CN110387400A - 一种同时捕获基因组目标区域正反义双链的平行液相杂交捕获方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种同时捕获基因组目标区域正反义双链的平行液相杂交捕获方法。本发明公开的平行液相杂交捕获方法包括：利用靶向目的DNA的正义链探针组和反义链探针组捕获目的DNA，完成目的DNA的捕获；正义链探针组由n条正义链探针组成，n大于等于1；反义链探针组由m条反义链探针组成，m大于等于1；正义链探针组和反义链探针组均能覆盖目的DNA的全部序列；正义链探针组中各探针和反义链探针组中各探针均含有转录酶的识别序列和/或测序引物的识别序列。实验证明：本发明可以显著提高液相杂交目的DNA的捕获效率和检测灵敏度，在癌症突变检测、靶向用药指导、胎儿遗传缺陷及婴儿出生缺陷的早期筛查等领域有着广泛的应用价值。

Description

一种同时捕获基因组目标区域正反义双链的平行液相杂交捕 获方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及高通量测序文库制备，目标区域探针的设计、正义链和反义链探针的制备、双链液相杂交富集捕获和测序方法。

背景技术

目前，基因检测已经成为临床和科研工作的重要工具。新一代测序(NGS，NextGeneration Sequencing)技术是基因检测中最重要的工具。新一代测序技术的高灵敏度和高准确性使得人们能够大规模的鉴定遗传突变和进行新物种的测序。尽管新一代测序技术为基因组测序过程带来了更高的效率，但是全基因测序仍然面临这成本过高的问题。因此对目标区域的靶向富集测序得以快速兴起发展，靶向富集测序就是利用各种手段从全基因组文库中捕获特定感兴趣的目标区域，进而进行深度测序和分析。这样可以使得测序成本大幅降低，同时使得目标区域的测序深度大幅提高，可以实现更加精细的分析。因此靶向富集测序可以更经济高效的用于基因检测的各个领域。

目前大规模靶向富集方法主要包括多重PCR法，液相杂交法，固相芯片捕获法，分子倒置探针法等等。对于大多数癌症和儿科遗传病检测等领域的较大捕获区间而言，液相杂交法的效率最高，应用也最广泛。但是目前市面上已有商品化的液相杂交法无论是基因RNA探针还是DNA探针、长探针还是短探针，在杂交过程中都是只捕获每个文库分子的单条链进行捕获，也就是只捕获正义链或反义链，然后再Post-PCR过程中补平得到双链文库分析再进行测序。因此无论捕获效率多高，永远都有一半的分子未被捕获到，这样使得目前很多应用受到严重限制，比如液态活检(Liquid Biopsy)、临床穿刺样本、极少量FFPE样本等微量样本的情况，或者癌症早期检测的低频突变等等。因此，如何在极低起始量的情况实现高效的捕获，或者普通起始量的情况下实现超低频突变检测成为最紧迫的问题。

发明内容

本发明提供一种捕获目的DNA的方法，该方法可以同时捕获目的DNA的正义链和反义链，进而提高了目的DNA的捕获效率，可以用于低起始量或低频突变的更有效检测。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了捕获目的DNA的方法，所述方法包括：利用靶向目的DNA的正义链探针组和反义链探针组捕获所述目的DNA，完成所述目的DNA的捕获；

所述正义链探针组由n条正义链探针组成，n大于等于1；所述反义链探针组由m条反义链探针组成，m大于等于1。

所述正义链探针组的各探针均与所述目的DNA中的一条链结合；所述反义链探针组的各探针均与所述目的DNA中的另一条链结合。

n可等于m。

上述方法中，所述正义链探针组和所述反义链探针组均能覆盖所述目的DNA的全部序列。

所述正义链探针和所述反义链探针均可为RNA。

在n大于1或m大于1时，所述正义链探针组或所述反义链探针中各探针在与所述目的DNA结合时，探针间呈叠瓦片式，即在所述目的DNA上任何两个相邻的探针均满足上游探针的下游有一个或多个核苷酸与下游探针的上游重叠(相同)，在与所述目的DNA结合时，两个相邻探针的重叠部分会择其一与所述目的DNA结合。

上述方法中，所述正义链探针组中各探针和所述反义链探针组中各探针均可含有转录酶的识别序列和/或测序引物的识别序列。

上述方法中，所述转录酶可为T7RNA聚合酶。所述测序引物可为P3和/或P5。

所述T7RNA聚合酶的识别序列为序列表中序列1的第1-22位。所述P3的序列可为序列表中序列2的26-46位；所述P5的序列可为序列表中序列1的第23-41位。

上述方法中，所述正义链探针组和所述反义链探针组中的单条探针的长度可为120-220nt。

上述方法中，所述正义链探针组中各探针的长度可为181nt。所述反义链探针组中各探针的长度可为184nt。

上述方法中，所述正义链探针组和所述反义链探针组中的各探针均可标记有生物素。

上述方法中，所述目的DNA的捕获可在液相中进行。

在本发明的一个实施例中，所述目的DNA可为EGFR、ALK、KRAS和/或BRAF的外显子。

所述正义链探针和所述反义链探针的制备方法包括：

1)根据所述目的DNA制备n条原始探针，各原始探针在与所述目的DNA结合时，探针间呈叠瓦片式，即在所述目的DNA上任何两个相邻的探针均满足上游探针的下游有一个或多个核苷酸与下游探针的上游重叠(相同)，在与所述目的DNA结合时，两个相邻探针的重叠部分会择其一与所述目的DNA结合；

2)利用PCR在各原始探针的两端分别添加两条测序引物的序列，得到初始探针，所述初始探针为DNA片段；

3)通过PCR在所述初始探针的一条链的5′端添加所述转录酶的识别序列，然后进行反转录，得到所述正义链探针组；

通过PCR在所述初始探针的另一条链的5′端添加所述转录酶的识别序列，然后进行反转录，得到所述反义链探针组。

所述两条测序引物可分别为所述P5和所述P3。

所述正义链探针组和所述反义链探针组的下述任一应用，也属于本发明的保护范围：

X1)在捕获目的DNA中的应用；

X2)在制备捕获目的DNA产品中的应用；

X3)在目的DNA测序中的应用；

X4)在制备目的DNA测序产品中的应用；

X5)在遗传病检测中的应用；

X6)在制备遗传病检测产品中的应用；

X7)在癌症检测中的应用；

X8)在制备癌症检测产品中的应用；

X9)在液态活检中的应用；

X10)在制备液态活检产品中的应用；

X11)在胎儿遗传缺陷早期筛查中的应用；

X12)在制备胎儿遗传缺陷早期筛查产品中的应用；

X13)在婴儿出生缺陷早期筛查中的应用；

X14)在制备婴儿出生缺陷早期筛查产品中的应用；

X15)在检测低频或超低频突变中的应用；

X16)在制备检测低频或超低频突变产品中的应用。

所述捕获目的DNA的方法的下述任一应用，也属于本发明的保护范围：

X1)在捕获目的DNA中的应用；

X2)在目的DNA测序中的应用；

X3)在遗传病检测中的应用；

X4)在癌症检测中的应用；

X5)在液态活检中的应用；

X6)在胎儿遗传缺陷早期筛查中的应用；

X7)在婴儿出生缺陷早期筛查中的应用；

X8)在检测低频或超低频突变中的应用。

通过实验证明：本发明的捕获目的DNA的方法可以显著提高液相杂交目的DNA的捕获效率和检测灵敏度。捕获后文库复杂度的显著提高可以确保起始量情况下可以尽可能得到更多的原始变异信息，尤其适合低起始量样本和低频突变检测。本发明的捕获目的DNA的方法在癌症突变检测、靶向用药指导、胎儿遗传缺陷及婴儿出生缺陷的早期筛查等领域有着广泛的应用价值。

附图说明

图1为对实施例1的探针组进行双向放大和标记的流程图。其中，PCR1表示第一步的PCR放大，PCR2表示第二步的PCR放大，

图2为双向捕获示意图。

图3为正反义链探针平行液相杂交捕获与目前标准探针液相杂交性能比较图。其中，横坐标的单位为％；A为本发明的方法的结果，B为安捷伦标准的杂交体系的结果。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂、仪器等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。下述实施例中，如无特殊说明，序列表中各核苷酸序列的第1位均为相应DNA的5′末端核苷酸，末位均为相应DNA的3′末端核苷酸。

实施例1：液相捕获初始探针组的制备

1，根据目标基因(EGFR，ALK,KRAS，BRAF)外显子的序列，设计四组叠瓦片式原始探针，这四组探针中所有原始探针长度均为120mer，且均为单链DNA，每组探针能覆盖目标基因外显子的全部序列，在与目标基因外显子结合时，任何两个相邻的原始探针均可满足上游原始探针的下游有60bp的核苷酸与下游原始探针的上游重叠(即上游原始探针的下游有60bp的核苷酸与下游原始探针的上游序列相同)。ALK的探针的序列为序列表中序列1-99，EGFR的探针的序列为序列表中序列100-182，KRAS的探针的序列为序列表中序列183-234，BRAF的探针的序列为序列表中序列235-248。

2，在步骤1得到的各原始探针的5′端添加5′-ATGCGACGTCGCAGT-3′序列，3′端添加5′-CTGCCTGGTCCGACA-3′，每个探针的总长度均为150bp，将得到的单个探针记为初始探针，各初始探针所组成的探针组记为初始探针组，即液相捕获初始探针组。

