CN110295228A

CN110295228A - 检测gata2的物质在制备诊断活动性结核病的试剂盒中的应用

Info

Publication number: CN110295228A
Application number: CN201910717103.2A
Authority: CN
Inventors: 刘艳华; 程小星; 王若; 蒋静; 杨秉芬; 苏瑾文; 翟斐; 曹志红; 安红娟
Original assignee: 8th Medical Center of PLA General Hospital
Current assignee: 8th Medical Center of PLA General Hospital
Priority date: 2019-08-05
Filing date: 2019-08-05
Publication date: 2019-10-01

Abstract

本发明公开了检测GATA2的物质在制备诊断活动性结核病的试剂盒中的应用。本发明采用荧光定量PCR检测活动性结核病患者PBMCs中的GATA2基因的表达量。结果显示GATA2在菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者PBMCs中的相对表达量均显著低于结核潜伏感染者和健康对照者。受试者工作特征曲线分析结果表明，GATA2可区分活动性结核病和结核潜伏感染，成为诊断活动性结核病的诊断靶点。

Description

检测GATA2的物质在制备诊断活动性结核病的试剂盒中的应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及检测GATA2的物质在制备诊断活动性结核病的试剂盒中的应用。

背景技术

结核病严重威胁人类健康，据世界卫生组织(WHO)估计，2016年全球新增结核病患者1040万人，死亡人数达170万人，是致死性排行第一的感染性疾病。我国是22个结核病高负担国家之一，结核病发病例数居全球第三位，结核病是我国需要重点防控的重大传染病。虽然结核病的发病率每年降低大约2％，但距离WHO制定的《终结结核病战略》中的4-5％降低幅度还有差距，因此开发新的灵敏特异的活动性结核病诊断试剂对于结核病的早期诊断和及时治疗，控制结核病的传播和降低死亡率具有重要意义。

目前结核病诊断主要有影像学诊断、结核菌病原学诊断、分子生物学诊断和免疫学诊断等方法。影像学诊断一方面难以区分肺结核病和其他肺部疾病，另一方面无法诊断肺外结核；结核菌病原学诊断的阳性率较低(不到50％)；分子生物学诊断则是通过检测结核菌的核酸序列和突变位点来诊断结核病，是目前灵敏度和特异性均较高的结核病诊断方法；干扰素释放试验(IGRA)是目前常用的免疫学诊断方法，但是无法区分活动性结核病和潜伏感染。中国的结核分枝杆菌潜伏感染者人数众多，约占总人口的15～18％，而感染者中只有5-10％会发展成活动性结核病，因此区分活动性结核病和潜伏感染者对于结核病的临床诊断具有重要的意义。

GATA2是转录因子GATA2的编码基因，GATA2是造血干细胞分化和增殖所必须的转录因子，GATA2蛋白功能缺陷会导致机体对病毒、真菌和非结核分枝杆菌等感染敏感，并会导致肺泡蛋白沉积和骨髓增生异常。研究发现，GATA2基因突变导致的GATA2蛋白功能缺陷是造成MonoMAC综合症、原发性淋巴水肿伴有骨髓异常增生综合症(Emberger syndrome)、树突、单核和B/NK淋巴细胞缺乏症(DCML)和家族聚集性骨髓增生异常综合症/急性淋巴细胞白血病(MDS/AML)的遗传原因。目前尚未见到GATA2基因与结核病关系的研究报道。

发明内容

本发明的目的是诊断活动性结核病及区分活动性结核病和结核潜伏感染。

本发明首先保护检测GATA2基因的物质或检测GATA2基因编码的mRNA的物质或检测GATA2基因编码的蛋白的物质的新用途。

本发明提供了检测GATA2基因的物质或检测GATA2基因编码的mRNA的物质或检测GATA2基因编码的蛋白的物质在如下(1)-(8)中任一种中的应用：

(1)诊断活动性结核病；

(2)制备诊断活动性结核病的产品；

(3)诊断待测者是否为活动性结核病患者；

(4)制备诊断待测者是否为活动性结核病患者的产品；

(5)区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染；

(6)制备区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染的产品；

(7)诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者；

(8)制备诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者的产品。

上述应用中，所述活动性结核病包括菌阳肺结核病、菌阴肺结核病和肺外结核病。

本发明还保护一种试剂盒。

本发明提供的试剂盒包括检测GATA2基因的物质或检测GATA2基因编码的mRNA的物质或检测GATA2基因编码的蛋白的物质；所述试剂盒的用途为如下(1)-(8)中任一种：

