CN110325543A - 作为sting(干扰素基因刺激因子)激动剂的环状二核苷酸 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了一种具有STING激动活性的化合物，可以预期所述化合物可用作预防或治疗STING相关疾病的剂。本公开涉及一种由式(I)表示的化合物：

Description

作为STING(干扰素基因刺激因子)激动剂的环状二核苷酸
技术领域
本公开提供了一种具有STING(干扰素基因刺激因子)激动活性的环状二核苷酸，所述化合物可能可用作预防或治疗癌症和其他疾病的药剂。
背景技术
STING是与TLR(toll样受体)不同的受体识别核酸。所识别的天然配体的实例包括细菌/原生动物来源的环状二核苷酸(CDN)、由上游cGAS(环状GMP-AMP合成酶)合成的2',3'-cGAMP等等(Trends in Immunology 35:88-93(2014))。据报告，作为天然配体之一的2',3'-cGAMP被作为焦磷酸酶/磷酸二酯酶之一的ENPP1(外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶)分解，而其他CDN被磷酸二酯酶分解(Nat Chem Biol 10:1043-1048(2014)；Cell Res 25:539-550(2015)；Biochemistry55:837-849(2016))。STING被这些天然配体激活，诱导下游TBK1(TANK结合激酶1)磷酸化，并且激活更下游的IRF3(干扰素调控因子3)信号和NFkB信号，从而诱导I型干扰素(IFN)反应(Trends in Immunology 35:88-93(2014))。使用敲除小鼠进行的试验表明STING信号对癌症的重要性。据报告，相较于野生型小鼠，在使用STING及其下游信号IRF3敲除小鼠的肿瘤同种异体移植小鼠中，癌细胞通过抑制癌症免疫系统而生长(Immunity 41:830-842(2014))。另外，还报告了肿瘤同种异体移植小鼠中的癌细胞生长受放射疗法抑制，但在STING和IFNAR1(干扰素(α和β)受体1，由下游信号产生的I型IFN受体)敲除小鼠中，放射疗法的效果被减弱(Immunity 41:843-852(2014))。出于那些原因，认为STING对癌细胞生长抑制和由STING激活而诱导的免疫信号激活起作用，从而产生抗癌活性。因此，STING激动剂可以用作靶向癌症免疫力的抗癌剂。另外，认为STING激活对疫苗的免疫效果起作用，这是因为该激活将激活自然免疫力(Ther Adv Vaccines 1:131-143(2013))。因此，STING激动剂可以用作多种疫苗的佐剂。
以下环状二核苷酸是已知的。
专利文献1(WO 2014/093936)公开了一种由下式表示的化合物：
其中各个符号如专利文献1中所定义，根据专利文献1，所述化合物是STING依赖性TBK1激活剂，并且可用于治疗癌症(特别是实性癌)等，而且还可用作佐剂。
专利文献2(WO 2014/189805)公开了一种由下式表示的化合物：
其中各个符号如专利文献2中所定义，根据专利文献2，所述化合物是经由STING的免疫刺激剂，并且可用于治疗癌症等。
专利文献3(WO 2015/077354)和非专利文献8(Cell reports 11,1018-1030(2015))公开了一种由下式表示的化合物：
其中各个符号如专利文献3中所定义，根据专利文献3，所述化合物是STING激动剂，并且可用于治疗癌症等。
专利文献4(WO 2013/185052)和非专利文献9(Sci.Transl.Med.283,283ra52(2015))公开了c-di-AMP、c-di-GMP、c-di-IMP、c-AMP-GMP、c-AMP-IMP和c-GMP-IMP，根据专利文献4，它们是STING依赖性TBK1激活剂。
专利文献5(WO 2014/189806)公开了一种由下式表示的化合物：
其中各个符号如专利文献5中所定义，
根据专利文献5，所述化合物抑制STING依赖性信号转导，并且可用于治疗自身免疫疾病等。
专利文献6(WO 2015/185565)公开了一种由下式表示的化合物：
其中各个符号如专利文献6中所定义，根据专利文献6，所述化合物是STING调节剂，并且可用于治疗炎症、过敏性自身免疫疾病、癌症等，而且还可用作疫苗佐剂。
专利文献7(WO 2014/179760)公开了一种由下式表示的化合物：
其中各个符号如专利文献7中所定义，根据专利文献7，所述化合物可以增加I型干扰素产生，并且可用于治疗癌症、自身免疫疾病、过敏性反应等，而且还可用作佐剂。
专利文献8(WO 2014/179335)和非专利文献10(Mol.Cell 154,748-762(2013))公开了一种由下式表示的化合物：
其中各个符号如专利文献8中所定义，根据专利文献8，所述化合物可以增加I型干扰素产生，并且可用于治疗以炎症为特征的疾病、自身免疫疾病、舍格伦氏综合征(syndrome)等。
专利文献9(WO 2015/017652)公开了一种由下式表示的化合物：
根据专利文献9，所述化合物是STING调节剂，并且可用于治疗癌症、自身免疫疾病等，而且还可用作疫苗。
专利文献10(WO 2016/096577)公开了一种由下式表示的化合物：
根据专利文献10，所述化合物是STING激动剂，并且可用于治疗癌症(特别是实性胰腺癌)等。
专利文献11(WO 2011/003025)公开了一种由下式表示的化合物：
根据专利文献11，所述化合物是STING激动剂。
专利文献12(WO 2016/096174)公开了一种由下式表示的化合物：
根据专利文献12，所述化合物是STING激动剂。
专利文献13(WO 2016/120305)公开了一种由下式表示的化合物：
根据专利文献13，所述化合物是STING激动剂。
专利文献14(WO 2016/145102)公开了一种由下式表示的化合物：
其中各个符号如专利文献14中所定义，根据专利文献14，所述化合物是STING激动剂。
专利文献15(WO 2017/027646)公开了一种由下式表示的化合物：
其中各个符号如专利文献15中所定义，根据专利文献15，所述化合物是STING激动剂。
专利文献16(WO 2017/075477)公开了一种由下式表示的化合物：
其中各个符号如专利文献16中所定义，根据专利文献16，所述化合物是STING激动剂。
专利文献17(WO 2017/027645)公开了一种由下式表示的化合物：
其中各个符号如专利文献17中所定义，根据专利文献17，所述化合物是STING激动剂。
发明内容
在一个方面，本公开提供了一种化合物，所述化合物由式(I)表示：
其中：
由式(A-1)表示的部分结构：
是由式(IIA)表示的部分结构：
或
由式(IIB)表示的部分结构：
R1和R2各自独立地为羟基或卤素原子；
B1是由
表示的基团；
R13、R14、R15、R16和R17各自独立地为氢原子或取代基；
Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16各自独立地为N或CR1a；
Z11、Z12、Z13、Z14、Z15和Z16各自独立地为N或C；
R1a是氢原子或取代基；
B2是由
表示的基团；
R23、R24、R25、R26和R27各自独立地为氢原子或取代基；
Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26各自独立地为N或CR2a；
Z21、Z22、Z23、Z24、Z25和Z26各自独立地为N或C；
R2a是氢原子或取代基；
限制条件是
i)Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16中至少一个是CR1a，
ii)Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26中至少一个是CR2a，或者
iii)Z13、Z16、Z23和Z26中至少一个是C；X1和X2各自独立地为氧原子或硫原子；以及
Q1、Q2、Q3和Q4各自独立地为氧原子或硫原子，
或其盐(下文中有时称为化合物(I))。
在另一个方面，本公开提供了一种化合物，所述化合物由式(I)表示，其中B1和B2中至少一个是
R18是氢或C1-6烷基；以及
R19是卤素原子，或其盐。
在另一个方面，X1和X2是O。
在另一个方面，本公开提供了一种化合物，所述化合物由式(I)表示，其中
B1是
以及
B2是
或其盐。在另一个方面，X1和X2是O。
在另一个方面，本公开提供了7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2,10,16-三羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮或其盐。
在另一个方面，本公开提供了7-((2R,5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-10,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮或其盐。
在另一个方面，本公开提供了2-氨基-9-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aS,16R)-14-(4-氨基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-2,10,15,16-四羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮或其盐。
在另一个方面，本公开提供了7-((2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-16-羟基-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮或其盐。
在另一个方面，本公开提供了一种化合物，所述化合物具有式(XIV)：
(CD-L)n-A(XIV)，
或其药学上可接受的盐，其中：
CD是由式(XX)至(XXIX)中的任一个表示的基团，参见下文；
L是接头；
A是抗体、抗体片段或抗原结合片段；
n是1至10。
在另一个方面，本公开提供了一种化合物，所述化合物具有式(XIV)，或其药学上可接受的盐，其中A是抗体。
在另一个方面，本公开提供了一种化合物，所述化合物具有式(XIV)，或其药学上可接受的盐，其中A是抗原结合片段。
在另一个方面，本公开提供了包含式(I)化合物或盐的药物。在另一个实施方案中，所述药物是STING激动剂。在另一个实施方案中，所述药物是用于预防或治疗癌症的剂。
在另一个方面，本公开提供了一种激活哺乳动物中的STING的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用有效量的具有式(I)的化合物或其盐。
在另一个方面，本公开提供了一种预防或治疗哺乳动物的癌症的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用有效量的具有式(I)的化合物或其盐。
在另一个方面，本公开提供了一种具有式(I)的化合物或其盐，其用于预防或治疗癌症。
在另一个方面，本公开提供了具有式(I)的化合物或其盐的用途，其用于制造用以预防或治疗癌症的剂。
附图说明
图1是显示来自ADC1的有效负载1释放的线图。
图2是显示来自ADC2的有效负载1释放的线图。
图3是显示来自ADC3的有效负载2释放的线图。
图4是显示表达ADC1的表面受体靶标的HEK293细胞在用ADC1处理时表现出STING途径标记物磷酸化IRF3(pIRF3)存在预期增加的条形图。
图5是显示表达ADC2的表面受体靶标的HEK293细胞在用ADC2处理时表现出STING途径标记物磷酸化IRF3(pIRF3)存在预期增加的条形图。
图6是显示表达ADC3的表面受体靶标的HEK293细胞在用ADC3处理时表现出STING途径标记物磷酸化IRF3(pIRF3)存在预期增加的条形图。
图7是显示化合物实施方案14的下游信号传导途径激活(TBK1和IRF3)的蛋白质印迹分析的条形图。
图8是显示化合物实施方案3a在结肠癌CT-26同基因小鼠模型中的抗肿瘤活性的线图。
图9是显示化合物实施方案14在结肠癌CT-26同基因小鼠模型中的抗肿瘤活性的线图。
图10是显示化合物实施方案3a在结肠癌B16F10同基因小鼠模型中的抗肿瘤活性的线图。
图11是显示化合物实施方案14在结肠癌B16F10同基因小鼠模型中的抗肿瘤活性的线图。
具体实施方式
以下详细说明本公开。
以下详细描述本说明书中使用的各个取代基的定义。除非另外规定，否则各个取代基具有以下定义。
在本说明书中，“卤素原子”的实例包括氟、氯、溴和碘。
在本说明书中，“C1-6烷基”的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、1-乙基丙基、己基、异己基、1,1-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基和2-乙基丁基。
在本说明书中，“任选地卤化的C1-6烷基”的实例包括任选地具有1至7个、优选1至5个卤素原子的C1-6烷基。其具体实例包括甲基、氯甲基、二氟甲基、三氯甲基、三氟甲基、乙基、2-溴甲基、2,2,2-三氟乙基、四氟乙基、五氟乙基、丙基、2,2-二氟丙基、3,3,3-三氟丙基、异丙基、丁基、4,4,4-三氟丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、5,5,5-三氟戊基、己基和6,6,6-三氟己基。
在本说明书中，“C2-6烯基”的实例包括乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、3-甲基-2-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、4-甲基-3-戊烯基、1-己烯基、3-己烯基和5-己烯基。
在本说明书中，“C2-6炔基”的实例包括乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基、5-己炔基和4-甲基-2-戊炔基。
在本说明书中，“C3-10环烷基”的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、双环[2.2.1]庚基、双环[2.2.2]辛基、双环[3.2.1]辛基和金刚烷基。
在本说明书中，“任选地卤化的C3-10环烷基”的实例包括任选地具有1至7个、优选1至5个卤素原子的C3-10环烷基。其具体实例包括环丙基、2,2-二氟环丙基、2,3-二氟环丙基、环丁基、二氟环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
在本说明书中，“C3-10环烯基”的实例包括环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基和环辛烯基。
在本说明书中，“C6-14芳基”的实例包括苯基、1-萘基、2-萘基、1-蒽基、2-蒽基和9-蒽基。
在本说明书中，“C7-16芳烷基”的实例包括苯甲基、苯乙基、萘甲基和苯丙基。
在本说明书中，“C1-6烷氧基”的实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基和己氧基。
在本说明书中，“任选地卤化的C1-6烷氧基”的实例包括任选地具有1至7个、优选1至5个卤素原子的C1-6烷氧基。其具体实例包括甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、乙氧基、2,2,2-三氟乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、4,4,4-三氟丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、戊氧基和己氧基。
在本说明书中，“C3-10环烷氧基”的实例包括环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基、环庚氧基和环辛氧基。
在本说明书中，“C1-6烷硫基”的实例包括甲硫基、乙硫基、丙硫基、异丙硫基、丁硫基、仲丁硫基、叔丁硫基、戊硫基和己硫基。
在本说明书中，“任选地卤化的C1-6烷硫基”的实例包括任选地具有1至7个、优选1至5个卤素原子的C1-6烷硫基。其具体实例包括甲硫基、二氟甲硫基、三氟甲硫基、乙硫基、丙硫基、异丙硫基、丁硫基、4,4,4-三氟丁硫基、戊硫基和己硫基。
在本说明书中，“C1-6烷基-羰基”的实例包括乙酰基、丙酰基、丁酰基、2-甲基丙酰基、戊酰基、3-甲基丁酰基、2-甲基丁酰基、2,2-二甲基丙酰基、己酰基和庚酰基。
在本说明书中，“任选地卤化的C1-6烷基-羰基”的实例包括任选地具有1至7个、优选1至5个卤素原子的C1-6烷基-羰基。其具体实例包括乙酰基、氯乙酰基、三氟乙酰基、三氯乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基和己酰基。
在本说明书中，“C1-6烷氧基-羰基”的实例包括甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、异丙氧基羰基、丁氧基羰基、异丁氧基羰基、仲丁氧基羰基、叔丁氧基羰基、戊氧基羰基和己氧基羰基。
在本说明书中，“C6-14芳基-羰基”的实例包括苯甲酰基、1-萘酰基和2-萘酰基。
在本说明书中，“C7-16芳烷基-羰基”的实例包括苯乙酰基和苯丙酰基。
在本说明书中，“5元至14元芳香杂环基羰基”的实例包括烟碱酰基、异烟碱酰基、噻吩甲酰基和糠酰基。
在本说明书中，“3元至14元非芳香杂环基羰基”的实例包括吗啉基羰基、哌啶基羰基和吡咯烷基羰基。
在本说明书中，“单或二C1-6烷基-氨基甲酰基”包括甲基氨基甲酰基、乙基氨基甲酰基、二甲基氨基甲酰基、二乙基氨基甲酰基和N-乙基-N-甲基氨基甲酰基。
在本说明书中，“单或二C7-16芳烷基-氨基甲酰基”的实例包括苯甲基氨基甲酰基和苯乙基氨基甲酰基。
在本说明书中，“C1-6烷基磺酰基”的实例包括甲基磺酰基、乙基磺酰基、丙基磺酰基、异丙基磺酰基、丁基磺酰基、仲丁基磺酰基和叔丁基磺酰基。
在本说明书中，“任选地卤化的C1-6烷基磺酰基”的实例包括任选地具有1至7个、优选1至5个卤素原子的C1-6烷基磺酰基。其具体实例包括甲基磺酰基、二氟甲基磺酰基、三氟甲基磺酰基、乙基磺酰基、丙基磺酰基、异丙基磺酰基、丁基磺酰基、4,4,4-三氟丁基磺酰基、戊基磺酰基和己基磺酰基。
在本说明书中，“C6-14芳基磺酰基”的实例包括苯基磺酰基、1-萘基磺酰基和2-萘基磺酰基。
在本说明书中，“取代基”的实例包括卤素原子、氰基、硝基、任选地取代的烃基、任选地取代的杂环基、酰基、任选地取代的氨基、任选地取代的氨基甲酰基、任选地取代的硫代氨基甲酰基、任选地取代的氨基磺酰基、任选地取代的羟基、任选地取代的硫烷基(SH)和任选地取代的硅烷基。
在本说明书中，“烃基”(包括“任选地取代的烃基”的“烃基”)的实例包括C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10环烷基、C3-10环烯基、C6-14芳基和C7-16芳烷基。
在本说明书中，“任选地取代的烃基”的实例包括任选地具有选自以下取代基组群A的取代基的烃基。
“取代基组群A”：
(1)卤素原子；
(2)硝基；
(3)氰基；
(4)氧代；
(5)羟基；
(6)任选地卤化的C1-6烷氧基；
(7)C6-14芳氧基(例如，苯氧基、萘氧基)；
(8)C7-16芳烷氧基(例如，苯甲氧基)；
(9)5元至14元芳香杂环氧基(例如，吡啶氧基)；
(10)3元至14元非芳香杂环氧基(例如，吗啉氧基、哌啶氧基)；
(11)C1-6烷基-羰氧基(例如，乙酰氧基、丙酰氧基)；
(12)C6-14芳基-羰氧基(例如，苯甲酰氧基、1-萘甲酰氧基、2-萘甲酰氧基)；
(13)C1-6烷氧基-羰氧基(例如，甲氧基羰氧基、乙氧基羰氧基、丙氧基羰氧基、丁氧基羰氧基)；
(14)单或二C1-6烷基-氨基甲酰氧基(例如，甲基氨基甲酰氧基、乙基氨基甲酰氧基、二甲基氨基甲酰氧基、二乙基氨基甲酰氧基)；
(15)C6-14芳基-氨基甲酰氧基(例如，苯基氨基甲酰氧基、萘基氨基甲酰氧基)；
(16)5元至14元芳香杂环基羰氧基(例如，烟碱酰氧基)；
(17)3元至14元非芳香杂环基羰氧基(例如，吗啉基羰氧基、哌啶基羰氧基)；
(18)任选地卤化的C1-6烷基磺酰氧基(例如，甲基磺酰氧基、三氟甲基磺酰氧基)；
(19)任选地经C1-6烷基取代的C6-14芳基磺酰氧基(例如，苯基磺酰氧基、甲苯磺酰氧基)；
(20)任选地卤化的C1-6烷硫基；
(21)5元至14元芳香杂环基；
(22)3元至14元非芳香杂环基；
(23)甲酰基；
(24)羧基；
(25)任选地卤化的C1-6烷基-羰基；
(26)C6-14芳基-羰基；
(27)5元至14元芳香杂环基羰基；
(28)3元至14元非芳香杂环基羰基；
(29)C1-6烷氧基-羰基；
(30)C6-14芳氧基-羰基(例如，苯氧基羰基、1-萘氧基羰基、2-萘氧基羰基)；
(31)C7-16芳烷氧基-羰基(例如，苯甲氧基羰基、苯乙氧基羰基)；
(32)氨基甲酰基；
(33)硫代氨基甲酰基；
(34)单或二C1-6烷基-氨基甲酰基；
(35)C6-14芳基-氨基甲酰基(例如，苯基氨基甲酰基)；
(36)5元至14元芳香杂环基氨基甲酰基(例如，吡啶基氨基甲酰基、噻吩基氨基甲酰基)；
(37)3元至14元非芳香杂环基氨基甲酰基(例如，吗啉基氨基甲酰基、哌啶基氨基甲酰基)；
(38)任选地卤化的C1-6烷基磺酰基；
(39)C6-14芳基磺酰基；
(40)5元至14元芳香杂环基磺酰基(例如，吡啶基磺酰基、噻吩基磺酰基)；
(41)任选地卤化的C1-6烷基亚磺酰基；
(42)C6-14芳基亚磺酰基(例如，苯基亚磺酰基、1-萘基亚磺酰基、2-萘基亚磺酰基)；
(43)5元至14元芳香杂环基亚磺酰基(例如，吡啶基亚磺酰基、噻吩基亚磺酰基)；
(44)氨基；
(45)单或二C1-6烷基氨基(例如，甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、异丙基氨基、丁基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、二丙基氨基、二丁基氨基、N-乙基-N-甲基氨基)；
(46)单或二C6-14芳基氨基(例如，苯基氨基)；
(47)5元至14元芳香杂环基氨基(例如，吡啶基氨基)；
(48)C7-16芳烷基氨基(例如，苯甲基氨基)；
(49)甲酰基氨基；
(50)C1-6烷基-羰基氨基(例如，乙酰基氨基、丙酰基氨基、丁酰基氨基)；
(51)(C1-6烷基)(C1-6烷基-羰基)氨基(例如，N-乙酰基-N-甲基氨基)；
(52)C6-14芳基-羰基氨基(例如，苯基羰基氨基、萘基羰基氨基)；
(53)C1-6烷氧基-羰基氨基(例如，甲氧基羰基氨基、乙氧基羰基氨基、丙氧基羰基氨基、丁氧基羰基氨基、叔丁氧基羰基氨基)；
(54)C7-16芳烷氧基-羰基氨基(例如，苯甲氧基羰基氨基)；
(55)C1-6烷基磺酰基氨基(例如，甲基磺酰基氨基、乙基磺酰基氨基)；
(56)任选地经C1-6烷基取代的C6-14芳基磺酰基氨基(例如，苯基磺酰基氨基、甲苯磺酰基氨基)；
(57)任选地卤化的C1-6烷基；
(58)C2-6烯基；
(59)C2-6炔基；
(60)C3-10环烷基；
(61)C3-10环烯基；和
(62)C6-14芳基。
“任选地取代的烃基”中的以上提到的取代基的数目是例如1至5，优选1至3。当取代基的数目是两个或更多个时，相应的取代基可以相同或不同。
在本说明书中，“杂环基”(包括“任选地取代的杂环基”的“杂环基”)的实例包括(i)芳香杂环基；(ii)非芳香杂环基；和(iii)7元至10元桥接杂环基，各个杂环基含有1至4个选自氮原子、硫原子和氧原子的杂原子作为除碳原子以外的环组成原子。
在本说明书中，“芳香杂环基”(包括“5元至14元芳香杂环基”)的实例包括含有1至4个选自氮原子、硫原子和氧原子的杂原子作为除碳原子以外的环组成原子的5元至14元(优选5元至10元)芳香杂环基。
“芳香杂环基”的优选实例包括5元或6元单环芳香杂环基，如噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、三唑基、四唑基、三嗪基等等；以及
8元至14元稠合多环(优选双环或三环)芳香杂环基，如苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并三唑基、咪唑并吡啶基、噻吩并吡啶基、呋喃并吡啶基、吡咯并吡啶基、吡唑并吡啶基、噁唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、咪唑并吡嗪基、咪唑并嘧啶基、噻吩并嘧啶基、呋喃并嘧啶基、吡咯并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、噁唑并嘧啶基、噻唑并嘧啶基、吡唑并三嗪基、萘并[2,3-b]噻吩基、啡噁噻基、吲哚基、异吲哚基、1H-吲唑基、嘌呤基、异喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、喹恶啉基、喹唑啉基、噌啉基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基等等。
在本说明书中，“非芳香杂环基”(包括“3元至14元非芳香杂环基”的实例包括含有1至4个选自氮原子、硫原子和氧原子的杂原子作为除碳原子以外的环组成原子的3元至14元(优选4元至10元)非芳香杂环基。
“非芳香杂环基”的优选实例包括3元至8元单环非芳香杂环基，如氮杂环丙基、环氧乙烷基、硫杂环丙基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、四氢噻吩基、四氢呋喃基、吡咯啉基、吡咯烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、噁唑啉基、噁唑烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、噻唑啉基、噻唑烷基、四氢异噻唑基、四氢噁唑基、四氢异噁唑基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡啶基、二氢吡啶基、二氢噻哌喃基、四氢嘧啶基、四氢哒嗪基、二氢哌喃基、四氢哌喃基、四氢噻哌喃基、吗啉基、硫代吗啉基、氮杂环庚基、二氮杂环庚基、氮杂环庚三烯基、氧杂环庚基、氮杂环辛基、二氮杂环辛基等等；以及
9元至14元稠合多环(优选双环或三环)非芳香杂环基，如二氢苯并呋喃基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并噁唑基、二氢苯并噻唑基、二氢苯并异噻唑基、二氢萘并[2,3-b]噻吩基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、4H-喹啉基、吲哚啉基、异吲哚啉基、四氢噻吩并[2,3-c]吡啶基、四氢苯并氮环庚三烯基、四氢喹噁啉基、四氢菲啶基、六氢吩噻嗪基、六氢吩噁嗪基、四氢酞嗪基、四氢萘啶基、四氢喹唑啉基、四氢噌啉基、四氢咔唑基、四氢-β-咔啉基、四氢吖啶基、四氢吩嗪基、四氢硫杂蒽基、八氢异喹啉基等等。
在本说明书中，“7元至10元桥接杂环基”的优选实例包括奎宁环基和7-氮杂双环[2.2.1]庚基。
在本说明书中，“含氮杂环基”的实例包括含有至少一个氮原子作为环组成原子的“杂环基”。
在本说明书中，“任选地取代的杂环基”的实例包括任选地具有选自以上提到的取代基组群A的取代基的杂环基。
“任选地取代的杂环基”中的取代基数目是例如1至3。当取代基的数目是两个或更多个时，相应取代基可以相同或不同。
在本说明书中，“酰基”的实例包括甲酰基、羧基、氨基甲酰基、硫代氨基甲酰基、亚磺酰基、磺酰基、氨基磺酰基和膦酰基，各个基团任选地具有“1或2个选自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10环烷基、C3-10环烯基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、5元至14元芳香杂环基和3元至14元非芳香杂环基的取代基，各个基团任选地具有1至3个选自卤素原子、任选地卤化的C1-6烷氧基、羟基、硝基、氰基、氨基和氨基甲酰基”的取代基。
“酰基”的实例还包括烃-磺酰基、杂环基磺酰基、烃-亚磺酰基和杂环基亚磺酰基。
在此，烃-磺酰基意指烃基键结的磺酰基，杂环基磺酰基意指杂环基键结的磺酰基，烃-亚磺酰基意指烃基键结的亚磺酰基，并且杂环基亚磺酰基意指杂环基键结的亚磺酰基。
“酰基”的优选实例包括甲酰基、羧基、C1-6烷基-羰基、C2-6烯基-羰基(例如，巴豆酰基)、C3-10环烷基-羰基(例如，环丁烷羰基、环戊烷羰基、环己烷羰基、环庚烷羰基)、C3-10环烯基-羰基(例如，2-环己烯羰基)、C6-14芳基-羰基、C7-16芳烷基-羰基、5元至14元芳香杂环基羰基、3元至14元非芳香杂环基羰基、C1-6烷氧基-羰基、C6-14芳氧基-羰基(例如，苯氧基羰基、萘氧基羰基)、C7-16芳烷氧基-羰基(例如，苯甲氧基羰基、苯乙氧基羰基)、氨基甲酰基、单或二C1-6烷基-氨基甲酰基、单或二C2-6烯基-氨基甲酰基(例如，二烯丙基氨基甲酰基)、单或二C3-10环烷基-氨基甲酰基(例如，环丙基氨基甲酰基)、单或二C6-14芳基-氨基甲酰基(例如，苯基氨基甲酰基)、单或二C7-16芳烷基-氨基甲酰基、5元至14元芳香杂环基氨基甲酰基(例如，吡啶基氨基甲酰基)、硫代氨基甲酰基、单或二C1-6烷基-硫代氨基甲酰基(例如，甲基硫代氨基甲酰基、N-乙基-N-甲基硫代氨基甲酰基)、单或二C2-6烯基-硫代氨基甲酰基(例如，二烯丙基硫代氨基甲酰基)、单或二C3-10环烷基硫代氨基甲酰基(例如，环丙基硫代氨基甲酰基、环己基硫代氨基甲酰基)、单或二C6-14芳基-硫代氨基甲酰基(例如，苯基硫代氨基甲酰基)、单或二C7-16芳烷基-硫代氨基甲酰基(例如，苯甲基硫代氨基甲酰基、苯乙基硫代氨基甲酰基)、5元至14元芳香杂环基硫代氨基甲酰基(例如，吡啶基硫代氨基甲酰基)、亚磺酰基、C1-6烷基亚磺酰基(例如，甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基)、磺酰基、C1-6烷基磺酰基、C6-14芳基磺酰基、膦酰基以及单或二C1-6烷基膦酰基(例如，二甲基膦酰基、二乙基膦酰基、二异丙基膦酰基、二丁基膦酰基)。
在本说明书中，“任选地取代的氨基”的实例包括任选地具有“1或2个选自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10环烷基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、C1-6烷基-羰基、C6-14芳基-羰基、C7-16芳烷基-羰基、5元至14元芳香杂环基羰基、3元至14元非芳香杂环基羰基、C1-6烷氧基-羰基、5元至14元芳香杂环基、氨基甲酰基、单或二C1-6烷基-氨基甲酰基、单或二C7-16芳烷基-氨基甲酰基、C1-6烷基磺酰基和C6-14芳基磺酰基的取代基，各个取代基任选地具有1至3个选自取代基组群A的取代基”的氨基。
任选地取代的氨基的优选实例包括氨基、单或二(任选地卤化的C1-6烷基)氨基(例如，甲基氨基、三氟甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、二乙基氨基、丙基氨基、二丁基氨基)、单或二C2-6烯基氨基(例如，二烯丙基氨基)、单或二C3-10环烷基氨基(例如，环丙基氨基、环己基氨基)、单或二C6-14芳基氨基(例如，苯基氨基)、单或二C7-16芳烷基氨基(例如，苯甲基氨基、二苯甲基氨基)、单或二(任选地卤化的C1-6烷基)羰基氨基(例如，乙酰基氨基、丙酰基氨基)、单或二C6-14芳基-羰基氨基(例如，苯甲酰基氨基)、单或二C7-16芳烷基-羰基氨基(例如，苯甲基羰基氨基)、单或二5元至14元芳香杂环基羰基氨基(例如，烟碱酰基氨基、异烟碱酰基氨基)、单或二3元至14元非芳香杂环基羰基氨基(例如，哌啶基羰基氨基)、单或二C1-6烷氧基-羰基氨基(例如，叔丁氧基羰基氨基)、5元至14元芳香杂环基氨基(例如，吡啶基氨基)、氨基甲酰基氨基、(单或二C1-6烷基-氨基甲酰基)氨基(例如，甲基氨基甲酰基氨基)、(单或二C7-16芳烷基-氨基甲酰基)氨基(例如，苯甲基氨基甲酰基氨基)、C1-6烷基磺酰基氨基(例如，甲基磺酰基氨基、乙基磺酰基氨基)、C6-14芳基磺酰基氨基(例如，苯基磺酰基氨基)、(C1-6烷基)(C1-6烷基-羰基)氨基(例如，N-乙酰基-N-甲基氨基)和(C1-6烷基)(C6-14芳基-羰基)氨基(例如，N-苯甲酰基-N-甲基氨基)。
在本说明书中，“任选地取代的氨基甲酰基”的实例包括任选地具有“1或2个选自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10环烷基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、C1-6烷基-羰基、C6-14芳基-羰基、C7-16芳烷基-羰基、5元至14元芳香杂环基羰基、3元至14元非芳香杂环基羰基、C1-6烷氧基-羰基、5元至14元芳香杂环基、氨基甲酰基、单或二C1-6烷基-氨基甲酰基以及单或二C7-16芳烷基-氨基甲酰基的取代基，各个取代基任选地具有1至3个选自取代基组群A的取代基”的氨基甲酰基。
任选地取代的氨基甲酰基的优选实例包括氨基甲酰基、单或二C1-6烷基-氨基甲酰基、单或二C2-6烯基-氨基甲酰基(例如，二烯丙基氨基甲酰基)、单或二C3-10环烷基-氨基甲酰基(例如，环丙基氨基甲酰基、环己基氨基甲酰基)、单或二C6-14芳基-氨基甲酰基(例如，苯基氨基甲酰基)、单或二C7-16芳烷基-氨基甲酰基、单或二C1-6烷基-羰基-氨基甲酰基(例如，乙酰基氨基甲酰基、丙酰基氨基甲酰基)、单或二C6-14芳基-羰基-氨基甲酰基(例如，苯甲酰基氨基甲酰基)和5元至14元芳香杂环基氨基甲酰基(例如，吡啶基氨基甲酰基)。
在本说明书中，“任选地取代的硫代氨基甲酰基”的实例包括任选地具有“1或2个选自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10环烷基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、C1-6烷基-羰基、C6-14芳基-羰基、C7-16芳烷基-羰基、5元至14元芳香杂环基羰基、3元至14元非芳香杂环基羰基、C1-6烷氧基-羰基、5元至14元芳香杂环基、氨基甲酰基、单或二C1-6烷基-氨基甲酰基以及单或二C7-16芳烷基-氨基甲酰基的取代基，各个取代基任选地具有1至3个选自取代基组群A的取代基”的硫代氨基甲酰基。
任选地取代的硫代氨基甲酰基的优选实例包括硫代氨基甲酰基、单或二C1-6烷基-硫代氨基甲酰基(例如，甲基硫代氨基甲酰基、乙基硫代氨基甲酰基、二甲基硫代氨基甲酰基、二乙基硫代氨基甲酰基、N-乙基-N-甲基硫代氨基甲酰基)、单或二C2-6烯基-硫代氨基甲酰基(例如，二烯丙基硫代氨基甲酰基)、单或二C3-10环烷基-硫代氨基甲酰基(例如，环丙基硫代氨基甲酰基、环己基硫代氨基甲酰基)、单或二C6-14芳基-硫代氨基甲酰基(例如，苯基硫代氨基甲酰基)、单或二C7-16芳烷基-硫代氨基甲酰基(例如，苯甲基硫代氨基甲酰基、苯乙基硫代氨基甲酰基)、单或二C1-6烷基-羰基-硫代氨基甲酰基(例如，乙酰基硫代氨基甲酰基、丙酰基硫代氨基甲酰基)、单或二C6-14芳基-羰基-硫代氨基甲酰基(例如，苯甲酰基硫代氨基甲酰基)和5元至14元芳香杂环基硫代氨基甲酰基(例如，吡啶基硫代氨基甲酰基)。
在本说明书中，“任选地取代的氨基磺酰基”的实例包括任选地具有“1或2个选自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10环烷基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、C1-6烷基-羰基、C6-14芳基-羰基、C7-16芳烷基-羰基、5元至14元芳香杂环基羰基、3元至14元非芳香杂环基羰基、C1-6烷氧基-羰基、5元至14元芳香杂环基、氨基甲酰基、单或二C1-6烷基-氨基甲酰基以及单或二C7-16芳烷基-氨基甲酰基的取代基，各个取代基任选地具有1至3个选自取代基组群A的取代基”的氨基磺酰基。
任选地取代的氨基磺酰基的优选实例包括氨基磺酰基、单或二C1-6烷基-氨基磺酰基(例如，甲基氨基磺酰基、乙基氨基磺酰基、二甲基氨基磺酰基、二乙基氨基磺酰基、N-乙基-N-甲基氨基磺酰基)、单或二C2-6烯基-氨基磺酰基(例如，二烯丙基氨基磺酰基)、单或二C3-10环烷基-氨基磺酰基(例如，环丙基氨基磺酰基、环己基氨基磺酰基)、单或二C6-14芳基-氨基磺酰基(例如，苯基氨基磺酰基)、单或二C7-16芳烷基-氨基磺酰基(例如，苯甲基氨基磺酰基、苯乙基氨基磺酰基)、单或二C1-6烷基-羰基-氨基磺酰基(例如，乙酰基氨基磺酰基、丙酰基氨基磺酰基)、单或二C6-14芳基-羰基-氨基磺酰基(例如，苯甲酰基氨基磺酰基)和5元至14元芳香杂环基氨基磺酰基(例如，吡啶基氨基磺酰基)。
在本说明书中，“任选地取代的羟基”的实例包括任选地具有“选自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10环烷基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、C1-6烷基-羰基、C6-14芳基-羰基、C7-16芳烷基-羰基、5元至14元芳香杂环基羰基、3元至14元非芳香杂环基羰基、C1-6烷氧基-羰基、5元至14元芳香杂环基、氨基甲酰基、单或二C1-6烷基-氨基甲酰基、单或二C7-16芳烷基-氨基甲酰基、C1-6烷基磺酰基和C6-14芳基磺酰的取代基，各个取代基任选地具有1至3个选自取代基组群A的取代基”的羟基。
任选地取代的羟基的优选实例包括羟基、C1-6烷氧基、C2-6烯氧基(例如，烯丙氧基、2-丁烯氧基、2-戊烯氧基、3-戊烯氧基)、C3-10环烷氧基(例如，环己氧基)、C6-14芳氧基(例如，苯氧基、萘氧基)、C7-16芳烷氧基(例如，苯甲氧基、苯乙氧基)、C1-6烷基-羰氧基(例如，乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、异丁酰氧基、新戊酰氧基)、C6-14芳基-羰氧基(例如，苯甲酰氧基)、C7-16芳烷基-羰氧基(例如，苯甲基羰氧基)、5元至14元芳香杂环基羰氧基(例如，烟碱酰氧基)、3元至14元非芳香杂环基羰氧基(例如，哌啶基羰氧基)、C1-6烷氧基-羰氧基(例如，叔丁氧基羰氧基)、5元至14元芳香杂环氧基(例如，吡啶氧基)、氨基甲酰氧基、C1-6烷基-氨基甲酰氧基(例如，甲基氨基甲酰氧基)、C7-16芳烷基-氨基甲酰氧基(例如，苯甲基氨基甲酰氧基)、C1-6烷基磺酰氧基(例如，甲基磺酰氧基、乙基磺酰氧基)和C6-14芳基磺酰氧基(例如，苯基磺酰氧基)。
在本说明书中，“任选地取代的硫烷基”的实例包括任选地具有“选自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10环烷基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、C1-6烷基-羰基、C6-14芳基-羰基和5元至14元芳香杂环基的取代基，各个取代基任选地具有1至3个选自取代基组群A的取代基”的硫烷基和卤化硫烷基。
任选地取代的硫烷基的优选实例包括硫烷基(-SH)、C1-6烷硫基、C2-6烯硫基(例如，烯丙硫基、2-丁烯硫基、2-戊烯硫基、3-己烯硫基)、C3-10环烷硫基(例如，环己硫基)、C6-14芳硫基(例如，苯硫基、萘硫基)、C7-16芳烷硫基(例如，苯甲硫基、苯乙硫基)、C1-6烷基-羰硫基(例如，乙酰硫基、丙酰硫基、丁酰硫基、异丁酰硫基、新戊酰硫基)、C6-14芳基-羰硫基(例如，苯甲酰硫基)、5元至14元芳香杂环硫基(例如，吡啶硫基)和卤化硫基(例如，全氟硫基)。
在本说明书中，“任选地取代的硅烷基”的实例包括任选地具有“1至3个选自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10环烷基、C6-14芳基和C7-16芳烷基的取代基，各个取代基任选地具有1至3个选自取代基组群A的取代基”的硅烷基。任选地取代的硅烷基的实例包括三C1-6烷基硅烷基(例如，三甲基硅烷基、叔丁基(二甲基)硅烷基)。
如本文所使用的术语“抗体-药物缀合物”或“ADC”是指与抗体连接且由式(CD-L)n-A定义的化合物，其中CD是由式(XX)至式(XXIX)中的任一个表示的基团，参见下文，L是接头，A是蛋白质，例如抗体，并且n是1至10。在一个实施方案中，接头由-X3-T-Z-Q-表示，其中X3是连接CD与接头的其余部分的二价基团或不存在，T是肽或不存在，Z是间隔基，并且Q是异双官能团或异三官能团。作为说明，以下通式显示本公开的具有基于对氨基苯甲基的接头、基于丙氨酸-丙氨酸的二肽、基于丙酮的间隔基和基于琥珀酰亚胺硫醚的异双官能团的ADC：
在本公开中，术语“接头”是指能够连接蛋白质，例如抗体、抗体片段(例如，抗原结合片段)或功能等效物与环状二核苷酸的任何化学部分。接头可能易于裂解(“可裂解接头”)，从而有助于释放该环状二核苷酸。举例来说，在该环状二核苷酸和/或该抗体保持活性的条件下，此类可裂解接头可能易于发生酸诱导的裂解、光子诱导的裂解、肽酶诱导的裂解、酯酶诱导的裂解和二硫键裂解。可选地，接头可能基本上抗裂解(“不可裂解接头”)。
在本公开中，不可裂解接头是能够以稳定共价方式连接环状二核苷酸与抗体的任何化学部分并且不属于以上针对可裂解接头列出的类别。因此，不可裂解接头基本上抗酸诱导的裂解、光子诱导的裂解、肽酶诱导的裂解、酯酶诱导的裂解和二硫键裂解。此外，不可裂解是指该接头中的或毗连该接头的化学键在环状二核苷酸和/或抗体不丧失其活性的条件下经受住由酸、光不稳定裂解剂、肽酶、酯酶或者使二硫键裂解的化学或生理学化合物诱导的裂解的能力。
一些可裂解接头被肽酶裂解(“肽酶可裂解接头”)。仅某些肽容易在细胞内部或外部裂解，参见例如Trout等,79Proc.Natl.Acad.Sci.USA,626-629(1982)和Umemoto等,43Int.J.Cancer,677-684(1989)。此外，肽由α-氨基酸单元和肽键构成，所述肽键在化学上是介于一个氨基酸的羧酸与第二个氨基酸的氨基之间的酰胺键。其他酰胺键，如介于羧酸与赖氨酸的α-氨基酸基团之间的键，不应当理解为肽键，而且被视为不可裂解的。
一些接头被酯酶裂解(“酯酶可裂解接头”)。仅某些酯可以被细胞内部或外部存在的酯酶裂解。酯是由羧酸与醇缩合而形成。简单的酯是用简单的醇，如脂族醇，和小环状小芳香醇产生的酯。
在一些实施方案中，可裂解接头组分包含含有一至十个氨基酸残基的肽。在这些实施方案中，肽允许接头被蛋白酶裂解，从而有助于在曝露于如溶酶体酶的细胞内蛋白酶后释放环状二核苷酸(Doronina等,(2003)Nat.Biotechnol.21:778-784)。示例性肽包括但不限于二肽、三肽、四肽和五肽。示例性二肽包括但不限于丙氨酸-丙氨酸(ala-ala)、缬氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)、丙氨酸-苯丙氨酸(af或ala-phe)；苯丙氨酸-赖氨酸(fk或phe-lys)；苯丙氨酸-高赖氨酸(phe-homolys)；和N-甲基-缬氨酸-瓜氨酸(Me-val-cit)。示例性三肽包括但不限于甘氨酸-缬氨酸-瓜氨酸(gly-val-cit)和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(gly-gly-gly)。
肽可以包含天然存在和/或非天然氨基酸残基。术语“天然存在的氨基酸”是指Ala、Asp、Cys、Glu、Phe、Gly、His、He、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、Val、Trp和Tyr。作为非限制性实例，“非天然氨基酸”(即，氨基酸并非天然存在)包括高丝氨酸、高精氨酸、瓜氨酸、苯基甘氨酸、牛磺酸、碘基酪氨酸、硒基半胱氨酸、正亮氨酸(“Nle”)、正缬氨酸(“Nva”)、β-丙氨酸、L-萘丙氨酸或D-萘丙氨酸、鸟氨酸(“Orn”)等等。肽可以经过设计和优化以便通过特定的酶，例如肿瘤相关蛋白酶、组织蛋白酶B、C和D或胞浆素蛋白酶进行酶催裂解。
氨基酸还包括天然和非天然氨基酸的D形式。“D-”表示氨基酸具有“D”(右旋)构象，与天然存在的(“L-”)氨基酸的构象相反。天然和非天然的氨基酸可以购自市面(SigmaChemical Co.、Advanced Chemtech)，或使用本领域中已知的方法合成。
在本公开中，术语“异双官能团”或术语“异三官能团”是指连接接头和另一个治疗活性分子，例如蛋白质，例如抗体的化学部分。参见例如WO 2017/191579。异二官能团和异三官能团的特征为在该化学部分的任一端具有不同的反应基团。非限制性示例性异双官能团包括：
其中“*”表示与连接至抗体的任何可利用碳原子、氮原子、氧原子或硫原子的连接点。在实施方案中，该异双官能团是
并且连接至与抗体连接的硫原子。
非限制性示例性异三官能团是：
在本公开中，术语“间隔基”是指连接异二官能团和异三官能团与接头的其余部分(例如肽)或在异二官能团和异三官能团不存在时连接该接头的其余部分或该环状二核苷酸与同抗体连接的任何可利用碳原子、氮原子、氧原子或硫原子的化学部分。非限制性示例性间隔基包括-NH-、-S-、-O-、-NHC(＝O)CH2CH2-、-S(＝O)2-CH2CH2-、-C(＝O)NHNH-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NH-、-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2＝CH2-、-C≡C-、-CH＝N-O-、聚乙二醇(PEG)、
术语“药物抗体比”或“DAR”是指连接至A(即，蛋白质，例如抗体或其抗原结合片段)的CD的数目。因此，在具有通式(CD-L)n-A的ADC中，DAR由变数“n”定义。
当提到代表个别ADC的具有式(CD-L)n-A的化合物时，DAR是指连接至个别A的CD的数目，例如n是1至10的整数。
当提到代表多种ADC的具有式(CD-L)n-A的化合物时，DAR是指连接至A的环状二核苷酸的平均数，例如n是1至10的整数或分数)。因此，作为一个实例，包含每个A具有3个环状二核苷酸的第一ADC和每个A具有4个环状二核苷酸的第二ADC的具有式(CD-L)n-A的化合物的DAR，即，“n”是3.5。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换用于指任何长度的氨基酸聚合物。所述聚合物可以是线性或分支的，它可以包含经修饰的氨基酸，而且它可以间杂非氨基酸。该术语还涵盖已经天然地或通过干预，例如二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化或任何其他操纵或修饰，如与标记组分缀合而得以修饰的氨基酸聚合物。该定义内还包括例如含有一种或多种氨基酸类似物(包括例如非天然氨基酸等)以及本领域中已知的其他修饰的多肽。应当理解，由于本公开的的多肽是基于抗体，所以在某些实施方案中，多肽可以呈单链或缔合链的形式存在。
“单克隆”抗体或其抗原结合片段是指参与对单个抗原决定子或表位的高特异性识别和结合的均质抗体或抗原结合片段群体。这与通常包括针对不同抗原决定子的不同抗体的多克隆抗体相反。术语“单克隆”抗体或其抗原结合片段涵盖完整全长单克隆抗体以及抗体片段(如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv)、单链(scFv)突变体、包含抗体部分的融合蛋白质，以及包含抗原识别位点的任何其他经修饰的免疫球蛋白分子。此外，“单克隆”抗体或其抗原结合片段是指以众多方式，包括但不限于通过杂交瘤、噬菌体选择、重组表达和转基因动物制得的此类抗体及其抗原结合片段。
术语“人源化”抗体或其抗原结合片段是指作为含有最小非人(例如鼠)序列的特定免疫球蛋白链、嵌合免疫球蛋白或其片段的非人(例如鼠)抗体或抗原结合片段形式。通常，人源化抗体或其抗原结合片段是人免疫球蛋白，其中来自互补决定区(CDR)的残基被来自具有所期望的特异性、亲和力和能力的非人物种(例如小鼠、大鼠、兔、仓鼠)的CDR的残基置换(“CDR移植”)(Jones等,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等,Nature 332:323-327(1988)；Verhoeyen等,Science 239:1534-1536(1988))。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv构架区(FR)残基置换为来自非人物种的具有所期望的特异性、亲和力和能力的抗体或片段中的相应残基。可以通过取代Fv构架区中和/或经置换的非人残基内的其他残基来进一步修饰人源化抗体或其抗原结合片段，以精化并优化抗体或其抗原结合片段的特异性、亲和力和/或能力。一般来说，人源化抗体或其抗原结合片段将包含基本上所有至少一个且通常两个或三个含有所有或基本上所有对应于非人免疫球蛋白的CDR区的可变域，而所有或基本上所有FR区都是人免疫球蛋白一致序列的那些FR区。人源化抗体或其抗原结合片段还可以包含免疫球蛋白恒定区或域(Fc)，通常人免疫球蛋白恒定区或域的至少一部分。用于产生人源化抗体的方法的实例描述于以下文献中：美国专利5,225,539；Roguska等,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,91(3):969-973(1994)；和Roguska等,Protein Eng.9(10):895-904(1996)。在一些实施方案中，“人源化抗体”是表面重整抗体。
抗体的“可变区”是指单独或组合的抗体轻链可变区或抗体重链可变区。重链和轻链的可变区各自由以三个互补性决定区(CDR，也称为高变区)连接的四个构架区(FR)组成。各个链中的CDR通过FR维持紧密邻近，并且与来自另一个链的CDR一起促成抗体抗原结合位点的形成。存在至少两种测定CDR的技术：(1)基于跨物种序列变异性的方法(即，Kabat等,Sequences of Proteins of Immunological Interest,(第5版,1991,NationalInstitutes of Health,Bethesda Md.))；以及(2)基于抗原抗体复合物的结晶学研究的方法(Al-lazikani等,(1997)J.Molec.Biol.273:927-948))。另外，本领域中有时使用这两种方法的组合来测定CDR。
当提到可变域(大约轻链的残基1至107和重链的残基1至113)中的残基时，一般使用Kabat编号系统(例如Kabat等,Sequences of Immunological Interest.第5版.PublicHealth Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。除非另外明确指出，否则本文使用的编号系统是Kabat编号系统。
如Kabat中的氨基酸位置编号是指Kabat等,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第5版.Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,Md.(1991)中用于编译抗体的重链可变域或轻链可变域的编号系统。使用该编号系统，实际线性氨基酸序列可以对应于可变域FR或CDR的缩短或插入而含有较少或额外氨基酸。举例来说，重链可变域可以包括在H2的残基52之后的单氨基酸插入(残基52a，根据Kabat)和在重链FR残基82之后的插入残基(例如,残基82a、82b和82c等，根据Kabat)。对于指定抗体，可以通过在抗体序列的同源性区域与“标准”Kabat编号序列进行比对来确定残基的Kabat编号。而Chothia是指结构环的位置(Chothia和LeskJ.Mol.Biol.196:901-917(1987))。当使用Kabat编号惯例进行编号时，Chothia CDR-H1环的末端在H32与H34之间变化，取决于环长度(这是由于Kabat编号方案在H35A和H35B处放置了插入；如果既不存在35A又不存在35B，则该环终止于32；如果仅存在35A，则该环终止于33；若存在35A和35B二者，则该环终止于34)。AbM高变区表示Kabat CDR与Chothia结构环之间的折衷，而且被Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用。
在某些方面，抗体或其抗原结合片段的CDR可以根据Chothia编号方案来确定，该编号方案是指免疫球蛋白结构环的位置(参见例如Chothia C和Lesk AM,(1987),J MolBiol 196:901-917；Al-Lazikani B等,(1997)J Mol Biol 273:927-948；Chothia C等,(1992)J Mol Biol227:799-817；Tramontano A等,(1990)J Mol Biol 215(1):175-82；以及美国专利第7,709,226号)。通常，当使用Kabat编号惯例时，Chothia CDR-H1环存在于重链氨基酸26至32、33或34处，Chothia CDR-H2环存在于重链氨基酸52至56处，并且ChothiaCDR-H3环存在于重链氨基酸95至102处，而Chothia CDR-L1环存在于轻链氨基酸24至34处，Chothia CDR-L2环存在于轻链氨基酸50至56处，并且Chothia CDR-L3环存在于轻链氨基酸89至97处。当使用Kabat编号惯例进行编号时，Chothia CDR-H1环的末端在H32与H34之间变化，取决于环长度(这是因为Kabat编号方案在H35A和H35B处放置了插入；如果既不存在35A又不存在35B，则该环终止于32；如果仅存在35A，则该环终止于33；如果存在35A和35B二者，则该环终止于34)。
在某些方面，抗体或其抗原结合片段的CDR可以根据如Lefranc M-P,(1999)TheImmunologist 7:132-136和Lefranc M-P等,(1999)Nucleic Acids Res 27:209-212中所描述的IMGT编号系统来确定。根据IMGT编号方案，VH-CDR1在位置26至35处，VH-CDR2在位置51至57处，VH-CDR3在位置93至102处，VL-CDR1在位置27至32处，VL-CDR2在位置50至52处，并且VL-CDR3在位置89至97处。
在某些方面，抗体或其抗原结合片段的CDR可以根据MacCallum RM等,(1996)JMol Biol 262:732-745来确定。还参见例如Martin A.“Protein Sequence and StructureAnalysis of Antibody Variable Domains”,Antibody Engineering,Kontermann和Dübel编,第31章,第422-439页,Springer-Verlag,Berlin(2001)。
在某些方面，抗体或其抗原结合片段的CDR可以根据AbM编号方案来确定，该编号方案是指表示Kabat CDR与Chothia结构环之间的折衷的AbM高变区，并且被OxfordMolecular的AbM抗体建模软件(Oxford Molecular Group,Inc.)使用。
术语“人”抗体意指由人产生的抗体或使用本领域中已知的任何技术制造的具有对应于由人产生的抗体的氨基酸序列的抗体。该人抗体定义包括完整或全长抗体、其片段和/或包含至少一个人重链和/或轻链多肽的抗体，如包含鼠轻链和人重链多肽的抗体。
术语“嵌合”抗体是指免疫球蛋白分子的氨基酸序列源自于两个或更多个物种的抗体。通常，轻链与重链二者的可变区对应于源自于一个物种的哺乳动物(例如小鼠、大鼠、兔等)的具有所期望的特异性、亲和力和能力的抗体的可变区，而恒定区与源自于另一个物种(通常是人)的抗体中的序列同源，以避免在该物种中引发免疫应答。
术语“表位”或“抗原决定子”在本文中可互换使用并且是指抗原中能够被特定抗体识别并且特异性地结合的部分。当抗原是多肽时，表位可以由连续氨基酸与通过蛋白质三级折叠而毗邻的非连续氨基酸二者形成。由连续氨基酸形成的表位通常在蛋白质变性后得以保留，而由三级折叠形成的表位通常在蛋白质变性后丧失。在独特空间构象下，表位通常包括至少3个且更通常至少5个或8至10个氨基酸。
“结合亲和力”一般是指分子(例如抗体)的单个结合位点与其结合搭配物(例如抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另外指明，否则如本文所使用，“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如抗体与抗原)之间的1:1相互作用的固有结合亲和力。分子X对其搭配物Y的亲和力一般可以由解离常数(Kd)表示。可以通过本领域中已知的常用方法，包括本文所描述的那些方法来测量亲和力。低亲和力抗体一般缓慢结合抗原并且倾向于容易解离，而高亲和力抗体一般更快地结合抗原并且倾向于保持结合较久。本领域中已知多种测量结合亲和力的方法，可以出于本公开的目的使用其中任一种。以下描述具体说明性实施方案。
“或更佳”当在本文中用于指结合亲和力时是指分子与其结合搭配物之间的更强结合。“或更佳”当在本文用于指更强结合时由较小数值Kd值表示。举例来说，对抗原具有“0.6nM或更佳”的亲和力的抗体，该抗体对该抗原的亲和力是<0.6nM，即，0.59nM、0.58nM、0.57nM等或小于0.6nM的任何值。
“特异性结合”一般意指抗体经由其抗原结合结构域结合至表位并且该结合需要该抗原结合结构域与该表位之间存在一定的互补性。根据此定义，当抗体经由其抗原结合域结合至表位比其结合随机无关表位更容易时，称抗体“特异性结合”至该表位。术语“特异性”在本文中用于对某一抗体结合至某一表位的相对亲和力进行定量。举例来说，可以认为抗体“A”对指定表位具有比抗体“B”更高的特异性，或者可以称抗体“A”以比其对相关表位“D”所具有的特异性更高的特异性结合表位“C”。
“优先结合”意指抗体特异性结合至表位比其结合相关、相似、同源或类似表位更容易。因此，纵使“优先结合”至指定表位的抗体可能与相关表位交叉反应，但与该相关表位相比，此类抗体将更可能结合至该表位。
如果抗体优先结合指定表位或重叠表位达到其可在某种程度上阻断参考抗体与该表位结合的程度，则称其“竞争性抑制”该参考抗体与该表位的结合。竞争性抑制可以通过本领域中已知的任何方法，例如竞争ELISA测定法来测定。可以称抗体竞争性抑制参考抗体与指定表位的结合达到至少90％、至少80％、至少70％、至少60％或至少50％。
如本文所使用的短语“基本上相似”或“基本上相同”表示两个数值(一般来说，一个与本公开的抗体相关，而另一个与参考/比较抗体相关)之间的相似性程度高到足以使本领域技术人员将认为该两个值之间的差异在由所述值(例如，Kd值)衡量的生物学特征的情形下几乎不具有或不具有生物学和/或统计显著性。该两个值之间的差异可以小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％和/或小于约10％，随参考/比较抗体值而变化。
“分离”的多肽、抗体、聚核苷酸、载体、细胞或组合物是呈自然界中未发现的形式的多肽、抗体、聚核苷酸、载体、细胞或组合物。分离的多肽、抗体、聚核苷酸、载体、细胞或组合物包括已经纯化至不再呈自然界中所发现的形式的程度的那些多肽、抗体、聚核苷酸、载体、细胞或组合物。在一些实施方案中，分离的抗体、聚核苷酸、载体、细胞或组合物是基本上纯的。
如本文所使用，“基本上纯”是指至少50％纯(即，不含污染物)、至少90％纯、至少95％纯、至少98％纯或至少99％纯的材料。
术语“抗体”是指免疫球蛋白分子，其可以经由该免疫球蛋白分子的可变区内的至少一个抗原识别位点识别并特异性结合至靶标，如蛋白质、多肽、肽、碳水化合物、聚核苷酸、脂质或上述的组合。如本文所使用，术语“抗体”涵盖完整多克隆抗体、完整单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、包含抗体的融合蛋白质和任何其他经修饰的免疫球蛋白分子，只要所述抗体表现出所期望的生物活性即可。抗体可以属于五种主要免疫球蛋白类别中的任一种：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，或其子类(同型)(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)，基于其重链恒定域的一致性分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白具有不同且众所周知的亚单位结构和三维构象。抗体可以是裸抗体或与如毒素、放射性同位素等其他分子缀合。如本文所使用，术语“抗体”涵盖双特异性和多特异性抗体。
术语“抗体片段”是指完整抗体的一部分。“抗原结合片段”是指完整抗体中结合至抗原的部分。抗原结合片段可以含有完整抗体的抗原决定可变区。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段、线性抗体和单链抗体。“抗原结合片段”可以是双特异性或多特异性抗原结合片段。
如本文所使用的术语“药物递送剂”是指改变并入其的分子的分布、靶向或寿命的化学部分。在一些实施方案中，与不存在此类药物递送剂的物质相比，药物递送剂对所选靶标，例如分子、细胞或细胞类型、区室、受体，例如体内的细胞或器官区室、组织、器官或区域提供增强的亲和力。对所选靶标提供增强的亲和力的药物递送剂称为靶向性药物递送剂。参见例如WO 2013/075035A1。本文引用的所有专利、专利申请和公开全部以引用的方式整体并入。
如本文所使用的术语“药物递送缀合物”是指包含式(XX)至式(XXIX)中的任一个、药物递送剂和任选共价接头的化合物。
一些药物递送剂具有内渗性。内渗性药物递送剂促进核内体溶解和/或式(XX)至式(XXIX)中的任一种从核内体转运至细胞质。内渗性药物递送剂可以是显示pH值依赖性膜活性和促融合性的聚阴离子肽或肽模拟物。在一个实施方案中，内渗性药物递送剂在核内体pH值下呈现其活性构象。“活性”构象是内渗性药物递送剂促进核内体溶解和/或式(XX)至式(XXIX)从核内体转运至细胞质的构象。示例性内渗性药物递送剂包括GALA肽(Subbarao等,Biochemistry,1987,26:2964-2972)、EALA肽(Vogel等,J.Am.Chem.Soc,1996,118:1581-1586)及其衍生物(Turk等,Biochem.Biophys.Acta,2002,1559:56-68)。在一个实施方案中，内渗性组分可以含有将响应于pH值变化而发生电荷或质子化变化的化学基团，例如氨基酸。内渗性组分可以是线性或分支的。
药物递送剂可以改善所得药物递送缀合物的转运、杂合和特异性。
药物递送剂可以包括治疗调节剂，例如用于增强摄取；诊断化合物或报告基团，例如用于监控分布；和交联剂。一般实例包括脂质、类固醇、维生素、碳水化合物、蛋白质、肽、聚胺、合成聚合物或寡聚物(如PEG的合成聚合物或寡聚物)、肽模拟物或其任何组合。
药物递送剂可以包括天然存在的物质，如蛋白质，例如人血清白蛋白(HSA)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)或球蛋白；碳水化合物，例如葡聚糖、支链淀粉、甲壳质、壳聚糖、菊粉、环糊精或透明质酸；或脂质。药物递送剂还可以是重组或合成分子，如合成聚合物或寡聚物，例如合成聚氨基酸、寡核苷酸，例如适体。聚氨基酸的实例包括聚赖氨酸(PLL)、聚L-天冬氨酸、聚L-谷氨酸。合成聚合物或寡聚物的其他实例包括苯乙烯-马来酸酐共聚物、聚(L-丙交酯-乙交酯)共聚物、二乙烯醚-马来酸酐共聚物、N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺共聚物(HMPA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)、聚氨基甲酸酯、聚(2-乙基丙烯酸)、N-异丙基丙烯酰胺聚合物或聚磷嗪。聚胺的实例包括：聚乙烯亚胺、聚赖氨酸(PLL)、精胺、亚精胺、聚胺、假肽-聚胺、肽模拟物聚胺、树枝状聚合物聚胺、精氨酸、脒、鱼精蛋白、阳离子脂质、阳离子卟啉、聚胺季盐或α螺旋肽。
药物递送剂还可以包括结合至指定细胞类型的靶向基团，例如细胞或组织靶向剂，例如凝集素、糖蛋白、脂质或蛋白质，例如抗体。靶向基团可以是促甲状腺激素、促黑素细胞素、凝集素、糖蛋白、表面活性蛋白A、粘蛋白碳水化合物、多价乳糖、多价半乳糖、N-乙酰基-半乳糖胺、N-乙酰基-葡糖胺多价甘露糖、多价岩藻糖、糖基化聚氨基酸、多价半乳糖、转铁蛋白、二膦酸盐、聚谷氨酸、聚天冬氨酸、脂质、胆固醇、类固醇、胆汁酸、叶酸、维生素B12、生物素、RGD肽、RGD肽模拟物或适体。
药物递送剂的其他实例包括染料、嵌入剂(例如吖啶)、交联剂(例如，补骨脂素、丝裂霉素C)、卟啉(TPPC4、德克萨卟啉(texaphyrin)、Sapphyrin)、多环芳香烃(例如吩嗪、二氢吩嗪)、人造内切核酸酶或螯合剂(例如EDTA)、亲脂性分子(例如胆固醇、胆酸、金刚烷乙酸、1-芘丁酸、二氢睾酮、1,3-双-0(十六烷基)甘油、香叶氧基己基、十六烷基甘油、冰片、薄荷醇、1,3-丙二醇、十七烷基、棕榈酸、肉豆蔻酸、03-(油酰基)石胆酸、03-(油酰基)胆烯酸、二甲氧基三苯甲基或吩噁嗪)和肽缀合物(例如，触角肽、Tat肽)、烷基化剂、磷酸盐、氨基、巯基、PEG(例如，PEG-40K)、MPEG、[MPEG]2、聚氨基、烷基、取代的烷基、放射性标记的标记物、酶、半抗原(例如，生物素)、转运/吸收促进剂(例如，阿司匹林、维生素E、叶酸)、合成核糖核酸酶(例如，咪唑、双咪唑、组织胺、咪唑簇、吖啶-咪唑缀合物、四氮杂大环的Eu3+络合物)、二硝基苯基、HRP或AP。
药物递送剂还可以包括激素和激素受体。它们还可以包括非肽物质，如脂质、凝集素、碳水化合物、维生素、辅因子、多价乳糖、多价半乳糖、N-乙酰基-半乳糖胺、N-乙酰基-葡糖胺多价甘露糖、多价岩藻糖或适体。药物递送剂可以是例如脂多糖、p38MAP激酶激活因子或NF-KB激活因子。
药物递送剂可以是能增加式(XX)至式(XXIX)中的任一种向细胞中的摄取，例如通过破坏细胞的细胞骨架，例如通过破坏细胞的微管、微丝和/或中间丝的物质。
药物递送剂可以通过例如激活炎症应答来增加式(XX)至式(XXIX)中的任一种向细胞中的摄取。具有此类作用的示例性药物递送剂包括肿瘤坏死因子α(TNFα)、白介素-1β或γ干扰素。
在一个实施方案中，药物递送剂是脂质或基于脂质的分子。此类脂质或基于脂质的分子可以结合血清蛋白，例如人血清白蛋白(HSA)。结合HSA的药物递送剂允许药物递送缀合物分布至靶组织，例如体内的非肾脏靶组织。还可以使用能结合HSA的其他分子作为药物递送剂。举例来说，可以使用萘普生或阿司匹林。脂质或基于脂质的药物递送剂可以(a)增加对药物递送缀合物降解的抗性，(b)增加对靶细胞或细胞膜的靶向或转运，和/或(c)可用于调节与血清蛋白，例如HSA的结合。脂质或基于脂质的药物递送剂还可以使得能够形成可以影响式(XX)至式(XXIX)中任一种的生物分布的纳米颗粒，例如胶束。
基于脂质的药物递送剂可用于调节，例如控制药物递送缀合物与靶组织的结合。举例而言，更强结合至HSA的脂质或基于脂质的药物递送剂不太可能靶向肾，因此不太可能从体内清除。不太强地结合至HSA的脂质或基于脂质的药物递送剂可用于将缀合物靶向肾脏。
