CN114182017A - circRNF220在筛选和/或制备治疗急性髓系白血病的药物中的应用 - Google Patents

circRNF220在筛选和/或制备治疗急性髓系白血病的药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及circRNF220在筛选和/或制备治疗急性髓系白血病的药物中的应用，所述circRNF220对应的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明首次证实了抑制所述circRNF220的表达能明显抑制HL‑60和THP‑1细胞的增殖，促进HL‑60和THP‑1细胞的早期凋亡率，阻滞HL‑60和THP‑1细胞周期于G1期，并有效降低皮下荷瘤裸鼠肿瘤的体积和重量。因此，circRNF220可用于筛选治疗急性髓系白血病的药物，且可作为急性髓系白血病的治疗靶标。本发明为急性髓系白血病提供了新的治疗分子靶标及治疗途径。

Description

circRNF220在筛选和/或制备治疗急性髓系白血病的药物中 的应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及circRNF220在筛选和/或制备治疗急性髓系白血病的药物中的应用。
背景技术
环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类新发现的内源性非编码RNA(non-codingRNA,ncRNA)，circRNA形成特殊的共价闭合环状结构，既没有5’-3’极性，亦无多聚腺苷酸尾巴。circRNA参与几乎所有的细胞生理过程，circRNA的异常表达与肿瘤的发生和发展有密切关系。目前，关于circRNA的调控分子机制主要是三方面：可以充当microRNA诱饵，circRNA一旦进入细胞质，就会起竞争性内源性RNA(ceRNA)的作用，它们作为miRNA海绵与miRNA结合并阻止其对靶mRNA的抑制作用；可以调控基因转录，circRNA中的环状内含子RNA(circular intronic RNAs，ciRNAs)和外显子-内含子环状RNA(Exon-intron circularRNAs r，EIciRNAs)可以通过与线性剪接相互竞争调控亲代基因的转录，ciRNAs可以作为RNA聚合酶Ⅱ(RNA PolⅡ)的积极调节因子和RNA PolⅡ相互作用调控亲代基因的转录，EIciRNAs则能与U1小核RNA(U1 snRNP)相互作用形成EIciRNA-U1 snRNP复合物，然后该复合物与Pol Ⅱ的转录复合物相互作用影响亲代基因表达；可以充当蛋白质的海绵体，和RNA结合蛋白(RNA-binding proteins,RBPs)结合形成RNA蛋白复合物，影响蛋白质的表达。由于circRNAs广泛表达在组织细胞及血液中，并具有高度稳定性、高度特异性的特点。因此，circRNA可作为恶性肿瘤诊治的潜在生物标志物及分子靶标。
急性髓细胞性白血病(acute myeloid leukemia，AML)是一类髓系造血干祖细胞的恶性克隆性疾病，发病时，骨髓中异常的原始细胞及幼稚细胞大量增殖并抑制正造血，可广泛浸润肝、脾、淋巴结等各种脏器，表现为贫血、出血、感染和浸润等征象。急性髓系白血病主要分为M0-M7型。不同分型其临床表现、发病机制各异。已有研究表明：circRNA在肿瘤发生发展中起着重要作用，但调控AML进展的关键circRNA及其分子调控机制仍不清楚。因此，寻找发现AML中关键circRNA分子，将能为AML的临床诊治提供新的分子标志物，并且为抑制AML细胞恶性增殖的策略提供科学依据。
发明内容
基于此，本发明的目的在于，提供circRNF220在筛选和/或制备治疗急性髓系白血病的药物中的应用，抑制circRNF220的表达能有效抑制AML细胞的增殖和实体瘤的生长。
具体技术方案为：
circRNF220在筛选治疗急性髓系白血病的药物中的应用，所述circRNF220对应的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了一种体外筛选治疗急性髓系白血病的药物的方法，其包括以下步骤：(1)用待选试剂处理表达或含有circRNF220的体系，所述circRNF220对应的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；(2)检测circRNF220的表达，若circRNF220的表达受到抑制，则所述待选试剂可作为治疗急性髓系白血病的药物。