(1)诊断活动性结核病；

(2)制备诊断活动性结核病的产品；

(3)诊断待测者是否为活动性结核病患者；

(4)制备诊断待测者是否为活动性结核病患者的产品；

(5)区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染；

(6)制备区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染的产品；

(7)诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者；

上述试剂盒中，所述活动性结核病包括菌阳肺结核病、菌阴肺结核病和肺外结核病。

上述试剂盒还包含数据处理装置Ⅰ；所述数据处理装置Ⅰ由数据输入模块Ⅰ、数据记录模块Ⅰ、数据比较模块Ⅰ和结论输出模块Ⅰ组成；

所述数据输入模块Ⅰ用于输入GATA2基因的相对表达量数值；

所述数据记录模块Ⅰ用于存储GATA2基因的相对表达量数值；

所述数据比较模块Ⅰ用于将待测者外周血中GATA2基因的相对表达量数值和阈值进行比较；所述阈值为0.005496；

所述结论输出模块Ⅰ用于显示结论，即如果待测者外周血中GATA2基因的相对表达量低于0.005496，则待测者为或疑似为活动性结核病患者；如果待测者外周血中GATA2基因的相对表达量等于或高于0.005496，则待测者不为或疑似不为活动性结核病患者。

上述试剂盒还包含数据处理装置Ⅱ；所述数据处理装置Ⅱ由数据输入模块Ⅱ、数据记录模块Ⅱ、数据比较模块Ⅱ和结论输出模块Ⅱ组成；

所述数据输入模块Ⅱ用于输入GATA2基因的相对表达量数值；

所述数据记录模块Ⅱ用于存储GATA2基因的相对表达量数值；

所述数据比较模块Ⅱ用于将待测者外周血中中GATA2基因的相对表达量数值和阈值进行比较；所述阈值为0.005505；

所述结论输出模块Ⅱ用于显示结论，即如果待测者外周血中GATA2基因的相对表达量低于0.005505，则待测者为或疑似为活动性结核病患者；如果待测者外周血中GATA2基因的相对表达量等于或高于0.005505，则待测者为或疑似为结核潜伏感染者。

上述任一所述的应用或试剂盒中，所述检测GATA2基因或检测GATA2基因编码的mRNA或检测GATA2基因编码的蛋白的物质可为检测GATA2基因或检测GATA2基因编码的mRNA或检测GATA2基因编码的蛋白所需的试剂和/或仪器。

所述检测GATA2基因或检测GATA2基因编码的mRNA或检测GATA2基因编码的蛋白所需的试剂和/或仪器可为检测GATA2基因相对表达量的试剂和/或仪器。

所述相对表达量为GATA2基因参比内参基因的相对表达量。

进一步的，所述试剂包括由序列1所示的单链DNA分子和序列2所示的单链DNA分子组成的引物对。

所述仪器包括荧光定量PCR仪，具体可为Ⅱ荧光定量PCR仪。

更进一步的，所述内参基因具体可为GAPDH基因。所述试剂还包括用于扩增GAPDH基因的由序列4所示的单链DNA分子和序列5所示的单链DNA分子组成的引物对。

所述相对表达量的计算方法具体如下：以待测者cDNA为模板，采用上述引物对进行实时荧光定量PCR，然后使用2^-ΔCt法计算获得。所述待测者cDNA可为待测者外周血中分离的PBMCs的cDNA。

所述实时荧光定量PCR的体系可采用KAPA^TM 快速定量PCR试剂盒进行配制，具体如下：2×Green Master Mix 10μL，正向引物(浓度为10μM)0.4μL，反向引物(浓度为10μM)0.4μL，cDNA(5-20ng)2μL，无核酶水补足总体系20μL。正向引物和反向引物分别为用于扩增GATA2基因的序列1所示的单链DNA分子和序列2所示的单链DNA分子或用于扩增GAPDH基因的序列4所示的单链DNA分子和序列5所示的单链DNA分子。

