TWI606845B - 木質醋酸菌醱酵液作爲化妝品組成物之新穎用途 - Google Patents

木質醋酸菌醱酵液作爲化妝品組成物之新穎用途 Download PDF

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Description

木質醋酸菌醱酵液作為化妝品組成物之新穎用途
本案關於微生物醱酵液作為化妝品組成物的用途，特別地是，關於木質醋酸菌醱酵液作為化妝品組成物的用途。
近年來，有多種微生物醱酵液商品問世。微生物醱酵液中，已知可能含有維生素、礦物質、多胜肽、胺基酸或天然保濕因子，對於皮膚具有促進代謝、強化保濕、抗氧化、舒緩發炎、調理皮脂等的功效。
例如，商品名SKII(Procter & Gamble；P&G)以釀酒過程中使用酵母菌(Saccharomycopsis)所產生的醱酵液PiteraTM作為活性成分，以達到保濕等的護膚功效(SKII Official Website；www.sk-ii.com)。Tsai等人也曾發表釀酒酵母(Saccharomycopsis)的醱酵液具有抗發炎和細胞修復的作用(Journal of Dermatological Science,2006,42,pp.249-257)。
基於天然醱酵產物的生物安全性及功效，進一步研發以天然醱酵物為活性成分之化妝品組成物，有市場上的需求。
本案提供一種化妝品組成物，其包含木質醋酸菌 (Gluconacetobacter xylinus)醱酵液為活性成分。
本案更提供一種木質醋酸菌(Gluconacetobacter xylinus)醱酵液作為化妝品組成物之用途。
上述木質醋酸菌醱酵液係由下列方法所製造：(i)調配含有碳源、氮源、磷源、無機鹽類以及有機酸之培養基；(ii)於該培養基接種該木質醋酸菌(Gluconacetobacter xylinus)；(iii)使含有該木質醋酸菌之該培養基靜置培養；以及(iv)移除該培養基中所生成的纖維素膜，收集剩餘的培養液。
該木質醋酸菌的接種量較佳為102~105cell/mL。
含有該木質醋酸菌之該培養基較佳於25~32℃靜置培養，更佳者以兩階段培養，該兩階段培養包括第一階段在25~28℃溫度培養以及在該第一階段後的第二階段在29~32℃培養。
又上述製造該木質醋酸菌醱酵液之方法可更包括純化步驟，包含吸附劑添加、超過濾法、或過濾之至少一種。
該吸附劑可包括食品吸附劑、活性碳或具有吸附效果之產品。
上述製造該木質醋酸菌醱酵液之方法也可更包括將步驟(iv)收集的培養液進行乾燥的步驟。
再者，上述木質醋酸菌醱酵液的濃度，基於該化妝品組成物的重量，為5重量%以下。
第1圖顯示本案一實施例中木質醋酸菌醱酵液對人類皮膚角質株化細胞(HaCaT cells)之細胞毒性。
第2圖顯示本案一實施例中木質醋酸菌醱酵液對人類皮膚角質株化細胞(HaCaT cells)之細胞週期分布的影響。
第3圖顯示本案一實施例中木質醋酸菌醱酵液之清除DPPH(di(phenyl)-(2,4,6-trinitrophenyl)iminoazanium)自由基之能力。
第4圖顯示本案一實施例中木質醋酸菌醱酵液之清除ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)自由基之能力。
第5圖顯示本案一實施例中木質醋酸菌醱酵液之抑制細胞內活性氧(ROS)生成的能力。
第6圖顯示本案一實施例中木質醋酸菌醱酵液之抑制脂氧合酶(lipoxygenase)生成的能力。
第7圖顯示本案一實施例中木質醋酸菌醱酵液之抑制一氧化氮(NO)生成的能力。
第8圖顯示本案一實施例中木質醋酸菌醱酵液之抑制蘑菇酪胺酸酶(Mushroom tyrosinase)活性的能力。
本案發明目的在於，提供木質醋酸菌 (Gluconacetobacter xylinus)醱酵液作為化妝品組成物之新穎用途。習知醋酸菌常用於食醋的釀造，製成如穀類醋或水果醋等。另一方面，醋酸菌也已知會代謝產生微生物纖維素(biocellulose)，進而形成膜狀，可應用於食品、工業材料、生醫材料、化妝品組成物等。在生醫材料方面，已知可作為例如燒燙傷敷料、人造皮膚等。在化妝品組成物方面，也已有微生物纖維膜作為面膜等的商品。然而，至本案發明之前，尚未有以木質醋酸菌的醱酵液作為化妝品組成物使用的技術問世。
