’une remarquable stabilité des compositions.
Exemple 3 : Lotions
Lotions contenant seulement Rhodiola X-G ou Rhodiola G : eau déminéralisée, propylène glycol, conservateur, parfum ; et produit actif : Rhodiola X-G ou Rhodiola G.
Exemple 5 : Shampooings
Shampoings / gels / laits contenant seulement une phase aqueuse A à base d’eau déminéralisée, détergents, moussants, épaississants, parfum et produit actif :
Rhodiola X-G ou Rhodiola G, sous forme d’une suspension visqueuse ou d’un gel.
Concernant les lotions, solutions et shampooings, les compositions à usage topique contiennent les différents constituants, dont on peut varier les teneurs en fonction des applications, mélangés dans la seule phase aqueuse, comme le réalise habituellement l'homme de l’art dans ce domaine.
La proportion de Rhodiola X-G ou Rhodiola G est fonction de la nature de la composition à usage topique et de l’application souhaitée. Elle est avantageusement comprise entre 0,01 et 5 %, mais peut atteindre jusqu’à 25 %.
Evidemment, l’invention n’est pas limitée aux exemples de réalisation donnés ci- dessus et il est possible de réaliser la composition à usage topique sous d’autres formes, telles que huile, onguent, laques, fards (fond de teint, poudre, rouge à lèvres, crayon, mascara ou produit cosmétique permettant de surligner les yeux en colorant les cils et/ou leur donnant plus de longueur ou d'épaisseur apparente, ombre à paupières) qui entrent aussi dans le cadre de l’invention.
Tests d'efficacité
La flore microbienne de la peau humaine est très complexe, comprenant des germes aérobies, anaérobies, des germes gram positifs et gram négatifs, des levures. La flore cutanée comprend d'une part la flore naturelle, résidente et non pathogène, et d'autre part, une flore exogène qui se développe lors d'un affaiblissement des défenses naturelles, d'une plaie, d'une infection, etc.
La flore cutanée résidente ou naturelle est composée de plusieurs espèces, dont: Staphylocoques (S. epidermis, S.hominis, S.haemolyticus, S. aureus), Corynebacteries (C.lipophiles ; C.urealyticum ; C.minutissimum ; C.jeikeium), Propionibacterie (P. acnés; P.avidum ; P. granulosum, P.propionicum), Microcoques (M.luteus; M.varians), Streptocoques (groupes A, B et G), Brevibacteries.
Il est généralement admis que la flore résidente, naturelle, a un rôle protecteur dans la mesure où elle "occupe le terrain", où elle sécrète parfois des substances antimicrobiennes (antibiotiques) qui défendent la peau contre d'autres espèces et où elle maintient le système défensif de la peau (système immunitaire) en éveil.
Des désordres cutanés sont liés à la rupture de l'équilibre écologique de la flore résidente suite à la colonisation de la peau par des germes exogènes ou à la prolifération anormale d'une souche endogène, cette profilération anormale peut être la conséquence d'une utilisation trop fréquentes de compositions bactéricides, antimicrobiennes, anti virucides, anti fongiques, antibiotiques, etc. non sélectives, attaquant indifféremment la flore pathogène et la flore résidente. Une telle utilisation de compositions non sélectives est une source de développement de souches exogènes résistantes. La prolifération des souches exogènes se traduit pai- des phénomènes divers, dont: le développement d'odeurs corporelles, notamment les odeurs axillaires et des pieds (principalement C. Xerosis pour les odeurs axillaires et B. linens pour les odeurs des pieds); pour les personnes à peau sensible, dermatite atopique, eczéma (germe responsable : S. aureus); la production de pellicules (principalement M. furfur); pour les personnes avec une peau grasse ou hyperséborrhéique, de l’acné (P. acnés); etc.
L'utilisation des antibiotiques ou bactéricides non spécifiques pose le problème du risque d'apparition de résistances bactériennes, et des problèmes de tolérance cutanée (irritations, allergies, ...).
