CN110283905A

CN110283905A - 基于abca2荧光定量pcr诊断活动性结核病的试剂盒

Info

Publication number: CN110283905A
Application number: CN201910717118.9A
Authority: CN
Inventors: 程小星; 刘艳华; 王若; 苏瑾文; 杨秉芬; 蒋静; 曹志红; 翟斐; 安红娟
Original assignee: 8th Medical Center of PLA General Hospital
Current assignee: 8th Medical Center of PLA General Hospital
Priority date: 2019-08-05
Filing date: 2019-08-05
Publication date: 2019-09-27

Abstract

本发明公开了基于ABCA2荧光定量PCR诊断活动性结核病的试剂盒。本发明采用荧光定量PCR检测活动性结核病患者PBMCs中的ABCA2基因的表达量。结果显示ABCA2在菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者PBMCs中的相对表达量均显著低于结核潜伏感染者和健康对照者。受试者工作特征曲线分析结果表明，ABCA2可区分活动性结核病和结核潜伏感染，成为诊断活动性结核病的诊断靶点。

Description

基于ABCA2荧光定量PCR诊断活动性结核病的试剂盒

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及基于ABCA2荧光定量PCR诊断活动性结核病的试剂盒。

背景技术

结核病(Tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，M.tb)感染引发的慢性传染性疾病，严重威胁人类健康。全国第五次结核病流行病学调查显示我国现有超过500万名成人活动性结核病患者。

常用的结核分枝杆菌感染诊断方法包括传统的结核菌素实验(TST)以及γ-干扰素释放试验(IGRAs)。TST方法容易受到卡介苗接种和非结核分枝杆菌的干扰，结核分枝杆菌感染诊断不够明确，更无法区分结核潜伏感染和活动性结核病。新近推行的IGRAs方法，虽然能够检测结核杆菌感染，但也无法区分结核潜伏感染和活动性结核病。因此区分活动性结核病和结核潜伏感染对于结核病的临床诊断具有重要的意义。

ABCA2是ABCA2蛋白(ATP-binding cassette transporterA2)的编码基因，ABCA2是ABC转运子家族的一员，表达于神经细胞、巨噬细胞、单核细胞和造血干细胞等多种组织，主要作用是保持细胞内脂类成分的内平衡和代谢。ABCA2也可表达于肿瘤细胞中，并且在肿瘤生长过程中ABCA2表达的增加会有助于肿瘤细胞的增殖。研究发现，ABCA2与早期动脉粥样硬化、丹吉尔病、小细胞肺癌、急性白血病和阿尔茨海默病等的发病相关，此外，ABCA2还与癌症化疗的耐药相关。但目前尚未发现ABCA2与结核病关系的研究报道。

发明内容

本发明的目的是诊断活动性结核病及区分活动性结核病和结核潜伏感染。

本发明首先保护检测ABCA2基因的物质或检测ABCA2基因编码的mRNA的物质或检测ABCA2基因编码的蛋白的物质的新用途。

本发明提供了检测ABCA2基因的物质或检测ABCA2基因编码的mRNA的物质或检测ABCA2基因编码的蛋白的物质在如下(a1)-(a16)中任一种中的应用：

(a1)诊断活动性结核病；

(a2)制备诊断活动性结核病的产品；

(a3)诊断待测者是否为活动性结核病患者；

(a4)制备诊断待测者是否为活动性结核病患者的产品；

(a5)诊断菌阳肺结核病；

(a6)制备诊断菌阳肺结核病的产品；

(a7)诊断待测者是否为菌阳肺结核病患者；

(a8)制备诊断待测者是否为菌阳肺结核病患者的产品；

(a9)诊断菌阴肺结核病；

(a10)制备诊断菌阴肺结核病的产品；

(a11)诊断待测者是否为菌阴肺结核病患者；

(a12)制备诊断待测者是否为菌阴肺结核病患者的产品；

(a13)诊断肺外结核病；

(a14)制备诊断肺外结核病的产品；

(a15)诊断待测者是否为肺外结核病患者；

(a16)制备诊断待测者是否为肺外结核病患者的产品。

本发明还提供了检测ABCA2基因的物质或检测ABCA2基因编码的mRNA的物质或检测ABCA2基因编码的蛋白的物质在如下(b1)-(b16)中任一种中的应用：

(b1)区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染；

(b2)制备区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染的产品；

(b3)诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者；

(b4)制备诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者的产品；

(b5)区分或鉴别菌阳肺结核病和结核潜伏感染；

(b6)制备区分或鉴别菌阳肺结核病和结核潜伏感染的产品；

(b7)诊断待测者为菌阳肺结核病患者还是结核潜伏感染者；

(b8)制备诊断待测者为菌阳肺结核病患者还是结核潜伏感染者的产品；

(b9)区分或鉴别菌阴肺结核病和结核潜伏感染；

(b10)制备区分或鉴别菌阴肺结核病和结核潜伏感染的产品；

(b11)诊断待测者为菌阴肺结核病患者还是结核潜伏感染者；

(b12)制备诊断待测者为菌阴肺结核病患者还是结核潜伏感染者的产品；

(b13)区分或鉴别肺外结核病和结核潜伏感染；

(b14)制备区分或鉴别肺外结核病和结核潜伏感染的产品；

(b15)诊断待测者为肺外结核病患者还是结核潜伏感染者；

(b16)制备诊断待测者为肺外结核病患者还是结核潜伏感染者的产品。

本发明还保护用于诊断活动性结核病的试剂盒或用于区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染的试剂盒。

本发明提供的用于诊断活动性结核病的试剂盒或用于区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染的试剂盒包括检测ABCA2基因的物质或检测ABCA2基因编码的mRNA的物质或检测ABCA2基因编码的蛋白的物质。

上述用于诊断活动性结核病的试剂盒还包含数据处理装置甲；所述数据处理装置甲由数据输入模块甲、数据记录模块甲、数据比较模块甲和结论输出模块甲组成；

所述数据输入模块甲用于输入ABCA2基因的相对表达量数值；

所述数据记录模块甲用于存储ABCA2基因的相对表达量数值；

所述数据比较模块甲用于将待测者外周血中ABCA2基因的相对表达量数值和阈值进行比较；所述阈值为0.01701；

所述结论输出模块甲用于显示结论，即如果待测者外周血中ABCA2基因的相对表达量低于0.01701，则待测者为或疑似为活动性结核病患者；如果待测者外周血中ABCA2基因的相对表达量等于或高于0.01701，则待测者不为或疑似不为活动性结核病患者。

上述用于区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染的试剂盒还包含数据处理装置乙；所述数据处理装置乙由数据输入模块乙、数据记录模块乙、数据比较模块乙和结论输出模块乙组成；

所述数据输入模块乙用于输入ABCA2基因的相对表达量数值；

所述数据记录模块乙用于存储ABCA2基因的相对表达量数值；

所述数据比较模块乙用于将待测者外周血中ABCA2基因的相对表达量数值和阈值进行比较；所述阈值为0.02124；

所述结论输出模块乙用于显示结论，即如果待测者外周血中ABCA2基因的相对表达量低于0.02124，则待测者为或疑似为活动性结核病患者；如果待测者外周血中ABCA2基因的相对表达量等于或高于0.02124，则待测者为或疑似为结核潜伏感染者。

上述任一所述的应用或试剂盒中，所述活动性结核病包括菌阳肺结核病、菌阴肺结核病和肺外结核病。

上述任一所述的应用或试剂盒中，所述检测ABCA2基因或检测ABCA2基因编码的mRNA或检测ABCA2基因编码的蛋白的物质可为检测ABCA2基因或检测ABCA2基因编码的mRNA或检测ABCA2基因编码的蛋白所需的试剂和/或仪器。