具體地說，本案所述之木質醋酸菌(Gluconacetobacter xylinus)醱酵液係去除木質醋酸菌醱酵產生的微生物纖維素膜所殘留下來的醱酵液。本案所述的醱酵液雖然可能含有部分殘留的纖維素，但是基於木質醋酸菌的好氧性質，微生物纖維素形成於液態培養基與空氣接觸的液面處而形成膜狀，因此在移除該膜狀物後，醱酵液中幾乎已無微生物纖維素。
本案之木質醋酸菌醱酵液係由下列方法所製造：(i)調配含有碳源、氮源、磷源、無機鹽類以及有機酸之培養基；(ii)於該培養基接種該木質醋酸菌(Gluconacetobacter xylinus)；(iii)使含有該木質醋酸菌之該培養基靜置培養；以及(iv)移除該培養基中的纖維素膜，收集剩餘的培養液。
上述步驟(i)所調配的培養基含有碳源、氮源、磷源、無機鹽類以及有機酸。碳源可來自五碳糖、六碳糖、水解糖液、含糖廢水等，氮源可來自酵母萃取物、蛋白腖(peptone)等化合物。 磷源可來自Na2HPO4、NaH2PO4、K2HPO4等。無機鹽類可來自礦物質、維生素，例如NaCl、CaCO3、C2H3O2Na等。有機酸可來自檸檬酸、醋酸等。本案一實施例中，使用濃度10~30g/L的葡萄糖作為碳源，2~10g/L的Na2HPO4作為磷源。惟本案所調配的培養基組成可視培養條件適當調整。
又上述製造木質醋酸菌醱酵液的方法中，木質醋酸菌(Gluconacetobacter xylinus)的接菌量可為102~105cell/mL，但不限於此，可視培養條件及所欲的醱酵液濃度而適當調整。
再者，上述製造木質醋酸菌醱酵液的方法中，步驟(iii)含有該木質醋酸菌之該培養基的靜置培養可在25~32℃進行。本案一實施例中，上述的靜置培養在室溫下進行。本案另一實施例中，上述靜置培養為兩階段培養，包括第一階段在25~28℃溫度培養以及在該第一階段後的第二階段在29~32℃培養。
再者，上述製造木質醋酸菌醱酵液的方法中，除上述步驟(i)~(iv)以外，可進一步包含一純化步驟，包括吸附劑的添加、超過濾法(ultrafiltration)、或過濾之至少一種。該吸附劑可包括食品吸附劑、活性碳或具有吸附效果之產品。一實施例中，吸附劑可為活性碳，藉由活性碳的多孔結構吸附異味及脫色，再利用過濾等方法去除活性碳。超過濾法使用奈米孔徑的超過濾膜，以濾除醱酵液中的雜質。
本案之製造木質醋酸菌醱酵液的方法中，除上述步驟(i)~(iv)以外，還可進一步包括將步驟(iv)收集的培養液進行乾燥的步驟。根據本案發明，乾燥後的木質醋酸菌醱酵液可長期儲存，而且使用時僅需要加水回溶，即可再現其活性。
根據本案發明，木質醋酸菌醱酵液，基於所製成的化妝品組成物總重量，較佳含有濃度5重量%以下，更佳為0.1重量%~5重量%，再更佳為2重量%~5重量%。含有濃度5重量%以下木質醋酸菌醱酵液之化妝品組成物具有有效的DPPH(di(phenyl)-(2,4,6-trinitrophenyl)iminoazanium)自由基清除效果、ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)自由基清除效果、活性氧(ROS)生成的抑制效果、一氧化氮(NO)生成的抑制效果、脂氧合酶(lipoxygenase)活性的抑制效果、以及蘑菇酪胺酸酶(Mushroom tyrosinase)活性的抑制效果，可顯見本案所述之化妝品組成物具有抗氧化、抗老化、保濕、美白等的美容功效。並且，在細胞毒性的試驗上，濃度5重量%以下的木質醋酸菌醱酵液的細胞存活率為50%以上，可顯見本案所述之化妝品組成物的生物安全性。
又本案所述之化妝品組成物的型態可為選自下列所構成之群組：化妝水、凝膠、凍膜、泥膜、乳液、乳霜、唇膏、粉底、粉餅、蜜粉、彩妝化妝品、卸妝油、卸妝乳、洗面乳、沐浴乳、洗髮精、護髮乳、防曬乳、護手霜、指甲油及香水，但不限於此。
本發明之化妝品組成物可視需要含有化妝品可接受成分，例如乳化劑、滲透促進劑、軟化劑、溶劑、賦型劑、抗氧化劑、或這些的組合。