在一个实施方案中，基于脂质的药物递送剂以足以使药物递送缀合物分布至非肾脏组织的亲和力结合HSA。在一个实施方案中，亲和力没有强到使HSA-药物递送剂结合不能逆转的程度。
在另一个实施方案中，基于脂质的药物递送剂弱结合或完全不结合HSA，使得药物递送缀合物分布至肾脏。靶向肾细胞的其他部分还可以代替或连同基于脂质的药物递送剂使用。
在另一个实施方案中，药物递送剂是被靶细胞(例如增殖细胞)摄取的部分，例如维生素。这些特别适用于治疗以例如恶性或非恶性类型，例如癌细胞的不合需要的细胞增殖为特征的病症。示例性维生素包括维生素A、维生素E和维生素K。其他示例性维生素包括B族维生素，例如叶酸、B12、核黄素、生物素、吡哆醛或者癌细胞摄取的其他维生素或营养物。还包括HAS、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。
在另一个实施方案中，药物递送剂是细胞渗透剂，例如螺旋细胞渗透剂。在一个实施方案中，所述剂是两亲性的。示例性两亲性剂包括肽，如tat或触角肽，以及脂质-PEG缀合物。如果所述剂是肽，则其可以经过修饰，包括肽基模拟物、反转异构体、非肽或假肽键，以及D-氨基酸的使用。在一个实施方案中，螺旋剂是具有亲脂相和疏脂相的α-螺旋剂。
药物递送剂可以是肽或肽模拟物。肽模拟物(本文中也称为寡肽模拟物)是能够折叠成与天然肽类似的确定三维结构的分子。肽或肽模拟物部分可以是约5至50个氨基酸长，例如约5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个氨基酸长。肽或肽模拟物可以是例如细胞渗透肽、阳离子肽、两亲性肽或疏水性肽(例如，主要由Tyr、Trp或Phe组成)。肽部分可以是树枝状聚合物肽、约束肽或交联肽。在另一个实施方案中，肽部分可以包括疏水性膜易位序列(MTS)。示例性含疏水性MTS的肽是RFGF。含有疏水性MTS的RFGF类似物也可以是靶向部分。肽部分可以是能携带大极性分子，包括肽、寡核苷酸和蛋白质越过细胞膜的“递送”肽。举例来说，已经发现来自HIV Tat蛋白和果蝇触角肽的某些序列能够起递送肽的作用。肽或肽模拟物可以由随机DNA序列编码，如从噬菌体呈现文库或一珠一化合物(one-bead-one-compound；OBOC)组合文库鉴定的肽(Lam等,Nature,354:82-84,1991)。在一个实施方案中，肽或肽模拟物是细胞靶向性肽，如精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)-肽或RGD模拟物。肽部分的长度可以在约5个氨基酸至约40个氨基酸的范围内。肽部分可以具有结构修饰，以便增强稳定性或直接构象性质。可以利用以下描述的任何结构修饰。可以使用RGD肽部分来靶向肿瘤细胞，如内皮肿瘤细胞或乳腺癌肿瘤细胞(Zitzmann等,Cancer Res.,62:5139-43,2002)。RGD肽可以促进式(XX)至式(XXIX)中的任一种靶向多种其他组织，包括肺、肾脏、脾脏或肝脏的肿瘤(Aoki等,Cancer Gene Therapy 8:783-787,2001)。
在一些实施方案中，RGD肽将促进药物递送缀合物靶向肾脏。RGD肽可以是线性的或环状的，并且可以经过修饰，例如糖基化或甲基化，以促进对特定组织的靶向。举例来说，糖基化RGD肽可以将药物递送缀合物递送至表达civB3的肿瘤细胞(Haubner等,Jour.Nucl.Med.,42:326-336,2001)。可以使用靶向增殖细胞中富含的标记物的肽。举例来说，含有RGD的肽和肽模拟物可以靶向癌细胞，特别是表现整合素的细胞。因此，可以使用RGD肽、含有RGD的环肽、包括D-氨基酸的RGD肽，以及合成的RGD模拟物。除了RGD以外，还可以使用靶向整合素药物递送剂的其他部分。一般来说，可以使用此类药物递送剂来控制增殖细胞和血管生成。这类药物递送剂的优选缀合物靶向PECAM-1、VEGF或其他癌症基因，例如本文所述的癌症基因。
“细胞渗透肽”能够渗透细胞，例如哺乳动物细胞，如人类细胞。细胞渗透肽可以包括RALA肽。(Molecular Therapy:Nucleic Acids,2017,6,249-258；J ControlRelease.2014,189:141-9；以及Nanomedicine(Lond).2015,10(19):2989-3001)。细胞渗透肽还可以包括核定位信号(NLS)。举例来说，细胞渗透肽可以是二分两亲性肽，源自于HIV-1gp41的融合肽结构域和SV40大T抗原的NLS的如MPG(Simeoni等,Nucl.Acids Res.31:2717-2724,2003)。细胞渗透肽可以形成纳米颗粒。
在一个实施方案中，靶向肽可以是两亲性a-螺旋肽。示例性两亲性a-螺旋肽包括但不限于天蚕素(cecropin)、莱科毒素(lycotoxin)、摩西鱼毒素(paradaxin)、蟾蛤肽(buforin)、CPF、铃蟾抗菌肽(bombinin)样肽(BLP)、导管素(cathelicidin)、角毒素(ceratotoxin)、柄海鞘(S.clava)肽、盲鳗肠道抗微生物肽(HFIAP)、爪蟾素(magainin)、蛙皮抗菌肽(brevinin)-2、皮抗菌肽(dermaseptin)、蜂毒素(melittin)、美洲拟鲽素(pleurocidin)、H2A肽、非洲爪蟾肽、esculentinis-1和caerin。将优选考虑许多因素以维持螺旋稳定性的完整性。举例来说，将利用最大数目的螺旋稳定化残基(例如，leu、ala或lys)，并且将利用最小数目的螺旋去稳定化残基(例如，脯氨酸或环状单体单元。将考虑封端残基(例如Gly是示例性N-封端残基和/或可以使用C-末端酰胺化来提供额外的H-键以稳定螺旋。在由i+3或i+4位置隔开的具有相反电荷的残基之间形成盐桥可以提供稳定性。举例来说，如赖氨酸、精氨酸、高精氨酸、鸟氨酸或组氨酸等阳离子残基可以与阴离子残基谷氨酸或天冬氨酸形成盐桥。
肽和肽模拟物递送剂包括具有天然存在的或修饰的肽的那些，所述肽是例如D或L肽；α、β或γ肽；N-甲基肽；氮杂肽；有一个或多个酰胺(即，肽)键替换为一个或多个脲、硫脲、氨基甲酸酯或磺酰脲键的肽；或环肽。
靶向性药物递送剂可以是能够靶向特定受体的任何药物递送剂。实例是：叶酸、GalNAc、半乳糖、甘露糖、甘露糖-6P、糖簇如GalNAc簇、甘露糖簇、半乳糖簇或适体。簇是两个或更多个糖单元的组合。靶向性药物递送剂还包括整合素受体药物递送剂、趋化因子受体药物递送剂、转铁蛋白、生物素、血清素受体药物递送剂、PSMA、内皮素、GCPII、生长抑素、LDL和HDL药物递送剂。药物递送剂还可以基于核酸，例如适体。适体可能未经修饰或具有本文公开的修饰的任何组合。
核内体释放剂包括咪唑、聚咪唑或寡咪唑、PEI、肽、融合肽、聚羧酸盐、聚阳离子、掩蔽的寡阳离子或阴离子或者掩蔽的聚阳离子或阴离子、缩醛、聚缩醛、缩酮/聚缩酮、原酸酯、具有掩蔽或未掩蔽的阳离子或阴离子电荷的聚合物、具有掩蔽或未掩蔽的阳离子或阴离子电荷的树枝状聚合物。
药物递送剂可以是PK调节剂(药代动力学调节剂)。PK调节剂包括亲脂体、胆汁酸、类固醇、磷脂类似物、肽、蛋白质结合剂、PEG、维生素等。示例性PK调节剂包括但不限于胆固醇、脂肪酸、胆酸、石胆酸、二烷基甘油酯、二酰基甘油酯、磷脂、鞘脂、萘普生、布洛芬、维生素E、生物素等。
还已知包含许多硫代磷酸酯键的寡核苷酸结合至血清蛋白，因此在主链中包含多个硫代磷酸酯键的短寡核苷酸，例如具有约5个碱基、10个碱基、15个碱基或20个碱基的寡核苷酸也顺应于本发明，作为药物递送剂(例如，作为PK调节药物递送剂)。
另外，结合血清组分(例如血清蛋白)的适体也顺应于本公开，作为PK调节药物递送剂。
当药物递送剂包含两个或更多个部分，例如脂质与碳水化合物，例如脂质与肽的组合时，所述两个或更多个部分可以都具有相同的性质，都具有不同的性质，或者一些部分具有相同的性质，而其他部分具有不同的性质。举例来说，药物递送剂可以具有靶向性质、内渗活性和/或PK调节性质。举例来说，药物递送剂的一个部分可以是亲水性的，而另一个可以是疏水性的。在一些实施方案中，所述部分具有不同的性质。
药物递送剂和接头描述于US 7,745,608、US 7,626,014、US 8,034,921、US 2005/0164235和WO 2013/075035中。本文引用的所有专利、专利申请和公开全部以引用的方式整体并入。
以下实施方案方案中详细说明式(I)中各个符号的定义。
在一个实施方案中，部分结构：
是由式(IIA)表示的部分结构：
或由式(IIB)表示的部分结构：
在另一个实施方案中，部分结构：
是由式(IIA)表示的部分结构：
在另一个实施方案中，由式(IIA)表示的部分结构：
是由式(IIAa)表示的部分结构：
在另一个实施方案中，由式(IIA)表示的部分结构：
是由式(IIAb)表示的部分结构：
在另一个实施方案中，由式(IIB)表示的部分结构：
是由式(IIBa)表示的部分结构：
在另一个实施方案中，由式(IIB)表示的部分结构：
是由式(IIBb)表示的部分结构：
在另一个实施方案中，部分结构：
是
在另一个实施方案中，部分结构：
是
在另一个实施方案中，R1和R2各自独立地为羟基或卤素原子。
在另一个实施方案中，R1和R2各自独立地为羟基或氟原子。
在另一个实施方案中，R1是羟基。
在另一个实施方案中，R2是羟基或氟原子。
在另一个实施方案中，B1是由
表示的基团。
在另一个实施方案中，R13、R14、R15、R16和R17各自独立地为氢原子或取代基。
在另一个实施方案中，Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16各自独立地为N或CR1a。
在另一个实施方案中，Z11、Z12、Z13、Z14、Z15和Z16各自独立地为N或C。
在另一个实施方案中，R1a是氢原子或取代基。
在另一个实施方案中，R13是氢原子。
在另一个实施方案中，R14是氢原子或任选地取代的氨基。
在另一个实施方案中，R14是氢原子或氨基。
在另一个实施方案中，R14是氢原子。
在另一个实施方案中，R15优选是氢原子。
在另一个实施方案中，R13与R15都是氢原子，并且R14是氢原子或任选地取代的氨基(特别是氢原子或氨基)。
在另一个实施方案中，R13、R14和R15都是氢原子。
在另一个实施方案中，R16是氢原子。
在另一个实施方案中，R17是氢原子。
在另一个实施方案中，Y11是N。
在另一个实施方案中，Y12是N或CH。
在另一个实施方案中，Y12是N。
在另一个实施方案中，Y13是N或CR1a，其中R1a是卤素原子(例如，氟原子)。
在另一个实施方案中，Y13是N或CF。
在另一个实施方案中，Y13是CF。
在另一个实施方案中，Y11是N，Y12是N或CH，并且Y13是N或CR1a，其中R1a是卤素原子(例如，氟原子)。
在另一个实施方案中，Y11是N，Y12是N或CH，并且Y13是N或CF。
在另一个实施方案中，Y11是N，Y12是N，并且Y13是CF；Y11是N，Y12是N，并且Y13是N；或Y11是N，Y12是CH，并且Y13是N。
在另一个实施方案中，Y11是N，Y12是N，并且Y13是CF。
在另一个实施方案中，Y14是N。
在另一个实施方案中，Y15是N。
在另一个实施方案中，Y16是N或CR1a，其中R1a是卤素原子(例如，氟原子)。
在另一个实施方案中，Y16是N或CF。
在另一个实施方案中，Y16是N。
在另一个实施方案中，Y14是N，Y15是N，并且Y16是N或CR1a，其中R1a是卤素原子(例如，氟原子)。
在另一个实施方案中，Y14是N，Y15是N，并且Y16是N或CF。
在另一个实施方案中，Y14是N，Y15是N，并且Y16是N；或Y14是N，Y15是N，并且Y16是CF。
在另一个实施方案中，Y14是N，Y15是N，并且Y16是N。
在另一个实施方案中，Z11是C。
在另一个实施方案中，Z12是C。
在另一个实施方案中，Z13是N。
在另一个实施方案中，Z11是C，Z12是C，并且Z13是N。
在另一个实施方案中，Z14优选是C。
在另一个实施方案中，Z15优选是C。
在另一个实施方案中，Z16优选是N。
在另一个实施方案中，Z14是C，Z15是C，并且Z16是N。
在另一个实施方案中，B2是由
表示的基团。
在另一个实施方案中，R23、R24、R25、R26和R27各自独立地为氢原子或取代基。
在另一个实施方案中，Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26各自独立地为N或CR2a。
在另一个实施方案中，Z21、Z22、Z23、Z24、Z25和Z26各自独立地为N或C。
在另一个实施方案中，R2a是氢原子或取代基。
在另一个实施方案中，R23是氢原子。
在另一个实施方案中，R24是氢原子或任选地取代的氨基。
在另一个实施方案中，R24是氢原子或氨基。
在另一个实施方案中，R24是氢原子。
在另一个实施方案中，R25是氢原子。
在另一个实施方案中，R26是氢原子。
在另一个实施方案中，R27是氢原子。
在另一个实施方案中，Y21是N。
在另一个实施方案中，Y22是N。
在另一个实施方案中，Y23是N或CR2a，其中R2a是卤素原子(例如，氟原子)。
在另一个实施方案中，Y23是N或CF。
在另一个实施方案中，Y23是CF。
在另一个实施方案中，Y21是N，Y22是N，并且Y23是N或CR2a，其中R2a是卤素原子(例如，氟原子)。
在另一个实施方案中，Y21是N，Y22是N，并且Y23是N或CF。
在另一个实施方案中，Y21是N，Y22是N，并且Y23是CF；或Y21是N，Y22是N，并且Y23是N。
在另一个实施方案中，Y21是N，Y22是N，并且Y23是CF。
在另一个实施方案中，Y24是N。
在另一个实施方案中，Y25是N或CH。
在另一个实施方案中，Y25是N。
在另一个实施方案中，Y26是N或CR2a，其中R2a是卤素原子(例如，氟原子)。
在另一个实施方案中，Y26是N或CF。
在另一个实施方案中，Y26是N。
在另一个实施方案中，Y24是N，Y25是N或CH，并且Y26是N或CR2a，其中R2a是卤素原子(例如，氟原子)。
在另一个实施方案中，Y24是N，Y25是N或CH，并且Y26是N或CF。
在另一个实施方案中，Y24是N，Y25是N，并且Y26是N；Y24是N，Y25是N，并且Y26是CF；或Y24是N，Y25是CH，并且Y26是N。
在另一个实施方案中，Y24是N，Y25是N，并且Y26是N。
在另一个实施方案中，Z21是N或C。
在另一个实施方案中，Z21是C。
在另一个实施方案中，Z22是C。
在另一个实施方案中，Z23是N或C。
在另一个实施方案中，Z23是N。
在另一个实施方案中，Z21是N或C，Z22是C，并且Z23是N或C。
在另一个实施方案中，Z21是C，Z22是C，并且Z23是N；或Z21是N，Z22是C，并且Z23是C。
在另一个实施方案中，Z21是C，Z22是C，并且Z23是N。
在另一个实施方案中，Z24是N或C。
在另一个实施方案中，Z24是C。
在另一个实施方案中，Z25是C。
在另一个实施方案中，Z26是N或C。
在另一个实施方案中，Z26是N。
在另一个实施方案中，Z24是N或C，Z25是C，并且Z26是N或C。
在另一个实施方案中，Z24是C，Z25是C，并且Z26是N；或Z24是N，Z25是C，并且Z26是C。
在另一个实施方案中，Z24是C，Z25是C，并且Z26是N。
在另一个实施方案中，B1和B2各自独立地为
在另一个实施方案中，B1和B2中至少一个是
并且在这种情况下，另一个是
在另一个实施方案中，B1是
以及
B2是
在另一个实施方案中，
i)Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16中至少一个是CR1a，
ii)Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26中至少一个是CR2a，或者
iii)Z13、Z16、Z23和Z26中至少一个是C。
在另一个实施方案中，X1和X2各自独立地为氧原子或硫原子。
在另一个实施方案中，X1与X2都是氧原子。
在另一个实施方案中，Q1、Q2、Q3和Q4各自独立地为氧原子或硫原子。
在另一个实施方案中，Q1是氧原子。
在另一个实施方案中，Q3是氧原子。
在另一个实施方案中，Q1与Q3都是氧原子，并且Q2和Q4各自独立地为氧原子或硫原子。
在另一个实施方案中，Q1是氧原子，Q2是氧原子或硫原子，Q3是氧原子，并且Q4是氧原子或硫原子。
在另一个实施方案中，Q1是氧原子，Q2是硫原子，Q3是氧原子，并且Q4是硫原子。
在另一个实施方案中，化合物(I)是由式(Ia)表示的化合物：
其中部分结构：
是由式(IIAa)表示的部分结构：
或
由式(IIBa)表示的部分结构：
或其盐(下文中有时称为化合物(Ia))。
在另一个实施方案中，化合物(I)是由式(Ib)表示的化合物：
其中部分结构：
是由式(IIAb)表示的部分结构：
或
由式(IIBb)表示的部分结构：
或其盐(下文中有时称为化合物(Ib))。
化合物(I)的实例包括以下化合物。
化合物A1
化合物A1是具有式(I)的化合物，其中部分结构：
是由式(IIA)表示的部分结构：
R1是羟基；
R2是羟基或卤素原子(例如，氟原子)；
B1是由
表示的基团；
R13是氢原子；
R14是氢原子或任选地取代的氨基；
R15是氢原子；
R16是氢原子；
R17是氢原子；
Y11是N；
Y12是N或CH；
Y13是N或CR1a，其中R1a是卤素原子(例如，氟原子)；
Y14是N；
Y15是N；
Y16是N或CR1a，其中R1a是卤素原子(例如，氟原子)；
Z11是C；
Z12是C；
Z13是N；
Z14是C；
Z15是C；
Z16是N；
B2是由
表示的基团；
R23是氢原子；
R24是氢原子；
R25是氢原子；
R26是氢原子；
R27是氢原子；
Y21是N；
Y22是N；
Y23是N或CR2a，其中R2a是卤素原子(例如，氟原子)；
Y24是N；
Y25是N或CH；
Y26是N或CR2a，其中R2a是卤素原子(例如，氟原子)；
Z21是N或C；
Z22是C；
Z23是N或C；
Z24是N或C；
Z25是C；
Z26是N或C；
限制条件是
i)Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16中至少一个是CR1a，
ii)Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26中至少一个是CR2a，或者
iii)Z13、Z16、Z23和Z26中至少一个是C；
X1和X2各自独立地为氧原子或硫原子；以及
Q1、Q2、Q3和Q4各自独立地为氧原子或硫原子。
化合物B1
化合物B1是具有式(I)的化合物，其中部分结构：
是由式(IIA)表示的部分结构：
R1是羟基；
R2是羟基或氟原子；
B1是由
表示的基团；
R13是氢原子；
R14是氢原子或氨基；
R15是氢原子；
R16是氢原子；
R17是氢原子；
Y11是N；
Y12是N或CH；
Y13是N或CF；
(例如，Y11是N，Y12是N，并且Y13是CF；Y11是N，Y12是N，并且Y13是N；或Y11是N，Y12是CH，并且Y13是N)；
Y14是N；
Y15是N；
Y16是N或CF；
(例如，Y14是N，Y15是N，并且Y16是N；或Y14是N，Y15是N，并且Y16是CF)；
Z11是C；
Z12是C；
Z13是N；
Z14是C；
Z15是C；
Z16是N；
B2是由
表示的基团；
R23是氢原子；
R24是氢原子；
R25是氢原子；
R26是氢原子；
R27是氢原子；
Y21是N；
Y22是N；
Y23是N或CF；
(例如，Y21是N，Y22是N，并且Y23是CF；或Y21是N，Y22是N，并且Y23是N)；
Y24是N；
Y25是N或CH；
Y26是N或CF；
(例如，Y24是N，Y25是N，并且Y26是N；Y24是N，Y25是N，并且Y26是CF；或Y24是N，Y25是CH，并且Y26是N)；
Z21是N或C；
Z22是C；
Z23是N或C；
(例如，Z21是C，Z22是C，并且Z23是N；或Z21是N，Z22是C，并且Z23是C)；
Z24是N或C；
Z25是C；
Z26是N或C；
(例如，Z24是C，Z25是C，并且Z26是N；或Z24是N，Z25是C，并且Z26是C)
限制条件是
i)Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16中至少一个是CR1a，
ii)Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26中至少一个是CR2a，或者
iii)Z13、Z16、Z23和Z26中至少一个是C；
X1与X2都是氧原子；
Q1是氧原子；
Q2是氧原子或硫原子；
Q3是氧原子；以及
Q4是氧原子或硫原子。
化合物A1-a
化合物A1-a是具有式(Ia)的化合物，其中部分结构：
是由式(IIAa)表示的部分结构：
R1是羟基；
R2是羟基或卤素原子(优选氟原子)；
B1是由
表示的基团；
R13是氢原子；
R14是氢原子或任选地取代的氨基；
R15是氢原子；
R16是氢原子；
R17是氢原子；
Y11是N；
Y12是N或CH；
Y13是N或CR1a，其中R1a是卤素原子(例如，氟原子)；
Y14是N；
Y15是N；
Y16是N或CR1a，其中R1a是卤素原子(例如，氟原子)；
Z11是C；
Z12是C；
Z13是N；
Z14是C；
Z15是C；
Z16是N；
B2是由
表示的基团；
R23是氢原子；
R24是氢原子；
R25是氢原子；
R26是氢原子；
R27是氢原子；
Y21是N；
Y22是N；
Y23是N或CR2a，其中R2a是卤素原子(例如，氟原子)；
Y24是N；
Y25是N或CH；
Y26是N或CR2a，其中R2a是卤素原子(例如，氟原子)；
Z21是N或C；
Z22是C；
Z23是N或C；
Z24是N或C；
Z25是C；
Z26是N或C；
限制条件是
i)Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16中至少一个是CR1a，
ii)Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26中至少一个是CR2a，或者iii)Z13、Z16、Z23和Z26中至少一个是C；
X1和X2各自独立地为氧原子或硫原子；以及
Q1、Q2、Q3和Q4各自独立地为氧原子或硫原子。
化合物B1-a
化合物B1-a是具有式(Ia)的化合物，其中部分结构：
是由式(IIAa)表示的部分结构：
R1是羟基；
R2是羟基或氟原子；
B1是由
表示的基团；
R13是氢原子；
R14是氢原子或氨基；
R15是氢原子；
R16是氢原子；
R17是氢原子；
Y11是N；
Y12是N或CH；
Y13是N或CF；
(例如，Y11是N，Y12是N，并且Y13是CF；Y11是N，Y12是N，并且Y13是N；或Y11是N，Y12是CH，并且Y13是N)；
Y14是N；
Y15是N；
Y16是N或CF；
(例如，Y14是N，Y15是N，并且Y16是N；或Y14是N，Y15是N，并且Y16是CF)；
Z11是C；
Z12是C；
Z13是N；
Z14是C；
Z15是C；
Z16是N；
B2是由
表示的基团；
R23是氢原子；
R24是氢原子；
R25是氢原子；
R26是氢原子；
R27是氢原子；
Y21是N；
Y22是N；
Y23是N或CF；
(例如，Y21是N，Y22是N，并且Y23是CF；或Y21是N，Y22是N，并且Y23是N)；
Y24是N；
Y25是N或CH；
Y26是N或CF；
(例如，Y24是N，Y25是N，并且Y26是N；Y24是N，Y25是N，并且Y26是CF；或Y24是N，Y25是CH，并且Y26是N)；
Z21是N或C；
Z22是C；
Z23是N或C；
(例如，Z21是C，Z22是C，并且Z23是N；或Z21是N，Z22是C，并且Z23是C)；
Z24是N或C；
Z25是C；
Z26是N或C；
(例如，Z24是C，Z25是C，并且Z26是N；或Z24是N，Z25是C，并且Z26是C)；
限制条件是
i)Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16中至少一个是CR1a，
ii)Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26中至少一个是CR2a，或者
iii)Z13、Z16、Z23和Z26中至少一个是C；
X1与X2都是氧原子；
Q1是氧原子；
Q2是氧原子或硫原子；
Q3是氧原子；以及
Q4是氧原子或硫原子。
化合物A1-b
化合物A1-b是具有式(Ib)的化合物，其中部分结构：
是由式(IIAb)表示的部分结构：
R1是羟基；
R2是羟基或卤素原子(例如，氟原子)；
B1是由
表示的基团；
R13是氢原子；
R14是氢原子或任选地取代的氨基；
R15是氢原子；
R16是氢原子；
R17是氢原子；
Y11是N；
Y12是N或CH；
Y13是N或CR1a，其中R1a是卤素原子(例如，氟原子)；
Y14是N；
Y15是N；
Y16是N或CR1a，其中R1a是卤素原子(例如，氟原子)；
Z11是C；
Z12是C；
Z13是N；
Z14是C；
Z15是C；
Z16是N；
B2是由
表示的基团；
R23是氢原子；
R24是氢原子；
R25是氢原子；
R26是氢原子；
R27是氢原子；
Y21是N；
Y22是N；
Y23是N或CR2a，其中R2a是卤素原子(例如，氟原子)；
Y24是N；
Y25是N或CH；
Y26是N或CR2a，其中R2a是卤素原子(例如，氟原子)；
Z21是N或C；
Z22是C；
Z23是N或C；
Z24是N或C；
Z25是C；
Z26是N或C；
限制条件是
i)Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16中至少一个是CR1a，
ii)Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26中至少一个是CR2a，或者
iii)Z13、Z16、Z23和Z26中至少一个是C；
X1和X2各自独立地为氧原子或硫原子；以及
Q1、Q2、Q3和Q4各自独立地为氧原子或硫原子。
化合物B1-b
化合物B1-b是具有式(Ib)的化合物，其中部分结构：
是由式(IIAb)表示的部分结构：
R1是羟基；
R2是羟基或氟原子；
B1是由
表示的基团；
R13是氢原子；
R14是氢原子或氨基；
R15是氢原子；
R16是氢原子；
R17是氢原子；
Y11是N；
Y12是N或CH；
Y13是N或CF；
(例如，Y11是N，Y12是N，并且Y13是CF；Y11是N，Y12是N，并且Y13是N；或Y11是N，Y12是CH，并且Y13是N)；
Y14是N；
Y15是N；
Y16是N或CF；
(例如，Y14是N，Y15是N，并且Y16是N；或Y14是N，Y15是N，并且Y16是CF)；
Z11是C；
Z12是C；
Z13是N；
Z14是C；
Z15是C；
Z16是N；
B2是由
表示的基团；
R23是氢原子；
R24是氢原子；
R25是氢原子；
R26是氢原子；
R27是氢原子；
Y21是N；
Y22是N；
Y23是N或CF；
(例如，Y21是N，Y22是N，并且Y23是CF；或Y21是N，Y22是N，并且Y23是N)；
Y24是N；
Y25是N或CH；
Y26是N或CF；
(例如，Y24是N，Y25是N，并且Y26是N；Y24是N，Y25是N，并且Y26是CF；或Y24是N，Y25是CH，并且Y26是N)；
Z21是N或C；
Z22是C；
Z23是N或C；
(例如，Z21是C，Z22是C，并且Z23是N；或Z21是N，Z22是C，并且Z23是C)；
Z24是N或C；
Z25是C；
Z26是N或C；
(例如，Z24是C，Z25是C，并且Z26是N；或Z24是N，Z25是C，并且Z26是C)；
限制条件是
i)Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16中至少一个是CR1a；
ii)Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26中至少一个是CR2a；或
iii)Z13、Z16、Z23和Z26中至少一个是C；
X1与X2都是氧原子；
Q1是氧原子；
Q2是氧原子或硫原子；
Q3是氧原子；以及
Q4是氧原子或硫原子。
化合物A2
化合物A2是具有式(I)的化合物，其中部分结构：
是由式(IIA)表示的部分结构：
或由式(IIB)表示的部分结构：
R1是羟基；
R2是羟基或卤素原子(例如，氟原子)；
B1是由
表示的基团；
R13是氢原子；
R14是氢原子或任选地取代的氨基；
R15是氢原子；
R16是氢原子；
R17是氢原子；
Y11是N；
Y12是N或CH；
Y13是N或CR1a，其中R1a是卤素原子(例如，氟原子)；
Y14是N；
Y15是N；
Y16是N或CR1a，其中R1a是卤素原子(例如，氟原子)；
Z11是C；
Z12是C；
Z13是N；
Z14是C；
Z15是C；
Z16是N；
B2是由
表示的基团；R23是氢原子；
R24是氢原子或任选地取代的氨基；
R25是氢原子；
R26是氢原子；
R27是氢原子；
Y21是N；
Y22是N；
Y23是N或CR2a，其中R2a是卤素原子(例如，氟原子)；
Y24是N；
Y25是N或CH；
Y26是N或CR2a，其中R2a是卤素原子(例如，氟原子)；
Z21是N或C；
Z22是C；
Z23是N或C；
Z24是N或C；
Z25是C；
Z26是N或C；
限制条件是
i)Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16中至少一个是CR1a，
ii)Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26中至少一个是CR2a，或者
iii)Z13、Z16、Z23和Z26中至少一个是C；
X1和X2各自独立地为氧原子或硫原子；以及
Q1、Q2、Q3和Q4各自独立地为氧原子或硫原子。
化合物B2
化合物B2是具有式(I)的化合物，其中部分结构：
是由式(IIA)表示的部分结构：
或
由式(IIB)表示的部分结构：
R1是羟基；
R2是羟基或氟原子；
B1是由
表示的基团；
R13是氢原子；
R14是氢原子或氨基；
R15是氢原子；
R16是氢原子；
R17是氢原子；
Y11是N；
Y12是N或CH；
Y13是N或CF；
(例如，Y11是N，Y12是N，并且Y13是CF；Y11是N，Y12是N，并且Y13是N；或Y11是N，Y12是CH，并且Y13是N)；
Y14是N；
Y15是N；
Y16是N或CF；
(例如，Y14是N，Y15是N，并且Y16是N；或Y14是N，Y15是N，并且Y16是CF)；
Z11是C；
Z12是C；
Z13是N；
Z14是C；
Z15是C；
Z16是N；
B2是由
表示的基团；
R23是氢原子；
R24是氢原子或氨基；
R25是氢原子；
R26是氢原子；
R27是氢原子；
Y21是N；
Y22是N；
Y23是N或CF；
(例如，Y21是N，Y22是N，并且Y23是CF；或Y21是N，Y22是N，并且Y23是N)；
Y24是N；
Y25是N或CH；
Y26是N或CF；
(例如，Y24是N，Y25是N，并且Y26是N；Y24是N，Y25是N，并且Y26是CF；或Y24是N，Y25是CH，并且Y26是N)；
Z21是N或C；
Z22是C；
Z23是N或C；
(例如，Z21是C，Z22是C，并且Z23是N；或Z21是N，Z22是C，并且Z23是C)；
Z24是N或C；
Z25是C；
Z26是N或C；
(例如，Z24是C，Z25是C，并且Z26是N；或Z24是N，Z25是C，并且Z26是C)
限制条件是
i)Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16中至少一个是CR1a，
ii)Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26中至少一个是CR2a，或者
iii)Z13、Z16、Z23和Z26中至少一个是C；
X1与X2都是氧原子；
Q1是氧原子；
Q2是氧原子或硫原子；
Q3是氧原子；以及
Q4是氧原子或硫原子。
化合物A2-a
化合物A2-a是具有式(Ia)的化合物，其中部分结构：
是由式(IIAa)表示的部分结构：
或
由式(IIBa)表示的部分结构：
R1是羟基；
R2是羟基或卤素原子(例如，氟原子)；
B1是由
表示的基团；
R13是氢原子；
R14是氢原子或任选地取代的氨基；
R15是氢原子；
R16是氢原子；
R17是氢原子；
Y11是N；
Y12是N或CH；
Y13是N或CR1a，其中R1a是卤素原子(例如，氟原子)；
Y14是N；
Y15是N；
Y16是N或CR1a，其中R1a是卤素原子(例如，氟原子)；
Z11是C；
Z12是C；
Z13是N；
Z14是C；
Z15是C；
Z16是N；
B2是由
表示的基团；
R23是氢原子；
R24是氢原子或任选地取代的氨基；
R25是氢原子；
R26是氢原子；
R27是氢原子；
Y21是N；
Y22是N；
Y23是N或CR2a，其中R2a是卤素原子(例如，氟原子)；
Y24是N；
Y25是N或CH；
Y26是N或CR2a，其中R2a是卤素原子(例如，氟原子)；
Z21是N或C；
Z22是C；
Z23是N或C；
Z24是N或C；
Z25是C；
Z26是N或C；
限制条件是
i)Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16中至少一个是CR1a，
ii)Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26中至少一个是CR2a，或者
iii)Z13、Z16、Z23和Z26中至少一个是C；
X1和X2各自独立地为氧原子或硫原子；以及
Q1、Q2、Q3和Q4各自独立地为氧原子或硫原子。
化合物B2-a
化合物B2-a是具有式(I)的化合物，其中部分结构：
是由式(IIAa)表示的部分结构：
或
由式(IIBa)表示的部分结构：
R1是羟基；
R2是羟基或氟原子；
B1是由
表示的基团；
R13是氢原子；
R14是氢原子或氨基；
R15是氢原子；
R16是氢原子；
R17是氢原子；
Y11是N；
Y12是N或CH；
Y13是N或CF；
(例如，Y11是N，Y12是N，并且Y13是CF；Y11是N，Y12是N，并且Y13是N；或Y11是N，Y12是CH，并且Y13是N)；
Y14是N；
Y15是N；
Y16是N或CF；
(例如，Y14是N，Y15是N，并且Y16是N；或Y14是N，Y15是N，并且Y16是CF)；
Z11是C；
Z12是C；
Z13是N；
Z14是C；
Z15是C；
Z16是N；
B2是由
表示的基团；
R23是氢原子；
R24是氢原子或氨基；
R25是氢原子；
R26是氢原子；
R27是氢原子；
Y21是N；
Y22是N；
Y23是N或CF；
(例如，Y21是N，Y22是N，并且Y23是CF；或Y21是N，Y22是N，并且Y23是N)；
Y24是N；
Y25是N或CH；
Y26是N或CF；
(例如，Y24是N，Y25是N，并且Y26是N；Y24是N，Y25是N，并且Y26是CF；或Y24是N，Y25是CH，并且Y26是N)；
Z21是N或C；
Z22是C；
Z23是N或C；
(例如，Z21是C，Z22是C，并且Z23是N；或Z21是N，Z22是C，并且Z23是C)；
Z24是N或C；
Z25是C；
Z26是N或C；
(例如，Z24是C，Z25是C，并且Z26是N；或Z24是N，Z25是C，并且Z26是C)；
限制条件是
i)Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16中至少一个是CR1a，
ii)Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26中至少一个是CR2a，或者
iii)Z13、Z16、Z23和Z26中至少一个是C；
X1与X2都是氧原子；
Q1是氧原子；
Q2是氧原子或硫原子；
Q3是氧原子；以及
Q4是氧原子或硫原子。
化合物A2-b
化合物A2-b是具有式(Ib)的化合物，其中部分结构：
是由式(IIAb)表示的部分结构：
或
由式(IIBb)表示的部分结构：
R1是羟基；
R2是羟基或卤素原子(例如，氟原子)；
B1是
表示的基团；
R13是氢原子；
R14是氢原子或任选地取代的氨基；
R15是氢原子；
R16是氢原子；
R17是氢原子；
Y11是N；
Y12是N或CH；
Y13是N或CR1a，其中R1a是卤素原子(例如，氟原子)；
Y14是N；
Y15是N；
Y16是N或CR1a，其中R1a是卤素原子(例如，氟原子)；
Z11是C；
Z12是C；
Z13是N；
Z14是C；
Z15是C；
Z16是N；
B2是由
表示的基团；
R23是氢原子；
R24是氢原子或任选地取代的氨基；
R25是氢原子；
R26是氢原子；
R27是氢原子；
Y21是N；
Y22是N；
Y23是N或CR2a，其中R2a是卤素原子(例如，氟原子)；
Y24是N；
Y25是N或CH；
Y26是N或CR2a，其中R2a是卤素原子(例如，氟原子)；
Z21是N或C；
Z22是C；
Z23是N或C；
Z24是N或C；
Z25是C；
Z26是N或C；
限制条件是
i)Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16中至少一个是CR1a，
ii)Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26中至少一个是CR2a，或者iii)Z13、Z16、Z23和Z26中至少一个是C；
X1和X2各自独立地为氧原子或硫原子；以及
Q1、Q2、Q3和Q4各自独立地为氧原子或硫原子。
化合物B2-b
化合物B2-b是具有式(Ib)的化合物，其中部分结构：
是由式(IIAb)表示的部分结构：
或
由式(IIBb)表示的部分结构：
R1是羟基；
R2是羟基或氟原子；
B1是由
表示的基团；
R13是氢原子；
R14是氢原子或氨基；
R15是氢原子；
R16是氢原子；
R17是氢原子；
Y11是N；
Y12是N或CH；
Y13是N或CF；
(例如，Y11是N，Y12是N，并且Y13是CF；Y11是N，Y12是N，并且Y13是N；或Y11是N，Y12是CH，并且Y13是N)；
Y14是N；
Y15是N；
Y16是N或CF；
(例如，Y14是N，Y15是N，并且Y16是N；或Y14是N，Y15是N，并且Y16是CF)；
Z11是C；
Z12是C；
Z13是N；
Z14是C；
Z15是C；
Z16是N；
B2是由
表示的基团；
R23是氢原子；
R24是氢原子或氨基；
R25是氢原子；
R26是氢原子；
R27是氢原子；
Y21是N；
Y22是N；
Y23是N或CF；
(例如，Y21是N，Y22是N，并且Y23是CF；或Y21是N，Y22是N，并且Y23是N)；
Y24是N；
Y25是N或CH；
Y26是N或CF；
(例如，Y24是N，Y25是N，并且Y26是N；Y24是N，Y25是N，并且Y26是CF；或Y24是N，Y25是CH，并且Y26是N)；
Z21是N或C；
Z22是C；
Z23是N或C；
(例如，Z21是C，Z22是C，并且Z23是N；或Z21是N，Z22是C，并且Z23是C)
Z24是N或C；
Z25是C；
Z26是N或C；
(例如，Z24是C，Z25是C，并且Z26是N；或Z24是N，Z25是C，并且Z26是C)
限制条件是
i)Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16中至少一个是CR1a，
ii)Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26中至少一个是CR2a，或者
iii)Z13、Z16、Z23和Z26中至少一个是C；
X1与X2都是氧原子；
Q1是氧原子；
Q2是氧原子或硫原子；
Q3是氧原子；以及
Q4是氧原子或硫原子。
化合物C2
化合物C2是具有式(I)的化合物，其中部分结构：
是由式(IIA)表示的部分结构：
或
由式(IIB)表示的部分结构：
R1是羟基；
R2是羟基或氟原子；
B1和B2各自独立地为
以及
B1和B2中至少一个是
并且例如，另一个是
X1与X2都是氧原子；
Q1是氧原子；
Q2是氧原子或硫原子；
Q3是氧原子；以及
Q4是氧原子或硫原子。
化合物C2-a
化合物C2-a是具有式(Ia)的化合物，其中部分结构：
是由式(IIAa)表示的部分结构：
或
由式(IIBa)表示的部分结构：
R1是羟基；
R2是羟基或氟原子；
B1和B2各自独立地为
以及
B1和B2中至少一个是
并且例如，另一个是
X1与X2都是氧原子；
Q1是氧原子；
Q2是氧原子或硫原子；
Q3是氧原子；以及
Q4是氧原子或硫原子。
化合物C2-b
化合物C2-b是具有式(Ib)的化合物，其中部分结构：
是由式(IIAb)表示的部分结构：
或
由式(IIBb)表示的部分结构：
R1是羟基；
R2是羟基或氟原子；
B1和B2各自独立地为
以及
B1和B2中至少一个是
并且例如，另一个是
X1与X2都是氧原子；
Q1是氧原子；
Q2是氧原子或硫原子；
Q3是氧原子；以及
Q4是氧原子或硫原子。
化合物D2
化合物D2是具有式(I)的化合物，其中部分结构：
是由式(IIA)表示的部分结构：
或
由式(IIB)表示的部分结构：
R1是羟基；
R2是羟基或氟原子；
B1是由
表示的基团；
B2是由
表示的基团；
X1与X2都是氧原子；
Q1是氧原子；
Q2是氧原子或硫原子；
Q3是氧原子；以及
Q4是氧原子或硫原子。
化合物D2-a
化合物D2-a是具有式(Ia)的化合物，其中部分结构：
是由式(IIAa)表示的部分结构：
或
由式(IIBa)表示的部分结构：
R1是羟基；
R2是羟基或氟原子；
B1是由
表示的基团；
B2是由
表示的基团；
X1与X2都是氧原子；
Q1是氧原子；
Q2是氧原子或硫原子；
Q3是氧原子；以及
Q4是氧原子或硫原子。
化合物D2-b
化合物D2-b是具有式(Ib)的化合物，其中部分结构：
是由式(IIAb)表示的部分结构：
或
由式(IIBb)表示的部分结构：
R1是羟基；
R2是羟基或氟原子；
B1是由
表示的基团；
B2是由
表示的基团；
X1与X2都是氧原子；
Q1是氧原子；
Q2是氧原子或硫原子；
Q3是氧原子；以及
Q4是氧原子或硫原子。
化合物(I)的具体实例包括实施例1至实施例20以及实施例3a的化合物。
当化合物(I)呈盐形式时，所述盐优选为药理学上可接受的盐。实例包括与无机碱的盐、与有机碱的盐、与无机酸的盐、与有机酸的盐和与碱性或酸性氨基酸的盐。
与无机碱的盐的优选实例包括碱金属盐，如钠盐、钾盐等等；碱土金属盐，如钙盐、镁盐等等；铝盐和铵盐。
与有机碱的盐的优选实例包括与三甲胺、三乙胺、吡啶、甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、缓血酸胺[三(羟甲基)甲胺]、叔丁胺、环己胺、苯甲胺、二环己胺和N,N-二苯甲基乙二胺的盐。
与无机酸的盐的优选实例包括与盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸和磷酸的盐。
与有机酸的盐的优选实例包括与甲酸、乙酸、三氟乙酸、邻苯二甲酸、富马酸、草酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、甲磺酸、苯磺酸和对甲苯磺酸的盐。
与碱性氨基酸的盐的优选实例包括与精氨酸、赖氨酸和鸟氨酸的盐。
与酸性氨基酸的盐的优选实例包括与天冬氨酸和谷氨酸的盐。
当化合物(I)呈盐形式时，该盐优选为与三乙胺或钠的盐，更优选为与三乙胺的盐。
以下说明本发明化合物的制造方法。
以下制造方法中的各个步骤中所使用的原材料化合物和试剂以及所获得的化合物可以各自呈盐形式，并且此类盐的实例包括与本公开的化合物的盐类似的那些盐。
当各个步骤中所获得的化合物是游离形式时，可以根据本身已知的方法将其转化成目标盐。当各个步骤中所获得的化合物是盐时，可以根据本身已知的方法将其转化成目标游离形式或其他盐。
各个步骤中所获得的化合物可以呈反应混合物形式或呈粗产物形式直接用于下一反应。可选地，各个步骤中所获得的化合物可以根据本身已知的方法，举例来说，如浓缩、结晶、再结晶、蒸馏、溶剂提取、分馏、柱色谱等分离手段从反应混合物中分离并纯化。
当各个步骤中所使用的原材料化合物和试剂可购自市面时，还可以直接使用市售产品。
除非另外规定，否则在各个步骤中的反应中，尽管反应时间取决于将要使用的试剂和溶剂的种类而变化，但其一般是1分钟至48小时，优选10分钟至8小时。
除非另外规定，否则在各个步骤中的反应中，尽管反应温度取决于将要使用的试剂和溶剂的种类而变化，但其一般是-78℃至300℃，优选-78℃至150℃。
除非另外规定，否则在各个步骤中的反应中，尽管压力取决于将要使用的试剂和溶剂的种类而变化，但其一般是1atm至20atm，优选1atm至3atm。
微波合成仪，如由Biotage制造的Initiator可以用于各个步骤中的反应。除非另外规定，否则尽管反应温度取决于将要使用的试剂和溶剂的种类而变化，但其一般是室温至300℃，优选50℃至250℃。除非另外规定，否则尽管反应时间取决于将要使用的试剂和溶剂的种类而变化，但其一般是1分钟至48小时，优选1分钟至8小时。
除非另外规定，否则在各个步骤中的反应中，试剂相对于基质以0.5当量至20当量、优选0.8当量至5当量的量使用。当试剂用作催化剂时，试剂相对于基质以0.001当量至1当量、优选0.01当量至0.2当量的量使用。当试剂用作反应溶剂时，试剂以溶剂量使用。除非另外规定，否则各个步骤中的反应在无溶剂的情况下或通过将原材料化合物溶解或悬浮在合适的溶剂中来进行。溶剂的实例包括实施例中所描述的那些溶剂和以下溶剂。
醇：甲醇、乙醇、叔丁醇、2-甲氧基乙醇等等；
醚：乙醚、二苯醚、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷等等；
芳香烃：氯苯、甲苯、二甲苯等等；
饱和烃：环己烷、己烷等等；
酰胺：N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮等等；
卤化烃：二氯甲烷、四氯化碳等等；
腈：乙腈等等；
亚砜：二甲亚砜等等；
芳香有机碱：吡啶等等；
酸酐：乙酸酐等等；
有机酸：甲酸、乙酸、三氟乙酸等等；
无机酸：盐酸、硫酸等等；
酯：乙酸乙酯等等；
酮：丙酮、甲基乙基酮等等；
水。
以上提到的溶剂可以呈其中两种或更多种的适当比率的混合物的形式加以使用。
当碱用于各个步骤中的反应时，其实例包括实施例中所描述的那些碱和以下碱。
无机碱：氢氧化钠、氢氧化镁、碳酸钠、碳酸钙、碳酸氢钠等等；
有机碱：三乙胺、二乙胺、吡啶、4-二甲基氨基吡啶、N,N-二甲基苯胺、1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷、1,8-二氮杂双环[5.4.0]-7-十一烯、咪唑、哌啶等等；
金属醇盐：乙醇钠、叔丁醇钾等等；
碱金属氢化物：氢化钠等等；
氨基金属：氨基钠、二异丙基氨基锂、六甲基二硅烷基氨基锂等等；
有机锂：正丁基锂等等。
当酸或酸催化剂用于各个步骤中的反应时，其实例包括实施例中所描述的那些以及以下酸和酸催化剂。
无机酸：盐酸、硫酸、硝酸、氢溴酸、磷酸等等；
有机酸：乙酸、三氟乙酸、柠檬酸、对甲苯磺酸、10-樟脑磺酸等等；
路易斯酸：三氟化硼乙醚复合物、碘化锌、无水氯化铝、无水氯化锌、无水氯化铁等等。
除非另外规定，否则各个步骤中的反应是根据本身已知的方法来进行，例如以下文献中所描述的方法：Jikken Kagaku Kouza,第5版,第13-19卷(日本化学学会编)；ShinJikken Kagaku Kouza,第14-15卷(日本化学学会编)；Fine Organic Chemistry,修订版第2版(L.F.Tietze,Th.Eicher,Nankodo)；Organic Name Reactions,the ReactionMechanism and Essence,修订版(Hideo Togo,Kodansha)；ORGANIC SYNTHESES丛书第I-VII卷(John Wiley&Sons Inc)；Modern Organic Synthesis in the Laboratory ACollection of Standard Experimental Procedures(Jie Jack Li,OXFORDUNIVERSITY)；Comprehensive Heterocyclic Chemistry III,第1卷至第14卷(ElsevierJapan)；Strategic Applications of Named Reactions in Organic Synthesis(由Kiyoshi Tomioka,Kagakudojin翻译)；Comprehensive Organic Transformations(VCHPublishers Inc.),1989；等等，或实施例中所描述的方法。
在各个步骤中，官能团的保护或脱保护反应是根据本身已知的方法来进行，例如以下文献中所描述的方法：“Protective Groups in Organic Synthesis,第4版”,Wiley-Interscience,Inc.,2007(Theodora W.Greene,Peter G.M.Wuts)；“Protecting Groups第3版”Thieme,2004(P.J.Kocienski)；等等，或实施例中所描述的方法。
羟基(例如醇等的羟基、酚羟基)的保护基的实例包括醚型保护基，如甲氧基甲基醚、苯甲基醚、叔丁基二甲基硅烷基醚、四氢哌喃基醚等等；羧酸酯型保护基，如乙酸酯等等；磺酸酯型保护基，如甲磺酸酯等等；以及碳酸酯型保护基，如叔丁基碳酸酯等等。
醛的羰基的保护基的实例包括缩醛型保护基，如二甲基乙缩醛等等；以及环状缩醛型保护基，如1,3-二噁烷等等。
酮的羰基的保护基的实例包括缩酮型保护基，如二甲基缩酮等等；环状缩酮型保护基，如1,3-二噁烷等等；肟型保护基，如O-甲基肟等等；以及腙型保护基，如N,N-二甲基腙等等。
羧基保护基的实例包括酯型保护基，如甲酯等等；以及酰胺型保护基，如N,N-二甲基酰胺等等。
硫醇保护基的实例包括醚型保护基，如苯甲基硫醚等等；以及酯型保护基，如硫代乙酸酯、硫代碳酸酯、硫代氨基甲酸酯等等。
氨基以及芳香杂环如咪唑、吡咯、吲哚等等的保护基的实例包括氨基甲酸酯型保护基，如氨基甲酸苯甲酯等等；酰胺型保护基，如乙酰胺、苯甲酰胺、异丁酰胺等等；烷基胺型保护基，如N-三苯基甲胺等等；以及磺酰胺型保护基，如甲磺酰胺等等。
保护基可以根据本身已知的方法(例如，使用酸、碱、紫外线、肼、苯肼、N-甲基二硫代氨基甲酸钠、四丁基氟化铵、乙酸钯或三烷基卤化硅烷(例如，三甲基碘硅烷、三甲基溴硅烷)的方法、还原法)来去除。
当各个步骤中进行还原反应时，将要使用的还原剂的实例包括金属氢化物，如氢化铝锂、三乙酰氧基硼氢化钠、氰基硼氢化钠、氢化二异丁基铝(DIBAL-H)、硼氢化钠、四甲基三乙酰氧基硼氢化铵等等；硼烷，如硼烷四氢呋喃复合物等等；雷氏(Raney)镍；雷氏钴；氢气；甲酸；三乙基硅烷等等。当还原碳-碳双键或三键时，可以采用使用如钯-碳、林德拉氏(Lindlar's)催化剂等催化剂的方法。
当各个步骤中进行氧化反应时，将要使用的氧化剂的实例包括过氧化物，如间氯过苯甲酸(mCPBA)、过氧化氢、叔丁基过氧化氢等等；高氯酸盐，如四丁基高氯酸铵等等；氯酸盐，如氯酸钠等等；亚氯酸盐，如亚氯酸钠等等；高碘酸，如高碘酸钠等等；高价碘试剂，如氧碘基苯等等；含锰试剂，如二氧化锰、高锰酸钾等等；铅，如四乙酸铅等等；含铬试剂，如氯铬酸吡啶(PCC)、重铬酸吡啶(PDC)、琼斯试剂(Jones reagent)等等；卤素化合物，如N-溴丁二酰亚胺(NBS)等等；氧气；臭氧；硫三氧负离子基-吡啶复合物；四氧化锇；二氧化硒；2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(DDQ)等等。
当各个步骤中进行自由基环化反应时，将要使用的自由基引发剂的实例包括偶氮化合物，如偶氮二异丁腈(AIBN)等等；水溶性自由基引发剂，如4,4'-偶氮二-4-氰基戊酸(ACPA)等等；存在空气或氧气的三乙基硼；过氧化苯甲酰等等。将要使用的自由基试剂的实例包括三丁基锡烷、三(三甲基硅基)硅烷、1,1,2,2-四苯基二硅烷、二苯基硅烷、碘化钐等等。
当各个步骤中进行威悌反应(Wittig reaction)时，将要使用的威悌试剂的实例包括亚烷基磷烷等等。亚烷基磷烷可以根据本身已知的方法，例如通过使膦酸盐与强碱反应来制备。
当各个步骤中进行霍纳-艾蒙斯反应(Horner-Emmons reaction)时，将要使用的试剂的实例包括膦酰基乙酸酯，如二甲基膦酰基乙酸甲酯、二乙基膦酰基乙酸乙酯等等；以及碱，如碱金属氢化物、有机锂等等。
当各个步骤中进行傅列德尔-克拉夫茨反应(Friedel-Crafts reaction)时，将要使用的试剂的实例包括路易斯酸与酰氯的组合或路易斯酸与烷基化剂(例如，烷基卤化物、醇、烯烃)的组合。可选地，还可以使用有机酸或无机酸来代替路易斯酸，并且还可以使用如乙酸酐等酸酐来代替酰氯。
当各个步骤中进行芳香亲核取代反应时，使用亲核试剂(例如，胺、咪唑)和碱(例如，有机碱)作为试剂。
当各个步骤中通过碳阴离子进行亲核性加成反应、通过碳阴离子进行亲核性1,4-加成反应(迈克尔加成反应)或通过碳阴离子进行亲核性取代反应时，将要用于产生碳阴离子的碱的实例包括有机锂、金属醇盐、无机碱、有机碱等等。
当各个步骤中进行格任亚试剂(Grignard reagent)时，将要使用的格任亚试剂的实例包括芳基卤化镁，如苯基溴化镁等等；烷基卤化镁，如甲基溴化镁等等；等等。格任亚试剂可以根据本身已知的方法，例如，通过使烷基卤化物或芳基卤化物与金属镁在作为溶剂的乙醚或四氢呋喃中反应来制备。
当各个步骤中进行克诺维纳盖尔缩合反应(Knoevenagel condensationreaction)时，使用具有活性亚甲基与两个吸电子基团的化合物(例如，丙二酸、丙二酸二乙酯、丙二腈等)和碱(例如，有机碱、金属醇盐、无机碱)作为试剂。
当各个步骤中进行维尔斯迈尔-哈克反应(Vilsmeier-Haack reaction)时，使用磷酰氯和酰胺衍生物(例如，N,N-二甲基甲酰胺等)作为试剂。
当各个步骤中进行醇、烷基卤化物或磺酸酯的叠氮化反应时，将要使用的叠氮化试剂的实例包括叠氮化磷酸二苯酯(DPPA)、叠氮化三甲基硅烷、叠氮化钠等等。举例来说，对于醇的叠氮化反应，采用使用叠氮化磷酸二苯酯和1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)的方法、使用叠氮化三甲基硅烷和路易斯酸的方法等等。
当各个步骤中进行还原胺化反应时，将要使用的还原剂的实例包括三乙酰氧基硼氢化钠、氰基硼氢化钠、氢气和甲酸。当基质是胺化合物时，将要使用的羰基化合物的实例包括聚甲醛；醛，如乙醛等等；以及酮，如环己酮等等。当基质是羰基化合物时，将要使用的胺的实例包括氨；一级胺，如甲胺等等；二级胺，如二甲胺等等；等等。
当各个步骤中进行光延反应(Mitsunobu reaction)时，使用偶氮二羧酸酯(例如偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)等)作为试剂。
当各个步骤中进行酯化反应、酰胺化反应或脲化反应时，将要使用的试剂的实例包括酰基卤化物，如酰氯、酰溴等等；活性羧酸，如酸酐、活性酯、硫酸酯等等。羧酸激活剂的实例包括碳化二亚胺缩合剂，如1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(WSCD)等等；三嗪缩合剂，如4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化吗啉n水合物(DMT-MM)等等；碳酸酯缩合剂，如1,1-羰基二咪唑(CDI)等等；叠氮化磷酸二苯酯(DPPA)；苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基膦酸)盐(BOP试剂)；2-氯-1-甲基-碘化吡啶(向山试剂(Mukaiyama reagent))；亚硫酰氯；卤代甲酸低碳烷基酯，如氯甲酸乙酯等等；O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸脲(HATU)；硫酸；其组合等等。当使用碳化二亚胺缩合剂时，可向反应系统中加入如1-羟基苯并三唑(HOBt)、N-羟基丁二酰亚胺(HOSu)、二甲基氨基吡啶(DMAP)等添加剂。
当各个步骤中进行偶合反应时，将要使用的金属催化剂的实例包括钯化合物，如乙酸钯(II)、四(三苯膦)钯(0)、二氯双(三苯膦)钯(II)、二氯双(三乙膦)钯(II)、三(二亚苯甲基丙酮)二钯(0)、1,1'-双(二苯膦)二茂铁氯化钯(II)等等；镍化合物，如四(三苯膦)镍(0)等等；铑化合物，如三(三苯膦)氯化铑(III)等等；钴化合物；铜化合物，如氧化铜、碘化铜(I)等等；铂化合物等等。另外，可以向反应系统中加入碱，并且其实例包括无机碱等等。
当各个步骤中进行硫羰基化反应时，典型地使用五硫化二磷作为硫羰基化剂。可选地，还可以使用具有1,3,2,4-二硫杂二磷杂环丁烷-2,4-二硫化物结构的试剂(例如，2,4-双(4-甲氧基苯基)-1,3,2,4-二硫杂二磷杂环丁烷-2,4-二硫化物(劳氏试剂(Lawessonreagent))等)来代替五硫化二磷。
当各个步骤中进行沃尔-齐格勒反应(Wohl-Ziegler reaction)时，将要使用的卤化剂的实例包括N-碘代丁二酰亚胺、N-溴代丁二酰亚胺(NBS)、N-氯代丁二酰亚胺(NCS)、溴、磺酰氯等等。另外，可以通过使如热、光、过氧化苯甲酰、偶氮二异丁腈等等的自由基引发剂经历反应系统反应而使反应加速。
当各个步骤中进行羟基卤化反应时，将要使用的卤化剂的实例包括氢卤酸以及无机酸的酸卤化物，具体来说，用于氯化的盐酸、亚硫酰氯、磷酰氯等等、用于溴化的48％氢溴酸等等。另外，可以采用通过使醇与三苯膦和四氯化碳或四溴化碳等反应来产生烷基卤化物的方法。可选地，还可以采用经由两个步骤产生烷基卤化物的方法，所述方法包括将醇转化成相应磺酸酯，然后使磺酸酯与溴化锂、氯化锂或碘化钠反应。
当各个步骤中进行阿尔布佐夫反应(Arbuzov reaction)时，将要使用的试剂的实例包括烷基卤化物，如溴乙酸乙酯等等；亚磷酸酯，如亚磷酸三乙酯、亚磷酸三(异丙基)酯等等；等等。
当各个步骤中进行磺酸酯酯化反应时，将要使用的磺酸酯化剂的实例包括甲磺酰氯、对甲苯磺酰氯、甲磺酸酐、对甲苯磺酸酐等等。
当各个步骤中进行水解反应时，使用酸或碱作为试剂。酸的实例包括2,2,2-三氟乙酸吡啶。对于叔丁基酯的酸水解反应，可以加入甲酸、三乙基硅烷等等以还原性地捕获副产物叔丁基阳离子。
当各个步骤中进行脱水反应时，将要使用的脱水剂的实例包括硫酸、五氧化二磷、磷酰氯、N,N'-二环己基碳二亚胺、氧化铝、聚磷酸等等。
各个步骤中将要使用的羟基保护基的实例包括醚型保护基，如双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲醚等等，以及以上例示的那些羟基保护基。
各个步骤中将要使用的氨基保护基的实例包括脒型保护基，如N,N-二甲基甲脒等等，以及以上例示的那些氨基保护基。
各个步骤中的脱保护反应还可以使用乙酸、1,1,1,3,3,3-六氟丙-2-醇、三氢氟酸三乙胺、甲胺、2-甲基丙-2-胺或氢氟酸-吡啶、三氟乙酸来代替以上例示的那些试剂来进行。
当各个步骤中进行重排反应时，将要使用的试剂的实例包括碱，如三乙胺等等。
当各个步骤中进行氨基磷酸酯反应时，使用氨基磷酸酯化剂(例如亚磷酰二胺，如3-((双(二异丙基氨基)膦基)氧)丙腈等等；氯代氨基磷酸酯，如二异丙基氯代氨基磷酸2-氰基乙基酯等等)和碱(例如，有机碱)作为试剂。
当各个步骤中进行硫代氨基磷酸酯反应时，使用硫代氨基磷酸酯化剂(例如，二丙-2-基氯代硫代氨基磷酸2-氰基乙基酯)和碱(例如，有机碱)作为试剂。
当各个步骤中进行H-膦酸化反应时，将要使用的H-膦酸化剂的实例包括亚磷酸二苯酯等等。
当各个步骤中进行H-硫代膦酸化反应时，将要使用的H-硫代膦酸化剂的实例包括如亚磷酸二苯酯等激活剂与如硫化锂等硫原子源的组合等等。
当各个步骤中进行缩合反应时，将要使用的激活剂的实例包括2,2,2-三氟乙酸吡啶、1H-四唑、5-(乙基硫烷基)-1H-四唑(下文有时称为5-(乙基硫烷基)-2H-四唑)等等。
当各个步骤中进行氧化反应时，将要使用的氧化剂的实例包括一般用于合成核酸的卤素(如碘等等)等等，以及以上例示的那些氧化剂。
当各个步骤中进行硫化反应时，将要使用的硫化剂的实例包括3H-苯并[c][1,2]二硫醇-3-酮、3H-苯并[c][1,2]二硫醇-3-酮1,1-二氧化物、((二甲基氨基-亚甲基)氨基)-3H-1,2,4-二噻唑啉-3-硫酮等等。另外，举例来说，硫-2,6-二甲基吡啶悬浮液、硫-二硫化碳溶液、二硫化四甲基秋兰姆(tetramethylthiuram disulfide，TETD)(H.Vu等,Tetrahedron Lett.,32,3005-3008(1991))、Beauge氏试剂(R.P.Lyer等,J.Am.Chem.Soc.,112,1253-1254(1990))和劳氏试剂也可以用于硫化反应。此外，作为形成二硫代磷酸酯结构的方法，可以使用Marshall等的文献(Science 259:1564-1570,1993)以及Caruthers和Nielsen等的文献(WO1989/011486)作为参考。
当各个步骤中进行环化反应时，将要使用的激活剂的实例包括2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物、新戊酰氯、六氟磷酸2-(苯甲酰基三唑-1-基氧)-1,3-二甲基-2-吡咯烷-1-基-1,3,2-二氮杂磷杂环戊烷(BOMP)、N,N-双(2-噁唑烷基)膦酰氯(BopCl)、焦磷酸等等。当不使用激活剂时，可以在加热下进行反应。另外，可以向反应系统中加入碱。碱的实例包括有机碱等等。
当各个步骤中进行核碱基与核糖之间的成键反应时，将要使用的激活剂的实例包括N-(三甲基硅烷基)乙酰亚胺三甲基硅烷基酯、三氟甲磺酸三甲基硅烷基酯等等。
当部分结构：
是由式(IIA)表示的部分结构：
时，
可以根据以下方法，由化合物(1a)或化合物(1b)和化合物(2a)或化合物(2b)制造化合物(IA)。
其中PGa是羟基保护基，并且其他符号如以上所定义。
可选地，当部分结构：
是由式(IIA)表示的部分结构时，还可以根据以下方法，由化合物(8a)或化合物(8b)和化合物(9a)或化合物(9b)制造化合物(IA)。
其中PGb是羟基保护基，并且其他符号如以上所定义。
当部分结构：
是由式(IIB)表示的部分结构时：
可以根据以下方法，由化合物(15a)或化合物(15b)和化合物(2a)或化合物(2b)制造化合物(IB)。
其中各个符号如以上所定义。
可选地，当部分结构：
是由式(IIB)表示的部分结构时，还可以根据以下方法，由化合物(8a)或化合物(8b)和化合物(21a)或化合物(21b)制造化合物(IB)。
其中PGc是羟基保护基，并且其他符号如以上所定义。
羟基保护基PGa、PGb或PGc的优选实例包括醚型保护基，如双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲醚、3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基醚等等。
当R1和R2各自是羟基时，可以对羟基进行保护。羟基保护基的优选实例包括醚型保护基，如叔丁基二甲基硅烷基醚、3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基醚等等。
当R1是羟基时，可以通过1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基对该羟基和由PGa表示的羟基进行保护：
在这种情况下，R1羟基受3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基的化合物保护：
该基团是在用于去除PGa的脱保护反应中产生。
当B1具有官能团时，可以对官能团进行保护。举例来说，当B1是由
表示的基团，以及
R14是-NH2基团时，可以对-NH2基团进行保护。另外，举例来说，当B1是由
表示的基团时，
可以对-NH2基团进行保护。
当B2具有官能团时，可以对官能团进行保护。举例来说，当B2是由
表示的基团，以及
R24是-NH2基团时，可以对-NH2基团进行保护。另外，举例来说，当B2是由
表示的基团时，
可以对-NH2基团进行保护。
-NH2基团保护基的优选实例包括酰胺型保护基，如苯甲酰胺、异丁酰胺等等；以及脒型保护基，如N,N-二甲基甲脒等等。
以上提到的化合物(1a)、化合物(1b)、化合物(9a)和化合物(9b)可以根据以下方法由化合物(27)制造。
其中各个符号如以上所定义。
以上提到的化合物(2a)、化合物(2b)、化合物(8a)和化合物(8b)可以根据以下方法由化合物(29)制造。
其中各个符号如以上所定义。
以上提到的化合物(15a)、化合物(15b)、化合物(21a)和化合物(21b)可以根据以下方法由化合物(31)制造。
其中各个符号如以上所定义。
可以根据本身已知的手段对如此获得的化合物(I)的取代基进行修饰(即，取代基引入、官能团转化)，以得到化合物(I)中所涵盖的另一种化合物或其盐。可以采用已知的一般方法用于取代基引入和官能团转化，并且其实例包括将卤素原子(例如，氟、氯、溴、碘)或任选地卤化的C1-6烷基磺酰氧基[例如，甲磺酰氧基、乙磺酰氧基、三氯甲磺酰氧基、三氟甲磺酰氧基(三氟甲磺酸酯)]转化成甲基、环丙基、乙烯基、氰基、甲酰基、羰基、羧基、羟基、氨基、硼烷基等等；通过赛费特-吉尔伯特同系化反应(Seyferth-Gilbert homologationreaction)将甲酰基转化成乙炔基；通过水解将酯转化成羧基；通过酰胺化将羧基转化成氨基甲酰基；通过还原将羧基转化成羟甲基；通过还原或烷基化将羰基转化成醇；羰基的还原胺化；羰基的肟化；氨基的酰化；氨基的脲化；氨基的磺酰化；氨基的烷基化；通过胺对活性卤素进行置换或胺化；羟基的烷基化；以及羟基的置换或胺化。
在取代基引入和官能团转化的情况下，当化合物具有可能发生不期望的反应的反应性部分时，可以在需要时预先根据本身已知的方法将保护基引入反应性部分中。通过在目标反应之后根据本身已知的方法去除保护基，可以制得本公开中所涵盖的化合物。
举例来说，当原材料化合物或中间物具有氨基、羧基或羟基时，可以通过一般用于肽化学的保护基等来保护这些基团。通过在反应之后在需要时去除保护基，可以获得目标化合物。
当化合物(I)含有如光学异构体、立体异构体、区位异构体、旋转异构体等异构体时，化合物(I)中还涵盖任何异构体及其混合物。举例来说，当化合物(I)含有光学异构体时，化合物(I)中还涵盖由外消旋化合物拆分的光学异构体。这些异构体可以根据本身已知的合成方法和本身已知的分离方法(例如，浓缩、溶剂提取、柱色谱和再结晶)获得为单一产物。
化合物(I)可以是晶体，并且化合物(I)中涵盖单一晶体形式与晶体形式混合物。晶体可以通过根据本身已知的结晶方法进行结晶来制造。
化合物(I)可以是药学上可接受的共晶体或其盐。共晶体或其盐意指在室温下由两种或更多种特殊固体组成的结晶物质，各个固体具有不同的物理性质(例如，结构、熔点、熔融热、吸湿性和稳定性)。共晶体或其盐可以根据本身已知的共结晶方法制造。
化合物(I)可以是水合物、非水合物、溶剂合物或非溶剂合物，并且它们都涵盖在化合物(I)中。
化合物(I)还涵盖经同位素(例如，2H、3H、11C、14C、18F、35S、125I)等标记或取代的化合物。经同位素标记或取代的化合物可以用作例如正电子发射断层摄影术(PET)中所使用的示踪剂(PET示踪剂)，并且可用于医学诊断领域等。
