CN109880825A - 一种环状RNA hsa_circ_0012152及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种环状RNA hsa_circ_0012152，其线性碱基序列如SEQ ID NO.1所示；本发明还公开了环状RNA hsa_circ_0012152作为儿童急性髓细胞白血病的分子标志物的应用；以及环状RNA hsa_circ_0012152含量的检测试剂在制备儿童急性髓细胞白血病的诊断试剂盒中的应用。本发明首先证实hsa_circ_0012152基因的客观存在；通过检测儿童急性髓细胞白血病AML中hsa_circ_0012152基因表达情况，发现其表达水平显著升高；因此，hsa_circ_0012152基因可作为诊断儿童急性髓细胞白血病AML的分子标志物，使儿童AML诊断更加准确、快速，为hsa_circ_0012152用于儿童AML的诊断以及预后分析提供新的理论依据和新的标志物。

Description

一种环状RNA hsa_circ_0012152及其应用

技术领域

本发明涉及白血病诊断技术领域，尤其是一种环状RNA hsa_circ_0012152及其在制备儿童急性髓细胞白血病诊断试剂中的应用。

背景技术

急性白血病是儿童最常见的恶性肿瘤，约占该时期恶性肿瘤的35％，其发病时骨髓中异常的原始细胞及幼稚细胞大量增殖，蓄积于骨髓并抑制正常造血，广泛浸润肝、脾、淋巴结等髓外脏器。急性白血病通常可以分为急性淋巴细胞白血病和急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia，AML)两大类。尽管AML仅占急性白血病的20％，但其病死人数却占儿童急性白血病的50％以上。由于急性白血病的病情发展程度不一，且分组亚型较多，所以在临床上对白血病的诊断显得尤为重要。如果病人在患有此种疾病以后，没有第一时间或者实施特殊的方式对疾病进行救治，患者的生命将受到严重威胁，其生存的时间可能会缩短到90天以内，这不仅严重影响了患儿的生活质量和生命健康，同时给患者家庭带来沉重的负担。因此，尽快尽早明确诊断对于临床治疗和患者预后生存有着密切关系，初诊期严谨、科学的检测方法，寻找新的高效、稳定的监测指标是近年来关注的热点。

随着肿瘤分子生物学技术的革新，研究者们发现了一类区别于传统线性RNA的RNA家族新成员——环状RNA(circular RNA，circRNA)，它不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴，是以共价键形成环形结构的RNA分子。研究发现在细胞中存在数以万计的序列高度保守的circRNA，这些circRNA主要定位于细胞质中，在人类细胞中广泛表达，它的主要特征之一是circRNA表达丰度高，部分circRNA的表达丰度是其线性异构体的10倍之多，并且还具有明显的组织特异性、时序特异性和疾病特异性；主要特征之二是它比线性RNA更稳定，不易被核酸外切酶降解。相比mRNA的一般半衰期为10小时，胞内的circRNA半衰期长达48小时。这些特征提示circRNA在生物的生命过程中发挥着重要作用，并且可能作为稳定的生物标志物用于临床诊断及预后分析。

目前对儿童AML的诊断多采用临床表现、血象、骨髓象的改变做出判断，同时结合细胞形态、免疫学、细胞遗传学和分子生物学进行分类和分型，但是，在一些发病早期，症状不典型，特别是白细胞数正常或者减少者，其血涂片不易找到幼稚白细胞时，使得诊断发生困难。而且难以与其他一些疾病(如再生障碍性贫血、恶性组织细胞增多症等)区分开。因此，寻找更快速、更灵敏、更特异的诊断指标具有重要的临床意义。

发明内容

基于上述问题，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种快速、灵敏、特异的儿童急性髓细胞白血病的诊断指标以及相应的诊断试剂盒。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案包括以下几个方面：

在第一个方面，本发明提供了一种环状RNA hsa_circ_0012152，所述环状RNA的线性碱基序列如SEQ ID NO.1所示。需要说明的是，本申请的发明人首次发现环状RNA hsa_circ_0012152在基因组上定位为chr1:44877652-44878394，对应的线性基因是RNF220(NM_018150)；该环状RNA由基因RNF220的第2个外显子区域单独环化而来，长742bp；目前尚无hsa_circ_0012152的功能应用的报道。