本案所述之化妝品組成物可更進一步包含第二活性成分，例如玻尿酸、水楊酸、熊果酸、麴酸、多胜肽、寡胜肽、生長因子、酵素等、或者上述之組合。
本發明之具體實施詳細說明如下，然而以下的實施例僅用於進一步揭露本發明之技術內容，不應藉以限制本案的發明範疇。
【實施例】
[實施例1]木質醋酸菌醱酵液的製備(1)
配製葡萄糖10~30g/L、酵母萃取粉5~10g/L的前培養用液態培養基，經滅菌後，接入木質醋酸菌(Gluconacetobacter xylinus)，於30℃通氣培養，培養3~7天後作為種菌用。另一方面，配製10~30g/L葡萄糖、5~10g/L酵母萃取粉，2~10g/L的Na2HPO4、1~5g/L檸檬酸的培養液(121℃滅菌30分鐘)，接入先前培養之種菌，使其初始的木質醋酸菌濃度控制在102~105cell/mL，於A4大小的培養盆中進行靜置培養，初始之培養溫度為25~28℃，2-4天後提高至29~32℃，再培養3~10天。之後，收集粗製醱酵液，醱酵液外觀為茶色且為可流動性液體。所得濾液加入10g活性碳靜置1小時，以脫色、脫臭。之後利用Whatman濾紙進行抽氣過濾，所收集的濾液為純化後的醱酵液90mL。該純化後的醱酵液於真空下進行乾燥，得到2.25g的乾燥醱酵物，儲存於25℃下。使用前將該乾燥醱酵物加水回溶，得到濃度100%的木質醋酸菌醱酵液，以進行下列測試。
[實施例2]木質醋酸菌醱酵液的製備(2)
配製葡萄糖10~30g/L、酵母萃取粉5~10g/L的前培養用液態培養基，經滅菌後，接入木質醋酸菌(Gluconacetobacter xylinus)，於30℃通氣培養，培養3~7天後作為種菌用。另一方面，配製10~30g/L葡萄糖、5~10g/L酵母萃取粉，2~10g/L的 Na2HPO4、1~5g/L檸檬酸的培養液(121℃滅菌30分鐘)，接入先前培養之種菌，使其初始的木質醋酸菌濃度控制在102~105cell/mL，於A4大小的培養盆中進行靜置培養，初始之培養溫度為25~28℃，2-4天後提高至29~32℃，再培養3~10天。之後，收集粗製醱酵液，醱酵液外觀為茶色且為可流動性液體。所蒐集到的醱酵液會再添加1~10重量%吸附劑，以進行脫色除臭前處理，處理條件為常溫下攪拌10分鐘，然後經由抽氣過濾的方式，將吸附劑移除，所得產物，滅菌後可直接利用，不需任何加工。
[實施例3]細胞存活試驗
步驟
將1×105cell/mL的人類皮膚角質株化細胞(HaCaT cells)培養於96-well盤(NEST 701001)，置於37℃及5% CO2培養箱中培養24小時。另一方面，將上述木質醋酸菌醱酵液加水稀釋，製備分別為1wt%、2wt%、5wt%和10wt%濃度的木質醋酸菌醱酵液。再於該96-well盤中加入1μL的上述不同濃度之木質醋酸菌醱酵液於37℃、5% CO2培養箱中培養24小時。控制組不添加上述醱酵液。之後移除培養液，以PBS(phosphate buffered saline)清洗，更換新鮮的培養液，加入10μL的MTT(3-(4,5-cimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)(5mg/mL)溶液反應4小時。之後移除上清液，加入100μL DMSO後，於波長570nm測其吸光值(BioTek,SynergyTM2,USA)。
結果
結果如第1圖顯示，以未添加醱酵液之控制組的細胞存活率為基準(100%)，人類皮膚角質株化細胞(HaCaT cells)與濃度1%、 2%、5%和10%的上述木質醋酸菌醱酵液共同培養24小時後，細胞存活率分別為97.5%、95.4%、70.0%及50.5%。此結果表示濃度5%以下的木質醋酸菌醱酵液不具有細胞毒性。
[實施例4]細胞週期試驗
步驟
將1×105cell/mL的人類皮膚角質株化細胞(HaCaT cells)培養在24well盤中至少24小時，之後加入濃度2%的上述木質醋酸菌醱酵液，於培養箱中反應24小時。收集上清液至15mL離心管，再以trypsin-EDTA溶液將細胞取下至離心管中，與上清液一併離心1200rpm、5分鐘。移除上清液，加入300μL PBS，緩慢震盪，並逐滴加入700μL絕對酒精固定細胞，再移至微量離心管。