3，合并步骤2得到的所有初始探针(基于CustomArray公司的OligoArray仪器进行探针池合成)。初始探针组中各探针的摩尔数均相等。

实施例2：对实施例1的探针组进行双向放大和标记

对实施例1的探针组进行双向放大和标记，流程如图1所示。所用Herculase试剂盒为安捷伦公司产品，货号为600677。具体方法如下：

1、将实施例1得到的初始探针组稀释到152.8μL得到初始探针溶液，进行第一步的PCR放大，放大反应体系(总体积为200μL)如下：

1.6μL P5引物(10μM)(序列为AGGGATGCGACGTCGCAGT)；

1.6μL P3引物(10μM)(序列为GTGGACTGCCTGGTCCGACA)；

2μL dNTP混合物(各dNTP的浓度均为100mM)(Herculase试剂盒试剂)；

40μL 5×Herculase II Reaction Buffer(Herculase试剂盒中试剂)；

2μL Herculase II Fusion DNA Polymerase(Herculase试剂盒中试剂)；

152.8μL初始探针溶液。

将上述体系混匀后分在四个PCR管中，每管50μL。按照如下反应条件进行反应：

将四个PCR管中得到的反应产物合并，然后向其中添加360μL的AMpure磁珠进行纯化，500μL乙醇漂洗。最后用去离子水洗脱，得到152.8μL第一步放大探针溶液。

2、将探针组进行第二步的PCR放大：

制备正义链探针的反应体系(总体积200μL)如下：

1.6μL P5-T7引物(10μM)；

1.6μL P3引物(10μM)；

2μL dNTP混合物(各dNTP的浓度均为100mM)(Herculase试剂盒试剂)；

40μL 5×Herculase II Reaction Buffer(Herculase试剂盒中试剂)；

2μL Herculase II Fusion DNA Polymerase(Herculase试剂盒中试剂)；

152.8μL 第一步放大探针溶液。

其中，P5-T7引物的序列为GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGATGCGACGTCGCAGT(序列表中序列249)。

制备反义链探针的反应体系(总体积200μL)如下：

1.6μL P5引物(10μM)；

1.6μL P3-T7引物(10μM)；

2μL dNTP混合物(各dNTP的浓度均为100mM)(Herculase试剂盒试剂)；

40μL 5×Herculase II Reaction Buffer(Herculase试剂盒中试剂)；

2μL Herculase II Fusion DNA Polymerase(Herculase试剂盒中试剂)；

152.8μL 第一步放大探针溶液。

其中，P3-T7引物的序列为GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGTGGACTGCCTGGTCCGACA(序列表中序列250)。

针对上述的两个反应体系，将每个反应体系混匀后分别分在四个PCR管中，每管50μL。按照如下反应条件进行反应：

反应结束后，得到含有正义链探针PCR反应产物的四个PCR管和含有反义链探针PCR反应产物的四个PCR管。分别合并含有正义链探针PCR反应产物的四个PCR管和含有反义链探针PCR反应产物的四个PCR管，然后按照下述步骤纯化两种探针：合并后向探针中加入360uL的AMpure磁珠(贝克曼公司，货号A63880)混匀后室温放置5min，置于磁力架上2min待溶液澄清，吸取上清液，在磁珠中加入500uL乙醇混匀后等待2min，待溶液澄清后彻底取出乙醇，室温晾干5min。最后加入25uL无核酸酶水重悬磁珠，静置2min后吸取上清转移到新管中，即得到目的探针。

3、探针的标记

按照如下方法对步骤2得到的正义链探针PCR反应产物和反义链探针PCR反应产物进行体外转录和生物素标记：

取1μg PCR反应产物，用无核酸酶水(Nuclease-free water)调整定容到28.2μL，然后向其中添加如下体积的如下试剂，得到体外转录标记体系(总体积为50μL)：

5μL 10x转录缓冲液(10x Transcription Buffer，该缓冲液由溶剂和溶质组成，溶剂为0.4M Tris-HCl(pH 8.0)，溶质及其浓度分别为60mM MgCl₂,100mM DTT(dithiothreitol),20mM亚精胺(spermidine))；

12.5μL生物素RNA Labeling Mix(生物素标记混合液，罗氏公司，货号11685597910)；

1.5μL T7RNA聚合酶(T7RNA Polymerase，20U/ml，Roche)；

0.3μL 焦磷酸酶(Pyrophosphatase，0.1U/ml,NEB)；

2.5μL SUPERase-In RNase inhibitor(20U/ml,Life Technologies，RNA酶抑制剂)。

将标记体系轻轻吹打混匀，37℃孵育16小时，得到转录标记反应产物；

向转录标记反应产物中添加1μL的TURBO DNase(2U/μL，Ambion)在37℃消化处理15min，再用Qiagen的RNeasy Mini Kit纯化，用50μL的无核酸酶水洗脱，洗脱两次，合并两次洗脱产物，得到100μL标记后的探针溶液。

使用NanoDrop的RNA-40和Qubit RNA Kit测定最终的RNA产量，使用2100RNA Kit检测探针的分布，确认得到的RNA的大小为150nt左右。

用无核酸酶水调整标记后的探针溶液中探针的浓度至200ng/μL，按照探针终浓度为1U/ul向其加入SUPERase-In RNase inhibitor(Ambion)，-80度保存。最终得到生物素标记正义链捕获探针溶液和生物素标记反义链捕获探针溶液。

实施例3：正反义链探针的平行液相杂交捕获及测序

1、取30ng血浆游离DNA标准品(Horizon公司，货号HD780)进行建库，得到基因组DNA文库。文库的构建所用试剂盒为(无锡迪赢生物科技有限公司，货号D8010A)，方法如下：

在30ng的血浆游离DNA标准品中补水定容至54.7uL，再加入9.8uL的末端修复缓冲液(蓝盖1号管)和5.5uL的末端修复酶(蓝盖2号管)，吹打混合均匀，放置于PCR仪上20度孵育30min，不适用热盖。加入120uL的AMPure磁珠(确保在室温平衡30分钟以上)混合均匀。室温放置5min，注意此时不要放在磁力架上。放置于磁力架上静置澄清后弃上清液。加入200uL的80％乙醇(当天配置)，静置1分钟后弃上清。再次加入200uL的80％乙醇(当天配置)，静置30秒后弃上清，快速离心后弃去残余乙醇，室温放置3分钟。从磁力架上取下管子，加入42uL的无核酸酶水重悬磁珠，再加入6uL加尾缓冲液(绿盖3号管)和2uL的加尾酶(绿盖4号管)，用旋涡混匀仪充分混合均匀，30度孵育30min，不加热盖。加入90uL的纯化结合液(黄盖5号管，室温平衡30分钟)充分混合均匀。从磁力架上取下管子，加入30uL的无核酸酶水重悬磁珠，在加入15uL的连接缓冲液液(橙盖6号管)和5uL的接头混合液(棕盖7号管)。用旋涡混匀仪充分混合均匀。放置于PCR仪上20℃孵育15min，不加热盖，加入70uL的纯化结合液(黄盖5号管)，纯化，最后用20uL的无核酸酶水洗脱。在新的PCR管中加入25uL的PCR混合液(粉盖8号管)，5uL的Pre-PCR引物混合液(白盖9号管)和20uL的洗脱DNA。混合均匀。按照如下PCR条件执行PCR扩增。

在PCR管中加入70uL的AMPure磁珠，最后用30uL的无核酸酶水洗脱。

取750ng的基因组DNA文库加水补足50μL，利用1.8X磁珠纯化后用下列试剂进行洗脱，首先加入6.4μL的无核酸酶水，然后加入2.5μL human Cot-1DNA(Thermo Fisher公司，货号15279011，1mg/ml)，2.5μL鲑精DNA(salmon sperm DNA，Thermo Fisher公司，货号15632-011，10mg/ml)和0.6μL的Blocker 3(无锡迪赢生物科技公司，货号D8014A)。

2、将步骤1得到的洗脱产物11-12μL放置于PCR仪上，95℃孵育5min，65℃保持至少5min，得到反应产物；

3、根据样本量在1.5mL EP管中制备如下混合液：向EP管中依次加入6.63μL的20xSSPE，0.27μL的0.5M EDTA，2.65μL的50xDenhardt’s(Thermo Fisher公司，货号750018)，3.45μL的1％SDS，旋涡剧烈震荡2s后spin(离心快甩)，如果有沉淀则放置于65℃孵育5min；然后再向该EP管中加入1μL的SUPERase-In RNase inhibitor(20U/μL)以及实施例2的正义链捕获探针溶液1μL和反义链捕获探针溶液1μL，旋涡剧烈震荡5s中后Spin，混合均匀得到混合液。

4、加16μL上述步骤3的溶液到步骤2的反应产物中，轻轻吹打10次，得到杂交体系。

5、步骤4结束后，将杂交体系密封盖子后65℃杂交16小时，得到杂交产物。

6、准备50μL的Dynabeads MyOne Streptavidin T1beads(Life Technologies)，使用Bead结合液洗脱，将得到的200μL的磁珠悬液加入步骤5的杂交产物中，在旋转混匀仪上室温孵育30min后于磁力架上吸附，弃掉上清，加入200μL的高盐洗脱液(无锡迪赢生物科技有限公司，D8013A)室温孵育15min，磁力架吸附弃掉上清，再加入65℃预热的低盐洗脱液(无锡迪赢生物科技有限公司，D8013A)，共计洗三次。最后加入31.5μL的水到磁珠中，得到纯化产物。

7、向步骤6获得的纯化后产物中依次加入10μL的5×Herculase II ReactionBuffer、1μL的Herculase II Fusion DNA Polymerase、0.5μL的dNTP混合物(各dNTP的浓度均为100mM)、1μL的12.5×SYBR Green和1μL的DYPostPCR-U。然后每个样本加入5μL的不同的DYPostPCR-I，得到不同扩增体系。

5×Herculase II Reaction Buffer、Herculase II Fusion DNA Polymerase和dNTP混合物均为Herculase试剂盒中试剂。

扩增引物序列如下：

DYPostPCR-U：

5′-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T-3′；

DYPostPCR-I：

5′-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATYYYYYYYYGTGACTGGAGTT*C-3′。YYYYYYYY代表用于区分样本的大小为8bp的Index序列，比如GCCACATA，CTGGCATA等，该序列只需满足使不同样本中的DYPostPCR-I不同即可。

