CN107281039A - 抗冻护手霜及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及皮肤保养品技术领域，具体涉及一种抗冻护手霜及其制备方法。本发明提供的抗冻护手霜的原料包括以下重量份的组分：梅花提取物10‑20份、尿囊素10‑15份、干细胞分泌因子0.01‑0.5份、乳化剂30‑40份、角鲨烷10‑20份、水15‑25份。本发明的抗冻护手霜不仅能够有效的保护手部，对手部进行了全面护理；还能促进皮肤的成纤维细胞合成胶原蛋白的能力，修复细胞、改善细胞代谢、激活衰老细胞；同时具有清淡的芬芳香味，使人们的心情放松，使用舒适。

Description

抗冻护手霜及其制备方法

技术领域

本发明涉及皮肤保养品技术领域，具体涉及一种抗冻护手霜及其制备方法。

背景技术

冬季气候寒冷而干燥，随着西北风吹过，人们的手足由湿润转为粗糙，这是由于在寒冷的天气，血液循环差，皮肤弹性降低，容易引起手裂。如果不加以保护，极易出现裂口，严重者还会引起疼痛、出血，医学上称之“皲裂症”。此外，经常做家务的人手会接触洗洁精、皂液等碱性物质，手部肌肤容易受到腐蚀而变得粗糙,这是由于手皮肤表面的油膜损坏，皮肤干燥，失去弹性所产生的皮肤组织断裂。再者，老年人新陈代谢缓慢，死亡的细胞多，新生的细胞少，皮肤弹性差，易发生手裂。

合适的护手霜是对手部保养的一种有效的方法，但如今护手霜的种类繁多，不同工作环境对手部皮肤造成的伤害也不同。护手霜根据其不同成分可分为防护型、保湿型及活肤型等多种类型，选用时要根据不同的需要进行保养。目前，针对上述情况的护手霜一般都含有果酸及维生素A和E等修复性元素,其中的果酸等成分对碱性物质有极强的综合修复作用，但果酸等原料具有脱色或脱皮作用等安全隐患，抗衰老常用的VA同样存在遇光、热分解的隐患。而选择护手霜不仅要根据使用者所从事的工作的不同，还要根据季节的变换，只有这样才能抵御因恶劣气候因素给手部留下的痕迹。

专利公开号为CN104800142A的发明公开了一种护手霜及其制备工艺，成分包括天然中草药提取物：黄芪、艾叶、薰衣草、甘草、钟乳石、当归、芦荟、白及、蜂蜜、牛奶、益母草、菊花和川弯。此类发明制得的护手霜能起到滋润肌肤、保养肌肤、延缓衰老、消除硬角质层等功效，但其抗冻防护的效果不明显，在秋冬季使用效果不理想。

发明内容

有鉴于此，有必要针对上述的问题，提供一种抗冻效果更好的护手霜。

本发明提供一种抗冻护手霜，所述抗冻护手霜的原料包括以下重量份的组分：梅花提取物10-20份、尿囊素10-15份、干细胞分泌因子0.01-0.5份、乳化剂30-40份、角鲨烷10-20份、水15-25份。

优选的，所述梅花提取物的主要成分包括罗勒烯、芳樟醇、乙酸苄酯、水杨酸甲酯、侧伯烯、柠檬烯以及苯甲醇。

优选的，所述梅花提取物的制备方法包括：取水分质量＜10％的梅花花瓣，加入乙醇水溶液浸泡，回流提取，过滤，得到第一滤液；在第一滤液中加入壳聚糖水溶液，絮凝，过滤，得到第二过滤液；将第二过滤液减压浓缩得到浓溶液；将浓溶液过柱，收集过柱液，得到所述梅花提取物。

优选的，所述尿囊素从甜菜中提取得到。

优选的，所述干细胞分泌因子为脐带间充质干细胞的分泌因子。

优选的，所述乳化剂选自单硬脂酸甘油酯、棕榈酸异丙酯、甘油酯、乳化蜡、卵磷脂、羊毛脂或蔗糖酯中的至少一种。

本发明还提供一种上述抗冻护手霜的制备方法，所述制备方法包括：将所述梅花提取物、所述尿囊素、所述干细胞分泌因子以及水按重量份混合溶解，加入所述乳化剂和所述角鲨烷，加热搅拌，降至室温后，通过超微化得到所述抗冻护手霜。

优选的，所述加热搅拌的温度为80-90℃，加热搅拌的速率为3000-5000转/min。

优选的，所述超微化通过动态高压微射流超微化技术实现，所述动态高压微射流超微化技术包括剪碎、破碎和均质，所述动态高压微射流超微化技术的工作压力为140-180Mpa，工作温度为20-30℃。