所述检测ABCA2基因或检测ABCA2基因编码的mRNA或检测ABCA2基因编码的蛋白所需的试剂和/或仪器可为检测ABCA2基因相对表达量的试剂和/或仪器。

所述相对表达量为ABCA2基因参比内参基因的相对表达量。

进一步的，所述试剂包括由序列1所示的单链DNA分子和序列2所示的单链DNA分子组成的引物对。

所述仪器包括荧光定量PCR仪，具体可为Ⅱ荧光定量PCR仪。

更进一步的，所述内参基因具体可为GAPDH基因。所述试剂还包括用于扩增GAPDH基因的由序列4所示的单链DNA分子和序列5所示的单链DNA分子组成的引物对。

所述相对表达量的计算方法具体如下：以待测者cDNA为模板，采用上述引物对进行实时荧光定量PCR，然后使用2^-ΔCt法计算获得。所述待测者cDNA可为待测者外周血中分离的PBMCs的cDNA。

所述实时荧光定量PCR的体系可采用KAPA^TM 快速定量PCR试剂盒进行配制，具体如下：2×Green Master Mix 10μL，正向引物(浓度为10μM)0.4μL，反向引物(浓度为10μM)0.4μL，cDNA(5-20ng)2μL，用无核酶水补足总体系20μL。正向引物和反向引物分别为用于扩增ABCA2基因的序列1所示的单链DNA分子和序列2所示的单链DNA分子或用于扩增GAPDH基因的序列4所示的单链DNA分子和序列5所示的单链DNA分子。

所述实时荧光定量PCR的反应条件具体如下：预变性：95℃3min；扩增反应：95℃5s，60℃30s，在延伸阶段检测荧光信号，40个循环。

ABCA2基因或ABCA2蛋白作为标志物在开发活动性结核病和/或菌阳肺结核病和/或菌阴肺结核病和/或肺外结核病的诊断试剂中的应用也属于本发明的保护范围。

上述引物对也属于本发明的保护范围。

上述任一所述的应用或试剂盒中，所述ABCA2基因序列如序列表中的序列6所示，所述ABCA2蛋白的氨基酸序列如序列表中的序列7所示。

本发明采用荧光定量PCR检测活动性结核病患者PBMCs中的ABCA2基因的表达量。结果显示ABCA2在菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者PBMCs中的相对表达量均显著低于结核潜伏感染者和健康对照者。受试者工作特征曲线分析结果表明，ABCA2可区分活动性结核病和结核潜伏感染，成为诊断活动性结核病的诊断靶点。

附图说明

图1为实时荧光定量PCR检测菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者、肺外结核病患者和潜伏感染者PBMCs中ABCA2的表达水平。

图2为实时荧光定量PCR检测菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者、肺外结核病患者和健康对照者PBMCs中ABCA2的表达水平。

图3为ROC曲线分析菌阳肺结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中ABCA2的表达水平。

图4为ROC曲线分析菌阴肺结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中ABCA2的表达水平。

图5为ROC曲线分析肺外结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中ABCA2的表达水平。

图6为ROC曲线分析菌阳肺结核病患者和健康对照者PBMCs中ABCA2的表达水平。

图7为ROC曲线分析菌阴肺结核病患者和健康对照者PBMCs中ABCA2的表达水平。

图8为ROC曲线分析肺外结核病患者和健康对照者PBMCs中ABCA2的表达水平。

图9为ROC曲线分析活动性结核病患者(包括菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者、肺外结核病患者)和结核潜伏感染者PBMCs中ABCA2的表达水平。

图10为ROC曲线分析活动性结核病患者(包括菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者、肺外结核病患者)和健康对照者PBMCs中ABCA2的表达水平。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

下述实施例中的ABCA2基因序列如序列表中的序列6所示，ABCA2蛋白的氨基酸序列如序列表中的序列7所示。

下述实施例中的活动性结核病包括菌阳肺结核病、菌阴肺结核病和肺外结核病。

活动性结核病是指由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染病。发生于肺组织、气管、支气管和胸膜的结核病变称之为肺结核，发生于其它部位的结核病变称之为肺外结核。

菌阳肺结核病是指痰涂片阳性或痰培养阳性的肺结核，菌阴肺结核病是指临床诊断的痰涂片阴性和/或痰培养阴性的肺结核。

实施例1、活动性结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中的ABCA2表达水平检测及其关联性分析

一、实验材料和方法

1、外周血样本的获得

受试者外周血样本：来源于151例患者和31例健康者的外周血样本。151例患者由120例活动性结核病患者和31例结核潜伏感染者组成，其中，120例活动性结核病患者的具体组成如下：经临床确诊的43例菌阳肺结核病患者、经临床确诊的59例菌阴肺结核病患者、经临床确诊的18例肺外结核病患者。

外周血样本的获得方法具体如下：分别抽取151例患者和31例健康者(均知情同意)的外周血2-3mL，置于含EDTA抗凝采血管，上下颠倒5-6次(目的为抗凝液和外周血混匀)，得到外周血标本。

2、外周血单个核细胞(PBMCs)的分离

分离受试者外周血单个核细胞(PBMCs)。具体步骤如下(6h内完成下述步骤)：采集受试者抗凝外周血2mL，先用基础培养基RPMI-1640进行1：1稀释，然后用淋巴细胞分离液进行密度梯度离心(Ficoll，GE Biosciences，USA)，收集中间单个核细胞层的细胞，再用RPMI-1640培养基洗两遍，得到PBMCs。

3、RNA的提取

使用TRIzol^TM Reagent(Invitrogen，USA)分别提取每个样本的PBMCs的RNA。具体步骤如下：向每个样本的PBMCs中加入0.5mL TRIzol和0.1mL氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟；12000g、4℃离心15分钟，分离上层无色水相，然后加入0.25mL异丙醇，颠倒数次混匀，室温沉淀10min；12000g、4℃离心10分钟，弃上清，用1mL含75％乙醇的无核酶水清洗RNA沉淀；7500g、4℃离心10分钟，弃上清，RNA沉淀置于冰上晾干(5-10min)，用30μL无核酶水溶解RNA沉淀，-80℃度保存备用。

4、cDNA的合成

使用PrimeScript^TM RT reagent Kit with gDNA Eraser(TaKaRaBiotechnology，Japan)将步骤3提取的RNA进行反转录，得到cDNA。具体步骤如下：先去除基因组DNA，反应体系为：5×gDNA Eraser Buffer 2μL，gDNA Eraser 1μL，RNA 0.5μg，用无核酶水补至10μL。反应条件为：42℃反应2min。然后进行反转录，反应体系为：去除基因组DNA的反应液10μL，RT Enzyme Mix I 1μL，RT Primer Mix 1μL，5×PrimerScript Buffer 4μL，用无核酶水补至20μL。反转录条件为：37℃15min，85℃5s。

5、引物序列和合成

委托上海生工生物科技有限公司合成引物，并使用HPLC纯化，引物序列如表1所示。

表1、引物序列

6、实时荧光定量PCR(RT-PCR)

采用KAPA^TM 快速定量PCR试剂盒(Kapa Biosystems，USA)配制定量PCR体系：2×Green Master Mix 10μL，正向引物(浓度为10μM)0.4μL，反向引物(浓度为10μM)0.4μL，cDNA(5-20ng)2μL，用无核酶水补足总体系20μL。以GAPDH基因作为内参基因。正向引物和反向引物分别为ABCA2-F和ABCA2-R或GAPDH-F和GAPDH-R。使用罗氏公司的Ⅱ荧光定量PCR仪进行荧光定量PCR检测。反应条件：预变性：95℃3min；扩增反应：95℃5s，60℃30s，在延伸阶段检测荧光信号，40个循环。使用2^-ΔCt计算相对表达量。