所述实时荧光定量PCR的反应条件具体如下：预变性：95℃3min；扩增反应：95℃5s，60℃30s，在延伸阶段检测荧光信号，40个循环。

GATA2基因或GATA2蛋白作为标志物在开发活动性结核病和/或菌阳肺结核病和/或菌阴肺结核病和/或肺外结核病的诊断试剂中的应用也属于本发明的保护范围。

上述引物对也属于本发明的保护范围。

上述任一所述的应用或试剂盒中，所述GATA2基因序列如序列表中的序列6所示，所述GATA2蛋白的氨基酸序列如序列表中的序列7所示。

本发明采用荧光定量PCR检测活动性结核病患者PBMCs中的GATA2基因的表达量。结果显示GATA2在菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者PBMCs中的相对表达量均显著低于结核潜伏感染者和健康对照者。受试者工作特征曲线分析结果表明，GATA2可区分活动性结核病和结核潜伏感染，成为诊断活动性结核病的诊断靶点。

附图说明

图1为实时荧光定量PCR检测菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者、肺外结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中GATA2的表达水平。

图2为实时荧光定量PCR检测菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者、肺外结核病患者和健康对照者PBMCs中GATA2的表达水平。

图3为ROC曲线分析菌阳肺结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中GATA2的表达水平。

图4为ROC曲线分析菌阴肺结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中GATA2的表达水平。

图5为ROC曲线分析肺外结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中GATA2的表达水平。

图6为ROC曲线分析菌阳肺结核病患者和健康对照者PBMCs中GATA2的表达水平。

图7为ROC曲线分析菌阴肺结核病患者和健康对照者PBMCs中GATA2的表达水平。

图8为ROC曲线分析肺外结核病患者和健康对照者PBMCs中GATA2的表达水平。

图9为ROC曲线分析活动性结核病患者(包括菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者)和结核潜伏感染者PBMCs中GATA2的表达水平。

图10为ROC曲线分析活动性结核病患者(包括菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者)和健康对照者PBMCs中GATA2的表达水平。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

下述实施例中的GATA2基因序列如序列表中的序列6所示，GATA2蛋白的氨基酸序列如序列表中的序列7所示。

下述实施例中的活动性结核病包括菌阳肺结核病、菌阴肺结核病和肺外结核病。

活动性结核病是指由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染病。发生于肺组织、气管、支气管和胸膜的结核病变称之为肺结核，发生于其它部位的结核病变称之为肺外结核。

菌阳肺结核病是指痰涂片阳性或痰培养阳性的肺结核，菌阴肺结核病是指临床诊断的痰涂片阴性和/或痰培养阴性的肺结核。

实施例1、活动性结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中的GATA2基因表达水平检测及其关联性分析

一、实验材料和方法

1、外周血样本的获得

受试者外周血样本：来源于145例患者和31例健康者的外周血样本。145例患者由114例活动性结核病患者和31例结核潜伏感染者组成，其中，114例活动性结核病患者的具体组成如下：经临床确诊的41例菌阳肺结核病患者、经临床确诊的55例菌阴肺结核病患者、经临床确诊的18例肺外结核病患者。

外周血样本的获得方法具体如下：分别抽取145例患者和31例健康者(均知情同意)的外周血2-3mL，置于含EDTA抗凝采血管，上下颠倒5-6次(目的为抗凝液和外周血混匀)，得到外周血标本。

2、外周血单个核细胞(PBMCs)的分离

分离受试者外周血单个核细胞(PBMCs)。具体步骤如下(6h内完成下述步骤)：采集受试者抗凝外周血2mL，先用基础培养基RPMI-1640进行1：1稀释，然后用淋巴细胞分离液进行密度梯度离心(Ficoll，GE Biosciences，USA)，收集中间单个核细胞层的细胞，再用RPMI-1640培养基洗两遍，得到PBMCs。

3、RNA的提取

使用TRIzol^TM Reagent(Invitrogen，USA)分别提取每个样本的PBMCs的RNA。具体步骤如下：向每个样本的PBMCs中加入0.5mL TRIzol和0.1mL氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟；12000g、4℃离心15分钟，分离上层无色水相，然后加入0.25mL异丙醇，颠倒数次混匀，室温沉淀10min；12000g、4℃离心10分钟，弃上清，用1mL含75％乙醇的无核酶水清洗RNA沉淀；7500g、4℃离心10分钟，弃上清，RNA沉淀置于冰上晾干(5-10min)，用30μL无核酶水溶解RNA沉淀，-80℃度保存备用。