本发明提供的抗冻护手霜克服了传统护手霜中大量添加刺激性化学品以及致癌或者有毒化学品的缺陷，采用纯天然化妆品成分，能够有效的保护手部，采用生物抗冻成分，对手部进行了全面护理；所用的原料中含有梅花提取物，来源主要是天然植物提取物，具有清淡的芬芳香味，使人们的心情放松，使用舒适。本发明提供的抗冻护手霜中还含有干细胞分泌的各种活性因子，具有提高成纤维细胞的增殖能力，促进皮肤的成纤维细胞合成胶原蛋白的能力，修复细胞、改善细胞代谢、激活衰老细胞。通过同时采用来自于天然植物提取物和来自于与人同源的干细胞分泌因子，两者互为促进吸收与修复皮肤组织和细胞，不但使得适用人群的范围扩大，而且能够起到满足特殊人群的需要(如抗冻抗皱)。具体制备方法中，采取了对含有效成分的纯天然植物进行了活性组分提取方法，因此能够提高植物的利用率，整个提取过程中无添加任何有毒化学溶剂，并对形成的护手霜进行了超微化，使得手部可以更好地吸收，制备方法简单安全可靠，产品无任何毒副作用，有良好的抗冻防裂效果，适合秋冬季节使用。

具体实施方式

为了便于本领域技术人员理解，下面将结合具体实施例对本发明进行进一步描述。

本发明提供一种抗冻护手霜，所述抗冻护手霜的原料包括以下重量份的组分：梅花提取物10-20份、尿囊素10-15份、干细胞分泌因子0.01-0.5份、乳化剂30-40份、角鲨烷10-20份、水15-25份。其中，水为纯进水或去离子水。通过这些重量份比例的各原料得到的抗冻护手霜涂抹在手上更容易吸收和渗透，不会有油腻厚重的感觉。

梅花是自然界为数不多可以抵御寒冬的神奇物种，科学研究证明，梅花内含有丰富的人体所需的氨基酸、维生素、常量和微量元素以及多种类脂、核酸、生长素、酶类和抗菌素等生物活性成分，近期研究得知梅花中还含有增强人体体质和保障人类健康至关重要的高效生物活性物质。梅花还有独特的药理功能，如清热解毒、理气养血之功，还有清单健脾、提神抗癌之效，使用含有梅花提取物的产品还可增强免疫、祛病益寿、养颜美容。

具体实施方式中，梅花提取物包括黄酮(flavone)、多糖(polysaccharide)、皂甙(saponins)、苯甲醛(Benzaldehyde)、异丁香酚(Isoeugenol)、乙酸(acetic acid)、1，1-二乙氧基乙烷(1，1diethoxy ethane)、异戊醇(isoamyl alcohol)、1，3-二氧戊环(1，3-dioxolang)、双丙酮醇(diacetone alcohol)、3-丁烯-2-酮(3-butene-2-one)、叶醇(3-hexen-1-ol)、侧柏烯(2-thujene)、月桂烯(myrcene)、对聚伞花素(pcymene)、柠檬烯(limonene)、6-甲基-1-辛醇(6-methyl-1-octanol)、苯甲醇(benzyl alcohol)、罗勒烯(α-ocimene)、芳樟醇(linalool)，氧化芳樟醇(linalool oxide)、松樟酮(pinocamphone)、乙酸苄酯(benzyl acetate)、萘(naphthalene)、水杨酸甲酯(methyl salicylate)、吲哚(1H-indole)、β-丁香烯(β-caryophyllene)、(王古)(王巴)烯(α-copaene)、2，6-二叔丁基对甲苯酚(2，6-di-tertbutyl-4-methylphenol)、香桧酮(sabina detone)、苯甲酸(benzoicacid)、癸酸(decanoic acid)、邻苯二甲酸叔丁酯(diphenate tertbutyl ester)、十二酸(dodecanoic acid)、4-癸酮(4-decanone)、1，3，5-三丁基六氢-1，3，5-三氮杂苯(1，3，5-tributylhexahydro-1，3，5-triazine)等成分。其中含量最多的是罗勒烯，其次是芳樟醇、乙酸苄酯、水杨酸甲酯、侧伯烯、柠檬烯及苯甲醇。另外还含有红豆杉氰甙(taxiphyllin)，蜡梅甙(meratin)，α-胡萝卜素(α-carotene)，蜡梅碱(calycanthine)等。

梅花提取物的制备方法包括：取水分质量＜10％的梅花花瓣，加入乙醇水溶液浸泡，回流提取，过滤，得到第一滤液；在第一滤液中加入壳聚糖水溶液，絮凝，过滤，得到第二过滤液；将第二过滤液减压浓缩得到浓溶液；将浓溶液过柱，收集过柱液，得到所述梅花提取物。