7、统计分析

使用GraphPad Prism 5进行统计分析。

二、实验结果

1、活动性结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中的ABCA2相对表达量

采用RT-PCR检测43例菌阳肺结核病患者、59例菌阴肺结核病患者、18例肺外结核病患者、31例结核潜伏感染者PBMCs中的ABCA2相对表达量。结果如图1所示，结果显示ABCA2在活动性结核病患者，包括菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者PBMCs中的相对表达量均显著低于结核潜伏感染者(p<0.0001)。说明ABCA2的表达量在区分活动性结核病患者和结核潜伏感染者方面具有重要价值。

2、活动性结核病患者和健康者PBMCs中的ABCA2相对表达量

采用RT-PCR检测43例菌阳肺结核病患者、59例菌阴肺结核病患者、18例肺外结核病患者和31例健康者PBMCs中的ABCA2相对表达量。结果如图2所示，结果显示ABCA2在活动性结核病患者，包括菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者PBMCs中的相对表达量均显著低于健康者(p<0.0001)。说明ABCA2的表达量在诊断活动性结核病方面具有重要价值。

3、菌阳肺结核病患者和结核潜伏感染者的工作特征曲线分析

根据菌阳肺结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中ABCA2的相对表达量，使用GraphPad Prism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图3所示，结果显示ROC曲线下面积为0.9306，p<0.0001。说明ABCA2的表达量在区分菌阳肺结核病患者和结核潜伏感染者方面具有重要价值。

4、菌阴肺结核病患者和结核潜伏感染者的工作特征曲线分析

根据菌阴肺结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中ABCA2的相对表达量，使用GraphPad Prism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图4所示，结果显示ROC曲线下面积为0.9183，p<0.0001。说明ABCA2的表达量在区分菌阴肺结核病患者和结核潜伏感染者方面具有重要价值。

5、肺外结核病患者和结核潜伏感染者的工作特征曲线分析

根据肺外结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中ABCA2的相对表达量，使用GraphPad Prism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图5所示，结果显示ROC曲线下面积为0.8853，p<0.0001。说明ABCA2的表达量在区分肺外结核病患者和结核潜伏感染者方面具有重要价值。

6、菌阳肺结核病患者和健康者的工作特征曲线分析

根据菌阳肺结核病患者和健康者PBMCs中ABCA2的相对表达量，使用GraphPadPrism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图6所示，结果显示ROC曲线下面积为0.9377，p<0.0001。说明ABCA2的表达量在诊断菌阳肺结核病方面具有重要价值。

7、菌阴肺结核病患者和健康者的工作特征曲线分析

根据菌阴肺结核病患者和健康者PBMCs中ABCA2的相对表达量，使用GraphPadPrism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图7所示，结果显示ROC曲线下面积为0.9196，p<0.0001。说明ABCA2的表达量在诊断菌阴肺结核病方面具有重要价值。

8、肺外结核病患者和健康者的工作特征曲线分析

根据肺外结核病患者和健康者PBMCs中ABCA2的相对表达量，使用GraphPad Prism5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图8所示，结果显示ROC曲线下面积为0.8889，p<0.0001。说明ABCA2的表达量在诊断肺外结核病方面具有重要价值。

9、活动性结核病患者和结核潜伏感染者的工作特征曲线分析

根据活动性结核病患者(包括菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者)和结核潜伏感染者PBMCs中ABCA2的相对表达量，使用GraphPad Prism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图9所示，结果显示ROC曲线下面积为0.9177，p<0.0001。说明ABCA2的表达量在区分活动性结核病患者与结核潜伏感染者方面具有重要价值。

10、活动性结核病患者和健康对照者的工作特征曲线分析

根据活动性结核病患者(包括菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者)和健康对照者PBMCs中ABCA2的相对表达量，使用GraphPad Prism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图10所示，结果显示ROC曲线下面积为0.9215，p<0.0001。说明ABCA2的表达量在诊断活动性结核病方面具有重要价值。

在实际应用中，可根据如下判断标准区分活动性结核病患者与结核潜伏感染者：如果待测者外周血中ABCA2基因的相对表达量低于0.02124(灵敏度为92.5％，置信区间为86.24％～96.51％；特异性为80.65％，置信区间为62.53％～92.55％)，则待测者为或疑似为活动性结核病患者；如果待测者外周血中ABCA2基因的相对表达量等于或高于0.02124，则待测者为或疑似为结核潜伏感染者。

还可根据如下判断标准诊断活动性结核病：如果待测者外周血中ABCA2基因的相对表达量低于0.01701(灵敏度为82.5％，置信区间为74.5％～88.83％；特异性为87.1％，置信区间为70.17％～96.37％)，则待测者为或疑似为活动性结核病患者；如果待测者外周血中ABCA2基因的相对表达量等于或高于0.01701，则待测者不为或疑似不为活动性结核病患者。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