4、cDNA的合成

使用PrimeScript^TM RT reagent Kit with gDNA Eraser(TaKaRaBiotechnology,Japan)将步骤3提取的RNA进行反转录，得到cDNA。具体步骤如下：先去除基因组DNA，反应体系为：5×gDNA Eraser Buffer 2μL，gDNA Eraser 1μL，RNA 0.5μg，用无核酶水补至10μL。反应条件为：42℃反应2min。然后进行反转录，反应体系为：去除基因组DNA的反应液10μL，RT Enzyme Mix I 1μL，RT Primer Mix 1μL，5×PrimerScript Buffer 4μL，用无核酶水补至20μL。反转录条件为：37℃15min，85℃5s。

5、引物序列和合成

委托上海生工生物科技有限公司合成引物，并使用HPLC纯化，引物序列如表1所示。

表1、引物序列

6、实时荧光定量PCR(RT-PCR)

采用KAPA^TM 快速定量PCR试剂盒(Kapa Biosystems，USA)配制定量PCR体系：2×Green Master Mix 10μL，正向引物(浓度为10μM)0.4μL，反向引物(浓度为10μM)0.4μL，cDNA 2μL，用无核酶水补足总体系20μL。以GAPDH基因作为内参基因。正向引物和反向引物分别为GATA2-F和GATA2-R或GAPDH-F和GAPDH-R。使用罗氏公司的Ⅱ荧光定量PCR仪进行荧光定量PCR检测。反应条件：预变性：95℃3min；扩增反应：95℃5s，60℃30s，在延伸阶段检测荧光信号，40个循环。使用2^-ΔCt计算相对表达量。

7、统计分析

使用GraphPad Prism 5进行统计分析。

二、实验结果

1、活动性结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中的GATA2相对表达量

采用RT-PCR检测41例菌阳肺结核病患者、55例菌阴肺结核病患者、18例肺外结核病患者、31例结核潜伏感染者PBMCs中的GATA2相对表达量。结果如图1所示，结果显示GATA2在活动性结核病患者，包括菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者PBMCs中的相对表达量均显著低于结核潜伏感染者(p<0.0001)。说明GATA2的表达量在区分活动性结核病患者和结核潜伏感染者方面具有重要价值。

2、活动性结核病患者和健康者PBMCs中的GATA2相对表达量

采用RT-PCR检测41例菌阳肺结核病患者、55例菌阴肺结核病患者、18例肺外结核病患者和31例健康者PBMCs中的GATA2相对表达量。结果如图2所示，结果显示GATA2在活动性结核病患者，包括菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者PBMCs中的相对表达量均显著低于健康者(p<0.0001)。说明GATA2的表达量在诊断活动性结核病方面具有重要价值。

3、菌阳肺结核病患者和结核潜伏感染者的工作特征曲线分析

根据菌阳肺结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中GATA2的相对表达量，使用GraphPad Prism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图3所示，结果显示ROC曲线下面积为0.8482，p<0.0001。说明GATA2的表达量在区分菌阳肺结核病患者和结核潜伏感染者方面具有重要价值。

4、菌阴肺结核病患者和结核潜伏感染者的工作特征曲线分析

根据菌阴肺结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中GATA2的相对表达量，使用GraphPad Prism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图4所示，结果显示ROC曲线下面积为0.8408，p<0.0001。说明GATA2的表达量在区分菌阴肺结核病患者和结核潜伏感染者方面具有重要价值。

5、肺外结核病患者和结核潜伏感染者的工作特征曲线分析

根据肺外结核病患者和结核潜伏感染者PBMCs中GATA2的相对表达量，使用GraphPad Prism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图5所示，结果显示ROC曲线下面积为0.871，p<0.0001。说明GATA2的表达量在区分肺外结核病患者和结核潜伏感染者方面具有重要价值。