进一步地，所述步骤(2)中检测circRNF220的表达的试剂包括如SEQ ID NO.6所示的上游引物和SEQ ID NO.7所示的下游引物。
本发明还提供了抑制circRNF220表达的试剂在制备治疗急性髓系白血病的药物中的应用，所述circRNF220对应的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
进一步地，所述抑制circRNF220表达的试剂为siRNA或包含siRNA的表达载体。
进一步地，所述siRNA包括如SEQ ID NO.2所示的正义链和SEQ ID NO.3所示的反义链。
进一步地，所述表达载体为慢病毒表达载体。
本发明还提供了一种siRNA，所述siRNA包括如SEQ ID NO.2所示的正义链和SEQID NO.3所示的反义链。
本发明还提供了一种包含所述siRNA的表达载体。
进一步地，所述表达载体为慢病毒表达载体。
本发明还提供了一种治疗急性髓系白血病的药物，所述药物包含所述的siRNA或表达载体，以及药物学上可接受的辅料。
本发明提供了一种可用于筛选和/或制备治疗急性髓系白血病的药物的分子标靶circRNF220，所述circRNF220来源于母基因RNF220，定位于1号染色体，由2号外显子单独反向拼接成环状RNA。发明人经过研究证实了抑制所述circRNF220的表达能明显抑制HL-60和THP-1细胞的增殖，促进HL-60和THP-1细胞的早期凋亡率，阻滞HL-60和THP-1细胞周期于G1期，并有效降低皮下荷瘤裸鼠肿瘤的体积和重量。因此，所述circRNF220可用于筛选治疗急性髓系白血病的药物，且可作为急性髓系白血病的治疗靶标。本发明为急性髓系白血病提供了新的治疗分子靶标及思路。
附图说明
图1为降低circRNF220的表达水平对THP-1细胞增殖和凋亡的影响的检测结果图；其中，Blank vec代表空载病毒感染组；RNAi代表shRNA-circRNF220组；cell代表空白对照组；NC代表阴性对照组；sh-circRNF220代表shRNA-circRNF220组。
图2为降低circRNF220的表达水平对HL-60细胞增殖和凋亡的影响的检测结果图；其中，Blank vec代表空载病毒感染组；RNAi代表shRNA-circRNF220组；cell代表空白对照组；NC代表阴性对照组；sh-circRNF220代表shRNA-circRNF220组。
图3为降低circRNF220的表达对THP-1细胞建模的荷瘤裸鼠的肿瘤生长影响检测结果图；其中，THP-1-cell代表空白对照组；THP-1-NC代表阴性对照组；THP-1-circRNF220代表shRNA-circRNF220组。
图4为降低circRNF220的表达对HL-60细胞建模的荷瘤裸鼠的肿瘤生长影响检测结果图；其中，HL-60-cell代表空白对照组；HL-60-NC代表阴性对照组；HL-60-circRNF220代表shRNA-circRNF220组。
图5为circRNF220的成环性、稳定性和定位鉴定结果图；其中，a:DAPI，b:FITC，c:Merge。
具体实施方式
本发明下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。
除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。
本发明的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。
本发明的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。
在本发明中提及的“多个”是指两个或两个以上。“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在B这三种情况。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。
本发明所述circRNF220对应的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：
SEQ ID NO.1：5’-GTCTTAGGAGGGAATGATTCCCCAGTAATATTCCCTGCCCTGACCCAAAGTGCTGGTTGGCCTCCCTCCCAGGGAAGACTGCTTCTTGCGTAACGCCGGCCACAGAAAGAGACTCCGATGGACTTACACCGGGCAGCCTTCAAGATGGAGAACTCATCCTACCTTCCCAACCCTCTGGCATCCCCAGCACTGATGGTCCTGGCATCCACGGCTGAGGCCAGCCGTGATGCTTCCATCCCTTGTCAGCAGCCACGACCCTTTGGTGTACCTGTCTCAGTTGACAAGGACGTGCATATTCCTTTCACCAACGGTTCCTATACCTTTGCCTCTATGTACCATCGGCAAGGTGGGGTGCCAGGCACTTTTGCCAATCGTGATTTCCCCCCTTCTCTACTACACCTCCACCCTCAATTTGCTCCCCCAAATCTAGATTGCACCCCAATCAGTATGCTGAATCATAGTGGTGTGGGGGCTTTCCGGCCCTTTGCCTCCACCGAGGACCGGGAGAGCTATCAGTCAGCCTTTACGCCGGCCAAGCGACTTAAGAACTGCCATGACACAGAGTCTCCCCACTTGCGCTTCTCAGATGCAGATGGCAAGGAATATGACTTTGGGACACAGCTGCCATCTAGCTCCCCCGGTTCACTAAAGGTTGATGACACTGGGAAGAAGATTTTTGCTGTCTCTGGCCTCATTTCTGATCGGGAAGCCTCATCTAGCCCAGAGGATCGGAATGACAGAT-3’
实施例1降低circRNF220的表达水平能有效抑制HL-60和THP-1细胞增殖一、实验方法
1、设计针对circRNF220接头处的siRNA，并构建针对所述siRNA的慢病毒表达载体感染HL-60和THP-1细胞株。
HL-60和THP-1细胞株购自华拓细胞库。细胞培养体系：DMEM/F12培养液含10％胎牛血清，置37℃、5％CO2培养箱，每2～3d用新鲜培养液传代培养。实验选用对数生长期、台盼蓝拒染率>95％的细胞。
circRNF220小干扰RNA序列的设计、合成和重组病毒质粒构建由上海吉玛公司完成，针对circRNF220基因的siRNA序列、阴性对照序列(NC序列)如表1所示：
表1 siRNA序列信息
Figure BDA0003415483430000041
分别将含有所述siRNA序列和NC序列的重组病毒质粒与包装质粒pGag/Pol、pRev、pVSV-G混合，转染293T细胞，转染后6h换液，48h后收集病毒液，浓缩，测滴度。分别将含有siRNA序列和NC序列的病毒液感染HL-60和THP-1细胞，同时将空病毒感染HL-60和THP-1细胞，同时加Polybrene增强感染效果，感染24h后换液，48h后加入puro药筛，筛选出单克隆稳转株，继续培养。
2、常规继续培养细胞，接种于96或12孔板，培养48小时后，分别运用CCK-8法检测细胞增殖能力、流式细胞术检测细胞早期凋亡率、qRT-PCR检测circRNF220的表达水平。
细胞分组：分空白对照组(HL-60和THP-1细胞，不进行慢病毒感染处理)、阴性对照组(感染含有所述NC序列的慢病毒表达载体的病毒)，shRNA-circRNF220组(感染含有所述siRNA的慢病毒表达载体的病毒，可以稳定表达针对circRNF220的siRNA)。
(1)收集细胞qRT-PCR检测circRNF220的表达
收集细胞，采取TRIzol试剂提取RNA，采用M-MLV逆转录酶逆转录为cDNA，作为PCR反应的模板。利用β-actin作为内参，针对circRNF220和β-actin的检测引物如表2所示：
表2检测引物
Figure BDA0003415483430000051
反应体系：cDNA 5.0μl，上游引物0.5μl，下游引物0.5μl，2×SYBR Green qPCRSuperMix 10μl，dH2O 4.0μl，总体积20μl。反应条件：50℃ 2min；95℃ 2min；95℃ 15s，60℃ 32s读板，40cycles；融解曲线分析：温度60℃，95℃，每个样重复3次。
(2)CCK-8法检测细胞增殖抑制率
用无血清的DMEM/F12培养液调细胞浓度为104个/mL，接种96孔板，每孔100μl，细胞分组参照以上，每孔加入CCK-8试剂10μl，室温孵育120min，多功能酶标仪(Bio-Rad)测定吸光度A450nm(激发波长450nm，参比波长655nm)，计算细胞的增殖抑制率。增殖抑制率(％)＝(对照组吸光度－实验组吸光度)/(对照组吸光度-空白组吸光度)×100％。
(3)流式细胞术检测细胞早期凋亡
细胞接种于6孔板中，按分组分别处理细胞48h后，0.25％胰蛋白酶消化收集细胞，PBS洗涤2次(2000r/min，离心5min)，调节细胞浓度为5×108个/L后加入500μL BindingBuffer悬浮细胞，加入5μl Annexin V-FITC混匀，再加入5μl Propidium Iodide(PI)混匀；室温、避光、反应5-15min；在1h内进行流式细胞仪检测，区分完整细胞(annexin/PI)、凋亡细胞(annexin+/PI)和坏死细胞(annexin+/PI+)。
(4)流式细胞术检测细胞周期
转染48h后收集各组细胞，调整细胞浓度为1×106个，离心后用预冷PBS洗涤3遍，将细胞置于4℃、75％的冰乙醇中固定过夜。经预冷PBS洗涤3次后，加100μl RNaseA溶液(试剂盒自带)，在37℃水浴锅中孵育30min。随后加入400μl PI溶液(试剂盒自带)混匀，室温避光染色20-30min后使用BD流式细胞仪检测各个样品的细胞周期分布并用modfit LT软件进行结果分析。
二、实验结果
1、siRNA能显著降低circRNF220的表达
针对THP-1细胞的检测结果如图1所示，设计针对circRNF220接头处的siRNA(图1A)，并构建相应的慢病毒表达载体，用于感染THP-1细胞。感染48h后，shRNA-circRNF220组的荧光结果如图1B所示，能看到明显的GFP绿色荧光。与空载体病毒感染组相比，shRNA-circRNF220组THP-1细胞中circRNF220的表达显著下降，提示所述siRNA抑制了circRNF220的表达(图1C)。与阴性对照组相比，shRNA-circRNF220组THP-1细胞的增殖明显受到了抑制(图1D)。流式细胞术检测结果表明shRNA-circRNF220组THP-1细胞的早期凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组，说明抑制circRNF220的表达可以促进THP-1细胞的凋亡(图1E)。同时，流式分析亦证实了抑制circRNF220的表达能阻止肿瘤细胞由G1期向S期转变，将细胞阻滞在G1期，从而抑制细胞增殖(图1F)。
针对HL-60细胞的检测结果如图2所示，感染48h后，shRNA-circRNF220组的荧光结果如图2A所示，在荧光显微镜下能观察到明显的GFP绿色荧光。与空载体病毒感染组相比，shRNA-circRNF220组HL-60细胞中circRNF220的表达显著下降(图2B)。与阴性对照组相比，shRNA-circRNF220组HL-60细胞的增殖明显受到了抑制(图2C)。流式细胞术检测结果表明shRNA-circRNF220组HL-60细胞的早期凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组，说明抑制circRNF220的表达可以促进HL-60细胞的凋亡(图2D)。同时，流式分析亦证实了抑制circRNF220的表达能阻止肿瘤细胞由G1期向S期转变，将细胞阻滞在G1期，从而抑制细胞增殖(图2E)。
上述结果表明，降低circRNF220的表达水平能有效抑制HL-60和THP-1细胞增殖。
实施例2动物体内实验观察circRNF220对AML细胞增殖的影响
一、实验方法
实验动物分组：雄激素BALB/c裸小鼠100只，购自广东省实验动物中心，体重18-20g，雌性，4周龄，分成四组，每组25只饲养。①空白对照组(注射HL-60和THP-1细胞)，②阴性对照组(注射能稳定表达NC序列的HL-60和THP-1的细胞株)，③shRNA-circRNF220组(注射能稳定表达针对circRNF220的siRNA的HL-60和THP-1细胞株)。分别收集处于对数生长期的细胞，用PBS清洗三遍后，用PBS稀释成浓度为4.5×107个/ml的细胞悬液，分别给各组BALB/C裸鼠背部皮下注射200μL的细胞悬液。约10天后肉眼可见裸鼠背部有瘤体形成；用电子数显卡尺测量瘤体体积、称量小鼠体重，每两天测量一次，连续检测20天后，将裸鼠处死，剥离裸鼠的瘤体，并记录瘤体的重量。
二、实验结果
注射含THP-1细胞株的小鼠检测结果如图3所示，与空白对照组和阴性对照组相比，shRNA-circRNF220组小鼠的肿瘤体积和肿瘤重量显著下降。
注射含HL-60细胞株的小鼠检测结果如图4所示，与空白对照组和阴性对照组相比，shRNA-circRNF220组小鼠的肿瘤体积和肿瘤重量显著下降。
上述结果表明，在小鼠体内降低circRNF220的表达能有效抑制THP-1和HL-60细胞建模的荷瘤裸鼠的肿瘤生长。
实施例3circRNF220的成环性、稳定性和定位鉴定
(1)琼脂糖凝胶电泳及连接点测序验证circRNF220的成环性
circRNA的来源不同于线性RNA，它是由基因或基因间的外显子或内含子通过特殊的剪切方式“索尾插接”(backsplicing)，使得3’端与5’端的碱基通过共价键结合形成环状，因此通过琼脂糖凝胶电泳实验方法，当以其反向引物进行实验时，无法在其基因组DNA中扩增出相应条带，而能在其cDNA中扩增相应条带，这是一种常用的间接证实其成环性的方法，具体操作方法参照(Bing,Zhou,Jian Wu,Yu.A novel identified circular RNA,circRNA_010567,promotes myocardial fibrosis via suppressing miR-141bytargeting TGF-β1[J].Biochemical and biophysical research communications,2017,487(4):769-775.)。最后将扩增产物外送上海生工测序，主要测定成环连接点附近的碱基序列，进一步证实其成环性。
(2)RNase R实验验证circRNF220的稳定性
由于circRNA特殊的环状结构，使其不易受RNase R影响。提取组织中的RNA；将RNA分为两组，即RNase消化组和非消化组，RNase消化组按1μg RNA用1U的RNase的比例加样，37℃，混匀15min；用苯酚/氯仿、乙醇沉淀法提取消化产物，并逆转录为cDNA；通过qRT-PCR检测circRNF220及对应线性mRNA的表达水平，以非消化组为对照。
(3)FISH技术验证circRNF220在细胞中的定位
基因探针序列如下：SEQ ID NO.10：5’-GAA TCA TTC CCT CCT AAG ACA TCT GTCATT C CG ATC CTC T-3’。荧光探针的设计合成由广州伯信科技公司完成。运用4％多聚甲醛室温固定组织20min，0.1％DEPC水洗涤2次/5min消化：蛋白酶K 37℃消化20min。PBS洗涤2次×5min；再固定。1％多聚甲醛再次室温固定10min，PBS洗涤2次/5min；过预冷的(-20℃)70％、85％、100％酒精脱水，各5min，空气中干燥；探针变性：将FITC荧光染料标记的探针和探针稀释液混匀成探针杂交混合液，73℃变性8min，置冰上；杂交：滴加杂交混合液于爬片上，42℃杂交过夜；用预热的(42℃)50％甲酰胺/2×SSC洗涤3次×5min，2×SSC洗涤2次×5min；DAPI染液复染，用PBS洗涤3次×5min。抗荧光衰减封片剂封片。最后荧光显微镜观察拍照。
结果如图5所示，所述circRNF220来源于母基因RNF220，定位于染色体1号染色体，由2号外显子单独反向拼接成环状RNA。Sanger测序已证实了circRNF220的成环位点(图5A)。circRNF220定位于胞质中(图5B)，通过放线菌素D处理，circRNF220比其线性形式RNA更加稳定(图5C)。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 广州市番禺区中心医院(广州市番禺区人民医院、广州市番禺区心血
管疾病研究所)
<120> circRNF220在筛选和/或制备治疗急性髓系白血病的药物中的应用
<130> 2021-12-14
<160> 9
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 742
<212> DNA
<213> Artifical Sequence
<400> 1
gtcttaggag ggaatgattc cccagtaata ttccctgccc tgacccaaag tgctggttgg 60
cctccctccc agggaagact gcttcttgcg taacgccggc cacagaaaga gactccgatg 120
gacttacacc gggcagcctt caagatggag aactcatcct accttcccaa ccctctggca 180
tccccagcac tgatggtcct ggcatccacg gctgaggcca gccgtgatgc ttccatccct 240
tgtcagcagc cacgaccctt tggtgtacct gtctcagttg acaaggacgt gcatattcct 300
ttcaccaacg gttcctatac ctttgcctct atgtaccatc ggcaaggtgg ggtgccaggc 360
acttttgcca atcgtgattt ccccccttct ctactacacc tccaccctca atttgctccc 420
ccaaatctag attgcacccc aatcagtatg ctgaatcata gtggtgtggg ggctttccgg 480
ccctttgcct ccaccgagga ccgggagagc tatcagtcag cctttacgcc ggccaagcga 540
cttaagaact gccatgacac agagtctccc cacttgcgct tctcagatgc agatggcaag 600
gaatatgact ttgggacaca gctgccatct agctcccccg gttcactaaa ggttgatgac 660
actgggaaga agatttttgc tgtctctggc ctcatttctg atcgggaagc ctcatctagc 720
ccagaggatc ggaatgacag at 742
<210> 2
<211> 21
<212> RNA
<213> Artifical Sequence
<400> 2
ggaaugacag augucuuagg a 21
<210> 3
<211> 21
<212> RNA
<213> Artifical Sequence
<400> 3
uccuaagaca ucugucauuc c 21
<210> 4
<211> 22
<212> RNA
<213> Artifical Sequence
<400> 4
uucuccgaac gugucacguu uc 22
<210> 5
<211> 22
<212> RNA
<213> Artifical Sequence
<400> 5
gaaacgugac acguucggag aa 22
<210> 6
<211> 24
<212> DNA
<213> Artifical Sequence
<400> 6
gttgatgaca ctgggaagaa gatt 24
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> Artifical Sequence
<400> 7
gcgttacgca agaagcagtc 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> Artifical Sequence
<400> 8
gtggccgagg actttgattg 20
<210> 9
<211> 23
<212> DNA
<213> Artifical Sequence
<400> 9
cctgtaacaa cgcatctcat att 23

Claims (10)

1.circRNF220在筛选治疗急性髓系白血病的药物中的应用，其特征在于，所述circRNF220对应的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种体外筛选治疗急性髓系白血病的药物的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用待选试剂处理表达或含有circRNF220的体系，所述circRNF220对应的核苷酸序列如SEQID NO.1所示；(2)检测circRNF220的表达，若circRNF220的表达受到抑制，则所述待选试剂可作为治疗急性髓系白血病的药物。
3.抑制circRNF220表达的试剂在制备治疗急性髓系白血病的药物中的应用，其特征在于，所述circRNF220对应的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抑制circRNF220表达的试剂为siRNA或包含siRNA的表达载体。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述siRNA包括如SEQ ID NO.2所示的正义链和SEQ ID NO.3所示的反义链。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述表达载体为慢病毒表达载体。
7.一种siRNA，其特征在于，所述siRNA包括如SEQ ID NO.2所示的正义链和SEQ IDNO.3所示的反义链。
8.一种包含权利要求7所述siRNA的表达载体。
9.根据权利要求8所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为慢病毒表达载体。
10.一种治疗急性髓系白血病的药物，其特征在于，所述药物包含权利要求7～9任一项所述的siRNA或表达载体，以及药物学上可接受的辅料。
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