序列表

<110>中国人民解放军总医院第八医学中心

<120>基于ABCA2荧光定量PCR诊断活动性结核病的试剂盒

<160>7

<170>PatentIn version 3.5

<210>1

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>1

ctcgtgcacc tcatgaccag 20

<210>2

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>2

gagtcacgtt gcccacaaaa 20

<210>3

<211>115

<212>DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>3

ctcgtgcacc tcatgaccag caaccccaaa atcctgtacg cgcctgcggg ctctgaggtc 60

gaccgcgtca tcctcaaggc caacgagact tttgcttttg tgggcaacgt gactc 115

<210>4

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>4

tgttgccatc aatgacccct 20

<210>5

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>5

tcgccccact tgattttgga 20

<210>6

<211>8103

<212>DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>6

gcgcgggcga tgcccagcgg cgcggcgggc tgcggggccc ggcggggcgc gcagaggagc 60

gggccgcggc gctgaggcgg cggagcgtgg ccccgccatg ggcttcctgc accagctgca 120

gctgctgctc tggaagaacg tgacgctcaa acgccggagc ccgtgggtcc tggccttcga 180

gatcttcatc cccctggtgc tgttctttat cctgctgggg ctgcgacaga agaagcccac 240

catctccgtg aaggaagtct ccttctacac agcggcgccc ctgacgtctg ccggcatcct 300

gcctgtcatg caatcgctgt gcccggacgg ccagcgagac gagttcggct tcctgcagta 360

cgccaactcc acggtcacgc agctgcttga gcgcctggac cgcgtggtgg aggaaggcaa 420

cctgtttgac ccagcgcggc ccagcctggg ctcagagctc gaggccctac gccagcatct 480

ggaggccctc agtgcgggcc cgggcacctc ggggagccac ctggacagat ccacagtgtc 540

ttccttctct ctggactcgg tggccagaaa cccgcaggag ctctggcgtt tcctgacgca 600

aaacttgtcg ctgcccaata gcacggccca agcactcttg gccgcccgtg tggacccgcc 660

cgaggtctac cacctgctct ttggtccctc atctgccctg gattcacagt ctggcctcca 720

caagggtcag gagccctgga gccgcctagg gggcaatccc ctgttccgga tggaggagct 780

gctgctggct cctgccctcc tggagcagct cacctgcacg ccgggctcgg gggagctggg 840

ccggatcctc actgtgcctg agagtcagaa gggagccctg cagggctacc gggatgctgt 900

ctgcagtggg caggctgctg cgcgtgccag gcgcttctct gggctgtctg ctgagctccg 960

gaaccagctg gacgtggcca aggtctccca gcagctgggc ctggatgccc ccaacggctc 1020

ggactcctcg ccacaggcgc cacccccacg gaggctgcag gcgcttctgg gggacctgct 1080

ggatgcccag aaggttctgc aggatgtgga tgtcctgtcg gccctggccc tgctactgcc 1140

ccagggtgcc tgcactggcc ggacccccgg acccccagcc agtggtgcgg gtggggcggc 1200

caatggcact ggggcagggg cagtcatggg ccccaacgcc accgctgagg agggcgcacc 1260

ctctgctgca gcactggcca ccccggacac gctgcagggc cagtgctcag ccttcgtaca 1320

gctctgggcc ggcctgcagc ccatcttgtg tggcaacaac cgcaccattg aacccgaggc 1380

gctgcggcgg ggcaacatga gctccctggg cttcacgagc aaggagcagc ggaacctggg 1440

cctcctcgtg cacctcatga ccagcaaccc caaaatcctg tacgcgcctg cgggctctga 1500

ggtcgaccgc gtcatcctca aggccaacga gacttttgct tttgtgggca acgtgactca 1560

ctatgcccag gtctggctca acatctcggc ggagatccgc agcttcctgg agcagggcag 1620

gctgcagcaa cacctgcgct ggctgcagca gtatgtagca gagctgcggc tgcaccccga 1680

ggcactgaac ctgtcactgg atgagctgcc gccggccctg agacaggaca acttctcgct 1740

gcccagtggc atggccctcc tgcagcagct ggataccatt gacaacgcgg cctgcggctg 1800

gatccagttc atgtccaagg tgagcgtgga catcttcaag ggcttccccg acgaggagag 1860

cattgtcaac tacaccctca accaggccta ccaggacaac gtcactgttt ttgccagtgt 1920

gatcttccag acccggaagg acggctcgct cccgcctcac gtgcactaca agatccgcca 1980

gaactccagc ttcaccgaga aaaccaacga gatccgccgc gcctactggc ggcctgggcc 2040

caatactggc ggccgcttct acttcctcta cggcttcgtc tggatccagg acatgatgga 2100

gcgcgccatc atcgacactt ttgtggggca cgatgtggtg gagccaggca gctacgtgca 2160

gatgttcccc tacccctgct acacacgcga tgacttcctg tttgtcattg agcacatgat 2220

gccgctgtgc atggtgatct cctgggtcta ctccgtggcc atgaccatcc agcacatcgt 2280

ggcggagaag gagcaccggc tcaaggaggt gatgaagacc atgggcctga acaacgcggt 2340

gcactgggtg gcctggttca tcaccggctt tgtgcagctg tccatctccg tgacagcact 2400

caccgccatc ctgaagtacg gccaggtgct tatgcacagc cacgtggtca tcatctggct 2460

cttcctggca gtctacgcgg tggccaccat catgttctgc ttcctggtgt ctgtgctgta 2520

ctccaaggcc aagctggcct cggcctgcgg tggcatcatc tacttcctga gctacgtgcc 2580

ctacatgtac gtggcgatcc gagaggaggt ggcgcatgat aagatcacgg ccttcgagaa 2640

gtgcatcgcg tccctcatgt ccacgacggc ctttggtctg ggctctaagt acttcgcgct 2700

gtatgaggtg gccggcgtgg gcatccagtg gcacaccttc agccagtccc cggtggaggg 2760

ggacgacttc aacttgctcc tggctgtcac catgctgatg gtggacgccg tggtctatgg 2820

catcctcacg tggtacattg aggctgtgca cccaggcatg tacgggctgc cccggccctg 2880

gtacttccca ctgcagaagt cctactggct gggcagtggg cggacagaag cctgggagtg 2940

gagctggccg tgggcacgca ccccccgcct cagtgtcatg gaggaggacc aggcctgtgc 3000

catggagagc cggcgctttg aggagacccg tggcatggag gaggagccca cccacctgcc 3060

tctggttgtc tgcgtggaca aactcaccaa ggtctacaag gacgacaaga agctggccct 3120

gaacaagctg agcctgaacc tctacgagaa ccaggtggtc tccttcttgg gccacaacgg 3180

ggcgggcaag accaccacca tgtccatcct gaccggcctg ttccctccaa cgtcgggttc 3240

cgccaccatc tacgggcacg acatccgcac ggagatggat gagatccgca agaacctggg 3300

catgtgcccg cagcacaatg tgctctttga ccggctcacg gtggaggaac acctctggtt 3360

ctactcacgg ctcaagagca tggctcagga ggagatccgc agagagatgg acaagatgat 3420

cgaggacctg gagctctcca acaaacggca ctcactggtg cagacattgt cgggtggcat 3480

gaagcgcaag ctgtccgtgg ccatcgcctt cgtgggcggc tctcgcgcca tcatcctgga 3540