具体实施方式中，梅花提取物的制备方法包括：

(1)取干的梅花花瓣作为原料，其水分质量含量<10％，取干的梅花花瓣10-50份，加入1-1.5倍10-30％的乙醇水溶液浸泡1.5-3h；

(2)回流提取2-4h，过滤，取滤液；

(3)加入滤液量1-5％的1％壳聚糖水溶液，絮凝10-60min，过滤，取滤液；

(4)以75℃-80℃减压浓缩成0.5-1生药/ml的浓溶液；

(5)过树脂柱(直径1.5厘米的层析柱)，上样速度为l-1.5ml/min，收集过柱液，即得梅花提取物。

更具体的，梅花提取物的制备方法包括：

(1)取干的梅花花瓣作为原料，其水分质量含量<10％，取干的梅花花瓣30份，加入1倍20％的乙醇水溶液浸泡2h；

(2)回流提取3h，过滤，取滤液；

(3)加入滤液量3.5％的1％壳聚糖水溶液，絮凝35min，过滤，取滤液；

(4)以78℃减压浓缩成0.5生药/ml的浓溶液；

(5)过树脂柱(直径1.5厘米的层析柱)，上样速度为lml/min，收集过柱液，即得梅花提取物。

具体实施方式中，尿囊素从甜菜中提取得到。选取甜菜作为尿囊素的提取源，对尿囊素进行提取，具体包括：采用亚临界水提取工艺对甜菜的尿囊素活性组分进行提取得到尿囊素提取液，将尿囊素提取液采用真空旋转蒸发器旋转蒸干得尿囊素粘稠状液体，其中，亚临界醇提取工艺的提取温度为135℃-145℃，提取时间为45-50min，液料比为(13:1)-(15:1)。更优选的，亚临界醇提取工艺的提取温度为135℃，提取时间为45min，液料比为13:1。

干细胞抗衰老基于其两种基本功能，一是干细胞的增殖分化能力，可以分化成不同的体细胞以代替衰老死亡的机体细胞，二是干细胞的分泌功能，可以产生许多生物活性分子，间充质干细胞一个强大的功能就是分泌众多的营养性细胞因子。大量科学研究表明，间充质干细胞至少分泌免疫调节因子(HGF、LIF)、趋化因子(RANTES、SDF-lα、fractalkine、MIP-lα、MCP-1、MCP-2)、支持祖细胞的营养因子(IL-6、FGF-2、PDGF-AA、PDGF-BB、EGF)、血管再生因子(VEGF165、FGF-2、PDGF-AA、PDGF-BB、EGF)、抑制疤痕因子(HGF、FGF-2)、抗凋亡因子(VEGF165、FGF-2、HGF)、伤口愈合相关因子(IL-6、IL-8、TGF-βl、MCP-1、VEGF、GM-CSF)、TIMP-1)、各型胶原蛋白(I、II、III、IV型胶原蛋白)以及各种溶菌酶等。

具体实施方式中，由于目前骨髓间充质干细胞的获得存在一些困难且来源不稳定，细胞增殖没有脐带间充质干细胞速度快；羊膜间充质干细胞虽然获得容易，但细胞体积大，增殖速度慢，获得干细胞分泌因子的成本高；脂肪间充质干细胞大多数供者自身都存在炎症问题，干细胞分泌因子中炎性因子也较多，不利于用于护肤品。本发明的抗冻护手霜中，干细胞分泌因子优选采用脐带间充质干细胞的分泌因子。

具体的，干细胞分泌因子冻干粉制备过程如下：

(1)收集健康人体脐带，对脐带作进一步清洗，再用无菌手术剪将脐带去除外膜、静脉和动脉后切割分为细小组织。

(2)剪碎后的细小组织通过加入适当浓度的胰酶、胶原酶等消化脐带组织块0.5小时。以消化出单核细胞，收集消化出的细胞用无血清培养基进行贴壁培养，获得脐带间充质干细胞。

(3)间充质干细胞的扩增培养,用干细胞培养基通过常规干细胞培养的方式进行间充质干细胞的培养,根据细胞生长状况进行换液，补液。

(4)观察细胞生长情况，取细胞检测细胞表面阳性标志CD90、CD105和细胞表面阴性表面标志CD45、CD34的表达情况。高表达上述检测物质时，取50ml干细胞培养基，分装于培养皿中，液面厚度不高于3mm，盖上保鲜膜，放于-86℃冰箱中冷冻24h。

(5)取出冷冻后的培养皿，用细针在保鲜膜上戳出若干小孔，放置于冻干机中，冷冻干燥。

(6)冻干成粉末状分装备用。

具体的，本发明采用第3代到第5代的细胞用于制备干细胞分泌因子，用于制备干细胞分泌因子的培养基为不含酚红的RPMI-1640，用于制备干细胞分泌因子的培养上清只收集细胞接种后第72-96h时间区间的培养上清。