DYPostPCR-U和DYPostPCR-I序列中的*表示硫代修饰。

将不同扩增体系均在如下条件下进行反应得到扩增产物：98℃2min；98℃30s，57℃30s，72℃60s，16个循环；72℃10min。

8、步骤7结束后，向得到的扩增产物中添加40μL水，然后加入90μL AMPure磁珠，纯化并用水洗脱至20μL，得到纯化产物，即捕获后文文库，捕获后文库的制备流程如图2所示。

9、将步骤8得到的纯化产物上机测序，使用Illumina公司HiSeq NGS平台进行测序，采用2x150bp双端测序模式。根据Panel(设计探针的全部区域)大小计算出测序所需数据量。

结果如图3所示。从图中可以看出：与业内公认的安捷伦标准的杂交体系(AgilentG9611A)比较，本发明的利用正义链捕获探针和反义链捕获探针同时捕获目的DNA的捕获效率、文库复杂度(特定测序深度下文库中唯一Reads的比例)和对捕获的DNA测序的大于1000x覆盖度均明显大于安捷伦标准的杂交体系。

<110> 无锡迪赢生物科技有限公司

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tgcgaccgag ctcagggccc aggctggttc atgctattct tgcttttcag aatggtatcc 60

tcgtaatgac cagctccagg ggcagtagcg gcttctaagg gcaagccctg ttgctggtag 120

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<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