cgagcccacg gcgggcgtgg acccctacgc gcgccgcgcc atctgggacc tcatcctgaa 3600

gtacaagcca ggccgcacca tccttctgtc cacccaccac atggatgagg ctgacctgct 3660

tggggaccgc attgccatca tctcccatgg gaagctcaag tgctgcggct ccccgctctt 3720

cctcaagggc acctatggcg acgggtaccg cctcacgctg gtcaagcggc ccgccgagcc 3780

ggggggcccc caagagccag ggctggcatc cagcccccca ggtcgggccc cgctgagcag 3840

ctgctccgag ctccaggtgt cccagttcat ccgcaagcat gtggcctcct gcctgctggt 3900

ctcagacaca agcacggagc tctcctacat cctgcccagc gaggccgcca agaagggggc 3960

tttcgagcgc ctcttccagc acctggagcg cagcctggat gcactgcacc tcagcagctt 4020

cgggctgatg gacacgaccc tggaggaagt gttcctcaag gtgtcggagg aggatcagtc 4080

gctggagaac agtgaggccg atgtgaagga gtccaggaag gatgtgctcc ctggggcgga 4140

gggcccggcg tctggggagg gtcacgctgg caatctggcc cggtgctcgg agctgaccca 4200

gtcgcaggca tcgctgcagt cggcgtcatc tgtgggctct gcccgtggcg acgagggagc 4260

tggctacacc gacgtctatg gcgactaccg ccccctcttt gataacccac aggacccaga 4320

caatgtcagc ctgcaagagg tggaggcaga ggccctgtcg agggtcggcc agggcagccg 4380

caagctggac ggcgggtggc tgaaggtgcg ccagttccac gggctgctgg tcaaacgctt 4440

ccactgcgcc cgccgcaact ccaaggcact cttctcccag atcttgctgc cagccttctt 4500

cgtctgcgtg gccatgaccg tggccctgtc cgtcccggag attggtgatc tgcccccgct 4560

ggtcctgtca ccttcccagt accacaacta cacccagccc cgtggcaatt tcatccccta 4620

cgccaacgag gagcgccgcg agtaccggct gcggctatcg cccgacgcca gcccccagca 4680

gctcgtgagc acgttccggc tgccgtcggg ggtgggtgcc acctgcgtgc tcaagtctcc 4740

cgccaacggc tcgctggggc ccacgttgaa cctgagcagc ggggagtcgc gcctgctggc 4800

ggctcggttc ttcgacagca tgtgtctgga gtccttcaca caggggctgc cactgtccaa 4860

tttcgtgcca cccccaccct cgcccgcccc atctgactcg ccagcgtccc cggatgagga 4920

cctgcaggcc tggaacgtct ccctgccgcc caccgctggg ccagaaatgt ggacgtcggc 4980

accctccctg ccgcgcctgg tacgggagcc cgtccgctgc acctgctctg cgcagggcac 5040

cggcttctcc tgccccagca gtgtgggcgg gcacccgccc cagatgcggg tggtcacagg 5100

cgacatcctg accgacatca ccggccacaa tgtctctgag tacctgctct tcacctccga 5160

ccgcttccga ctgcaccggt atggggccat cacctttgga aacgtcctga agtccatccc 5220

agcctcattt ggcaccaggg ccccacccat ggtgcggaag atcgcggtgc gcagggctgc 5280

ccaggttttc tacaacaaca agggctatca cagcatgccc acctacctca acagcctcaa 5340

caacgccatc ctgcgtgcca acctgcccaa gagcaagggc aacccggcgg cttacggcat 5400

caccgtcacc aaccacccca tgaataagac cagcgccagc ctctccctgg attacctgct 5460

gcagggcacg gatgtcgtca tcgccatctt catcatcgtg gccatgtcct tcgtgccggc 5520

cagcttcgtt gtcttcctcg tggccgagaa gtccaccaag gccaagcacc tgcagtttgt 5580

cagcggctgc aaccccatca tctactggct ggcgaactac gtgtgggaca tgctcaacta 5640

cctggtcccc gctacctgct gtgtcatcat cctgtttgtg ttcgacctgc cggcctacac 5700

gtcgcccacc aacttccctg ccgtcctctc cctcttcctg ctctatgggt ggtccatcac 5760

gcccatcatg tacccggcct ccttctggtt cgaggtcccc agctccgcct acgtgttcct 5820

cattgtcatc aatctcttca tcggcatcac cgccaccgtg gccaccttcc tgctacagct 5880

cttcgagcac gacaaggacc tgaaggttgt caacagttac ctgaaaagct gcttcctcat 5940

tttccccaac tacaacctgg gccacgggct catggagatg gcctacaacg agtacatcaa 6000

cgagtactac gccaagattg gccagtttga caagatgaag tccccgttcg agtgggacat 6060

tgtcacccgc ggactggtgg ccatggcggt tgagggcgtc gtgggcttcc tcctgaccat 6120

catgtgccag tacaacttcc tgcggcggcc acagcgcatg cctgtgtcta ccaagcctgt 6180

ggaggatgat gtggacgtgg ccagtgagcg gcagcgagtg ctccggggag acgccgacaa 6240

tgacatggtc aagattgaga acctgaccaa ggtctacaag tcccggaaga ttggccgtat 6300

cctggccgtt gaccgcctgt gcctgggtgt gcgtcctggc gagtgcttcg ggctcctggg 6360

cgtcaacggt gcgggcaaga ccagcacctt caagatgctg accggcgacg agagcacgac 6420

ggggggcgag gccttcgtca atggacacag cgtgctgaag gagctgctcc aggtgcagca 6480

gagcctcggc tactgcccgc agtgtgacgc gctgttcgac gagctcacgg cccgggagca 6540

cctgcagctg tacacgcggc tgcgtgggat ctcctggaag gacgaggccc gggtggtgaa 6600

gtgggctctg gagaagctgg agctgaccaa gtacgcagac aagccggctg gcacctacag 6660

cggcggcaac aagcggaagc tctccacggc catcgccctc attgggtacc cagccttcat 6720

cttcctggac gagcccacca caggcatgga ccccaaggcc cggcgcttcc tctggaacct 6780

catccttgac ctcatcaaga cagggcgttc agtggtgctg acatcacaca gcatggagga 6840

gtgcgaggcg ctgtgcacgc ggctggccat catggtgaac ggtcgcctgc ggtgcctggg 6900

cagcatccag cacctgaaga accggtttgg agatggctac atgatcacgg tgcggaccaa 6960

gagcagccag agtgtgaagg acgtggtgcg gttcttcaac cgcaacttcc cggaagccat 7020

gctcaaggag cggcaccaca caaaggtgca gtaccagctc aagtcggagc acatctcgct 7080

ggcccaggtg ttcagcaaga tggagcaggt gtctggcgtg ctgggcatcg aggactactc 7140

ggtcagccag accacactgg acaatgtgtt cgtgaacttt gccaagaagc agagtgacaa 7200

cctggagcag caggagacgg agccgccatc cgcactgcag tcccctctcg gctgcttgct 7260

cagcctgctc cggccccggt ctgcccccac ggagctccgg gcacttgtgg cagacgagcc 7320

cgaggacctg gacacggagg acgagggcct catcagcttc gaggaggagc gggcccagct 7380

gtccttcaac acggacacgc tctgctgacc acccagagct gggccaggga ggacacgctc 7440

cactgaccac ccagagctgg gccagggact caacaatggg gacagaagtc ccccagtgcc 7500

tgccagggcc tggagtggag gttcaggacc aaggggcttc tggtcctcca gcccctgtac 7560

tcggccatgc cctgtggtca ctgcggttgc cgcccctaat tgtgccaaag gctgacccgg 7620

cccgggctgc gtacaccctt gccctgcttt gccttaaagc ctcggggtct gcccggcccc 7680

