CN110295229A - Prdm1作为标志物在制备诊断活动性结核病的产品中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了PRDM1作为标志物在制备诊断活动性结核病的产品中的应用。本发明采用荧光定量PCR检测活动性结核病患者PBMCs中的PRDM1基因的表达量。结果显示PRDM1在菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者PBMCs中的相对表达量均显著低于结核潜伏感染者和健康对照者。受试者工作特征曲线分析结果表明，PRDM1可区分活动性结核病和结核潜伏感染，成为诊断活动性结核病的诊断靶点。

Description

PRDM1作为标志物在制备诊断活动性结核病的产品中的应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及PRDM1作为标志物在制备诊断活动性结核病的产品中的应用。
背景技术
结核病(Tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，M.tb)感染引发的慢性传染性疾病，严重威胁人类健康。成人感染结核分枝杆菌后，部分呈现带菌生存状态，并不会发展为结核病，称为潜伏感染者(Latent tuberculosisinfection，LTBI)；约5-10％的潜伏感染者会继续发展为活动性结核病。国内各地区流行病学调查结果显示，基于γ-干扰素释放试验(IGRA)得出的结核分枝杆菌感染率大约在20-30％之间，即全国约有3-4亿人为结核分枝杆菌感染者，数目庞大的无临床症状的结核潜伏感染者是活动性结核病的重要来源。此外，由于结核潜伏感染的预防性治疗方案与活动性结核病的抗痨治疗方案显著不同。因此，如何实现结核潜伏感染与活动性结核病的早期鉴别诊断至关重要。
常用的结核分枝杆菌感染诊断方法包括传统的结核菌素实验(TST)以及γ-干扰素释放试验(IGRAs)，TST方法容易受到卡介苗接种和非结核分枝杆菌的干扰，结核分枝杆菌感染诊断不够明确，更无法区别结核潜伏感染和活动性结核病。新近推行的IGRAs方法，虽然能够检测结核分枝杆菌感染，但无法区分结核潜伏感染和活动性结核病。近年来虽然陆续出现了一些先进的基于核酸扩增的分子生物学检测技术(如XpertMTB/RIF assay)，但由于受到仪器设备和诊断费用的限制，以及假阳性率偏高等问题，还无法全面推广。因此，现行的结核病诊断方法或辅助诊断手段都无法实现快速有效的鉴别诊断结核潜伏感染和活动性结核病，使得临床上面临严重的治疗延误以及过度治疗等问题。基于上述现状，寻找新的结核病特异标志物，鉴别诊断结核潜伏感染和活动性结核病，已经成为结核病临床诊断中一项亟待解决的难题。
PRDM1是转录因子blimp-1的编码基因，blimp-1通过富含脯氨酸的辛指结构结合到DNA上发挥转录抑制作用，控制胚胎和成熟组织中基因的表达和染色体的结构。Blimp-1能调控包括B细胞、T细胞、树突细胞、巨噬细胞和NK细胞在内的多种免疫细胞的发育和分化。全基因组关联分析发现PRDM1的基因多态性与多种自身免疫疾病(如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎和炎症性肠病)的发病相关。PRDM1因缺失、突变或转录抑制导致的失活则与多种淋巴瘤的发生密切相关，对这些淋巴瘤的预后也有重要的指导意义。但是PRDM1与结核病关系的研究较少，尚未见到PRDM1的基因表达用于活动性结核病诊断的研究报道。
发明内容
本发明的目的是诊断活动性结核病及区分活动性结核病和结核潜伏感染。
本发明首先保护检测PRDM1基因的物质的新用途。
本发明提供了检测PRDM1基因的物质在如下(1)-(8)中任一种中的应用：
(1)诊断活动性结核病；
(2)制备诊断活动性结核病的产品；
(3)诊断待测者是否为活动性结核病患者；
(4)制备诊断待测者是否为活动性结核病患者的产品；
(5)区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染；
(6)制备区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染的产品；
(7)诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者；
(8)制备诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者的产品。
本发明还保护检测PRDM1基因编码的mRNA的物质的新用途。
本发明提供了检测PRDM1基因编码的mRNA的物质在如下(1)-(8)中任一种中的应用：
(1)诊断活动性结核病；
(2)制备诊断活动性结核病的产品；
(3)诊断待测者是否为活动性结核病患者；
(4)制备诊断待测者是否为活动性结核病患者的产品；
(5)区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染；
(6)制备区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染的产品；
(7)诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者；
(8)制备诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者的产品。
本发明还保护检测PRDM1基因编码的蛋白的物质的新用途。
本发明提供了检测PRDM1基因编码的蛋白的物质在如下(1)-(8)中任一种中的应用：
(1)诊断活动性结核病；
(2)制备诊断活动性结核病的产品；
(3)诊断待测者是否为活动性结核病患者；
(4)制备诊断待测者是否为活动性结核病患者的产品；
(5)区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染；
(6)制备区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染的产品；
(7)诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者；
(8)制备诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者的产品。
本发明还保护一种试剂盒。
本发明提供的试剂盒包括检测PRDM1基因的物质或检测PRDM1基因编码的mRNA的物质或检测PRDM1基因编码的蛋白的物质；
所述试剂盒的用途为如下(1)-(8)中任一种：
(1)诊断活动性结核病；
(2)制备诊断活动性结核病的产品；
(3)诊断待测者是否为活动性结核病患者；
(4)制备诊断待测者是否为活动性结核病患者的产品；
(5)区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染；