將上述微量離心管在4℃下以1200rpm離心5分鐘，移除上清液。之後依序加入445μL PBS、5μL RNase(10mg/mL)、及50μL 10% Triton X-100，將細胞的RNA破壞分解後，於37℃反應30分鐘，以1200rpm離心5分鐘，移除上清液。之後加入400μL PBS混合均勻，再加入5μL PI(5mg/mL)，於4℃避光反應5分鐘，以過濾膜過濾。利用流式細胞分析儀(flow cytometer,FACScan)，配合Winmdi電腦軟體來分析細胞週期分佈比例(%)。
結果
結果如第2圖顯示，人類皮膚角質株化細胞(HaCaT cells)與濃度2%的上述木質醋酸菌醱酵液共同培養24小時後，細胞週期中sub-G1為1.9%，小於10%。subG1期為細胞凋亡的特徵之一，如果為正常細胞，不會有subG1期產生，根據誘導死亡因素以及時間的不同，該期在染色細胞中的比例也會有所不同。
[實施例5]清除DPPH自由基評估
步驟
取1μL濃度分別為1%、2%、5%和10%的上述木質醋酸菌醱酵液，以及1000μg/mL的維生素C為正對照組，分別加入99μL新鮮配製的100μM DPPH(di(phenyl)-(2,4,6-trinitrophenyl)iminoazanium)的溶液。使上述各溶液振盪混合均勻，於室溫下靜置30min後，使用分光光度計檢測517nm之吸光值。控制組(control)為未添加醱酵液或維生素C的DPPH的溶液。
結果
以添加1000μg/mL的維生素C之正對照組所檢測到的DPPH自由基的含量為基準(100%)，結果如第3圖所示，濃度1%、2%、5%和10%的上述木質醋酸菌醱酵液的DPPH清除率分別為37.8%、54%、77.2%和84.0%，其清除DPPH自由基之IC50<10%。清除DPPH自由基的數值越高表示醱酵液抗氧化能力越強。
[實施例6]抑制ABTS自由基評估
步驟
配製ABTS+ stock溶液：將7mM ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)(F.W.=548.68)和4.9mM K2S2O8(potassium persulfate，F.W.=270.32)，溶於ddH2O後，於室溫避光反應16小時備用。
ABTS分析溶液：將上述製備的ABTS +stock溶液以二次ddH2O稀釋40倍，在吸光值734nm下測吸光值於0.7左右。之後使2.45mM K2S2O8和7mM ABTS溶液混合後，避光靜置16-18小時 後，反應產生自由基。之後，分別取1.5μL濃度1%、2%、5%和10%的上述木質醋酸菌醱酵液及1000μg/ml的Trolox(6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid)做為正對照組，分別混合3.5μL ddH2O及145mL的7mM ABTS溶液，靜置20分鐘，以分光光度計檢測734nm之吸光值。當吸光值越低表示樣品清除ABTS自由基的能力越佳。對照組為未添加上述醱酵液或Trolox的溶液。
結果
ABTS自由基為陽離子型自由基，此試驗可評估上述木質醋酸菌醱酵液是否具有清除陽離子自由基的功效。結果如第4圖所示，以添加1000μg/ml的Trolox正對照組所檢測到的ABTS自由基濃度為基準(100%)，添加濃度1%、2%、5%和10%的上述木質醋酸菌醱酵液的ABTS自由基清除率分別為33.0%、76.6%、77.2%和84.2%，其清除ABTS自由基之IC50<10%。
[實施例7]抑制細胞內活性氧(ROS)生成量之評估
步驟
將1×105cell/mL的細胞數培養在96-well盤中，並在37℃、5% CO2培養箱中生長24小時以上，再分別加入濃度0%、1%、2%、5%和10%的上述木質醋酸菌醱酵液共同培養。達反應時間後，移除上清液，以PBS清洗，分別加入含有0.1mM H2O2之新鮮培養液再培養1小時。接著移除培養液，加入含有10Mm的DCFH2DA(2’,7’-dichlorofluorescin diacetate)之新鮮培養液，避光作用1小時後，移除培養液。之後加入定量的PBS，於激發光502nm/散色光524nm下測其吸光值(BioTek,SynergyTM2,USA)。控制 組為未添加醱酵液或H2O2的細胞。