tcgcccctgc ctggcactgc tcaccgccca aggcgacgcc ggctggacca ggcactgctg 7740

gcctttctcc tgcccggcct cggaaccagc ttttctctct tacgatgaag gctgatgccg 7800

agagcgggct gtgggcggag ctgggtcagt cccgtattta ttttgctttg agaagaggct 7860

cctctggccc tgctctcctg cagggaggtg gctgtcctgc gggaagccat cagcttgggc 7920

cagctggcag gtggcaggaa tggagaagct gaccctgctg gccaggcaag gggccagacc 7980

ccccccaacc cccagctgcc atcgctctcc cacccagctt ggccccctgc ccgcccacct 8040

ccctgggagc cgggcctgta catagcgcac agatgtttgt tttaaataaa taaacaaaat 8100

gtc 8103

<210>7

<211>2436

<212>PRT

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>7

Met Gly Phe Leu His Gln Leu Gln Leu Leu Leu Trp Lys Asn Val Thr

1 5 10 15

Leu Lys Arg Arg Ser Pro Trp Val Leu Ala Phe Glu Ile Phe Ile Pro

20 25 30

Leu Val Leu Phe Phe Ile Leu Leu Gly Leu Arg Gln Lys Lys Pro Thr

35 40 45

Ile Ser Val Lys Glu Val Ser Phe Tyr Thr Ala Ala Pro Leu Thr Ser

50 55 60

Ala Gly Ile Leu Pro Val Met Gln Ser Leu Cys Pro Asp Gly Gln Arg

65 70 75 80

Asp Glu Phe Gly Phe Leu Gln Tyr Ala Asn Ser Thr Val Thr Gln Leu

85 90 95

Leu Glu Arg Leu Asp Arg Val Val Glu Glu Gly Asn Leu Phe Asp Pro

100 105 110

Ala Arg Pro Ser Leu Gly Ser Glu Leu Glu Ala Leu Arg Gln His Leu

115 120 125

Glu Ala Leu Ser Ala Gly Pro Gly Thr Ser Gly Ser His Leu Asp Arg

130 135 140

Ser Thr Val Ser Ser Phe Ser Leu Asp Ser Val Ala Arg Asn Pro Gln

145 150 155 160

Glu Leu Trp Arg Phe Leu Thr Gln Asn Leu Ser Leu Pro Asn Ser Thr

165 170 175

Ala Gln Ala Leu Leu Ala Ala Arg Val Asp Pro Pro Glu Val Tyr His

180 185 190

Leu Leu Phe Gly Pro Ser Ser Ala Leu Asp Ser Gln Ser Gly Leu His

195 200 205

Lys Gly Gln Glu Pro Trp Ser Arg Leu Gly Gly Asn Pro Leu Phe Arg

210 215 220

Met Glu Glu Leu Leu Leu Ala Pro Ala Leu Leu Glu Gln Leu Thr Cys

225 230 235 240

Thr Pro Gly Ser Gly Glu Leu Gly Arg Ile Leu Thr Val Pro Glu Ser

245 250 255

Gln Lys Gly Ala Leu Gln Gly Tyr Arg Asp Ala Val Cys Ser Gly Gln

260 265 270

Ala Ala Ala Arg Ala Arg Arg Phe Ser Gly Leu Ser Ala Glu Leu Arg

275 280 285

Asn Gln Leu Asp Val Ala Lys Val Ser Gln Gln Leu Gly Leu Asp Ala

290 295 300

Pro Asn Gly Ser Asp Ser Ser Pro Gln Ala Pro Pro Pro Arg Arg Leu

305 310 315 320

Gln Ala Leu Leu Gly Asp Leu Leu Asp Ala Gln Lys Val Leu Gln Asp

325 330 335

Val Asp Val Leu Ser Ala Leu Ala Leu Leu Leu Pro Gln Gly Ala Cys

340 345 350

Thr Gly Arg Thr Pro Gly Pro Pro Ala Ser Gly Ala Gly Gly Ala Ala

355 360 365

Asn Gly Thr Gly Ala Gly Ala Val Met Gly Pro Asn Ala Thr Ala Glu

370 375 380

Glu Gly Ala Pro Ser Ala Ala Ala Leu Ala Thr Pro Asp Thr Leu Gln

385 390 395 400

Gly Gln Cys Ser Ala Phe Val Gln Leu Trp Ala Gly Leu Gln Pro Ile

405 410 415

Leu Cys Gly Asn Asn Arg Thr Ile Glu Pro Glu Ala Leu Arg Arg Gly

420 425 430

Asn Met Ser Ser Leu Gly Phe Thr Ser Lys Glu Gln Arg Asn Leu Gly

435 440 445

Leu Leu Val His Leu Met Thr Ser Asn Pro Lys Ile Leu Tyr Ala Pro

450 455 460

Ala Gly Ser Glu Val Asp Arg Val Ile Leu Lys Ala Asn Glu Thr Phe

465 470 475 480

Ala Phe Val Gly Asn Val Thr His Tyr Ala Gln Val Trp Leu Asn Ile

485 490 495

Ser Ala Glu Ile Arg Ser Phe Leu Glu Gln Gly Arg Leu Gln Gln His

500 505 510

Leu Arg Trp Leu Gln Gln Tyr Val Ala Glu Leu Arg Leu His Pro Glu

515 520 525

Ala Leu Asn Leu Ser Leu Asp Glu Leu Pro Pro Ala Leu Arg Gln Asp

530 535 540

Asn Phe Ser Leu Pro Ser Gly Met Ala Leu Leu Gln Gln Leu Asp Thr

545 550 555 560

Ile Asp Asn Ala Ala Cys Gly Trp Ile Gln Phe Met Ser Lys Val Ser

565 570 575

Val Asp Ile Phe Lys Gly Phe Pro Asp Glu Glu Ser Ile Val Asn Tyr

580 585 590

Thr Leu Asn Gln Ala Tyr Gln Asp Asn Val Thr Val Phe Ala Ser Val

595 600 605

Ile Phe Gln Thr Arg Lys Asp Gly Ser Leu Pro Pro His Val His Tyr

610 615 620

Lys Ile Arg Gln Asn Ser Ser Phe Thr Glu Lys Thr Asn Glu Ile Arg

625 630 635 640

Arg Ala Tyr Trp Arg Pro Gly Pro Asn Thr Gly Gly Arg Phe Tyr Phe

645 650 655

Leu Tyr Gly Phe Val Trp Ile Gln Asp Met Met Glu Arg Ala Ile Ile

660 665 670

Asp Thr Phe Val Gly His Asp Val Val Glu Pro Gly Ser Tyr Val Gln

675 680 685

Met Phe Pro Tyr Pro Cys Tyr Thr Arg Asp Asp Phe Leu Phe Val Ile

690 695 700

Glu His Met Met Pro Leu Cys Met Val Ile Ser Trp Val Tyr Ser Val

705 710 715 720

Ala Met Thr Ile Gln His Ile Val Ala Glu Lys Glu His Arg Leu Lys

725 730 735

Glu Val Met Lys Thr Met Gly Leu Asn Asn Ala Val His Trp Val Ala

740 745 750

Trp Phe Ile Thr Gly Phe Val Gln Leu Ser Ile Ser Val Thr Ala Leu

755 760 765

Thr Ala Ile Leu Lys Tyr Gly Gln Val Leu Met His Ser His Val Val

770 775 780

Ile Ile Trp Leu Phe Leu Ala Val Tyr Ala Val Ala Thr Ile Met Phe

785 790 795 800

Cys Phe Leu Val Ser Val Leu Tyr Ser Lys Ala Lys Leu Ala Ser Ala

805 810 815

Cys Gly Gly Ile Ile Tyr Phe Leu Ser Tyr Val Pro Tyr Met Tyr Val

820 825 830

Ala Ile Arg Glu Glu Val Ala His Asp Lys Ile Thr Ala Phe Glu Lys

835 840 845

Cys Ile Ala Ser Leu Met Ser Thr Thr Ala Phe Gly Leu Gly Ser Lys

850 855 860

Tyr Phe Ala Leu Tyr Glu Val Ala Gly Val Gly Ile Gln Trp His Thr

865 870 875 880

Phe Ser Gln Ser Pro Val Glu Gly Asp Asp Phe Asn Leu Leu Leu Ala