(6)制备区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染的产品；
(7)诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者；
(8)制备诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者的产品。
上述任一所述的应用或试剂盒中，所述活动性结核病包括菌阳肺结核病、菌阴肺结核病和肺外结核病。
上述试剂盒还包含数据处理装置ⅰ；所述数据处理装置ⅰ由数据输入模块ⅰ、数据记录模块ⅰ、数据比较模块ⅰ和结论输出模块ⅰ组成；
所述数据输入模块ⅰ用于输入PRDM1基因的相对表达量数值；
所述数据记录模块ⅰ用于存储PRDM1基因的相对表达量数值；
所述数据比较模块ⅰ用于将待测者外周血中PRDM1基因的相对表达量数值和阈值进行比较；所述阈值为0.08063；
所述结论输出模块ⅰ用于显示结论，即如果待测者外周血中PRDM1基因的相对表达量低于0.08063，则待测者为或疑似为活动性结核病患者；如果待测者外周血中PRDM1基因的相对表达量等于或高于0.08063，则待测者不为或疑似不为活动性结核病患者。
上述试剂盒还包含数据处理装置ⅱ；所述数据处理装置ⅱ由数据输入模块ⅱ、数据记录模块ⅱ、数据比较模块ⅱ和结论输出模块ⅱ组成；
所述数据输入模块ⅱ用于输入PRDM1基因的相对表达量数值；
所述数据记录模块ⅱ用于存储PRDM1基因的相对表达量数值；
所述数据比较模块ⅱ用于将待测者外周血中中PRDM1基因的相对表达量数值和阈值进行比较；所述阈值为0.07242；
所述结论输出模块ⅱ用于显示结论，即如果待测者外周血中PRDM1基因的相对表达量低于0.07242，则待测者为或疑似为活动性结核病患者；如果待测者外周血中PRDM1基因的相对表达量等于或高于0.07242，则待测者为或疑似为结核潜伏感染者。
上述任一所述的应用或试剂盒中，所述检测PRDM1基因或检测PRDM1基因编码的mRNA或检测PRDM1基因编码的蛋白的物质可为检测PRDM1基因或检测PRDM1基因编码的mRNA或检测PRDM1基因编码的蛋白所需的试剂和/或仪器。
所述检测PRDM1基因或检测PRDM1基因编码的mRNA或检测PRDM1基因编码的蛋白所需的试剂和/或仪器可为检测PRDM1基因相对表达量的试剂和/或仪器。
所述相对表达量为PRDM1基因参比内参基因的相对表达量。
进一步的，所述试剂包括由序列1所示的单链DNA分子和序列2所示的单链DNA分子组成的引物对。
所述仪器包括荧光定量PCR仪，具体可为480Ⅱ荧光定量PCR仪。
更进一步的，所述内参基因具体可为GAPDH基因。所述试剂还包括用于扩增GAPDH基因的由序列4所示的单链DNA分子和序列5所示的单链DNA分子组成的引物对。
所述相对表达量的计算方法具体如下：以待测者cDNA为模板，采用上述引物对进行实时荧光定量PCR，然后使用2-ΔCt法计算获得。所述待测者cDNA可为待测者外周血中分离的PBMCs的cDNA。
所述实时荧光定量PCR的体系可采用KAPATM 快速定量PCR试剂盒进行配制，具体如下：2×Green Master Mix 10μL，正向引物(浓度为10μM)0.4μL，反向引物(浓度为10μM)0.4μL，cDNA(5-20ng)2μL，无核酶水补足总体系20μL。正向引物和反向引物分别为用于扩增PRDM1基因的序列1所示的单链DNA分子和序列2所示的单链DNA分子或用于扩增GAPDH基因的序列4所示的单链DNA分子和序列5所示的单链DNA分子。
所述实时荧光定量PCR的反应条件具体如下：预变性：95℃3min；扩增反应：95℃5s，60℃30s，在延伸阶段检测荧光信号，40个循环。
PRDM1基因或PRDM1蛋白作为标志物在开发活动性结核病和/或菌阳肺结核病和/或菌阴肺结核病和/或肺外结核病的诊断试剂中的应用也属于本发明的保护范围。
上述引物对也属于本发明的保护范围。
上述任一所述的应用或试剂盒中，所述PRDM1基因序列如序列表中的序列6所示，所述PRDM1蛋白的氨基酸序列如序列表中的序列7所示。
本发明采用荧光定量PCR检测活动性结核病患者PBMCs中的PRDM1基因的表达量。结果显示PRDM1在菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者PBMCs中的相对表达量均显著低于结核潜伏感染者和健康对照者。受试者工作特征曲线分析结果表明，PRDM1可区分活动性结核病和结核潜伏感染，成为诊断活动性结核病的诊断靶点。
附图说明
图1为实时荧光定量PCR检测菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者、肺外结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中PRDM1的表达水平。
图2为实时荧光定量PCR检测菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者、肺外结核病患者和健康对照者PBMCs中PRDM1的表达水平。
图3为ROC曲线分析菌阳肺结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中PRDM1的表达水平。
图4为ROC曲线分析菌阴肺结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中PRDM1的表达水平。
图5为ROC曲线分析肺外结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中PRDM1的表达水平。
图6为ROC曲线分析菌阳肺结核病患者和健康对照者PBMCs中PRDM1的表达水平。
图7为ROC曲线分析菌阴肺结核病患者和健康对照者PBMCs中PRDM1的表达水平。
图8为ROC曲线分析肺外结核病患者和健康对照者PBMCs中PRDM1的表达水平。
图9为ROC曲线分析活动性结核病患者(包括菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者)和结核潜伏感染者PBMCs中PRDM1的表达水平。
图10为ROC曲线分析活动性结核病患者(包括菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者)和健康对照者PBMCs中PRDM1的表达水平。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
下述实施例中的PRDM1基因序列如序列表中的序列6所示，PRDM1蛋白的氨基酸序列如序列表中的序列7所示。
下述实施例中的活动性结核病包括菌阳肺结核病、菌阴肺结核病和肺外结核病。
活动性结核病是指由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染病。发生于肺组织、气管、支气管和胸膜的结核病变称之为肺结核，发生于其它部位的结核病变称之为肺外结核。