化合物(I)可以是前药。
化合物(I)的前药意指在活体中在生理条件下利用由于酶、胃酸等所致的反应而转化成化合物(I)的化合物，即，通过酶催氧化、还原、水解等而转化成化合物(I)的化合物；通过由于胃酸等所致的水解等而转化成化合物(I)的化合物。
化合物(I)的前药的实例包括
(1)通过使化合物(I)中的氨基经受酰化、烷基化或磷酸化而获得的化合物(例如，通过使化合物(I)中的氨基经受二十烷酰基化、金刚烷基化、戊基氨基羰基化、(5-甲基-2-氧代-1,3-二噁烯-4-基)甲氧基羰基化、四氢呋喃基化、吡咯烷基甲基化、新戊酰氧基甲基化、叔丁基化、乙氧基羰基化、叔丁氧基羰基化、乙酰化或环丙基羰基化而获得的化合物)；
(2)通过使化合物(I)中的羟基经受酰化、烷基化、磷酸化或硼酸化而获得的化合物(例如，通过使化合物(I)中的羟基经受乙酰化、棕榈酰化、丙酰化、新戊酰化、琥珀酰化、反丁烯二酰化、丙氨酰化或二甲基氨基甲基羰基化而获得的化合物)；
(3)通过使化合物(I)中的羧基经受酯化或酰胺化而获得的化合物(例如，通过使化合物(I)中的羧基经受乙基酯化、苯基酯化、羧甲基酯化、二甲基氨基甲基酯化、新戊酰氧基甲基酯化、乙氧基羰氧基乙基酯化、酞基酯化、(5-甲基-2-氧代-1,3-二噁烯-4-基)甲基酯化、环己氧基羰基乙基酯化或甲基酰胺化而获得的化合物)。这些化合物可以根据本身已知的方法由化合物(I)制得。
化合物(I)的前药还可以是如“IYAKUHIN no KAIHATSU(Development ofPharmaceuticals)”,第7卷,Design of Molecules,第163-198页,HIROKAWA SHOTEN出版(1990)中所描述的在生理条件下转化成化合物(I)的化合物。
在本说明书中，前药可以呈盐形式，并且此类盐的实例包括与由式(I)表示的化合物的盐类似的那些盐。
化合物(I)还可以用作抗体(或肽抗原识别序列)-药物缀合物中的有效负载(该有效负载是对应于以上提到的药物的部分)。当化合物(I)用作有效负载时，化合物(I)可以经由接头键合至抗体(或肽抗原识别序列)。
以上提到的有效负载的实例包括
(1)化合物(I)，其中B1是由
表示的基团；以及
(2)化合物(I)，其中B2是由
表示的基团。
当化合物(I)用作有效负载时，可以将化合物(I)转化成抗体(或肽抗原识别序列)-药物缀合物，如下。
(1)将式(I)中的B1转化成由
表示的基团，或者
将式(I)中的B2转化成由
表示的基团，
其中
Ra和Rb各自独立地为
(i)C1-6烷基；
(ii)酰基；或
(iii)由下式表示的基团：
其中
R是键合至抗体或肽抗原识别序列的接头(键是接头与抗体或肽抗原识别序列的侧链中的官能团之间的共价键)；以及
各个R'是氢原子或取代基。
(2)将式(I)中的R1和R2各自独立地转化成由下式表示的基团：-OR3，其中R3是
(i)C1-6烷基；
(ii)酰基(优选C1-6烷氧基-羰基)；
(iii)由下式表示的基团：
(iv)由下式表示的基团：
(v)由下式表示的基团：
(vi)由下式表示的基团：
(vii)由下式表示的基团：
(viii)由下式表示的基团：
或
(ix)由下式表示的基团：
其中诸式中的各个R和各个R'各自如以上所定义。
(3)将式(I)中的Q2H和Q4H各自独立地转化成
(i)由下式表示的基团：-SR4，其中R4是
(a)C1-6烷基；
(b)酰基；
(c)由下式表示的基团：-SR；
(d)由下式表示的基团：
(e)由下式表示的基团：
(f)由下式表示的基团：
(g)由下式表示的基团：
(h)由下式表示的基团：
或
(i)由下式表示的基团：
(ii)由下式表示的基团：-OR5，其中R5是
(a)C1-6烷基；
(b)酰基；
(c)由下式表示的基团：
(d)由下式表示的基团：
(e)由下式表示的基团：
或
(f)由下式表示的基团：
或
(iii)由下式表示的基团：-NHR6，其中R6是
(a)C1-6烷基；
(b)酰基；
(c)由下式表示的基团：
(d)由下式表示的基团：
或
(e)由下式表示的基团：
其中诸式中的各个R和各个R'各自如以上所定义。
另外，当化合物(I)用作有效负载时，可以使用以下文献中描述的接头：Chem.Rev.,114,9154-9218(2014)；Pharma.Res.32,3526-3540(2015)；BioconjugateChem.21,5-13(2010)；The AAPS journal,17,339-351(2015)；WO 2011/005761；等等。
本公开还提供了以下具体实施方案。
实施方案1.一种化合物，其具有式(I)：
或其药学上可接受的盐，其中：
由式(A-1)表示的部分结构：
是由式(IIA)或式(IIB)表示的部分结构：
R1和R2各自独立地为羟基或卤素原子；
B1是由式(B1-A)或式(B1-B)表示的基团：
R13、R14、R15、R16和R17各自独立地为氢原子或取代基；
Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16各自独立地为N或CR1a；
Z11、Z12、Z13、Z14、Z15和Z16各自独立地为N或C；
R1a是氢原子或取代基；
B2是由式(B2-A)或式(B2-B)表示的基团：
R23、R24、R25、R26和R27各自独立地为氢原子或取代基；
Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26各自独立地为N或CR2a；
Z21、Z22、Z23、Z24、Z25和Z26各自独立地为N或C；
R2a是氢原子或取代基；
X1和X2各自独立地为氧原子或硫原子；以及
Q1、Q2、Q3和Q4各自独立地为氧原子或硫原子。
限制条件是：
B1或B2中至少一个是
其中：
R18是氢或C1-6烷基；以及
R19是卤素原子。
实施方案2.如实施方案1所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R19是氟或氯。
实施方案3.如实施方案1或实施方案2所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其具有式(X)：
实施方案4.如实施方案1或实施方案2所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其具有式(XI)：
实施方案5.如实施方案1至实施方案4中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R1是羟基。
实施方案6.如实施方案1至实施方案4中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R1是氟原子。
实施方案7.如实施方案1至实施方案3、实施方案5或实施方案6中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R2是羟基。
实施方案8.如实施方案1至实施方案3、实施方案5或实施方案6中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R2是氟原子。
实施方案9.如实施方案1至实施方案8中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q4是硫原子。
实施方案10.如实施方案1至实施方案9中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q2是氧原子。
实施方案11.如实施方案1至实施方案9中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q2是硫原子。
实施方案12.如实施方案1至实施方案3或实施方案5至实施方案11中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其具有式(XII)：
实施方案13.如实施方案1、实施方案2、实施方案4至实施方案6或实施方案9至实施方案11中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其具有式(XIII)：
实施方案14.如实施方案1至实施方案13中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B1是：
实施方案15.如实施方案1至实施方案13中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B2是：
实施方案16.如实施方案2至实施方案15中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R19是氟原子。
实施方案17.如实施方案1至实施方案16中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R18是氢。
实施方案18.如实施方案1至实施方案16中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R18是甲基。
实施方案19.如实施方案14或实施方案16至实施方案18中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B2是选自由以下组成的组：
所述基团各自任选地且独立地在：
(i)任何可利用碳原子处经卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或氨基取代；和/或
(ii)任何可利用氮原子处经C1-6烷基取代。
实施方案20.如实施方案19所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B2是选自由以下组成的组：
实施方案21.如实施方案20所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B2是选自由以下组成的组：
实施方案22.如实施方案21所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B2是选自由以下组成的组：
实施方案23.如实施方案15至实施方案18中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B1是选自由以下组成的组：
所述基团各自任选地且独立地在：
(i)任何可利用碳原子处经卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或氨基取代；和/或
(ii)任何可利用氮原子处经C1-6烷基取代。
实施方案24.如实施方案23所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B1是选自由以下组成的组：
实施方案25.如实施方案24所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B1是选自由以下组成的组：
实施方案26.如实施方案25所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B1是选自由以下组成的组：
实施方案27.如实施方案1所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其是选自由以下组成的组：
实施方案28.如实施方案27所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其是选自由以下组成的组：
实施方案29.如实施方案27所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其是选自由以下组成的组：
实施方案30.如实施方案1至实施方案29中任一个所述的化合物，其中所述药学上可接受的盐是三乙胺盐或钠盐，例如二(三乙胺)盐或二钠盐。
实施方案31.一种药物组合物，其包含如实施方案1至实施方案30中任一个所述的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。
实施方案32.一种化合物，其具有式(XIV)：
(CD-L)n-A(XIV)，
或其药学上可接受的盐，其中：
CD是由式(XX)至式(XXIX)中的任一个表示的基团：
R1和R2各自独立地为羟基、氢、氨基或卤素原子；
B3和B4独立地为任选地取代的5元至14元芳香杂环基团；
X1和X2各自独立地为氧原子、CH2或硫原子；
Q1、Q2、Q3和Q4各自独立地为氧原子或硫原子；
L是接头；
A是抗体、抗体片段或抗原结合片段；以及
n是1至10。
实施方案33.如实施方案32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R1和R2各自独立地为羟基或卤素原子。
实施方案34.如实施方案32或实施方案33所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中X1和X2各自独立地为氧原子或硫原子。
实施方案35.如实施方案31至实施方案34中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q1和Q3是氧原子。
实施方案36.如实施方案32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XX-A)表示的基团：
实施方案37.如实施方案32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXI-A)表示的基团：
实施方案38.如实施方案32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXII-A)表示的基团：
实施方案39.如实施方案32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXIII-A)表示的基团：
实施方案40.如实施方案32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXIV-A)表示的基团：
实施方案41.如实施方案32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXV-A)表示的基团：
实施方案42.如实施方案32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXVI-A)表示的基团：
实施方案43.如实施方案32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXVII-A)表示的基团：
实施方案44.如实施方案32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXVIII-A)表示的基团：
实施方案45.如实施方案32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXIX-A)表示的基团：
实施方案46.如实施方案32至实施方案45中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
L是-X3-T-Z-Q-；
X3是-(CH2)o-、
o是1、2或3；或
X3不存在；
T是肽或不存在；
Z是间隔基；
Q是异双官能团或异三官能团，或不存在。
实施方案47.如实施方案46所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其具有式(XXX)：
实施方案48.如实施方案46所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其具有式(XXXI)：
实施方案49.如实施方案46至实施方案48中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X3是
T是以及
R10a和R10b是独立地选自由以下组成的组：氢和任选地取代的C1-6烷基。
实施方案50.如实施方案49所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X3是
实施方案51.如实施方案46至实施方案50中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
Z是或-(CH2CH2O)s-；
m是1、2、3、4、5或6；以及
s是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
实施方案52.如实施方案46至实施方案48中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X3是-CH2-；
Z是以及
p是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
实施方案53.如实施方案46至实施方案48中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X3是-CH2CH2-；
Z是
q是1、2、3、4、5或6；以及
r是1、2、3、4、5或6。
实施方案54.如实施方案46至实施方案53中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中
Q是选自由以下组成的组的异双官能团：
R29是氢或C1-6烷基；
R30a和R30b是独立地选自由以下组成的组：氢、C1-6烷基、卤代、-C(＝O)OR29、-NH2、C1-6烷氧基、-CN、-NO2和-OH；
R31a和R31b是独立地选自由以下各项组成的组：氢、C1-6烷基、卤代、-C(＝O)OR29、-NH2、-N(CH3)2、C1-6烷氧基、-CN、-NO2和-OH；以及
*指示与连接至该抗体、抗体片段或抗原结合片段的任何可利用碳原子、氮原子、氧原子或硫原子的连接点。
实施方案55.如实施方案51所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其具有式(XXXII)：
其中：
R10a和R10b独立地为C1-3烷基；以及
m是2、3、4或5。
实施方案56.如实施方案55所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其具有式(XXXIII)：
其中p是4、5或6。
实施方案57.如实施方案56所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其具有式(XXXIV)：
其中：
q是1、2或3；以及
r是1、2或3。
实施方案58.如实施方案32至实施方案57中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中n是2至8。
实施方案59.如实施方案32至实施方案58中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3和B4独立地为任选地取代的8元至14元稠合双环芳香杂环。
实施方案60.如实施方案59所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
B3是由式(B3-A)或式(B3-B)表示的基团：
R13、R14、R15、R16和R17各自独立地为氢原子或取代基；
Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16各自独立地为N或CR1a；
Z11、Z12、Z13、Z14、Z15和Z16各自独立地为N或C；
R1a是氢原子或取代基；
B4是由式(B4-A)或式(B4-B)表示的基团：
R23、R24、R25、R26和R27各自独立地为氢原子或取代基；
Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26各自独立地为N或CR2a；
Z21、Z22、Z23、Z24、Z25和Z26各自独立地为N或C；
R2a是氢原子或取代基。
实施方案61.如实施方案32至实施方案60中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3或B4中至少一个是：
R18是氢或C1-6烷基；以及
R19是卤素原子。
实施方案62.如实施方案61所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是：
实施方案63.如实施方案61所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是：
实施方案64.如实施方案61至实施方案63中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R19是氟原子。
实施方案65.如实施方案61至实施方案64中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R18是氢。
实施方案66.如实施方案61至实施方案64中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R18是甲基。
实施方案67.如实施方案62或实施方案64至实施方案66中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
所述基团各自任选地且独立地在：
(i)任何可利用碳原子处经卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或氨基取代；和/或
(ii)任何可利用氮原子处经C1-6烷基取代。
实施方案68.如实施方案67所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
实施方案69.如实施方案68所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
实施方案70.如实施方案69所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
实施方案71.如实施方案63至实施方案66中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
所述基团各自任选地且独立地在：
(i)任何可利用碳原子处经卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或氨基取代；和/或
(ii)任何可利用氮原子处经C1-6烷基取代。
实施方案72.如实施方案71所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
实施方案73.如实施方案72所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
实施方案74.如实施方案73所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
实施方案75.如实施方案32至实施方案39、实施方案44或实施方案46至实施方案74中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q2是氧原子。
实施方案76.如实施方案32至实施方案39、实施方案44或实施方案46至实施方案74中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q2是硫原子。
实施方案77.如实施方案32至实施方案35、实施方案40至实施方案43、实施方案45、实施方案46、实施方案49至实施方案54或实施方案58至实施方案74中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q4是氧原子。
实施方案78.如实施方案32至实施方案35、实施方案40至实施方案43、实施方案45、实施方案46、实施方案49至实施方案54或实施方案58至实施方案74中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q4是硫原子。
实施方案79.如实施方案32至实施方案78中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中X1和X2是氧原子，并且R1和R2独立地为羟基、氟原子或氯原子。
实施方案80.如实施方案32至实施方案79中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述抗体是抗GCC抗体。结合人鸟苷酸环化酶C(GCC)的抗体公开于例如US20130315923和WO 2011050242中。
实施方案81.如实施方案80所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述抗体是包含含有氨基酸序列SEQ.ID.No.1的重链区的抗GCC抗体。
实施方案82.如实施方案80或实施方案81所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述抗体是包含含有氨基酸序列SEQ.ID.No.2的轻链区的抗GCC抗体。
实施方案83.一种药物组合物，其包含如实施方案32至实施方案82中任一个所述的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。
实施方案84.一种治疗患者的方法，其包括向所述患者施用治疗有效量的如实施方案1至实施方案30或实施方案32至实施方案82中任一个所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述患者患有癌症。
实施方案85.如实施方案84所述的方法，其中所述癌症是表7的癌症中的任何一种或多种。
实施方案86.如实施方案85所述的方法，其中所述癌症是选自由以下组成的组：实性瘤和淋巴瘤。
实施方案87.如实施方案84至实施方案86中任一个所述的方法，其还包括施用治疗有效量的可用于治疗癌症的第二治疗剂。
实施方案88.如实施方案31或实施方案83所述的药物组合物，其用于治疗癌症。
实施方案89.如实施方案88所述的药物组合物，其中所述癌症是表7的癌症中的任何一种或多种。
实施方案90.如实施方案88所述的药物组合物，其中所述癌症是选自由以下组成的组：实性瘤和淋巴瘤。
实施方案91.如实施方案1至实施方案30或实施方案32至实施方案82中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其用于治疗癌症。
实施方案92.如实施方案91所述的化合物，其中所述癌症是表7的癌症中的任何一种或多种。
实施方案93.如实施方案91所述的化合物，其中所述癌症是选自由以下组成的组：实性瘤和淋巴瘤。
实施方案94.一种如实施方案1至实施方案30或实施方案32至实施方案82中任一个所述的化合物或其药学上可接受的盐的用途，其用于制造供治疗癌症用的药物。
实施方案95.如实施方案94所述的用途，其中所述癌症是表7的癌症中的任何一种或多种。
实施方案96.如实施方案94所述的用途，其中所述癌症是选自由以下组成的组：实性瘤和淋巴瘤。
实施方案97.一种药盒，其包括如实施方案1至实施方案30或实施方案32至实施方案82中任一个所述的化合物或药学上可接受的盐，以及关于向患有癌症的患者施用所述化合物或其药学上可接受的盐的说明书。
实施方案98.如实施方案97所述的药盒，其中所述癌症是表7的癌症中的任何一种或多种。
实施方案99.如实施方案97所述的药盒，其中所述癌症是选自由以下组成的组：实性瘤和淋巴瘤。
实施方案100.如实施方案97至实施方案99中任一个所述的药盒，其还包括一种或多种其他治疗剂。
实施方案101.一种化合物，其具有式(XL)：
CD-L1-R28(XL)，
或其药学上可接受的盐，其中：
CD是由式(XX)至式(XXIX)中的任一个表示的基团：
R1和R2各自独立地为羟基、氢、氨基或卤素原子；
B3和B4独立地为任选地取代的5元至14元芳香杂环基团；
X1和X2各自独立地为氧原子、CH2或硫原子；
Q1、Q2、Q3和Q4各自独立地为氧原子或硫原子；
L是接头；
R28是选自由以下各项组成的组：-N3、-ONH2、-OH、-CN、-NO2、-CHO、-NR29C(＝O)CH＝CH2、-SH、-S(＝O)2(CH＝CH2)、-NR29C(＝O)CH2Br、-NR29C(＝O)CH2I、-C(＝O)NHNH2、-CO2H、-NH2、-C≡CH、
R29是氢或C1-6烷基；
R30a和R30b是独立地选自由以下各项组成的组：氢、C1-6烷基、卤代、-C(＝O)OR29、-NH2、C1-6烷氧基、-CN、-NO2和-OH；
R31a和R31b是独立地选自由以下各项组成的组：氢、C1-6烷基、卤代、-C(＝O)OR29、-NH2、-N(CH3)2、C1-6烷氧基、-CN、-NO2和-OH；以及
所述接头经由任何可利用碳、氮、氧或硫原子连接至环状二核苷酸。
实施方案102.如实施方案101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R1和R2各自独立地为羟基或卤素原子。
实施方案103.如实施方案101或实施方案102所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中X1和X2各自独立地为氧原子或硫原子。
实施方案104.如实施方案101至实施方案103中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q1和Q3是氧原子。
实施方案105.如实施方案101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XX-A)表示的基团：
实施方案106.如实施方案101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXI-A)表示的基团：
实施方案107.如实施方案101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXII-A)表示的基团：
实施方案108.如实施方案101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXIII-A)表示的基团：
实施方案109.如实施方案101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXIV-A)表示的基团：
实施方案110.如实施方案101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXV-A)表示的基团：
实施方案111.如实施方案101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXVI-A)表示的基团：
实施方案112.如实施方案101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXVII-A)表示的基团：
实施方案113.如实施方案101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXVIII-A)表示的基团：
实施方案114.如实施方案101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXIX-A)表示的基团：
实施方案115.如实施方案101至实施方案114中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
L1是-X3-T-Z-；
X3是-(CH2)o-、
o是1、2或3；或
X3不存在；
T是肽或不存在；以及
Z是间隔基。
实施方案116.如实施方案115所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X3是
T是以及
R10a和R10b是独立地选自由以下组成的组：氢和任选地取代的C1-6烷基。
实施方案117.如实施方案116所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X3是
实施方案118.如实施方案115至实施方案117中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
Z是或-(CH2CH2O)s-；
m是1、2、3、4、5或6；以及
s是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
实施方案119.如实施方案115所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X3是-CH2-；
Z是以及
p是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
实施方案120.如实施方案115所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X3是-CH2CH2-；
Z是
q是1、2、3、4、5或6；以及
r是1、2、3、4、5或6。
实施方案121.如实施方案101至实施方案120中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3和B4独立地为任选地取代的8元至14元稠合双环芳香杂环。
实施方案122.如实施方案121所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
B3是由式(B3-A)或式(B3-B)表示的基团：
R13、R14、R15、R16和R17各自独立地为氢原子或取代基；
Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16各自独立地为N或CR1a；
Z11、Z12、Z13、Z14、Z15和Z16各自独立地为N或C；
R1a是氢原子或取代基；
B4是由式(B4-A)或式(B4-B)表示的基团：
R23、R24、R25、R26和R27各自独立地为氢原子或取代基；
Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26各自独立地为N或CR2a；
Z21、Z22、Z23、Z24、Z25和Z26各自独立地为N或C；
R2a是氢原子或取代基。
实施方案123.如实施方案101至实施方案122中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3或B4中至少一个是：
R18是氢或C1-6烷基；以及
R19是卤素原子。
实施方案124.如实施方案123所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是：
实施方案125.如实施方案123所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是：
实施方案126.如实施方案123至实施方案125中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R19是氟原子。
实施方案127.如实施方案123至实施方案126中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R18是氢。
实施方案128.如实施方案123至实施方案126中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R18是甲基。
实施方案129.如实施方案124或实施方案126至实施方案128中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
所述基团各自任选地且独立地在：
(i)任何可利用碳原子处经卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或氨基取代；和/或
(ii)任何可利用氮原子处经C1-6烷基取代。
实施方案130.如实施方案129所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
实施方案131.如实施方案130所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
实施方案132.如实施方案131所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
实施方案133.如实施方案125至实施方案128中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
所述基团各自任选地且独立地在：
(i)任何可利用碳原子处经卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或氨基取代；和/或
(ii)任何可利用氮原子处经C1-6烷基取代。
实施方案134.如实施方案133所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
实施方案135.如实施方案134所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
实施方案136.如实施方案135所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
实施方案137.如实施方案101至实施方案108、实施方案113或实施方案115至实施方案136中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q2是氧原子。
实施方案138.如实施方案101至实施方案108、实施方案113或实施方案115至实施方案136中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q2是硫原子。
实施方案139.如实施方案101至实施方案104、实施方案109至实施方案112、实施方案114或实施方案115至实施方案136中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q4是氧原子。
实施方案140.如实施方案101至实施方案104、实施方案109至实施方案112、实施方案114或实施方案115至实施方案136中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q4是硫原子。
实施方案141.如实施方案101至实施方案142中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中X1和X2是氧原子并且R1和R2独立地为羟基或氟原子。
实施方案142.如实施方案101至实施方案141中任一个所述的化合物，其中R28是
实施方案143.如实施方案142所述的化合物，其是选自由以下组成的组：
实施方案144.一种化合物，其具有式(XLI)：
(CD-L2)u-DA(XLI)，
或其药学上可接受的盐，其中：
CD是由式(XX)至式(XXIX)中的任一个表示的基团：
R1和R2各自独立地为羟基、氢、氨基或卤素原子；
B3和B4独立地为任选地取代的5元至14元芳香杂环基团；
X1和X2各自独立地为氧原子、CH2或硫原子；
Q1、Q2、Q3和Q4各自独立地为氧原子或硫原子；
L2是接头；或者
L2不存在；
DA是药物递送剂；以及
u是1至1000。
实施方案145.如实施方案144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R1和R2各自独立地为羟基或卤素原子。
实施方案146.如实施方案144或实施方案145所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中X1和X2各自独立地为氧原子或硫原子。
实施方案147.如实施方案144至实施方案146中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q1和Q3是氧原子。
实施方案148.如实施方案144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XX-A)表示的基团：
实施方案149.如实施方案144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXI-A)表示的基团：
实施方案150.如实施方案144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXII-A)表示的基团：
实施方案151.如实施方案144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXIII-A)表示的基团：
实施方案152.如实施方案144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXIV-A)表示的基团：
实施方案152.如实施方案144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXV-A)表示的基团：
实施方案153.如实施方案144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXVI-A)表示的基团：
实施方案154.如实施方案144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXVII-A)表示的基团：
实施方案155.如实施方案144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXVIII-A)表示的基团：
实施方案156.如实施方案144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXIX-A)表示的基团：
实施方案157.如实施方案144至实施方案156中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3和B4独立地为任选地取代的8元至14元稠合双环芳香杂环。
实施方案158.如实施方案157所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
B3是由式(B3-A)或式(B3-B)表示的基团：
R13、R14、R15、R16和R17各自独立地为氢原子或取代基；
Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16各自独立地为N或CR1a；
Z11、Z12、Z13、Z14、Z15和Z16各自独立地为N或C；
R1a是氢原子或取代基；
B4是由式(B4-A)或式(B4-B)表示的基团：
R23、R24、R25、R26和R27各自独立地为氢原子或取代基；
Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26各自独立地为N或CR2a；
Z21、Z22、Z23、Z24、Z25和Z26各自独立地为N或C；
R2a是氢原子或取代基。
实施方案159.如实施方案144至实施方案158中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3或B4中至少一个是：
R18是氢或C1-6烷基；以及
R19是卤素原子。
实施方案160.如实施方案159所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是：
实施方案161.如实施方案159所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是：
实施方案162.如实施方案159至实施方案161中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R19是氟原子。
实施方案163.如实施方案159至实施方案162中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R18是氢。
实施方案164.如实施方案159至实施方案162中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R18是甲基。
实施方案165.如实施方案159或实施方案162至实施方案164中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
所述基团各自任选地且独立地在：
(i)任何可利用碳原子处经卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或氨基取代；和/或
(ii)任何可利用氮原子处经C1-6烷基取代。
实施方案166.如实施方案165所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
实施方案167.如实施方案166所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
实施方案168.如实施方案167所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
实施方案169.如实施方案161至164中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
所述基团各自任选地且独立地在：
(i)任何可利用碳原子处经卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或氨基取代；和/或
(ii)任何可利用氮原子处经C1-6烷基取代。
实施方案170.如实施方案169所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
实施方案171.如实施方案170所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
实施方案172.如实施方案171所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
实施方案173.如实施方案144至实施方案151、实施方案155或实施方案157至实施方案172中任一个所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q2是氧原子。
实施方案174.如实施方案144至实施方案151、实施方案155或实施方案157至实施方案172中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q2是硫原子。
实施方案175.如实施方案144至实施方案147、实施方案152至实施方案154、实施方案156或实施方案157至实施方案172中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q4是氧原子。
实施方案176.如实施方案144至实施方案147、实施方案152至实施方案154、实施方案156或实施方案157至实施方案172中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q4是硫原子。
实施方案177.如实施方案144至实施方案176中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中X1和X2是氧原子，以及R1和R2独立地为羟基、氟原子或氯原子。
实施方案178.如实施方案144至实施方案177中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中u是1至100。
实施方案179.如实施方案178所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中u是1至10。
实施方案180.如实施方案179所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中u是1至5。
实施方案181.如实施方案180所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中u是1。
实施方案182.如实施方案144至实施方案181中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
L2是-X4-T1-Z1-QA-；
X4是-(CH2)v-、
v是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；或者
X4不存在；
T1是肽或不存在；
Z1是间隔基；
QA是异双官能团或异三官能团或不存在。
实施方案183.如实施方案182所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X4是
T1是以及
R10c和R10d是独立地选自由以下组成的组：氢和任选地取代的C1-6烷基。
实施方案184.如实施方案183所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X4是
实施方案185.如实施方案182至184中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
Z1是或-(CH2CH2O)s1-；
m1是1、2、3、4、5或6；以及
s1是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
实施方案186.如实施方案182所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X4是-CH2-；
Z1是以及
p1是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
实施方案187.如实施方案182所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X4是-CH2CH2-；
Z1是
q1是1、2、3、4、5或6；以及
r1是1、2、3、4、5或6。
实施方案188.如实施方案182、实施方案186或实施方案187中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中T1不存在。
实施方案189.如实施方案182至实施方案188中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中QA是选自由以下组成的组的异双官能团：
R29是氢或C1-6烷基；
R30a和R30b是独立地选自由以下组成的组：氢、C1-6烷基、卤代、-C(＝O)OR29、-NH2、C1-6烷氧基、-CN、-NO2和-OH；
R31a和R31b是独立地选自由以下组成的组：氢、C1-6烷基、卤代、-C(＝O)OR29、-NH2、-N(CH3)2、C1-6烷氧基、-CN、-NO2和-OH；以及
*指示与连接至所述药物递送剂的任何可利用碳原子、氮原子、氧原子或硫原子的连接点。
实施方案190.如实施方案182所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中X4、T1和QA不存在。
实施方案191.如实施方案144至实施方案190中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含脂质、类固醇、维生素、碳水化合物、蛋白质、肽、聚胺、聚乙二醇或肽模拟物，或其任何组合。
实施方案192.如实施方案191所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含脂质。
实施方案193.如实施方案191所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含类固醇。
实施方案194.如实施方案191所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含维生素。
实施方案195.如实施方案191所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含碳水化合物。
实施方案196.如实施方案191所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含蛋白质。
实施方案197.如实施方案191所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含肽。
实施方案198.如实施方案191所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含聚胺。
实施方案199.如实施方案191所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含聚乙二醇。
实施方案200.如实施方案191所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含肽模拟物。
因为化合物(I)或其前药(在本说明书中，有时集体缩写为“本公开的化合物”)具有STING激动活性，所以其可能可用作癌症预防或治疗剂、癌症生长抑制剂或癌症转移抑制剂。
因为本公开的化合物显示STING激动活性，并且在功效表达、药代动力学(例如，吸收、分布、代谢、排出)、溶解度(例如，水溶解度)、与其他药物的相互作用(例如，药物代谢酶抑制作用)、安全性(例如，急性毒性、慢性毒性、基因毒性、生殖毒性、心脏毒性、致癌性、中枢毒性)和稳定性(例如，化学稳定性、遇酶时稳定性)方面优越，所以其可能可用作药物。
因此，本公开的化合物可以用于增加哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、仓鼠、兔、猫、狗、牛、羊、猴、人)的STING活性。
本公开的化合物可以用作药物，如用于预防或治疗可能受STING影响的疾病(在本说明书中，有时缩写为“STING相关疾病”)，例如癌症[例如，结肠直肠癌(例如，结肠直肠癌、直肠癌、肛门癌、家族性结肠直肠癌、遗传性非息肉病性结肠直肠癌、胃肠基质肿瘤)、肺癌(例如，非小细胞肺癌、小细胞肺癌、恶性间皮瘤)、间皮瘤、胰腺癌(例如，胰腺导管癌、胰腺内分泌肿瘤)、咽癌、喉癌、食道癌、胃癌(例如，乳头状腺癌、粘液腺癌、腺鳞状癌)、十二指肠癌、小肠癌、乳腺癌(例如，侵袭性导管癌、非侵袭性导管癌、发炎性乳腺癌)、卵巢癌(例如，卵巢上皮癌、性腺外生殖细胞肿瘤、卵巢生殖细胞肿瘤、卵巢低恶性潜能肿瘤)、睪丸肿瘤、前列腺癌(例如，激素依赖性前列腺癌、非激素依赖性前列腺癌、性去势疗法抗性前列腺癌)、肝癌(例如，肝细胞癌、原发性肝癌、肝外胆管癌)、甲状腺癌(例如，甲状腺髓样癌)、肾癌(例如，肾细胞癌(例如，透明细胞肾细胞癌)、肾盂和输尿管移行细胞癌)、子宫癌(例如，宫颈癌、子宫体癌、子宫肉瘤)、妊娠期绒毛膜癌、脑肿瘤(例如，成髓细胞瘤、神经胶质瘤、松果体星形细胞肿瘤、纤维性星形细胞瘤、弥漫性星形细胞瘤、退行性星形细胞瘤、垂体腺瘤)、成视网膜细胞瘤、皮肤癌(例如，基底细胞癌、恶性黑素瘤)、肉瘤(例如，横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、软组织肉瘤、梭形细胞肉瘤)、恶性骨肿瘤、膀胱癌、血液癌(例如，多发性骨髓瘤、白血病(例如，急性骨髓性白血病)、恶性淋巴瘤、霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、慢性骨髓增生性疾病)、未知原发性癌]的剂、癌症生长抑制剂、癌症转移抑制剂、细胞凋亡促进剂、用于治疗癌前病变(例如，骨髓发育不良综合征)的剂等等。
在另一个实施方案中，所述癌症是选自表7的癌症中的任何一种或多种。
表7
在另一个实施方案中，所述癌症是实性瘤或淋巴瘤。
具体来说，本公开的化合物可以用作针对结肠直肠癌、乳腺癌、皮肤癌、恶性淋巴瘤或肺癌的药物。
本公开的化合物可以依原样或呈与药理学上可接受的载体的混合物的形式作为药物口服或肠胃外施用至哺乳动物(优选人)。
以下详细说明含有本公开的化合物的药物(下文有时缩写为“本公开的药物”)。本公开的药物的剂型的实例包括口服制剂，如片剂(例如，糖衣片剂、膜衣片剂、舌下片剂、口腔片剂、口服崩解片剂)、丸剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂(例如，软胶囊、微胶囊)、糖浆、乳液、悬浮液、膜(例如，口服可崩解膜、口腔粘膜粘附膜)等等。另外，本公开的药物的剂型的实例包括肠胃外制剂，如注射、点滴输注、经皮吸收型制剂(例如，离子电渗经皮吸收型制剂)、栓剂、软膏、鼻用制剂、肺用制剂、眼用滴剂等等。此外，本公开的药物可以是释放控制制剂，如即时释放制剂、持续释放制剂(例如，持续释放微胶囊)等等。
作为本公开的药物的剂型，还可以使用纳米颗粒制剂和使用细菌来源膜的制剂。
可以根据制剂领域中通常使用的本身已知的方法(例如，日本药典(JapanesePharmacopoeia)中描述的方法等)来制备本公开的药物。另外，本公开的药物可以在需要时含有适量的制剂领域中通常使用的添加剂，如赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、表面活性剂、悬浮剂、乳化剂、着色剂、防腐剂、芳香剂、矫味剂、稳定剂、增稠剂等等。药理学上可接受的载体的实例包括这些添加剂。
举例来说，可以使用赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等等来制备片剂，并且可以使用赋形剂、粘合剂和崩解剂来制备丸剂或颗粒剂。可以使用赋形剂等来制备粉剂或胶囊剂，可以使用甜味剂等等来制备糖浆，并且可以使用悬浮剂、表面活性剂、乳化剂等等来制备乳液或悬浮液。
赋形剂的实例包括乳糖、蔗糖、葡萄糖、淀粉、蔗糖、结晶纤维素、粉状甘草、甘露糖醇、碳酸氢钠、磷酸钙和硫酸钙。
粘合剂的实例包括5wt％至10wt％淀粉液体糊剂、10wt％至20wt％阿拉伯树胶溶液或明胶溶液、1wt％至5wt％黄芪胶溶液、羧甲基纤维素溶液、海藻酸钠溶液和甘油。
崩解剂的实例包括淀粉和碳酸钙。
润滑剂的实例包括硬脂酸镁、硬脂酸、硬脂酸钙和纯化的滑石。
甜味剂的实例包括葡萄糖、果糖、转化糖、山梨糖醇、木糖醇、甘油和单糖浆。
表面活性剂的实例包括月桂基硫酸钠、聚山梨酸酯80、脱水山梨糖醇单脂肪酸酯和聚乙二醇40硬脂酸酯。
悬浮剂的实例包括阿拉伯树胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素和膨土。
乳化剂的实例包括阿拉伯树胶、黄芪胶、明胶和聚山梨酸酯80。
举例来说，当本公开的药物是片剂时，将例如赋形剂(例如，乳糖、蔗糖、淀粉)、崩解剂(例如，淀粉、碳酸钙)、粘合剂(例如，淀粉、阿拉伯树胶、羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素)或润滑剂(例如，滑石、硬脂酸镁、聚乙二醇6000)加入至本公开的化合物，并且根据本身已知的方法对混合物进行压缩模制，然后出于掩蔽味道、肠溶性或持久性的目的在必要时根据本身已知的方法对模制产物进行包覆，从而得到片剂。作为供包覆用的包覆剂，可以使用例如羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚氧乙二醇、Tween 80、Pluronic F68、醋酸酞酸纤维素、酞酸羟丙基甲基纤维素、醋酸琥珀酸羟甲基纤维素、Eudragit(甲基丙烯酸-丙烯酸共聚物，由Rohm,DE制造)和颜料(例如，氧化铁红、二氧化钛)。
注射的实例包括静脉内注射以及皮下注射、皮内注射、肌肉内注射、腹膜内注射、点滴注射等等。
此类注射液是根据本身已知的方法或通过使本公开的化合物溶解、悬浮或乳化在灭菌水性或油性液体中而制备。水性液体的实例包括生理盐水、含葡萄糖或其他辅助药物(例如，D-山梨糖醇、D-甘露糖醇、氯化钠)的等张溶液等等。水性液体可以含有合适的增溶剂，如醇(例如，乙醇)、多元醇(例如，丙二醇、聚乙二醇)、非离子表面活性剂(例如，聚山梨酸酯80、HCO-50)等等。油性液体的实例包括芝麻油、大豆油等等。油性液体可以含有增溶剂。增溶剂的实例包括苯甲酸苯甲酯、苯甲醇等等。另外，注射液可以与缓冲液(例如，磷酸盐缓冲液、乙酸钠缓冲液)、安抚剂(例如，氯化苯甲烷铵、盐酸普罗卡因)、稳定剂(例如，人血清白蛋白、聚乙二醇)、防腐剂(例如，苯甲醇、苯酚)等等。所制备的注射液一般可以填充在安瓿中。
尽管本公开的药物中的本公开的化合物含量取决于医药制剂的形式而变化，但其相对于整个制剂一般占约0.01wt％至约100wt％，优选占约2wt％至约85wt％，更优选占约5wt％至约70wt％。
尽管本公开的药物中的添加剂含量取决于医药制剂的形式而变化，但其相对于整个制剂一般占约1wt％至约99.9wt％，优选占约10wt％至约90wt％。
本公开的化合物稳定而且低毒，并且可以安全使用。尽管本公开的化合物的每日剂量取决于患者的病状和体重、化合物的种类、施用途径等而变化，但在例如口服施用至患者以治疗癌症的情况下，对成人(体重约60kg)的每日剂量是约1至约1000mg，优选约3至约300mg，更优选约10至约200mg本公开的化合物，其可以呈单次施用的形式给与或每天分2或3份施用。
当本公开的化合物肠胃外施用时，其一般呈液体(例如，注射液)形式施用。尽管本公开的化合物的剂量取决于施用的受试者、目标器官、症状、施用方法等等而变化，但相对于1kg体重，它是例如约0.01mg至约100mg，优选约0.01至约50mg，更优选约0.01至约20mg，优选通过静脉内注射给与。
本公开的化合物可以与其他药物同时使用。具体来说，本公开的化合物可以与诸多药物，如激素治疗剂、化学治疗剂、免疫治疗剂、抑制细胞生长因子或细胞生长因子受体的作用的药物等等一起使用。在下文中，将可与本公开的化合物组合使用的药物缩写为伴随药物。
“激素治疗剂”的实例包括磷雌酚(fosfestrol)、己烯雌酚(diethylstylbestrol)、氯烯雌醚(chlorotrianisene)、醋酸甲羟孕酮(medroxyprogesterone acetate)、醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)、醋酸氯地孕酮(chlormadinone acetate)、醋酸环丙氯地孕酮(cyproterone acetate)、达那唑(danazol)、烯丙雌醇(allylestrenol)、孕三烯酮(gestrinone)、美帕曲星(mepartricin)、雷洛昔芬(raloxifene)、奥美昔芬(ormeloxifene)、左美洛昔芬(levormeloxifene)、抗雌激素(例如，柠檬酸它莫西芬(tamoxifen citrate)、柠檬酸托瑞米芬(toremifenecitrate))、丸剂制剂、美雄烷(mepitiostane)、睪内酯(testrolactone)、氨鲁米特(aminoglutethimide)、LH-RH激动剂(例如，醋酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、布舍瑞林(buserelin)、亮丙瑞林(leuprorelin)、醋酸亮丙瑞林)、屈洛昔芬(droloxifene)、环硫雄醇(epitiostanol)、磺酸乙炔雌二醇、芳香酶抑制剂(例如，盐酸法倔唑(fadrozolehydrochloride)、阿那曲唑(anastrozole)、瑞曲唑(retrozole)、依西美坦(exemestane)、伏氯唑(vorozole)、福美斯坦(formestane))、抗雄激素(例如，氟他胺(flutamide)、比卡鲁胺(bicartamide)、尼鲁米特(nilutamide)、恩扎鲁胺(enzalutamide))、5α-还原酶抑制剂(例如，非那雄胺(finasteride)、依立雄胺(epristeride)、度他雄胺(dutasteride))、肾上腺皮质激素药物(例如，地塞米松(dexamethasone)、泼尼松龙(prednisolone)、倍他米松(betamethasone)、去炎松(triamcinolone))、雄激素合成抑制剂(例如，阿比特龙(abiraterone))、类视黄醇和延迟类视黄醇代谢的药物(例如，利阿唑(liarozole))、甲状腺激素及其DDS(药物递送系统)制剂。
“化学治疗剂”的实例包括烷基化剂、抗代谢剂、抗癌抗生素和植物来源抗癌剂。
“烷基化剂”的实例包括氮芥(nitrogen mustard)、盐酸氮芥-N-氧化物、瘤可宁(chlorambutyl)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、依弗酰胺(ifosfamide)、噻替派(thiotepa)、卡波醌(carboquone)、甲苯磺酸英丙舒凡(improsulfan tosylate)、白消安(busulfan)、盐酸尼莫司汀(nimustine hydrochloride)、二溴甘露醇(mitobronitol)、美法仑(melphalan)、达卡巴嗪(dacarbazine)、雷莫司汀(ranimustine)、雌莫司汀磷酸钠(sodium estramustine phosphate)、三乙烯蜜胺(triethylenemelamine)、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、链脲霉素(streptozocin)、哌泊溴烷(pipobroman)、依托格鲁(etoglucid)、卡铂(carboplatin)、顺铂(cisplatin)、米铂(miboplatin)、奈达铂(nedaplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、六甲蜜胺(altretamine)、氨莫司汀(ambamustine)、盐酸二溴螺铵(dibrospidium hydrochloride)、福莫司汀(fotemustine)、松龙苯芥(prednimustine)、嘌嘧替派(pumitepa)、利博莫司汀(ribomustin)、替莫唑胺(temozolomide)、曲奥舒凡(treosulphan)、奥曲法胺(osptrophhamide)、净司他丁斯酯(zinostatin stimalamer)、阿多来新(adozelesin)、半胱胺亚硝脲(cystemustine)、比折来新(bizelesin)及其DDS制剂。
“抗代谢物”的实例包括巯基嘌呤(mercaptopurine)、6-巯基嘌呤核糖苷、硫代肌苷(thioinosine)、氨甲叶酸(methotrexate)、培美曲塞(pemetrexed)、依诺他滨(enocitabine)、阿糖胞苷(cytarabine)、阿糖胞苷十八烷基磷酸钠(cytarabineocfosfate)、盐酸环胞苷(ancitabine hydrochloride)、5-FU药物(例如，氟尿嘧啶(fluorouracil)、替加氟(tegafur)、UFT、脱氧氟尿苷(doxifluridine)、卡莫氟(carmofur)、加洛他滨(gallocitabine)、乙嘧替氟(emitefur)、卡培他滨(capecitabine))、氨基蝶呤(aminopterine)、奈扎拉滨(nelzarabine)、甲酰四氢叶酸钙(leucovorin calcium)、小药片(tabloid)、甘胺硫嘌呤(butocine)、亚叶酸钙(calciumfolinate)、左亚叶酸钙(levofolinate calcium)、克拉屈滨(cladribine)、乙嘧替氟、氟达拉滨(fludarabine)、吉西他滨(gemcitabine)、羟基脲(hydroxycarbamide)、喷司他丁(pentostatin)、吡曲克辛(piritrexim)、碘苷(idoxuridine)、米托胍腙(mitoguazone)、噻佐夫林(thiazophrine)、氨莫司汀、苯达莫司汀(bendamustine)及其DDS制剂。