885 890 895

Val Thr Met Leu Met Val Asp Ala Val Val Tyr Gly Ile Leu Thr Trp

900 905 910

Tyr Ile Glu Ala Val His Pro Gly Met Tyr Gly Leu Pro Arg Pro Trp

915 920 925

Tyr Phe Pro Leu Gln Lys Ser Tyr Trp Leu Gly Ser Gly Arg Thr Glu

930 935 940

Ala Trp Glu Trp Ser Trp Pro Trp Ala Arg Thr Pro Arg Leu Ser Val

945 950 955 960

Met Glu Glu Asp Gln Ala Cys Ala Met Glu Ser Arg Arg Phe Glu Glu

965 970 975

Thr Arg Gly Met Glu Glu Glu Pro Thr His Leu Pro Leu Val Val Cys

980 985 990

Val Asp Lys Leu Thr Lys Val Tyr Lys Asp Asp Lys Lys Leu Ala Leu

995 1000 1005

Asn Lys Leu Ser Leu Asn Leu Tyr Glu Asn Gln Val Val Ser Phe

1010 1015 1020

Leu Gly His Asn Gly Ala Gly Lys Thr Thr Thr Met Ser Ile Leu

1025 1030 1035

Thr Gly Leu Phe Pro Pro Thr Ser Gly Ser Ala Thr Ile Tyr Gly

1040 1045 1050

His Asp Ile Arg Thr Glu Met Asp Glu Ile Arg Lys Asn Leu Gly

1055 1060 1065

Met Cys Pro Gln His Asn Val Leu Phe Asp Arg Leu Thr Val Glu

1070 1075 1080

Glu His Leu Trp Phe Tyr Ser Arg Leu Lys Ser Met Ala Gln Glu

1085 1090 1095

Glu Ile Arg Arg Glu Met Asp Lys Met Ile Glu Asp Leu Glu Leu

1100 1105 1110

Ser Asn Lys Arg His Ser Leu Val Gln Thr Leu Ser Gly Gly Met

1115 1120 1125

Lys Arg Lys Leu Ser Val Ala Ile Ala Phe Val Gly Gly Ser Arg

1130 1135 1140

Ala Ile Ile Leu Asp Glu Pro Thr Ala Gly Val Asp Pro Tyr Ala

1145 1150 1155

Arg Arg Ala Ile Trp Asp Leu Ile Leu Lys Tyr Lys Pro Gly Arg

1160 1165 1170

Thr Ile Leu Leu Ser Thr His His Met Asp Glu Ala Asp Leu Leu

1175 1180 1185

Gly Asp Arg Ile Ala Ile Ile Ser His Gly Lys Leu Lys Cys Cys

1190 1195 1200

Gly Ser Pro Leu Phe Leu Lys Gly Thr Tyr Gly Asp Gly Tyr Arg

1205 1210 1215

Leu Thr Leu Val Lys Arg Pro Ala Glu Pro Gly Gly Pro Gln Glu

1220 1225 1230

Pro Gly Leu Ala Ser Ser Pro Pro Gly Arg Ala Pro Leu Ser Ser

1235 1240 1245

Cys Ser Glu Leu Gln Val Ser Gln Phe Ile Arg Lys His Val Ala

1250 1255 1260

Ser Cys Leu Leu Val Ser Asp Thr Ser Thr Glu Leu Ser Tyr Ile

1265 1270 1275

Leu Pro Ser Glu Ala Ala Lys Lys Gly Ala Phe Glu Arg Leu Phe

1280 1285 1290

Gln His Leu Glu Arg Ser Leu Asp Ala Leu His Leu Ser Ser Phe

1295 1300 1305

Gly Leu Met Asp Thr Thr Leu Glu Glu Val Phe Leu Lys Val Ser

1310 1315 1320

Glu Glu Asp Gln Ser Leu Glu Asn Ser Glu Ala Asp Val Lys Glu

1325 1330 1335

Ser Arg Lys Asp Val Leu Pro Gly Ala Glu Gly Pro Ala Ser Gly

1340 1345 1350

Glu Gly His Ala Gly Asn Leu Ala Arg Cys Ser Glu Leu Thr Gln

1355 1360 1365

Ser Gln Ala Ser Leu Gln Ser Ala Ser Ser Val Gly Ser Ala Arg

1370 1375 1380

Gly Asp Glu Gly Ala Gly Tyr Thr Asp Val Tyr Gly Asp Tyr Arg

1385 1390 1395

Pro Leu Phe Asp Asn Pro Gln Asp Pro Asp Asn Val Ser Leu Gln

1400 1405 1410

Glu Val Glu Ala Glu Ala Leu Ser Arg Val Gly Gln Gly Ser Arg

1415 1420 1425

Lys Leu Asp Gly Gly Trp Leu Lys Val Arg Gln Phe His Gly Leu

1430 1435 1440

Leu Val Lys Arg Phe His Cys Ala Arg Arg Asn Ser Lys Ala Leu

1445 1450 1455

Phe Ser Gln Ile Leu Leu Pro Ala Phe Phe Val Cys Val Ala Met

1460 1465 1470

Thr Val Ala Leu Ser Val Pro Glu Ile Gly Asp Leu Pro Pro Leu

1475 1480 1485

Val Leu Ser Pro Ser Gln Tyr His Asn Tyr Thr Gln Pro Arg Gly

1490 1495 1500

Asn Phe Ile Pro Tyr Ala Asn Glu Glu Arg Arg Glu Tyr Arg Leu

1505 1510 1515

Arg Leu Ser Pro Asp Ala Ser Pro Gln Gln Leu Val Ser Thr Phe

1520 1525 1530

Arg Leu Pro Ser Gly Val Gly Ala Thr Cys Val Leu Lys Ser Pro

1535 1540 1545

Ala Asn Gly Ser Leu Gly Pro Thr Leu Asn Leu Ser Ser Gly Glu

1550 1555 1560

Ser Arg Leu Leu Ala Ala Arg Phe Phe Asp Ser Met Cys Leu Glu

1565 1570 1575

Ser Phe Thr Gln Gly Leu Pro Leu Ser Asn Phe Val Pro Pro Pro

1580 1585 1590

Pro Ser Pro Ala Pro Ser Asp Ser Pro Ala Ser Pro Asp Glu Asp

1595 1600 1605

Leu Gln Ala Trp Asn Val Ser Leu Pro Pro Thr Ala Gly Pro Glu

1610 1615 1620

Met Trp Thr Ser Ala Pro Ser Leu Pro Arg Leu Val Arg Glu Pro

1625 1630 1635

Val Arg Cys Thr Cys Ser Ala Gln Gly Thr Gly Phe Ser Cys Pro

1640 1645 1650

Ser Ser Val Gly Gly His Pro Pro Gln Met Arg Val Val Thr Gly

1655 1660 1665

Asp Ile Leu Thr Asp Ile Thr Gly His Asn Val Ser Glu Tyr Leu

1670 1675 1680

Leu Phe Thr Ser Asp Arg Phe Arg Leu His Arg Tyr Gly Ala Ile

1685 1690 1695

Thr Phe Gly Asn Val Leu Lys Ser Ile Pro Ala Ser Phe Gly Thr

1700 1705 1710

Arg Ala Pro Pro Met Val Arg Lys Ile Ala Val Arg Arg Ala Ala

1715 1720 1725

Gln Val Phe Tyr Asn Asn Lys Gly Tyr His Ser Met Pro Thr Tyr

1730 1735 1740

Leu Asn Ser Leu Asn Asn Ala Ile Leu Arg Ala Asn Leu Pro Lys

1745 1750 1755

Ser Lys Gly Asn Pro Ala Ala Tyr Gly Ile Thr Val Thr Asn His

1760 1765 1770

Pro Met Asn Lys Thr Ser Ala Ser Leu Ser Leu Asp Tyr Leu Leu

1775 1780 1785

Gln Gly Thr Asp Val Val Ile Ala Ile Phe Ile Ile Val Ala Met

1790 1795 1800

Ser Phe Val Pro Ala Ser Phe Val Val Phe Leu Val Ala Glu Lys

1805 1810 1815

Ser Thr Lys Ala Lys His Leu Gln Phe Val Ser Gly Cys Asn Pro

1820 1825 1830

Ile Ile Tyr Trp Leu Ala Asn Tyr Val Trp Asp Met Leu Asn Tyr

1835 1840 1845

Leu Val Pro Ala Thr Cys Cys Val Ile Ile Leu Phe Val Phe Asp