菌阳肺结核病是指痰涂片阳性或痰培养阳性的肺结核，菌阴肺结核病是指临床诊断的痰涂片阴性和/或痰培养阴性的肺结核。
实施例1、活动性结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中的PRDM1基因表达水平检测及其关联性分析
一、实验材料和方法
1、外周血样本的获得
受试者外周血样本：来源于140例患者和31例健康者的外周血样本。140例患者由109例活动性结核病患者和31例结核潜伏感染者组成，其中，109例活动性结核病患者的具体组成如下：经临床确诊的38例菌阳肺结核病患者、经临床确诊的53例菌阴肺结核病患者、经临床确诊的18例肺外结核病患者。
外周血样本的获得方法具体如下：分别抽取140例患者和31例健康者(均知情同意)的外周血2-3mL，置于含EDTA抗凝采血管，上下颠倒5-6次(目的为抗凝液和外周血混匀)，得到外周血标本。
2、外周血单个核细胞(PBMCs)的分离
分离受试者外周血单个核细胞(PBMCs)。具体步骤如下(6h内完成下述步骤)：采集受试者抗凝外周血2mL，先用基础培养基RPMI-1640进行1：1稀释，然后用淋巴细胞分离液进行密度梯度离心(Ficoll，GE Biosciences，USA)，收集中间单个核细胞层的细胞，再用RPMI-1640培养基洗两遍，得到PBMCs。
3、RNA的提取
使用TRIzolTM Reagent(Invitrogen，USA)分别提取每个样本的PBMCs的RNA。具体步骤如下：向每个样本的PBMCs中加入0.5mL TRIzol和0.1mL氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟；12000g、4℃离心15分钟，分离上层无色水相，然后加入0.25mL异丙醇，颠倒数次混匀，室温沉淀10min；12000g、4℃离心10分钟，弃上清，用1mL含75％乙醇的无核酶水清洗RNA沉淀；7500g、4℃离心10分钟，弃上清，RNA沉淀置于冰上晾干(5-10min)，用30μL无核酶水溶解RNA沉淀，-80℃度保存备用。
4、cDNA的合成
使用PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser(TaKaRaBiotechnology,Japan)将步骤3提取的RNA进行反转录，得到cDNA。具体步骤如下：先去除基因组DNA，反应体系为：5×gDNA Eraser Buffer 2μL，gDNA Eraser 1μL，RNA 0.5μg，用无核酶水补至10μL。反应条件为：42℃反应2min。然后进行反转录，反应体系为：去除基因组DNA的反应液10μL，RT Enzyme Mix I 1μL，RT Primer Mix 1μL，5×PrimerScript Buffer 4μL，用无核酶水补至20μL。反转录条件为：37℃15min，85℃5s。
5、引物序列和合成
委托上海生工生物科技有限公司合成引物，并使用HPLC纯化，引物序列如表1所示。
表1、引物序列
6、实时荧光定量PCR(RT-PCR)
采用KAPATM 快速定量PCR试剂盒(Kapa Biosystems，USA)配制定量PCR体系：2×Green Master Mix 10μL，正向引物(浓度为10μM)0.4μL，反向引物(浓度为10μM)0.4μL，cDNA 2μL，用无核酶水补足总体系20μL。以GAPDH基因作为内参基因。正向引物和反向引物分别为PRDM1-F和PRDM1-R或GAPDH-F和GAPDH-R。使用罗氏公司的480Ⅱ荧光定量PCR仪进行荧光定量PCR检测。反应条件：预变性：95℃3min；扩增反应：95℃5s，60℃30s，在延伸阶段检测荧光信号，40个循环。使用2-ΔCt计算相对表达量。
7、统计分析
使用GraphPad Prism 5进行统计分析。
二、实验结果
1、活动性结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中的PRDM1相对表达量
采用RT-PCR检测38例菌阳肺结核病患者、53例菌阴肺结核病患者、18例肺外结核病患者、31例结核潜伏感染者PBMCs中的PRDM1相对表达量。结果如图1所示，结果显示PRDM1在活动性结核病患者，包括菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者PBMCs中的相对表达量均显著低于结核潜伏感染者(p<0.0001)。说明PRDM1的表达量在区分活动性结核病患者和结核潜伏感染者方面具有重要价值。
2、活动性结核病患者和健康者PBMCs中的PRDM1相对表达量
采用RT-PCR检测38例菌阳肺结核病患者、53例菌阴肺结核病患者、18例肺外结核病患者和31例健康者PBMCs中的PRDM1相对表达量。结果如图2所示，结果显示PRDM1在活动性结核病患者，包括菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者PBMCs中的相对表达量均显著低于健康者(p<0.0001)。说明PRDM1的表达量在诊断活动性结核病方面具有重要价值。
3、菌阳肺结核病患者和结核潜伏感染者的工作特征曲线分析
根据菌阳肺结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中PRDM1的相对表达量，使用GraphPad Prism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图3所示，结果显示ROC曲线下面积为0.8587，p<0.0001。说明PRDM1的表达量在区分菌阳肺结核病患者和结核潜伏感染者方面具有重要价值。
4、菌阴肺结核病患者和结核潜伏感染者的工作特征曲线分析
根据菌阴肺结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中PRDM1的相对表达量，使用GraphPad Prism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图4所示，结果显示ROC曲线下面积为0.9239，p<0.0001。说明PRDM1的表达量在区分菌阴肺结核病患者和结核潜伏感染者方面具有重要价值。
5、肺外结核病患者和结核潜伏感染者的工作特征曲线分析
根据肺外结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中PRDM1的相对表达量，使用GraphPad Prism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图5所示，结果显示ROC曲线下面积为0.8925，p<0.0001。说明PRDM1的表达量在区分肺外结核病患者和结核潜伏感染者方面具有重要价值。