“抗癌抗生素”的实例包括放线菌素D(actinomycin-D)、放线菌素C、丝裂霉素C(mitomycin-C)、色霉素A3(chromomycin-A3)、盐酸博来霉素(bleomycin hydrochloride)、硫酸博来霉素(bleomycin sulfate)、硫酸培洛霉素(peplomycin sulfate)、盐酸柔红霉素(daunorubicin hydrochloride)、盐酸阿霉素(doxorubicin hydrochloride)、盐酸阿拉霉素(aclarubicin hydrochloride)、盐酸吡拉霉素(pirarubicin hydrochloride)、盐酸泛艾霉素(epirubicin hydrochloride)、新制癌菌素(neocarzinostatin)、光神霉素(mithramycin)、肉瘤霉素(sarcomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、米托坦(mitotane)、盐酸佐柔比星(zorubicin hydrochloride)、盐酸米托蒽醌(mitoxantronehydrochloride)、盐酸伊达比辛(idarubicin hydrochloride)及其DDS制剂(例如，包括阿霉素的PEG脂质粒)。
“植物来源抗癌剂”的实例包括依托泊苷(etoposide)、磷酸依托泊苷、硫酸长春碱(vinblastine sulfate)、硫酸长春新碱(vincristine sulfate)、硫酸长春地辛(vindesine sulfate)、替尼泊苷(teniposide)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、欧洲紫杉醇(docetaxel)、卡巴他赛(cabazitaxel)、长春瑞滨(vinorelbine)及其DDS制剂。
“免疫治疗剂(BRM)”的实例包括毕西巴尼(picibanil)、云芝多糖(krestin)、西佐喃(sizofiran)、蘑菇多糖(lentinan)、乌苯美司(ubenimex)、干扰素、白介素、巨噬细胞集落刺激因子、粒细胞集落刺激因子、红细胞生成素、淋巴细胞毒素、BCG疫苗、小棒状杆菌(Corynebacterium parvum)、左旋咪唑(levamisole)、多糖K、丙考达唑(procodazole)、抗CTLA4抗体(例如，伊匹单抗(ipilimumab)、曲美目单抗(tremelimumab))、抗PD-1抗体(例如，纳武单抗(nivolumab)、帕博利单抗(pembrolizumab))和抗PD-L1抗体。
“抑制细胞生长因子或细胞生长因子受体的作用的药物”中的“细胞生长因子”的实例包括促进细胞增殖的任何物质，其在正常情况下是具有不超过20,000分子量并且能够通过结合受体而在低浓度下表现出其活性的肽，包括(1)EGF(表皮生长因子)或具有基本上与EGF相同的活性的物质[例如，TGFα]；(2)胰岛素或具有基本上与胰岛素相同的活性的物质[例如，胰岛素、IGF(胰岛素样生长因子)-1、IGF-2]；(3)FGF(成纤维细胞生长因子)或具有基本上与FGF相同的活性的物质[例如，酸性FGF、碱性FGF、KGF(角化细胞生长因子)、FGF-10]；以及(4)其他细胞生长因子[例如，CSF(集落刺激因子)、EPO(红细胞生成素)、IL-2(白介素-2)、NGF(神经生长因子)、PDGF(血小板衍生生长因子)、TGFβ(转化生长因子β)、HGF(肝细胞生长因子)、VEGF(血管内皮生长因子)、调蛋白、血管生成素]。
“细胞生长因子受体”的实例包括能够结合上述细胞生长因子的任何受体，包括EGF受体、调蛋白受体(例如HER3)、胰岛素受体、IGF受体-1、IGF受体-2、FGF受体-1或FGF受体-2、VEGF受体、血管生成素受体(例如Tie2)、PDGF受体等等。
“抑制细胞生长因子或细胞生长因子受体的作用的药物”的实例包括EGF抑制剂、TGFα抑制剂、调蛋白抑制剂、胰岛素抑制剂、IGF抑制剂、FGF抑制剂、KGF抑制剂、CSF抑制剂、EPO抑制剂、IL-2抑制剂、NGF抑制剂、PDGF抑制剂、TGFβ抑制剂、HGF抑制剂、VEGF抑制剂、血管生成素抑制剂、EGF受体抑制剂、HER2抑制剂、HER4抑制剂、胰岛素受体、IGF-1受体抑制剂、IGF-2受体抑制剂、FGF受体-1抑制剂、FGF受体-2抑制剂、FGF受体-3抑制剂、FGF受体-4抑制剂、VEGF受体抑制剂、Tie-2抑制剂、PDGF受体抑制剂、Abl抑制剂、Raf抑制剂、FLT3抑制剂、c-Kit抑制剂、Src抑制剂、PKC抑制剂、Smo抑制剂、ALK抑制剂、ROR1抑制剂、Trk抑制剂、Ret抑制剂、mTOR抑制剂、Aurora抑制剂、PLK抑制剂、MEK(MEK1/2)抑制剂、MET抑制剂、CDK抑制剂、Akt抑制剂、ERK抑制剂、PI3K抑制剂等等。更具体来说，可以使用抗VEGF抗体(例如，贝伐珠单抗(Bevacizumab)、雷莫芦单抗(Ramucurumab))、抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗(Trastuzumab)、帕妥珠单抗(Pertuzumab))、抗EGFR抗体(例如，西妥昔单抗(Cetuximab)、帕尼单抗(Panitumumab)、马妥珠单抗(Matuzumab)、尼妥珠单抗(Nimotuzumab))、抗HGF抗体、伊马替尼(Imatinib)、埃罗替尼(Erlotinib)、吉非替尼(Gefitinib)、索拉非尼(Sorafenib)、舒尼替尼(Sunitinib)、达沙替尼(Dasatinib)、拉帕替尼(Lapatinib)、瓦他拉尼(Vatalanib)、依鲁替尼(Ibrutinib)、博舒替尼(Bosutinib)、卡博替尼(Cabozantinib)、克唑替尼(Crizotinib)、阿雷替尼(Alectinib)、维莫德吉(Vismodegib)、阿西替尼(Axitinib)、莫特莎尼(Motesanib)、尼罗替尼(Nilotinib)、6-[4-(4-乙基哌嗪-1-基甲基)苯基]-N-[1(R)-苯乙基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(AEE-788)、凡德他尼(Vandetanib)、替西罗莫司(Temsirolimus)、依维莫司(Everolimus)、恩扎妥林(Enzastaurin)、托扎舍替(Tozasertib)、磷酸2-[N-[3-[4-[5-[N-(3-氟苯基)氨基甲酰基甲基]-1H-吡唑-3-基氨基]喹唑啉-7-基氧基]丙基]-N-乙基氨基]乙酯(AZD-1152)、4-[9-氯-7-(2,6-二氟苯基)-5H-嘧啶并[5,4-d][2]苯并氮呯-2-基氨基]苯甲酸、N-[2-甲氧基-5-[(E)-2-(2,4,6-三甲氧基苯基)乙烯基磺酰基甲基]苯基]甘氨酸钠盐(ON-1910Na)、沃拉舍替(Volasertib)、司美替尼(Selumetinib)、曲美替尼(Trametinib)、N-[2(R),3-二羟基丙氧基]-3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)苯甲酰胺(PD-0325901)、博舒替尼、瑞戈菲尼(Regorafenib)、阿法替尼(Afatinib)、艾代拉利司(Idelalisib)、色瑞替尼(Ceritinib)、达拉非尼(Dabrafenib)等等。
除上述药物以外，还可以使用L-天冬酰胺酶、L-精氨酸酶、精氨酸脱亚胺酶、乙酰格雷酮(aceglatone)、盐酸丙卡巴肼、原卟啉-钴错合盐、汞血卟啉-钠、拓扑异构酶I抑制剂(例如，伊立替康(irinotecan)、拓扑替康(topotecan)、因都替康(indotecan)、因地替康(Indimitecan))、拓扑异构酶II抑制剂(例如，索布佐生(sobuzoxane))、分化诱导剂(例如，类视黄醇、维生素D)、其他血管生成抑制剂(例如，胡马吉林(humagillin)、鲨鱼提取物、COX-2抑制剂)、α-阻断剂(例如，盐酸坦舒洛新(tamsulosin hydrochloride))、双膦酸(例如，帕米膦酸盐(pamidronate)、唑来膦酸盐(zoledronate))、沙利度胺(thalidomide)、来那度胺(lenalidomide)、泊马度胺(pomalidomide)、氮杂胞苷(azacytidine)、地西他滨(decitabine)、蛋白酶体抑制剂(例如，硼替佐米(bortezomib)、卡非佐米(carfilzomib)、伊沙佐米(ixazomib))、NEDD8抑制剂(例如，佩冯奈地司他(Pevonedistat))、UAE抑制剂、PARP抑制剂(例如，奥拉帕尼(Olaparib)、尼拉帕尼(Niraparib)、维利帕尼(Veliparib))、抗肿瘤抗体如抗CD20抗体(例如，利妥昔单抗(Rituximab)、奥妥珠单抗(Obinutuzumab))、抗CCR4抗体(例如，莫加利珠单抗(Mogamulizumab))等等、抗体-药物缀合物(例如，曲妥珠单抗安坦辛(trastuzumab emtansine)、贝伦妥单抗维多汀(Brentuximab vedotin))等等作为伴随药物。
通过组合本公开的化合物与伴随药物，可以实现优越的效果，如(1)与单独施用本公开的化合物或伴随药物相比，可以减少剂量；(2)可以根据患者的病状(轻微情况、严重情况等等)来选择与本公开的化合物组合的药物；(3)可以将治疗时段设定得更久；(4)可以设计持续治疗效果；(5)通过组合使用本公开的化合物与伴随药物可以得到协同效应；等等。
在本说明书中，组合使用的本公开的化合物与伴随药物称为“本公开的组合剂”。
对于本公开的组合剂的使用，本公开的化合物和伴随药物的施用时间不受限制，并且本公开的化合物和伴随药物可以同时施用施用至受试者，或者可以在不同的时间施用。当以一定的时间间隔施用时，该间隔取决于将要施用的有效成分、剂型和施用方法而不同，并且举例来说，当首先施用伴随药物时，可以在施用伴随药物之后1分钟至3天、优选10分钟至1天、更优选15分钟至1小时的时间范围内施用本公开的化合物。当首先施用本公开的化合物时，在施用本公开的化合物之后1分钟至1天、优选10分钟至6小时、更优选15分钟至1小时的时间范围内施用伴随药物。伴随药物的剂量可以根据剂量临床设定来确定，并且可以取决于施用受试者、施用途径、疾病、组合等等适当地选择。
组合使用本公开的化合物与伴随药物的施用模式的实例包括以下方法：(1)同时制造本公开的化合物和伴随药物以得到单一制剂，然后施用。(2)分别制造本公开的化合物和伴随药物以得到两种制剂，然后通过相同的施用途径同时施用。(3)分别制造本公开的化合物和伴随药物以得到两种制剂，然后在不同的时间通过相同的施用途径施用。(4)分别制造本公开的化合物和伴随药物以得到两种制剂，然后通过不同的施用途径同时施用。(5)分别制造本公开的化合物和伴随药物以得到两种制剂，然后在不同的时间通过不同的施用途径施用(例如，将本公开的化合物和伴随药物按这个顺序或相反顺序施用)。
可以根据其临床剂量适当地确定伴随药物的剂量，并且可以取决于施用受试者、施用途径、目标疾病、症状、组合等等适当地确定本公开的化合物与伴随药物的比率。举例来说，当施用受试者是人时，相对于1重量份的本公开的化合物，以0.01至100重量份使用伴随药物。
此外，本公开的化合物或本公开的组合剂可以与非药物疗法同时使用。确切地说，本公开的化合物或本公开的组合剂可以与非药物疗法组合，如(1)手术；(2)使用血管紧张素II等的高血压化学疗法；(3)基因疗法；(4)热疗法；(5)冷疗法；(6)激光烧灼；以及(7)放射疗法。
举例来说，通过在以上提到的手术等前后或者在其中两种或三种的组合治疗前后使用本公开的化合物或本公开的组合剂，可以得到诸多效果，如预防出现抗性、延长无疾病存活时间、抑制癌症转移或复发、延长寿命等等。
另外，有可能组合利用本公开的化合物或本公开的组合剂的治疗与支持疗法[(i)施用针对伴随多种感染性疾病的抗生素(例如，β-内酰胺型，如头孢替安(pansporin)等等；大环内酯型，如克拉霉素等等)；(ii)施用用于改善营养不良的高卡路里转液、氨基酸制剂或一般维生素制剂；(iii)施用用于疼痛缓解的吗啡；(iv)施用用于改善如恶心、呕吐、厌食症、腹泻、白细胞减少症、血小板减少症、血红蛋白浓度降低、脱发、肝病、肾病、DIC、发热等副作用的药剂；以及(v)施用用于抑制癌症等的多药物抗性的药剂]。
实施例
参考以下实施例、实验实施例和配制实施例详细说明本公开，所述实施例、实验实施例和配制实施例不应当被视为具限制性，并且公开内容可以在本公开的范围内变化。
在以下实施例中，“室温”一般意指约10℃至约35℃。除非另外规定，否则针对混合溶剂指出的比率是体积混合比。除非另外规定，否则％意指wt％。
在硅胶柱色谱法中，“Diol”意指使用3-(2,3-二羟基丙氧基)丙基硅烷结合型硅胶。在硅胶柱色谱法和HPLC(高效液相色谱法)中，“C18”意指使用十八基结合型硅胶。除非另外规定，否则洗脱溶剂的比率是体积混合比。
在以下条件下进行LC/MS测量[柱：L-Column2ODS，3.0mm内径×50mm，流动相：乙腈/5mM乙酸铵缓冲溶液＝900/100)]。
在实施例中，使用以下缩写。
mp：熔点
MS：质谱
[M+H]+，[M-H]-：分子离子峰
M：摩尔浓度
N：标称
CDCl3：氘化三氯甲烷
DMSO-d6：氘化二甲亚砜
D2O：氘化水
1H NMR：质子核磁共振
31P NMR：磷核磁共振
LC/MS：液相色谱仪质谱仪
ESI：电喷雾电离
APCI：大气压化学电离
THF：四氢呋喃
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
DCM：二氯甲烷
通过傅里叶变换型NMR来测量1H NMR和31P NMR。对于该分析，使用ACD/SpecManager(商标名)等等。不描述具有极弱质子，如羟基、氨基等的峰。
通过LC/MS来测量MS。作为离子化方法，使用ESI方法或APCI方法。数据指出实际测量值(实验值)。总体来说，观察分子离子峰。在具有叔丁氧羰基的化合物的情况下，可以观察消除叔丁氧羰基或叔丁基之后的呈片段离子形式的峰。在具有羟基的化合物的情况下，可以观察消除H2O之后的呈片段离子形式的峰。在盐的情况下，一般观察游离形式的分子离子峰或片段离子峰。
实施例1
7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2,10,16-三羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐的合成
A)7-((2R,3R,4S,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-5-氟-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4(7H)-酮
在室温下向7-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)-5-氟-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4(7H)-酮(6.26g)在吡啶(100mL)中的溶液中加入4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷(8.92g)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌过夜。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，并且用乙酸乙酯提取混合物。依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和盐水洗涤有机层，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(8.65g)。MS:[M-H]-586.0。
B)7-(5-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-3-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮
向7-((2R,3R,4S,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-5-氟-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4(7H)-酮(2.65g)在DMF(20mL)中的溶液中加入咪唑(0.614g)和叔丁基二甲基氯硅烷(0.816g)，并且在室温下将混合物搅拌过夜。用水稀释反应混合物，并且用乙酸乙酯提取。用饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到标题化合物(1.1g)。MS:[M-H]-700.2。
C)7-(5-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-3-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-2-O-((2-氰基乙氧基)(二异丙基氨基)膦基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮
使7-(5-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-3-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(5.43g)与无水甲苯一起经受共沸脱水三次，并且溶解在无水DMF(15mL)中。向溶液中加入3-((双(二异丙基氨基)膦基)氧)丙腈(3.19mL)、1H-四唑(0.542g)和1-甲基-1H-咪唑(0.306mL)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌过夜，倾入饱和碳酸氢钠水溶液中，并且用乙酸乙酯提取。依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和盐水洗涤有机层，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(DIOL，乙酸乙酯/己烷)纯化残余物。再次通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷，含有0.5％三乙胺)纯化所获得的粗产物，得到呈两种非对映异构体的混合物形式的标题化合物(4.22g)。MS:[M-H]-901.2。
D)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷酰基)氧)甲基)-4-氟四氢呋喃-3-基酯
使N-苯甲酰基-2'-脱氧-2'-氟-3'-O-(羟基(氧负离子基)磷烷基)腺苷(1.2g)和7-(5-O-([双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)]-3-O-([叔丁基(二甲基)硅烷基)]-2-O-({(2-氰基乙氧基)([二异丙基氨基)]膦基)}-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(3.4g)与无水乙腈一起经受共沸脱水，并且向其中加入无水乙腈(15mL)和无水THF(5mL)。向混合物中加入5-(乙基硫烷基)-2H-四唑(1.07g)(其与无水乙腈一起经受共沸脱水)与无水乙腈(10mL)的混合物，并且在55℃下在氩气氛下将混合物搅拌2小时。向其中加入70％氢过氧化叔丁基水溶液(1.12mL)，并且在室温下将混合物搅拌20分钟。向反应混合物中加入硫代硫酸钠(5920mg)与水(3mL)的混合物，并且在减压下浓缩混合物。向残余物中加入80％乙酸(30mL)，并且在室温下将混合物搅拌20分钟。在减压下浓缩反应混合物，并且通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(1.1g)。MS:[M+H]+952.2
E)N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-15-氟-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,10-二羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺
使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷酰基)氧)甲基)-4-氟四氢呋喃-3-基酯(350mg)与无水乙腈和无水吡啶一起经受共沸脱水，并且向其中加入无水吡啶(15mL)。向混合物中加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(238mg)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时。向其中加入水(232μL)和碘(121mg)，并且在室温下将混合物再搅拌20分钟。向反应混合物中加入五水合硫代硫酸钠(91mg)与水(1mL)的混合物，并且在室温下将混合物搅拌5分钟。向其中加入甲苯，并且在减压下浓缩混合物。向残余物中加入无水乙腈(15mL)和2-甲基丙-2-胺(5.26mL)，在室温下将混合物搅拌2小时，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(332mg)。MS:[M+H]+897.1
F)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-16-((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-15-氟-2,10-二羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮
向N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-15-氟-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,10-二羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(332mg)中加入40％甲胺乙醇溶液(7.6mL)，在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，并且通过HPLC(L-column2ODS，50×150mm，流动相：5mM乙酸铵水溶液/乙腈)纯化所获得的残余物，得到标题化合物(106.4mg)。MS:[M+H]+793.1
G)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2,10,16-三羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐
向7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-16-((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-15-氟-2,10-二羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(106.4mg)中加入三氢氟酸三乙胺(1094μL)。在50℃下将反应混合物搅拌1小时，并且冷却至室温，向其中加入乙氧基(三甲基)硅烷(6266μL)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。在减压下浓缩反应混合物，向残余物中加入乙氧基(三甲基)硅烷(6266μL)和甲醇(1mL)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。在减压下浓缩反应混合物，并且通过C18柱色谱法(乙腈/10mM乙酸三乙铵缓冲溶液)纯化残余物，得到标题化合物(82mg)。1H NMR(400MHz,D2O)δ1.18(18H,t,J＝7.3Hz),3.11(12H,q,J＝7.4Hz),4.01-4.14(2H,m),4.17-4.26(1H,m),4.34(2H,d,J＝3.4Hz),4.42-4.50(1H,m),4.54(1H,d,J＝4.2Hz),4.86-4.99(2H,m),5.38-5.60(1H,m),6.30-6.45(2H,m),7.24(1H,d,J＝2.0Hz),7.91(1H,s),8.05(1H,s),8.17(1H,s)。31P NMR(162MHz,D2O)δ-2.16,-1.66。
实施例1a
7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2,10,16-三羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二钠盐的合成
使去离子水(480mL)通过将AG(商标名)50W-X8阳离子交换树脂(100-200目，30g)包装在空柱中而制备的柱。然后，使1M氢氧化钠水溶液(288mL)和去离子水(540mL)通过该树脂。在以上提到的预处理之后，使含有7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2,10,16-三羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(1.53g)的去离子水(54mL)通过该树脂，使去离子水(72mL)通过该树脂，并且对所获得的水溶液进行冷冻干燥，得到标题化合物(1.28g)。1HNMR(300MHz,D2O)δ4.05-4.17(2H,m),4.20-4.28(1H,m),4.33-4.40(2H,m),4.44-4.51(1H,m),4.55(1H,d,J＝4.2Hz),4.84-5.01(2H,m),5.39-5.61(1H,m),6.31-6.40(2H,m),7.25(1H,d,J＝2.0Hz),7.91(1H,s),8.07(1H,s),8.18(1H,s)。31P NMR(121MHz,D2O)δ-2.2,-1.6。
实施例2
7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-10,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)的合成
A)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-16-((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-15-氟-10-羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体)
使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷酰基)氧)甲基)-4-氟四氢呋喃-3-基酯(700mg)与无水乙腈和无水吡啶一起经受共沸脱水，并且向其中加入无水吡啶(50mL)。在室温下向混合物中加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(475mg)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时。向其中加入水(464μL)和3H-苯并[c][1,2]二硫醇-3-酮(186mg)，并且在室温下将混合物再搅拌30分钟。向反应混合物中加入硫代硫酸钠(913mg)与水(3mL)的混合物，并且在减压下浓缩混合物。向残余物中加入无水乙腈(30mL)和2-甲基丙-2-胺(10mL)，在室温下将混合物搅拌1小时，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，并且向所获得的残余物中加入40％甲胺乙醇溶液(7.3mL)。在室温下在氩气氛下将混合物搅拌30分钟，并且在减压下浓缩反应混合物。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物。通过HPLC(L-column2ODS，50×150mm，流动相：5mM乙酸铵水溶液/乙腈)将所获得的残余物拆分成两种非对映异构体(tR1和tR2，按这个顺序，依据LC/MS，其滞留时间为较短至较长)，得到标题化合物(70mg，tR1)和标题化合物(150mg，tR2)。MS(tR1):[M+H]+809.1。MS(tR2):[M+H]+809.1
B)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-10,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)
向7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-16-((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-15-氟-10-羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体)(70mg，衍生自tR1)中加入甲醇(3.0mL)和三氢氟酸三乙胺(1.41mL)。浓缩反应混合物以去除甲醇，并且在55℃下将残余物搅拌1小时。将残余物冷却至室温，向其中加入乙氧基(三甲基)硅烷(7.8mL)，并且在室温下将混合物搅拌2小时。在减压下浓缩反应混合物，并且通过C18柱色谱法(乙腈/10mM乙酸三乙铵缓冲溶液)纯化残余物，得到标题化合物(56mg)。1H NMR(400MHz,D2O)δ1.23(18H,t,J＝7.3Hz),3.15(12H,q,J＝7.3Hz),4.15-4.23(3H,m),4.37-4.50(2H,m),4.54(1H,d,J＝10.3Hz),4.61(1H,d,J＝3.9Hz),4.96(2H,dt,J＝7.9,3.9Hz),5.77-5.95(1H,m),6.36(1H,d,J＝8.1Hz),6.40(1H,d,J＝15.4Hz),7.51(1H,d,J＝1.7Hz),7.99(2H,d,J＝13.7Hz),8.23(1H,s)。31P NMR(162MHz,D2O)δ-2.43,54.03。
实施例3
7-((2R,5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-10,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮1.7三乙胺盐的合成
向7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-16-((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-15-氟-10-羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体)(150mg，衍生自tR2)中加入甲醇(3.0mL)和三氢氟酸三乙胺(3.02mL)。浓缩反应混合物以去除甲醇，并且在55℃下将残余物搅拌1小时。将残余物冷却至室温，向其中加入乙氧基(三甲基)硅烷(16.4mL)，并且在室温下将混合物搅拌2小时。在减压下浓缩反应混合物，并且通过C18柱色谱法(乙腈/10mM乙酸三乙铵缓冲溶液)纯化残余物，得到标题化合物(155mg)。1H NMR(400MHz,D2O)δ1.23(15H,t,J＝7.3Hz),3.15(10H,q,J＝7.3Hz),4.06(1H,dd,J＝11.7,4.9Hz),4.18(1H,dd,J＝11.6,2.8Hz),4.29-4.47(3H,m),4.51(1H,d,J＝8.8Hz),4.58(1H,d,J＝3.9Hz),4.93-5.14(2H,m),5.44-5.64(1H,m),6.33-6.45(2H,m),7.32(1H,d,J＝1.5Hz),7.95(1H,s),8.06(1H,s),8.24(1H,s)。31P NMR(162MHz,D2O)δ-2.41,55.33。
实施例3a
7-((2R,5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-10,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二钠盐的合成
使去离子水(400mL)通过将AG(商标名)50W-X8阳离子交换树脂(100-200目，25.3g)包装在空柱中而制备的柱。然后，使1M氢氧化钠水溶液(240mL)和去离子水(450mL)通过该树脂。在以上提到的预处理之后，使含有7-((2R,5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-10,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(1.30g)的去离子水(45mL)通过该树脂，并且使去离子水(60mL)通过该树脂，得到含有标题化合物的水溶液。
使去离子水(400mL)通过将AG(商标名)50W-X8阳离子交换树脂(100-200目，26.3g)包装在空柱中而制备的柱。然后，使1M氢氧化钠水溶液(270mL)和去离子水(540mL)通过该树脂。在以上提到的预处理之后，使含有7-((2R,5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-10,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(1.18g)的去离子水(54mL)通过该树脂，并且使去离子水(63mL)通过该树脂，得到含有标题化合物的水溶液。合并含有标题化合物的两份水溶液并且冷冻干燥，得到标题化合物(2.0g)。1H NMR(300MHz,D2O)δ3.97-4.07(1H,m),4.11-4.20(1H,m),4.27-4.42(3H,m),4.43-4.51(1H,m),4.55(1H,d,J＝3.8Hz),4.88-5.12(2H,m),5.34-5.59(1H,m),6.30-6.40(2H,m),7.28(1H,d,J＝1.9Hz),7.91(1H,s),8.01(1H,s),8.18(1H,s)。31P NMR(121MHz,D2O)δ-2.38,55.3。
实施例4
7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2,10,15,16-四羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐的合成
A)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷酰基)氧)甲基)四氢呋喃-3-基酯
使N-苯甲酰基-2'-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-3'-O-(羟基(氧负离子基)磷烷基)腺苷(369mg)和7-(5-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-3-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-2-O-((2-氰基乙氧基)(二异丙基氨基)膦基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(817mg)与无水乙腈一起经受共沸脱水(三次)，并且悬浮在无水乙腈(3.6mL)和无水THF(1.2mL)中。向悬浮液中加入5-(乙基硫烷基)-2H-四唑(262mg)(其与无水乙腈一起经受共沸脱水)与无水乙腈(2.4mL)的混合物，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1.5小时。向反应溶液中加入70％氢过氧化叔丁基水溶液(0.276mL)，并且在室温下将混合物再搅拌40分钟。用硫代硫酸钠(636mg)和水(2mL)淬灭反应混合物，并且在减压下蒸发溶剂。将残余物溶解在80％乙酸(5mL)中，并且在室温下将溶液搅拌2.5小时。在减压下浓缩反应混合物，并且使残余物与无水乙腈和甲苯一起经受共沸脱水。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(538mg)。MS:[M+H]+1064.3。
B)N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-10-(2-氰基乙氧基)-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺
使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷酰基)氧)甲基)四氢呋喃-3-基酯(538mg)与无水乙腈和无水吡啶一起经受共沸脱水，并且悬浮在无水吡啶(12mL)中。向其中加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(327mg)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。向其中加入水(0.319mL)和碘(167mg)，并且在室温下将混合物再搅拌30分钟。用硫代硫酸钠(208mg)和水(2mL)淬灭反应混合物，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(509mg)。MS:[M+H]+1062.3。
C)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2,10-二羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮
将N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-10-(2-氰基乙氧基)-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(509mg)溶解在33％甲胺乙醇溶液(10mL)中，在室温下在氩气氛下将溶液搅拌1小时，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物。通过HPLC(L-column2ODS，50×150mm，流动相：5mM乙酸铵水溶液/乙腈)纯化所获得的残余物，得到标题化合物(227mg)。MS:[M+H]+905.2。
D)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2,10,15,16-四羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐
向7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2,10-二羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(227mg)中加入三氢氟酸三乙胺(0.818mL)，并且在50℃下将混合物搅拌5小时。在减压下蒸发溶剂，用1M碳酸氢三乙铵水溶液中和残余物，并且再次在减压下蒸发溶剂。通过C18硅胶柱色谱法(10mM乙酸三乙铵缓冲溶液/乙腈)纯化残余物，并且对所获得的固体进行冷冻干燥，得到标题化合物(103mg)。1H NMR(300MHz,D2O)δ1.26(18H,t,J＝7.4Hz),3.18(12H,q,J＝7.4Hz),4.06-4.29(3H,m),4.34-4.52(3H,m),4.62(1H,d,J＝3.8Hz),4.69-4.83(1H,m),4.84-4.95(1H,m),4.98-5.09(1H,m),6.14(1H,d,J＝1.5Hz),6.41(1H,dd,J＝8.3,1.5Hz),7.33(1H,d,J＝1.9Hz),7.99(1H,s),8.16(1H,s),8.25(1H,s)。31P NMR(121MHz,D2O)δ-1.96,-1.21。
实施例5
7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟
-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)
A)7-(5-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-3-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-2-O-(羟基(氧负离子基)磷烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮
将7-(5-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-3-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(835mg)溶解在吡啶(4mL)中，并且向其中加入亚磷酸二苯酯(0.456mL)。在室温下将混合物搅拌2小时。向其中加入水(1mL)和氢氧化铵(2mL)。在室温下将混合物搅拌30分钟，用水稀释反应混合物，并且用乙酸乙酯提取。使提取物经无水硫酸镁干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(611mg)。MS:[M-H]-764.1。
B)7-(3-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-2-O-(羟基(氧负离子基)磷烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮
在室温下将7-(5-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-3-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-2-O-(羟基(氧负离子基)磷烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(611mg)与80％乙酸(4mL)的混合物搅拌2小时。用甲醇稀释反应混合物，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(358mg)。MS:[M+H]+464.1。
C)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷代磺酰基)氧)甲基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)四氢呋喃-3-基酯
使7-(3-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-2-O-(羟基(氧负离子基)磷烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(358mg)与N-苯甲酰基-5'-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-2'-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-3'-O-((2-氰基乙氧基)(二异丙基氨基)膦基)腺苷(1.02g)的混合物与无水乙腈一起经受共沸脱水，并且悬浮在无水乙腈(10mL)中。向其中加入2,2,2-三氟乙酸吡啶(386mg)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时。向其中加入((二甲基氨基-亚甲基)氨基)-3H-1,2,4-二噻唑啉-3-硫酮(199mg)，并且在室温下将混合物再搅拌30分钟。用硫代硫酸钠(250mg)的水溶液(2.5mL)淬灭反应混合物，并且在减压下蒸发溶剂。将残余物溶解在1,1,1,3,3,3-六氟丙-2-醇(10mL)中，在室温下将溶液搅拌30分钟，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(328mg)。MS:[M+H]+1080.3。
D)N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2-(2-氰基乙氧基)-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-10-氧负离子基-10-硫烷基-2-硫离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(光学异构体)
向膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷代磺酰基)氧)甲基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)四氢呋喃-3-基酯(328mg)与无水吡啶(10mL)的混合物中加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(196mg)。在室温下在氩气氛下将混合物搅拌30分钟，向其中加入水(0.5mL)和3H-苯并[c][1,2]二硫醇-3-酮(61mg)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。用饱和碳酸氢钠水溶液稀释反应混合物，并且用乙酸乙酯提取。使提取物经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，然后通过C18硅胶柱色谱法(10mM乙酸三乙铵缓冲溶液/乙腈)加以纯化，得到标题化合物(光学异构体)(92mg，tR4)。MS:[M+H]+1094.3。
E)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体)
将N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2-(2-氰基乙氧基)-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-10-氧负离子基-10-硫烷基-2-硫离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(光学异构体)(90mg)溶解在40％甲胺甲醇溶液(3.0mL)中，在室温下在氩气氛下将溶液搅拌1小时，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(32mg)。MS:[M+H]+937.1。
F)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)
在50℃下将7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体)(32mg)与三氢氟酸三乙胺(0.12mL)的混合物搅拌3小时。将混合物冷却至室温，用1M碳酸氢三乙铵水溶液中和，并且在减压下蒸发溶剂。通过C18硅胶柱色谱法(10mM乙酸三乙铵缓冲溶液/乙腈)纯化残余物。对所获得的固体进行冷冻干燥，得到标题化合物(21mg)。1H NMR(300MHz,D2O)δ1.23(18H,t,J＝7.3Hz),3.15(12H,q,J＝7.4Hz),3.99-4.09(1H,m),4.23-4.30(2H,m),4.30-4.41(2H,m),4.41-4.45(1H,m),4.47-4.54(1H,m),4.83-4.88(2H,m),4.96-5.13(3H,m),6.11(1H,d,J＝1.1Hz),6.36(1H,d,J＝7.4Hz),7.31(1H,d,J＝1.9Hz),7.95(1H,s),8.11(1H,s),8.22(1H,s)。31P NMR(121MHz,D2O)δ52.25,54.88。
实施例6
7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)的合成
A)7-(5-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮
向7-((2R,3R,4S,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-5-氟-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4(7H)-酮(2.65g)在DMF(20mL)中的溶液中加入咪唑(0.614g)和叔丁基二甲基氯硅烷(0.816g)，并且在室温下将混合物搅拌过夜。用水稀释反应混合物，并且用乙酸乙酯提取。用饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到标题化合物(1.2g)。MS:[M-H]-700.3。
B)7-(5-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-3-O-((2-氰基乙氧基)(二异丙基氨基)膦基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮
将7-(5-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(2.37g)溶解在DMF(6.75mL)中，并且向溶液中加入3-((双(二异丙基氨基)膦基)氧)丙腈(2.15mL)、1H-四唑(0.237g)和1-甲基-1H-咪唑(0.134mL)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌20.5小时。向反应溶液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，并且用乙酸乙酯提取混合物。用饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸镁干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷，含有0.5％三乙胺)纯化残余物，得到标题化合物(2.67g)。MS:[M-H]-900.2。
C)7-(2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-3-O-(羟基(氧负离子基)磷烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮
将7-(5-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-3-O-((2-氰基乙氧基)(二异丙基氨基)膦基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(1.54g)溶解在乙腈(15mL)中，在室温下向其中加入2,2,2-三氟乙酸吡啶(0.396g)和水(0.062mL)，并且在室温下将混合物搅拌50分钟。在室温下向反应溶液中加入2-甲基丙-2-胺(8.07mL)，并且在室温下将混合物搅拌30分钟。在减压下浓缩反应混合物，向残余物中加入80％乙酸(8.54mL)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。
类似地，将7-(5-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-3-O-((2-氰基乙氧基)(二异丙基氨基)膦基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(1.13g)溶解在乙腈(10mL)中，在室温下向其中加入2,2,2-三氟乙酸吡啶(0.290g)和水(0.045mL)，并且在室温下将混合物搅拌50分钟。在室温下向反应溶液中加入2-甲基丙-2-胺(5.92mL)，并且在室温下将混合物搅拌30分钟。在减压下浓缩反应混合物，向残余物中加入80％乙酸(6.27mL)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。
合并反应混合物，在减压下浓缩，并且通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(961mg)。MS:[M+H]+464.0。
D)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-2-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷代磺酰基)氧)甲基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)四氢呋喃-3-基酯
使7-(2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-3-O-(羟基(氧负离子基)磷烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(400mg)和N-苯甲酰基-5'-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-3'-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-2'-O-((2-氰基乙氧基)(二异丙基氨基)膦基)腺苷(1.02g)与无水乙腈一起经受共沸脱水(三次)，并且悬浮在无水乙腈(6mL)中。向其中加入2,2,2-三氟乙酸吡啶(333mg)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时。向其中加入((二甲基氨基-亚甲基)氨基)-3H-1,2,4-二噻唑啉-3-硫酮(195mg)，并且在室温下将混合物再搅拌30分钟。用硫代硫酸钠(316mg)和水(0.5mL)淬灭反应混合物，并且在减压下蒸发溶剂。将残余物溶解在1,1,1,3,3,3-六氟丙-2-醇(5mL)中，并且在室温下将溶液搅拌1小时。在减压下浓缩反应混合物，并且使残余物与无水乙腈和甲苯一起经受共沸脱水。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(556mg)。MS:[M+H]+1080.3。
E)N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-10-(2-氰基乙氧基)-14-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-羟基-2,10-二硫离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(光学异构体)
使膦酸氢((2R,3R,4R,5R)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-2-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷代磺酰基)氧)甲基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)四氢呋喃-3-基酯(556mg)与无水乙腈和无水吡啶一起经受共沸脱水，并且溶解在无水吡啶(15mL)中。在室温下向溶液中加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(332mg)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌30分钟。向其中加入水(1mL)和3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮(108mg)，并且在室温下将混合物再搅拌1小时。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，并且用乙酸乙酯提取混合物。用饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/甲醇)纯化残余物。通过HPLC(L-column2ODS，50×150mm，流动相：5mM乙酸铵水溶液/乙腈)将所获得的残余物拆分成四种非对映异构体(tR1、tR2、tR3和tR4，按这个顺序，依据LC/MS，其滞留时间为较短至较长)，得到标题化合物(120mg，tR2)和标题化合物(183mg，tR4)。tR2MS:[M+H]+1094.3。tR4MS:[M+H]+1094.3。
F)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体)
将N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-10-(2-氰基乙氧基)-14-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-氧负离子基-2-硫烷基-10-硫离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(光学异构体，衍生自tR2)(120mg)溶解在33％甲胺乙醇溶液(5.0mL)中，在室温下在氩气氛下将溶液搅拌1.5小时，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(84.4mg)。MS:[M+H]+937.2。
G)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)
向7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体，衍生自tR2)(84.4mg)中加入三氢氟酸三乙胺(0.294mL)，并且在50℃下将混合物搅拌2小时。将反应溶液冷却至室温，用1M碳酸氢三乙铵水溶液中和，并且在减压下蒸发溶剂。通过C18硅胶柱色谱法(10mM乙酸三乙铵缓冲溶液/乙腈)纯化残余物，并且对所获得的固体进行冷冻干燥，得到标题化合物(58.4mg)。1H NMR(300MHz,D2O)δ1.26(18H,t,J＝7.4Hz),3.18(12H,q,J＝7.3Hz),3.94-4.05(1H,m),4.10-4.20(1H,m),4.28-4.45(2H,m),4.50(2H,brs),4.59(1H,d,J＝4.2Hz),4.71-4.81(1H,m),5.32(2H,d,J＝10.6Hz),6.23-6.32(2H,m),7.17(1H,d,J＝2.3Hz),8.05(1H,s),8.20(1H,s),8.66(1H,s)。31P NMR(121MHz,D2O)δ55.8,59.2。
实施例7
7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)的合成
A)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体)
将N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-10-(2-氰基乙氧基)-14-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-氧负离子基-2-硫烷基-10-硫离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(光学异构体，衍生自tR4)(183mg)溶解在33％甲胺乙醇溶液(5.0mL)中，在室温下在氩气氛下将溶液搅拌1小时，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(107mg)。MS:[M+H]+937.1。
B)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)
向7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体，衍生自tR4)(107mg)中加入三氢氟酸三乙胺(0.372mL)，并且在50℃下将混合物搅拌2.5小时。将反应溶液冷却至室温，用1M碳酸氢三乙铵水溶液中和，并且在减压下蒸发溶剂。通过C18硅胶柱色谱法(10mM乙酸三乙铵缓冲溶液/乙腈)纯化残余物，并且对所获得的固体进行冷冻干燥，得到标题化合物(78mg)。1H NMR(300MHz,D2O)δ1.26(18H,t,J＝7.4Hz),3.18(12H,q,J＝7.2Hz),4.09-4.18(1H,m),4.21-4.29(2H,m),4.33-4.43(1H,m),4.51(2H,brs),4.65-4.71(1H,m),4.89(1H,d,J＝4.2Hz),4.99-5.11(1H,m),5.29-5.42(1H,m),6.23-6.31(2H,m),7.00(1H,d,J＝1.9Hz),8.03(1H,s),8.17(1H,s),8.56(1H,s)。31P NMR(121MHz,D2O)δ52.8,55.1。
实施例8
2-氨基-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(4-氨基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,10,15,16-四羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮二(三乙胺)盐的合成
A)N-(7-((2R,3R,4S,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺
将二苯甲酸(2R,3R,4R,5R)-2-((苯甲酰氧基)甲基)-5-(4-氯-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)四氢呋喃-3,4-二酯(14.09g)分17份装入17个密封管容器中，并且分别向其中加入2M氨异丙醇溶液(20mL)。在130℃下在微波照射下将各个混合物搅拌5小时。合并所获得的混合物，并且在减压下浓缩。使所获得的残余物与甲苯一起经受共沸蒸发两次以去除溶剂，向其中加入吡啶(100mL)，并且将混合物冷却至0℃。在0℃下向其中加入苯甲酰氯(26.6mL)，并且在室温下将混合物搅拌过夜。向反应混合物中加入水，并且用乙酸乙酯提取混合物。在减压下浓缩提取物，并且通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷)纯化残余物。向所获得的化合物中加入吡啶(350mL)和乙醇(100mL)，并且将混合物冷却至0℃。向其中加入1M氢氧化钠水溶液(103mL)，并且在0℃下将混合物搅拌1小时。再次向其中加入1M氢氧化钠水溶液(45.7mL)，并且在0℃下将混合物搅拌1小时。在室温下向反应混合物中加入强酸性阳离子交换树脂DOWEXTM50Wx4 100-200(95g)，通过过滤去除固体，并且在减压下浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物。向所获得的产物(5.71g)中加入吡啶(60mL)和4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷(5.98g)，并且在室温下将混合物搅拌4小时。再次向其中加入4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷(5.98g)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。在减压下浓缩混合物，向其中加入水，并且用乙酸乙酯提取混合物。用水和饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到标题化合物(8.50g)。MS:[M+H]+691.2。
B)N-(7-((2R,3R,4R,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-4-羟基四氢呋喃-2-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺
向N-(7-((2R,3R,4S,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺(7.51g)与DMF(30mL)的混合物中加入咪唑(1.924g)和叔丁基二甲基氯硅烷(2.13g)，并且在室温下将混合物搅拌过夜。向反应混合物中加入水，并且用乙酸乙酯提取混合物。用水和饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到标题化合物(2.94g)。MS,实验值:501.2。
C)N-苯甲酰基-7-(5-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-3-O-((2-氰基乙氧基)(二异丙基氨基)膦基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
使N-(7-((2R,3R,4R,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-4-羟基四氢呋喃-2-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺(1.03g)与无水甲苯一起经受共沸脱水，并且在氩气氛下向其中加入无水DMF(5mL)。向其中加入3-((双(二异丙基氨基)膦基)氧)丙腈(0.771g)、1H-四唑(0.090g)和1-甲基-1H-咪唑(0.051mL)，并且将混合物搅拌6小时。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，并且用乙酸乙酯提取混合物。用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(含0.5％三乙胺的乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到标题化合物(1.12g)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ-0.17(3H,d,J＝2.6Hz),-0.04-0.00(3H,m),0.78(9H,s),1.04(3H,d,J＝6.8Hz),1.13-1.23(9H,m),2.32(1H,t,J＝6.6Hz),2.68(1H,td,J＝6.4,1.9Hz),3.21-3.36(1H,m),3.42-3.71(4H,m),3.79(6H,d,J＝1.1Hz),3.85-4.05(1H,m),4.25-4.45(2H,m),4.64-4.82(1H,m),6.39(1H,dd,J＝14.2,5.9Hz),6.74-6.89(4H,m),7.19-7.41(8H,m),7.43-7.67(5H,m),7.98(2H,d,J＝7.6Hz),8.50(1H,s),8.64(1H,d,J＝5.3Hz)。