cagggcagtt cttgggtggg tccatccggc ctccactggt gacaaactcc agaacttcct 60

ggttgctttt gctggggtat ggcatatatc caagagaaaa gatttcccat agcagcactc 120

<210> 16

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

ggttgctttt gctggggtat ggcatatatc caagagaaaa gatttcccat agcagcactc 60

caaaggacct gggcatggga cagaggacat ggagatggat atagacacac ccacccacat 120

<210> 17

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

atggctgcag ggatacctgg aggatgatgg ctgacttacc atgtgtctgt tttagaagtg 60

aatattcctt ccatgaaggc ctctgggggc atccacttaa ctggcagcat ggcacagcct 120

<210> 18

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

aatattcctt ccatgaaggc ctctgggggc atccacttaa ctggcagcat ggcacagcct 60

ccctttctat agtagctcgc cctgtgggga aggagaggaa aaccaaacta ggatctggag 120

<210> 19

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

tgtgttacag gaagcagctt cctgccagct gtcgacatta attaattacc tcaataaata 60

agtactgaat atttagtatg tatcaggtac tctgccatgt gctgaggaca taaataggtc 120

<210> 20

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 20

agtactgaat atttagtatg tatcaggtac tctgccatgt gctgaggaca taaataggtc 60

agtctctctc tcccaaggat attgtttagt ggaagaaatg gatatatatg cattgcaata 120

<210> 21

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 21

ggtggaagag acaggcccgg aggggtgagg cagtctttac tcacctgtag atgtctcggg 60

ccatcccgaa gtctccaatc ttggccactc ttccagggcc tggacaggtc aagaggcagt 120

<210> 22

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 22

ccatcccgaa gtctccaatc ttggccactc ttccagggcc tggacaggtc aagaggcagt 60

ttctggcagc aatgtctctg ggaagaaagg aaatgcattt cctaatttta tccctaggaa 120

<210> 23

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 23

agcgacagga tgacaggaag agcacagtca ctttgactca ccggtggatg aagtggtttt 60

cctccaaata ctgacagcca caggcaatgt cccgagccac gtgcagaagg tccagcatgg 120

<210> 24

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 24

cctccaaata ctgacagcca caggcaatgt cccgagccac gtgcagaagg tccagcatgg 60

ccagggagga gggctggctc tgtggggaga cagaagcggg ccactgacga ggagcttgtc 120

<210> 25

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 25

atccttgctc ctgtccttgg cacaacaact gcagcaaaga ctggttctca ctcaccgggc 60

gagggcgggt ctctcggagg aaggacttga ggtctccccc cgccatgagc tccagcagga 120

<210> 26

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 26

gagggcgggt ctctcggagg aaggacttga ggtctccccc cgccatgagc tccagcagga 60

tgaaccgggg cagggattgc aggctcaccc caatgcagcg aacaatgttc tggtggttga 120

<210> 27

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 27

tgaaccgggg cagggattgc aggctcaccc caatgcagcg aacaatgttc tggtggttga 60

atttgctgca gagcagagag ggatgtaacc aaaattaact gagctgagtc tgggcaaatc 120

<210> 28

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 28

gggcagcagg ggtcccgggc tgagcctaaa cccagaatct tgctggtgag caggtgggaa 60

gaaccacagc aggctccaca ggagttccat ttgcaggaga gtggctggag ctgtgaggat 120

<210> 29

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 29

gaaccacagc aggctccaca ggagttccat ttgcaggaga gtggctggag ctgtgaggat 60

gttgctcagg cacttgggtg aggaagtgtc tcagggggca ggagagtgtc tttctcagat 120

<210> 30

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 30

gttgctcagg cacttgggtg aggaagtgtc tcagggggca ggagagtgtc tttctcagat 60

actggtgcgt ggactgggtg ctagaattca tggtcgattt ctcccaggaa ggcctcaggc 120

<210> 31

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 31

actggtgcgt ggactgggtg ctagaattca tggtcgattt ctcccaggaa ggcctcaggc 60

agaaggtgaa gcaaaacaac tgcttccaag agagactggg tgagacttgc caagtgacag 120

<210> 32

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 32

tccaggttct ttgggggcag aggggagttg gggtgagggt gtctctctgt ggctttacct 60

gatgatcagg gcttccatga ggaaatccag ttcgtcctgt tcagagcaca cttcaggcag 120

<210> 33

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 33

gatgatcagg gcttccatga ggaaatccag ttcgtcctgt tcagagcaca cttcaggcag 60

cgtctgggca gagaagggga gggtggggag gaggaggagg ctgtgagctg agaactgcag 120

<210> 34

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 34

gagtccgcaa gccaagggca ggctcaagag tgagccactt cttaccttca cagccacttg 60

cagggggctt gggtcgttgg gcattccgga cacctggcct tcatacacct ccccaaaggc 120

<210> 35

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 35

cagggggctt gggtcgttgg gcattccgga cacctggcct tcatacacct ccccaaaggc 60

gccatggccc agacccctgt gcaaaggaga agacaagagg agacagagtc aaacaggcca 120

<210> 36

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 36

ctcccaggac ggcagcaggg cgctcaccga atgagggtga tgtttttccg cggcacctcc 60

ttcaggtcac tgatggagga ggtcttgcca gcaaagcagt agttggggtt gtagtcggtc 120

<210> 37

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 37

ttcaggtcac tgatggagga ggtcttgcca gcaaagcagt agttggggtt gtagtcggtc 60

atgatggtcg aggtgcggag cttgctcagc ttgtactcag ggctctgcag ctccatctgc 120

<210> 38

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 38

atgatggtcg aggtgcggag cttgctcagc ttgtactcag ggctctgcag ctccatctgc 60

atggcttgca gctcctggtg cttccggcgg tacactgcag gtgggtggtc agctgcaaca 120

<210> 39

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 39

ctgccccctt gggagtccct ggggctctgt gcactcacca atcatgatgc cggagaaagc 60

caggaccagg gcggccacga gggcagaggt caccacagag aggatcagcg agagtggcag 120

<210> 40

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 40

caggaccagg gcggccacga gggcagaggt caccacagag aggatcagcg agagtggcag 60

gtgtggctcc ggggtgggtg acactggaag acaggtccca ctggggtatt gacaaccaca 120

<210> 41

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 41

tcaggctatg ggcccctctg cctcccctgg ccctgccccc ttaccaatgc aggagacgcc 60

atcctcagcc agcaccgtcc cgtggtcaca gaagcagatg accttgtggc tttcagggtc 120

<210> 42

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 42

atcctcagcc agcaccgtcc cgtggtcaca gaagcagatg accttgtggc tttcagggtc 60

catgtgacat tcgtctacct cacagtgact gcagtttaga taatgcttaa tattcacttc 120

<210> 43

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 43

catgtgacat tcgtctacct cacagtgact gcagtttaga taatgcttaa tattcacttc 60

cccgtggcct tccatcacta gtgacaagga gggagggtca gtcttgggcc gagcctgcct 120

<210> 44

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 44

gacctaagca agtttgttct gctgcctggc agagaagcta ccttttaaag ctggggtgta 60

caggatgccc agtggactga tgaaggaaac cccatcttcc ccatccattt cggggtcatt 120

<210> 45

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 45

caggatgccc agtggactga tgaaggaaac cccatcttcc ccatccattt cggggtcatt 60

gtttgaggct gcattgccgc ctgagtagca aaccagagca gagtttaaca tggggggtgg 120

<210> 46

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 46

gtgacacctt gaacacgaat catctttacc tatatatcct ccgcctcctc cacctgagga 60

gcacccccct ccaccccctc cgaaaccccc tcttgtctcc cacccccact tcttcatggc 120

<210> 47

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 47

gcacccccct ccaccccctc cgaaaccccc tcttgtctcc cacccccact tcttcatggc 60

ctgggggcag gaatgtcctc cggtggcacc ctcctgcaaa gattttccgg cccagagcaa 120

<210> 48

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 48

ctgggggcag gaatgtcctc cggtggcacc ctcctgcaaa gattttccgg cccagagcaa 60

ggaagtgtta tcattccagc cacctccacc acctgcggga agagataggg aacctgcgtg 120

<210> 49

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 49

gaaggcctgg gagaggttct gggagagggc acgcttgcag cgctttacct gcggctccgg 60

aattgccgtt tagccctaga accgaggagt tattctccag tctctctggg tggaacgtgt 120

<210> 50

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 50

aattgccgtt tagccctaga accgaggagt tattctccag tctctctggg tggaacgtgt 60

ctgtcttggc cccgtaggcc ctgccaccac ctccggctgc aatgatcagg ggcaccggca 120

<210> 51

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 51

ctgtcttggc cccgtaggcc ctgccaccac ctccggctgc aatgatcagg ggcaccggca 60

ctccatcctt catctgacca ggggagacat tcagacattg agaaaccgag ctgtgcttcc 120

<210> 52

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 52

ctgacattgc agatgcacag gaacctggtg gaaatctggc agcacacacc ataccttaaa 60

tacgtaggtg gctccacccc ctcctcctcc gcctcctgcc cactcatgca cgcttctgtt 120

<210> 53

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 53

tacgtaggtg gctccacccc ctcctcctcc gcctcctgcc cactcatgca cgcttctgtt 60

cacacggatt tcttcttcta tcacattgtt ctctccaatg cagactttct ggattaactg 120

<210> 54

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 54

cacacggatt tcttcttcta tcacattgtt ctctccaatg cagactttct ggattaactg 60

gtttgtctgt agaaacaaaa agcacgttag gtttgtggcc aaaccagagt tctccacttt 120

<210> 55

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 55

ggcctgacag agtgcagacg agaaacccct gctctgggca cttacactgg ggcaggcgtc 60

ctctccctgc tgcccaacca ggatgtacag catgtcatcc ttctccaggt tgaagatgcc 120

<210> 56

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 56

ctctccctgc tgcccaacca ggatgtacag catgtcatcc ttctccaggt tgaagatgcc 60

cagcacagac acgccgtggg accgcatcat ggtgttcttc ccgcctttcc cgccagcagc 120

<210> 57

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 57

cagcacagac acgccgtggg accgcatcat ggtgttcttc ccgcctttcc cgccagcagc 60

tccgtagccc gagatgctgc aatgggacaa agaacgttgg ctcccgctgt ggtatgaaga 120

<210> 58

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 58

gggtggtctg cccctcccct ccccctcttc catacgcacc tgtaggtgtc ggtggctggc 60

accttccaga tctggatgcc tttcaggggg ccctcgctcc ccacctccac gctcaggttg 120

<210> 59

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 59

accttccaga tctggatgcc tttcaggggg ccctcgctcc ccacctccac gctcaggttg 60

gagttctggt aggcgttgtt gcactgtgcc tgggtggggc catggggccc gctggcccca 120

<210> 60

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 60

gagttctggt aggcgttgtt gcactgtgcc tgggtggggc catggggccc gctggcccca 60

catgtggtga acagccaatg aactgtggca caagaggaga ggcagtcact catgtggcca 120

<210> 61

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 61

ttctgccttt tgcaacaaga agttactgtg ctcacatttg tgagctgaac ccttacctgt 60

agggtcaaag atgggggtct gtcttggtga attttccccg ggtttcagct ccttgtttgg 120

<210> 62

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 62

agggtcaaag atgggggtct gtcttggtga attttccccg ggtttcagct ccttgtttgg 60

gtttctctca aacaggtttc ttgatttggg tgctgtattc tgcaggatct tgtcctctcc 120

<210> 63

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 63

gtttctctca aacaggtttc ttgatttggg tgctgtattc tgcaggatct tgtcctctcc 60

gctaactgca atagagaaga ccccacgggc tgagttaggt gagggttgat ttcagggtga 120