6、菌阳肺结核病患者和健康者的工作特征曲线分析
根据菌阳肺结核病患者和健康者PBMCs中PRDM1的相对表达量，使用GraphPadPrism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图6所示，结果显示ROC曲线下面积为0.8654，p<0.0001。说明PRDM1的表达量在诊断菌阳肺结核病方面具有重要价值。
7、菌阴肺结核病患者和健康者的工作特征曲线分析
根据菌阴肺结核病患者和健康者PBMCs中PRDM1的相对表达量，使用GraphPadPrism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图7所示，结果显示ROC曲线下面积为0.9172，p<0.0001。说明PRDM1的表达量在诊断菌阴肺结核病方面具有重要价值。
8、肺外结核病患者和健康者的工作特征曲线分析
根据肺外结核病患者和健康者PBMCs中PRDM1的相对表达量，使用GraphPad Prism5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图8所示，结果显示ROC曲线下面积为0.9104，p<0.0001。说明PRDM1的表达量在诊断肺外结核病方面具有重要价值。
9、活动性结核病患者和结核潜伏感染者的工作特征曲线分析
根据活动性结核病患者(包括菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者)和结核潜伏感染者PBMCs中PRDM1的相对表达量，使用GraphPad Prism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图9所示，结果显示ROC曲线下面积为0.896，p<0.0001。说明PRDM1的表达量在区分活动性结核病患者与结核潜伏感染者方面具有重要价值。
10、活动性结核病患者和健康对照者的工作特征曲线分析
根据活动性结核病患者(包括菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者)和健康对照者PBMCs中PRDM1的相对表达量，使用GraphPad Prism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图10所示，结果显示ROC曲线下面积为0.898，p<0.0001。说明PRDM1的表达量在诊断活动性结核病方面具有重要价值。
在实际应用中，可根据如下判断标准区分活动性结核病患者与结核潜伏感染者：如果待测者外周血中PRDM1基因的相对表达量低于0.07242(灵敏度为77.06％，置信区间为68.03％～84.57％；特异性为87.1％，置信区间为70.17％～96.37％)，则待测者为或疑似为活动性结核病患者；如果待测者外周血中PRDM1基因的相对表达量等于或高于0.07242，则待测者为或疑似为结核潜伏感染者。
还可根据如下判断标准诊断活动性结核病：如果待测者外周血中PRDM1基因的相对表达量低于0.08063(灵敏度为83.49％，置信区间为75.16％～89.91％；特异性为87.1％，置信区间为70.17％～96.37％)，则待测者为或疑似为活动性结核病患者；如果待测者外周血中PRDM1基因的相对表达量等于或高于0.08063，则待测者不为或疑似不为活动性结核病患者。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。
序列表
<110>中国人民解放军总医院第八医学中心
<120>PRDM1作为标志物在制备诊断活动性结核病的产品中的应用
<160>7
<170>PatentIn version 3.5
<210>1
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>1
ttaagcccat ccctgccaac 20
<210>2
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>2
gctcggttgc tttagactgc 20
<210>3
<211>137
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>3
ttaagcccat ccctgccaac caggaacttc ttgtgtggta ttgtcgggac tttgcagaaa 60
ggcttcacta cccttatccc ggagagctga caatgatgaa tctcacacaa acacagagca 120
gtctaaagca accgagc 137
<210>4
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>4
tgttgccatc aatgacccct 20
<210>5
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>5
tcgccccact tgattttgga 20
<210>6
<211>5148
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>6
aacacagaca aagtgctgcc gtgacactcg gccctccagt gttgcggaga ggcaagagca 60
gcgaccgcgg cacctgtccg cccggagctg ggacgcgggc gcccgggcgg ccggacgaag 120
cgaggaggga ccgccgaggt gcgcgtctgt gcggctcagc ctggcggggg acgcggggag 180
aatgtggact gggtagagat gaacgagact tttctcagat gttggatatt tgcttggaaa 240
aacgtgtggg tacgaccttg gctgccccca agtgtaactc cagcactgtg aggtttcagg 300
gattggcaga ggggaccaag gggaccatga aaatggacat ggaggatgcg gatatgactc 360
tgtggacaga ggctgagttt gaagagaagt gtacatacat tgtgaacgac cacccctggg 420
attctggtgc tgatggcggt acttcggttc aggcggaggc atccttacca aggaatctgc 480
ttttcaagta tgccaccaac agtgaagagg ttattggagt gatgagtaaa gaatacatac 540
caaagggcac acgttttgga cccctaatag gtgaaatcta caccaatgac acagttccta 600