結果
DCFH2DA為一螢光劑，其和活性氧物質結合後會放出螢光，利用此特性來偵測細胞內活性氧的含量。結果如第5圖所示，以未添加上述醱酵液或H2O2的細胞所生成的ROS濃度為基準(100%)，未添加上述醱酵液的細胞經過H2O2作用後，細胞內活性氧生成量(121%)增加了21%。然而，與濃度1%、2%、5%和10%的上述木質醋酸菌醱酵液共同培養的細胞，細胞內活性氧生成量則明顯降低，表示上述木質醋酸菌醱酵液可有效地降低由H2O2誘導產生ROS。與濃度1%、2%、5%和10%上述木質醋酸菌醱酵液作用後細胞的ROS生成量皆低於110.5%(50%活性氧生成量)，表示上述木質醋酸菌醱酵液抑制細胞內活性氧(ROS)生成的IC50<10%。
[實施例8]抑制脂氧合酶(lipoxygenase)活性試驗
步驟
取1μL的濃度0.1%、0.2%上述木質醋酸菌醱酵液以及1000μg/ml咖啡酸為正對照組，分別加入2μL之LOX-1(135units)。之後加入1.5μL 10mM之亞麻油酸(linoleic acid)作為引起反應之基質，並加入95.5μL之Tris-HCl緩衝液(pH 9.0)。控制組以等藥量之DMSO為基準，完全均勻混合後，以分光光度計在234nm下測定其吸光值。
結果
LOX-1酵素為發炎反應中重要的酵素之一，利用此試驗可評估上述木質醋酸菌醱酵液是否具有抗發炎的效能。由於此試驗有波長的限制，基於上述木質醋酸菌醱酵液在高濃度時為深褐色， 因此僅能測定低濃度的木質醋酸菌醱酵液在脂氧合酶(lipoxygenase)的抑制率。結果如第6圖所示，以添加1000μg/ml咖啡酸之正對照組所測得的LOX-1濃度為基準(100%)，濃度0.1%和0.2%的上述木質醋酸菌醱酵液的在抑制LOX-1活性的能力分別為58.7%和65.2%，其抑制LOX-1活性之IC50<10%。
[實施例9]一氧化氮(NO)清除試驗
步驟
取98μL硝普鈉(sodium nitroprusside)5mM加入2μL濃度1%、2%、5%和10%的上述木質醋酸菌醱酵液，以及1000μg/ml芸香素(rutin)為正對照組，在25℃下150分鐘培養。之後加入100μL1 Griess Reagent(0.1% naphthylenediamine dihydrochloride、5% phosphoric acid和1% sulfanilamine)，測定560nm的吸光值。控制組為未添加上述醱酵液或芸香素的溶液。
結果
濃度1%、2%、5%和10%的上述木質醋酸菌醱酵液去除NO自由基的能力分別為約34.0%、38.9%、47.1%和51.2%，芸香素清除NO自由基的能力約為84%，其抑制酪胺酸酶之IC50<10%。
[實施例10]抑制蘑菇酪胺酸酶(Mushroom tyrosinase)活性的測定
步驟
以1000μg/ml維生素C作為標準品，試驗組為2μL的濃度1%、2%、5%和10%的上述木質醋酸菌醱酵液分別與18μL DMSO混合，加入96-well盤中，再加入25μL的100units蘑菇酪胺酸酶(Mushroom tyrosinase)溶液，於室溫下反應10分鐘。之後，以475 nm波長下測定蘑菇酪胺酸酶之背景值。隨後避光加入155μL的2.5mM L-DOPA溶液於室溫下混合，以475nm波長下測定蘑菇酪胺酸酶之吸光值(BioTek,SynergyTM2,USA)。計算不同濃度的木質醋酸菌醱酵液對於蘑菇酪胺酸酶之抑制活性。
結果
如第8圖所示，以添加1000μg/mL維生素C所測得的蘑菇酪胺酸酶濃度為基準(100%)，濃度1%、2%、5%和10%的上述木質醋酸菌醱酵液分別具有30.4%、55.8%、93.8%和94.3%的酪胺酸酶抑制率，顯示上述木質醋酸菌醱酵液具有良好的美白功效，其抑制酪胺酸酶之IC50<10%。