<210> 64

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 64

atgggggttg ggggacagag tgctggggtc agagtgaact cactggtgag gtagcagtcc 60

aggctgatgg agatattgtc aaaagccacg atggctctgg atccttgtcc ccaccatgcg 120

<210> 65

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 65

aggctgatgg agatattgtc aaaagccacg atggctctgg atccttgtcc ccaccatgcg 60

accatctgca gccagaacct gtacacatca agaggaatgt gtgtgaggag caaactgggg 120

<210> 66

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 66

ggagaagggt attgggggag atgcatagag cctacctgtc agacacatcg aggagaggca 60

acaccatcca ctgccacagg ctcaagcctt cataggcggc gacatgccag accatcctgc 120

<210> 67

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 67

acaccatcca ctgccacagg ctcaagcctt cataggcggc gacatgccag accatcctgc 60

cttgctcctt cccggttttg ttctccacta gcaccaagga cacgtttccc ctcaagactc 120

<210> 68

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 68

cttgctcctt cccggttttg ttctccacta gcaccaagga cacgtttccc ctcaagactc 60

cacgaatgag ccaggacatt cggagctgtg agggcgagaa gagtcagagg acaaggtatg 120

<210> 69

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 69

ggaggagaaa ttagagaact agagaaacaa ggagacttgc ctcacatgga gagctcttga 60

tcggtgcagg aaacgtagca ctggtcactg tagcactttc agaagcgggg acatcagtgg 120

<210> 70

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 70

tcggtgcagg aaacgtagca ctggtcactg tagcactttc agaagcgggg acatcagtgg 60

tactgagcaa tagagcatgg tctaggagag aggaaaagaa tcacaagcac gccattatca 120

<210> 71

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 71

gtctatgtgg gcatgaagat gggcaccaga gagaaggcag gagagcagta gtaccttggt 60

ggtcctggaa ccgggcatcc tttagggtcc tgacctgcca ttgaggagtg tggggtgaca 120

<210> 72

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 72

ggtcctggaa ccgggcatcc tttagggtcc tgacctgcca ttgaggagtg tggggtgaca 60

gtgtgccttg ggtccagcca cagaagccat cttcaaagtt gcagtaaaaa cccacaggca 120

<210> 73

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 73

gtgtgccttg ggtccagcca cagaagccat cttcaaagtt gcagtaaaaa cccacaggca 60

gtttccctat ggagagagca gagaggcacc atcattttca ggaccactaa aggcaaaata 120

<210> 74

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 74

gggttatgag catgggctgg gctcaggcag ggtggggcag ccccatctac tcacggcaca 60

tctggctctc atcttctccc tgggcacagt cctggtggaa gtcacaggcc tgcccaagct 120

<210> 75

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 75

tctggctctc atcttctccc tgggcacagt cctggtggaa gtcacaggcc tgcccaagct 60

ggaggactgt cccattccaa caagtgaagg agctctgcag ggccatcttg gagcctgggg 120

<210> 76

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 76

ggaggactgt cccattccaa caagtgaagg agctctgcag ggccatcttg gagcctgggg 60

atgttcctgg agagcacaca gacacacaac catggtaagt ttgcatggcc ccaggcagca 120

<210> 77

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 77

tgacacatct aacacaatag gctaccaagg agcgtgggaa agccagattc agataccttc 60

actgcagttc ttcagggcaa agaagtccac tgcagacaag ctgcggtttc cactggagat 120

<210> 78

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 78

actgcagttc ttcagggcaa agaagtccac tgcagacaag ctgcggtttc cactggagat 60

gtattccagg gccactcgaa atgggttgtc tggacgcccg attcttccct ggagcactgt 120

<210> 79

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 79

gtattccagg gccactcgaa atgggttgtc tggacgcccg attcttccct ggagcactgt 60

ccaactggtt gcattggaaa acagaggaga aaagcataga gaaacagata tgagaattag 120

<210> 80

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 80

gacatggaga agtacttacc catgcttccc tggagtgggc atcaggagga tctctcttgc 60

agcctcgttg tggggcagca gctgggcaat gtaccttcca gagggctgca ggtgcctgtg 120

<210> 81

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 81

agcctcgttg tggggcagca gctgggcaat gtaccttcca gagggctgca ggtgcctgtg 60

caccgagacg gccagtgtgc agtgctcact gctgctcctc atccacggac tcaggatggt 120

<210> 82

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 82

caccgagacg gccagtgtgc agtgctcact gctgctcctc atccacggac tcaggatggt 60

gtgcttggag tcagctgagg tgttgagaag gagaaaggag cctggaaaga gacagggaaa 120

<210> 83

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 83

tgacccaccc aggacatcac cagcagcctc tcccttacct ctgggcatct ccttagaacg 60

ctctgcccca ggcccatcca gcaagtccat ctgggaggcc tcctcggagg ggatgcggcg 120

<210> 84

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 84

ctctgcccca ggcccatcca gcaagtccat ctgggaggcc tcctcggagg ggatgcggcg 60

ccaggaccag ctctggttcc tgaggtcatg cagtggaggg gaatactcca gctcacaggg 120

<210> 85

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 85

ccaggaccag ctctggttcc tgaggtcatg cagtggaggg gaatactcca gctcacaggg 60

gaagtcaaag ctgcactcca gacctgcaat aatagccaag ggtcaatgga aaaaaccatt 120

<210> 86

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 86

acagagtcct tattatgaga tagtgacagt gtatctcaag taaatattaa acatatactt 60

accatatcgg ctgcgatgag acaggaaagg gaaggagtct ttcattatcc aggtgagatt 120

<210> 87

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 87

accatatcgg ctgcgatgag acaggaaagg gaaggagtct ttcattatcc aggtgagatt 60

ccatgtaaaa taatcaggag aaggagaagg catgtttgtt ggtgattcca aggagctatg 120

<210> 88

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 88

ccatgtaaaa taatcaggag aaggagaagg catgtttgtt ggtgattcca aggagctatg 60

acctggacat aaaaataaag aaaacactga tccatgtgct tggggtgtgt cttttagctg 120

<210> 89

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 89

cggcacactc aggcgggagc tgctcaccag tcccgaagat ctggaagaga aggcggggct 60

gggaggcgcg aattgccgcg gacagccttc cctctctgcc cacttccgac gccttcttct 120

<210> 90

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 90

gggaggcgcg aattgccgcg gacagccttc cctctctgcc cacttccgac gccttcttct 60

cgggcatcag gcggatcctc agtcgccctt cgccttggcg aatccaccaa ctgaacagct 120

<210> 91

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 91

cgggcatcag gcggatcctc agtcgccctt cgccttggcg aatccaccaa ctgaacagct 60

cgctgagatt gaactggagc agccccacag ccgcctcccc ggggggcccg acgcaaccct 120

<210> 92

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 92

cgctgagatt gaactggagc agccccacag ccgcctcccc ggggggcccg acgcaaccct 60

ccaagatcgc ctcctcgccc agctccagca ccaactgctt ggcacgccgg agcttgcgca 120

<210> 93

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 93

ccaagatcgc ctcctcgccc agctccagca ccaactgctt ggcacgccgg agcttgcgca 60

cggagccgcc cttcagcacc ctggacagcg tccgggcctc tgccggggct ggtgaaccgg 120

<210> 94

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 94

cggagccgcc cttcagcacc ctggacagcg tccgggcctc tgccggggct ggtgaaccgg 60

cggtccagga gacccccggc gccggcccca gcaacctgag cagcggggcg cagtccagag 120

<210> 95

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 95

cggtccagga gacccccggc gccggcccca gcaacctgag cagcggggcg cagtccagag 60

ctagcgagcc gcgggcctcg ggcctgccag ccttcagctc cgaggaggat ggtggcagca 120

<210> 96

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 96

ctagcgagcc gcgggcctcg ggcctgccag ccttcagctc cgaggaggat ggtggcagca 60

gtaggtcccg ggcgtagaca cggaagagcg agggcaccac gaagtcaact gccagactct 120

<210> 97

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 97

gtaggtcccg ggcgtagaca cggaagagcg agggcaccac gaagtcaact gccagactct 60

tcctctgcag gcgcgagtag ctgagtggct cccggggctg cagcggcggc cccgcagctg 120

<210> 98

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 98

tcctctgcag gcgcgagtag ctgagtggct cccggggctg cagcggcggc cccgcagctg 60

gggagcccgc gcgctggccg gtccccatcc cggagcccac agctgccgtg gaaagcagca 120

<210> 99

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 99

gggagcccgc gcgctggccg gtccccatcc cggagcccac agctgccgtg gaaagcagca 60

gcggcaggag ccacaggagc ccgatggctc ccatcccgcc ggaggaggcc gtttacactg 120

<210> 100

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 100

cccctgactc cgtccagtat tgatcgggag agccggagcg agctcttcgg ggagcagcga 60

tgcgaccctc cgggacggcc ggggcagcgc tcctggcgct gctggctgcg ctctgcccgg 120

<210> 101

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 101

tgcgaccctc cgggacggcc ggggcagcgc tcctggcgct gctggctgcg ctctgcccgg 60

cgagtcgggc tctggaggaa aagaaaggta agggcgtgtc tcgccggctc ccgcgccgcc 120

<210> 102

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 102

tgcatttctc agtatttcat gtgatatctg tctttttctt ccagtttgcc aaggcacgag 60

taacaagctc acgcagttgg gcacttttga agatcatttt ctcagcctcc agaggatgtt 120

<210> 103

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 103

taacaagctc acgcagttgg gcacttttga agatcatttt ctcagcctcc agaggatgtt 60

caataactgt gaggtggtcc ttgggaattt ggaaattacc tatgtgcaga ggaattatga 120

<210> 104

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 104

caataactgt gaggtggtcc ttgggaattt ggaaattacc tatgtgcaga ggaattatga 60

tctttccttc ttaaaggttg gtgactttga ttttcctaca caaataaaat tggagaaaat 120

<210> 105

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 105

atcacgcatt tatgttttct cttcttagac catccaggag gtggctggtt atgtcctcat 60

tgccctcaac acagtggagc gaattccttt ggaaaacctg cagatcatca gaggaaatat 120

<210> 106

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 106

tgccctcaac acagtggagc gaattccttt ggaaaacctg cagatcatca gaggaaatat 60

gtactacgaa aattcctatg ccttagcagt cttatctaac tatgatgcaa ataaaaccgg 120

<210> 107

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 107

gtactacgaa aattcctatg ccttagcagt cttatctaac tatgatgcaa ataaaaccgg 60

actgaaggag ctgcccatga gaaatttaca gggtgagagg ctgggatgcc aaggctgggg 120

<210> 108

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 108

gggaatttaa aggagctgga aagagtgctc accgcagttc cattctcccg cagaaatcct 60

gcatggcgcc gtgcggttca gcaacaaccc tgccctgtgc aacgtggaga gcatccagtg 120

<210> 109

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 109

gcatggcgcc gtgcggttca gcaacaaccc tgccctgtgc aacgtggaga gcatccagtg 60

gcgggacata gtcagcagtg actttctcag caacatgtcg atggacttcc agaaccacct 120

<210> 110

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 110

gcgggacata gtcagcagtg actttctcag caacatgtcg atggacttcc agaaccacct 60

gggcagctgt aagtgtcgca tacacactat ctctgcctcc agctcctatg ggggacagct 120

<210> 111

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 111

gtcatcagtt tctcatcatt tcactgagat atgcatctat tacttttaca tttcaggcca 60

aaagtgtgat ccaagctgtc ccaatgggag ctgctggggt gcaggagagg agaactgcca 120

<210> 112

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 112