agaacgccaa caggaaatat ttttggagga tctattccag aggggagctt caccacttca 660
ttgacggctt taatgaagag aaaagcaact ggatgcgcta tgtgaatcca gcacactctc 720
cccgggagca aaacctggct gcgtgtcaga acgggatgaa catctacttc tacaccatta 780
agcccatccc tgccaaccag gaacttcttg tgtggtattg tcgggacttt gcagaaaggc 840
ttcactaccc ttatcccgga gagctgacaa tgatgaatct cacacaaaca cagagcagtc 900
taaagcaacc gagcactgag aaaaatgaac tctgcccaaa gaatgtccca aagagagagt 960
acagcgtgaa agaaatccta aaattggact ccaacccctc caaaggaaag gacctctacc 1020
gttctaacat ttcacccctc acatcagaaa aggacctcga tgactttaga agacgtggga 1080
gccccgaaat gcccttctac cctcgggtcg tttaccccat ccgggcccct ctgccagaag 1140
actttttgaa agcttccctg gcctacggga tcgagagacc cacgtacatc actcgctccc 1200
ccattccatc ctccaccact ccaagcccct ctgcaagaag cagccccgac caaagcctca 1260
agagctccag ccctcacagc agccctggga atacggtgtc ccctgtgggc cccggctctc 1320
aagagcaccg ggactcctac gcttacttga acgcgtccta cggcacggaa ggtttgggct 1380
cctaccctgg ctacgcaccc ctgccccacc tcccgccagc tttcatcccc tcgtacaacg 1440
ctcactaccc caagttcctc ttgcccccct acggcatgaa ttgtaatggc ctgagcgctg 1500
tgagcagcat gaatggcatc aacaactttg gcctcttccc gaggctgtgc cctgtctaca 1560
gcaatctcct cggtgggggc agcctgcccc accccatgct caaccccact tctctcccga 1620
gctcgctgcc ctcagatgga gcccggaggt tgctccagcc ggagcatccc agggaggtgc 1680
ttgtcccggc gccccacagt gccttctcct ttaccggggc cgccgccagc atgaaggaca 1740
aggcctgtag ccccacaagc gggtctccca cggcgggaac agccgccacg gcagaacatg 1800
tggtgcagcc caaagctacc tcagcagcga tggcagcccc cagcagcgac gaagccatga 1860
atctcattaa aaacaaaaga aacatgaccg gctacaagac ccttccctac ccgctgaaga 1920
agcagaacgg caagatcaag tacgaatgca acgtttgcgc caagactttc ggccagctct 1980
ccaatctgaa ggtccacctg agagtgcaca gtggagaacg gcctttcaaa tgtcagactt 2040
gcaacaaggg ctttactcag ctcgcccacc tgcagaaaca ctacctggta cacacgggag 2100
aaaagccaca tgaatgccag gtctgccaca agagatttag cagcaccagc aatctcaaga 2160
cccacctgcg actccattct ggagagaaac cataccaatg caaggtgtgc cctgccaagt 2220
tcacccagtt tgtgcacctg aaactgcaca agcgtctgca cacccgggag cggccccaca 2280
agtgctccca gtgccacaag aactacatcc atctctgtag cctcaaggtt cacctgaaag 2340
ggaactgcgc tgcggccccg gcgcctgggc tgcccttgga agatctgacc cgaatcaatg 2400
aagaaatcga gaagtttgac atcagtgaca atgctgaccg gctcgaggac gtggaggatg 2460
acatcagtgt gatctctgta gtggagaagg aaattctggc cgtggtcaga aaagagaaag 2520
aagaaactgg cctgaaagtg tctttgcaaa gaaacatggg gaatggactc ctctcctcag 2580
ggtgcagcct ttatgagtca tcagatctac ccctcatgaa gttgcctccc agcaacccac 2640
tacctctggt acctgtaaag gtcaaacaag aaacagttga accaatggat ccttaagatt 2700
ttcagaaaac acttattttg tttcttaagt tatgacttgg tgagtcaggg tgcctgtagg 2760
aagtggcttg tacataatcc cagctctgca aagctctctc gacagcaaat ggtttcccct 2820
cacctctgga attaaagaag gaactccaaa gttactgaaa tctcagggca tgaacaaggc 2880
aaaggccata tatatatata tatatatatc tgtatacata ttatatatac ttatttacac 2940
ctgtgtctat atatttgccc ctgtgtattt tgaatatttg tgtggacatg tttgcatagc 3000
cttcccatta ctaagactat tacctagtca taattatttt ttcaatgata atccttcata 3060
atttattata caatttatca ttcagaaagc aataattaaa aaagtttaca atgactggaa 3120
agattccttg taatttgagt ataaatgtat ttttgtcttg tggccattct ttgtagataa 3180