D)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(4-苯甲酰胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基酯
向N-苯甲酰基-7-(5-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-3-O-((2-氰基乙氧基)(二异丙基氨基)膦基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(1.12g)中加入乙腈(5mL)、水(40μL)和2,2,2-三氟乙酸吡啶(258mg)。在室温下将混合物搅拌10分钟，向其中加入叔丁胺(5.43mL)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。在减压下浓缩反应混合物，向其中加入80％乙酸(5.5mL)，并且在室温下将混合物再搅拌1小时。在减压下蒸发溶剂，并且通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(527mg)。MS:[M+H]+567.2。
E)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(4-苯甲酰胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(羟基甲基)-2-(2-异丁基酰胺基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷酰基)氧)甲基)四氢呋喃-3-基酯
使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(4-苯甲酰胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基酯(527mg)和3'-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-2'-O-((2-氰基乙氧基)(二异丙基氨基)膦基)-N-异丁酰基鸟苷(1.083g)与无水乙腈一起经受共沸脱水三次，并且向其中加入无水乙腈(10mL)。向其中加入2,2,2-三氟乙酸吡啶(359mg)，并且在室温下将混合物搅拌30分钟。向其中加入70％氢过氧化叔丁基水溶液(382μL)，并且在室温下将混合物再搅拌20分钟。向反应混合物中加入硫代硫酸钠(693mg)与水(1mL)的混合物，并且在减压下浓缩混合物。向残余物中加入80％乙酸(5mL)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。在减压下浓缩反应混合物，并且使残余物与甲苯一起经受共沸脱水三次。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(175mg)。MS:[M+H]+1149.4。
F)N-(7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-10-(2-氰基乙氧基)-2-羟基-7-(2-((2-甲基丙酰基)氨基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺
使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(4-苯甲酰胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(羟基甲基)-2-(2-异丁基酰胺基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷酰基)氧)甲基)四氢呋喃-3-基酯(175mg)与无水乙腈一起经受共沸脱水三次，并且向其中加入无水吡啶(3mL)和2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(98mg)。在室温下在氩气氛下将混合物搅拌10分钟，向其中加入水(96μL)和碘(50mg)，并且在室温下将混合物再搅拌20分钟。将反应混合物加入至硫代硫酸钠(98mg)与水(0.4mL)的混合物中，并且将混合物搅拌5分钟，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)将残余物纯化两次，得到标题化合物(48mg)。MS:[M+H]+1147.6。
G)2-氨基-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(4-氨基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2,10-二羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮
使N-(7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-10-(2-氰基乙氧基)-2-羟基-7-(2-((2-甲基丙酰基)氨基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺(48mg)与无水乙腈一起经受共沸脱水两次，向其中加入33％甲胺乙醇溶液(2mL)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌过夜。在减压下浓缩所获得的混合物，并且通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物。通过HPLC(L-column2ODS，50×150mm，流动相：5mM乙酸铵水溶液/乙腈)纯化所获得的残余物，在减压下浓缩所获得的级分，并且对所获得的产物进行冷冻干燥，得到标题化合物(5mg)。MS:[M+H]+920.3。
H)2-氨基-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(4-氨基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,10,15,16-四羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮二(三乙胺)盐
在50℃下将2-氨基-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(4-氨基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2,10-二羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮(5mg)与三氢氟酸三乙胺(200μL)的混合物搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温，并且用1M碳酸氢三乙铵水溶液中和。通过C18柱色谱法(乙腈/10mM乙酸三乙铵缓冲溶液)纯化反应混合物，在减压下浓缩目标级分，并且对所获得的产物进行冷冻干燥，得到标题化合物(3.2mg)。1H NMR(600MHz,D2O)δ1.23(18H,t,J＝7.3Hz),3.15(12H,q,J＝7.3Hz),4.06-4.11(1H,m),4.14-4.19(1H,m),4.21-4.26(1H,m),4.31-4.37(2H,m),4.40(1H,d,J＝1.5Hz),4.56(1H,dd,J＝15.2,4.3Hz),4.61-4.68(1H,m),5.00(1H,ddd,J＝8.5,6.6,4.5Hz),5.60(1H,td,J＝7.9,4.1Hz),5.93(1H,d,J＝8.5Hz),6.26(1H,s),7.14(1H,d,J＝1.6Hz),7.87(1H,s),8.10(1H,s)。
实施例10
1-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2,10,15,16-四羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-1,5-二氢-4H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-酮的合成
A)二苯甲酸(2R,3R,4R,5R)-2-((苯甲酰氧基)甲基)-5-(4-氧代-4,5-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)四氢呋喃-3,4-二酯
在室温下向4-氯-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶(20g)中加入甲酸(123mL)和水(30mL)，并且在100℃下将混合物搅拌2小时。将混合物冷却至室温，并且在减压下浓缩。向残余物中加入浓盐酸(100mL)，并且在100℃下将混合物搅拌1小时。在减压下浓缩混合物，将残余物悬浮在MeOH(100mL)和二异丙醚(100mL)中，并且向其中加入三乙胺(50mL)。通过过滤来收集所得固体，并且溶解在乙腈(600mL)中。在室温下向其中加入N-(三甲基硅烷基)乙酰亚胺三甲基硅烷基酯(38.2mL)，并且将混合物搅拌10分钟。在室温下向反应混合物中加入二苯甲酸(2S,3R,4R,5R)-2-乙酰氧基-5-((苯甲酰氧基)甲基)四氢呋喃-3,4-二酯(79.0g)，并且将混合物加热至80℃。向反应溶液中加入三氟甲磺酸三甲基硅烷基酯(28.2mL)，并且在80℃下在氩气氛下将混合物搅拌过夜。将混合物冷却至室温，向其中加入水(500mL)，并且通过过滤来收集所得固体。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化固体，得到标题化合物(25.9g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.65-4.96(3H,m),5.91(2H,brs),6.23-6.42(1H,m),6.64(1H,brs),7.15(1H,brs),7.32-7.56(9H,m),7.92-8.15(7H,m),12.11-12.50(1H,m)。MS:[M+H]+580.1
B)1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4(5H)-酮
向二苯甲酸(2R,3R,4R,5R)-2-((苯甲酰氧基)甲基)-5-(4-氧代-4,5-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)四氢呋喃-3,4-二酯(30.0g)中加入40％甲胺甲醇溶液(200mL)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时，并且在减压下浓缩。使残余物从己烷-乙酸乙酯中再结晶，得到标题化合物(11.2g)。MS:[M+H]+268.1
C)1-((2R,3R,4S,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4(5H)-酮
在室温下向1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4(5H)-酮(18.0g)在吡啶(140mL)中的溶液中加入4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷(18.46g)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。在减压下浓缩反应混合物，向残余物中加入水，并且用乙酸乙酯提取混合物。用饱和盐水洗涤所获得的提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(18.2g)。MS:[M+H]+570.2
D)1-((2R,3R,4S,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-3-羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4(5H)-酮
向1-((2R,3R,4S,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4(5H)-酮(18.02g)在DMF(158mL)中的溶液中加入咪唑(4.30g)和叔丁基二甲基氯硅烷(5.72g)，并且在室温下将混合物搅拌3小时。再次向其中加入叔丁基二甲基氯硅烷(2.38g)，并且将混合物搅拌3小时。用水稀释反应混合物，并且用乙酸乙酯提取。用饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷)纯化残余物。将所分离的标题化合物的区位异构体溶解在MeOH和三乙胺中，并且在室温下将溶液搅拌过夜。浓缩反应溶液，并且通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到标题化合物(11.5g)。MS:[M+H]+684.2
E)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(4-氧代-4,5-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)四氢呋喃-3-基酯
向1-((2R,3R,4S,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-3-羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4(5H)-酮(8.0g)和吡啶(117mL)的混合物中加入亚磷酸二苯酯(4.5mL)。在室温下将混合物搅拌1小时。向反应混合物中加入水(20mL)。在室温下将混合物搅拌30分钟，用水稀释反应混合物，并且用乙酸乙酯提取。用饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸镁干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(8.5g)。MS:[M+H]+748.3
F)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(羟基甲基)-2-(4-氧代-4,5-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)四氢呋喃-3-基酯
在室温下将膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(4-氧代-4,5-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)四氢呋喃-3-基酯(8.2g)与1,1,1,3,3,3-六氟丙-2-醇(30mL)的混合物搅拌2小时。向其中加入甲醇(10mL)，在60℃下将混合物搅拌1小时，并且在减压下蒸发溶剂。使残余物从乙酸乙酯和二异丙醚中再结晶，得到标题化合物(4.3g)。MS:[M+H]+446.1
G)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷酰基)氧)甲基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(4-氧代-4,5-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)四氢呋喃-3-基酯
使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(羟基甲基)-2-(4-氧代-4,5-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)四氢呋喃-3-基酯(250mg)和N-苯甲酰基-5'-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-2'-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-3'-O-((2-氰基乙氧基)(二异丙基氨基)膦基)腺苷(776mg)与无水乙腈一起经受共沸脱水，并且向其中加入无水乙腈(5.61mL)。向混合物中加入2,2,2-三氟乙酸吡啶(271mg)，并且在室温下将混合物搅拌40分钟。向其中加入70％氢过氧化叔丁基水溶液(231μL)，并且在室温下将混合物搅拌20分钟。向反应混合物中加入硫代硫酸钠(1.3g)与水(3mL)的混合物，并且在减压下浓缩混合物。向残余物中加入1,1,1,3,3,3-六氟丙-2-醇(15mL)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。在减压下浓缩反应混合物，并且通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷和甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(170mg)。MS:[M+H]+1046.3
H)N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2-(2-氰基乙氧基)-10-羟基-2,10-二氧负离子基-7-(4-氧代-4,5-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺
使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷酰基)氧)甲基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(4-氧代-4,5-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)四氢呋喃-3-基酯(160mg)与无水吡啶一起经受共沸脱水，并且向其中加入无水吡啶(3.0mL)。在室温下向混合物中加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(99mg)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。向其中加入水(96μL)和碘(50.5mg)，并且在室温下将混合物再搅拌20分钟。向反应混合物中加入硫代硫酸钠(190mg)与水(0.4mL)的混合物，并且在减压下浓缩混合物。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(10.6mg)。MS:[M+H]+1044.3
I)1-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2,10-二羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-1,5-二氢-4H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-酮
向N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2-(2-氰基乙氧基)-10-羟基-2,10-二氧负离子基-7-(4-氧代-4,5-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(10.6mg)中加入40％甲胺乙醇溶液(5.0mL)，在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(9.0mg)。MS:[M+H]+887.2
J)1-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2,10,15,16-四羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-1,5-二氢-4H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-酮
向1-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2,10-二羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-1,5-二氢-4H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-酮(9.0mg)中加入甲醇(1.0mL)和三氢氟酸三乙胺(165μL)。浓缩反应混合物以去除甲醇，并且在55℃下将残余物搅拌1小时。将混合物冷却至室温，向其中加入乙氧基(三甲基)硅烷(0.90mL)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。在减压下浓缩反应混合物，并且通过C18柱色谱法(乙腈/10mM乙酸三乙铵缓冲溶液)纯化残余物，得到标题化合物(0.3mg)。1HNMR(400MHz,D2O)4.15(2H,d,J＝11.5Hz),4.46(4H,brs),4.56-4.62(1H,m),4.98-4.99(2H,m),6.05-6.20(2H,m),6.79-6.87(1H,m),7.06-7.12(1H,m),8.00(1H,s),7.96-8.10(1H,m),8.23(2H,s)。31P NMR(162MHz,D2O)δ-2.36,-1.94。
实施例11
2-氨基-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(4-氨基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)-2,10,15,16-四羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮二(三乙胺)盐的合成
A)N-苯甲酰基-1-(2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-3,5-O-(二叔丁基亚硅烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺
将N-苯甲酰基-1-(β-D-核糖呋喃酰基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺(2.41g)溶解在DMF(25mL)中，在0℃下向其中加入双(三氟甲磺酸)二(叔丁基)硅烷二酯(2.32mL)，并且在0℃下将混合物搅拌75分钟。在0℃下向其中加入双(三氟甲磺酸)二(叔丁基)硅烷二酯(0.63mL)，并且在0℃下将混合物再搅拌30分钟。在0℃下向其中加入双(三氟甲磺酸)二(叔丁基)硅烷二酯(0.63mL)，并且在0℃下将混合物再搅拌35分钟。向反应混合物中加入1H-咪唑(2.22g)，并且在室温下将混合物搅拌10分钟。向其中加入叔丁基二甲基氯硅烷(1.18g)，并且在60℃下将混合物搅拌1.5小时。向其中加入叔丁基二甲基氯硅烷(0.294g)，并且在60℃下将混合物搅拌14.5小时。用水稀释反应混合物，并且用乙酸乙酯提取。用饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到标题化合物(3.28g)。MS:[M+H]+625.2。
B)N-苯甲酰基-1-(2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺
在0℃下将聚(氟化氢)吡啶(1.86mL)溶解在吡啶(10mL)中，在0℃下将该溶液加入至N-苯甲酰基-1-(2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-3,5-O-(二叔丁基亚硅烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺(1.64g)在THF(13mL)中的溶液中，并且在0℃下将混合物搅拌8分钟。将这个反应重复两次。合并反应溶液，用水稀释，并且用乙酸乙酯提取。用饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷和甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(2.24g)。MS:[M+H]+485.1。
C)N-苯甲酰基-1-(5-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺
将N-苯甲酰基-1-(2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺(2.24g)溶解在吡啶(25mL)中，在室温下向其中加入4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷(2.04g)，并且在室温下将混合物搅拌4.5小时。在减压下浓缩反应混合物，向残余物中加入水，并且用乙酸乙酯提取混合物。用饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到标题化合物(3.29g)。MS:[M+H]+787.3。
D)N-苯甲酰基-1-(5-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-3-O-((2-氰基乙氧基)(二异丙基氨基)膦基)-β-D-核糖呋喃酰基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺
将N-苯甲酰基-1-(5-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺(3.29g)溶解在无水DMF(9.5mL)中，向溶液中加入3-((双(二异丙基氨基)膦基)氧)丙腈(2.98mL)、1H-四唑(0.328g)和1-甲基-1H-咪唑(0.185mL)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌2.5小时。向反应溶液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，并且用乙酸乙酯提取混合物。用饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷，含有0.5％三乙胺)纯化残余物，得到标题化合物(3.85g)。MS:[M+H]+987.4。
E)N-苯甲酰基-1-(2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-3-O-(羟基(氧负离子基)磷烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺
将N-苯甲酰基-1-(5-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-3-O-((2-氰基乙氧基)(二异丙基氨基)膦基)-β-D-核糖呋喃酰基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺(3.85g)溶解在乙腈(30mL)中，在室温下向其中加入2,2,2-三氟乙酸吡啶(0.904g)和水(0.141mL)，并且在室温下将混合物搅拌30分钟。在室温下向反应溶液中加入2-甲基丙-2-胺(9mL)，并且在室温下将混合物搅拌40分钟。在减压下浓缩反应混合物，向残余物中加入1,1,1,3,3,3-六氟丙-2-醇(25mL)，并且在室温下将混合物搅拌3.5小时。在减压下浓缩反应混合物，向其中加入乙酸(20mL)和水(5mL)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。在减压下浓缩反应混合物，并且通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(1.85g)。MS:[M+H]+549.1。
F)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(4-苯甲酰胺基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(羟基甲基)-2-(2-异丁基酰胺基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷酰基)氧)甲基)四氢呋喃-3-基酯
使N-苯甲酰基-1-(2-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-3-O-(羟基(氧负离子基)磷烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺(300mg)和5'-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-3'-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-2'-O-((2-氰基乙氧基)(二异丙基氨基)膦基)-N-异丁酰基鸟苷(637mg)与无水乙腈一起经受共沸脱水(三次)，并且悬浮在无水乙腈(6mL)中。向其中加入2,2,2-三氟乙酸吡啶(264mg)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时。向其中加入70％氢过氧化叔丁基水溶液(0.225mL)，并且在室温下将混合物再搅拌1小时。用硫代硫酸钠(400mg)和水(1.5mL)淬灭反应混合物，并且在减压下蒸发溶剂。将残余物溶解在80％乙酸(5mL)中，并且在室温下将溶液搅拌45分钟。在减压下浓缩反应混合物，并且使残余物与无水乙腈和甲苯一起经受共沸脱水。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(469mg)。MS:[M+H]+1131.4。
G)N-(1-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-10-(2-氰基乙氧基)-2-羟基-7-(2-(异丁酰基氨基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)苯甲酰胺
使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(4-苯甲酰胺基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(羟基甲基)-2-(2-异丁基酰胺基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷酰基)氧)甲基)四氢呋喃-3-基酯(469mg)与无水乙腈和无水吡啶一起经受共沸脱水，并且悬浮在无水吡啶(10mL)中。向其中加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(268mg)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌15分钟。向其中加入水(1mL)和碘(158mg)，并且在室温下将混合物再搅拌13分钟。用硫代硫酸钠(170mg)和水(0.5mL)淬灭反应混合物，在减压下蒸发溶剂，并且使残余物与甲苯一起经受共沸脱水。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(419mg)。MS:[M+H]+1129.3。
H)2-氨基-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(4-氨基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2,10-二羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮
将N-(1-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-10-(2-氰基乙氧基)-2-羟基-7-(2-(异丁酰基氨基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)苯甲酰胺(419mg)溶解在33％甲胺乙醇溶液(10.0mL)中，并且在室温下在氩气氛下将溶液搅拌18.5小时。向其中加入33％甲胺乙醇溶液(5mL)，将混合物再搅拌3小时，并且在减压下蒸发溶剂。将残余物溶解在33％甲胺乙醇溶液(10.0mL)中，在室温下将溶液搅拌1小时，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(173mg)。MS:[M+H]+902.3。
I)2-氨基-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(4-氨基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)-2,10,15,16-四羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮二(三乙胺)盐
向2-氨基-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(4-氨基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2,10-二羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮(173mg)中加入三氢氟酸三乙胺(0.625mL)，并且在50℃下将混合物搅拌3小时。将混合物冷却至室温，用1M碳酸氢三乙铵水溶液中和，并且在减压下蒸发溶剂。通过C18硅胶柱色谱法(10mM乙酸三乙铵缓冲溶液/乙腈)纯化残余物，并且对所获得的固体进行冷冻干燥，得到标题化合物(123mg)。1H NMR(300MHz,D2O)δ1.25(18H,t,J＝7.4Hz),3.17(12H,q,J＝7.2Hz),3.87-4.10(1H,m),4.11-4.30(3H,m),4.32-4.45(2H,m),4.52(1H,d,J＝3.8Hz),4.65(1H,d,J＝4.2Hz),4.97-5.10(1H,m),5.79(1H,brs),5.94(2H,d,J＝8.3Hz),7.10(1H,d,J＝6.8Hz),7.68-7.78(1H,m),7.83(1H,s),7.94-8.26(1H,m)。31PNMR(121MHz,D2O)δ-1.36。
实施例12
8-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aS,16R)-7-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4(3H)-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)的合成
A)8-((2S,3S,4R,5R)-3,4-双(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4(3H)-酮
在室温下向4-((2S,3S,4R,5R)-3,4-双(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-吡唑-5-胺(17.3g)和碳酸钾(24.6g)在DMF(200mL)中的溶液中加入甲亚胺乙酯盐酸盐(19.5g)。在室温下将反应混合物搅拌过夜。在室温下向反应混合物中加入碳酸二乙酯(126g)，并且在100℃下将反应混合物搅拌1小时。在室温下向反应混合物中加入20％乙醇钠乙醇溶液(60.6g)。在100℃下将反应混合物搅拌30分钟。在室温下用乙酸中和反应混合物，并且用乙酸乙酯提取。用水和饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到标题化合物(5.79g)。MS:[M+H]+539.1。
B)8-((2S,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4(3H)-酮
在室温下在氢气氛下将8-((2S,3S,4R,5R)-3,4-双(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4(3H)-酮(3.49g)和氢氧化钯(1.37g，10％Pd)在甲醇(30mL)中的溶液搅拌过夜。通过过滤来去除催化剂，并且在减压下浓缩滤液，得到标题化合物(1.72g)。MS:[M+H]+269.0。
C)8-((2S,3R,4S,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4(3H)-酮
在冰冷却下向8-((2S,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4(3H)-酮(1.72g)在脱水吡啶(30mL)中的溶液中加入4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷(2.39g)。在室温下在氩气氛下将反应混合物搅拌2小时。在冰冷却下向反应混合物中加入4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷(0.217g)。在室温下在氩气氛下将反应混合物搅拌3小时。在室温下向反应混合物中加入4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷(0.217g)。在室温下在氩气氛下将反应混合物搅拌30分钟。在室温下向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，并且用乙酸乙酯提取混合物。用水和饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(1.62g)。MS:[M-H]-569.1。
D)8-((2S,3R,4R,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-4-羟基四氢呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4(3H)-酮
在室温下在氩气氛下将叔丁基二甲基氯硅烷(536mg)和硝酸银(I)(604mg)加入至8-((2S,3R,4S,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4(3H)-酮(1.69g)和脱水吡啶(1.20mL)在脱水THF(20mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌8小时，并且在室温下向反应混合物中加入叔丁基二甲基氯硅烷(89mg)和硝酸银(I)(101mg)。在室温下将反应混合物搅拌过夜。通过过滤来去除不溶性物质，并且用乙酸乙酯洗涤。向滤液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，并且用乙酸乙酯提取混合物。用饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(740mg)。MS:[M-H]-683.1。
E)膦酸氢(2R,3R,4S,5S)-2-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(4-氧代-3,4-二氢吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)四氢呋喃-3-基酯
在室温下将亚磷酸二苯酯(0.41mL)加入至8-((2S,3R,4R,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-4-羟基四氢呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4(3H)-酮(740mg)在吡啶(10mL)中的溶液中。在室温下在氩气氛下将反应混合物搅拌1小时。向反应混合物中加入水(20mL)，并且将混合物搅拌1小时。在室温下将反应混合物倾入水中，并且用乙酸乙酯提取。用水和饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(300mg)。MS:[M-H]-747.1。
F)膦酸氢(2R,3R,4S,5S)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(羟基甲基)-5-(4-氧代-3,4-二氢吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)四氢呋喃-3-基酯
向膦酸氢(2R,3R,4S,5S)-2-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(4-氧代-3,4-二氢吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)四氢呋喃-3-基酯(300mg)中加入80％乙酸水溶液(10mL)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。在减压下浓缩反应混合物，并且通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(170mg)。MS:[M+H]+447.0。
G)膦酸氢(2R,3R,4S,5S)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-2-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷代磺酰基)氧)甲基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(4-氧代-3,4-二氢吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)四氢呋喃-3-基酯
将膦酸氢(2R,3R,4S,5S)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(羟基甲基)-5-(4-氧代-3,4-二氢吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)四氢呋喃-3-基酯(190mg)和N-苯甲酰基-5'-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-3'-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-2'-O-((2-氰基乙基)(二异丙基氨基)膦基)腺苷(505mg)与脱水乙腈一起经受共沸过程三次。向残余物中加入脱水乙腈(5mL)和2,2,2-三氟乙酸吡啶(164mg)。在室温下在氩气氛下将反应混合物搅拌10分钟，向反应混合物中加入((二甲基氨基-亚甲基)氨基)-3H-1,2,4-二噻唑啉-3-硫酮(96mg)，并且在室温下将混合物搅拌20分钟。向反应混合物中加入硫代硫酸钠(0.2g)的水溶液(0.2mL)，并且在减压下浓缩混合物。向残余物中加入80％乙酸水溶液(5mL)，在室温下将混合物搅拌1小时，并且使反应混合物与乙腈一起经受共沸过程两次。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(260mg)。MS:[M+H]+1063.2。
H)8-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aR,16R)-7-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4(3H)-酮(光学异构体)
使膦酸氢(2R,3R,4S,5S)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-2-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷代磺酰基)氧)甲基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(4-氧代-3,4-二氢吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)四氢呋喃-3-基酯(260mg)与脱水乙腈一起经受共沸过程两次。使残余物与脱水吡啶一起经受共沸过程一次。向残余物在脱水吡啶(5mL)中的溶液中加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(158mg)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌20分钟。在室温下向反应混合物中加入水(0.15mL)和3H-苯并[c][1,2]二硫醇-3-酮(49.4mg)。在室温下将反应混合物搅拌1小时。在室温下向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，并且用乙酸乙酯提取混合物。用饱和硫代硫酸钠水溶液和饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，然后通过HPLC(L-column2ODS，50×150mm，流动相：5mM乙酸铵水溶液/乙腈)加以纯化，得到级分，并且在减压下浓缩具有最长滞留时间的级分。向残余物中加入33％甲胺乙醇溶液(5mL)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。在减压下浓缩反应混合物。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(25mg)。MS:[M+H]+920.2。
I)8-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aS,16R)-7-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4(3H)-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)
在室温下向8-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aR,16R)-7-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4(3H)-酮(光学异构体)(25mg)在甲醇(2mL)中的溶液中加入三氢氟酸三乙胺(0.177mL)，并且在50℃下将混合物搅拌2小时。在室温下向反应混合物中加入乙氧基三甲基硅烷(5mL)，并且将混合物搅拌10分钟。在减压下浓缩反应混合物，通过C18硅胶柱色谱法(10mM乙酸三乙铵缓冲溶液/乙腈)纯化残余物，并且对所获得的产物进行冷冻干燥，得到标题化合物(13mg)。1H NMR(300MHz,D2O)δ4.02-4.19(3H,m),4.32-4.42(2H,m),4.44-4.49(1H,m),4.59-4.64(1H,m),4.76-4.80(1H,m),4.95-5.04(1H,m),5.16(1H,d,J＝4.9Hz),5.31(1H,ddd,J＝9.8,8.7,4.2Hz),6.22(1H,d,J＝8.3Hz),7.99(1H,s),8.00(1H,s),8.14(1H,s),8.49(1H,s)。
实施例13
2-氨基-9-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aS,16R)-14-(4-氨基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-2,10,15,16-四羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮二(三乙胺)盐的合成
A)二苯甲酸(2S,3S,4R,5R)-2-(4-(N-苯甲酰基苯甲酰胺基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-5-((苯甲酰氧基)甲基)四氢呋喃-3,4-二酯
在冰冷却下向(2S,3R,4S,5R)-2-(4-氨基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(2.98g)和N,N-二甲基-4-氨基吡啶(1.36g)在脱水吡啶(50mL)中的溶液中加入苯甲酰氯(12.5g)。在氩气氛下将反应混合物搅拌1小时。在冰冷却下向反应混合物中加入苯甲酰氯(3.13g)。在室温下在氩气氛下将反应混合物搅拌2小时。向反应混合物中加入水，并且用乙酸乙酯提取混合物。用水和饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到标题化合物(6.51g)。MS:[M+H]+788.2。
B)N-(8-((2S,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基)苯甲酰胺
在冰冷却下向二苯甲酸(2S,3S,4R,5R)-2-(4-(N-苯甲酰基苯甲酰胺基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-5-((苯甲酰氧基)甲基)四氢呋喃-3,4-二酯(6.51g)在吡啶(50mL)与乙醇(25mL)的混合溶剂中的溶液中加入1M氢氧化钠水溶液(49.6mL)，并且在室温下将混合物搅拌2小时。在室温下向反应混合物中加入强酸性阳离子交换树脂DOWEX TM50Wx4 100-200(40g)，并且在室温下将混合物搅拌15分钟。通过过滤来去除固体，并且在减压下浓缩滤液。向残余物中加入甲醇，并且通过过滤来收集所获得的固体，得到标题化合物(1.82g)。MS:[M+H]+372.1。
C)N-(8-((2S,3R,4S,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基)苯甲酰胺
在冰冷却下向N-(8-((2S,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基)苯甲酰胺(1.89g)在脱水吡啶(30mL)中的溶液中加入4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷(517mg)。在室温下在氩气氛下将反应混合物搅拌3小时。在室温下向反应混合物中加入4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷(517mg)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌过夜。在室温下向反应混合物中加入4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷(1035mg)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时。在室温下向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，并且用乙酸乙酯提取混合物。用饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(2160mg)。MS:[M-H]-672.1。
D)N-(8-((2S,3R,4R,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-4-羟基四氢呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基)苯甲酰胺
向N-(8-((2S,3R,4S,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基)苯甲酰胺(2.16g)在脱水THF(30mL)中的溶液中加入硝酸银(I)(708mg)和脱水吡啶(1.22g)。在氩气氛下将反应混合物搅拌15分钟，并且向其中加入叔丁基二甲基氯硅烷(628mg)。在室温下在氩气氛下将反应混合物搅拌2小时。在室温下向反应混合物中加入硝酸银(I)(163mg)、叔丁基二甲基氯硅烷(145mg)和脱水吡啶(507mg)。在室温下在氩气氛下将反应混合物搅拌过夜。在室温下向反应混合物中加入硝酸银(I)(436mg)、叔丁基二甲基氯硅烷(387mg)和脱水吡啶(761mg)。在室温下在氩气氛下将反应混合物搅拌2小时。在室温下向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，并且用乙酸乙酯提取混合物。用饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到标题化合物(980mg)。MS:[M-H]-786.2。
E)膦酸氢(2R,3R,4S,5S)-5-(4-苯甲酰胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基酯
使N-(8-((2S,3R,4R,5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-4-羟基四氢呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基)苯甲酰胺(980mg)与脱水甲苯一起经受共沸过程两次，并且溶解在脱水DMF(10mL)中。向反应混合物中加入3-((双(二异丙基氨基)膦基)氧)丙腈(487mg)、1H-四唑(87mg)和1-甲基-1H-咪唑(51mg)。在室温下在氩气氛下将反应混合物搅拌5小时。在室温下向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，并且用乙酸乙酯提取混合物。用饱和盐水洗涤提取物，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(含有0.5％三乙胺的乙酸乙酯/己烷)纯化残余物。在室温下向所获得的混合物在乙腈(10mL)中的溶液中加入水(0.04mL)和2,2,2-三氟乙酸吡啶(256mg)。在室温下将反应混合物搅拌30分钟，向其中加入叔丁胺(5.38mL)，并且在室温下将混合物搅拌45分钟。在减压下蒸发溶剂。向残余物中加入80％乙酸水溶液(5.4mL)，在室温下将混合物搅拌1小时，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(530mg)。MS:[M+H]+550.2。
F)膦酸氢(2R,3R,4S,5S)-5-(4-苯甲酰胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(羟基甲基)-2-(2-异丁基酰胺基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷酰基)氧)甲基)四氢呋喃-3-基酯
使膦酸氢(2R,3R,4S,5S)-5-(4-苯甲酰胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基酯(240mg)与5'-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-3'-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-2'-O-((2-氰基乙基)(二异丙基氨基)膦基)-N-异丁酰基鸟苷(635mg)的混合物与脱水乙腈一起经受共沸过程三次。向残余物中加入脱水乙腈(5mL)、脱水THF(2.5mL)和5-(乙硫基)-2H-四唑(171mg)(其预先与脱水乙腈一起经受共沸过程)在脱水乙腈(2.5mL)中的溶液。在室温下在氩气氛下将反应混合物搅拌2小时。向其中加入70％氢过氧化叔丁基水溶液(0.179mL)，并且在室温下将混合物搅拌20分钟。向反应混合物中加入五水合硫代硫酸钠(0.12g)的水溶液(0.12mL)，并且在减压下浓缩反应混合物。向残余物中加入80％乙酸水溶液(3mL)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。使残余物与乙腈一起经受共沸过程两次。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到含有标题化合物的粗产物(420mg)。MS:[M+H]+1132.3。
G)N-(8-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aR,16R)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-10-(2-氰基乙氧基)-2-羟基-7-(2-((2-甲基丙酰基)氨基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基)苯甲酰胺
使含有膦酸氢(2R,3R,4S,5S)-5-(4-苯甲酰胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(羟基甲基)-2-(2-异丁基酰胺基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷酰基)氧)甲基)四氢呋喃-3-基酯的粗产物(430mg)与脱水乙腈一起经受共沸过程两次。使所获得的残余物与脱水吡啶一起经受共沸过程一次。向所获得的残余物在脱水吡啶(3mL)中的溶液中加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(245mg)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌10分钟。向反应混合物中加入水(0.239mL)和碘(125mg)，并且在室温下将混合物搅拌20分钟。向反应混合物中加入五水合硫代硫酸钠(245mg)的水溶液(0.4mL)，并且在室温下将混合物搅拌5分钟。向其中加入甲苯，并且在减压下浓缩混合物。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到含有标题化合物的粗产物(553mg)。MS:[M+H]+1130.4。
H)2-氨基-9-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aS,16R)-14-(4-氨基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-2,10,15,16-四羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮二(三乙胺)盐
在室温下将N-(8-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aR,16R)-15,16-双((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-10-(2-氰基乙氧基)-2-羟基-7-(2-((2-甲基丙酰基)氨基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基)苯甲酰胺(553mg)与33％甲胺乙醇溶液(20mL)的混合物搅拌过夜。在减压下浓缩反应混合物，通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，然后通过HPLC(ODS，流动相：水/乙腈(含有5mM乙酸铵))加以纯化，得到级分，并且在减压下浓缩所获得的级分。在室温下向所获得的残余物在甲醇(3mL)中的溶液中加入三氢氟酸三乙胺(0.072mL)，并且在50℃下将混合物搅拌4小时。在室温下向反应混合物中加入三氢氟酸三乙胺(0.181mL)，并且在50℃下将混合物搅拌过夜。在室温下向反应混合物中加入三氢氟酸三乙胺(0.181mL)，并且在50℃下将混合物搅拌5小时。在室温下向反应混合物中加入乙氧基三甲基硅烷(1.034mL)，并且将混合物搅拌5分钟。在减压下浓缩反应混合物，通过C18硅胶柱色谱法(10mM乙酸三乙铵缓冲溶液/乙腈)纯化残余物，并且对所获得的产物进行冷冻干燥，得到标题化合物(10mg)。1H NMR(300MHz,D2O)δ3.99-4.08(1H,m),4.11-4.31(4H,m),4.34-4.42(1H,m),4.52-4.60(2H,m),4.94-5.05(1H,m),5.27-5.35(1H,m),5.51-5.62(1H,m),5.94(1H,d,J＝8.3Hz),7.89(1H,s),8.07(1H,s),8.08(1H,s)。
实施例14
7-((2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-16-羟基-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二钠盐
A)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷代磺酰基)氧)甲基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)四氢呋喃-3-基酯
使7-(3-O-(叔丁基(二甲基)硅烷基)-2-O-(羟基(氧负离子基)磷烷基)-β-D-核糖呋喃酰基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(8.89g)和N-苯甲酰基-5'-O-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)-3'-O-((2-氰基乙氧基)(二异丙基氨基]膦基)-2'-脱氧-2'-氟腺苷(18.5g)与脱水乙腈一起经受共沸过程三次。向残余物中加入无水乙腈(40mL)、无水THF(20mL)和5-(乙基硫烷基)-2H-四唑(7.49g)的无水乙腈溶液(40mL)。在室温下在氩气氛下将反应混合物搅拌30分钟，向反应混合物中加入((二甲基氨基亚甲基)氨基)-3H-1,2,4-二噻唑啉-3-硫酮(4.33g)，并且在室温下将混合物搅拌30分钟。向反应混合物中加入含有硫代硫酸钠(5.24g)的水溶液(5mL)，并且在减压下浓缩混合物。向残余物中加入80％乙酸水溶液(100mL)，在室温下将混合物搅拌1小时，并且使反应混合物与甲苯一起经受共沸过程。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(14.3g)。MS:[M+H]+968.3。
B)N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2-(2-氰基乙氧基)-15-氟-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-10-氧负离子基-10-硫烷基-2-硫离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(光学异构体)
使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷代磺酰基)氧)甲基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)四氢呋喃-3-基酯(1.07g)与脱水吡啶一起经受共沸过程三次。向残余物在无水吡啶(150mL)中的溶液中加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(4.66g)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌30分钟。在室温下向反应混合物中加入3H-苯并[c][1,2]二硫醇-3-酮(1.46g)和水(4.55mL)，并且将反应混合物搅拌30分钟。对反应混合物的LCMS分析显示具有相同质量([M+H]+971.1)的四个峰，表明形成四种非对映异构体。在减压下浓缩反应混合物，并且通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，然后通过HPLC(L-column2ODS，50×150mm，流动相：5mM乙酸铵水溶液/乙腈)加以纯化。在减压下浓缩具有最长滞留时间的级分，得到标题化合物(379mg)。MS:[M+H]+982.1。
C)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-16-((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-15-氟-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体)
在室温下在氩气氛下将N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-2-(2-氰基乙氧基)-15-氟-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-10-氧负离子基-10-硫烷基-2-硫离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(光学异构体)(379mg)的40％甲胺甲醇溶液(10mL)搅拌3小时。在减压下浓缩反应混合物，并且通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(319mg)。MS:[M+H]+825.1。
D)7-((2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-16-羟基-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐
在室温下向7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-16-((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-15-氟-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体)(319mg)在甲醇(1mL)中的溶液中加入三氢氟酸三乙胺(2.52mL)，并且在50℃下将混合物搅拌3小时，并且用甲醇(10mL)稀释。在室温下向反应混合物中加入乙氧基三甲基硅烷(12mL)，并且将混合物搅拌10分钟。在减压下浓缩反应混合物，用甲醇稀释残余物，并且再次在减压下浓缩混合物。向残余物中加入乙酸三乙铵缓冲溶液，通过过滤来收集固体，并且用乙腈洗涤，得到白色固体。通过硅胶柱色谱法(ODS，10mM乙酸三乙铵缓冲溶液/乙腈)纯化所获得的白色固体。另一方面，在减压下浓缩滤液，并且通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)和硅胶柱色谱法(ODS，10mM乙酸三乙铵缓冲溶液/乙腈)纯化残余物。在减压下浓缩通过硅胶柱色谱法(ODS，10mM乙酸三乙铵缓冲溶液/乙腈)获得的含有标题化合物的级分，并且对残余物进行冷冻干燥，得到标题化合物(195mg)。MS:[M+H]+711.0。