具体实施方式中，所述乳化剂选自单硬脂酸甘油酯、棕榈酸异丙酯、甘油酯、乳化蜡、卵磷脂、羊毛脂或蔗糖酯中的至少一种。

具体实施方式中，本发明所用的原料中角鲨烷是从深海鲨鱼肝脏中提取的角鲨烯经氢化制得一种性能优异的烃类油脂，故又名深海鲨鱼肝油。角鲨烷是一种化学稳定性高，使用感极佳的动物油脂，对皮肤有较好的亲和性，不会引起过敏和刺激，并能加速配方中其他活性成分向皮肤中渗透；具有较低的极性和中等的铺展性，且纯净、无色、无异味；还可抑制霉菌的生长。具有高度的滋润性和保湿性；其抗氧化性和热稳定性优异；在宽广的PH范围内有很好的稳定性；与矿物油和大多数护理用品的原料有很好的相容性。

本发明提供的抗冻护手霜克服了传统护手霜中大量添加刺激性化学品以及致癌或者有毒化学品的缺陷，采用纯天然化妆品成分，能够有效的保护手部，采用生物抗冻成分，对手部进行了全面护理；所用的原料中含有梅花提取物，来源主要是天然植物提取物，具有清淡的芬芳香味，使人们的心情放松，使用舒适。本发明提供的抗冻护手霜中还含有干细胞分泌的各种活性因子，具有提高成纤维细胞的增殖能力，促进皮肤的成纤维细胞合成胶原蛋白的能力，修复细胞、改善细胞代谢、激活衰老细胞。通过同时采用来自于天然植物提取物和来自于与人同源的干细胞分泌因子，两者互为促进吸收与修复皮肤组织和细胞，不但使得适用人群的范围扩大，而且能够起到满足特殊人群的需要(如抗冻抗皱)。

本发明还提供一种上述抗冻护手霜的制备方法，制备方法包括：将梅花提取物、尿囊素、干细胞分泌因子以及水按重量份混合溶解，加入乳化剂和角鲨烷，加热搅拌，降至室温后，通过超微化得到抗冻护手霜。其中，加热搅拌的温度为80-90℃，加热搅拌的速率为3000-5000转/min。超微化通过动态高压微射流超微化技术实现，动态高压微射流超微化技术包括剪碎、破碎和均质，动态高压微射流超微化技术的工作压力为140-180Mpa，工作温度为20-30℃。

具体的制备方法包括：在分别制备好梅花提取物，尿囊素以及干细胞分泌因子后，将梅花提取物10-20重量份、尿囊素10-15重量份以及干细胞分泌因子0.01-0.5份，加入15-25重量份的纯净水混合后溶解，向其中加入30-40重量份乳化剂，再加入10-20重量份的角鲨烷，搅拌下加热到80℃-90℃，加入搅拌机中搅拌，搅拌速率为3000-5000转/min，搅拌3-8min，降至室温，通过干法粉碎技术或者湿法粉碎技术进行超微化得到生物抗冻护手霜。更优选的，搅拌下加热到85℃，加入搅拌机中搅拌，搅拌速率为4000转/min，搅拌5min，降至室温。更优选的，其中，超微化采用的是动态高压微射流超微化技术，具体步骤：剪碎、破碎和均质，其中工作压力为150-170MPa，工作温度为20-30℃；更优选的工作压力为160MPa，工作温度为25℃。

具体的实施方式中，抗冻护手霜的制备方法包括如下步骤：

步骤一、梅花提取物的制备过程

(1)将梅花花瓣10-50份，加入1-1.5倍10％-30％的乙醇水溶液浸泡1.5-3h；

(2)回流提取2-4h，过滤，取滤液；

(3)加入滤液量1％-5％的1％壳聚糖水溶液，絮凝10-60min，过滤，取滤液；

(4)以75℃-80℃减压浓缩成0.5-1生药/ml的浓溶液；

(5)过树脂柱(直径1.5厘米的层析柱)，上样速度为1-1.5ml/min，收集过柱液，即得梅花提取物。

步骤二、尿囊素的提取的制备

选取甜菜作为尿囊素的提取源，对尿囊素进行提取，具体包括：采用亚临界水提取工艺对甜菜的尿囊素活性组分进行提取得到尿囊素提取液，将所述尿囊素提取液采用真空旋转蒸发器旋转蒸干得尿囊素粘稠状液体，其中，所述亚临界醇提取工艺的提取温度为135℃-145℃，提取时间为45-50min，液料比为(13:1)-(15:1)。

步骤三、干细胞分泌因子冻干粉制备

(1)收集健康人体脐带，对脐带作进一步清洗，再用无菌手术剪将脐带去除外膜、静脉和动脉后切割分为细小组织。

(2)剪碎后的细小组织通过加入适当浓度的胰酶、胶原酶等消化脐带组织块0.5小时。以消化出单核细胞，收集消化出的细胞用无血清培养基进行贴壁培养，获得脐带间充质干细胞。