tttctgcaca tctgtataag tacctaagat ttagttaaac aaatatatga cttcagtcaa 3240
cctctctctc taataatggt ttgaaaatga ggtttgggta attgccaatg ttggacagtt 3300
gatgtgttca ttcctgggat cctatcattt gaacagcatt gtacataact tgggggtatg 3360
tgtgcaggat tacccaagaa taacttaagt agaagaaaca agaaagggaa tcttgtatat 3420
ttttgttgat agttcatgtt tttcccccag ccacaatttt accggaaggg tgacaggaag 3480
gctttaccaa cctgtctctc cctccaaaag agcagaatcc tcccaccgcc ctgccctccc 3540
caccgagtcc tgtggccatt cagagcggcc acatgacttt tgcatccatt gtattatcag 3600
aaaatgtgaa gaagaaaaaa atgccatgtt ttaaaaccac tgcgaaaatt tccccaaagc 3660
ataggtggct ttgtgtgtgt gcgatttggg ggcttgagtc tgggtggtgt tttgttgttg 3720
gtttttgttg cttttttttt tttttttttt ttaatgtcaa aattgcacaa acatggtgct 3780
ctaccaggaa ggattcgagg tagataggct caggccacac tttaaaaaca aacacacaaa 3840
caacaaaaaa cgggtattct agtcatcttg gggtaaaagc gggtaatgaa cattcctatc 3900
cccaacacat caattgtatt ttttctgtaa aactcagatt ttcctcagta tttgtgtttt 3960
tacattttat ggttaattta atggaagatg aaagggcatt gcaaagttgt tcaacaacag 4020
ttacctcatt gagtgtgtcc agtagtgcag gaaatgatgt cttatctaat gatttgcttc 4080
tctagaggag aaaccgagta aatgtgctcc agcaagatag actttgtgtt attctatctt 4140
ttattctgct aagcccaaag attacatgtt ggtgttcaaa gtgtagcaaa aaatgatgta 4200
tatttataaa tctatttata ccactatatc atatgtatat atatttataa ccacttaaat 4260
tgtgagccaa gccatgtaaa agatctactt tttctaaggg caaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4320
aaagaacact cctttctgag actttgctta atacttggtg acctcacaat cacgtcggta 4380
tgattgggca cccttgccta ctgtaagaga ccctaaaacc ttggtgcagt ggtggggacc 4440
acaaaacaac cagggaggaa gagatacatc attttttagt attaaggacc atctaagaca 4500
gctctatttt ttttttgcca ctttatgatt atgtggtcac acccaagtca cagaaataaa 4560
aaactgactt taccgctgca atttttctgt tttcctcctt actaaatact gatacattac 4620
tccaatctat tttataatta tatttgacat tttgttcaca tcaactaatg ttcacctgta 4680
gaagagaaca aatttcgaat aatccaggga aacccaagag ccttactggt cttctgtaac 4740
ttccaagact gacagctttt tatgtatcag tgtttgataa acacagtcct taactgaagg 4800
taaaccaaag catcacgttg acattagacc aaatactttt gattcccaac tactcgtttg 4860
ttctttttct ccttttgtgc tttcccatag tgagaatttt tataaagact tcttgcttct 4920
ctcaccatcc atccttctct tttctgcctc ttacatgtga atgttgagcc cacaatcaac 4980
agtggtttta ttttttcctc tactcaaagt taaaactgac caaagttact ggctttttac 5040
tttgctagaa caacaaacta tcttatgttt acatactggt ttacaatgtt atttatgtgc 5100
aaattgtcaa aatgtaaatt aaatataaat gttcatgctt taccaaaa 5148
<210>7
<211>825
<212>PRT
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>7
Met Leu Asp Ile Cys Leu Glu Lys Arg Val Gly Thr Thr Leu Ala Ala
1 5 10 15
Pro Lys Cys Asn Ser Ser Thr Val Arg Phe Gln Gly Leu Ala Glu Gly
20 25 30
Thr Lys Gly Thr Met Lys Met Asp Met Glu Asp Ala Asp Met Thr Leu
35 40 45
Trp Thr Glu Ala Glu Phe Glu Glu Lys Cys Thr Tyr Ile Val Asn Asp
50 55 60
His Pro Trp Asp Ser Gly Ala Asp Gly Gly Thr Ser Val Gln Ala Glu
65 70 75 80
Ala Ser Leu Pro Arg Asn Leu Leu Phe Lys Tyr Ala Thr Asn Ser Glu
85 90 95
Glu Val Ile Gly Val Met Ser Lys Glu Tyr Ile Pro Lys Gly Thr Arg
100 105 110