aaagtgtgat ccaagctgtc ccaatgggag ctgctggggt gcaggagagg agaactgcca 60

gaaacgtaag tcagtgaaca gcctcagacc catgtgtgac cgcccctctc ttccttcact 120

<210> 113

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 113

cagctcacag ggaacctttg ctctttttca gtgaccaaaa tcatctgtgc ccagcagtgc 60

tccgggcgct gccgtggcaa gtcccccagt gactgctgcc acaaccagtg tgctgcaggc 120

<210> 114

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 114

tccgggcgct gccgtggcaa gtcccccagt gactgctgcc acaaccagtg tgctgcaggc 60

tgcacaggcc cccgggagag cgactgcctg gtaagatgcc cctccagcag cctccctgga 120

<210> 115

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 115

gctgagtgta cttacctcac ttgcccagcg tgtcctctct cctccatagg tctgccgcaa 60

attccgagac gaagccacgt gcaaggacac ctgcccccca ctcatgctct acaaccccac 120

<210> 116

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 116

attccgagac gaagccacgt gcaaggacac ctgcccccca ctcatgctct acaaccccac 60

cacgtaccag atggatgtga accccgaggg caaatacagc tttggtgcca cctgcgtgaa 120

<210> 117

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 117

cacgtaccag atggatgtga accccgaggg caaatacagc tttggtgcca cctgcgtgaa 60

gaagtgtccc cgtgagtcct cctctgtggg ccctctaact ggtcaggcat ccttgtcccg 120

<210> 118

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 118

tcatcacctt cctttcatgc tctcttcccc aggtaattat gtggtgacag atcacggctc 60

gtgcgtccga gcctgtgggg ccgacagcta tgagatggag gaagacggcg tccgcaagtg 120

<210> 119

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 119

gtgcgtccga gcctgtgggg ccgacagcta tgagatggag gaagacggcg tccgcaagtg 60

taagaagtgc gaagggcctt gccgcaaagg taggaagccc gccggtgtgc ggacgaggct 120

<210> 120

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 120

tagctattct taatccaaca aatgtgaacg gaatacacgt ctctcttatc tctgcagtgt 60

gtaacggaat aggtattggt gaatttaaag actcactctc cataaatgct acgaatatta 120

<210> 121

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 121

gtaacggaat aggtattggt gaatttaaag actcactctc cataaatgct acgaatatta 60

aacacttcaa aaactgcacc tccatcagtg gcgatctcca catcctgccg gtggcattta 120

<210> 122

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 122

aacacttcaa aaactgcacc tccatcagtg gcgatctcca catcctgccg gtggcattta 60

gggggtgagt cacaggttca gttgcttgta taaagaaaaa caaaatctgc ctttttaact 120

<210> 123

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 123

taactggtag agattggtga tcaataatca ccctgttgtt tgtttcagtg actccttcac 60

acatactcct cctctggatc cacaggaact ggatattctg aaaaccgtaa aggaaatcac 120

<210> 124

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 124

acatactcct cctctggatc cacaggaact ggatattctg aaaaccgtaa aggaaatcac 60

aggtttgagc tgaattatca catgaatata aatgggaaat cagtgtttta gagagagaac 120

<210> 125

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 125

aactcctacg tggtgtgtgt ctgaagtctt tcatctgcct tacagggttt ttgctgattc 60

aggcttggcc tgaaaacagg acggacctcc atgcctttga gaacctagaa atcatacgcg 120

<210> 126

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 126

aggcttggcc tgaaaacagg acggacctcc atgcctttga gaacctagaa atcatacgcg 60

gcaggaccaa gcaacagtaa gttgaccaca gccaaagcct ggtagattac atttgccttt 120

<210> 127

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 127

ttttcttctc tccaatgtag tggtcagttt tctcttgcag tcgtcagcct gaacataaca 60

tccttgggat tacgctccct caaggagata agtgatggag atgtgataat ttcaggaaac 120

<210> 128

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 128

tccttgggat tacgctccct caaggagata agtgatggag atgtgataat ttcaggaaac 60

aaaaatttgt gctatgcaaa tacaataaac tggaaaaaac tgtttgggac ctccggtcag 120

<210> 129

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 129

aaaaatttgt gctatgcaaa tacaataaac tggaaaaaac tgtttgggac ctccggtcag 60

aaaaccaaaa ttataagcaa cagaggtgaa aacagctgca gtaagtcacc gctttctgtt 120

<210> 130

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 130

cccctcgggt ccctgctctg tcactgactg ctgtgaccca ctctgtctcc gcagaggcca 60

caggccaggt ctgccatgcc ttgtgctccc ccgagggctg ctggggcccg gagcccaggg 120

<210> 131

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 131

caggccaggt ctgccatgcc ttgtgctccc ccgagggctg ctggggcccg gagcccaggg 60

actgcgtctc ttgccggaat gtcagccgag gcagggaatg cgtggacaag tgcaaccttc 120

<210> 132

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 132

actgcgtctc ttgccggaat gtcagccgag gcagggaatg cgtggacaag tgcaaccttc 60

tggaggggta ggaggttatt tctttaatcc ccttgcgttg atcaaaaata aggctccagg 120

<210> 133

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 133

aatgtctcag gggtgggctg acgggtttcc tcttcctcct ctcagtgagc caagggagtt 60

tgtggagaac tctgagtgca tacagtgcca cccagagtgc ctgcctcagg ccatgaacat 120

<210> 134

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 134

tgtggagaac tctgagtgca tacagtgcca cccagagtgc ctgcctcagg ccatgaacat 60

cacctgcaca ggacgggtaa gagccccttg ctgctatcca cgtccatttc atgggaaggg 120

<210> 135

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 135

gaaagagaca tgcatgaaca tttttctcca ccttggtgca gggaccagac aactgtatcc 60

agtgtgccca ctacattgac ggcccccact gcgtcaagac ctgcccggca ggagtcatgg 120

<210> 136

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 136

agtgtgccca ctacattgac ggcccccact gcgtcaagac ctgcccggca ggagtcatgg 60

gagaaaacaa caccctggtc tggaagtacg cagacgccgg ccatgtgtgc cacctgtgcc 120

<210> 137

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 137

gagaaaacaa caccctggtc tggaagtacg cagacgccgg ccatgtgtgc cacctgtgcc 60

atccaaactg cacctacggg tgagtggaaa gtgaaggaga acagaacatt tcctctcttg 120

<210> 138

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 138

gccaaatata gaaagagggg atttagtcaa gatttaaatt aaaaatgtta gtggtcattt 60

ttctaatgtc tttctatttt ttcccaggtc ctaataaatc ttcactgtct gactttagtc 120

<210> 139

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 139

ttctaatgtc tttctatttt ttcccaggtc ctaataaatc ttcactgtct gactttagtc 60

tcccactaaa actgcatttc ctttctacaa tttcaatttc tccctttgct tcaaataaag 120

<210> 140

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 140

ggccaggaaa tgagagtctc aaagccatgt tattctgcct ttttaaacta tcatcctgta 60

atcaaagtaa tgatggcagc gtgtcccacc agagcgggag cccagctgct caggagtcat 120

<210> 141

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 141

atcaaagtaa tgatggcagc gtgtcccacc agagcgggag cccagctgct caggagtcat 60

gcttaggatg gatcccttct cttctgccgt cagagtttca gctgggttgg ggtggatgca 120

<210> 142

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 142

gcttaggatg gatcccttct cttctgccgt cagagtttca gctgggttgg ggtggatgca 60

gccacctcca tgcctggcct tctgcatctg tgatcatcac ggcctcctcc tgccactgag 120

<210> 143

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 143

taaaaatctc caaaatatat gccaaagaag tagaatgaga aaaatgtata tttctctttc 60

acttcctaca gatgcactgg gccaggtctt gaaggctgtc caacgaatgg gtaagtgttc 120

<210> 144

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 144

acttcctaca gatgcactgg gccaggtctt gaaggctgtc caacgaatgg gtaagtgttc 60

acagctctgt gtcacatgga cctcgtcaag aatgaccaca ctgctgtggg tgaagatgct 120

<210> 145

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 145

gactggggag agcttgagaa agttggaaac gttgccttag aagcctgttt tttctccttt 60

tagaagctac atagtgtctc actttccaag atcattctac aagatgtcag tgcactgaaa 120

<210> 146

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 146

tagaagctac atagtgtctc actttccaag atcattctac aagatgtcag tgcactgaaa 60

catgcagggg cgtgttgagt gccaaggcca tggaatctgt cagcaacctc acccttcctt 120

<210> 147

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 147

ggaatctgtc agcaacctca cccttccttg ttcctccacc tcattccagg cctaagatcc 60

cgtccatcgc cactgggatg gtgggggccc tcctcttgct gctggtggtg gccctgggga 120

<210> 148

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 148

cgtccatcgc cactgggatg gtgggggccc tcctcttgct gctggtggtg gccctgggga 60

tcggcctctt catgcgaagg cgccacatcg ttcggaagcg cacgctgcgg aggctgctgc 120

<210> 149

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 149

tcggcctctt catgcgaagg cgccacatcg ttcggaagcg cacgctgcgg aggctgctgc 60

aggagaggga ggtgagtgcc agtcctgggt gggctcagga gccctcgcac cccgacagga 120

<210> 150

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 150

gctttccagc atggtgaggg ctgaggtgac ccttgtctct gtgttcttgt cccccccagc 60

ttgtggagcc tcttacaccc agtggagaag ctcccaacca agctctcttg aggatcttga 120

<210> 151

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 151

ttgtggagcc tcttacaccc agtggagaag ctcccaacca agctctcttg aggatcttga 60

aggaaactga attcaaaaag atcaaagtgc tgggctccgg tgcgttcggc acggtgtata 120

<210> 152

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 152

aggaaactga attcaaaaag atcaaagtgc tgggctccgg tgcgttcggc acggtgtata 60

aggtaaggtc cctggcacag gcctctgggc tgggccgcag ggcctctcat ggtctggtgg 120

<210> 153

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 153

cacaattgcc agttaacgtc ttccttctct ctctgtcata gggactctgg atcccagaag 60

gtgagaaagt taaaattccc gtcgctatca aggaattaag agaagcaaca tctccgaaag 120

<210> 154

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 154

gtgagaaagt taaaattccc gtcgctatca aggaattaag agaagcaaca tctccgaaag 60

ccaacaagga aatcctcgat gtgagtttct gctttgctgt gtgggggtcc atggctctga 120

<210> 155

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 155

cactgacgtg cctctccctc cctccaggaa gcctacgtga tggccagcgt ggacaacccc 60

cacgtgtgcc gcctgctggg catctgcctc acctccaccg tgcagctcat cacgcagctc 120

<210> 156

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 156

cacgtgtgcc gcctgctggg catctgcctc acctccaccg tgcagctcat cacgcagctc 60

atgcccttcg gctgcctcct ggactatgtc cgggaacaca aagacaatat tggctcccag 120

<210> 157

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 157

atgcccttcg gctgcctcct ggactatgtc cgggaacaca aagacaatat tggctcccag 60

tacctgctca actggtgtgt gcagatcgca aaggtaatca gggaagggag atacggggag 120

<210> 158

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 158

catgatgatc tgtccctcac agcagggtct tctctgtttc agggcatgaa ctacttggag 60

gaccgtcgct tggtgcaccg cgacctggca gccaggaacg tactggtgaa aacaccgcag 120

<210> 159

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 159

gaccgtcgct tggtgcaccg cgacctggca gccaggaacg tactggtgaa aacaccgcag 60

catgtcaaga tcacagattt tgggctggcc aaactgctgg gtgcggaaga gaaagaatac 120

<210> 160

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 160