雖然本發明已以較佳實施例揭露如上，然其並非用 以限定本發明，任何熟悉此項技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

Claims (12)

  1. 一種化妝品組成物，其包含木質醋酸菌(Gluconacetobacter xylinus)醱酵液為活性成分，其中該木質醋酸菌醱酵液係由下列方法所製造：(i)調配含有碳源、氮源、磷源、無機鹽類以及有機酸之培養基，其中該培養基含有10~30g/L的葡萄糖、5~10g/L的酵母萃取粉、2~10g/L的Na2HPO4及1~5g/L的檸檬酸；(ii)於該培養基接種該木質醋酸菌(Gluconacetobacter xylinus)；(iii)使含有該木質醋酸菌之該培養基靜置培養，其中，含有該木質醋酸菌之該培養基的靜置培養為兩階段培養，該兩階段培養包括第一階段在25~28℃溫度培養以及在該第一階段後的第二階段在29~32℃培養；以及(iv)移除該培養基中所生成的纖維素膜，收集剩餘的培養液。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之化妝品組成物，其中，該木質醋酸菌的接種量為102~105cell/mL。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之化妝品組成物，其中，該製造該木質醋酸菌醱酵液之方法更包括純化步驟，該純化步驟包括吸附劑的添加、或過濾之至少一種。
  4. 如申請專利範圍第3項所述之化妝品組成物，其中該吸附劑包括食品吸附劑、活性碳或具有吸附效果之產品。
  5. 如申請專利範圍第1項所述之化妝品組成物，其中該製造該木質醋酸菌醱酵液之方法更包括將步驟(iv)收集的培養液進行乾燥的步驟。
  6. 如申請專利範圍第1項所述之化妝品組成物，其中該木質醋酸菌醱酵液的濃度，基於該化妝品組成物的重量，為5重量%以下。
  7. 一種木質醋酸菌(Gluconacetobacter xylinus)醱酵液之用途，其係用於製造化妝品組成物，其中該木質醋酸菌醱酵液為該化妝品組成物之活性成分且係由下列方法所製造：(i)調配含有碳源、氮源、磷源、無機鹽類以及有機酸之培養基，其中該培養基含有10~30g/L的葡萄糖、5~10g/L的酵母萃取粉、2~10g/L的Na2HPO4及1~5g/L的檸檬酸；(ii)於該培養基接種該木質醋酸菌(Gluconacetobacter xylinus)；(iii)使含有該木質醋酸菌之該培養基靜置培養，其中，含有該木質醋酸菌之該培養基的靜置培養為兩階段培養，該兩階段培養包括第一階段在25~28℃溫度培養以及在該第一階段後的第二階段在29~32℃培養；以及(iv)移除該培養基中所生成的纖維素膜，收集剩餘的培養液。
  8. 如申請專利範圍第7項所述之用途，其中，該木質醋酸菌的接種量為102~105cell/mL。
  9. 如申請專利範圍第7項所述之用途，其中，該製造該木質醋酸菌醱酵液之方法更包括純化步驟，該純化步驟包括吸附劑的添加、或過濾之至少一種。
  10. 如申請專利範圍第9項所述之用途，其中，該吸附劑包括食品吸附劑、活性碳或具有吸附效果之產品。
  11. 如申請專利範圍第7項所述之用途，其中該製造該木質醋酸菌醱酵液之方法更包括將步驟(iv)收集的培養液進行乾燥的步驟。
  12. 如申請專利範圍第7項所述之用途，其中該木質醋酸菌醱酵液的濃度，基於該化妝品組成物的重量，為5重量%以下。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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JPS61143313A (ja) * 1985-11-20 1986-07-01 Sansho Seiyaku Kk メラニン生成抑制用ロ−シヨン剤
CN104825343A (zh) * 2014-02-06 2015-08-12 奈菲儿生医股份有限公司 含有生物纤维素膜碎片的化妆品组合物及其制造方法

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