(3)间充质干细胞的扩增培养，用干细胞培养基通过常规干细胞培养的方式进行间充质干细胞的培养，根据细胞生长状况进行换液，补液。

(4)观察细胞生长情况，取细胞检测细胞表面阳性标志CD90、CD105和细胞表面阴性表面标志CD45、CD34的表达情况。高表达上述检测物质时，取50ml干细胞培养基，分装于培养皿中，液面厚度不高于3mm，盖上保鲜膜，放于-86℃冰箱中冷冻24h。

(5)取出冷冻后的培养皿，用细针在保鲜膜上戳出若干小孔，放置于冻干机中，冷冻干燥。

(6)冻干成粉末状分装备用。

步骤四、抗冻护手霜的制备

将梅花提取物10-20重量份、尿囊素10-15重量份以及干细胞分泌因子0.01-0.5份，加入15-25重量份的纯净水混合后溶解，向其中加入30-40重量份乳化剂，再加入10-20重量份的角鲨烷，搅拌下加热到80℃-90℃，加入搅拌机中搅拌，搅拌速率为3000-5000转/min，搅拌3-8min，降至室温，通过干法粉碎技术或者湿法粉碎技术进行超微化得到生物抗冻护手霜，其中，超微化采用的是动态高压微射流超微化技术，具体步骤：剪碎、破碎和均质，其中工作压力为150-170MPa，工作温度为20℃-30℃。

本发明的制备方法中，采取了对含有效成分的纯天然植物进行了活性组分提取方法，因此能够提高植物的利用率，整个提取过程中无添加任何有毒化学溶剂，并对形成的护手霜进行了超微化，使得手部可以更好地吸收，制备方法简单安全可靠，产品无任何毒副作用，有良好的抗冻防裂效果，适合秋冬季节使用。

以下结合具体实施例予以进一步说明。

下述实施例中原料份数均为重量份数。使用的原料均为干的梅花花瓣，水分质量含量<10％。

实施例1：

步骤一、梅花提取物的制备过程

(1)将梅花花瓣10份，加入0.5倍10％的乙醇水溶液浸泡1.5h；

(2)回流提取2h，过滤，取滤液；

(3)加入滤液量1％的1％壳聚糖水溶液，絮凝10min，过滤，取滤液；

(4)以75℃减压浓缩成0.5生药/ml的浓溶液；

(5))过树脂柱(直径1.5厘米的层析柱)，上样速度为0.5ml/min，收集过柱液，即得梅花提取物。

步骤二、尿囊素的提取的制备

选取甜菜作为尿囊素的提取源，对尿囊素进行提取，具体包括：采用亚临界水提取工艺对甜菜的尿囊素活性组分进行提取得到尿囊素提取液，将所述尿囊素提取液采用真空旋转蒸发器旋转蒸干得尿囊素粘稠状液体，其中，所述亚临界醇提取工艺的提取温度为135℃，提取时间为45min，液料比为13:1。

步骤三、干细胞分泌因子冻干粉制备

(1)收集健康人体脐带，对脐带作进一步清洗，再用无菌手术剪将脐带去除外膜、静脉和动脉后切割分为细小组织。

(2)剪碎后的细小组织通过加入适当浓度的胰酶、胶原酶等消化脐带组织块0.5小时。以消化出单核细胞，收集消化出的细胞用无血清培养基进行贴壁培养，获得脐带间充质干细胞。

(3)间充质干细胞的扩增培养，用干细胞培养基通过常规干细胞培养的方式进行间充质干细胞的培养,根据细胞生长状况进行换液，补液。

(4)观察细胞生长情况，取细胞检测细胞表面阳性标志CD90、CD105和细胞表面阴性表面标志CD45、CD34的表达情况。高表达上述检测物质时，取50ml干细胞培养基，分装于培养皿中，液面厚度不高于3mm，盖上保鲜膜，放于-86℃冰箱中冷冻24h。

(5)取出冷冻后的培养皿，用细针在保鲜膜上戳出若干小孔，放置于冻干机中,冷冻干燥。

(6)冻干成粉末状分装备用。

步骤四、抗冻护手霜的制备

将步骤一得到的梅花提取物10重量份、步骤二得到的尿囊素10重量份以及步骤三的得到的干细胞分泌因子0.05重量份，加入22重量份的纯净水混合后溶解，向其中加入40重量份单硬脂酸甘油酯(乳化剂)，再加入17重量份的角鲨烷，搅拌下加热到85℃，加入搅拌机中搅拌，搅拌速率为4000转/min，搅拌5min，降至室温，通过干法粉碎技术或者湿法粉碎技术进行超微化得到生物抗冻护手霜，其中，超微化采用的是动态高压微射流超微化技术，具体步骤：剪碎、破碎和均质，其中工作压力为160MPa，工作温度为25℃。