6、菌阳肺结核病患者和健康者的工作特征曲线分析

根据菌阳肺结核病患者和健康者PBMCs中GATA2的相对表达量，使用GraphPadPrism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图6所示，结果显示ROC曲线下面积为0.808，p<0.0001。说明GATA2的表达量在诊断菌阳肺结核病方面具有重要价值。

7、菌阴肺结核病患者和健康者的工作特征曲线分析

根据菌阴肺结核病患者和健康者PBMCs中GATA2的相对表达量，使用GraphPadPrism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图7所示，结果显示ROC曲线下面积为0.8003，p<0.0001。说明GATA2的表达量在诊断菌阴肺结核病方面具有重要价值。

8、肺外结核病患者和健康者的工作特征曲线分析

根据肺外结核病患者和健康者PBMCs中GATA2的相对表达量，使用GraphPad Prism5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图8所示，结果显示ROC曲线下面积为0.8378，p<0.0001。说明GATA2的表达量在诊断肺外结核病方面具有重要价值。

9、活动性结核病患者和结核潜伏感染者的工作特征曲线分析

根据活动性结核病患者(包括菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者)和结核潜伏感染者PBMCs中GATA2的相对表达量，使用GraphPad Prism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图9所示，结果显示ROC曲线下面积为0.8482，p<0.0001。说明GATA2的表达量在区分活动性结核病患者和结核潜伏感染者方面具有重要价值。

10、活动性结核病患者和健康对照者的工作特征曲线分析

根据活动性结核病患者(包括菌阳肺结核病患者、菌阴肺结核病患者和肺外结核病患者)和健康对照者PBMCs中GATA2的相对表达量，使用GraphPad Prism 5进行受试者工作特征曲线分析。结果如图10所示，结果显示ROC曲线下面积为0.809，p<0.0001。说明GATA2的表达量在诊断活动性结核病方面具有重要价值。

在实际应用中，可按照如下判断标准区分活动性结核病患者和结核潜伏感染者：如果待测者外周血中GATA2基因的相对表达量低于0.005505(灵敏度为73.68％，置信区间为64.61％～81.49％；特异性为80.65％，置信区间为62.53％～92.55％)，则待测者为或疑似为活动性结核病患者；如果待测者外周血中GATA2基因的相对表达量等于或高于0.005505，则待测者为或疑似为结核潜伏感染者。

还可按照如下判断标准诊断活动性结核病：如果待测者外周血中GATA2基因的相对表达量低于0.005496(灵敏度为73.68％，置信区间为64.61％～81.49％；特异性为80.65％，置信区间为62.53％～92.55％)，则待测者为或疑似为活动性结核病患者；如果待测者外周血中GATA2基因的相对表达量等于或高于0.005496，则待测者不为或疑似不为活动性结核病患者。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