En particulier dans cette période de Coronavirus, le lavage et la désinfection répétée des mains avec des solutions hydro alcooliques se sont traduits dans des perturbations de la flore cutanée naturelle, favorisant ainsi l'apparition et le développement d'espèces microbiennes exogènes, voire pathogènes au détriment de la flore naturelle. Cette apparition et développement rapide d'espèces microbiennes exogènes et pathogènes sont une source de contamination importante entre personnes, et de propagations de maladies. La composition cosmétique selon l'invention a montré lors de tests sur des volontaires, qu'elle permet un maintien d'un équilibre microbien bénéfique sur la peau, même et surtout après des agressions répétées du type hydroalcoolique.
Pour des tests d'efficacité, une lotion pour visage a été utilisée. Le pH de cette lotion est de 7,5.
Cette lotion de visage a été utilisée pour préparer les lotions de tests suivantes:
Lotion de référence : lotion de base "LR"
Lotion comparative 1 : lotion de base additionnée de Xylitol pour obtenir une teneur en Xylitol de 1% en poids. "LCOMP1 ",
Dans une variante de la lotion comparative 1 ("LCOMPlbis"), le xylitol a été mélangé et broyé avec le CAL 1, avec un large excès de xylitol par rapport au poids de CALL Ce mélange a été filtré pour récupérer une phase liquide visqueuse contenant du xylitol. Cette phase liquide a été utilisée pour préparer la lotion de base additionnée de xylitol pour obtenir une teneur- de 1% en poids de xylitol dans la lotion.
Lotion comparative 2 : lotion de base additionnée de CAL Ipour obtenir une teneur- en CAL 1 dans la lotion de 8% en poids. "LCOMP2"
Lotion comparative 3 : lotion de base additionnée de CAL 1 pour obtenir une teneur en CAL 1 dans la lotion de 8% en poids, et additionnée de glycérine pour obtenir une teneur de 15% en poids. "LCOMP3"
Lotion selon l'invention 1 : lotion de base additionnée de "Rhodiola X-G" en quantité suffisante pour obtenir une lotion avec une teneur de 1% en poids de Xylitol. Lotion selon l'invention 2 : lotion de base additionnée de "Rhodiola G" en quantité suffisante pour obtenir une lotion avec une teneur de 0,5% en poids de Xylitol.
Quinze personnes volontaires ont participé au test en suivant le protocole ci- dessous:
Le visage est lavé avec un savon liquide de pH 7.5, puis rincé et séché.
Le pH cutané est déterminé à l'aide d'une électrode spécifique de surface. Un prélèvement de la flore microbienne au niveau du visage est effectué à l'aide de plaques de gélose pour chaque volontaire.
Les volontaires ont été répartis en cinq groupes, le groupe référence qui sera traité avec la lotion LR, le groupe comparatif 1 qui sera traité avec la lotion LCOMP1, le groupe comparatif 2 qui sera traité avec la lotion LCOMP2, le groupe invention 1 qui sera traité avec la lotion Rhodiola X-G, et le groupe invention 2 qui sera traité avec la lotion Rhodiola G. Après ce traitement avec une lotion, les zones traitées ont été mises en contact (1 heure après le traitement) avec des souches exogènes Corynebacterium xerosis pour déterminer leur prolifération. Ces souches exogènes après le test ont été tuées par une crème antibiotique. La zone traitée est limitée à 4cm2, de manière à pouvoir observer les différences éventuelles avec la zone non traitée pour- un même volontaire.
On effectue des mesures du pH de la peau avant traitement, et ensuite de la zone traitée, à divers moments après traitement, à savoir 2heures, 4 heures, 8 heures et lôheures après traitement. De même, on opère à des prélèvements de microbes sur les zones traitées à divers moments, à savoir 2, 4, 8 et 16 heures après traitement.
16 heures après traitement, on opère un lavage avec le savon liquide de pH 7,5. On détermine alors le temps requis pour que la zone traitée retrouve son pH initial avant traitement. 1, 2 et 4 heures après le lavage, on examine la flore cutanée de la zone traitée lavée.
En cas de développement trop important de Corynebacterium xerosis sur la zone traitée, le test est arrêté et la zone est traitée rapidement avec une crème topique antibiotique.
Avant traitement, mais après lavage et séchage, la peau des volontaires avaient un pH de 4,9 à 5,3. La flore microbienne cutanée se composait essentiellement des espèces suivantes: Staphylocoques (S. epidermis, S.hominis, S.haemolyticus, S. aureus), Corynebacteries (C.lipophiles ; C.urealyticum ; C.minutissimum ;
C.jeikeium), Propionibacterie (P. acnés; P.avidum ; P. granulosum, P.propionicum), Microcoques (M.luteus; M.varians), Streptocoques (groupes A, B et G), Brevibacteries.