制得实施例1的抗冻护手霜经过体系破坏性试验，对皮肤无任何损伤破坏，而且，产品各项感观指标、理化指标、卫生指标均符合相应的国家标准。

实施例2：

步骤一、梅花提取物的制备过程

(1)将梅花花瓣30份，加入1倍20％的乙醇水溶液浸泡2h；

(2)回流提取3h，过滤，取滤液；

(3)加入滤液量3.5％的1％壳聚糖水溶液，絮凝35min，过滤，取滤液；

(4)以78℃减压浓缩成0.5生药/ml的浓溶液；

(5)过树脂柱(直径1.5厘米的层析柱)，上样速度为lml/min，收集过柱液，即得梅花提取物。

步骤二、尿囊素的提取的制备

选取甜菜作为尿囊素的提取源，对尿囊素进行提取，具体包括：采用亚临界水提取工艺对甜菜的尿囊素活性组分进行提取得到尿囊素提取液，将所述尿囊素提取液采用真空旋转蒸发器旋转蒸干得尿囊素粘稠状液体，其中，所述亚临界醇提取工艺的提取温度为135℃，提取时间为45min，液料比为14:1；

步骤三、干细胞分泌因子冻干粉制备

(1)收集健康人体脐带，对脐带作进一步清洗，再用无菌手术剪将脐带去除外膜、静脉和动脉后切割分为细小组织。

(2)剪碎后的细小组织通过加入适当浓度的胰酶、胶原酶等消化脐带组织块0.5小时。以消化出单核细胞，收集消化出的细胞用无血清培养基进行贴壁培养，获得脐带间充质干细胞。

(3)间充质干细胞的扩增培养，用干细胞培养基通过常规干细胞培养的方式进行间充质干细胞的培养，根据细胞生长状况进行换液，补液。

(4)观察细胞生长情况，取细胞检测细胞表面阳性标志CD90、CD105和细胞表面阴性表面标志CD45、CD34的表达情况。高表达上述检测物质时，取50ml干细胞培养基，分装于培养皿中，液面厚度不高于3mm，盖上保鲜膜，放于-86℃冰箱中冷冻24h。

(5)取出冷冻后的培养皿，用细针在保鲜膜上戳出若干小孔，放置于冻干机中，冷冻干燥。

(6)冻干成粉末状分装备用。

步骤四、抗冻护手霜的制备

将步骤一得到的梅花提取物15重量份、步骤二得到的尿囊素13重量份以及步骤三的得到的干细胞分泌因子0.2重量份，加入18重量份的纯净水混合后溶解，向其中加入30重量份棕榈酸异丙酯(乳化剂)，再加入20重量份的角鲨烷，搅拌下加热到88℃，加入搅拌机中搅拌，搅拌速率为4500转/min，搅拌8min，降至室温，通过干法粉碎技术或者湿法粉碎技术进行超微化得到生物抗冻护手霜，其中，超微化采用的是动态高压微射流超微化技术，具体步骤：剪碎、破碎和均质，其中工作压力为170MPa，工作温度为25℃。

制得的实施例2的抗冻护手霜经过体系破坏性试验，对皮肤无任何损伤破坏，而且，产品各项感观指标、理化指标、卫生指标均符合相应的国家标准。

实施例3：

步骤一、梅花提取物的制备过程

(1)将梅花花瓣50份，加入1.5倍30％的乙醇水溶液浸泡3h；

(2)回流提取4h，过滤，取滤液；

(3)加入滤液量5％的1％壳聚糖水溶液，絮凝60min，过滤，取滤液；

(4)以80℃减压浓缩成1g生药/ml的浓溶液；

(5)过树脂柱(直径1.5厘米的层析柱)，上样速度为l.5ml/min，收集过柱液，即得梅花提取物。

步骤二、尿囊素的提取的制备

选取甜菜作为尿囊素的提取源，对尿囊素进行提取，具体包括：采用亚临界水提取工艺对甜菜的尿囊素活性组分进行提取得到尿囊素提取液，将所述尿囊素提取液采用真空旋转蒸发器旋转蒸干得尿囊素粘稠状液体，其中，所述亚临界醇提取工艺的提取温度为145℃，提取时间为50min，液料比为15:1；

步骤三、干细胞分泌因子冻干粉制备

(1)收集健康人体脐带，对脐带作进一步清洗，再用无菌手术剪将脐带去除外膜、静脉和动脉后切割分为细小组织。

(2)剪碎后的细小组织通过加入适当浓度的胰酶、胶原酶等消化脐带组织块0.5小时。以消化出单核细胞，收集消化出的细胞用无血清培养基进行贴壁培养，获得脐带间充质干细胞。