catgtcaaga tcacagattt tgggctggcc aaactgctgg gtgcggaaga gaaagaatac 60

catgcagaag gaggcaaagt aaggaggtgg ctttaggtca gccagcattt tcctgacacc 120

<210> 161

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 161

aacagaggga aactaatagt tgtctcactg cctcatctct caccatccca aggtgcctat 60

caagtggatg gcattggaat caattttaca cagaatctat acccaccaga gtgatgtctg 120

<210> 162

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 162

caagtggatg gcattggaat caattttaca cagaatctat acccaccaga gtgatgtctg 60

gagctacggt gagtcataat cctgatgcta atgagtttgt actgaggcca agctggcttt 120

<210> 163

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 163

gttcattcat gatcccactg ccttcttttc ttgcttcatc ctctcagggg tgactgtttg 60

ggagttgatg acctttggat ccaagccata tgacggaatc cctgccagcg agatctcctc 120

<210> 164

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 164

ggagttgatg acctttggat ccaagccata tgacggaatc cctgccagcg agatctcctc 60

catcctggag aaaggagaac gcctccctca gccacccata tgtaccatcg atgtctacat 120

<210> 165

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 165

catcctggag aaaggagaac gcctccctca gccacccata tgtaccatcg atgtctacat 60

gatcatggtc aagtgtgagt gactggtggg tctgtccaca ctgcctagct gagccttggt 120

<210> 166

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 166

cagtgttcta attgcactgt tttttctcat tccttcccca ggctggatga tagacgcaga 60

tagtcgccca aagttccgtg agttgatcat cgaattctcc aaaatggccc gagaccccca 120

<210> 167

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 167

tagtcgccca aagttccgtg agttgatcat cgaattctcc aaaatggccc gagaccccca 60

gcgctacctt gtcattcagg tacaaattgc agtctgtgct tccattggga agagtccctc 120

<210> 168

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 168

cgggccattc taatagcctc aaaatctctg caccaggggg atgaaagaat gcatttgcca 60

agtcctacag actccaactt ctaccgtgcc ctgatggatg aagaagacat ggacgacgtg 120

<210> 169

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 169

agtcctacag actccaactt ctaccgtgcc ctgatggatg aagaagacat ggacgacgtg 60

gtggatgccg acgagtacct catcccacag cagggcttct tcagcagccc ctccacgtca 120

<210> 170

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 170

gtggatgccg acgagtacct catcccacag cagggcttct tcagcagccc ctccacgtca 60

cggactcccc tcctgagctc tctggtatga aatctctgtc tctctctctc tctcaagctg 120

<210> 171

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 171

attcaggaaa agtggatgag atgtggtaca agcattccat gggcaacttc tctgtttctt 60

tttcagagtg caaccagcaa caattccacc gtggcttgca ttgatagaaa tggggtatgt 120

<210> 172

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 172

tttcagagtg caaccagcaa caattccacc gtggcttgca ttgatagaaa tggggtatgt 60

atgaacacct tataagccag aatttacagc tctccactat ggctctattt tacatggaaa 120

<210> 173

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 173

taaccttccc tcatttcctc ctgcagctgc aaagctgtcc catcaaggaa gacagcttct 60

tgcagcgata cagctcagac cccacaggcg ccttgactga ggacagcata gacgacacct 120

<210> 174

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 174

tgcagcgata cagctcagac cccacaggcg ccttgactga ggacagcata gacgacacct 60

tcctcccagt gcctggtgag tggcttgtct ggaaacagtc ctgctcctca acctcctcga 120

<210> 175

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 175

tcctcccagt gcctggtgag tggcttgtct ggaaacagtc ctgctcctca acctcctcga 60

cccactcagc agcagccagt ctccagtgtc caagccaggt gctccctcca gcatctccag 120

<210> 176

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 176

cccactcagc agcagccagt ctccagtgtc caagccaggt gctccctcca gcatctccag 60

agggggaaac agtggcagat ttgcagacac agtgaagggc gtaaggagca gataaacaca 120

<210> 177

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 177

tcacctctga tttctttcca ctttcagaat acataaacca gtccgttccc aaaaggcccg 60

ctggctctgt gcagaatcct gtctatcaca atcagcctct gaaccccgcg cccagcagag 120

<210> 178

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 178

ctggctctgt gcagaatcct gtctatcaca atcagcctct gaaccccgcg cccagcagag 60

acccacacta ccaggacccc cacagcactg cagtgggcaa ccccgagtat ctcaacactg 120

<210> 179

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 179

acccacacta ccaggacccc cacagcactg cagtgggcaa ccccgagtat ctcaacactg 60

tccagcccac ctgtgtcaac agcacattcg acagccctgc ccactgggcc cagaaaggca 120

<210> 180

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 180

tccagcccac ctgtgtcaac agcacattcg acagccctgc ccactgggcc cagaaaggca 60

gccaccaaat tagcctggac aaccctgact accagcagga cttctttccc aaggaagcca 120

<210> 181

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 181

gccaccaaat tagcctggac aaccctgact accagcagga cttctttccc aaggaagcca 60

agccaaatgg catctttaag ggctccacag ctgaaaatgc agaataccta agggtcgcgc 120

<210> 182

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 182

agccaaatgg catctttaag ggctccacag ctgaaaatgc agaataccta agggtcgcgc 60

cacaaagcag tgaatttatt ggagcatgac cacggaggat agtatgagcc ctaaaaatcc 120

<210> 183

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 183

acagaactgt gttttgatgt taacaaattg tacgaacaca agacttaaga aataagagca 60

gatgctgcca tgatggtggc tacttgaagg ctgcaaattc tcctgtagag ggaggacaag 120

<210> 184

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 184

gatgctgcca tgatggtggc tacttgaagg ctgcaaattc tcctgtagag ggaggacaag 60

agctaatttt aaaaaagtca tctcaaataa cctagagaca cagaaaagcc tcatttgagc 120

<210> 185

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 185

ttccttttgt tgctactctc ctgaactctc tcactcattt gtttcagtgg acaggaaacg 60

caccatatcc ccctgcctgg atgggtgttt ttggagaagc acaagcatat agactaaaat 120

<210> 186

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 186

caccatatcc ccctgcctgg atgggtgttt ttggagaagc acaagcatat agactaaaat 60

cctctgtttg gaaaccagcc cgattcaagg agggttctga tgcactgcgg tgaatttttg 120

<210> 187

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 187

cctctgtttg gaaaccagcc cgattcaagg agggttctga tgcactgcgg tgaatttttg 60

gcaatgagcg ggccagcagc tcaatagagg cgagaatcta caaaaaaaaa aagaaaaaaa 120

<210> 188

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 188

tctgtctatg aatgttagtc tgttcttttg gatagcatga agcttttact tacttgggga 60

aagagtggtc tctcatctct tttctttttg aggcactctg ccattaatct cttcatggct 120

<210> 189

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 189

aagagtggtc tctcatctct tttctttttg aggcactctg ccattaatct cttcatggct 60

tttggacagt tactccgtac cttactgaga tctggagaca ggtatcctcg tcccaccata 120

<210> 190

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 190

tttggacagt tactccgtac cttactgaga tctggagaca ggtatcctcg tcccaccata 60

aaaattatct ggagagagaa aaaaaaggga aataattcaa ccttgtagat aagttgaaaa 120

<210> 191

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 191

aagaattaac tagtaaaggc cttacccttc tgttggtcac acattcctct catggagagt 60

aagcccttgc cacatcattt attatactcc catggaggac aaagcaccta aaatgccaag 120

<210> 192

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 192

aagcccttgc cacatcattt attatactcc catggaggac aaagcaccta aaatgccaag 60

aagtggatga gagaagaact ctgggatgct tttatctgta ttttggagat aatacttgtt 120

<210> 193

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 193

tggagccttg tatatagacg gtaaaataaa caccaagacg tggtaaatat ttacctggtc 60

cctgttgttg atgtttgaat aaggtaactg tccagtcatc aattcataca gaacaattcc 120

<210> 194

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 194

cctgttgttg atgtttgaat aaggtaactg tccagtcatc aattcataca gaacaattcc 60

aaatgcatat acatctgact gaaagctgta tggattttta tcttgcattc tgatgacttc 120

<210> 195

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 195

aaatgcatat acatctgact gaaagctgta tggattttta tcttgcattc tgatgacttc 60

tggtgcctgt tagaacatac aaagaaaaat attcttcact tcaattgaat aaagactgaa 120

<210> 196

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 196

taatcagtgg aaaaatagcc tcaattctta ccatccacaa aatggatcca gacaactgtt 60

caaactgatg ggacccactc catcgagatt tcactgtagc tagaccaaaa tcacctattt 120

<210> 197

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 197

caaactgatg ggacccactc catcgagatt tcactgtagc tagaccaaaa tcacctattt 60

ttactgtgag gtcttcatga agaaatatat ctgaggtgta gtaagtaaag gaaaacagta 120

<210> 198

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 198

aagacaaaat gcagaagaaa aagtcaggat gttttcaaac ttcgcagaca aatttcagga 60

aggatactat tactcttgag gtctctgtgg atgattgact tggcgtgtaa gtaactgaaa 120

<210> 199

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 199

aggatactat tactcttgag gtctctgtgg atgattgact tggcgtgtaa gtaactgaaa 60

aacaaaacat cattttaacc tgagtagggc taaaggactc tggcctcgaa atctacagaa 120

<210> 200

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 200

aatttacaag acatttaacg aatggaactt actccatgcc ctgtgcagtc tgtcgtgcaa 60

tatctataag tttgatcatc tcaaatttgg tctcaatgat atggagatgg tgatacaagc 120

<210> 201

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 201

tatctataag tttgatcatc tcaaatttgg tctcaatgat atggagatgg tgatacaagc 60

tggagccctc acaccactgg gtaacaatag ccagttgtgg ctttgtggaa tagcccatga 120

<210> 202

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 202

tggagccctc acaccactgg gtaacaatag ccagttgtgg ctttgtggaa tagcccatga 60

agagtaggat attcacatgt cgtgttttcc tgtacaaaga aatgtgacag taaacattaa 120

<210> 203

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 203

ataaaaataa cttctttctc tggaaaagag taattcacac aagctcacct gagtactcct 60

acttcatttt tgaaggcttg taactgctga ggtgtaggtg ctgtcacatt caacattttc 120

<210> 204

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 204

acttcatttt tgaaggcttg taactgctga ggtgtaggtg ctgtcacatt caacattttc 60

actgccacat cacctaaaag gcaattgtta ctccaagtgt catttcaatt tttaaaattt 120

<210> 205

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 205

ttgtcacaat gtcaccacat tacatactta ccatgccact ttcccttgta gactgttcca 60

aatgatccag atccaattct ttgtcccact gtaatctgcc catcaggaat ctcccaatca 120

<210> 206

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 206

aatgatccag atccaattct ttgtcccact gtaatctgcc catcaggaat ctcccaatca 60

tcactcgagt cccgtctacc aagtgttttc ttgataaaaa cagtaaaaaa gtcaagtcaa 120

<210> 207

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 207

tgacttctaa gaagaaagaa ttcagagaaa aaaagatatc atatactctt accattcgat 60

tcctgtcttc tgaggatgaa gatgacttcc tttctcgctg aggtcctgga gatttctgta 120

<210> 208

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 208