La flore bactérienne cutanée pour les zones qui vont être soumises à traitement ne comportait pas de Corynebacterium xerosis.
Pour les volontaires traités avec la lotion de référence LR, le pH de la zone traitée augmente rapidement d'une à deux unités, de plus une prolifération de la souche Corynebacterium xerosis est visible 4 heures après le début du traitement. La flore microbienne cutanée résidente était perturbée. Le test a été interrompu et la zone traitée a été soumise à une étape de lavage, rinçage et séchage. 3 heures après cette étape de lavage, le pH de la zone traitée revenait à une valeur de 5,2 - 5,5.
Pour éviter toute prolifération future de Corynebacterium xerosis, la zone traitée lavée et rincée a été traitée au moyen de la crème antibiotique.
Pour les volontaires traités avec la lotion comparative LC0MP1, le pH de la zone traitée augmente rapidement d'une à deux unités, de plus une prolifération de la souche Corynebacterium xerosis est visible 8 heures après le début du traitement. La flore microbienne cutanée résidente était perturbée. Le test a été interrompu après 8 heures et la zone traitée a été soumise à une étape de lavage, rinçage et séchage. 2 heures après cette étape de lavage, le pH de la zone traitée revenait à une valeur de 5,2 - 5,5.
Pour éviter toute prolifération future de Corynebacterium xerosis, la zone traitée et lavée a été traitée au moyen de la crème antibiotique.
Ces mêmes volontaires ont été traités avec la variante LCOMP1bis. Les résultats de ce test étaient identiques à ceux obtenus avec la composition comparative LCOMP1.
Pour les volontaires traités avec la lotion de référence LCOMP2, le pH de la zone traitée augmente rapidement d'une à deux unités, de plus une prolifération de la souche Corynebacterium xerosis est visible 8 heures après le début du traitement. La flore microbienne cutanée résidente était perturbée. Le test a été interrompu et la zone traitée a été soumise à une étape de lavage, rinçage et séchage. 2 heures après cette étape de lavage, le pH de la zone traitée revenait à une valeur de 5,2 - 5,5.
Pour éviter toute prolifération future de Corynebacterium xerosis, la zone traitée et lavée a été traitée au moyen de la crème antibiotique.
Pour les volontaires traités avec la lotion de l'invention 1 avec Rhodiola X-G, le pH de la zone traitée augmente d'une unité,. Après 16 heures, aucune prolifération de la souche Corynebacterium xerosis n'a été observée. La flore microbienne cutanée résidente restait proche de la flore originelle. Le test a été interrompu après 16 heures et la zone traitée a été soumise à une étape de lavage, rinçage et séchage.
1 heure après cette étape de lavage, le pH de la zone traitée et lavée revenait à une valeur de 5,2 - 5,5. La lotion selon l'invention 1 protège donc de manière efficace la flore cutanée résidente, tout en ayant une action protectrice contre des microorganismes exogènes. Pour les volontaires traités avec la lotion de l'invention 2 avec Rhodiola G, le pH de la zone traitée augmente de 0,5 unité. Après 12 heures, une légère prolifération de la souche Corynebacterium xerosis a été observée. La flore microbienne cutanée résidente restait proche de la flore originelle. Le test a été interrompu après 12 heures et la zone traitée a été soumise à une étape de lavage, rinçage et séchage.
1 heure après cette étape de lavage, le pH de la zone traitée et lavée revenait à une valeur de 5,2 - 5,5. La lotion selon l'invention 2 protège donc de manière efficace la flore cutanée résidente, tout en ayant une action protectrice confie des micro organismes exogènes. La durée d'action protectrice de la lotion selon l'invention 2 avec Rhodiola G était inférieure à celle de la lotion selon l'invention
1 avec Rlioliola X-G.
La peau traitée avec la lotion de l'invention 1 ou 2 avait un aspect plus souple, plus douce, plus hydratée que la peau non traitée, et le traitement n’a pas provoqué de rougeurs et d'irritations.