E)7-((2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-16-羟基-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二钠盐
使去离子水(60mL)通过将AG(商标名)50W-X8阳离子交换树脂(100-200目，3.9g)包装在空柱中而制备的柱。然后，使1M氢氧化钠水溶液(36mL)和去离子水(68mL)通过该树脂。在以上提到的预处理之后，使含有7-((2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-16-羟基-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(195mg)的去离子水(15mL)通过该树脂，使去离子水(19mL)通过该树脂，并且对所获得的水溶液进行冷冻干燥，得到标题化合物(165mg)。1H NMR(300MHz,D2O)δ4.00-4.08(1H,m),4.22-4.45(4H,m),4.50-4.57(1H,m),4.81-4.84(1H,m),4.98-5.14(2H,m),5.40-5.61(1H,m),6.33-6.43(2H,m),7.28(1H,d,J＝1.9Hz),7.94(1H,s),8.05(1H,s),8.21(1H,s)。31P NMR(121MHz,D2O)δ52.1,55.3。
实施例15
7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-10-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)的合成
A)5-氟-7-((6aR,8R,9R,9aS)-9-羟基-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-8-基)-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮
向7-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)-5-氟-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4(7H)-酮(37.9g)在吡啶(760mL)中的溶液中加入1,3-二氯-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷(44.4mL)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌3小时。在减压下蒸发溶剂，并且向残余物中加入乙酸乙酯和水。用水和饱和盐水洗涤有机层，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。用异丙醚(IPE)稀释残余物，并且在室温下将混合物搅拌过夜。通过过滤来收集固体，得到标题化合物(32.3g)。在减压下浓缩母液，并且通过硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(13.3g)。MS:[M+H]+528.2。
B)二异丙基氨基磷酸2-氰基乙基酯(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基酯
使5-氟-7-((6aR,8R,9R,9aS)-9-羟基-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-8-基)-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(20g)与无水乙腈一起经受共沸脱水三次，并且溶解在无水DMF(100mL)中。向该溶液中加入1H-四唑(2.79g)、1-甲基-1H-咪唑(1.65mL)和3-((双(二异丙基氨基)膦基)氧)丙腈(24.1mL)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌过夜，倾入饱和碳酸氢钠水溶液中，并且用乙酸乙酯提取。依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和盐水洗涤有机层，经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷，含有0.5％三乙胺)纯化残余物，得到呈两种非对映异构体的混合物形式的标题化合物(20.8g)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ0.91-1.19(40H,m),2.69-2.82(2H,m),3.46-3.73(2H,m),3.78-4.12(5H,m),4.47-4.61(2H,m),6.02-6.12(1H,m),7.14-7.23(1H,m),7.84-7.91(1H,m),12.00-12.40(1H,br)。
C)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((((2-氰基乙氧基)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基)氧)磷代磺酰基)氧)甲基)-4-氟四氢呋喃-3-基酯
使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基酯(3.48g)与二异丙基氨基磷酸2-氰基乙基酯(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基酯(7.82g)的混合物与无水乙腈一起经受共沸脱水，并且悬浮在无水乙腈(25mL)和无水THF(15mL)中。将5-(乙基硫烷基)-2H-四唑(3.11g)(其预先与无水乙腈一起经受共沸脱水)溶解在无水乙腈(6mL)中，将溶液加入至以上提到的悬浮液中，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时。向其中加入((二甲基氨基亚甲基)氨基)-3H-1,2,4-二噻唑啉-3-硫酮(3.27g)，并且在室温下将混合物再搅拌30分钟。在减压下蒸发溶剂，并且通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(6.73g)。MS:[M+H]+1096.2。
D)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((((2-氰基乙氧基)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-4-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)磷代磺酰基)氧)甲基)-4-氟四氢呋喃-3-基酯
将膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((((2-氰基乙氧基)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基)氧)磷代磺酰基)氧)甲基)-4-氟四氢呋喃-3-基酯(6.73g)溶解在THF(74.8mL)与水(16.6mL)的混合溶剂中，并且对溶液进行冰冷却。向其中加入三氟乙酸(16.6mL)，并且在0℃下将混合物搅拌2小时。用碳酸氢钠(25.8g)的水溶液淬灭反应混合物，并且用乙酸乙酯提取。用饱和盐水洗涤有机层，经无水硫酸镁干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(6.43g)。MS:[M+H]+1114.2。
E)N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-氰基乙氧基)-15-氟-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-羟基-16-((3-羟基-1,1,3,3-四(丙-2-基)二硅氧烷基)氧)-2-氧负离子基-10-硫离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺
使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((((2-氰基乙氧基)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-4-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)磷代磺酰基)氧)甲基)-4-氟四氢呋喃-3-基酯(6.43g)与无水乙腈和无水吡啶一起经受共沸脱水，并且悬浮在无水吡啶(130mL)中。向其中加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(3.73g)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时。向其中加入水(5.17mL)和碘(1.90g)，并且在室温下将混合物再搅拌1小时。用硫代硫酸钠(7.16g)和水(3.6mL)淬灭反应混合物，并且用乙酸乙酯提取。用水和饱和盐水洗涤有机层，经无水硫酸镁干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(4.60g)。MS:[M+H]+1112.2。
F)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2-羟基-16-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-2,10-二氧负离子基-10-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体)
向N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-氰基乙氧基)-15-氟-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-羟基-16-((3-羟基-1,1,3,3-四(丙-2-基)二硅氧烷基)氧)-2-氧负离子基-10-硫离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(6.42g)中加入40％甲胺甲醇溶液(30mL)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时。在减压下浓缩所获得的混合物，并且通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物。通过HPLC(L-column2ODS，50×150mm，流动相：5mM乙酸铵水溶液/乙腈)纯化所获得的残余物，在减压下浓缩所获得的级分，并且对残余物进行冷冻干燥，得到标题化合物(420mg)。MS:[M+H]+955.2。
G)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-10-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)
向7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2-羟基-16-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-2,10-二氧负离子基-10-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体，衍生自tR2)(420mg)中加入三氢氟酸三乙胺(9.68mL)，并且在50℃下将混合物搅拌7.5小时。在室温下向反应混合物中加入乙氧基三甲基硅烷(36.3mL)，并且将混合物搅拌30分钟。在减压下浓缩反应混合物，并且通过C18硅胶柱色谱法(10mM乙酸三乙铵缓冲溶液/乙腈)纯化残余物，并且进行冷冻干燥，得到标题化合物(298mg)。1H NMR(300MHz,D2O)δ1.13-1.29(16H,m),3.12(11H,q,J＝7.2Hz),3.99-4.29(4H,m),4.31-4.43(2H,m),4.50(1H,d,J＝9.1Hz),4.81-5.08(3H,m),5.39-5.61(1H,m),6.30-6.42(2H,m),7.24(1H,d,J＝1.9Hz),7.92(1H,s),8.09(1H,s),8.19(1H,s)。31P NMR(121MHz,D2O)δ52.2,1.63。
实施例16
7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2,10,18-三羟基-2,10-二氧负离子基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)的合成
A)膦酸氢(1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((((2-氰基乙氧基)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基)氧)磷酰基)氧)甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-7-基酯
使膦酸氢(1S,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-(羟基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-7-基酯(2.00g)和二异丙基氨基磷酸2-氰基乙基酯(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基酯(4.23g)与无水乙腈(约50mL)一起经受共沸脱水(三次)，并且悬浮在无水THF(16mL)中。将5-(乙基硫烷基)-2H-四唑(1.75g)(其预先与无水乙腈(约30mL)一起经受共沸脱水(三次))溶解在无水乙腈(16mL)中，将溶液加入至以上提到的悬浮液中，并且在室温下在氩气流下将混合物搅拌15小时。向其中加入70％氢过氧化叔丁基水溶液(1.86mL)，并且在室温下将混合物再搅拌30分钟。用10％硫代硫酸钠水溶液(13mL)淬灭反应混合物，并且在减压下浓缩。使残余物依次与乙腈(约80mL)和甲苯(约80mL)一起经受共沸脱水，使残余物经受硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)，并且在减压下浓缩目标级分，得到呈白色非晶态固体(两种非对映异构体的混合物)形式的标题化合物(5.36g)。MS:[M+H]+1090.2。
B)膦酸氢(1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((((2-氰基乙氧基)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-4-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)磷酰基)氧)甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-7-基酯
将膦酸氢(1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((((2-氰基乙氧基)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基)氧)磷酰基)氧)甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-7-基酯(5.36g)溶解在THF(60mL)与水(13mL)的混合溶剂中，并且对溶液进行冰冷却。向其中加入三氟乙酸(13.18mL)，并且在0℃下将混合物搅拌4小时。用碳酸氢钠(20.65g)在水(250mL)中的溶液一点一点地淬灭反应混合物，用NaCl使其饱和，并且用乙酸乙酯-THF(3:1)提取。用饱和盐水洗涤有机层，经无水硫酸镁干燥，并且在减压下蒸发溶剂。使残余物经受硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)，并且在减压下浓缩目标级分，得到呈白色非晶态固体(两种非对映异构体的混合物)形式的标题化合物(3.06g)。MS:[M+H]+1108.3。
C)N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-10-(2-氰基乙氧基)-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-羟基-18-((3-羟基-1,1,3,3-四(丙-2-基)二硅氧烷基)氧)-2,10-二氧负离子基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14(12H)-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺
使膦酸氢(1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((((2-氰基乙氧基)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-4-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)磷酰基)氧)甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-7-基酯(3.06g)依次与无水乙腈(约100mL)和无水吡啶(约100mL)一起经受共沸脱水，并且溶解在无水吡啶(75mL)中。向其中加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(1.78g)，并且在室温下在氩气流下将混合物搅拌1小时。向其中加入水(1.74mL)和碘(911mg)，并且在室温下将混合物再搅拌15分钟。用10％硫代硫酸钠水溶液(7.5mL)淬灭反应混合物，并且在减压下浓缩。用水(100mL)稀释残余物，并且用乙酸乙酯-THF(3:1)提取混合物。用饱和盐水洗涤有机层，经无水硫酸镁干燥，并且在减压下蒸发溶剂。向其中加入甲苯(约100mL)，并且再次在减压下浓缩混合物。使残余物经受硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)，并且在减压下浓缩目标级分，得到呈白色非晶态固体(两种非对映异构体的混合物)形式的标题化合物(2.38g)。MS:[M+H]+1106.3。
D)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2,10-二羟基-18-((3-羟基-1,1,3,3-四(丙-2-基)二硅氧烷基)氧)-2,10-二氧负离子基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮
将N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-10-(2-氰基乙氧基)-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-羟基-18-((3-羟基-1,1,3,3-四(丙-2-基)二硅氧烷基)氧)-2,10-二氧负离子基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14(12H)-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(2.38g)溶解在40％甲胺甲醇溶液(40mL)中，在室温下将溶液搅拌1小时，并且在减压下浓缩反应混合物。向其中加入甲苯(约80mL)，并且再次在减压下浓缩混合物。使残余物经受硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)，并且在减压下浓缩目标级分，得到呈白色固体形式的标题化合物(756mg)。MS:[M+H]+949.2。
E)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2,10,18-三羟基-2,10-二氧负离子基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)
将7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2,10-二羟基-18-((3-羟基-1,1,3,3-四(丙-2-基)二硅氧烷基)氧)-2,10-二氧负离子基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(756mg)溶解在甲醇(2mL)和三乙胺(0.8mL)中，向其中加入三氢氟酸三乙胺(3.90mL)，并且在50℃下将混合物搅拌2小时。允许反应混合物冷却至室温，用1M碳酸氢三乙铵水溶液(110mL)中和，并且在室温下搅拌15分钟。在减压下浓缩反应混合物，并且使残余物经受ODS柱色谱法(乙腈/10mM乙酸三乙铵缓冲溶液)。在减压下浓缩目标级分，并且对残余物进行冷冻干燥，得到呈白色固体形式的标题化合物(504mg)。1H NMR(300MHz,D2O)δ1.20(18H,t,J＝7.4Hz),3.12(12H,q,J＝7.2Hz),4.02-4.16(4H,m),4.23-4.37(3H,m),4.55(1H,d,J＝4.5Hz),4.82-4.93(3H,m),6.12(1H,s),6.39(1H,dd,J＝8.3,1.5Hz),7.19(1H,d,J＝1.9Hz),7.96(1H,s),8.11(1H,s),8.17(1H,s)。31P NMR(121MHz,D2O)δ-1.91,-1.80。
实施例17
7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-10,18-二羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)的合成
A)N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-10-(2-氰基乙氧基)-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-18-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14(12H)-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺
使膦酸氢(1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((((2-氰基乙氧基)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-4-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)磷酰基)氧)甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-7-基酯(3.71g)与无水乙腈和无水吡啶一起经受共沸脱水，并且悬浮在无水吡啶(70mL)中。向其中加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(2.15g)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时。向其中加入3H-苯并[c][1,2]二硫醇-3-酮(674mg)，并且在室温下将混合物再搅拌1小时。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，并且用乙酸乙酯提取混合物。用饱和盐水洗涤有机层，经硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(2.78g)。MS:[M+H]+1122.2
B)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-10-羟基-18-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体)
将N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-10-(2-氰基乙氧基)-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-18-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14(12H)-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(2.78g)溶解在40％甲胺甲醇溶液(50mL)中，在室温下在氩气氛下将溶液搅拌1小时，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物。通过HPLC(L-column2ODS，50×150mm，流动相：5mM乙酸铵水溶液/乙腈)纯化所获得的残余物，得到标题化合物(30mg)。MS:[M+H]+965.3。
C)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-10,18-二羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)
向7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-10-羟基-18-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体)(30mg)中加入三氢氟酸三乙胺(0.70mL)和甲醇(1mL)，并且在50℃下将混合物搅拌3小时。向反应溶液中加入乙氧基(三甲基)硅烷(2.5mL)，在室温下将混合物搅拌30分钟，并且在减压下蒸发溶剂。通过C18硅胶柱色谱法(10mM乙酸三乙铵缓冲溶液/乙腈)纯化残余物，并且对所获得的固体进行冷冻干燥，得到标题化合物(25mg)。1H NMR(300MHz,D2O)δ1.19(18H,t,J＝7.4Hz),3.11(12H,q,J＝7.2Hz),3.99-4.09(3H,m),4.09-4.17(2H,m),4.22-4.29(1H,m),4.34-4.38(1H,m),4.50-4.54(2H,m),4.90-4.96(1H,m),5.06(1H,s),6.11(1H,s),6.35(1H,dd,J＝8.3,1.1Hz),7.19(1H,d,J＝2.3Hz),7.94(1H,s),8.08(1H,s),8.16(1H,s)。31P NMR(121MHz,D2O)δ55.76,-1.56。
实施例18
7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2,18-二羟基-2,10-二氧负离子基-10-硫烷基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)的合成
A)膦酸氢(1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((((2-氰基乙氧基)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基)氧)磷代磺酰基)氧)甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-7-基酯
使膦酸氢(1S,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-(羟基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-7-基酯(3.0g)与二异丙基氨基磷酸2-氰基乙基酯(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基酯(5.86g)的混合物与无水乙腈一起经受共沸脱水，并且悬浮在无水THF(25mL)中。将5-(乙基硫烷基)-2H-四唑(2.62g)(其预先与无水乙腈一起经受共沸脱水)溶解在无水乙腈(25mL)中，将溶液加入至以上提到的悬浮液中，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌过夜。向其中加入((二甲基氨基亚甲基)氨基)-3H-1,2,4-二噻唑啉-3-硫酮(2.75g)，并且在室温下将混合物再搅拌30分钟。在减压下蒸发溶剂，并且通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(4.96g)。MS:[M+H]+1106.3。
B)膦酸氢(1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((((2-氰基乙氧基)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-4-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)磷代磺酰基)氧)甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-7-基酯
将膦酸氢(1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((((2-氰基乙氧基)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基)氧)磷代磺酰基)氧)甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-7-基酯(4.96g)溶解在THF(60mL)与水(12mL)的混合溶剂中，并且对溶液进行冰冷却。向其中加入三氟乙酸(12.1mL)，并且在0℃下将混合物搅拌3小时。用碳酸氢钠(18.8g)在水(100mL)中的溶液淬灭反应混合物，并且用乙酸乙酯-THF(3:1)提取。使有机层经硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(3.77g)。MS:[M+H]+1124.2。
C)N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-10-(2-氰基乙氧基)-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-羟基-18-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-2-氧负离子基-10-硫离子基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14(12H)-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺
使膦酸氢(1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((((2-氰基乙氧基)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-4-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)磷代磺酰基)氧)甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-7-基酯(3.77g)与无水乙腈和无水吡啶一起经受共沸脱水，并且悬浮在无水吡啶(70mL)中。向其中加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(2.17g)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时。向其中加入水(2.12mL)和碘(1.11g)，并且在室温下将混合物再搅拌1小时。用10％硫代硫酸钠水溶液(15mL)淬灭反应混合物，并且在减压下蒸发溶剂。用水(100mL)稀释残余物，并且用乙酸乙酯-THF(3:1)提取混合物。使有机层经硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(2.21g)。MS:[M+H]+1122.2。
D)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2-羟基-18-((3-羟基-1,1,3,3-四(丙-2-基)二硅氧烷基)氧)-2,10-二氧负离子基-10-硫烷基-六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体)
向N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-10-(2-氰基乙氧基)-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-羟基-18-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-2-氧负离子基-10-硫离子基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14(12H)-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(2.38g)中加入40％甲胺甲醇溶液(40mL)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时。在减压下浓缩所获得的混合物，并且通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物。通过HPLC(L-column2ODS，50×150mm，流动相：5mM乙酸铵水溶液/乙腈)纯化所获得的残余物，在减压下浓缩所获得的级分，并且对残余物进行冷冻干燥，得到标题化合物(710mg)。MS:[M+H]+965.2。
E)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2,18-二羟基-2,10-二氧负离子基-10-硫烷基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)
向7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2-羟基-18-((3-羟基-1,1,3,3-四(丙-2-基)二硅氧烷基)氧)-2,10-二氧负离子基-10-硫烷基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体，衍生自tR2)(710mg)在甲醇(20mL)中的溶液中加入三氢氟酸三乙胺(4.80mL)，并且在50℃下将混合物搅拌3小时。在室温下向反应混合物中加入乙氧基三甲基硅烷(2.29mL)，并且将混合物搅拌30分钟。在减压下浓缩反应混合物，并且通过C18硅胶柱色谱法(10mM乙酸三乙铵缓冲溶液/乙腈)纯化残余物，并且进行冷冻干燥，得到标题化合物(530mg)。1H NMR(300MHz,D2O)δ1.22(18H,t,J＝7.2Hz),3.14(12H,q,J＝7.6Hz),4.03-4.19(4H,m),4.25-4.41(3H,m),4.65(1H,d,J＝4.5Hz),4.84(1H,d,J＝4.5Hz),4.91(1H,s),4.99(1H,ddd,J＝10.1,8.2,4.3Hz),6.14(1H,s),6.39(1H,d,J＝7.9Hz),7.17(1H,d,J＝2.3Hz),7.97(1H,s),8.11(1H,s),8.19(1H,s)。31P NMR(121MHz,D2O)δ52.5,1.74。
实施例19
2-氨基-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-氟-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,10,16-三羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)的合成
A)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-2-((((2-氰基乙氧基)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基)氧)磷酰基)氧)甲基)-4-氟-5-(2-异丁基酰胺基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)四氢呋喃-3-基酯
使2'-脱氧-2'-氟-3'-O-(羟基(氧负离子基)磷烷基)-N-异丁酰基鸟苷(680mg)和二异丙基氨基磷酸2-氰基乙基酯(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基酯(1535mg)与无水乙腈一起经受共沸脱水(三次)，并且悬浮在无水THF(10.00ml)中。向悬浮液中加入5-(乙基硫烷基)-2H-四唑(633mg)(其与无水乙腈一起经受共沸脱水)与无水乙腈(10ml)的混合物，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌7小时。向混合物中加入二异丙基氨基磷酸2-氰基乙基酯(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基酯(1181mg，1.62mmol)(其与无水乙腈一起经受共沸脱水)与无水乙腈(3ml)的混合物和5-(乙基硫烷基)-2H-四唑(633mg)(其与无水乙腈一起经受共沸脱水)与无水乙腈(3ml)的混合物，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌过夜。向反应混合物中加入70％氢过氧化叔丁基水溶液(0.674mL)，并且在室温下将混合物再搅拌30分钟。向反应混合物中加入五水合硫代硫酸钠(2817mg)与水(4mL)的混合物，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(1260mg)。MS:[M+H]+1062.3。
B)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-2-((((2-氰基乙氧基)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-4-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)磷酰基)氧)甲基)-4-氟-5-(2-异丁基酰胺基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)四氢呋喃-3-基酯
在0℃下向膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-2-((((2-氰基乙氧基)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基)氧)磷酰基)氧)甲基)-4-氟-5-(2-异丁基酰胺基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)四氢呋喃-3-基酯(1.26g)、THF(16ml)和水(4ml)的混合物中加入三氟乙酸(3.18ml)，并且将混合物搅拌4小时。向混合物中加入碳酸氢钠(4.98g)的水溶液，并且用氯化钠使混合物饱和。用乙酸乙酯/THF提取混合物，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(1000mg)。MS:[M+H]+1080.3。
C)N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-氰基乙氧基)-15-氟-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-羟基-16-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基)-2-甲基丙酰胺
使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-2-((((2-氰基乙氧基)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-4-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)磷酰基)氧)甲基)-4-氟-5-(2-异丁基酰胺基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)四氢呋喃-3-基酯(1g)与无水乙腈和无水吡啶一起经受共沸脱水，并且悬浮在无水吡啶(24mL)中。向其中加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(598mg)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌15分钟。向其中加入水(0.584mL)和碘(305mg)，并且在室温下将混合物再搅拌25分钟。在减压下浓缩反应混合物，并且通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(800mg)。MS:[M+H]+1078.2
D)2-氨基-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-氟-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,10-二羟基-16-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮(光学异构体)
向N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-氰基乙氧基)-15-氟-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-羟基-16-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基)-2-甲基丙酰胺(800mg，0.74mmol)中加入33％甲胺乙醇溶液(30mL)，在室温下在氩气氛下将混合物搅拌过夜，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物。通过HPLC(L-column2ODS，50×150mm，流动相：5mM乙酸铵水溶液/乙腈)纯化所获得的残余物，得到标题化合物(163.4mg)。MS:[M+H]+955.3。
E)2-氨基-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-氟-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,10,16-三羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)
在50℃下在氩气氛下将2-氨基-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-氟-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,10-二羟基-16-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮(光学异构体)(21.4mg)、三氢氟酸三乙胺(0.183mL)和甲醇(0.07mL)的混合物搅拌1小时。向反应混合物中加入乙氧基(三甲基)硅烷(1.046mL)，在室温下将混合物再搅拌1小时，并且在减压下蒸发溶剂。通过C18硅胶柱色谱法(10mM乙酸三乙铵缓冲溶液/乙腈)纯化残余物，并且进行冷冻干燥，得到标题化合物(4.6mg)。1H NMR(300MHz,D2O)δ1.20(18H,t,J＝7.3Hz),3.13(12H,q,J＝7.3Hz),4.07(2H,d,J＝11.1Hz),4.25(2H,d,J＝7.6Hz),4.33-4.99(4H,m),5.04-5.25(1H,m),5.41-5.70(1H,m),6.17(1H,d,J＝19.0Hz),6.38(1H,d,J＝9.2Hz),7.32(1H,s),7.79(1H,brs),7.95(1H,s).31P NMR(121MHz,D2O)δ-1.61,-1.52。
实施例20
7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2,10,15,16-四羟基-2-氧负离子基-10-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)的合成
A)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-((((2-氰基乙氧基)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基)氧)磷代磺酰基)氧)甲基)四氢呋喃-3-基酯
使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基酯(3.0g)与二异丙基氨基磷酸2-氰基乙基酯(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基酯(5.36g)的混合物与无水乙腈一起经受共沸脱水，并且悬浮在无水乙腈(25mL)和无水THF(15mL)中。将5-(乙基硫烷基)-2H-四唑(2.13g)(其预先与无水乙腈一起经受共沸脱水)溶解在无水乙腈(15mL)中，将溶液加入至以上提到的悬浮液中，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌过夜。向其中加入((二甲基氨基亚甲基)氨基)-3H-1,2,4-二噻唑啉-3-硫酮(2.24g)，并且在室温下将混合物再搅拌1小时。在减压下蒸发溶剂，并且通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(5.15g)。MS:[M+H]+1208.3。
B)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-((((2-氰基乙氧基)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-4-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)磷代磺酰基)氧)甲基)四氢呋喃-3-基酯
将膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-((((2-氰基乙氧基)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-氟[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基)氧)磷代磺酰基)氧)甲基)四氢呋喃-3-基酯(5.15g)溶解在THF(48mL)与水(10mL)的混合溶剂中，并且对溶液进行冰冷却。向其中加入三氟乙酸(11.5mL)，并且在0℃下将混合物搅拌3小时。用碳酸氢钠(12.5g)在水(100mL)中的溶液淬灭反应混合物，并且用乙酸乙酯-THF提取。用饱和盐水洗涤有机层，经硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(5.13g)。MS:[M+H]+1226.4。
C)N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-10-(2-氰基乙氧基)-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-羟基-16-((3-羟基-1,1,3,3-四(丙-2-基)二硅氧烷基)氧)-2-氧负离子基-10-硫离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺
使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-2-((((2-氰基乙氧基)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-氟-4-氧代-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(4H)-基)-4-((3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)氧)磷代磺酰基)氧)甲基)四氢呋喃-3-基酯(5.13g)与无水乙腈和无水吡啶一起经受共沸脱水，并且悬浮在无水吡啶(100mL)中。向其中加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(2.70g)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时。向其中加入水(2.64g)和碘(1.38g)，并且在室温下将混合物再搅拌1小时。用硫代硫酸钠(5.19g)和水(2.64g)淬灭反应混合物，并且用乙酸乙酯提取。用水和饱和盐水洗涤有机层，经无水硫酸镁干燥，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(3.53g)。MS:[M+H]+1224.4。
D)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-(((1,1-二甲基乙基)二甲基硅烷基)氧)八氢-2,10-二羟基-16-((3-羟基-1,1,3,3-四(1-甲基乙基)二硅氧烷基)氧)-2-氧负离子基-10-硫烷基-5,8-甲桥-12H-氟[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体)
向N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-((叔丁基(二甲基)硅烷基)氧)-10-(2-氰基乙氧基)-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-羟基-16-((3-羟基-1,1,3,3-四(丙-2-基)二硅氧烷基)氧)-2-氧负离子基-10-硫离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(3.5g)加入40％甲胺甲醇溶液(50mL)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时。在减压下浓缩所获得的混合物，并且通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物。通过HPLC(L-column2ODS，50×150mm，流动相：5mM乙酸铵水溶液/乙腈)纯化所获得的残余物，在减压下浓缩所获得的级分，并且对残余物进行冷冻干燥，得到标题化合物(210mg)。MS:[M+H]+1067.4。
E)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2,10,15,16-四羟基-2-氧负离子基-10-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体)
向7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-(((1,1-二甲基乙基)二甲基硅烷基)氧)八氢-2,10-二羟基-16-((3-羟基-1,1,3,3-四(1-甲基乙基)二硅氧烷基)氧)-2-氧负离子基-10-硫烷基-5,8-甲桥-12H-氟[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基)-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体，衍生自tR2)(210mg)在甲醇(1.0mL)-三乙胺(0.4mL)中的溶液中加入三氢氟酸三乙胺(0.962mL)，并且在50℃下将混合物搅拌2.5小时。在室温下向反应混合物中加入乙氧基三甲基硅烷(4.59mL)，并且将混合物搅拌30分钟。在减压下浓缩反应混合物，并且通过C18硅胶柱色谱法(10mM乙酸三乙铵缓冲溶液/乙腈)纯化残余物，并且进行冷冻干燥，得到标题化合物(125mg)。1H NMR(300MHz,D2O)δ1.13-1.28(18H,m),3.12(12H,q,J＝7.2Hz),4.02-4.11(1H,m),4.13-4.25(2H,m),4.27-4.40(2H,m),4.46(1H,d,J＝6.4Hz),4.73-4.79(2H,m),4.80-4.91(1H,m),5.02(1H,td,J＝8.8,4.2Hz),6.08(1H,d,J＝1.7Hz),6.35(1H,d,J＝8.1Hz),7.27(1H,d,J＝1.7Hz),7.93(1H,s),8.14(1H,s),8.18(1H,s)。31P NMR(121MHz,D2O)δ52.4,1.21。
实施例23
7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-10,15,16-三羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基]-5-氟-3-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体1和光学异构体2)的合成
A)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-[6-(苯甲酰基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-4-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}-2-({[(2-氰基乙氧基){[(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基]氧基}磷酰基]氧基}甲基)四氢呋喃-3-基酯
使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-[6-(苯甲酰基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-4-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基酯(250mg)和二异丙基氨基磷酸2-氰基乙基酯(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基酯(359mg)(实施例24步骤C)与无水乙腈一起经受共沸脱水，并且向其中加入无水乙腈(1.1mL)和无水四氢呋喃(0.7mL)。向溶液中加入5-(乙基硫烷基)-2H-四唑(175mg)(其与无水乙腈一起经受共沸脱水)在无水乙腈(0.75mL)中的溶液，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌2小时。向其中加入含氢过氧化叔丁基(5.5mol/L)的壬烷(0.25mL)，并且在室温下将混合物搅拌40分钟。在冰浴中冷却反应混合物，并且加入硫代硫酸钠(345mg)在水(0.275mL)中的溶液。允许在室温下搅拌混合物15分钟并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(甲醇/二氯甲烷)纯化粗产物，得到呈非对映异构体混合物形式的标题化合物(318mg)。MS:[M+H]+1206.3
B)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-[6-(苯甲酰基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-4-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}-2-({[(2-氰基乙氧基)({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-氟-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(羟基甲基)-4-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]四氢呋喃-3-基}氧基)磷酰基]氧基}甲基)四氢呋喃-3-基酯
将膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-[6-(苯甲酰基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-4-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}-2-({[(2-氰基乙氧基){[(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基]氧基}磷酰基]氧基}甲基)四氢呋喃-3-基酯(315mg)溶解在四氢呋喃(2.8mL)与水(0.71mL)的混合物中，允许搅拌溶液并且在冰浴中冷却。逐滴加入三氟乙酸(0.71mL)，并且允许在0至5℃下搅拌混合物2小时15分钟。在维持充分搅拌的同时向反应混合物中逐渐加入碳酸氢钠(1.14g)，然后加入水(3mL)和乙酸乙酯(10mL)。用乙酸乙酯(10mL)提取所分离的水层。用盐水(3mL)洗涤所合并的有机物，经无水硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法(甲醇/二氯甲烷)纯化残余物，得到标题化合物(145mg)。MS:[M+H]+1224.3
C)N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}-10-(2-氰基乙氧基)-7-(5-氟-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基}-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺
使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-[6-(苯甲酰基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-4-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}-2-({[(2-氰基乙氧基)({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-氟-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(羟基甲基)-4-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]四氢呋喃-3-基}氧基)磷酰基]氧基}甲基)四氢呋喃-3-基酯(143mg)与无水乙腈一起经受共沸脱水，并且向其中加入无水乙腈和无水吡啶(2.3mL)。向混合物中加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环戊烷2-氧化物(75mg)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌45分钟。向其中加入水(75μL)和3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮1,1-二氧化物(29mg)，并且在室温下将混合物再搅拌40分钟。向反应混合物中加入五水合硫代硫酸钠(150mg)在水(0.35mL)中的溶液，并且在室温下将混合物搅拌5分钟。浓缩混合物，向其中加入甲苯，并且在减压下浓缩混合物(重复4次)。通过硅胶柱色谱法(甲醇/二氯甲烷)纯化粗产物，得到呈非对映异构体混合物形式的标题化合物(84mg)。MS:[M+H]+1238.3
D)7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}-10-羟基-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基}-5-氟-3-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮
向N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}-10-(2-氰基乙氧基)-7-(5-氟-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基}-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(83mg)中加入33％甲胺乙醇溶液(2.0mL)，在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时，并且在减压下浓缩。通过逆相色谱法(ISCO RediSepRf Gold HP C1815.5g柱)纯化粗产物，用0至70％ACN/10mM NH4OAc水溶液洗脱，得到标题化合物的两种分离的单一异构体：峰1(早期级分，11mg)和峰2(晚期级分，44.5mg)。MS:[M+H]+1081.3
E)7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-10,15,16-三羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基]-5-氟-3-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体1)
向7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}-10-羟基-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基}-5-氟-3-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(324mg，峰2/来自步骤D的晚期级分)中加入吡啶(6.0mL)和三氢氟酸三乙胺(0.303mL)。在55℃下将反应混合物搅拌16小时。LCMS分析显示一些经单保护的中间物。加入甲醇(2.0mL)并且在55℃下将反应混合物搅拌3小时。LCMS随后显示完全反应。在减压下浓缩反应混合物，并且加入水(6.7mL)和氯化钙(700mg)。将所得悬浮液搅拌1小时，并且在垫上过滤。在减压下浓缩滤液，并且通过逆相色谱法(ISCO RediSepRf Gold HP C18Aq柱)纯化残余物，用0至15％ACN/10mM乙酸三乙铵水溶液洗脱，得到标题化合物(195mg)。MS:[M+H]+707.1。1H NMR(400MHz,D2O)δ1.27(18H,t,J＝7.3Hz),3.19(12H,q,J＝7.3Hz),3.35(3H,s),4.06-4.10(1H,m),4.18-4.26(1H,m),4.32-4.37(1H,m),4.39-4.54(3H,m),4.63(1H,d,J＝4.0Hz),4.80-4.82(1H,m),5.03-5.12(2H,m),6.15-6.17(1H,m),6.35-6.39(1H,m),7.33-7.37(1H,m),8.13(1H,s),8.15(1H,s),8.27(1H,s)。31P NMR(162MHz,D2O)δ-2.22,54.80。19FNMR(376MHz,D2O)δ-164.6。
F)7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-10,15,16-三羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基]-5-氟-3-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体2)
通过使用与光学异构体1相同的程序来制备光学异构体2。7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}-10-羟基-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基}-5-氟-3-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(24.5mg，峰1/来自步骤D的早期级分)得到标题化合物(11.8mg)。MS:[M+H]+707.1。1H NMR(400MHz,D2O)δppm 1.25(18H,t,J＝7.22Hz),3.17(q,J＝7.24Hz,12H),3.35(3H,s),4.12-4.22(3H,m),4.40-4.53(3H,m),4.62(1H,m),4.83-4.90(1H,m),4.93-4.98(1H,m),5.09-5.15(1H,m),6.16(1H,s),6.28-6.36(1H,m),7.50(1H,s),8.12(1H,s),8.15(1H,s),8.31(1H,s)。31P NMR(162MHz,D2O)δ-2.42,54.11。19F NMR(376MHz,D2O)δ-165.54
实施例24
7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-10,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基]-5-氟-3-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体1和光学异构体2)的合成
A)7-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基]-5-氟-3-甲基-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮.