在第二个方面，本发明提供了一种儿童急性髓细胞白血病的分子标志物，所述分子标志物为环状RNA hsa_circ_0012152。本申请的发明人经多次实验发现在儿童急性髓细胞白血病(AML)中RNF220基因的RNA存在环化现象，且环状RNA hsa_circ_0012152在AML骨髓中表达量显著上调，表明hsa_circ_0012152可作为儿童AML诊断的新的分子标志物。

在第三个方面，本发明提供了环状RNA hsa_circ_0012152含量的检测试剂在制备儿童急性髓细胞白血病的诊断试剂盒中的应用，其中，所述检测试剂为能扩增出环状RNAhsa_circ_0012152的引物。

优选地，所述引物的碱基序列如SEQ ID NO.2和3所示。应当说明的是，本发明中能扩增出环状RNA hsa_circ_0012152的引物包括但不限于如SEQ ID NO.2和3所示的引物，还包括其它能成功扩增出环状RNA hsa_circ_0012152的引物序列。

在第四个方面，本发明提供了一种儿童急性髓细胞白血病的诊断试剂盒，所述试剂盒含有用于检测白细胞中环状RNA hsa_circ_0012152含量的试剂。本申请的发明人经多次试验发现hsa_circ_0012152对AML诊断的工作特征曲线的AUC＝0.915，当△Ct＜9.67时，灵敏度为90％，特异度可达100％，因此，hsa_circ_0012152可作为儿童AML的诊断的良好的分子标志物。

优选地，所述试剂盒含有能扩增出环状RNA hsa_circ_0012152的引物，所述引物的碱基序列如SEQ ID NO.2和3所示。需要说明的是，本发明中的诊断试剂盒中除了含有能扩增出环状RNA hsa_circ_0012152的引物外，还包括其它PCR扩增所需要的试剂，例如，RNA聚合酶、缓冲液、NTP等。

综上所述，本发明的有益效果为：

本发明通过设计特异的环状RNA引物进行RT-PCR、qPCR、一代测序、RNA酶降解、放线菌素D处理、原位杂交及核质分离等实验首先证实环状hsa_circ_0012152基因的客观存在；

本发明通过检测儿童急性髓细胞白血病(AML)中hsa_circ_0012152基因表达情况，发现其表达水平显著升高；因此，hsa_circ_0012152基因可作为诊断儿童急性髓细胞白血病AML的良好的分子标志物，使儿童AML诊断更加准确、快速，为hsa_circ_0012152用于儿童AML的诊断以及预后分析提供新的理论依据和新的标志物。

附图说明

图1为RT-PCR后电泳的结果图，其中，黑色三角形代表反向引物，白色三角形代表正向引物；其证实hsa_circ_0012152在儿童急性髓细胞白血病中的表达；

图2为一代测序结果图；其鉴定出hsa_circ_0012152的环化位点；

图3为RNase R消化后，RNA(hsa_circ_0012152和RNF220)的相对表达量的结果图；其证实了hsa_circ_0012152对核酸外切酶不敏感；

图4为放线菌素D处理后hsa_circ_0012152和RNF220表达丰度变化结果图(h：小时)；

图5为RNA荧光原位杂交的结果图；其鉴定出hsa_circ_0012152的位置(蓝色为细胞核，红色为hsa_circ_0012152标记)；

图6为qRT–PCR的结果图；其验证了hsa_circ_0012152和RNF220在胞内和核质内的分布；

图7为hsa_circ_0012152在儿童AML中的表达量的统计结果图；

图8为hsa_circ_0012152对儿童AML的诊断效应对应的ROC曲线图。

具体实施方式

本发明根据环状RNA hsa_circ_0012152在儿童AML中的表达及其对人白血病细胞生物学功能的调节作用的研究，提供了hsa_circ_0012152在儿童AML的诊断方面的应用。环状RNA hsa_circ_0012152相应的线性脱氧核糖核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

GTCTTAGGAGGGAATGATTCCCCAGTAATATTCCCTGCCCTGACCCAAAGTGCTGGTTGGCCTCCCTCCCAGGGAAGACTGCTTCTTGCGTAACGCCGGCCACAGAAAGAGACTCCGATGGACTTACACCGGGCAGCCTTCAAGATGGAGAACTCATCCTACCTTCCCAACCCTCTGGCATCCCCAGCACTGATGGTCCTGGCATCCACGGCTGAGGCCAGCCGTGATGCTTCCATCCCTTGTCAGCAGCCACGACCCTTTGGTGTACCTGTCTCAGTTGACAAGGACGTGCATATTCCTTTCACCAACGGTTCCTATACCTTTGCCTCTATGTACCATCGGCAAGGTGGGGTGCCAGGCACTTTTGCCAATCGTGATTTCCCCCCTTCTCTACTACACCTCCACCCTCAATTTGCTCCCCCAAATCTAGATTGCACCCCAATCAGTATGCTGAATCATAGTGGTGTGGGGGCTTTCCGGCCCTTTGCCTCCACCGAGGACCGGGAGAGCTATCAGTCAGCCTTTACGCCGGCCAAGCGACTTAAGAACTGCCATGACACAGAGTCTCCCCACTTGCGCTTCTCAGATGCAGATGGCAAGGAATATGACTTTGGGACACAGCTGCCATCTAGCTCCCCCGGTTCACTAAAGGTTGATGACACTGGGAAGAAGATTTTTGCTGTCTCTGGCCTCATTTCTGATCGGGAAGCCTCATCTAGCCCAGAGGATCGGAATGACAGAT(SEQ IDNO.1)

在一些实施例中，本发明首先通过设计能扩增该环状RNA的特异性引物，并通过一代测序的方法测定出hsa_circ_0012152准确的环化位点(如图2所示)，接着进行RNase R降解实验和放线菌素D处理，确定hsa_circ_0012152是一种由742个核苷酸组成的，具有闭合环状结构的环状RNA分子。同时，采用原位杂交的方法对环状RNA hsa_circ_0012152进行细胞内定位实验。

在一些实施例中，本发明通过采用实时荧光定量PCR的方法检测环状RNA hsa_circ_0012152在儿童AML样本中的表达差异，并分析了hsa_circ_0012152对儿童AML诊断的工作特征曲线，故可制作检测该基因表达变化的试剂盒以用于诊断儿童AML。

为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。如无特别说明，本发明的试剂浓度均为质量浓度。

如无特别说明，本发明所涉及的技术均为分子生物学常规技术手段，其中涉及的酶、试剂以及反应条件均可根据本领域技术人员的经验进行合理选择，其中涉及试剂耗材属于市售的普通产品，其中涉及的检测手段以及仪器也均为本领域技术人员所熟知并熟练掌握。

实施例1 RT-PCR及测序验证环状RNA hsa_circ_0012152基因的来源和序列

1、细胞采集和预处理

收集广州市妇女儿童医疗中心3例脐带静脉血各4ml，参加者均签署知情同意书。同一份脐血分为2份，一份3ml采用淋巴细胞分离液(Ficoll，)密度梯度离心法收集单个核细胞。最后加入RNAiso Plus试剂(TaKaRa)，反复吹打混匀，-80℃保存待用，一份1ml直接冻存待提取DNA。

2、RNA提取

向上述1的RNAiso Plus裂解液中直接加入200ul氯仿，上下用力震荡混匀15，静置3分钟后，4℃，12000g离心15分钟。取上清液到新的EP管内，加入等体积的异丙醇混匀，静置10分钟后，4℃，12000g离心10分钟。去掉上清，加入1ml 75％乙醇颠倒清洗，4℃，7500g离心5分钟。去掉上清，再加入1ml无水乙醇颠倒清洗，4℃，7500g离心5分钟；去掉上清，真空抽干。根据RNA沉淀的量加入适量体积(20-50ul)的DEPC水溶解RNA，测RNA浓度(A260/A280＝1.8～2.1)。

3、DNA提取

采用TIANGEN的TIANamp Genomic DNA Kit血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒完成。

取200ul脐血，加入20ul Proteinase K混匀；加入200ul缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10分钟；加入200ul无水乙醇，充分振荡混匀15秒，将上一步所得的溶液和絮状沉淀加入一个吸附柱CB3中，12000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中；向吸附柱CB3中加入500ul缓冲液GD，12000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中；向吸附柱CB3中加入600ul缓冲液PW，12000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中；将吸附柱CB3放入收集管中，12000rpm离心2分钟，倒掉废液，将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残留的漂洗液；将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50ul洗脱缓冲液TE，室温放置5分钟，12000rpm离心2分钟，将溶液收集到离心管中；将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2分钟，12000rpm离心2分钟，将溶液收集到离心管中；最后测浓度，放-20℃保存备用。

4、引物

环状RNA和内参GAPDH分别设计反向引物和正向引物各一对；PCR时设立一组gDNA为模板对照，证实circRNA来自转录后剪切，而不是基因融合等突变。使用的引物如下表1所列：

表1引物序列

5、cDNA逆转录

采用TaKaRa的PrimeScript^TM RT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect RealTime)进行cDNA逆转录(gDNA略过此步骤)。

(1)按照以下表2的配方处理以去除基因组DNA。反应程序42℃，2分钟。4℃，放置备用。

表2配方

试剂	使用量
		5×gDNA Eraser Buffer	2.0ul
gDNA Eraser	1.0ul
		Total RNA	1ug
RNase Free dH<sub>2</sub>O	补齐10ul

(2)按照以下表3的配方进行反转录反应，反应程序：37℃，15分钟；85℃，5sec；4℃，备用。

表3反转录反应体系

试剂	使用量
		步骤1的反应液	10.0ul
PrimeScript RT Enzyme Mix I	1.0ul
		RT Primer Mix	1.0ul
5×PrimeScript Buffer 2	4.0ul
		RNase Free dH<sub>2</sub>O	4.0ul
Total	20ul

6、PCR反应

采用TaKaRa的Premix Taq^TM酶，按照以下表4配方进行。反应程序：94℃，2分钟预变性；94℃变性30sec，60℃退火30sec，72℃延伸2分钟，持续40个循环；72℃、10分钟。

表4 PCR体系

试剂	使用量
		Premix Taq(Ex Taq Version 2.0plus dye)	10ul
cDNA模板或gDNA	2ug
		Primer F(10uM)	0.8ul
Primer R(10uM)	0.8ul
		RNase Free dH<sub>2</sub>O	补齐20ul

以GAPDH作为内参，3％琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，结果见图1。结果显示：只有cDNA作为模板时，反向引物能将环状RNA扩增出来，说明circ RNA—hsa_circ_0012152是来自转录后剪切，而不是基因融合等突变。

hsa_circ_0012152的序列见SEQ ID NO.1；PCR产物送测序公司测序，明确检测到环化位点，结果见图2。

实施例2 hsa_circ_0012152的稳定性实验

1、研究hsa_circ_0012152对核酸外切酶的稳定性

(1)RNase R反应体系

按照以下表5配方进行hsa_circ_0012152对核酸外切酶(RNase R)不敏感的检测。反应程序为37℃，30分钟。

表5反应体系

试剂	使用量
		RNase R(20U/ul)	0.5ul
RNA模板	5ug
		10x Reaction Buffer	2ul
dH<sub>2</sub>O	齐20ul

(2)cDNA逆转录

上述反应结束后，取2ul反应液及原RNA(未经过RNase R处理)500ng进行cDNA逆转录。方法同实施例1。

(3)定量PCR(QPCR)

采用QPCR扩增hsa_circ_0012152，线性体RNF220及GAPDH。采用TaKaRa的TBGreenTM Premix Ex TaqTMⅡ(Tli RNaseH Plus)试剂盒完成。按照以下表6实验体系完成。线性体RNF220引物序列为：

上游引物Q-RNF220-F:5’TCTCTCACGCCAACTGAGTC3’(SEQ ID NO.10)；

下游引物Q-RNF220-R2:5’CTCCTAAGACTTGCCGTGGA3’(SEQ ID NO.11)。

表6实验体系

试剂	使用量
		TB Green<sup>TM</sup> Premix Ex TaqⅡ(Tli RNaseH Plus)	10.0ul
PCR Forward Primer(10uM)	0.8ul
		PCR Reverse Primer(10uM)	0.8ul
DNA模板	1.0ul
		RNase Free dH<sub>2</sub>O	7.4ul
Total	20.0ul

反应程序为两步法，PCR扩增标准程序：预变性95℃，30sec；第二步95℃变性5sec，60℃延伸30sec，该步骤进行40个循环。

Ct_目的为目标基因Ct值，Ct_管家为管家基因Ct值。△Ct＝Ct_目的-Ct_管家，表示各样本目的基因相对管家基因的相对Ct值，△△Ct＝(△Ct)_Test-(△Ct)_Control，表示处理组相对对照组进行归一化，2^-△△Ct表示处理组相对对照组的相对表达量，表示目标基因相对表达倍数。

目标基因的相对表达量计算公式为：2^-△△Ct＝2^-【(△Ct) _Test ^-(△Ct) _Control ^】。

结果见图3，结果说明：相比mRNA(如亲本基因RNF220)，circRNA hsa_circ_0012152对核酸外切酶很稳定。

2、研究放线菌素D对hsa_circ_0012152影响

(1)将对数生长期的人髓系白血病细胞系THP-1细胞放置于到12孔细胞培养板中，在37℃、5％CO₂培养箱内培养。24h后加入2ug/ml的放线菌素D于每个孔中，分别在0h，4h，8h，12h，24h、48h六个时间点吸取培养基，用1ml PBS洗一次，弃去，加入1ml RNAiso Plus提取RNA：方法同实施例1；

(2)分别取1ug直接进行cDNA逆转录：同实施例1；

(3)QPCR扩增实验：同实施例1；

(4)结果见图4。结果显示，mRNA(如亲本基因RNF220)的半衰期约4小时，而circRNAhsa_circ_0012152超过48小时，非常稳定，这是作为分子标志物良好的特性之一。

实施例3 hsa_circ_0012152的定位

1、原位杂交研究hsa_circ_0012152在细胞内的定位(采用广州外显子探针检测试剂盒完成)

(1)细胞固定

在干净的载玻片上涂上一大小约1.5cm的圆，PBS洗5分钟；将solution A滴加到标本上，室温静置20分钟；吸去solution A，滴加solution B，室温静置15分钟；吸去solutionB，PBS洗5分钟；尽量吸干残留在片子上的PBS，在标本上滴加4％多聚甲醛，室温孵育15分钟；吸去4％多聚甲醛，用PBS洗2次，5分钟/次，洗涤后甩去残留的PBS。

(2)预杂交

在标本上滴加50ul Hybridization Buffer，盖上盖玻片，用Rubber Cement封片，至于湿盒中，于恒温箱55℃预杂交2小时。后续步骤均避光处理。

(3)杂交

预杂交快结束时，将探针与Hybridization Buffer按1:20稀释【探针的碱基序列为：5‘-CATTCCCTCCTAAGACATCTGTCATTC-3’(SEQ ID NO.12)】，混合均匀后，85℃变性3分钟，37℃平衡2分钟；预杂交结束后，吸去Hybridization Buffer，滴加20ul平衡后的探针，盖上盖玻片，用Rubber Cement封片，37℃～42℃杂交20小时。

(4)曝光

将Washing Buffer与蒸馏水按1:9混合均匀，配成工作液，揭去Rubber Cement，将玻片放入Washing Buffer工作液，待盖玻片会自动脱落后，将玻片移至预热为42℃新的Washing Buffer工作液中，洗2分钟，再移到室温的Washing Buffer工作液中，洗8分钟。待标本干燥后，滴加20ul DAPI Anti-fade solution，盖上盖玻片后，暗处静置10分钟，玻片至于冰上，荧光显微镜下观察。

(5)结果见图5。结果显示：hsa_circ_0012152基本上都定位在核内。

2、核质分离后QPCR检测hsa_circ_0012152在细胞内的定位(采用Thermoscientific的NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagents完成)

(1)取新鲜脐血单个核细胞10⁷，磷酸盐缓冲液(PBS)清洗1次，500g离心3分钟收集。去上清后加CERⅠ试剂200ul，剧烈震荡15秒，冰上孵育10分钟。

(2)加入冰浴后的CERⅡ试剂11ul，剧烈震荡5秒，冰浴1分钟；再次剧烈震荡5秒，16000g离心5分钟。

(3)迅速取上清到另一个无酶EP管中，即为细胞浆内容物，下层沉淀即为细胞核。分别加1ml RNAiso Plus，吹打混匀，待提取RNA。

(4)RNA提取：同实施例1；

(5)cDNA逆转录：同实施例1；

(6)QPCR扩增实验：同实施例1。

(7)结果见图6，结果与图5所示一致：hsa_circ_0012152主要定位在细胞核内。

实施例4 QPCR检测儿童急性髓细胞白血病骨髓中hsa_circ_0012152的表达情况

1、血液标本采集及处理

收集广州市妇女儿童医疗中心2015.1-2018.10月新发的儿童AML骨髓标本52例，完全缓解病例51例，正常儿童对照骨髓32例。所有参加者均签署知情同意书。EDTA抗凝管采骨髓标本，记录患者信息。采用红细胞裂解的方式收集白细胞。最后加入RNAiso Plus试剂(TaKaRa，)，反复吹打混匀，-80℃保存待用；

2、RNA提取：同实施例1；

3、cDNA逆转录：同实施例1；

4、QPCR扩增实验：同实施例1。

5、结果见图7，结果显示：hsa_circ_0012152在初诊的儿童AML中异常高表达；与正常健康的儿童相比，两者相差13倍之多。

6、分析hsa_circ_0012152与临床特征的相关性，结果见表7。结果显示，环状hsa_circ_0012152与白细胞、血小板、融合基因及分型的相关性都没有统计学意义，这表示hsa_circ_0012152是作为一个独立的指标在儿童AML中发挥作用。

表7 hsa_circ_0012152与临床特征的相关性

实施例5 hsa_circ_0012152诊断儿童AML的特异度和灵敏度分析

利用实施例4中检测出来的hsa_circ_0012152的表达量值(△Ct，具体计算见实施例2)绘制ROC曲线并计算曲线下面积AUC来评价hsa_circ_0012152诊断儿童AML灵敏度和特异度。当AUC＜0.5时，表示诊断无意义；AUC＝0.5-0.7时，表示诊断准确性较低；AUC＝0.7-0.9时，表示诊断准确性中等；AUC＞0.9时，表示诊断准确性高。灵敏度为纵坐标代表真阳性率，(1-特异性)为横坐标代表假阳性率。

结果见图8，结果显示，AUC＝0.915，p＜0.0001。当△Ct＜9.67时，灵敏度90％，特异度100％；说明采用环状RNA作为标志物对于诊断儿童AML的效果非常优秀。

最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 广州市妇女儿童医疗中心

<120> 一种环状RNA hsa_circ_0012152及其应用

<130> 2019

<160> 12

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 742

<212> DNA

<213> 智人

<400> 1

gtcttaggag ggaatgattc cccagtaata ttccctgccc tgacccaaag tgctggttgg 60

cctccctccc agggaagact gcttcttgcg taacgccggc cacagaaaga gactccgatg 120

gacttacacc gggcagcctt caagatggag aactcatcct accttcccaa ccctctggca 180

tccccagcac tgatggtcct ggcatccacg gctgaggcca gccgtgatgc ttccatccct 240

tgtcagcagc cacgaccctt tggtgtacct gtctcagttg acaaggacgt gcatattcct 300

ttcaccaacg gttcctatac ctttgcctct atgtaccatc ggcaaggtgg ggtgccaggc 360

acttttgcca atcgtgattt ccccccttct ctactacacc tccaccctca atttgctccc 420

ccaaatctag attgcacccc aatcagtatg ctgaatcata gtggtgtggg ggctttccgg 480

ccctttgcct ccaccgagga ccgggagagc tatcagtcag cctttacgcc ggccaagcga 540

cttaagaact gccatgacac agagtctccc cacttgcgct tctcagatgc agatggcaag 600

gaatatgact ttgggacaca gctgccatct agctcccccg gttcactaaa ggttgatgac 660

actgggaaga agatttttgc tgtctctggc ctcatttctg atcgggaagc ctcatctagc 720

ccagaggatc ggaatgacag at 742

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

tgctgtctct ggcctcattt c 21

<210> 3

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

gggaatcatt ccctcctaag ac 22

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

cctttcacca acggttccta 20

<210> 5

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

atcttcttcc cagtgtcatc aa 22

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

gaagactgtg gatggcccct 20

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

caaatgagcc ccagccttct 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

agaaggctgg ggctcatttg 20

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

aggggccatc cacagtcttc 20

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

tctctcacgc caactgagtc 20

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

ctcctaagac ttgccgtgga 20

<210> 12

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

cattccctcc taagacatct gtcattc 27

Claims (6)

1.一种环状RNA hsa_circ_0012152，其特征在于，所述环状RNA的线性碱基序列如SEQID NO.1所示。

2.一种儿童急性髓细胞白血病的分子标志物，其特征在于，所述分子标志物为权利要求1的环状RNA hsa_circ_0012152。

3.环状RNA hsa_circ_0012152含量的检测试剂在制备儿童急性髓细胞白血病的诊断试剂盒中的应用，其中，所述检测试剂为能扩增出环状RNAhsa_circ_0012152的引物。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述引物的碱基序列如SEQ ID NO.2和3所示。

5.一种儿童急性髓细胞白血病的诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有用于检测白细胞中环状RNA hsa_circ_0012152含量的试剂。

6.根据权利要求5所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有能扩增出环状RNAhsa_circ_0012152的引物，所述引物的碱基序列如SEQ ID NO.2和3所示。