序列表

<110>中国人民解放军总医院第八医学中心

<120>检测GATA2的物质在制备诊断活动性结核病的试剂盒中的应用

<160>7

<170>PatentIn version 3.5

<210>1

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>1

cctggcgcac aactacatgg 20

<210>2

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>2

acatctggcc tccggtca 18

<210>3

<211>170

<212>DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>3

cctggcgcac aactacatgg aacccgcgca gctgctgcct ccagacgagg tggacgtctt 60

cttcaatcac ctcgactcgc agggcaaccc ctactatgcc aaccccgctc acgcgcgggc 120

gcgcgtctcc tacagccccg cgcacgcccg cctgaccgga ggccagatgt 170

<210>4

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>4

tgttgccatc aatgacccct 20

<210>5

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>5

tcgccccact tgattttgga 20

<210>6

<211>3470

<212>DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>6

actgggtcaa gcacagccct gagcggccgc gtgtccgagg cccaggtgcc ctctagagcc 60

ctgtagttcc tgcccctctc tgcccctctc ggctcctgct gttccgccgc tgtcgtccga 120

accatcccaa cccccagtcc acccagacag cgcccgagct aggggaggga acggtctggg 180

agtcggcagc tggcgccagg gcggccggag gatgccgagg ggccggagcc gggagggccc 240

gaggccgagg cgcactctac ccccagctcc taccctgtaa gccccgccag cctccggacg 300

tgctgtccct gggcccgtcg ccctcggggc tcccgccgga actccttcac tctcagaggc 360

cgagtccctc ccctccccac ggctgcgtgt ggccgttgcc gtctgcaccc agaccctgag 420

ccgccgccgc cggccatgga ggtggcgccc gagcagccgc gctggatggc gcacccggcc 480

gtgctgaatg cgcagcaccc cgactcacac cacccgggcc tggcgcacaa ctacatggaa 540

cccgcgcagc tgctgcctcc agacgaggtg gacgtcttct tcaatcacct cgactcgcag 600

ggcaacccct actatgccaa ccccgctcac gcgcgggcgc gcgtctccta cagccccgcg 660

cacgcccgcc tgaccggagg ccagatgtgc cgcccacact tgttgcacag cccgggtttg 720

ccctggctgg acgggggcaa agcagccctc tctgccgctg cggcccacca ccacaacccc 780

tggaccgtga gccccttctc caagacgcca ctgcacccct cagctgctgg aggccctgga 840

ggcccactct ctgtgtaccc aggggctggg ggtgggagcg ggggaggcag cgggagctca 900

gtggcctccc tcacccctac agcagcccac tctggctccc accttttcgg cttcccaccc 960

acgccaccca aagaagtgtc tcctgaccct agcaccacgg gggctgcgtc tccagcctca 1020

tcttccgcgg ggggtagtgc agcccgagga gaggacaagg acggcgtcaa gtaccaggtg 1080

tcactgacgg agagcatgaa gatggaaagt ggcagtcccc tgcgcccagg cctagctact 1140

atgggcaccc agcctgctac acaccacccc atccccacct acccctccta tgtgccggcg 1200

gctgcccacg actacagcag cggactcttc caccccggag gcttcctggg gggaccggcc 1260

tccagcttca cccctaagca gcgcagcaag gctcgttcct gttcagaagg ccgggagtgt 1320

gtcaactgtg gggccacagc cacccctctc tggcggcggg acggcaccgg ccactacctg 1380

tgcaatgcct gtggcctcta ccacaagatg aatgggcaga accgaccact catcaagccc 1440

aagcgaagac tgtcggccgc cagaagagcc ggcacctgtt gtgcaaattg tcagacgaca 1500

accaccacct tatggcgccg aaacgccaac ggggaccctg tctgcaacgc ctgtggcctc 1560

tactacaagc tgcacaatgt taacaggcca ctgaccatga agaaggaagg gatccagact 1620

cggaaccgga agatgtccaa caagtccaag aagagcaaga aaggggcgga gtgcttcgag 1680

gagctgtcaa agtgcatgca ggagaagtca tcccccttca gtgcagctgc cctggctgga 1740

cacatggcac ctgtgggcca cctcccgccc ttcagccact ccggacacat cctgcccact 1800