将7-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基]-5-氟-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(300mg)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(3.30mL)中，并且加入碳酸钾(192mg)。在冰浴中冷却该悬浮液。加入碘甲烷(0.080mL)。伴随冷却将混合物搅拌5分钟，然后在室温下搅拌过夜。浓缩混合物并且加入水，用1M HCl中和至pH～6。通过过滤收集所得固体并且在真空下干燥过夜，得到标题化合物(266mg)。MS:[M+H]+300.1。
B)5-氟-7-[(6aR,8R,9R,9aS)-9-羟基-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-8-基]-3-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮.
将7-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基]-5-氟-3-甲基-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(985mg)(与乙腈一起预先共沸3次并且在真空中干燥5小时)溶解在吡啶(9.75mL)和N,N-二甲基甲酰胺(4.80mL)中。搅拌15分钟之后，逐滴加入1,3-二氯-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷(1.02mL)。在室温下将混合物搅拌过夜。在减压下浓缩混合物并且与甲苯一起共沸。使残余物分配在EtOAc(120mL)与水(50mL)之间。用水(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤所分离的有机层，经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩。通过色谱法使用EtOAc/己烷来纯化残余物，得到标题化合物(1.41g)。MS:[M+H]+542.3。
C)二异丙基氨基磷酸2-氰基乙基酯(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基酯
在15mL圆底烧瓶中，使5-氟-7-[(6aR,8R,9R,9aS)-9-羟基-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-8-基]-3-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(1.41g)与无水乙腈(3×5mL)一起共沸，在氩气下溶解在无水N,N-二甲基甲酰胺(6.17mL)中。加入含0.45M 1H-四唑的乙腈(7.05mL)、1-甲基-1H-咪唑(123μL)和2-氰基乙基N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺(1.86mL)。在室温下将混合物搅拌1小时。用70ml EtOAc稀释混合物，用饱和NaHCO3(×2)和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩。通过硅胶色谱法，使用EtOAc/己烷(0.5％Et3N)来纯化粗残余物，得到标题化合物(1.87g)。MS:[M+H]+742.4。
D)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-[6-(苯甲酰基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-({[(2-氰基乙氧基){[(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基]氧基}磷酰基]氧基}甲基)-4-氟四氢呋喃-3-基酯
在100mL圆底烧瓶中，使二异丙基氨基磷酸2-氰基乙基酯(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基酯(937mg)和膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-[6-(苯甲酰基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基酯(425mg)与无水CH3CN(3×5mL)一起共沸，在氩气下悬浮在无水四氢呋喃(1.80mL)和乙腈(2.95mL)中。加入5-(乙硫基)-1H-四唑(380mg)(与乙腈3×5mL一起预先共沸)在无水乙腈(1.80mL)中的溶液。允许在室温下将混合物搅拌1小时。加入含氢过氧化叔丁基(5.5mol/L)的壬烷(425μL)。在室温下将混合物搅拌40分钟，然后在冰浴中冷却。加入硫代硫酸钠(500.0mg)在水(700μL)中的溶液，并且将混合物搅拌10分钟。在减压下浓缩混合物，并且通过硅胶柱色谱法(甲醇/DCM)纯化残余物。获得呈两种光学异构体的混合物形式的标题化合物(1.10g)。MS:[M+H]+1094.3。
E)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-[6-(苯甲酰基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-({[(2-氰基乙氧基)({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-氟-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(羟基甲基)-4-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]四氢呋喃-3-基}氧基)磷酰基]氧基}甲基)-4-氟四氢呋喃-3-基酯.
向膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-[6-(苯甲酰基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-({[(2-氰基乙氧基){[(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氟-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基]氧基}磷酰基]氧基}甲基)-4-氟四氢呋喃-3-基酯(1.10g)在四氢呋喃(11.0mL)和水(2.50mL)中的溶液(用冰浴冷却)中缓慢加入三氟乙酸(2.50mL)。伴随冷却将混合物搅拌4小时。加入碳酸氢钠(3800mg)，然后加入8ml水。将混合物搅拌5分钟，使其达到室温并且用EtOAc提取两次。用盐水洗涤所合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下蒸发滤液，得到粗产物。使用硅胶柱(甲醇/DCM)进行色谱，得到标题化合物(1.14g)。MS:[M+H]+1112.3。
F)N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-氰基乙氧基)-15-氟-7-(5-氟-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基}-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺.
在100mL圆底烧瓶中，使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-[6-(苯甲酰基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-({[(2-氰基乙氧基)({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-氟-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(羟基甲基)-4-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]四氢呋喃-3-基}氧基)磷酰基]氧基}甲基)-4-氟四氢呋喃-3-基酯(149mg)与乙腈(3×4mL)一起共沸并且在真空下干燥，溶解在无水吡啶(2.35mL)中并且在冰浴中冷却。加入含2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(180mg)的吡啶(0.120ml)。允许在室温下将混合物搅拌1.5小时。加入水(70.3μL)，然后加入3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮(56.2mg)。允许在室温下将混合物搅拌40分钟。加入含硫代硫酸钠(135mg)的1mL水。将混合物搅拌10分钟，在减压下浓缩，与甲苯一起共沸以去除吡啶。通过硅胶柱色谱法(甲醇/DCM)纯化残余物，得到呈两种光学异构体的混合物形式的标题化合物(63.6mg)。MS:[M+H]+1126.3。
G)7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-10-羟基-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基}-5-氟-3-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮
在室温下，在含甲胺(33wt％)的乙醇(3.00mL)中将两种异构体N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-氰基乙氧基)-15-氟-7-(5-氟-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基}-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺的混合物(60.7mg)搅拌1小时。在减压下蒸发出挥发性物质。通过逆相色谱法(ISCO RediSepRf Gold HP C18柱)纯化粗产物，用0至50％ACN/10mM NH4OAc水溶液洗脱，得到标题化合物的两种分离的单一异构体：峰1(早期级分，12mg)和峰2(晚期级分，35.6mg)。MS:[M+H]+969.3。
H)7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-10,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基]-5-氟-3-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体1)
将15mL聚丙烯锥形管装入7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-10-羟基-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基}-5-氟-3-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(35.6mg，峰2/来自步骤G的晚期级分)。加入吡啶(273μL)，然后加入三氢氟酸三乙胺(27.3μL)和三乙胺(414μL)。允许在室温下将混合物搅拌过夜并且在50℃下搅拌2小时。在冰浴中冷却反应混合物并且用水(1.3mL)稀释。缓慢加入氯化钙(146.0mg)在水(1.0mL)中的溶液。将混合物搅拌30分钟，然后通过塞进行过滤。在减压下浓缩滤液，并且通过逆相色谱法(ISCORediSepRf Gold HP C18Aq柱)纯化残余物，用0至10％ACN/10mM乙酸三乙铵水溶液洗脱，得到标题化合物(23.9mg)。M S:[M+H]+709.2。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ＝8.29-8.24(m,1H),8.22(s,1H),8.08-8.04(m,1H),7.46-7.40(m,1H),6.48(d,1H,J＝12Hz),6.37(d,1H,J＝16Hz),5.80-5.57(m,1H),5.33-5.12(m,1H),5.05-4.95(m,1H),4.50-4.42(m,2H),4.41-4.34(m,1H),4.34-4.24(m,2H),4.08-3.96(m,1H),3.57(s,3H),3.52-3.48(m,1H),3.25-3.11(m,12H),1.39-1.24(m,18H)。31P NMR(162MHz,D2O)δ-2.45,55.32。19F NMR(376.5MHz,D2O)δ-164.60,-200.71。
I)7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-10,16-二羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基]-5-氟-3-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体2)
将15mL聚丙烯锥形管装入7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-10-羟基-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基}-5-氟-3-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(12.0mg，峰1/来自步骤G的早期级分)。加入吡啶(92μL)，然后加入三氢氟酸三乙胺(9.2μL)和三乙胺(140μL)。允许在50℃下将混合物搅拌2小时。用冰浴冷却反应混合物并且用水(1.0mL)稀释。缓慢加入氯化钙(6.98mg)在水(1.0mL)中的溶液。将混合物搅拌30分钟，然后通过塞进行过滤。在减压下浓缩滤液，并且通过逆相色谱法(ISCO RediSepRf Gol d HPC18Aq柱)纯化残余物，用0至10％ACN/10mM乙酸三乙铵水溶液洗脱，得到标题化合物(1.94mg)。MS:[M+H]+709.3。1H N MR(400MHz,氧化氘)δ＝8.20(s,1H),8.06(s,1H),7.99(s,1H),7.46-7.40(m,1H),6.37(d,1H,J＝16),6.27(d,1H,J＝8),5.83(dd,1H,J1＝52Hz,J2＝4Hz),4.98-4.84(m,2H),4.57(br d,J＝3.9Hz,2H),4.54-4.48(m,2H),4.46-4.36(m,3H),4.20-4.11(m,3H),3.55-3.47(m,3H),3.20-3.06(dd,12H),1.28-1.12(t,18H)。31P NMR(162MHz,D2O)δ-2.52,53.94。19F NMR(376.5MHz,D2O)δ-165.55,-202.45。
实施例25
7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2,10,16-三羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基]-5-氟-3-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐的合成
A)N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-氰基乙氧基)-15-氟-7-(5-氟-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-羟基-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基}-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺
在100mL圆底烧瓶中，使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-[6-(苯甲酰基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-({[(2-氰基乙氧基)({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-氟-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(羟基甲基)-4-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]四氢呋喃-3-基}氧基)磷酰基]氧基}甲基)-4-氟四氢呋喃-3-基酯(1.14g)与乙腈(3×4mL)一起共沸并且在真空下干燥，溶解在吡啶(18.0mL)中且在冰浴中冷却。分2份加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(586mg)。允许在室温下将混合物搅拌40分钟。加入水(0.554mL)，然后加入3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮1,1-二氧化物(251mg)。允许在室温下将混合物搅拌40分钟。加入硫代硫酸钠(810mg)在2mL水中的溶液。在减压下浓缩混合物并且与甲苯一起共沸以去除吡啶。通过硅胶柱色谱法(甲醇/DCM)纯化残余物，得到标题化合物(650mg)。MS:[M+H]+1111.3
B)7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2,10-二羟基-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基}-5-氟-3-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮
向25mL圆底烧瓶中加入N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-氰基乙氧基)-15-氟-7-(5-氟-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-羟基-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基}-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(650mg)和含甲胺(33质量％)的绝对乙醇(22.7mL)。在室温下将混合物搅拌3小时。在减压下浓缩反应混合物，并且通过逆相色谱法(ISCO RediSepRf Gold HP C18柱)纯化残余物，用0至60％ACN/10mM NH4OAc水溶液洗脱，得到标题化合物(32.0mg)。MS:[M+H]+953.3。
C)7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2,10,16-三羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基]-5-氟-3-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐.
将15mL聚丙烯锥形管装入7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2,10-二羟基-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基}-5-氟-3-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(32.0mg)，并且加入吡啶(246μL)。向悬浮液中加入三氢氟酸三乙胺(24.6μL)，然后加入三乙胺(372μL)。允许在室温下将混合物搅拌过夜。在冰浴中冷却反应混合物并且用水(1mL)稀释。缓慢加入氯化钙(18.6mg)在水(1mL)中的溶液。将混合物搅拌30分钟，然后通过塞进行过滤。在减压下浓缩滤液，并且通过逆相色谱法(ISCO RediSepRf Gold HP C18Aq柱)纯化残余物，用0至5％ACN/10mM乙酸三乙铵水溶液洗脱，得到标题化合物(8.3mg)。MS:[M+H]+693.2。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ＝8.36(br,1H),8.22(s,1H),8.05(s,1H),7.38(d,1H,j＝2),6.48(d,1H,j＝8),6.37(d,1H,J＝16Hz),5.70(dd,1H,J1＝52Hz,J2＝4Hz),5.20-5.07(m,1H),4.98-4.92(m,1H),4.53(d,1H,J＝4Hz),4.45-4.33(m,2H),4.33-4.19(m,3H),4.09-4.03(m,1H),3.45(s,3H),3.17(qt,12H),1.28(t,18H)。31P NMR(162MHz,D2O)δ-1.66,-2.26。19FNMR(376.5MHz,D2O)δ-164.5,-201.7。
实施例26
7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-16-羟基-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基]-5-氯-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体1和光学异构体2)的合成:
A)二异丙基氨基磷酸(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氯-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基酯2-氰基乙基酯
在100mL圆底烧瓶中，使5-氯-7-[(6aR,8R,9R,9aS)-9-羟基-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-8-基]-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(1.469g)(用与实施例15A的方法中相同的方式合成)与甲苯(3×)一起共沸，并且在真空中干燥。将圆底烧瓶排空并且用氩气回填(3×)。加入无水N,N-二甲基甲酰胺(5.00mL)以便利用声波处理一分钟来溶解起始物质，然后依次加入2-氰基乙基N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺(2.50mL)、1-甲基咪唑(0.13mL)和1H-四唑(0.45M乙腈溶液，6.70mL)。在室温下，在氩气氛下将混合物搅拌3小时。用EtOAc(200mL)稀释混合物。加入饱和NaHCO3溶液。用EtOAc提取水层两次。依次用水和盐水洗涤所合并的EtOAc层，经无水Na2SO4干燥，过滤。在减压下浓缩滤液，得到粗油性产物。通过柱色谱法(ISCO RediSepRfDIOL HP Gold 100g柱)纯化粗物质，用EtOAc:己烷(1:9至1:1)洗脱，得到标题化合物(1.77g)。对于产物水解片段，MS:[M+H]+661.3。
B)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-[6-(苯甲酰基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基酯.
在氩气下将N-{9-[(2R,3R,4R,5R)-5-{[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基]甲基}-3-氟-4-羟基四氢呋喃-2-基]-9H-嘌呤-6-基}苯甲酰胺(2.64g)溶解在无水吡啶(18.0mL)中，用冰浴冷却。经1分钟缓慢加入亚磷酸二苯酯(1.60mL)。允许反应溶液升温至室温并且搅拌1小时。缓慢加入第二份亚磷酸二苯酯(0.35mL)，并且保持搅拌混合物30分钟以上。用冰浴冷却混合物。加入水(2.0mL)并且在室温下将混合物搅拌30分钟。在减压下浓缩混合物并且与甲苯一起共沸以进一步去除吡啶和水。在真空泵上干燥残余物。向残余物中加入乙酸(10.0mL)和水(2.0mL)。在室温下将混合物搅拌30分钟。在减压下浓缩混合物并且与甲苯一起共沸，然后在真空泵上干燥，得到粗油，在硅胶柱上使用MeOH/DCM(0/100至50/50)进行色谱，得到1.33g白色固体状标题产物。MS:[M+H]+438.1。
C)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-[6-(苯甲酰基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-({[{[(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氯-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基]氧基}(2-氰基乙氧基)硫代磷酰基]氧基}甲基)-4-氟四氢呋喃-3-基酯.
在250mL圆底烧瓶中，使二异丙基氨基磷酸(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氯-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基酯2-氰基乙基酯(2.23g)与膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-[6-(苯甲酰基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基酯(1.17g)的混合物与无水乙腈(25mL×3)一起共沸，在真空泵上干燥1小时。在氩气下向混合物中加入无水乙腈(20.0mL)，然后加入5-(乙硫基)-1H-四唑(1.00g)(与无水乙腈10mL一起预先共沸3次，并且在真空泵上干燥)在无水乙腈(10.0mL)中的溶液。在室温下将混合物搅拌1小时20分钟。加入((二甲基氨基-亚甲基)氨基)-3H-1,2,4-二噻唑啉-3-硫酮(655mg)，并且在室温下将混合物搅拌40分钟。在减压下浓缩混合物。在硅胶柱上使用MeOH/DCM(0/100至40/60)进行色谱，得到呈2种光学异构体的混合物形式的标题化合物(1.78g)。MS:[M+H]+1112.4。
E)膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-[6-(苯甲酰基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-({[({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-氯-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(羟基甲基)-4-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]四氢呋喃-3-基}氧基)(2-氰基乙氧基)硫代磷酰基]氧基}甲基)-4-氟四氢呋喃-3-基酯.
在圆底烧瓶中，将膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-[6-(苯甲酰基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-({[{[(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-氯-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2,4,4-四异丙基四氢-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧杂二硅杂环辛烷-9-基]氧基}(2-氰基乙氧基)硫代磷酰基]氧基}甲基)-4-氟四氢呋喃-3-基酯(1.73g)溶解在四氢呋喃(16mL)和水(4.0mL)中。用冰浴冷却溶液。逐滴加入三氟乙酸(4.0mL)。伴随冷却将混合物搅拌4小时。在0℃下，逐份加入碳酸氢钠(7.00g)，然后加入水和EtOAc。将混合物搅拌3分钟，然后使其达到室温。分离诸层。用EtOAc(3次)提取水层。用盐水洗涤所合并的EtOAc溶液，经无水Na2SO4干燥，过滤。在减压下浓缩滤液并且在真空泵上干燥，得到粗产物。在硅胶柱上使用MeOH/DCM(0/100至40/60)纯化粗物质，得到呈2种光学异构体的混合物形式的标题产物(1.43g)。MS:[M+H]+1130.3。
F)N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(5-氯-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-10-(2-氰基乙氧基)-15-氟-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2-氧负离子基-2-硫烷基-10-硫离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基}-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(两种主要光学异构体的混合物).
在圆底烧瓶中，使膦酸氢(2R,3R,4R,5R)-5-[6-(苯甲酰基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-({[({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-氯-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(羟基甲基)-4-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]四氢呋喃-3-基}氧基)(2-氰基乙氧基)硫代磷酰基]氧基}甲基)-4-氟四氢呋喃-3-基酯(1.20g)依次与无水吡啶(新瓶)/乙腈(2次)和无水乙腈一起共沸。在真空下干燥所得白色固体。在氩气氛下，加入无水吡啶(20.0mL)(新瓶)，然后加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(0.700g)。允许在室温下将澄清溶液搅拌1小时10分钟。加入水(0.70mL)，然后加入3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮1,1-二氧化物(0.300g)。在室温下将混合物搅拌20分钟。在减压下浓缩混合物，与甲苯一起共沸(2次)，在真空泵上干燥，得到粗残余物。在硅胶柱上使用MeOH/DCM(0/100至20/80)对粗残余物进行色谱。得到来自早期级分的标题产物(590mg)，并且根据LCMS鉴定为峰2和峰4的主要异构体的混合物；而来自晚期级分的第二批产物(389mg)为所有4种异构体的混合物。MS:[M+H]+1144.2。
G)7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基}-5-氯-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(单一光学异构体1和单一光学异构体2)
在N2气氛下，在室温下在含甲胺(33质量％)的绝对乙醇(15.0mL)中将N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(5-氯-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-10-(2-氰基乙氧基)-15-氟-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2-氧负离子基-2-硫烷基-10-硫离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-14-基}-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(0.584g，2种主要异构体的混合物，柱色谱仪的早期级分)搅拌2小时。在减压下浓缩混合物并且在真空泵上干燥，得到粗固体。在硅胶柱上使用MeOH/EtOAc(0/100至40/60)进行两次后续纯化，得到标题化合物的2种单一光学异构体：异构体1(早期级分/峰1，73mg)和异构体2(晚期级分/峰2，304mg)，以及峰1与峰2的混合级分(0.30g)。MS(光学异构体1):[M+H]+987.2。MS(光学异构体2):[M+H]+987.2。
H)7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-16-羟基-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基]-5-氯-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体1).
向聚丙烯管中加入7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基}-5-氯-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体1，69.2mg，来自柱色谱的早期级分)、吡啶(0.40mL)，然后加入三氢氟酸三乙胺(0.060mL)，然后加入三乙胺(0.90mL)。在50℃下在密封丙烯管中将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，用水(1.30mL)稀释。加入氯化钙(92.5mg)在水(1.30mL)中的溶液。在室温下将混浊白色混合物搅拌1小时，然后使用塑料过滤漏斗通过进行过滤，用水(1mL×4)洗涤。在减压下浓缩澄清水性滤液，与甲苯一起共沸多次，在真空上干燥10分钟，得到粗残余物。通过C18柱色谱法(水-乙腈/10mM乙酸三乙铵缓冲溶液)纯化粗残余物。在减压下浓缩产物级分，依次与甲苯(×4)一起和与不含内毒素的水(×5)一起共沸。将最终残余物溶解在不含内毒素的水中并且冻干，得到标题产物(光学异构体1，29.0mg)。MS[M+H]+727.0。1H NMR(400MHz,氧化氘)δ＝8.19(s,1H),8.16(s,1H),7.96(s,1H),7.63(s,1H),6.39(br d,J＝15.7Hz,1H),6.34(br d,J＝8.0Hz,1H),5.60-5.41(m,1H),5.22-5.14(m,1H),5.14-5.02(m,1H),4.55(br d,J＝3.8Hz,1H),4.51(br d,J＝8.2Hz,1H),4.42(br s,1H),4.40(br s,1H),4.35-4.28(m,1H),4.16-4.10(m,1H),4.06(br dd,J＝4.3,11.5Hz,1H),3.13(q,J＝7.3Hz,12H),1.21(t,J＝7.3Hz,18H)。31P NMR(162MHz,氧化氘)δ55.29,54.54。19F NMR(376MHz,氧化氘)δ＝-200.90
I)7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-16-羟基-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基]-5-氯-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮二(三乙胺)盐(光学异构体2).
向聚丙烯管中加入7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-16-[(3-羟基-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷基)氧基]-2,10-二氧负离子基-2,10-二硫烷基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7-基}-5-氯-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(光学异构体2，186mg，来自色谱仪的晚期级分)。加入吡啶(1.1mL)，然后加入三氢氟酸三乙胺(0.161mL)，然后加入三乙胺(2.4mL)。在50℃下在密封丙烯管中将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，用水(3.50mL)稀释。加入氯化钙(250mg)在水(3.50mL)中的溶液。在室温下将混浊白色混合物搅拌1小时。使用塑料过滤漏斗通过对混合物进行过滤，用水(3mL×4)洗涤。在减压下浓缩澄清水性滤液，与甲苯一起共沸多次，在真空上干燥10分钟，得到粗残余物。通过C18柱色谱法(水-乙腈/10mM乙酸三乙铵缓冲溶液)纯化粗残余物。在减压下浓缩产物级分，依次与甲苯(×4)一起和与不含内毒素的水(×5)一起共沸。将最终残余物溶解在不含内毒素的水中并且冻干，得到标题产物(光学异构体2，109mg)。MS[M+H]+727.0。
1H NMR(400MHz,氧化氘)δ＝8.10(s,1H),7.89(s,1H),7.86(s,1H),7.55(s,1H),6.30(d,J＝15.9Hz,1H),6.24(d,J＝8.2Hz,1H),5.49-5.27(m,1H),5.07-4.86(m,2H),4.85(d,J＝3.9Hz,1H),4.44(br d,J＝9.0Hz,1H),4.33(br d,J＝14.7Hz,2H),4.28-4.16(m,2H),3.98(br dd,J＝5.0,11.8Hz,1H),3.04(q,J＝7.4Hz,12H),1.12(t,J＝7.3Hz,18H)。31PNMR(162MHz,氧化氘)δ55.12,52.04。19F NMR(376MHz,氧化氘)δ-200.43
实施例27
接头-有效负载1
向6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)-N-[(1S)-1-[[(1S)-2-[4-(羟基甲基)苯氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]胺甲酰基]-2-甲基-丙基]己酰胺(mc-Val-Ala-PAB-OH，Synchem，ElkGrove Village，IL，0.0822mmol，40.0mg)在无水乙腈(19.1mmol，1.00mL，783mg)中的混合物中加入碘化铯(0.0986mmol，25.6mg)和三氟化硼合乙醚(0.0986mmol，0.0125mL，14.0mg)。在室温下将反应物搅拌过夜。搅拌18小时之后，用约10mL DCM稀释混合物并且在垫上过滤。用DCM洗涤固体。浓缩滤液以获得橘色固体。粗产物(mc-Val-Ala-PAB-I)不经过进一步纯化便使用。
将装有(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-16-羟基-2-硫离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-10-醇酸二钠2,10-二氧化物(有效负载1，即“化合物实施方案3a，”0.0106mmol，7.80mg)和6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)-N-[(1S)-1-[[(1S)-2-[4-(碘甲基)苯氨基]-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酰基]-2-甲基-丙基]己酰胺(mc-Val-Ala-PAB-I，0.0208mmol，12.4mg，粗物质)在N,N-二甲基甲酰胺(5.17mmol，0.400mL，378mg)中的溶液的小瓶密封并且加热至60℃。在2小时内，将反应物冷却至室温并且在C18柱上通过色谱法(从20％至60％CH3CN/水+0.1％甲酸的连续梯度)加以纯化，得到白色固体状N-[(2S)-1-{[(2S)-1-{[4-({[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-10,16-二羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-2-基]硫烷基}甲基)苯基]氨基}-1-氧代丙-2-基]氨基}-3-甲基-1-氧代丁-2-基]-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺(5.5mg，45％产率)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.23-8.35(m,2H),8.10(s,1H),7.89-8.02(m,1H),7.84(s,1H),7.52-7.64(m,2H),7.41(br d,J＝8.53Hz,2H),7.22-7.38(m,2H),6.75-6.83(m,2H),6.32-6.43(m,2H),5.71-5.90(m,2H),4.54-4.59(m,2H),4.42-4.51(m,2H),4.07-4.35(m,8H),3.46(br t,J＝7.03Hz,2H),2.27(br t,J＝7.34Hz,2H),2.03-2.15(m,2H),1.53-1.70(m,4H),1.39-1.47(m,3H),1.23-1.37(m,2H),0.92-1.02(m,6H)。LCMS:m/z 1163,1164[M+H]。
实施例28
接头-有效负载2
根据实施例27中的程序，使用2-氨基-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-10,18-二羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基]-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮倍半(三乙胺)盐(有效负载2)代替有效负载1来产生接头-有效负载2。
根据以下方法来制备有效负载2。
2-氨基-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-10,18-二羟基-2,10-氧负离子基-2-硫烷基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮倍半三乙胺盐(光学异构体)
A)膦酸氢(1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(羟基甲基)-2-(2-异丁酰胺基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷酰基)氧)甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-7-基酯
使膦酸氢(1S,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-(羟基甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-7-基酯(700mg)和5'-O-[双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]-3'-O-[叔丁基(二甲基)硅烷基]-2'-O-{(2-氰基乙氧基)[二异丙基氨基]磷烷基}-N-(2-甲基丙酰基)鸟苷酸(2280mg)与无水乙腈一起经受共沸脱水，并且向其中加入无水乙腈(15mL)和无水四氢呋喃(5mL)。向该混合物中加入5-(乙基硫烷基)-2H-四唑(611mg)(其与无水乙腈一起经受共沸脱水)与无水乙腈(10mL)的混合物，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌过夜。向其中加入70％氢过氧化叔丁基(643μL)，并且在室温下将混合物搅拌20分钟。向反应混合物中加入硫代硫酸钠(5920mg)与水(3mL)的混合物，并且在减压下浓缩混合物。向残余物中加入80％乙酸(30mL)，并且在室温下将混合物搅拌20分钟。在减压下浓缩反应混合物，并且通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(980mg)。MS:[M+H]+1030.2
B)2-氨基-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-18-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}-2,10-二羟基-10-氧负离子基-2-硫离子基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基]-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮(光学异构体)
使膦酸氢(1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-5-(羟基甲基)-2-(2-异丁酰胺基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)四氢呋喃-3-基)氧)(2-氰基乙氧基)磷酰基)氧)甲基)-2,5-二氧杂双环[2.2.1]庚-7-基酯(980mg)与无水乙腈和无水吡啶一起经受共沸脱水，并且向其中加入无水吡啶(50mL)。在室温下向混合物中加入2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷2-氧化物(615mg)，并且在室温下在氩气氛下将混合物搅拌1小时。向其中加入水(600μL)和3H-苯并[c][1,2]二硫醇-3-酮(240mg)，并且在室温下将混合物再搅拌30分钟。向反应混合物中加入硫代硫酸钠(1180mg)与水(3mL)的混合物，并且在减压下浓缩混合物。向残余物中加入无水乙腈(15mL)和2-甲基丙-2-胺(5.0mL)，并且在室温下将混合物搅拌1.5小时，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物，并且向所获得的残余物中加入40％甲胺乙醇溶液(30mL)。在室温下在氩气氛下将混合物搅拌过夜，并且在减压下浓缩反应混合物。通过硅胶柱色谱法(甲醇/乙酸乙酯)纯化残余物。通过HPLC(L-column2ODS，50×150mm，流动相：5mM乙酸铵水溶液/乙腈)将所获得的残余物拆分成两种非对映异构体(tR1和tR2，按这个顺序，依据LC/MS，其滞留时间为较短至较长)，得到标题化合物(38mg，tR1)和标题化合物(322mg，tR2)。MS(tR1):[M+H]+817.1。MS(tR2):[M+H]+817.1
C)2-氨基-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2,10,18-三羟基-10-氧负离子基-2-硫离子基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基]-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮倍半三乙胺盐(光学异构体)
向2-氨基-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-18-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}-2,10-二羟基-10-氧负离子基-2-硫离子基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基]-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮(光学异构体)(38mg，tR1)中加入甲醇(3.0mL)和三氢氟酸三乙胺(0.76mL)。浓缩反应混合物以去除甲醇，并且在55℃下将残余物搅拌1小时。将混合物冷却至室温，向其中加入乙氧基(三甲基)硅烷(4.2mL)，并且在室温下将混合物搅拌2小时。在减压下浓缩反应混合物，并且通过C18柱色谱法(乙腈/10mM乙酸三乙铵缓冲溶液)纯化残余物，得到标题化合物(27mg)。1H NMR(400MHz,D2O)δ1.23(13H,t,J＝7.3Hz),3.15(9H,q,J＝7.3Hz),4.04(1H,d,J＝8.3Hz),4.08-4.19(3H,m),4.28(1H,d,J＝12.2Hz),4.37-4.52(2H,m),4.65(1H,d,J＝4.2Hz),4.90(1H,d,J＝4.6Hz),5.36(1H,s),5.55(1H,td,J＝8.5,4.0Hz),5.98(1H,d,J＝8.3Hz),6.16(1H,s),7.94(1H,s),8.21(1H,s),8.25(1H,s)。31P NMR(162MHz,D2O)δ-1.45,53.78。
2-氨基-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-10,18-二羟基-2,10-二氧负离子基-2-硫烷基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基]-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮倍半三乙胺盐(光学异构体；有效负载2)的合成
向2-氨基-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-18-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}-2,10-二羟基-10-氧负离子基-2-硫离子基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-7(12H)-基]-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮(光学异构体)(322mg，tR2)中加入甲醇(3.0mL)和三氢氟酸三乙胺(3.2mL)。浓缩反应混合物以去除甲醇，并且在55℃下将残余物搅拌1小时。将混合物冷却至室温，向其中加入乙氧基(三甲基)硅烷(14mL)，并且在室温下将混合物搅拌2小时。在减压下浓缩反应混合物，并且通过C18柱色谱法(乙腈/10mM乙酸三乙铵缓冲溶液)纯化残余物，得到标题化合物(266mg)。1H NMR(400MHz,D2O)δ1.23(14H,t,J＝7.3Hz),3.15(10H,q,J＝7.3Hz),4.02(1H,d,J＝8.1Hz),4.13-4.24(2H,m),4.27-4.42(4H,m),4.59(1H,d,J＝4.4Hz),5.01(1H,s),5.11(1H,d,J＝4.2Hz),5.61-5.73(1H,m),5.95(1H,d,J＝8.3Hz),6.15(1H,s),7.87(1H,s),8.00(1H,s),8.25(1H,s)。31P NMR(162MHz,D2O)δ-1.93,55.44。
实施例29
一般ADC缀合程序
用适当缓冲液将抗体溶液稀释至所期望的反应浓度。通过加入0.5M tris、25mMEDTA水溶液(pH 8.0)将pH值调节至7。伴随搅拌加入TCEP(2.2当量，5mM水溶液)。在室温下孵育1小时之后，加入5当量接头-有效负载(5mM DMA溶液)。在室温下再轻缓搅拌2小时之后，在3mL spinOUT脱盐柱(G-Bioscience，用含有10mM组氨酸、7.5％蔗糖(w/v)和0.08％聚山梨醇酯20(w/v)的pH 5.2缓冲液预平衡)上将混合物纯化两次，然后缓冲液交换至杜尔贝科氏PBS，并且使用Vivaspin6柱(GE Healthcare)浓缩至1至3mg/mL(如使用标准IgG1消光系数通过紫外吸光度所测定)。然后通过QTOF质谱表征样品的药物-抗体比(DAR)。通过尺寸排阻色谱(SEC)来测定ADC的单体组成。
尺寸排阻色谱(SEC)方案
样品制备
通过向HPLC小瓶中加入HPLC水来制备水空白。裸抗体对照物和ADC样品是获自化学师。如果浓度在5mg/mL以上，则用1×PBS稀释对照物和样品；或如果浓度是5mg/mL或以下，则直接注入。
HPLC系统设定
使用Agilent 1100HPLC系统进行分析。该系统设定为一个泵通道上存在系统洗涤液(5％乙腈/HPLC水)，并且在一不同的泵通道上存在流动相(如以上所描述)。所使用的柱是Tosoh Biosep TSK Gel，G3000SWxl；P/N 8541；250A；5um；7.8mm×300mm。流速设定至1mL/min，并且将每一次运作以100％流动相[100mM磷酸钠、300mM氯化钠pH 6.8、10％乙腈(v/v)]等张20分钟。将DAD设定至280nm。各个对照物、样品和空白的注入体积通常是10uL，但可以取决于紫外吸光度而进行调节。数据分析：在280nm下在适当时间窗口(通常2分钟至10分钟)内对所有峰进行积分。
实施例30
ADC1的制备
根据一般ADC缀合程序进行合成。
抗体：抗体1，抗GCC抗体(5F9)，100uL，在50mM组氨酸和100mM精氨酸的pH 6.0缓冲液中的60mg/mL溶液，受体靶标鸟苷酸环化酶C(GCC)
抗体1重链：
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVFGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEINHRGNTNDNPSLKSRVTISVDTSKNQFALKLSSVTAADTAVYYCARERGYTYGNFDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ.ID No.1)
抗体1轻链：
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSRNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTIGSLQSEDFAVYYCQQYKTWPRTFGQGTNVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ.IDNo.2)
缓冲液：50mM组胺酸和100mM精氨酸，pH 6.0，200uL，最终浓度20mg/mL
接头-有效负载：N-[(2S)-1-{[(2S)-1-{[4-({[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-10,16-二羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-2-基]硫烷基}甲基)苯基]氨基}-1-氧代丙-2-基]氨基}-3-甲基-1-氧代丁-2-基]-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺(接头-有效负载1)
产物ADC：ADC1，产率＝1.9ml，2.5mg/mL(79％)，DAR 3.5，99％单体(即，未聚集)
实施例31
ADC2的制备
根据一般ADC缀合程序进行合成。
抗体：抗体2，针对某些实性瘤(包括肺和乳房)中过度表达的膜锚定蛋白的非GCC靶向抗体，100uL，11.8mg/mL，在25mM乙酸钠中，pH 5.5。
缓冲液：杜尔贝科氏PBS，pH 7.4，200uL，最终浓度4mg/mL
接头-有效负载：N-[(2S)-1-{[(2S)-1-{[4-({[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-7-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-10,16-二羟基-2,10-二氧负离子基八氢-12H-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-2-基]硫烷基}甲基)苯基]氨基}-1-氧代丙-2-基]氨基}-3-甲基-1-氧代丁-2-基]-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺(接头-有效负载1)
产物ADC：ADC2，产率＝0.6ml，1.4mg/mL(70％)，DAR 2.6，99％单体
实施例32
ADC3的制备
根据一般ADC缀合程序进行合成。
抗体：抗体1，33uL，60mg/mL，在50mM组氨酸和100mM精氨酸的pH 6.0缓冲液中
缓冲液：50mM组氨酸和100mM精氨酸，pH 6.0，66uL，抗体溶液的最终浓度20mg/mL
接头-有效负载：N-[(2S)-1-{[(2S)-1-{[4-({[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-7-(2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)-14-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-10,18-二羟基-2,10-二氧负离子基六氢-14H-15,12a-(环氧甲桥)-5,8-甲桥呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧杂二磷杂环十四炔-2(12H)-基]硫烷基}甲基)苯基]氨基}-1-氧代丙-2-基]氨基}-3-甲基-1-氧代丁-2-基]-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺(接头-有效负载2)
产物ADC：ADC3，产率＝1.9ml，1.0mg/mL(95％)，DAR 4.3，98％单体
实施例33
去污溶酶体有效负载释放测定-在体外溶酶体模型中测量来自接头-有效负载系统或ADC的有效负载释放
材料：
缓冲液：含47.9mg/ml磷酸二氢钾(Sigma-Aldrich，产品编号P5379)；6.8mg/ml磷酸氢二钠(Sigma-Aldrich，产品编号S0876)；1.7mg/ml乙二胺四乙酸(Sigma-Aldrich，产品编号ED4SS)的纯化水。使用1N HCl或1N KOH将pH值调节至6.0。
购自XenoTech的大鼠肝脏去污溶酶体
接头-有效负载(10mM DMSO)
ADC(1-40uM，在储存缓冲液中，供制造使用)。
程序：
为了评估来自接头-有效负载化合物的有效负载释放，由接头-有效负载化合物的10mM储备溶液制备120.95uM DMSO工作溶液。然后，将120.95uM DMSO工作溶液在含有22.4％大鼠肝脏去污溶酶体的225uL去污溶酶体缓冲溶液中稀释至1μM。
为了评估ADC分子，用大鼠肝脏去污溶酶体在去污溶酶体缓冲液中的混合物223.1uL稀释1.86uL ADC溶液。
在37℃下将如此制备的溶液孵育24小时。在0.5小时、1小时、3小时、5小时和24小时取出40uL等分试样，并且在96孔平板中用160uL 0.1％甲酸的甲醇溶液进行稀释，储存在-80℃冷冻器中直到实验完毕。收集最后一个时间点之后，将加入有作为内标物溶液的150nM磺胺丁脲的新鲜200uL 0.1％甲酸的甲醇溶液加入至样品中。将样品充分混合并且在4000g下离心10分钟，并且提交96孔平板以便通过LC/MS/MS来分析有效负载浓度。
LC/MS/MS系統：
将5uL样品注入具有Waters Xselect C18CSH 3.5u 2.1mm内径×30mm长度柱的LC/MS/MS中。流动相水性溶剂含有含0.1％甲酸的水，并且流动相有机溶剂含有含0.1％甲酸的5％水和95％乙腈。以3分钟梯度以1.5mL/min流速运作样品。起初，仪器运作100％水性流动相溶剂0.5分钟，然后它在接下来的1.5分钟内增至100％有机溶剂。系统将保持100％有机溶剂再持续0.5分钟，然后它将在接下来的0.5分钟内变成100％水相溶剂。
分析：
为了监控和计算接头-有效负载和有效负载从ADC的释放，对峰面积或浓度对比时间曲线进行绘图。将通过使用Excel-Fit程序来分析数据，以计算由测试分子形成有效负载的线性范围速率和t1/2。
去污溶酶体有效负载释放数据：
如图1、图2和图3中所示，当进行以上方案时，ADC1、ADC2和ADC3释放预期有效负载。
磷酸化IRF3测定方案
将经过工程化以表达mAb抗体1(ADC1和ADC3)和抗体2(ADC2)的肿瘤相关细胞表面靶标的HEK293细胞以及不表达靶标的HEK293细胞(HEK293-Vect)以1.5×105个细胞/孔(500μL/孔)种在聚D-赖氨酸涂布的24孔平板(Corning)中，并且培养过夜。在过夜血清剥夺之后，用不同浓度的ADC将细胞处理6小时，然后溶解在含蛋白酶和磷酸酶抑制剂(ThermoFisher Scientific)的RIPA缓冲液(ThermoFisher Scientific)中。针对磷酸化IRF3(CST)和IRF3(BD Biosciences)对细胞溶解物进行蛋白质印迹分析。将磷酸化IRF3的水平相对于其总IRF3进行正规化。
磷酸化IRF3测定结果
如图4、图5和图6中所示，表达ADC1、ADC2和ADC3的表面受体靶标的HEK293细胞分别在用ADC1、ADC2和ADC3进行处理时表现出STING途径标记物磷酸化IRF3(pIRF3)存在预期增加。相反，在不表达相应表面受体靶标的载体HEK293细胞中，pIRF3应答在ADC处理后未上调。
实施例34
所选环状二核苷酸的药理学剖析
所选环状二核苷酸的药理学剖析示于表6中。
THP-1Dual Lucia报告基因测定方案
通过在ISG54(干扰素刺激的基因)最小启动子连同五个干扰素(IFN)刺激的应答元件的控制下稳定整合Lucia荧光素酶基因(一种分泌荧光素酶报告基因)而由人THP-1单核细胞细胞系获得THP1-DualTM细胞(InvivoGen，编号thpd-nfis)。在实验当天，将细胞以7500个细胞/25μL/孔的密度接种至黑色384孔平板(Corning356697)的生长培养基(RPMI1640，2mM L-谷酰胺酸、25mM HEPES、10％热灭活胎牛血清、100μg/mL NormocinTM、100U/mL-100μg/mL青霉素-链霉素、10μg/mL杀稻瘟菌素和100μg/mL Zeocin)中。给与细胞平板以62.5nL测试化合物，然后在37℃下孵育20小时。在孵育结束时，加入15μL/孔的QUANTI-LucTM(InvivoGen，编号rep-qlc1)，并且立即使用LeadSeeker测量荧光。
下游信号传导途径激活(TBK1和IRF3)的蛋白质印迹分析方案
用DMSO或所指出的浓度的实施例14将1.5×106个THP-1-Dual细胞(Invivogen，目录号thpd-nfis)处理3小时。刺激之后，在冰上收集细胞，在800RCF下离心5分钟，并且在冰冷PBS中洗涤一次。
将细胞团块溶解在含有1％Triton X-100整细胞溶解缓冲液(10％甘油、20mMTris-HCl pH 7.5、150mM NaCl、1μM EDTA和1μM DTT)的蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合液(分别是Sigma编号P8340和CalBiochem编号524629)中。通过在16,000RCF下离心10分钟来清除细胞溶解物的不溶性碎屑。通过Bradford测定使用BSA标准物来测定溶解物的蛋白质浓度。
使溶解物在含有DTT作为还原剂的NuPAGETMLDS样品缓冲液(4×，目录号NP0008)中变性。在NuPAGETM4％至12％Bis-Tris凝胶上在MES/SDS运作缓冲液中拆分已变性的溶解物，并且使用半干式印迹法转移至PVDF膜。在4℃下，使用得自于Cell Signaling Technology的抗体(分别是编号5483、编号4947和编号5174)针对磷酸化TBK1S172、磷酸化IRF3S396和GAPDH对膜进行探测过夜。
在过夜一级探测之后，对膜进行深度洗涤，然后在室温下用含二级抗体(Alexa680山羊抗兔IgG，Life Technologies编号A21109)的阻断缓冲液(目录号927-400000)探测。在深度洗涤之后，使用LI-COR ODYSSEY CLx使膜显色。
对磷酸化TBK1和磷酸化IRF3谱带的相对强度进行定量，并且相对于GAPDH的水平进行正规化。将经GAPDH正规化的磷酸化TBK1和磷酸化IRF3值图示为相对于未刺激(DMSO)对照物的强度倍数。参见图7。
人血浆稳定性测定方案
在37℃下在肝素化人血浆中将化合物孵育0小时、1小时、2小时、4小时、8小时和24小时，并且通过LC/MS/MS方法来测量化合物浓度变化。假定浓度呈指数性降低，基于拟合曲线，如下计算消除速率常数(＝k(/h))：时间x的浓度＝初始浓度*exp(-k*x)。
同基因肿瘤模型检验
在小鼠同基因肿瘤模型中测试实施例14和实施例3a。当静脉内施用实施例14和实施例3a(每3天，3次)时，观察抗肿瘤效果。关于在结肠癌CT-26同基因小鼠模型中的抗肿瘤效果，参见图8和图9；并且关于在结肠癌B16F10同基因小鼠模型中的抗肿瘤效果，参见图10和图11。
抗肿瘤效果评估方案
将8×104个B16F10和2×105个CT-26小鼠肿瘤细胞经皮下植入雌性C57BL/6小鼠(B16F10)和Balb/C小鼠(CT-26)的胁部(n＝7只/组)。一旦肿瘤体积已经达到100mm3(第0天)，便将媒剂(1×PBS)、化合物实施例3a(30mg/kg)或实施例14(1.0mg/kg)经静脉内施用(最终体积100μL)至携带肿瘤的小鼠。每3天给与媒剂、实施例3a或实施例14，总计3个剂量(q3dx3)。每周三次分别使用游标卡尺和梅特勒天平来获取肿瘤和体重测量值。通过沿肿瘤短轴测量的宽度(‘W’)的平方乘以沿肿瘤短轴测量的长度(‘L’)的二分之一来确定肿瘤体积(V＝W2×0.5L)。
实施例的化合物示于下表中。表中的MS意指实际测量值。化合物实施例9是用与实施例5的方法相同的方式合成。
表1-1
表1-2
表1-3
表1-4
表1-5
实施例35
STING结合测试
使用测定缓冲液(含0.01％无脂肪酸牛血清白蛋白(Wako Pure ChemicalIndustries,Ltd.)的杜尔贝科氏磷酸盐缓冲生理盐水(Wako Pure Chemical Industries,Ltd.))将测试化合物(2μL)、链霉亲和素-铽(4μL，Cisbio)、经荧光素标记的2',3'-cGAMP(c[G(2',5')p-2'-Fluo-AHC-A(3',5')p])(Biolog，Germany)和生物素化STING蛋白(2μL，野生型，WT)混合，并且在室温下将混合物静置3小时(最终浓度：链霉亲和素-铽：以1/1000进行稀释；FITC-cGAMP：1μM；生物素化STING蛋白：100nM)。通过EnVision(PerkinElmer，Waltham，MA，US)在520nm和486nm的波长下测量时间分辨荧光共振能量传递(TR-FRET)。使用520nm下的计数除以486nm下的计数的比值来计算测试化合物对野生型STING蛋白与2',3'-cGAMP结合的抑制率。结果示于表2和表2A中。
通过以下方法制备以上提到的生物素化STING蛋白(野生型(WT))。
生物素化野生型STING蛋白的制备方法