Phe Gly Pro Leu Ile Gly Glu Ile Tyr Thr Asn Asp Thr Val Pro Lys
115 120 125
Asn Ala Asn Arg Lys Tyr Phe Trp Arg Ile Tyr Ser Arg Gly Glu Leu
130 135 140
His His Phe Ile Asp Gly Phe Asn Glu Glu Lys Ser Asn Trp Met Arg
145 150 155 160
Tyr Val Asn Pro Ala His Ser Pro Arg Glu Gln Asn Leu Ala Ala Cys
165 170 175
Gln Asn Gly Met Asn Ile Tyr Phe Tyr Thr Ile Lys Pro Ile Pro Ala
180 185 190
Asn Gln Glu Leu Leu Val Trp Tyr Cys Arg Asp Phe Ala Glu Arg Leu
195 200 205
His Tyr Pro Tyr Pro Gly Glu Leu Thr Met Met Asn Leu Thr Gln Thr
210 215 220
Gln Ser Ser Leu Lys Gln Pro Ser Thr Glu Lys Asn Glu Leu Cys Pro
225 230 235 240
Lys Asn Val Pro Lys Arg Glu Tyr Ser Val Lys Glu Ile Leu Lys Leu
245 250 255
Asp Ser Asn Pro Ser Lys Gly Lys Asp Leu Tyr Arg Ser Asn Ile Ser
260 265 270
Pro Leu Thr Ser Glu Lys Asp Leu Asp Asp Phe Arg Arg Arg Gly Ser
275 280 285
Pro Glu Met Pro Phe Tyr Pro Arg Val Val Tyr Pro Ile Arg Ala Pro
290 295 300
Leu Pro Glu Asp Phe Leu Lys Ala Ser Leu Ala Tyr Gly Ile Glu Arg
305 310 315 320
Pro Thr Tyr Ile Thr Arg Ser Pro Ile Pro Ser Ser Thr Thr Pro Ser
325 330 335
Pro Ser Ala Arg Ser Ser Pro Asp Gln Ser Leu Lys Ser Ser Ser Pro
340 345 350
His Ser Ser Pro Gly Asn Thr Val Ser Pro Val Gly Pro Gly Ser Gln
355 360 365
Glu His Arg Asp Ser Tyr Ala Tyr Leu Asn Ala Ser Tyr Gly Thr Glu
370 375 380
Gly Leu Gly Ser Tyr Pro Gly Tyr Ala Pro Leu Pro His Leu Pro Pro
385 390 395 400
Ala Phe Ile Pro Ser Tyr Asn Ala His Tyr Pro Lys Phe Leu Leu Pro
405 410 415
Pro Tyr Gly Met Asn Cys Asn Gly Leu Ser Ala Val Ser Ser Met Asn
420 425 430
Gly Ile Asn Asn Phe Gly Leu Phe Pro Arg Leu Cys Pro Val Tyr Ser
435 440 445
Asn Leu Leu Gly Gly Gly Ser Leu Pro His Pro Met Leu Asn Pro Thr
450 455 460
Ser Leu Pro Ser Ser Leu Pro Ser Asp Gly Ala Arg Arg Leu Leu Gln
465 470 475 480
Pro Glu His Pro Arg Glu Val Leu Val Pro Ala Pro His Ser Ala Phe
485 490 495
Ser Phe Thr Gly Ala Ala Ala Ser Met Lys Asp Lys Ala Cys Ser Pro
500 505 510
Thr Ser Gly Ser Pro Thr Ala Gly Thr Ala Ala Thr Ala Glu His Val
515 520 525
Val Gln Pro Lys Ala Thr Ser Ala Ala Met Ala Ala Pro Ser Ser Asp
530 535 540
Glu Ala Met Asn Leu Ile Lys Asn Lys Arg Asn Met Thr Gly Tyr Lys
545 550 555 560
Thr Leu Pro Tyr Pro Leu Lys Lys Gln Asn Gly Lys Ile Lys Tyr Glu
565 570 575
Cys Asn Val Cys Ala Lys Thr Phe Gly Gln Leu Ser Asn Leu Lys Val
580 585 590
His Leu Arg Val His Ser Gly Glu Arg Pro Phe Lys Cys Gln Thr Cys
595 600 605
Asn Lys Gly Phe Thr Gln Leu Ala His Leu Gln Lys His Tyr Leu Val
610 615 620
His Thr Gly Glu Lys Pro His Glu Cys Gln Val Cys His Lys Arg Phe
625 630 635 640
Ser Ser Thr Ser Asn Leu Lys Thr His Leu Arg Leu His Ser Gly Glu
645 650 655
Lys Pro Tyr Gln Cys Lys Val Cys Pro Ala Lys Phe Thr Gln Phe Val
660 665 670
His Leu Lys Leu His Lys Arg Leu His Thr Arg Glu Arg Pro His Lys
675 680 685
Cys Ser Gln Cys His Lys Asn Tyr Ile His Leu Cys Ser Leu Lys Val
690 695 700
His Leu Lys Gly Asn Cys Ala Ala Ala Pro Ala Pro Gly Leu Pro Leu
705 710 715 720
Glu Asp Leu Thr Arg Ile Asn Glu Glu Ile Glu Lys Phe Asp Ile Ser
725 730 735