ccgacgccca tccacccctc ctccagcctc tccttcggcc acccccaccc gtccagcatg 1860

gtgaccgcca tgggctaggg aacagatgga cgtcgaggac cgggcactcc cgggatgggt 1920

ggaccaaacc cttagcagcc cagcatttcc cgaaggccga caccactcct gccagcccgg 1980

ctcggcccag caccccctct cctggagggc gcccagcagc ctgccagcag ttactgtgaa 2040

tgttccccac cgctgagagg ctgcctccgc acctgaccgc tgcccaggtg gggtttcctg 2100

catggacagt tgtttggaga acaacaagga caactttatg tagagaaaag gaggggacgg 2160

gacagacgaa ggcaaccatt tttagaagga aaaaggatta ggcaaaaata atttattttg 2220

ctcttgtttc taacaaggac ttggagactt ggtggtctga gctgtcccaa gtcctccggt 2280

tcttcctcgg gattggcggg tccacttgcc agggctctgg gggcagattt gtggggacct 2340

cagcctgcac cctcttctcc tctggcttcc ctctctgaaa tagccgaact ccaggctggg 2400

ctgagccaaa gccagagtgg ccacggccca gggagggtga gctggtgcct gctttgacgg 2460

gccaggccct ggagggcaga gacaatcacg ggcggtcctg cacagattcc caggccaggg 2520

ctgggtcaca ggaaggaaac aacattttct tgaaagggga aacgtctccc agatcgctcc 2580

cttggctttg aggccgaagc tgctgtgact gtgtcccctt actgagcgca agccacagcc 2640

tgtcttgtca ggtggaccct gtaaatacat cctttttctg ctaacccttc aaccccctcg 2700

cctcctactc tgagacaaaa gaaaaaatat taaaaaaatg cataggctta actcgctgat 2760

gagttaattg ttttattttt aaactctttt tgggtccagt tgattgtacg tagccacagg 2820

agccctgcta tgaaaggaat aaaacctaca cacaaggttg gagctttgca attctttttg 2880

gaaaagagct gggatcccac agccctagta tgaaagctgg gggtggggag gggcctttgc 2940

tgcccttggt ttctgggggc tggttggcat ttgctggcct ggcagggggt gaaggcagga 3000

gttgggggca ggtcaggacc aggacccagg gagaggctgt gtccctgctg gggtctcagg 3060

tccagcttta ctgtggctgt ctggatcctt cccaaggtac agctgtatat aaacgtgtcc 3120

cgagcttaga ttctgtatgc ggtgacggcg gggtgtggtg gcctgtgagg ggcccctggc 3180

ccaggaggag gattgtgctg atgtagtgac caagtgcaat atgggcgggc agtcgctgca 3240

gggagcacca cggccagaag taacttattt tgtactagtg tccgcataag aaaaagaatc 3300

ggcagtattt tctgttttta tgttttattt ggcttgtttt attttggatt agtgaactaa 3360

gttattgtta attatgtaca acatttatat attgtctgta aaaaatgtat gctatcctct 3420

tattccttta aagtgagtac tgttaagaat aataaaatac tttttgtgaa 3470

<210>7

<211>480

<212>PRT

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>7

Met Glu Val Ala Pro Glu Gln Pro Arg Trp Met Ala His Pro Ala Val

1 5 10 15

Leu Asn Ala Gln His Pro Asp Ser His His Pro Gly Leu Ala His Asn

20 25 30

Tyr Met Glu Pro Ala Gln Leu Leu Pro Pro Asp Glu Val Asp Val Phe

35 40 45

Phe Asn His Leu Asp Ser Gln Gly Asn Pro Tyr Tyr Ala Asn Pro Ala

50 55 60

His Ala Arg Ala Arg Val Ser Tyr Ser Pro Ala His Ala Arg Leu Thr

65 70 75 80

Gly Gly Gln Met Cys Arg Pro His Leu Leu His Ser Pro Gly Leu Pro

85 90 95

Trp Leu Asp Gly Gly Lys Ala Ala Leu Ser Ala Ala Ala Ala His His

100 105 110

His Asn Pro Trp Thr Val Ser Pro Phe Ser Lys Thr Pro Leu His Pro

115 120 125

Ser Ala Ala Gly Gly Pro Gly Gly Pro Leu Ser Val Tyr Pro Gly Ala

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Ser Ser Val Ala Ser Leu Thr

145 150 155 160

Pro Thr Ala Ala His Ser Gly Ser His Leu Phe Gly Phe Pro Pro Thr

165 170 175