Test d'efficacité sur la croissance de germes Corynebacterium xerosis. Staphylococcus epidermidis, et Propionibacterium acnés
L'action inhibitrice ou non des lotions a été évaluée sur la croissance des germes Corynebacterium. xerosis (principal germe responsable des mauvaises odeurs corporelles), Staphylococcus epidermidis (bactérie bénéfique de la flore microbienne de la peau), et sur le germe Propionibacterium acnés (germes présents sur la peau hyperséborrhéique - responsables de poussée d'acné).
Les germes ont été mis chacun dans un milieu de culture gélose. On a opéré des puits pour chaque boite de culture, chaque puit étant destiné à recevoir une même quantité de lotion (LR ou LCOMP1 ou LCOMP2 ou Rhodiola X-G. Aucune action inhibitrice ou une faible action inhibitrice n’a été observée sur Corynebacterium. xerosis, Staphylococcus epidennidis, et sur le germe Propionibacterium acnés, pour la lotion LR.
Pour la lotion LCOMP1, pas d'effet inhibiteur pour Corynebacterium xerosis, mais bien une certaine inhibition pour Staphylococcus epidennidis, et pour le germe Propionibacterium acnesC
Pour la lotion LCOMP2, pas d'effet inhibiteur pour Corynebacterium xerosis, et Staphylococcus epidennidis, mais bien une certaine inhibition pour le germe Propionibacterium acnés (acné).
Pour la lotion Rhodiola G et la lotion Rhodiola X-G, on observe un effet inhibiteur respectivement marqué et très marqué pour Corynebacterium xerosis, et Propionibacterium acnés, et pas d'effet inhibiteur pour Staphylococcus epidermidis. Ceci permet de conserver la flore cutanée résidente, tout en ayant une action sur Corynebacterium xerosis, et Propionibacterium acnés.
Tests sur de de la peau reconstituée
Pour ces tests on a reconstitué une peau associée à un mélange de bactéries Staphyloccocus aureus, Staphyloccoccus epidennidis, Corynebacterium xerosis et Cutibacterium acnés.
On a appliqué sur cette peau reconstituée infectée de ce mélange de bactéries les mélanges à base de glycérol (97,5% en poids) et de cellules de Rhodiola Rosea enrichies en Xylitol (2,5% en poids). Par rapport à la peau reconstituée infectée de ce mélange de bactéries, mais non traitée, on a observé ainsi une réduction générale de l'adhésion des bactéries sur la peau reconstituée, mais surtout un accroissement de la proportion de Staphylococcus epidennidis sur la peau reconstituée (en particulier au détriment de Staphylococcus aureus et de Corynebacterium xerosis, sans modifier la proportion de Cutibacterium acnés), cet accroissement de la proportion de Staphylococcus epidermidis sur la peau assurant un effet de barrière améliorée.

Claims

26 Revendications
1. Composition cosmétique au moins partiellement aqueuse contenant au moins (a) des cellules dédifférenciées et élicitées de Rhodiola Rosea non broyées enrichies au moins en xylitol dans leur volume interne défini par leur paroi cellulaire, (b) du xylitol hors du volume interne des cellules, (c) de la glycérine et (d) un support pour application cosmétique.
2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle contient en outre (e) un broyât de cellules dédifférenciées et élicitées de Rhodiola Rosea
3. Composition suivant la revendication 2, caractérisée en ce que le broyât de cellules dédifférenciées et élicitées de Rhodiola Rosea est un broyât de cellules de rhodiola Rosea en présence de Xylitol et de glycérine, le rapport en poids Xylitol / glycérine étant avantageusement de 1 :5 à 1 :25, de préférence de 1 : 10 à 1 :20.
4. Composition suivant la revendication 2 ou 3, caractérisée en ce que le rapport en poids entre les cellules non broyées, dédifférenciées et élicitées de Rhodiola Rosea enrichies au moins en xylitol dans leur volume interne, et le broyât de cellules dedifférentiées et élicitées de Rhodiola Rosea est compris entre 1:10 et 10: 1.
5. Composition suivant l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les cellules dédifférenciées et élicitées de Rhodiola Rosea non broyées enrichies au moins en xylitol dans leur volume interne défini par leur paroi cellulaire présentent sur leur paroi cellulaire au moins une ou des zones comprenant du xylitol et de la glycérine.