(3)间充质干细胞的扩增培养,用干细胞培养基通过常规干细胞培养的方式进行间充质干细胞的培养，根据细胞生长状况进行换液，补液。

(4)观察细胞生长情况，取细胞检测细胞表面阳性标志CD90、CD105和细胞表面阴性表面标志CD45、CD34的表达情况。高表达上述检测物质时，取50ml干细胞培养基，经过45μm滤膜过滤后分装于新的培养皿中，液面厚度不高于3mm，盖上保鲜膜，放于-86℃冰箱中冷冻24h。

(5)取出冷冻后的培养皿，用细针在保鲜膜上戳出若干小孔，放置于冻干机中，冷冻干燥。

(6)冻干成粉末状分装备用。

步骤四、抗冻护手霜的制备

将步骤一得到的梅花提取物20重量份、步骤二得到的尿囊素15重量份以及步骤三的得到的干细胞分泌因子0.3重量份，加入15重量份的纯净水混合后溶解，向其中加入32重量份甘油酯(乳化剂)，再加入12重量份的角鲨烷，搅拌下加热到90℃，加入搅拌机中搅拌，搅拌速率为5000转/min，搅拌10min，降至室温，通过干法粉碎技术或者湿法粉碎技术进行超微化得到生物抗冻护手霜，其中，超微化采用的是动态高压微射流超微化技术，具体步骤：剪碎、破碎和均质，其中工作压力为160MPa，工作温度为25℃。

制得实施例3的抗冻护手霜经过体系破坏性试验，对皮肤无任何损伤破坏，而且，产品各项感观指标、理化指标、卫生指标均符合相应的国家标准。

对照例1：

步骤一、尿囊素的提取的制备

选取甜菜作为尿囊素的提取源，对尿囊素进行提取，具体包括：采用亚临界水提取工艺对甜菜的尿囊素活性组分进行提取得到尿囊素提取液，将所述尿囊素提取液采用真空旋转蒸发器旋转蒸干得尿囊素粘稠状液体，其中，所述亚临界醇提取工艺的提取温度为145℃，提取时间为50min，液料比为15:1；

步骤二、干细胞分泌因子冻干粉制备

(1)收集健康人体脐带，对脐带作进一步清洗，再用无菌手术剪将脐带去除外膜、静脉和动脉后切割分为细小组织。

(2)剪碎后的细小组织通过加入适当浓度的胰酶、胶原酶等消化脐带组织块0.5小时。以消化出单核细胞，收集消化出的细胞用无血清培养基进行贴壁培养,获得脐带间充质干细胞。

(3)间充质干细胞的扩增培养,用干细胞培养基通过常规干细胞培养的方式进行间充质干细胞的培养，根据细胞生长状况进行换液，补液。

(4)观察细胞生长情况，取细胞检测细胞表面阳性标志CD90、CD105和细胞表面阴性表面标志CD45、CD34的表达情况。高表达上述检测物质时，取50ml干细胞培养基，经过45μm滤膜过滤后分装于新的培养皿中，液面厚度不高于3mm，盖上保鲜膜,放于-86℃冰箱中冷冻24h。

(5)取出冷冻后的培养皿，用细针在保鲜膜上戳出若干小孔，放置于冻干机中，冷冻干燥。

(6)冻干成粉末状分装备用。

步骤三、抗冻护手霜的制备

将步骤一得到的尿囊素12重量份以及步骤二的得到的干细胞分泌因子0.25重量份，加入25重量份的纯净水混合后溶解，向其中加入40重量份乳化剂，再加入18重量份的角鲨烷，搅拌下加热到90℃，加入搅拌机中搅拌，搅拌速率为5000转/min，搅拌10min，降至室温，通过干法粉碎技术或者湿法粉碎技术进行超微化得到对照组1护手霜，其中，超微化采用的是动态高压微射流超微化技术，具体步骤：剪碎、破碎和均质，其中工作压力为160MPa，工作温度为25℃。

制得的对照组1的抗冻护手霜经过体系破坏性试验，对皮肤无任何损伤破坏，而且，产品各项感观指标、理化指标、卫生指标均符合相应的国家标准。

对照例2：

步骤一、梅花提取物的制备过程

(1)将梅花花瓣50份，加入1.5倍30％的乙醇水溶液浸泡3h；

(2)回流提取4h，过滤，取滤液；

(3)加入滤液量5％的1％壳聚糖水溶液，絮凝60min，过滤，取滤液；

(4)以80℃减压浓缩成1g生药/ml的浓溶液；

(5)过树脂柱(直径1.5厘米的层析柱)，上样速度为l.5ml/min，收集过柱液，即得梅花提取物。

步骤二、尿囊素的提取的制备

选取甜菜作为尿囊素的提取源，对尿囊素进行提取，具体包括：采用亚临界水提取工艺对甜菜的尿囊素活性组分进行提取得到尿囊素提取液，将所述尿囊素提取液采用真空旋转蒸发器旋转蒸干得尿囊素粘稠状液体，其中，所述亚临界醇提取工艺的提取温度为145℃，提取时间为50min，液料比为15:1；

