CN107058474B - 一种通过血浆microRNA-3591-3p诊断急性高山病的诊断试剂盒 - Google Patents

一种通过血浆microRNA-3591-3p诊断急性高山病的诊断试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN107058474B
CN107058474B CN201611002911.3A CN201611002911A CN107058474B CN 107058474 B CN107058474 B CN 107058474B CN 201611002911 A CN201611002911 A CN 201611002911A CN 107058474 B CN107058474 B CN 107058474B
Authority
CN
China
Prior art keywords
microrna
ams
plasma
mountain sickness
acute mountain
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201611002911.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107058474A (zh
Inventor
高钰琪
刘宝
徐刚
黄河
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Army Medical University
Original Assignee
Army Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Army Medical University filed Critical Army Medical University
Priority to CN201611002911.3A priority Critical patent/CN107058474B/zh
Publication of CN107058474A publication Critical patent/CN107058474A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107058474B publication Critical patent/CN107058474B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA

Abstract

本发明涉及一种用于检测急性高山病的microRNA标志物及其在制备急性高山病检测试剂盒中的应用。通过定量PCR等方法检测被测者血中的microRNA‑3591‑3p的含量，并与正常microRNA水平比较来诊断急性高山病，该急性高山病分子标志物microRNA灵敏度高，特异性强，操作方便，安全无创伤及易于大量筛查。