6. Composition suivant l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les cellules dédifférenciées et élicitées de Rhodiola Rosea non broyées enrichies au moins en xylitol dans leur volume interne défini par leur paroi cellulaire comprennent au moins des phytoalexines et du xylitol, le rapport en poids xylitol / phytoalexines dans le volume interne des cellules défini par leur paroi cellulaire étant supérieur à 0,3, avantageusement supérieur à 0,5, de préférence supérieur à 1.
7. Composition suivant l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les cellules dédifférentiées, et avantageusement élicitées,, de Rhodiola Rosea non broyées enrichies au moins en Xylitol et présentant dans leur volume interne défini par leur paroi cellulaire du Xylitol sont des cellules préparées en séparant de leur milieu de culture, un cal comprenant des cellules dédifférentiées, et avantageusement élicitées, et en mélangeant ce cal de cellules de Rhodiola Rosea avec du xylitol ou une composition liquide aqueuse contenant du xylitol, le rapport en poids cal aqueux / Xylitol étant supérieur à 1 : 1 et étant adapté à la teneur en eau du cal pour éviter toute cristallisation du xylitol en mélange avec le cal à une température comprise entre 15 et 40°C.
8. Composition suivant la revendication 7, caractérisée en ce que le cal est mélangé avec du xylitol en poudre, avec un rapport en poids cal aqueux / xylitol adapté pour assurer la dissolution totale du xylitol à une température comprise entre 15 et 40°C dans l'eau contenue dans le cal.
9. Composition suivant la revendication 7 ou 8, caractérisée en ce que le cal après mélange son mélange avec du xylitol, est mélangé à du glycérol, la rapport en poids glycérol / xylitol étant supérieur à 0,5 : 1, avantageusement supérieur à 1 : 1 , de préférence supérieur à 10 : 1 ; en particulier compris entre 10:1 et 50 : 1.
10. Composition suivant la revendication 9, caractérisée en ce que le cal après mélange avec du xylitol et du glycérol est soumis à un broyage partiel, de manière à ce qu'au moins 50% en poids des cellules dédifférentiées de Rhodiola Rosea aient une paroi cellulaire dans un état non broyé.
11. Composition suivant l'une quelconque des revendications 7 à 10, caractérisée en ce que le cal de cellules dédifférentiées, et avantageusement élicitées, éventuellement soumise à un broyage, avantageusement mélangé à du glycérol est soumis à une élicitation à pression atmosphérique, à une température de 20 à 40°C, et dans de l'air avec un taux d'humidité relative de plus de 50% , avantageusement de 75% ou plus de 75% enrichi en CO2 pour- que sa teneur en CO2 soit comprise entre 3 et 10% en volume, comprenant au moins deux étapes d'illumination dans la gamme de longueur d'ondes comprise entre 400 et 720nm avec chacune une durée de 20 à 120 minutes avec une intensité de plus de 1000 lux, avantageusement de plus de 10000 lux et séparée entre elles par une période d'obscurité de moins de lOOlux de durée comprise entre 20 et 60minutes.
12. Composition suivant l'une quelconque des revendications 7 à 11, caractérisée en ce que le cal de cellules dédifférentiées et élicitées de Rhodiola Rosea, après séchage à -40°C et sous une pression de 100 Pa ou inférieure à 100 Pa, pour obtenir un cal séché présentant une teneur en humidité inférieure à 0,5% en poids, contient plus de 0,5% en poids de mélange de tyrosol et de Salidroside par rapport au poids du cal après séchage. Avantageusement, le cal séché contient plus de 0,5% en poids de Salidroside, de préférence de 0,6% à 1,2% en poids, et plus de 0,1% en poids de tyrosol, de préférence de 0,2% à 0,6% en poids, par rapport au poids du cal séché ou cal après séchage.
13. Composition suivant l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle contient de 0,1 à 10% en poids de cellules dédifférentiées de Rhodiola Rosea non broyées enrichies au moins en xylitol et présentant dans leur volume interne défini par leur paroi cellulaire du xylitol.
14. Composition suivant la revendication 13 pour l'amélioration de l'équilibre microbiologique de la flore cutanée.
15. Traitement cosmétique, non thérapeutique, d'une zone de la peau d'un être humain pour améliorer et/ou réguler l'équilibre microbiologique de la flore cutanée de cette zone, dans lequel on applique sur ladite zone une composition cosmétique selon l'une des revendications 1 à 14.
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