1850 1855 1860

Leu Pro Ala Tyr Thr Ser Pro Thr Asn Phe Pro Ala Val Leu Ser

1865 1870 1875

Leu Phe Leu Leu Tyr Gly Trp Ser Ile Thr Pro Ile Met Tyr Pro

1880 1885 1890

Ala Ser Phe Trp Phe Glu Val Pro Ser Ser Ala Tyr Val Phe Leu

1895 1900 1905

Ile Val Ile Asn Leu Phe Ile Gly Ile Thr Ala Thr Val Ala Thr

1910 1915 1920

Phe Leu Leu Gln Leu Phe Glu His Asp Lys Asp Leu Lys Val Val

1925 1930 1935

Asn Ser Tyr Leu Lys Ser Cys Phe Leu Ile Phe Pro Asn Tyr Asn

1940 1945 1950

Leu Gly His Gly Leu Met Glu Met Ala Tyr Asn Glu Tyr Ile Asn

1955 1960 1965

Glu Tyr Tyr Ala Lys Ile Gly Gln Phe Asp Lys Met Lys Ser Pro

1970 1975 1980

Phe Glu Trp Asp Ile Val Thr Arg Gly Leu Val Ala Met Ala Val

1985 1990 1995

Glu Gly Val Val Gly Phe Leu Leu Thr Ile Met Cys Gln Tyr Asn

2000 2005 2010

Phe Leu Arg Arg Pro Gln Arg Met Pro Val Ser Thr Lys Pro Val

2015 2020 2025

Glu Asp Asp Val Asp Val Ala Ser Glu Arg Gln Arg Val Leu Arg

2030 2035 2040

Gly Asp Ala Asp Asn Asp Met Val Lys Ile Glu Asn Leu Thr Lys

2045 2050 2055

Val Tyr Lys Ser Arg Lys Ile Gly Arg Ile Leu Ala Val Asp Arg

2060 2065 2070

Leu Cys Leu Gly Val Arg Pro Gly Glu Cys Phe Gly Leu Leu Gly

2075 2080 2085

Val Asn Gly Ala Gly Lys Thr Ser Thr Phe Lys Met Leu Thr Gly

2090 2095 2100

Asp Glu Ser Thr Thr Gly Gly Glu Ala Phe Val Asn Gly His Ser

2105 2110 2115

Val Leu Lys Glu Leu Leu Gln Val Gln Gln Ser Leu Gly Tyr Cys

2120 2125 2130

Pro Gln Cys Asp Ala Leu Phe Asp Glu Leu Thr Ala Arg Glu His

2135 2140 2145

Leu Gln Leu Tyr Thr Arg Leu Arg Gly Ile Ser Trp Lys Asp Glu

2150 2155 2160

Ala Arg Val Val Lys Trp Ala Leu Glu Lys Leu Glu Leu Thr Lys

2165 2170 2175

Tyr Ala Asp Lys Pro Ala Gly Thr Tyr Ser Gly Gly Asn Lys Arg

2180 2185 2190

Lys Leu Ser Thr Ala Ile Ala Leu Ile Gly Tyr Pro Ala Phe Ile

2195 2200 2205

Phe Leu Asp Glu Pro Thr Thr Gly Met Asp Pro Lys Ala Arg Arg

2210 2215 2220

Phe Leu Trp Asn Leu Ile Leu Asp Leu Ile Lys Thr Gly Arg Ser

2225 2230 2235

Val Val Leu Thr Ser His Ser Met Glu Glu Cys Glu Ala Leu Cys

2240 2245 2250

Thr Arg Leu Ala Ile Met Val Asn Gly Arg Leu Arg Cys Leu Gly

2255 2260 2265

Ser Ile Gln His Leu Lys Asn Arg Phe Gly Asp Gly Tyr Met Ile

2270 2275 2280

Thr Val Arg Thr Lys Ser Ser Gln Ser Val Lys Asp Val Val Arg

2285 2290 2295

Phe Phe Asn Arg Asn Phe Pro Glu Ala Met Leu Lys Glu Arg His

2300 2305 2310

His Thr Lys Val Gln Tyr Gln Leu Lys Ser Glu His Ile Ser Leu

2315 2320 2325

Ala Gln Val Phe Ser Lys Met Glu Gln Val Ser Gly Val Leu Gly

2330 2335 2340

Ile Glu Asp Tyr Ser Val Ser Gln Thr Thr Leu Asp Asn Val Phe

2345 2350 2355

Val Asn Phe Ala Lys Lys Gln Ser Asp Asn Leu Glu Gln Gln Glu

2360 2365 2370

Thr Glu Pro Pro Ser Ala Leu Gln Ser Pro Leu Gly Cys Leu Leu

2375 2380 2385

Ser Leu Leu Arg Pro Arg Ser Ala Pro Thr Glu Leu Arg Ala Leu

2390 2395 2400

Val Ala Asp Glu Pro Glu Asp Leu Asp Thr Glu Asp Glu Gly Leu

2405 2410 2415

Ile Ser Phe Glu Glu Glu Arg Ala Gln Leu Ser Phe Asn Thr Asp

2420 2425 2430

Thr Leu Cys

2435

Claims

1.检测ABCA2基因的物质或检测ABCA2基因编码的mRNA的物质或检测ABCA2基因编码的蛋白的物质在如下(a1)-(a16)中任一种中的应用：

(a1)诊断活动性结核病；

(a2)制备诊断活动性结核病的产品；

(a3)诊断待测者是否为活动性结核病患者；

(a4)制备诊断待测者是否为活动性结核病患者的产品；

(a5)诊断菌阳肺结核病；

(a6)制备诊断菌阳肺结核病的产品；

(a7)诊断待测者是否为菌阳肺结核病患者；

(a8)制备诊断待测者是否为菌阳肺结核病患者的产品；

(a9)诊断菌阴肺结核病；

(a10)制备诊断菌阴肺结核病的产品；

(a11)诊断待测者是否为菌阴肺结核病患者；

(a12)制备诊断待测者是否为菌阴肺结核病患者的产品；

(a13)诊断肺外结核病；

(a14)制备诊断肺外结核病的产品；

(a15)诊断待测者是否为肺外结核病患者；

(a16)制备诊断待测者是否为肺外结核病患者的产品。

2.检测ABCA2基因的物质或检测ABCA2基因编码的mRNA的物质或检测ABCA2基因编码的蛋白的物质在如下(b1)-(b16)中任一种中的应用：

(b1)区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染；

(b2)制备区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染的产品；

(b3)诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者；

(b5)区分或鉴别菌阳肺结核病和结核潜伏感染；

(b6)制备区分或鉴别菌阳肺结核病和结核潜伏感染的产品；

(b7)诊断待测者为菌阳肺结核病患者还是结核潜伏感染者；

(b9)区分或鉴别菌阴肺结核病和结核潜伏感染；

(b10)制备区分或鉴别菌阴肺结核病和结核潜伏感染的产品；

(b11)诊断待测者为菌阴肺结核病患者还是结核潜伏感染者；

(b13)区分或鉴别肺外结核病和结核潜伏感染；

(b14)制备区分或鉴别肺外结核病和结核潜伏感染的产品；

(b15)诊断待测者为肺外结核病患者还是结核潜伏感染者；

3.用于诊断活动性结核病的试剂盒，其包括检测ABCA2基因的物质或检测ABCA2基因编码的mRNA的物质或检测ABCA2基因编码的蛋白的物质。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含数据处理装置甲；所述数据处理装置甲由数据输入模块甲、数据记录模块甲、数据比较模块甲和结论输出模块甲组成；

所述数据输入模块甲用于输入ABCA2基因的相对表达量数值；

所述数据记录模块甲用于存储ABCA2基因的相对表达量数值；

所述结论输出模块甲用于显示结论，即如果待测者外周血中ABCA2基因的相对表达量低于0.01701，则待测者为或疑似为活动性结核病患者；如果待测者外周血中ABCA2基因的相对表达量等于或高于0.01701，则待测者不为或疑似不为活动性结核病患者；

或，所述活动性结核病包括菌阳肺结核病、菌阴肺结核病和肺外结核病。

5.用于区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染的试剂盒，其包括检测ABCA2基因的物质或检测ABCA2基因编码的mRNA的物质或检测ABCA2基因编码的蛋白的物质。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含数据处理装置乙；所述数据处理装置乙由数据输入模块乙、数据记录模块乙、数据比较模块乙和结论输出模块乙组成；

所述数据输入模块乙用于输入ABCA2基因的相对表达量数值；

所述数据记录模块乙用于存储ABCA2基因的相对表达量数值；

所述结论输出模块乙用于显示结论，即如果待测者外周血中ABCA2基因的相对表达量低于0.02124，则待测者为或疑似为活动性结核病患者；如果待测者外周血中ABCA2基因的相对表达量等于或高于0.02124，则待测者为或疑似为结核潜伏感染者；

7.根据权利要求1或2所述的应用或权利要求3-6任一所述的试剂盒，其特征在于：所述物质为检测ABCA2基因或检测ABCA2基因编码的mRNA或检测ABCA2基因编码的蛋白所需的试剂和/或仪器。

8.根据权利要求7所述的应用或试剂盒，其特征在于：所述试剂包括由序列1所示的单链DNA分子和序列2所示的单链DNA分子组成的引物对。

9.ABCA2基因或ABCA2蛋白作为标志物在开发活动性结核病和/或菌阳肺结核病和/或菌阴肺结核病和/或肺外结核病的诊断试剂中的应用。

10.权利要求8中所述的引物对。