Description

一种通过血浆microRNA-3591-3p诊断急性高山病的诊断试 剂盒
技术领域
本发明涉及医学分子生物学技术领域，是一种将血浆中的microRNA作为生物标志物用于急性高山病的诊断。
背景技术
急性高山病(acute mountain sickness，AMS)，又称作急性轻症高原反应，是人体对高原自然环境未适应而产生的头痛，食欲减退，恶心，眩晕和疲劳等机体反应。是急进高原人群中最常见的高原特发疾病。现有研究由于人群年龄，进入高原海拔高度，速度以及AMS诊断方法的不同，AMS的发病率为16-100％(MacInnis M J et al.(2013)Aprospective epidemiological study of acute mountain sickness in Nepalesepilgrims ascending to high altitude(4380m)，《PLoS One》，8(10)，e75644.，McDevittM et al.(2014)Risk determinants of acute mountain sickness in trekkers in theNepali Himalaya：a 24-year follow-up，《Wilderness Environ Med》，25(2)，152-9.，Gaillard S et al.(2004)Awareness，prevalence，medication use，and risk factorsof acute mountain sickness in tourists trekking around the Annapurnas inNepal：a 12-year follow-up，《High Alt Med Biol》，5(4)，410-9.)，在随机对照研究中，AMS的中位发病率为60％(Waeber B et al.(2015)Impact of Study Design on ReportedIncidences of Acute Mountain Sickness：A Systematic Review，《High Alt MedBiol》，16(3)，204-15.)，是影响急进高原人群生活和工作的一个主要障碍。AMS如果没有得到及时有效的控制，可能进展为具有高致死率的高原脑水肿进而危及生命(Basnyat B andMurdoch D R(2003)High-altitude illness，《Lancet》，361(9373)，1967-74.)。
尽管近年来对AMS的诊断进行了大量的研究，现阶段国内外对AMS的诊断主要依据患者所表现出的相关临床症状的严重程度进行评分诊断，现有的症状评分诊断系统有1980年提出的环境症状问卷计分诊断系统、1991年提出的中华人民共和国国家军用标准GJB1098-91、1993年加拿大路易斯湖国际诊断标准以及1995年中华医学会在国家军用标准基础上制定的急性轻症高原病症状分度与评分系统。由于症状评分存在较大的主观性，因此寻找更加可靠的客观性诊断指标成为AMS诊断的又一研究热点。
MicroRNA是一类广泛存在于真核生物中的内源性小分子非编码RNA，长度为18～24个核苷酸。MicroRNA通过转录后水平抑制靶基因的表达，调控细胞分化、增殖、凋亡等生命活动，在胚胎发育、机体代谢、疾病发生发展等多种生理和病理过程中发挥重要作用。近年来，研究人员在血液、唾液、尿液等多种体液中检测到microRNA，提出循环microRNA的概念。并且，microRNA的表达水平的高低和其遗传基因的差异性高度相关，大量研究表明，循环microRNA对肿瘤、高血压、卒中及一系列疾病的提前诊断和发病预测都有很好的特异性和敏感性。再者血液等体液标本易于获得，临床可操性强且创伤性小，而且循环microRNA稳定性好，检测便利，因此，循环microRNA具有作为AMS无创性生物标志物的潜能。
而关于循环microRNA与AMS发病之间的相关性，尚未见报道。
更未见一种用于检测血浆中的microRNA-3591-3p表达水平来诊断AMS发病的报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供了一种用于检测AMS的microRNA标志物，通过检测被测者血清或者血浆中microRNA-3591-3p的含量，并与正常人血清或者血浆中的microRNA-3591-3p的水平进行比较来诊断AMS，且该microRNA的灵敏度和精确度高。
本发明解决上述技术问题的技术方案是：一种诊断AMS的microRNA标志物，所述标志物为microRNA-3591-3p，microRNA-3591-3p的序列为AAACACCAUUGUCACACUCCAC。
本发明的有益效果是：筛查出的microRNA标志物，作为用于检测AMS的精确度和灵敏度高。
更进一步的，在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
本发明还包括一种诊断AMS的microRNA标志物在制备AMS诊断试剂中的用途。
附图说明
图1.AMS发病者和健康对照的血浆中microRNA-3591-3p表达水平(即与cel-miR-39相比microRNA-3591-3p的归一化水平)。
其中AMS是AMS发病者、non-AMS为健康对照。*：p＜0.05，即有显著统计学差异，**：p＜0.01，即有极显著统计学差异，***：p＜0.001，即有极显著统计学差异。
图2为AMS患者血浆microRNA-3591-3p的工作特征曲线(receiver operatingcharacteristic curve，简称ROC曲线)，该图中的很好的显示了AMS发病者的ROC曲线、曲线下面积(area under the curve，AUC)、灵敏性(sensitivity)、特异性(specificity)，其中AUC反映了诊断效能(AUC＝0.5，没有诊断学价值；0.5＜AUC＜0.7很小的诊断价值；0.7＜AUC＜0.9相当准确的诊断价值；0.9＜AUC＜1，很准确的诊断价值)。
具体实施方式
下面结合附图对本发明进行描述，所列举的实施例仅仅是用来解释本发明，并非用于限制本发明的范围。
实施例1血浆标本microRNA-3591-3p的表达与AMS发病的相关性研究
一、材料与标本收集描述
AMS患者血浆标本收集自急进高原人群中的AMS患者，合计37例。正常人群的血浆标本收集自急进高原人群中的正常健康人群，合计31例。AMS的诊断是通过国际通用诊断标准-路易斯湖评分来确认的。AMS患者在取血之前没有服用任何药物。每个样本用EDTA-Na抗凝管合计收集2ml血液。
二、样品处理和RNA提取
在静脉血采集后10min内，在3000×g，25摄氏度下离心10分钟之后，用无RNA酶和无细菌的吸头取上层血浆于无RNA酶和无细菌的EP管中-80℃保存备用。血浆中的RNA通过德国凯杰技术有限公司的血浆microRNA柱式抽提试剂盒(miRNeasy Serum/Plasma Kit，货号：217184)按照说明书操作步骤进行提取和纯化。
三、实时荧光定量PCR(SYBR染料法)
运用中国上海吉玛制药技术有限公司的microRNA实时荧光定量PCR试剂盒(Hairpin-itTMmiRNAs RT-PCR Quantitation Kit，货号：E01008)对microRNA-3591-3p和外参cel-miR-39进行扩增；分别得到Ct值(cycle threshold)，通过公式：表达量＝2Ct(cel -miR-39)-Ct(hsa-miR-3591-3p)在分别计算每例标本的microRNA-3591-3p的表达水平，具体操作过程见说明书。每个样本重复三次实验。microRNA-3591-3p和cel-miR-39引物序列见表3.
四、统计分析方法。
运用统计学软件SPSS 19.0进行统计。正态性检验采用Shapiro-Wilk法，显著性差异用Mann-Whitney检验(Mann-Whitney Test)，工作特征曲线(receiver operatingcharacteristic curve，简称ROC曲线)及线下面积(area under the curve，AUC)用于评价microRNA-3591-3p的诊断效能。当p＜0.05时认为有统计学差异。
五、结果分析
1.microRNA-3591-3p在AMS及正常人群中的表达
如图1所示，与外参cel-miR-39的水平相比的血浆microRNA-3591-3p的归一化水平在AMS发病组和正常人群组之间具有显著性差异(P＜0.001)。
2.AMS中microRNA-3591-3p的水平作为生物标志物的诊断值
AMS患者血浆microRNA-3591-3p作为生物标志物的诊断表现通过ROC曲线(图2)可知。AMS患者血浆microRNA-3591-3p作为生物标志物的诊断表现良好，其AUC为0.8047(95％CI，0.699-0.911)。
六、结论
血中microRNA-3591-3p的水平可以作为生物标志物来筛查和诊断AMS。
表1AMS发病组和健康对照组中血浆microRNA-3591-3p的表达水平
Figure GSB0000164279920000061
***AMS发病组VS健康对照组：P＜0.001，数据以中位数(25％-75％分位数)表示
表2 microRNA-3591-3p基本信息
Figure GSB0000164279920000062
表3 microRNA-3591-3p和cel-miR-39引物信息
Figure GSB0000164279920000063
Figure ISB0000162243500000011

Claims (1)