ECOS(商标名)胜任大肠杆菌BL21(DE3)购自Nippon Gene Co.,Ltd.。氨比西林(ampicillin)、卡那霉素(kanamycin)、NaCl、甘油、异丙基硫代半乳糖苷、(+)-生物素、咪唑、重组SEM核酸酶和BCA蛋白质测定试剂盒购自Wako Pure Chemical Industries,Ltd。细菌用胰化蛋白和细菌用酵母提取物购自Difco Laboratories，tris缓冲生理盐水(TBS)片剂pH 7.6购自Takara Bio Inc.，溶菌酶(蛋清)6×晶体购自Seikagaku Corporation，并且cOmplet(商标名)和无EDTA蛋白酶抑制剂混合液购自Roche。使用由QIAGEN制造的Ni-NTA超流滤筒，并且使用由GE Healthcare制造的HiLoad 26/60Superdex 200pg。
向具有改变的多克隆位点的pRSF1b(Novagen)中插入大肠杆菌BirA，并且转染至ECOS JM109，借以构建pRH8/FLAG-BirA。将pET21HH/His-Avi-SUMO-FLAG-hTMEM173(139-379)(H232R)(其是通过实施例36中所提到的方法构建)和用于Avi标签生物素化的pRH8/FLAG-BirA同时转化至ECO(商标名)胜任大肠杆菌BL21(DE3)以制备表达His-Avi-SUMO-FLAG-hSTING(139-379，H232R)的细胞系。将表达细胞系加入至含有氨比西林(100μg/L)和卡那霉素(50μg/L)的LB培养基(10g/L胰化蛋白、5g/L酵母提取物、5g/L NaCl)，在30℃下预培养混合物，并且扩增至含有相同抗生素的TB培养基(12g/L胰化蛋白、24g/L酵母提取物、4mL/L甘油、2.3g/L KH2PO4、12.5g/L K2HPO4)，并且在37℃下培养混合物。当培养物溶液的混浊度达到500KU时，将培养物温度降至16℃，向其中加入0.1mM异丙基硫代半乳糖苷和50μM(+)-生物素，并且将混合物再培养16小时。
对培养物溶液进行离心，使所获得的真菌体悬浮在溶解缓冲液(50mM TrisHCl、150mM NaCl、20mM咪唑、1mg/mL溶菌酶、5U/mL重组SEM核酸酶，完全不含EDTA，pH 7.6)中，并且通过超声波破碎来提取蛋白质。向其中加入试剂，以便将提取物的盐浓度调节至300mMNaCl，并且通过离心来收集上清液。使所获得的上清液通过经洗涤缓冲液(50mM TrisHCl、300mM NaCl、20mM咪唑，pH 7.6)平衡的NiNTA超流滤筒，用洗涤缓冲液洗涤滤筒，并且用洗脱缓冲液(50mM TrisHCl、300mM NaCl、250mM咪唑，pH 7.6)洗脱。使洗脱液通过经储存缓冲液(50mM TrisHCl、150mM NaCl，pH 7.6)平衡的HiLoad 26/60Superdex 200pg柱，并且收集呈生物素化His-Avi-SUMO-FLAG-hSTING(139-379，H232R)形式的级分。使用BCA蛋白质测定试剂盒测量蛋白质浓度，并且将级分冷冻保存在-80℃下直到使用。
表2：STING结合测试
实施例编号 测试化合物(30μM)的结合抑制率
1 76％
2 79％
3 64％
3a 93％
5 71％
8 90％
13 68％
14 89％
15 89％
16 91％
17 86％
18 94％
19 93％
20 98％
表2A：STING结合测试
如从以上提到的结果显而易知，本公开的化合物抑制野生型STING蛋白与天然配体2',3'-cGAMP的结合，即，本公开的化合物结合至野生型STING蛋白。
实施例36
报告基因测定
多种质粒的制备
(i)人TMEM173等的表达质粒构建
使用人TMEM173cDNA克隆(GeneCopoeia)作为模板，通过重叠延伸PCR用于引入突变来获得大肠杆菌中的人STING表达质粒(在本说明书中，有时称为人TMEM173)。首先，使用两种引物(5'-CCTGGCCCCAGCTGAGATCTCTG-3'(C-hTMEM(139aa)-F)(SEQ.ID No.3)和5'-GTAAACCCGATCCTTGATGCCAGCACGGTCACCGGTC-3'(hTMEM173(H232R)-R))(SEQ.ID No.4)以及两种引物(5'-CTGCCCCAGCAGACCGGTGACCGTGCTGGCATCAAG-3'(hTMEM173(H232R)-F)(SEQ.IDNo.5)和5'-ATAATAGCGGCCGCTCAAGAGAAATCCGTGCGGAGAGG-3'(hTMEM173-st-Not-R)(SEQ.IDNo.6)进行PCR。使用PrimeStar MAX DNA聚合酶(Takara Bio Inc.)进行各个PCR，依次(1)在98℃下持续1分钟；(2)在98℃下持续10秒并且在72℃下持续10秒，重复25次；以及(3)在72℃下持续1分钟。然后，使用所获得的区段作为模板并且使用两种引物(C-hTMEM(139aa)-F和hTMEM173-st-Not-R)来进行PCR。使用PrimeStar GXL DNA聚合酶(Takara Bio Inc.)进行PCR，依次(1)在98℃下持续1分钟；(2)在98℃下持续10秒并且在72℃下持续1.5分钟，重复35次；以及(3)在72℃下持续1分钟。用Not I(Takara Bio Inc.)切割所获得的区段，使用Ligation High(Toyobo Co.,Ltd)插入His-Avi-SUMO标签连接至pET21a的载体(Novagen)的Stu I/Not I位点中，并且转染至ECOS JM109(Nippon Gene Co.,Ltd.)，借以构建pET21HH/His-Avi-SUMO-hTMEM173(139-379)(H232R)。
其次，使用这种质粒作为模板并且使用两种引物(5'-CGACTACAAGGACGACGATGACAAGGGATCCCTGGCCCCAG CTGAGATCTCTG-3'(C-FLAG-Bam-hTMEM173(139aa)-F)(SEQ.ID No.7)和hTMEM173-st-Not-R)来进行PCR。使用PrimeStar MAX DNA聚合酶进行PCR，依次(1)在98℃下持续1分钟；(2)在98℃下持续10秒并且在72℃下持续10秒，重复25次；以及(3)在72℃下持续1分钟。如以上所提到，用Not I切割所获得的区段，使用Ligation High插入至连接有His-Avi-SUMO标签的pET21a的Stu I/Not I位点中，并且转染至ECOS JM109，借以构建pET21HH/His-Avi-SUMO-FLAG-hTMEM173(139-379)(H232R)。
如以上所提到，使用人TMEM173cDNA克隆作为模板，通过重叠延伸PCR用于引入突变来获得用于报告因子测定的表达质粒。首先，使用两种引物(5'-GTACCCATACGATGTTCCAGATTACGCTGGATCCGCCACCAT GCCCCACTCCAGCCTGCATC-3'(HA-Bam-ko-hTMEM173-F)(SEQ.IDNo.8)和hTMEM173(H232R)-R)以及两种引物(hTMEM173(H232R)-F和hTMEM173-st-Not-R)来进行PCR。使用PrimeStar MAX DNA聚合酶进行各个PCR，依次(1)在98℃下持续1分钟；(2)在98℃下持续10秒并且在72℃下持续10秒，重复25次；以及(3)在72℃下持续1分钟。然后，使用所获得的区段作为模板并且使用两种引物(5'-ATAATATCTAGAATTCGCCACCATGTACCCATACGATGTTCCA GATTACGC-3'(Xba-Eco-ko-HA-F)(SEQ.ID No.9)和hTMEM173-st-Not-R)来进行PCR。使用PrimeStar GXL DNA聚合酶进行PCR，依次(1)在98℃下持续1分钟；(2)在98℃下持续10秒、在65℃下持续5秒并且在72℃下持续1.5分钟，重复35次；以及(3)在72℃下持续1分钟。用Xba I(Takara Bio Inc.)和Not I切割所获得的区段，使用Ligation High插入至多克隆位点被插入pcDNA3.3中的Zeocin抗性载体(Invitrogen)的Nhe I/Not I位点中，并且转染至ECOS JM109，借以构建pcDNA3.3zeo/HA-hTMEM173(H232R)。
使用人TMEM173cDNA克隆(GeneCopoeia)作为模板并且使用两种引物(5'-TTCCAGATTACGCTGGATCCGCCACCATGCCCCACTCCAGCC TGCATC-3'(Bam-ko-hTEME173v1-F)(SEQ.IDNo.10)和5'-CCTCTAGACTCGAGCGGCCGCTCAAGAGAAATCCGTGCGGA GAGG-3'(hTMEM173-st-Not-R2)(SEQ.ID No.11)，通过PCR来构建表达人突变型TMEM173(R232H)的质粒。使用PrimeStarMAX DNA聚合酶(Takara Bio Inc.)进行PCR，依次(1)在98℃下持续1分钟；(2)在98℃下持续10秒并且在68℃下持续10秒，重复30次；以及(3)在72℃下持续1分钟。使用GibsonAssembly(NEB)将所获得的区段插入至HA标签被连接至pcDNA3.1(+)的载体(ThermoFischer)的Bam HI/Not I位点中，并且转染至ECOS JM109(Nippon Gene Co.,Ltd.)，借以构建pcDNA3.1HA/HA-hTMEM173v1。
使用pcDNA3.3zeo/HA-hTMEM173(H232R)质粒作为模板并且使用两种引物(5'-GGAGACCCAAGCTGGCTAGCGCCACCATGTACCCATACGATG-3'(Nhe-ko-HA-F)(SEQ.ID No.12)和5'-CCTCTAGACTCGAGCGGCCGCTCAAGAGAAATCCGTGCGGA GAGG-3'(hTMEM173-st-Not-R2)(SEQ.IDNo.11)，通过PCR来构建表达人野生型TMEM173(H232R)的质粒。使用PrimeStar MAX DNA聚合酶进行PCR，依次(1)在98℃下持续1分钟；(2)在98℃下持续10秒并且在72℃下持续35秒，重复30次；以及(3)在72℃下持续1分钟。使用Gibson Assembly将所获得的区段插入至pcDNA3.1zeo(ThermoFischer)的Nhe I/Not I位点中，并且转染至ECOS JM109，借以构建pcDNA3.1zeo/HA-hTMEM173(H232R)。
(ii)荧火虫荧光素酶表达质粒构建
通过将CMV启动子插入至报告因子载体中来构建荧火虫荧光素酶表达质粒。使用pcDNA3.1(+)载体(Invitrogen)作为模板并且使用两种引物(5'-ATAATAAGATCTGTTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAG-3'(CMVPro-BglII-F)(SEQ.ID No.13)和5'-ATAATAAAGCTTGAGCTCTGCTTATATAGACCTCCC-3'(CMVPro-HindIII-R)(SEQ.ID No.14)来进行PCR。使用PrimeStar MAX DNA聚合酶进行PCR，依次(1)在98℃下持续1分钟；(2)在98℃下持续10秒并且在68℃下持续3秒，重复25次；以及(3)在72℃下持续1分钟。用Bgl II和Hind III(TakaraBio Inc.)切割所获得的区段，使用Ligation High(Toyobo Co.,Ltd)插入至pGL4.17(Promega Corporation)的Bgl II/Hind III位点中，并且转染至ECOS JM109，借以构建pGL4.17/CMV Pro。
报告基因测定(1)
构建经pNL[NLucP/ISRE/Hygro]载体(Promega，Fitchburg，WI，US)转染的稳定表达293T细胞系。使用FugeneHD(Promega，Fitchburg，WI，US)将pcDNA3.3zeo/HA-hTMEM173(H232R)转染至所述细胞，并且使用含有10％胎牛血清的杜尔贝科氏改良伊格尔氏培养基(DMEM)(Wako Pure Chemical Industries,Ltd.)将所述细胞培养一天。收集细胞，并且利用CELLBANKER 1(Nippon Zenyaku Kogyo Co.,Ltd.)冷冻保存。
在测定当天，将经测定缓冲液(含0.1％无脂肪酸牛血清白蛋白的DMEM)稀释的测试化合物以10μL/孔加入至白色384孔平板(Corning，NY，US)中。将冷冻保存的细胞解冻，并且将悬浮在测定缓冲液中的细胞以10μL/孔(10000个细胞/孔)种至其中。在37℃下在5％CO2条件下将细胞培养20小时，并且向其中加入NanoGlo试剂(Promega，Fitchburg，WI，US)溶液(20μL)。孵育5分钟之后，使用EnVision(PerkinElmer，Waltham，MA，US)测量荧光水平。当经2',3'-cGAMP(30μM)处理的细胞的计数被视为100％，并且经溶剂处理的细胞的计数被视为0％时，计算各个测试化合物的活性水平。结果示于表3中。
表3：STING激动活性测试
实施例编号 测试化合物的活性水平(30μM)
1 77％
2 77％
3 76％
3a 107％
5 100％
14 71％
15 81％
16 123％
17 99％
18 81％
20 125％
如从以上提到的结果显而易知，本公开的化合物对野生型STING具有激动活性。
报告基因测定(2)
构建经pNL[NLucP/ISRE/Hygro]载体(Promega，Fitchburg，WI，US)转染的稳定表达293T细胞系。将通过使用FugeneHD(Promega，Fitchburg，WI，US)将pcDNA3.1zeo/HA-hTMEM173(H232R)或pcDNA3.1HA/HA-hTMEM173v1连同萤火虫荧光素酶表达质粒一起转染至所述细胞而制备的悬浮液加入至384孔平板(Corning，NY，US)，并且将所述细胞培养两天。取出培养物溶液，并且以15μL/孔向其中加入经测定缓冲液(50mM HEPES pH 7.0、100mMKCl、3mM MgCl2、85mM蔗糖、0.1mM DTT、0.2％BSA、1mM ATP、0.1mM GTP、10μg/ml毛地黄皂苷)稀释的测试化合物。在37℃下在5％CO2条件下将细胞培养30分钟，并且取出测定缓冲液。以20μL/孔向其中加入含10％胎牛血清的杜尔贝科氏改良伊格尔氏培养基(DMEM)(WakoPure Chemical Industries,Ltd.)，并且在37℃下在5％CO2条件下将细胞培养4小时。使用EnVision(PerkinElmer，Waltham，MA，US)根据Nano-Glo Dual-Luciferase报告因子测定系统(Promega，Fitchburg，WI，US)方案来测量源自于萤火虫荧光素酶和NanoLuc荧光素酶每一者的荧光信号。将NanoLuc荧光素酶的计数除以萤火虫荧光素酶的计数的比值用于计算。当经2',3'-cGAMP(30μM)处理的细胞的比率被视为100％，并且经溶剂处理的细胞的比率被视为0％时，计算各个测试化合物的活性水平。结果示于表4中。
表4：STING激动活性测试
如从以上提到的结果显而易知，本公开的化合物对野生型STING和突变型STING(R232H)具有激动活性。
实施例37
FaDu细胞中的磷酸化IRF3蛋白检测
接种人喉癌细胞系FaDu细胞(ATCC)，接种之后一天将培养基替换为无血清培养基。替换之后，将细胞培养一天，并且向细胞中加入天然配体2',3'-cGAMP(最终浓度：30μM)和测试化合物(最终浓度：15μM或30μM)。加入之后6小时，用PBS洗涤细胞，制备细胞提取物，并且通过ELISA方法或蛋白质印迹方法检测磷酸化IRF3蛋白。当以30μM的最终浓度加入天然配体2',3'-cGAMP的样品中的值被视为100％时，计算测试化合物的IRF3蛋白磷酸化活性。结果示于表5中。
表5：IRF3蛋白磷酸化测试
实施例编号 测试化合物的活性水平
1 468.8％，在30μM
2 88.7％，在30μM
3 464.6％，在30μM
5 117.4％，在30μM
如从以上所提到的结果显而易知，本公开的化合物促进IRF3磷酸化，这是STING的下游信号，如在天然配体2',3'-cGAMP中。即，本公开的化合物激活STING的下游信号，从而作为STING激动剂。
实施例38
配制实施例
举例来说，可以基于以下组成来制造含有本公开的化合物作为活性成分的药物。
1.胶囊
将(1)、(2)、(3)和5mg(4)掺合并且进行造粒。向其中加入其余5mg(4)，并且将总量填充在明胶胶囊中。
2.片剂
将(1)、(2)、(3)、20mg(4)和2.5mg(5)掺合并且进行造粒。向其中加入其余10mg(4)和其余2.5mg(5)，并且将混合物压制成形，以得到片剂。
行业适用性
本公开的化合物可能具有STING激动活性。因此，本公开的化合物可以用作STING激动剂，并且可能可用作预防或治疗STING相关疾病，包括癌症等的剂。
应理解，上述实施方案和示例不希望在任何方面限制本公开的范围，而且本文呈现的技术方案意在涵盖所有实施方案和示例，无论是否在本文明确地呈现。
本文引用的所有专利、专利申请和公开全部以引用的方式完全并入。
序列表
<110> 武田药品工业有限公司
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望月伦代
B·S·弗里兹
俵石泰辅
和田康史
P·D·格林斯潘
<120> 环状二核苷酸
<130> 3817.040PC03
<150> US 62/589,300
<151> 2017-11-21
<150> JP 2017-107216
<151> 2017-05-30
<150> JP 2016-234553
<151> 2016-12-01
<160> 14
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体1重链
<400> 1
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Phe Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn His Arg Gly Asn Thr Asn Asp Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ala Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Glu Arg Gly Tyr Thr Tyr Gly Asn Phe Asp His Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 2
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体1轻链
<400> 2
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Gly Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Lys Thr Trp Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> C-hTMEM(139aa)-F引物
<400> 3
cctggcccca gctgagatct ctg 23
<210> 4
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hTMEM173(H232R)-R引物
<400> 4
gtaaacccga tccttgatgc cagcacggtc accggtc 37
<210> 5
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hTMEM173(H232R)-F引物
<400> 5
ctgccccagc agaccggtga ccgtgctggc atcaag 36
<210> 6
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hTMEM173-st-Not-R引物
<400> 6
ataatagcgg ccgctcaaga gaaatccgtg cggagagg 38
<210> 7
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> C-FLAG-Bam-hTMEM173(139aa)-F引物
<400> 7
cgactacaag gacgacgatg acaagggatc cctggcccca gctgagatct ctg 53
<210> 8
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> HA-Bam-ko-hTMEM173-F引物
<400> 8
gtacccatac gatgttccag attacgctgg atccgccacc atgccccact ccagcctgca 60
tc 62
<210> 9
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> Xba-Eco-ko-HA-F引物
<400> 9
ataatatcta gaattcgcca ccatgtaccc atacgatgtt ccagattacg c 51
<210> 10
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> Bam-ko-hTEME173v1-F引物
<400> 10
ttccagatta cgctggatcc gccaccatgc cccactccag cctgcatc 48
<210> 11
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hTMEM173-st-Not-R2引物
<400> 11
cctctagact cgagcggccg ctcaagagaa atccgtgcgg agagg 45
<210> 12
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> Nhe-ko-HA-F引物
<400> 12
ggagacccaa gctggctagc gccaccatgt acccatacga tg 42
<210> 13
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CMVPro-BglII-F引物
<400> 13
ataataagat ctgttgacat tgattattga ctagttatta atag 44
<210> 14
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CMVPro-HindIII-R引物
<400> 14
ataataaagc ttgagctctg cttatataga cctccc 36

Claims (201)

1.一种化合物，其具有式(I)：
或其药学上可接受的盐，其中：
由式(A-1)表示的部分结构：
是由式(IIA)或式(IIB)表示的部分结构：
R1和R2各自独立地为羟基或卤素原子；
B1是由式(B1-A)或式(B1-B)表示的基团：
R13、R14、R15、R16和R17各自独立地为氢原子或取代基；
Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16各自独立地为N或CR1a；
Z11、Z12、Z13、Z14、Z15和Z16各自独立地为N或C；
R1a是氢原子或取代基；
B2是由式(B2-A)或式(B2-B)表示的基团：
R23、R24、R25、R26和R27各自独立地为氢原子或取代基；
Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26各自独立地为N或CR2a；
Z21、Z22、Z23、Z24、Z25和Z26各自独立地为N或C；
R2a是氢原子或取代基；
X1和X2各自独立地为氧原子或硫原子；以及
Q1、Q2、Q3和Q4各自独立地为氧原子或硫原子，
限制条件是：
B1或B2中至少一个是
其中：
R18是氢或C1-6烷基；以及
R19是卤素原子。
2.如权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R19是氟或氯。
3.如权利要求1或2所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其具有式(X)：
4.如权利要求1或2所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其具有式(XI)：
5.如权利要求1至4中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R1是羟基。
6.如权利要求1至4中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R1是氟原子。
7.如权利要求1至3、5或6中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R2是羟基。
8.如权利要求1至3、5或6中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R2是氟原子。
9.如权利要求1至8中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q4是硫原子。
10.如权利要求1至9中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q2是氧原子。
11.如权利要求1至9中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q2是硫原子。
12.如权利要求1至3或5至11中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其具有式(XII)：
13.如权利要求1、2、4至6或9至11中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其具有式(XIII)：
14.如权利要求1至13中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B1是：
15.如权利要求1至13中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B2是：
16.如权利要求2至15中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R19是氟原子。
17.如权利要求1至16中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R18是氢。
18.如权利要求1至16中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R18是甲基。
19.如权利要求14或16至18中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B2是选自由以下组成的组：
所述基团各自任选地且独立地在：
(i)任何可利用碳原子处经卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或氨基取代；和/或
(ii)任何可利用氮原子处经C1-6烷基取代。
20.如权利要求19所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B2是选自由以下组成的组：
21.如权利要求20所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B2是选自由以下组成的组：
22.如权利要求21所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B2是选自由以下组成的组：
23.如权利要求15至18中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B1是选自由以下组成的组：
所述基团各自任选地且独立地在：
(i)任何可利用碳原子处经卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或氨基取代；和/或
(ii)任何可利用氮原子处经C1-6烷基取代。
24.如权利要求23所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B1是选自由以下组成的组：
25.如权利要求24所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B1是选自由以下组成的组：
26.如权利要求25所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B1是选自由以下组成的组：
27.如权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其是选自由以下组成的组：
28.如权利要求27所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其是选自由以下组成的组：
29.如权利要求27所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其是选自由以下组成的组：
30.如权利要求1至29中任一项所述的化合物，其中所述药学上可接受的盐是三乙胺盐或钠盐。
31.一种药物组合物，其包含如权利要求1至30中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。
32.一种化合物，其具有式(XIV)：
(CD-L)n-A(XIV)，
或其药学上可接受的盐，其中：
CD是由式(XX)至式(XXIX)中的任一个表示的基团：
R1和R2各自独立地为羟基、氢、氨基或卤素原子；
B3和B4独立地为任选地取代的5元至14元芳香杂环基团；
X1和X2各自独立地为氧原子、CH2或硫原子；
Q1、Q2、Q3和Q4各自独立地为氧原子或硫原子；
L是接头；
A是抗体、抗体片段或抗原结合片段；以及
n是1至10。
33.如权利要求32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R1和R2各自独立地为羟基或卤素原子。
34.如权利要求32或33所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中X1和X2各自独立地为氧原子或硫原子。
35.如权利要求32至34中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q1和Q3是氧原子。
36.如权利要求32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XX-A)表示的基团：
37.如权利要求32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXI-A)表示的基团：
38.如权利要求32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXII-A)表示的基团：
39.如权利要求32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXIII-A)表示的基团：
40.如权利要求32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXIV-A)表示的基团：
41.如权利要求32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXV-A)表示的基团：
42.如权利要求32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXVI-A)表示的基团：
43.如权利要求32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXVII-A)表示的基团：
44.如权利要求32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXVIII-A)表示的基团：
45.如权利要求32所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXIX-A)表示的基团：
46.如权利要求32至45中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
L是-X3-T-Z-Q-；
X3是-(CH2)o-、
o是1、2或3；或
X3不存在；
T是肽或不存在；
Z是间隔基；
Q是异双官能团或异三官能团。
47.如权利要求46所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其具有式(XXX)：
48.如权利要求46所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其具有式(XXXI)：
49.如权利要求46至48中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X3是
T是以及
R10a和R10b是独立地选自由以下组成的组：氢和任选地取代的C1-6烷基。
50.如权利要求49所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X3是
51.如权利要求46至50中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
Z是或-(CH2CH2O)s-；
m是1、2、3、4、5或6；以及
s是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
52.如权利要求46至48中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X3是-CH2-；
Z是以及
p是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
53.如权利要求46至48中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X3是-CH2CH2-；
Z是
q是1、2、3、4、5或6；以及
r是1、2、3、4、5或6。
54.如权利要求46至53中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q是选自由以下组成的组的异双官能团：
R29是氢或C1-6烷基；
R30a和R30b是独立地选自由以下组成的组：氢、C1-6烷基、卤代、-C(＝O)OR29、-NH2、C1-6烷氧基、-CN、-NO2和-OH；
R31a和R31b是独立地选自由以下组成的组：氢、C1-6烷基、卤代、-C(＝O)OR29、-NH2、-N(CH3)2、C1-6烷氧基、-CN、-NO2和-OH；以及
*指示与连接至所述抗体的任何可利用碳原子、氮原子、氧原子或硫原子的连接点。
55.如权利要求51所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其具有式(XXXII)：
其中：
R10a和R10b独立地为C1-3烷基；以及
m是2、3、4或5。
56.如权利要求52所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其具有式(XXXIII)：
其中p是4、5或6。
57.如权利要求53所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其具有式(XXXIV)：
其中：
q是1、2或3；以及
r是1、2或3。
58.如权利要求32至57中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中n是2至8。
59.如权利要求32至58中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3和B4独立地为任选地取代的8元至14元稠合双环芳香杂环。
60.如权利要求59所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
B3是由式(B3-A)或式(B3-B)表示的基团：
R13、R14、R15、R16和R17各自独立地为氢原子或取代基；
Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16各自独立地为N或CR1a；
Z11、Z12、Z13、Z14、Z15和Z16各自独立地为N或C；
R1a是氢原子或取代基；
B4是由式(B4-A)或式(B4-B)表示的基团：
R23、R24、R25、R26和R27各自独立地为氢原子或取代基；
Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26各自独立地为N或CR2a；
Z21、Z22、Z23、Z24、Z25和Z26各自独立地为N或C；
R2a是氢原子或取代基。
61.如权利要求32至60中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3或B4中至少一个是：
R18是氢或C1-6烷基；以及
R19是卤素原子。
62.如权利要求61所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是：
63.如权利要求61所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是：
64.如权利要求61至63中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R19是氟原子。
65.如权利要求61至64中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R18是氢。
66.如权利要求61至64中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R18是甲基。
67.如权利要求62或64至66中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
所述基团各自任选地且独立地在：
(i)任何可利用碳原子处经卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或氨基取代；和/或
(ii)任何可利用氮原子处经C1-6烷基取代。
68.如权利要求67所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
69.如权利要求68所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
70.如权利要求69所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
71.如权利要求63至66中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
所述基团各自任选地且独立地在：
(i)任何可利用碳原子处经卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或氨基取代；和/或
(ii)任何可利用氮原子处经C1-6烷基取代。
72.如权利要求71所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
73.如权利要求72所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
74.如权利要求73所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
75.如权利要求32至39、44或46至74中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q2是氧原子。
76.如权利要求32至39、44或46至74中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q2是硫原子。
77.如权利要求32至35、40至43、45、46、49至54或58至74中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q4是氧原子。
78.如权利要求32至35、40至43、45、46、49至54或58至74中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q4是硫原子。
79.如权利要求32至78中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中X1和X2是氧原子，以及R1和R2独立地为羟基、氟原子或氯原子。
80.如权利要求32至79中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述抗体是抗GCC抗体。
81.如权利要求80所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述抗体是包含含有氨基酸序列SEQ.ID.No.1的重链区域的抗GCC抗体。
82.如权利要求80或81所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述抗体是包含含有氨基酸序列SEQ.ID.No.2的轻链区域的抗GCC抗体。
83.一种药物组合物，其包含如权利要求32至82中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。
84.一种治疗患者的方法，其包括向所述患者施用治疗有效量的如权利要求1至30或32至82中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述患者患有癌症。
85.如权利要求84所述的方法，其中所述癌症是表7的癌症中的任何一种或多种。
86.如权利要求85所述的方法，其中所述癌症是选自由以下组成的组：实性瘤和淋巴瘤。
87.如权利要求84至86中任一项所述的方法，其还包括施用治疗有效量的可用于治疗癌症的第二治疗剂。
88.如权利要求31或83所述的药物组合物，其是用于治疗癌症。
89.如权利要求88所述的药物组合物，其中所述癌症是表7的癌症中的任何一种或多种。
90.如权利要求88所述的药物组合物，其中所述癌症是选自由以下组成的组：实性瘤和淋巴瘤。
91.如权利要求1至30或32至82中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其是用于治疗癌症。
92.如权利要求91所述的化合物，其中所述癌症是表7的癌症中的任何一种或多种。
93.如权利要求91所述的化合物，其中所述癌症是选自由以下组成的组：实性瘤和淋巴瘤。
94.一种如权利要求1至30或32至82中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的用途，其是用于制造用以治疗癌症的药物。
95.如权利要求94所述的用途，其中所述癌症是表7的癌症中的任何一种或多种。
96.如权利要求94所述的用途，其中所述癌症是选自由以下组成的组：实性瘤和淋巴瘤。
97.一种药盒，其包括如权利要求1至30或32至82中任一项所述的化合物或药学上可接受的盐，以及关于向患有癌症的患者施用所述化合物或其药学上可接受的盐的说明书。
98.如权利要求97所述的药盒，其中所述癌症是表7的癌症中的任何一种或多种。
99.如权利要求97所述的药盒，其中所述癌症是选自由以下组成的组：实性瘤和淋巴瘤。
100.如权利要求97至99中任一项所述的药盒，其还包括一种或多种额外治疗剂。
101.一种化合物，其具有式(XL)：
CD-L1-R28(XL)，
或其药学上可接受的盐，其中：
CD是由式(XX)至式(XXIX)中的任一个表示的基团：
R1和R2各自独立地为羟基、氢、氨基或卤素原子；
B3和B4独立地为任选地取代的5元至14元芳香杂环基团；
X1和X2各自独立地为氧原子、CH2或硫原子；
Q1、Q2、Q3和Q4各自独立地为氧原子或硫原子；
L1是接头；
R28是选自由以下组成的组：-N3、-ONH2、-OH、-CN、-NO2、-CHO、-NR29C(＝O)CH＝CH2、-SH、-S(＝O)2(CH＝CH2)、-NR29C(＝O)CH2Br、-NR29C(＝O)CH2I、-C(＝O)NHNH2、-CO2H、-NH2、-C≡CH、
R29是氢或C1-6烷基；
R30a和R30b是独立地选自由以下组成的组：氢、C1-6烷基、卤代、-C(＝O)OR29、-NH2、C1-6烷氧基、-CN、-NO2和-OH；以及
R31a和R31b是独立地选自由以下组成的组：氢、C1-6烷基、卤代、-C(＝O)OR29、-NH2、-N(CH3)2、C1-6烷氧基、-CN、-NO2和-OH。
102.如权利要求101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R1和R2各自独立地为羟基或卤素原子。
103.如权利要求101或102所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中X1和X2各自独立地为氧原子或硫原子。
104.如权利要求101至103中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q1和Q3是氧原子。
105.如权利要求101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XX-A)表示的基团：
106.如权利要求101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXI-A)表示的基团：
107.如权利要求101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXII-A)表示的基团：
108.如权利要求101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXIII-A)表示的基团：
109.如权利要求101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXIV-A)表示的基团：
110.如权利要求101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXV-A)表示的基团：
111.如权利要求101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXVI-A)表示的基团：
112.如权利要求101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXVII-A)表示的基团：
113.如权利要求101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXVIII-A)表示的基团：
114.如权利要求101所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXIX-A)表示的基团：
115.如权利要求101至114中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
L1是-X3-T-Z-；
X3是-(CH2)o-、
o是1、2或3；或者
X3不存在；
T是肽或不存在；以及
Z是间隔基。
116.如权利要求115所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X3是
T是以及
R10a和R10b是独立地选自由以下组成的组：氢和任选地取代的C1-6烷基。
117.如权利要求116所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X3是
118.如权利要求115至117中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
Z是或-(CH2CH2O)s-；
m是1、2、3、4、5或6；以及
s是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
119.如权利要求115所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X3是-CH2-；
Z是以及
p是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
120.如权利要求115所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X3是-CH2CH2-；
Z是
q是1、2、3、4、5或6；以及
r是1、2、3、4、5或6。
121.如权利要求101至120中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3和B4独立地为任选地取代的8元至14元稠合双环芳香杂环。
122.如权利要求121所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
B3是由式(B3-A)或式(B3-B)表示的基团：
R13、R14、R15、R16和R17各自独立地为氢原子或取代基；
Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16各自独立地为N或CR1a；
Z11、Z12、Z13、Z14、Z15和Z16各自独立地为N或C；
R1a是氢原子或取代基；
B4是由式(B4-A)或式(B4-B)表示的基团：
R23、R24、R25、R26和R27各自独立地为氢原子或取代基；
Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26各自独立地为N或CR2a；
Z21、Z22、Z23、Z24、Z25和Z26各自独立地为N或C；
R2a是氢原子或取代基。
123.如权利要求101至122中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3或B4中至少一个是：
R18是氢或C1-6烷基；以及
R19是卤素原子。
124.如权利要求123所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是：
125.如权利要求123所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是：
126.如权利要求123至125中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R19是氟原子。
127.如权利要求123至126中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R18是氢。
128.如权利要求123至126中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R18是甲基。
129.如权利要求124或126至128中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
所述基团各自任选地且独立地在：
(i)任何可利用碳原子处经卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或氨基取代；和/或
(ii)任何可利用氮原子处经C1-6烷基取代。
130.如权利要求129所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
131.如权利要求130所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
132.如权利要求131所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
133.如权利要求125至128中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
所述基团各自任选地且独立地在：
(i)任何可利用碳原子处经卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或氨基取代；和/或
(ii)任何可利用氮原子处经C1-6烷基取代。
134.如权利要求133所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
135.如权利要求134所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
136.如权利要求135所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
137.如权利要求101至108、113或115至136中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q2是氧原子。
138.如权利要求101至108、113或115至136中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q2是硫原子。
139.如权利要求101至104、109至112、114或115至136中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q4是氧原子。
140.如权利要求101至104、109至112、114或115至136中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q4是硫原子。
141.如权利要求101至142中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中X1和X2是氧原子，以及R1和R2独立地为羟基或氟原子。
142.如权利要求101至141中任一项所述的化合物，其中R28是
143.如权利要求142所述的化合物，其是选自由以下组成的组：
144.一种化合物，其具有式(XLI)：
(CD-L2)u-DA(XLI)，
或其药学上可接受的盐，其中：
CD是由式(XX)至式(XXIX)中任一个表示的基团：
R1和R2各自独立地为羟基、氢、氨基或卤素原子；
B3和B4独立地为任选地取代的5元至14元芳香杂环基团；
X1和X2各自独立地为氧原子、CH2或硫原子；
Q1、Q2、Q3和Q4各自独立地为氧原子或硫原子；
L2是接头；或者
L2不存在；
DA是药物递送剂；以及
u是1至1000。
145.如权利要求144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R1和R2各自独立地为羟基或卤素原子。
146.如权利要求144或145所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中X1和X2各自独立地为氧原子或硫原子。
147.如权利要求144至146中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q1和Q3是氧原子。
148.如权利要求144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XX-A)表示的基团：
149.如权利要求144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXI-A)表示的基团：
150.如权利要求144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXII-A)表示的基团：
151.如权利要求144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXIII-A)表示的基团：
152.如权利要求144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXIV-A)表示的基团：
153.如权利要求144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXV-A)表示的基团：
154.如权利要求144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXVI-A)表示的基团：
155.如权利要求144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXVII-A)表示的基团：
156.如权利要求144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXVIII-A)表示的基团：
157.如权利要求144所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中CD是由式(XXIX-A)表示的基团：
158.如权利要求144至156中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3和B4独立地为任选地取代的8元至14元稠合双环芳香杂环。
159.如权利要求157所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
B3是由式(B3-A)或式(B3-B)表示的基团：
R13、R14、R15、R16和R17各自独立地为氢原子或取代基；
Y11、Y12、Y13、Y14、Y15和Y16各自独立地为N或CR1a；
Z11、Z12、Z13、Z14、Z15和Z16各自独立地为N或C；
R1a是氢原子或取代基；
B4是由式(B4-A)或式(B4-B)表示的基团：
R23、R24、R25、R26和R27各自独立地为氢原子或取代基；
Y21、Y22、Y23、Y24、Y25和Y26各自独立地为N或CR2a；
Z21、Z22、Z23、Z24、Z25和Z26各自独立地为N或C；
R2a是氢原子或取代基。
160.如权利要求144至158中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3或B4中至少一个是：
R18是氢或C1-6烷基；以及
R19是卤素原子。
161.如权利要求159所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是：
162.如权利要求159所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是：
163.如权利要求159至161中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R19是氟原子。
164.如权利要求159至162中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R18是氢。
165.如权利要求159至162中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R18是甲基。
166.如权利要求159或162至164中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
所述基团各自任选地且独立地在：
(i)任何可利用碳原子处经卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或氨基取代；和/或
(ii)任何可利用氮原子处经C1-6烷基取代。
167.如权利要求165所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
168.如权利要求166所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
169.如权利要求167所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B4是选自由以下组成的组：
170.如权利要求161至164中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
所述基团各自任选地且独立地在：
(i)任何可利用碳原子处经卤代、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或氨基取代；和/或
(ii)任何可利用氮原子处经C1-6烷基取代。
171.如权利要求169所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
172.如权利要求170所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
173.如权利要求171所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中B3是选自由以下组成的组：
174.如权利要求144至151、155或157至172中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q2是氧原子。
175.如权利要求144至151、155或157至172中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q2是硫原子。
176.如权利要求144至147、152至154、156或157至172中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q4是氧原子。
177.如权利要求144至147、152至154、156或157至172中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中Q4是硫原子。
178.如权利要求144至176中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中X1和X2是氧原子，以及R1和R2独立地为羟基、氟原子或氯原子。
179.如权利要求144至177中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中u是1至100。
180.如权利要求178所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中u是1至10。
181.如权利要求179所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中u是1至5。
182.如权利要求180所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中u是1。
183.如权利要求144至181中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
L2是-X4-T1-Z1-QA-；
X4是-(CH2)v-、
v是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；或者
X4不存在；
T1是肽或不存在；
Z1是间隔基；
QA是异双官能团或异三官能团或不存在。
184.如权利要求182所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X4是
T1是以及
R10c和R10d是独立地选自由以下组成的组：氢和任选地取代的C1-6烷基。
185.如权利要求183所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X4是
186.如权利要求182至184中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
Z1是或-(CH2CH2O)s1-；
m1是1、2、3、4、5或6；以及
s1是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
187.如权利要求182所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X4是-CH2-；
Z1是以及
p1是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
188.如权利要求182所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
X4是-CH2CH2-；
Z1是
q1是1、2、3、4、5或6；以及
r1是1、2、3、4、5或6。
189.如权利要求182、186或187中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中T1不存在。
190.如权利要求182至188中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中QA是选自由以下组成的组的异双官能团：
R29是氢或C1-6烷基；
R30a和R30b是独立地选自由以下组成的组：氢、C1-6烷基、卤代、-C(＝O)OR29、-NH2、C1-6烷氧基、-CN、-NO2和-OH；
R31a和R31b是独立地选自由以下组成的组：氢、C1-6烷基、卤代、-C(＝O)OR29、-NH2、-N(CH3)2、C1-6烷氧基、-CN、-NO2和-OH；以及
*指示与连接至所述药物递送剂的任何可利用碳原子、氮原子、氧原子或硫原子的连接点。
191.如权利要求182所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中X4、T1和QA不存在。
192.如权利要求144至190中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含脂质、类固醇、维生素、碳水化合物、蛋白质、肽、聚胺、聚乙二醇或肽模拟物，或其任何组合。
193.如权利要求191所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含脂质。
194.如权利要求191所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含类固醇。
195.如权利要求191所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含维生素。
196.如权利要求191所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含碳水化合物。
197.如权利要求191所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含蛋白质。
198.如权利要求191所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含肽。
199.如权利要求191所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含聚胺。
200.如权利要求191所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含聚乙二醇。
201.如权利要求191所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述药物递送剂包含肽模拟物。
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