Pro Pro Lys Glu Val Ser Pro Asp Pro Ser Thr Thr Gly Ala Ala Ser

180 185 190

Pro Ala Ser Ser Ser Ala Gly Gly Ser Ala Ala Arg Gly Glu Asp Lys

195 200 205

Asp Gly Val Lys Tyr Gln Val Ser Leu Thr Glu Ser Met Lys Met Glu

210 215 220

Ser Gly Ser Pro Leu Arg Pro Gly Leu Ala Thr Met Gly Thr Gln Pro

225 230 235 240

Ala Thr His His Pro Ile Pro Thr Tyr Pro Ser Tyr Val Pro Ala Ala

245 250 255

Ala His Asp Tyr Ser Ser Gly Leu Phe His Pro Gly Gly Phe Leu Gly

260 265 270

Gly Pro Ala Ser Ser Phe Thr Pro Lys Gln Arg Ser Lys Ala Arg Ser

275 280 285

Cys Ser Glu Gly Arg Glu Cys Val Asn Cys Gly Ala Thr Ala Thr Pro

290 295 300

Leu Trp Arg Arg Asp Gly Thr Gly His Tyr Leu Cys Asn Ala Cys Gly

305 310 315 320

Leu Tyr His Lys Met Asn Gly Gln Asn Arg Pro Leu Ile Lys Pro Lys

325 330 335

Arg Arg Leu Ser Ala Ala Arg Arg Ala Gly Thr Cys Cys Ala Asn Cys

340 345 350

Gln Thr Thr Thr Thr Thr Leu Trp Arg Arg Asn Ala Asn Gly Asp Pro

355 360 365

Val Cys Asn Ala Cys Gly Leu Tyr Tyr Lys Leu His Asn Val Asn Arg

370 375 380

Pro Leu Thr Met Lys Lys Glu Gly Ile Gln Thr Arg Asn Arg Lys Met

385 390 395 400

Ser Asn Lys Ser Lys Lys Ser Lys Lys Gly Ala Glu Cys Phe Glu Glu

405 410 415

Leu Ser Lys Cys Met Gln Glu Lys Ser Ser Pro Phe Ser Ala Ala Ala

420 425 430

Leu Ala Gly His Met Ala Pro Val Gly His Leu Pro Pro Phe Ser His

435 440 445

Ser Gly His Ile Leu Pro Thr Pro Thr Pro Ile His Pro Ser Ser Ser

450 455 460

Leu Ser Phe Gly His Pro His Pro Ser Ser Met Val Thr Ala Met Gly

465 470 475 480

Claims

1.检测GATA2基因的物质或检测GATA2基因编码的mRNA的物质或检测GATA2基因编码的蛋白的物质在如下(1)-(8)中任一种中的应用：

(1)诊断活动性结核病；

(2)制备诊断活动性结核病的产品；

(3)诊断待测者是否为活动性结核病患者；

(4)制备诊断待测者是否为活动性结核病患者的产品；

(5)区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染；

(6)制备区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染的产品；

(7)诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者；

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述活动性结核病包括菌阳肺结核病、菌阴肺结核病和肺外结核病。

3.一种试剂盒，其包括检测GATA2基因的物质或检测GATA2基因编码的mRNA的物质或检测GATA2基因编码的蛋白的物质；所述试剂盒的用途为如下(1)-(8)中任一种：

(1)诊断活动性结核病；

(2)制备诊断活动性结核病的产品；

(3)诊断待测者是否为活动性结核病患者；

(4)制备诊断待测者是否为活动性结核病患者的产品；

(5)区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染；

(6)制备区分或鉴别活动性结核病和结核潜伏感染的产品；

(7)诊断待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者；

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含数据处理装置Ⅰ；所述数据处理装置Ⅰ由数据输入模块Ⅰ、数据记录模块Ⅰ、数据比较模块Ⅰ和结论输出模块Ⅰ组成；

所述数据输入模块Ⅰ用于输入GATA2基因的相对表达量数值；

所述数据记录模块Ⅰ用于存储GATA2基因的相对表达量数值；

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含数据处理装置Ⅱ；所述数据处理装置Ⅱ由数据输入模块Ⅱ、数据记录模块Ⅱ、数据比较模块Ⅱ和结论输出模块Ⅱ组成；

所述数据输入模块Ⅱ用于输入GATA2基因的相对表达量数值；

所述数据记录模块Ⅱ用于存储GATA2基因的相对表达量数值；

所述数据比较模块Ⅱ用于将待测者外周血中GATA2基因的相对表达量数值和阈值进行比较；所述阈值为0.005505；

6.根据权利要求3-5任一所述的试剂盒，其特征在于：所述活动性结核病包括菌阳肺结核病、菌阴肺结核病和肺外结核病。

7.根据权利要求1或2所述的应用或权利要求3-6任一所述的试剂盒，其特征在于：所述物质为检测GATA2基因或检测GATA2基因编码的mRNA或检测GATA2基因编码的蛋白所需的试剂和/或仪器。

8.根据权利要求7所述的应用或试剂盒，其特征在于：所述试剂包括由序列1所示的单链DNA分子和序列2所示的单链DNA分子组成的引物对。

9.权利要求8中所述的引物对。

10.GATA2基因或GATA2蛋白作为标志物在开发活动性结核病和/或菌阳肺结核病和/或菌阴肺结核病和/或肺外结核病的诊断试剂中的应用。