tcctgtcttc tgaggatgaa gatgacttcc tttctcgctg aggtcctgga gatttctgta 60

aggctttcac gttagttagt gagccaggta atgaggcagg gggggtagca gacaaacctg 120

<210> 209

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 209

aggctttcac gttagttagt gagccaggta atgaggcagg gggggtagca gacaaacctg 60

tggttgatcc taaattagtg aaaagaaaaa tgtatacatt aaggaggagc aagtatgtta 120

<210> 210

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 210

tataaaggaa ataagcagca aagcaattgc agtttccttg agtttttaaa aaaacctgaa 60

atcactactt acctccatca ccacgaaatc cttggtctct aatcaagtcc tacaaataaa 120

<210> 211

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 211

atcactactt acctccatca ccacgaaatc cttggtctct aatcaagtcc tacaaataaa 60

tagtaatgta tatttattcc aagcaagcat ataatcagag agtagcgata acactgaatt 120

<210> 212

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 212

acttggtttt tttttagttc tagcaatgct ggatacttac atcaatattg acaggttcta 60

ttgtgtttat atgcacattg ggagctgatg aggatcggtc tcgttgccca aattgatttc 120

<210> 213

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 213

ttgtgtttat atgcacattg ggagctgatg aggatcggtc tcgttgccca aattgatttc 60

gatgatcttc atctgctggt cggaagggct gtggaattgg aatggatttt gaaggagacg 120

<210> 214

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 214

gatgatcttc atctgctggt cggaagggct gtggaattgg aatggatttt gaaggagacg 60

gactggtgag aatttggggc ctggaaaaat gaagtcattg gaagataaga ttcagagtaa 120

<210> 215

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 215

tgtcgcccaa gagcagaagt caaaccatac ccaatagagt ccgaggcggg tgcggaaggg 60

gatgatccag atgttagggc agtctctgct aaggacgcct cttcctgtgg tattgggtgg 120

<210> 216

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 216

gatgatccag atgttagggc agtctctgct aaggacgcct cttcctgtgg tattgggtgg 60

tgttcaaaga acttggagac aaacagcaaa ctgtgaggca aaacaaaaca aacctaactt 120

<210> 217

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 217

aagtgtaaaa tggtaggtag aaaagagata tttttggatt acttactcaa gttggtcata 60

attaacacac atcagtggaa cttctgtact acaacgctgg tgaaatttat aaccacatgt 120

<210> 218

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 218

attaacacac atcagtggaa cttctgtact acaacgctgg tgaaatttat aaccacatgt 60

ttgacagcgg aaaccctgga aaagcagctt tcgacaaaag tcacaaaatg ctaaggtgaa 120

<210> 219

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 219

ttgacagcgg aaaccctgga aaagcagctt tcgacaaaag tcacaaaatg ctaaggtgaa 60

aaacgttttt cgtacctgca aagtaaaaaa tcacagagat ttcaaaaact cacaagaaaa 120

<210> 220

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 220

catttttgac atttcaaaaa aaaatgtaaa gatacataca aagttgtgtg ttgtaagtgg 60

aacattctcc aacacttcca catgcaattc ttctccagta agccaggaaa tatcagtgtc 120

<210> 221

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 221

aacattctcc aacacttcca catgcaattc ttctccagta agccaggaaa tatcagtgtc 60

ccaaccaatt ggtttcttct ctctgaaaaa tgtagacaca agcctttctt ggttattaca 120

<210> 222

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 222

tccatcgtta gaaatttaaa tggcaataaa ttaattttaa gtttacccca aataaatgta 60

tcactcttgg acaaacagca gggtaaagag atgtactctt ttcttcaagt cagctccaga 120

<210> 223

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 223

tcactcttgg acaaacagca gggtaaagag atgtactctt ttcttcaagt cagctccaga 60

aaagacctac aacagcagaa aatggattgt tcctggggtc caaaaaaaaa aaaaaaaaaa 120

<210> 224

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 224

ctttttaaac aaaatttcac gtcacataca aaccataccc atcctgaatt ctgtaaacag 60

cacagcactc tgggattaga cctctcatca tcagtgcttt ctttagactg tctcggactg 120

<210> 225

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 225

cacagcactc tgggattaga cctctcatca tcagtgcttt ctttagactg tctcggactg 60

taactccaca ccttgcaggt acctatggta tcataaatat attgataaga ggtaaaggga 120

<210> 226

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 226

atattaaaac tgactcacca ctgtcctctg tttgttgggc aggaagactc taacgatagg 60

tttttgtggt gacttggggt tgctccgtgc cacatctgtg ggattttgaa aaactgaaag 120

<210> 227

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 227

tttttgtggt gacttggggt tgctccgtgc cacatctgtg ggattttgaa aaactgaaag 60

agatgaaggt agcactgaaa ggctagaaga ggaagaagat gtaacggtat ccattgatgc 120

<210> 228

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 228

agatgaaggt agcactgaaa ggctagaaga ggaagaagat gtaacggtat ccattgatgc 60

agagctagaa acagaaaaat cagttccgtt ccccagagat tccaataact gttgttctct 120

<210> 229

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 229

agagctagaa acagaaaaat cagttccgtt ccccagagat tccaataact gttgttctct 60

ttgttggagt gcatctagct tgctggtgta ttcttcatag gcctataaaa taaagcagac 120

<210> 230

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 230

tcttttcaaa attactagat atgatactca aaagcttacc tccagatata ttgatggtgg 60

attatgctcc ccaccaaatt tgtccaatag ggcctctata tgttcctgtg tcaacttaat 120

<210> 231

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 231

attatgctcc ccaccaaatt tgtccaatag ggcctctata tgttcctgtg tcaacttaat 60

catttgtttg atattccaca cctaaaaaat atttcaaaag aatttaaata aaaatcactt 120

<210> 232

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 232

cagccgccga gcccggagtc gggagggcgg cagggtggcg ccagcactca cctcctccgg 60

aatggcaggg tccgcagccg aagaggccgc ggcgccggcg ccggcgccgg cctcgggctc 120

<210> 233

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 233

aatggcaggg tccgcagccg aagaggccgc ggcgccggcg ccggcgccgg cctcgggctc 60

catgtccccg ttgaacagag cctggcccgg ctccgcgccg ccaccaccgc caccgctcag 120

<210> 234

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 234

catgtccccg ttgaacagag cctggcccgg ctccgcgccg ccaccaccgc caccgctcag 60

cgccgccatc ttataaccga gagccggggc ccgagcggcc gctgtcgggc ggggaggggg 120

<210> 235

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 235

agtatgcctt aagaaaaaag tacaaattgt atttacataa ttacacactt tgtctttgac 60

ttctttttct tctttttacc atctttgctc atcttttctt tatgttttcg aatttctcga 120

<210> 236

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 236

ttctttttct tctttttacc atctttgctc atcttttctt tatgttttcg aatttctcga 60

actaatgtat agaaggcatc atcaacaccc tgaaatacat aaaaagtatt aaaatgtgaa 120

<210> 237

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 237

aattaatgtg ctgaacttaa acttaccaga ttacattata atgcattttt taattttcac 60

acagccagga gtcttttctt ctttgctgat ttttttcaat ctgtattgtc ggatctccct 120

<210> 238

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 238

acagccagga gtcttttctt ctttgctgat ttttttcaat ctgtattgtc ggatctccct 60

caccaatgta taaaaagcat cctccactct ctgcattgta aaacacaact tctttaaagt 120

<210> 239

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 239

ttgcagaaaa cagatctgta tttatttcag tgttacttac ctgtcttgtc tttgctgatg 60

tttcaataaa aggaattcca taacttcttg ctaagtcctg agcctgtttt gtgtctactg 120

<210> 240

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 240

tttcaataaa aggaattcca taacttcttg ctaagtcctg agcctgtttt gtgtctactg 60

ttctagaagg caaatcacat ttatttccta ctaggaccat aggtacatct tcagagtcct 120

<210> 241

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 241

ttctagaagg caaatcacat ttatttccta ctaggaccat aggtacatct tcagagtcct 60

taactctttt aatttgttct ctgggaaaga aaaaaaagtt atagcacagt cattagtaac 120

<210> 242

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 242

tgtcagctta ttatattcaa tttaaaccca cctataatgg tgaatatctt caaatgattt 60

agtattattt atggcaaata cacaaagaaa gccctcccca gtcctcatgt actggtccct 120

<210> 243

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 243

agtattattt atggcaaata cacaaagaaa gccctcccca gtcctcatgt actggtccct 60

cattgcactg tactcctctt gacctgctgt gtcgagaata tccaagagac aggtttctcc 120

<210> 244

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 244

cattgcactg tactcctctt gacctgctgt gtcgagaata tccaagagac aggtttctcc 60

atcaattact acttgcttcc tgtaggaatc ctgagaaggg agaaacacag tctggattat 120

<210> 245

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 245

aaatgtcaat aatgtattac tcggggattt cctcttgaaa ttgtatgttt tcttaatgta 60

ttaagtattg taaggacttt ttacatactg cttaataaca cctgtaggaa aagatgagaa 120

<210> 246

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 246

ttaagtattg taaggacttt ttacatactg cttaataaca cctgtaggaa aagatgagaa 60

acttttactc aattaatgct caagtacttt acgttactct tccgaaaggt tatttaaatt 120

<210> 247

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 247

tgcaccagta atatgcatat taaaacaaga tttacctcta ttgttggatc atattcgtcc 60

acaaaatgat tctgaattag ctgtatcgtc aaggcactct tgcctacgcc accagctcca 120

<210> 248

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 248

acaaaatgat tctgaattag ctgtatcgtc aaggcactct tgcctacgcc accagctcca 60

actaccacaa gtttatattc agtcattttc agcaggcctt ataataaaaa taatgaaaat 120

<210> 249

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 249

ggattctaat acgactcact atagggatgc gacgtcgcag t 41

<210> 250

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 250

ggattctaat acgactcact atagggtgga ctgcctggtc cgaca 45

Claims (10)

1.捕获目的DNA的方法，包括：利用靶向目的DNA的正义链探针组和反义链探针组捕获所述目的DNA，完成所述目的DNA的捕获；

所述正义链探针组由n条正义链探针组成，n大于等于1；所述反义链探针组由m条反义链探针组成，m大于等于1。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述正义链探针组和所述反义链探针组均能覆盖所述目的DNA的全部序列。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述正义链探针组中各探针和所述反义链探针组中各探针还均含有转录酶的识别序列和/或测序引物的识别序列。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述转录酶为T7RNA聚合酶；所述测序引物为P3和/或P5。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述正义链探针组和所述反义链探针组中的单条探针的长度为120-220nt。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述正义链探针组中各探针的长度为181nt；和/或，所述反义链探针组中各探针的长度为184nt。

7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：所述正义链探针组和所述反义链探针组中的各探针均标记有生物素。

8.根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：所述目的DNA的捕获在液相中进行。

9.权利要求1-7中任一所述正义链探针组和所述反义链探针组的下述任一应用：

X1)在捕获目的DNA中的应用；

X2)在制备捕获目的DNA产品中的应用；

X3)在目的DNA测序中的应用；

X4)在制备目的DNA测序产品中的应用；

X5)在遗传病检测中的应用；

X6)在制备遗传病检测产品中的应用；

X7)在癌症检测中的应用；

X8)在制备癌症检测产品中的应用；

X9)在液态活检中的应用；

X10)在制备液态活检产品中的应用；

X11)在胎儿遗传缺陷早期筛查中的应用；

X12)在制备胎儿遗传缺陷早期筛查产品中的应用；

X13)在婴儿出生缺陷早期筛查中的应用；

X14)在制备婴儿出生缺陷早期筛查产品中的应用；

X15)在检测低频或超低频突变中的应用；

X16)在制备检测低频或超低频突变产品中的应用。

10.权利要求1-8中任一所述方法的下述任一应用：

X1)在捕获目的DNA中的应用；

X2)在目的DNA测序中的应用；

X3)在遗传病检测中的应用；

X4)在癌症检测中的应用；

X5)在液态活检中的应用；

X6)在胎儿遗传缺陷早期筛查中的应用；

X7)在婴儿出生缺陷早期筛查中的应用；

X8)在检测低频或超低频突变中的应用。