1.检测microRNA-3591-3p表达水平的引物在制备急性高山病易感者的预测试剂盒中的应用，其特征在于，所述microRNA-3591-3p的序列为SEQ ID NO:1。
CN201611002911.3A 2016-11-03 2016-11-03 一种通过血浆microRNA-3591-3p诊断急性高山病的诊断试剂盒 Active CN107058474B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611002911.3A CN107058474B (zh) 2016-11-03 2016-11-03 一种通过血浆microRNA-3591-3p诊断急性高山病的诊断试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611002911.3A CN107058474B (zh) 2016-11-03 2016-11-03 一种通过血浆microRNA-3591-3p诊断急性高山病的诊断试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107058474A CN107058474A (zh) 2017-08-18
CN107058474B true CN107058474B (zh) 2020-09-01

Family

ID=59618493

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201611002911.3A Active CN107058474B (zh) 2016-11-03 2016-11-03 一种通过血浆microRNA-3591-3p诊断急性高山病的诊断试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107058474B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112410430B (zh) * 2020-11-30 2022-08-30 河北仁博科技有限公司 一种与肿瘤细胞对顺铂耐药性相关的标志物及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104955950A (zh) * 2012-09-26 2015-09-30 米尔克斯治疗学公司 具有改善的脱靶特征谱的寡核苷酸
WO2016137235A2 (ko) * 2015-02-25 2016-09-01 (주)바이오니아 마이크로 rna를 유효 성분으로 포함하는 암 치료용 약학 조성물

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014100252A1 (en) * 2012-12-18 2014-06-26 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Methods and compositions to modulate rna processing

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104955950A (zh) * 2012-09-26 2015-09-30 米尔克斯治疗学公司 具有改善的脱靶特征谱的寡核苷酸
WO2016137235A2 (ko) * 2015-02-25 2016-09-01 (주)바이오니아 마이크로 rna를 유효 성분으로 포함하는 암 치료용 약학 조성물
CN107454843A (zh) * 2015-02-25 2017-12-08 柏业公司 包含微小核糖核酸作为活性成分的用于治疗癌症的药物组合物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Homo sapiens microRNA 3591 (MIR3591), microRNA;Accession No: NR_039899;《Genbank》;20141211;全文 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN107058474A (zh) 2017-08-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107058472B (zh) 一种通过四种血浆microRNA联合诊断急性高山病的诊断试剂盒
CN103667445A (zh) 一种脑梗塞早期诊断标志物及其应用
CN109136358A (zh) 鉴别诊断NOA患者睾丸内残存精子的试剂及miRNA在其中的应用
CN107058474B (zh) 一种通过血浆microRNA-3591-3p诊断急性高山病的诊断试剂盒
CN105671179B (zh) 血清microRNA在肝癌诊断中的应用及诊断试剂盒
CN107058470B (zh) 一种通过联合miR-136和miR-4791预测急性高山病发病风险的诊断试剂盒
CN108300788A (zh) 一种用于检测轻型脑外伤的微小核糖核酸组合及其应用
CN112391460A (zh) 用于脓毒症的生物标志物组及脓毒症判断方法和试剂盒
CN107058475B (zh) 一种联合miR-676、miR-181b和miR-193b诊断急性高山病的试剂盒
CN107058473B (zh) 一种联合miR-676、miR-181b和miR-3591诊断急性高山病的试剂盒
CN107058468B (zh) 一种通过循环microRNA-369-3p表达水平预测急性高山病发病风险的试剂盒
CN107058469B (zh) 一种通过循环microRNA-449b-3p表达水平预测急性高山病发病风险的试剂盒
CN111733227B (zh) 特发性视神经炎诊断分子标记物circRNA、试剂盒及应用
CN107058471B (zh) 一种通过四种microRNA生物标志物联合预测急性高山病发病风险的试剂盒
CN110042161B (zh) 一种用于筛查急性高原反应易感者的microRNA分子标志物及其应用
CN112111570A (zh) 一种与缺血性卒中辅助诊断相关的血清miRNA标志物及其应用
CN112266955A (zh) 一种强直性脊柱炎诊断标志物及应用
CN110527721A (zh) 一种陈旧性结核病标志物及其应用
CN109868319B (zh) 一种用于筛查急性高原反应易感者唾液中的microRNA分子标志物及其应用
CN109897897B (zh) hsa-miR-15b-5p作为分子标志物的应用和试剂盒
CN109880900B (zh) hsa-miR-134-3p作为分子标志物的应用和试剂盒
RU2580310C1 (ru) Способ прогнозирования риска развития гипертонической болезни у индивидуумов, имеющих наследственную отягощенность
CN109868318B (zh) hsa-miR-3654作为急性高原反应易感者分子标志物的应用和试剂盒
TWI690597B (zh) 泌尿上皮癌的檢測套組及檢測方法
CN109880899B (zh) hsa-miR-134-3p作为急性高原反应易感者分子标志物的应用和试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information
CB02 Change of applicant information

Address after: 400037 gaotanyan, Shapingba District, Chongqing

Applicant after: ARMY MEDICAL University

Address before: Chongqing city Shapingba street 400038 gaotanyan No. 30

Applicant before: THIRD MILITARY MEDICAL UNIVERSITY, CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY, P.R. OF CHINA

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant