CN106480033A - 一种与白血病相关的环状circRNA‑005365基因及其用途 - Google Patents

一种与白血病相关的环状circRNA‑005365基因及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种白血病相关的环状circRNA‑005365基因及其用途，本发明首先证实环状circRNA‑005365基因的存在，通过检测全身辐照病人中该基因表达情况，发现其表达水平显著下调。circRNA_005365可通过“海绵作用”吸附miR‑20a，因此该circRNA水平降低将导致细胞内游离的miR‑20a水平升高，miR‑20a对IL‑6基因表达的抑制作用加强。IL‑6在造血调节中发挥中重要作用，且与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的发生密切相关。研究组将转染了过表达环状circRNA‑005365基因的腺病毒载体的骨髓基质细胞与转染了空载体的对照骨髓基质细胞相比，发现转染组IL‑6水平明显低于对照，因而环状circRNA‑005365基因及其表达产物可作为预测造血干细胞移植后aGVHD的标记物，也可以作为治疗白血病的靶基因和用于制备治疗白血病的药物。

Description

一种与白血病相关的环状circRNA-005365基因及其用途
技术领域
本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及一种与白血病相关的环状circRNA-005365基因及其用途。
背景技术
骨髓移植(Bone marrow transplantation，BMT)目前仍是各种血液系统恶性肿瘤、再生障碍性贫血、重度地中海贫血以及一些先天性免疫缺乏症或代谢性疾病的根本治疗方法。急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease，aGVHD)是异基因造血干细胞移植后常见并发症。尽管对于移植免疫的认识在不断进步,但aGVHD仍然是异基因造血干细胞移植后病人死亡的主要原因之一。
环状RNA(circular RNA，circRNA)是一类在哺乳动物细胞中广泛存在的、对基因表达具有调控作用的内源性RNA分子。circRNA多定位于细胞质，具有miRNA应答元件(microRNA response element，MRE)，能与miRNA相互作用。circRNA能够瞬间结合或释放大量miRNA，从而高效地发挥其调控作用。circRNA广泛参与体内各种基因表达的调控，包括移植后排斥反应的调节。因此，circRNA可能是防治白血病骨髓移植患者aGVHD发生的新靶点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种环状circRNA-005365基因，该基因及其表达产物可作为预测造血干细胞移植后aGVHD的标记物，作为治疗白血病的靶基因和用于制备治疗白血病的药物。
本发明发现白血病患者经全身放疗后骨髓间充质干细胞(Bone marrowmesenchymal stem cells，BMSCs)中环状circRNA-005365基因表达显著下调，通过circRNABase预测该基因的应答元件中包括miR-20a。多项研究表明miR-20a可显著抑制白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)基因的表达。IL-6在造血调节中发挥中重要作用，且与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的发生密切相关。综合文献和课题组研究结果，我们提出科学假设：circRNA-005365可通过“海绵作用”调节miR-20a水平，从而影响白血病患者体内IL-6含量，进而参与造血干细胞移植后aGVHD的调控。
本发明第一个方面提供一种环状circRNA-005365基因，其cDNA序列如SEQ ID NO：1所示。
本发明第二个方面提供环状circRNA-005365基因在制备诊断白血病的试剂中的应用。
该环状RNA基因作为造血干细胞移植疗效的标记物。
本发明第三个方面提供环状circRNA-005365基因在制备治疗白血病药物中的应用。
本发明第四个方面提供检测所述环状circRNA-005365基因检测试剂盒，主要由DNA聚合酶、缓冲液、水、扩增引物对组成，所述的扩增引物对核酸序列如SEQ ID NO：2，SEQID NO：3所述。
本发明第五个方面提供扩增环状circRNA-005365基因的引物对在制备诊断白血病试剂中的应用，所述的扩增引物对核酸序列如SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3所述。
在本发明范围内，本发明的上述技术特征和下文实施例中具体描述的各技术特征可以互相组合，从而构成新的技术方案，限于篇幅，在此不一一赘述。
本发明首次证实了一个新的环状circRNA-005365基因的客观存在，通过检测全身辐照患者中该基因表达情况，发现其表达水平明显下降，该环状circRNA-005365基因及其表达产物可作为预测造血干细胞移植后aGVHD的标记物，为治疗白血病提供新的思路。含有该环状circRNA-005365基因及其引物对的试剂盒，可以用于aGVHD预测；环状circRNA-005365基因也可以作为预防aGVHD的靶基因，在白血病治疗中起到重大作用。
附图说明
图1正常组骨髓基质细胞中环状RNA芯片结果图；
图2全身辐照处理组骨髓基质细胞环状RNA芯片结果图；
图3正常组和全身辐照处理组骨髓基质细胞中环状RNA表达情况的聚类分析图；图中左侧为正常组骨髓基质细胞中环状RNA表达情况的聚类分析图，右侧为全身辐照处理组骨髓基质细胞中环状RNA表达情况的聚类分析图；
图4内参GAPDH基因的实时定量PCR扩增曲线；
图5 circRNA-005365基因实时定量PCR扩增曲线；
图6过表达cricRNA-005365基因腺病毒载体的骨髓基质细胞与正常组的IL-6水平比较。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定，本发明中所用的方法及其相关的试剂，可以有其他可选择和替代方案，能够达到相同技术结果即可。
实施例1：扩增环状circRNA-005365基因引物对
根据环状circRNA-005365基因SEQ ID NO:1所示的cDNA序列，设计扩增用引物，各引物的具体序列见表1。
表1 环状circRNA-005365基因扩增引物序列
引物名称 序列(5’→3’) SEQ.ID
F GAGGAGGAAGAACAGCCAAGC 2
R TGGCCTTCAATGCTCACAGC 3
上述引物人工合成后，作为扩增环状circRNA-005365基因cDNA序列引物对使用。
实施例2：样品中总RNA的制备
按照TRIZOL法RNA提取步骤，提取对照组、全身辐照处理组的骨髓基质细胞样品中的总RNA。简述如下：
1匀浆
样品按照TRIZOL法说明书，根据细胞数量，加入TRIZOL试剂后，匀浆；
2两相分离
匀浆后的样品在15-30℃孵育5分钟后，按照每1ml的TRIZOL试剂匀浆的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12,000×g离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层核上层的无色的水相。RNA全部被分配于水相中。
3RNA沉淀
将水相转移到新离心管中。水相与异丙醇混合以沉淀其中的RNA，加入异丙醇的量为每个样品匀浆时加入1ml TRIZOL试剂的此时加0.5ml的异丙醇。混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃12,000×g离心10分钟。
4RNA清洗
移去上清液，每1ml TRIZOL试剂匀浆的样品中加入至少1ml的75％乙醇，清洗RNA沉淀。振荡后，4℃7,500×g离心5分钟。
5重新溶解RNA沉淀
去除乙醇溶液，空气中干燥RNA沉淀5-10分钟，切勿真空离心干燥。注意RNA沉淀不要完全干燥，否则将大大降低RNA的可溶性。部分溶解的RNA样品A260/280比值将小于1.6。溶解RNA时，先加入无RNA酶的水用枪反复吹打几次，然后55到60℃孵育10分钟。获得的RNA溶液保存于-70℃。
6总RNA质量检测
提取的总RNA，使用ND-1000测定RNA浓度和纯度，测量前先用溶解RNA用的DEPC水调零。
提取的总RNA质量、数质量应能满足后续试验的要求。
实施例3：总cDNA序列的合成
经质量检测合格的总RNA，按照下面所述的方法进行cDNA的合成。合成所用的试剂及其生产商如下：
RNA酶抑制剂(Epicentre)；SuperScriptTM III Reverse Transcriptase(Invitrogen)；5×RT缓冲液(Invitrogen)；2.5mM dNTP混合液(dATP，dGTP，dCTP和dTTP各2.5mM)(HyTest Ltd)；Primer(英骏生物技术有限公司)
cDNA合成用热循环仪为Gene Amp PCR System 9700(Applied Biosystems)。
具体的操作方法如下：
1配制退火混合物
混合液在65℃水浴5分钟,冰上放置2分钟。
2短暂离心后，在离心管中依次加入RT反应液
混合后37℃恒温1分钟，然后用移液枪轻轻吸打几次混合均匀。
3、50℃温育60分钟。
4、70℃温育15分钟使酶失活。
5、总cDNA置冰浴待用或-20℃保存。
实施例4：环状circRNA-005365基因cDNA扩增
本发明中，环状circRNA-005365基因cDNA扩增体系如下：
取实施例3合成的总cDNA样品，配置PCR反应体系，反应体系如下：
轻柔的使溶液混合，5000rpm短暂离心。cDNA的扩增按照以下程序进行：
95℃，10min；40个PCR循环(95℃，10秒；60℃，60秒)。
实时荧光定量PCR信号收集在PCR循环的60℃，60秒阶段进行。
反应结束PCR产物与100bp DNA Ladder在2％琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。
实施例5：环状circRNA-005365基因检测试剂盒
一种环状RNA基因检测试剂盒，包括DNA聚合酶、镁离子、缓冲液、环状RNA基因特异性引物、水。
具体体系如下：
使用时，加入经反转录得到的总cDNA样品，在下列PCR扩增程序中进行扩增，
95℃，10min；40个PCR循环(95℃，10秒；60℃，60秒)。
实施例6：基因芯片法研究全身辐照病人中环状circRNA-005365基因表达情况
取经全身辐照处理后的患者骨髓基质细胞，按照实施例2中样品中总RNA的制备，提取的总RNA进行环状RNA基因芯片检测。具体步骤如下：
1 总RNA的纯度和浓度检测
用NanoDrop ND-1000检测提取的总RNA的纯度和浓度，结果如下所示：
表2 总RNA的纯度和浓度质量检测
2 RNA标记
质量合格的总RNA，用Rnase富集环状RNA。富集后的circRNA经扩增后用Arraystar公司的超级RNA标记探针(Arraystar,Inc)标记。
3 Array杂交
标记后的circRNA与Arraystar公司circRNA芯片(8*15K,Arraystar)在安捷伦分子杂交仪中65℃孵育17小时，进行杂交。
4 Array扫描
充分洗涤后，芯片用安捷伦扫描仪G2505C进行检测。
5 用安捷伦数据处理软件获取数据；
6 circRNAs表达分析
用R软件包进行一系列包括均一化的数据处理。
7 CircRNA的差异表达
用倍数变化cutoff值或者火山图分别分析辐照组和对照组中表达差异有统计学意义的circRNA。
8 注释circRNA和microRNA相互作用
采用Arraystar’s预测软件分析circRNA与microRNA的相互作用，所有差异表达的circRNA都详细注释了与之相互作用的microRNA。
9 环状RNA基因芯片检测结果
正常组和全身辐照处理组骨髓基质细胞中环状RNA基因芯片检测结果如图1、2所示，表达情况的聚类分析结果如图3所示。
环状circRNA芯片检测结果原始数据如下表所示
表3 circRNA-005365基因在环状circRNA芯片检测结果中原始荧光强度
组别 circRNA-005365荧光强度
对照组 9.09822125099127
TBI处理组 7.39410015632848
所得荧光强度数据经用安捷伦数据处理软件处理后，得到全身辐照处理组骨髓基质细胞内circRNA-005365基因比对照组表达下调1.7041211倍。
利用cytoscape生物信息学软件进行ceRNA分析，可以预测出circRNA-005365可以通过海绵吸附作用调节miR-20a水平，从而参与全身放疗后细胞周期阻滞的调控。
利用TargetScan和miRanda两种生物信息软件预测分析，发现miR-20a为circRNA-005365的应答元件。
实施例7：实时定量PCR验证全身辐照病人样品中环状circRNA-005365基因和miR-20a基因表达情况
样品总RNA提取，总cDNA合成，实时荧光定量PCR反应体系组成、扩增等参数如实施例1、2、3、4所示，采用实时荧光定量PCR分别检测对照组和实验组骨髓基质细胞内circRNA-005365基因和miR-20a基因的表达情况，各样品的目的基因和管家基因分别进行实时荧光定量PCR反应。根据绘制的梯度稀释DNA标准曲线，各样品目的基因和管家基因的浓度结果直接由机器生成。每个样品的目的基因浓度除以其管家基因的浓度，即为此样品此基因的校正后的相对含量。
内参GAPDH基因的实时定量PCR扩增曲线如图4所示，circRNA-005365基因的实时定量PCR扩增曲线如图5所示。其中图4、图5实时荧光定量PCR扩增曲线图中的△Rn含义是Rn扣除基线后得到的标准化结果，Rn(Normalized reporter)是荧光报告基团的荧光发射强度与参比染料的荧光发射强度的比值。
对照组和实验组骨髓基质细胞内circRNA-005365和miR-20a，实时定量PCR结果校正如下：
表4 全身辐照病人样品中环状circRNA-005365基因和miR-20a基因表达情况实时荧光定量PCR结果
进行数据处理后，所得的表达情况如下表所示：
表格5 全身辐照病人样品中环状circRNA-005365基因和miR-20a基因相对于内参GAPDH基因表达情况
数据比较方案 circRNA-005365/GAPDH miR-20a/GAPDH
处理组/正常组 0.22 2.02
结果显示，经过全身辐照患者骨髓基质细胞中circRNA-005365表达显著下调，仅为正常组0.22倍，同时miR-20a水平上升，较正常组高2.02倍。
实施例8：环状circRNA-005365基因过表达与IL-6的相关性
经实施例6、7中全身辐照病人样品中环状circRNA-005365基因表达情况的数据，利用cytoscape生物信息学软件进行ceRNA分析，可以预测出circRNA-005365通过海绵吸附作用调节miR-20a水平，从而IL-6表达调控，影响aGVHD的发生。
为验证该预测，将转染了过表达circRNA-005365基因腺病毒载体的骨髓基质细胞与转染空载体的对照骨髓基质细胞相比，发现circRNA-005365转染细胞株IL-6水平下降，具体如下：
1 circRNA-005365基因扩增
根据实施例1设计环状circRNA-005365扩增引物；按照实施例2制备环状circRNA-005365基因扩增用样品；按照实施例3进行总RNA基因cDNA序列的合成；然后按照实施例4进行环状circRNA-005365基因cDNA扩增，并回收扩增的circRNA-005365基因的cDNA。
2 pcDNA3-circRNA-005365重组质粒和腺病毒的制备
用taq酶将扩增后环状circRNA-005365基因cDNA链接到pcDNA3载体上，并包被到rAD-EGFP腺病毒中，命名为rAD-4-circRNA005365腺病毒。
3 细胞转染
转染前24h将1×105骨髓基质细胞接种6孔板培养皿，当细胞长至70％-80％融合的时转染。转染当日弃去旧培养基，用PBS洗2次，加入无血清、无双抗的纯DMEN 1ml，本实验对照组用1×105的rAD-EGFP腺病毒，实验组用1×105的rAD-4-circRNA005365腺病毒感染骨髓基质细胞，转染后将6孔板置于37℃，5％CO2的培养箱中培养6h，弃去培养基，换成2ml含10％血清的DMEN培养基，培养至48h，收集细胞进行后续检测。
4 IL-6检测
使用ELISA对实验组与对照组分别进行IL-6检测，结果如图6所示，实验组IL-6水平显著高于对照组。
在本发明中，发明人发现白血病患者经TBI后BMSCs中circRNA-005365表达，通过circRNABase预测circRNA-005365的应答元件为miR-20a，实验结果显示TBI处理后circRNA-005365通过“海绵作用”调节miR-20a水平，从而参与IL-6的表达调控，影响造血干细胞移植后aGVHD的发生。
以上具体实施方式仅为本创作的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神及原则之内所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 中南大学湘雅三医院
<120> 一种白血病相关的环状circRNA-005365基因及其用途
<130> 无
<160> 3
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 325
<212> DNA
<213> circRNA-005365基因的cDNA序列
<400> 1
ctttctcagc cagctgtgag cattgaaggc caggtctcaa accctccatc tactagtagc 60
accgaagtga attctcagac cattcctgag aagcagcctt cacaggaagt gaaaatggag 120
tctaaaatgg aggtggataa gccagaacca gcagatgctc aacctgagga tacaaaggag 180
gctaaaggtg aggatgttaa agtagaacct acagaaatgg aggagagagg ccctgagtta 240
aaaactgatg ggaaagagga ggaagaacag ccaagcacct ctgctaccca gtcctcccca 300
gctcctggac agtcaaagaa gaaga 325
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> circRNA-005365基因的扩增引物F
<400> 2
gaggaggaag aacagccaag c
21
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> circRNA-005365基因的扩增引物R
<400> 3
tggccttacc tgctcacagc
20

Claims (6)

1.一种环状circRNA-005365基因，其特征在于，其cDNA序列如SEQ ID NO：1所示。
2.权利要求1所述的环状circRNA-005365基因在制备诊断白血病的试剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的环状circRNA-005365基因在制备诊断白血病的试剂中的应用，其特征在于，该环状RNA基因作为造血干细胞移植疗效的标记物。
4.权利要求1所述的环状circRNA-005365基因在制备治疗白血病药物中的应用。
5.一种检测权利要求1所述环状circRNA-005365基因检测试剂盒，主要由DNA聚合酶、缓冲液、水、扩增引物对组成，其特征在于，所述的扩增引物对核酸序列如SEQ ID NO：2，SEQID NO：3所述。
6.一种扩增环状circRNA-005365基因的引物对在制备诊断白血病试剂中的应用，所述的扩增引物对核酸序列如SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3所述。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107831225A (zh) * 2017-10-13 2018-03-23 苏州大学附属第医院 硬脂酸/软脂酸组合作为aGVHD疾病诊断标志物的应用
CN107937522A (zh) * 2017-12-01 2018-04-20 南京市儿童医院 一组用于儿童急性淋巴细胞白血病诊断的circRNA标志物及其应用
CN109880825A (zh) * 2019-02-25 2019-06-14 广州市妇女儿童医疗中心 一种环状RNA hsa_circ_0012152及其应用
WO2019135701A1 (en) 2018-01-05 2019-07-11 Nilsson Rolf Jonas Andreas Endogenous tumor-derived circular rna and proteins thereof for use as vaccine

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A BONIZZATO等: "CircRNAs in hematopoiesis and hematological malignancies", 《BLOOD CANCER JOURNAL》 *
夏世金: "环状RNA的研究现状及展望", 《中国肺部疾病杂志》 *
靖彧: "蛋白质芯片技术检测异基因造血干细胞移植患者血浆IL-4和IL-6含量变化及其与aGVHD关系探讨", 《中国实验血液学杂志》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107831225A (zh) * 2017-10-13 2018-03-23 苏州大学附属第医院 硬脂酸/软脂酸组合作为aGVHD疾病诊断标志物的应用
CN107831225B (zh) * 2017-10-13 2021-08-10 苏州大学附属第一医院 硬脂酸/软脂酸组合作为aGVHD疾病诊断标志物的应用
CN107937522A (zh) * 2017-12-01 2018-04-20 南京市儿童医院 一组用于儿童急性淋巴细胞白血病诊断的circRNA标志物及其应用
CN107937522B (zh) * 2017-12-01 2019-02-26 南京市儿童医院 一组用于儿童急性淋巴细胞白血病诊断的circRNA标志物及其应用
WO2019135701A1 (en) 2018-01-05 2019-07-11 Nilsson Rolf Jonas Andreas Endogenous tumor-derived circular rna and proteins thereof for use as vaccine
CN109880825A (zh) * 2019-02-25 2019-06-14 广州市妇女儿童医疗中心 一种环状RNA hsa_circ_0012152及其应用

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