Asp Asn Ala Asp Arg Leu Glu Asp Val Glu Asp Asp Ile Ser Val Ile
740 745 750
Ser Val Val Glu Lys Glu Ile Leu Ala Val Val Arg Lys Glu Lys Glu
755 760 765
Glu Thr Gly Leu Lys Val Ser Leu Gln Arg Asn Met Gly Asn Gly Leu
770 775 780
Leu Ser Ser Gly Cys Ser Leu Tyr Glu Ser Ser Asp Leu Pro Leu Met
785 790 795 800
Lys Leu Pro Pro Ser Asn Pro Leu Pro Leu Val Pro Val Lys Val Lys
805 810 815
Gln Glu Thr Val Glu Pro Met Asp Pro
820 825

Claims (10)

1.检测PRDM1基因的物质在如下(1)-(8)中任一种中的应用：
(1)诊断活动性结核病；
(2)制备诊断活动性结核病的产品；
(3)诊断待测者是否为活动性结核病患者；
(4)制备诊断待测者是否为活动性结核病患者的产品；
(5)区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染；
(6)制备区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染的产品；
(7)诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者；
(8)制备诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者的产品。
2.检测PRDM1基因编码的mRNA的物质在如下(1)-(8)中任一种中的应用：
(1)诊断活动性结核病；
(2)制备诊断活动性结核病的产品；
(3)诊断待测者是否为活动性结核病患者；
(4)制备诊断待测者是否为活动性结核病患者的产品；
(5)区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染；
(6)制备区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染的产品；
(7)诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者；
(8)制备诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者的产品。
3.检测PRDM1基因编码的蛋白的物质在如下(1)-(8)中任一种中的应用：
(1)诊断活动性结核病；
(2)制备诊断活动性结核病的产品；
(3)诊断待测者是否为活动性结核病患者；
(4)制备诊断待测者是否为活动性结核病患者的产品；
(5)区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染；
(6)制备区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染的产品；
(7)诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者；
(8)制备诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者的产品。
4.一种试剂盒，其包括检测PRDM1基因的物质或检测PRDM1基因编码的mRNA的物质或检测PRDM1基因编码的蛋白的物质；
所述试剂盒的用途为如下(1)-(8)中任一种：
(1)诊断活动性结核病；
(2)制备诊断活动性结核病的产品；
(3)诊断待测者是否为活动性结核病患者；
(4)制备诊断待测者是否为活动性结核病患者的产品；
(5)区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染；
(6)制备区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染的产品；
(7)诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者；
(8)制备诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者的产品。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含数据处理装置ⅰ；所述数据处理装置ⅰ由数据输入模块ⅰ、数据记录模块ⅰ、数据比较模块ⅰ和结论输出模块ⅰ组成；
所述数据输入模块ⅰ用于输入PRDM1基因的相对表达量数值；
所述数据记录模块ⅰ用于存储PRDM1基因的相对表达量数值；
所述数据比较模块ⅰ用于将待测者外周血中PRDM1基因的相对表达量数值和阈值进行比较；所述阈值为0.08063；
所述结论输出模块ⅰ用于显示结论，即如果待测者外周血中PRDM1基因的相对表达量低于0.08063，则待测者为或疑似为活动性结核病患者；如果待测者外周血中PRDM1基因的相对表达量等于或高于0.08063，则待测者不为或疑似不为活动性结核病患者。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含数据处理装置ⅱ；所述数据处理装置ⅱ由数据输入模块ⅱ、数据记录模块ⅱ、数据比较模块ⅱ和结论输出模块ⅱ组成；
所述数据输入模块ⅱ用于输入PRDM1基因的相对表达量数值；
所述数据记录模块ⅱ用于存储PRDM1基因的相对表达量数值；
所述数据比较模块ⅱ用于将待测者外周血中PRDM1基因的相对表达量数值和阈值进行比较；所述阈值为0.07242；
所述结论输出模块ⅱ用于显示结论，即如果待测者外周血中PRDM1基因的相对表达量低于0.07242，则待测者为或疑似为活动性结核病患者；如果待测者外周血中PRDM1基因的相对表达量等于或高于0.07242，则待测者为或疑似为结核潜伏感染者。
7.根据权利要求1-3任一所述的应用或权利要求4-6任一所述的试剂盒，其特征在于：所述活动性结核病包括菌阳肺结核病、菌阴肺结核病和肺外结核病。
8.根据权利要求1-3任一所述的应用或权利要求4-7任一所述的试剂盒，其特征在于：所述物质为检测PRDM1基因或检测PRDM1基因编码的mRNA或检测PRDM1基因编码的蛋白所需的试剂和/或仪器；
或，所述试剂包括由序列1所示的单链DNA分子和序列2所示的单链DNA分子组成的引物对。
9.权利要求8中所述的引物对。
10.PRDM1基因或PRDM1蛋白作为标志物在开发活动性结核病和/或菌阳肺结核病和/或菌阴肺结核病和/或肺外结核病的诊断试剂中的应用。
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