步骤三、抗冻护手霜的制备

将步骤一得到的梅花提取物13重量份、步骤二得到的尿囊素14重量份，加入19重量份的纯净水混合后溶解，向其中加入38重量份乳化剂，再加入16重量份的角鲨烷，搅拌下加热到90℃，加入搅拌机中搅拌，搅拌速率为5000转/min，搅拌10min，降至室温，通过干法粉碎技术或者湿法粉碎技术进行超微化得到对照组2护手霜，其中，超微化采用的是动态高压微射流超微化技术，具体步骤：剪碎、破碎和均质，其中工作压力为160MPa，工作温度为25℃。

制得的对照组2的抗冻护手霜经过体系破坏性试验，对皮肤无任何损伤破坏，而且，产品各项感观指标、理化指标、卫生指标均符合相应的国家标准。

具体实施例1、实施例2、实施例3、对照组1和对照组2的抗冻护手霜对应的原料组分如表1中所示：

表1

效果评价

在秋冬季节，挑选往年有手部开裂情况的使用者250名并将其分为5组，分别使用实施例1、实施例2、实施例3、对照组1和对照组2产品，每天早上和午后使用本品各1次，每次约使用3g，连续1个月。对他们的手部开裂情况做记录分析。

(1)安全性评价：本实验中，所有实验对象在使用过程中无不良反应(如皮肤刺痛、脱皮及泛红等不良反应)。

(2)效果评价：1个月后，与对照组相比，实验组(实施例1、实施例2、实施例3)使用者手部开裂现象均有显著降低。

表2

如表2所示，其中，有效率是指，若未再发生开裂、皲裂或有所改善则为有效，若发生开裂、皲裂与往年无异则为无效。根据表2数据结果可知，采用本发明实施例的制备方法制得的抗冻护手霜，相对于对照组1和对照组2分别仅仅只使用梅花提取物或者干细胞分泌因子所得到的抗冻护手霜，使用后使用者手部开裂现象均有显著降低，手部皮肤无龟裂现象得到显著改善。充分说明本发明的抗冻护手霜不仅能够有效的保护手部，对手部进行了全面护理；还能促进皮肤的成纤维细胞合成胶原蛋白的能力，修复细胞、改善细胞代谢、激活衰老细胞；同时具有清淡的芬芳香味，使人们的心情放松，使用舒适。梅花提取物与干细胞分泌因子两者的结合使用带来了更加突出的效果。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种抗冻护手霜，其特征在于，所述抗冻护手霜的原料包括以下重量份的组分：

梅花提取物10-20份、尿囊素10-15份、干细胞分泌因子0.01-0.5份、乳化剂30-40份、角鲨烷10-20份、水15-25份。

2.根据权利要求1所述的抗冻护手霜，其特征在于，所述梅花提取物的主要成分包括罗勒烯、芳樟醇、乙酸苄酯、水杨酸甲酯、侧伯烯、柠檬烯以及苯甲醇。

3.根据权利要求1所述的抗冻护手霜，其特征在于，所述梅花提取物的制备方法包括：取水分质量＜10％的梅花花瓣，加入乙醇水溶液浸泡，回流提取，过滤，得到第一滤液；在第一滤液中加入壳聚糖水溶液，絮凝，过滤，得到第二过滤液；将第二过滤液减压浓缩得到浓溶液；将浓溶液过柱，收集过柱液，得到所述梅花提取物。

4.根据权利要求1所述的抗冻护手霜，其特征在于，所述尿囊素从甜菜中提取得到。

5.根据权利要求1所述的抗冻护手霜，其特征在于，所述干细胞分泌因子为脐带间充质干细胞的分泌因子。

6.根据权利要求1所述的抗冻护手霜，其特征在于，所述乳化剂选自单硬脂酸甘油酯、棕榈酸异丙酯或甘油酯中的至少一种。

7.根据权利要求1所述的抗冻护手霜，其特征在于，所述水为去离子水或纯净水。

8.一种根据权利要求1所述的抗冻护手霜的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：将所述梅花提取物、所述尿囊素、所述干细胞分泌因子以及水按重量份混合溶解，加入所述乳化剂和所述角鲨烷，加热搅拌，降至室温后，通过超微化得到所述抗冻护手霜。

9.根据权利8所述的制备方法，其特征在于，所述加热搅拌的温度为80-90℃，加热搅拌的速率为3000-5000转/min。

10.根据权利8所述的制备方法，其特征在于，所述超微化通过动态高压微射流超微化技术实现，所述动态高压微射流超微化技术包括剪碎、破碎和均质，所述动态高压微射流超微化技术的工作压力为140-180Mpa，工作温度为20-30℃。