CN110291193A - 在酵母中产生去饱和脂肪醇和去饱和脂肪酰基乙酸酯 - Google Patents

Abstract

本发明涉及从酵母细胞中产生包含在信息素、特别是蛾信息素中的化合物，如去饱和脂肪醇和去饱和脂肪酰基乙酸酯及其衍生物。

Description

在酵母中产生去饱和脂肪醇和去饱和脂肪酰基乙酸酯

技术领域

本发明涉及从酵母细胞中产生包含在信息素、特别是蛾信息素中的化合物，如去饱和脂肪醇和去饱和脂肪酰基乙酸酯及其衍生物。

背景技术

自从50多年前DDT出现以来，广谱神经毒性杀虫剂已经为防治农业和公共卫生项目中经济上重要的昆虫提供了主要手段。尽管合成杀虫剂的使用最初导致作物产量的显著增加和一些重要的人类和动物疾病媒介的抑制，但是昆虫害虫群体中杀虫剂抗性的发展和由杀虫剂引起的环境损害已经被广泛认为是它们的使用的严重弊端。与制造和使用杀虫剂相关的最显著的环境问题包括1)它们对非靶标生物(包括人类)的直接毒性；2)它们在它们可能积累并在高等生物中引起不幸的发育和生殖影响的生物圈中的持久性；3)与它们的制造和分销相关的显著点源污染；4)它们的全球分散。

信息素可以取代杀虫剂用作害虫防治。例如，已经发现(Z)19-14:OAc在单独施用(即没有其他信息素组分)时以86％的效率干扰秋粘虫的交配效率(Mitchell&McLaughlin,1982)。信息素通过交配干扰来防治昆虫害虫的商业用途具有优于常规杀虫剂的若干优点。信息素：1)无毒且对环境无害；2)对一种靶标物种具有特异性，而不会不利地影响非靶标有益昆虫，使得它们非常适合用于综合害虫治理项目；并且3)不太可能(并且从未显示过)在靶标昆虫中产生抗性。与自然界中的信息素合成相反，当前用于商业生产信息素的方法采用传统的合成化学途径。因为信息素需要非常高的纯度来引发昆虫的反应，所以这些合成方法是昂贵且困难的，并且产生大量需要处理的有机废物。

因此，阻碍使用性信息素的主要障碍仍然是生产成本。因此，全球农业用地中很小一部分采用了信息素(估计低于0.05％)。预期从细胞工厂产生信息素将显著降低信息素的生产成本。

发明内容

本发明是如在权利要求中所限定的。

本文提供了能够产生去饱和脂肪醇和任选地去饱和脂肪酰基乙酸酯的酵母细胞，所述酵母细胞表达：

i)至少一种能够在碳链长为14的脂肪酰基-CoA中引入至少一个双键的异源去饱和酶；和

ii)至少一种能够将至少一部分的所述去饱和脂肪酰基-CoA转化为去饱和脂肪醇的异源脂肪酰基-CoA还原酶(FAR)；以及

iii)任选地，能够将至少一部分的所述去饱和脂肪醇转化为去饱和脂肪酰基乙酸酯的乙酰基转移酶；

其中所述去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性。

还提供了用于在酵母细胞中产生去饱和脂肪酸和任选地去饱和脂肪酰基乙酸酯的方法，所述方法包括提供酵母细胞以及在培养基中孵育所述酵母细胞的步骤，其中所述酵母细胞表达：

i)至少一种能够在碳链长为14的脂肪酰基-CoA中引入至少一个双键的异源去饱和酶，从而将至少一部分的所述脂肪酰基-CoA转化为去饱和脂肪酰基-CoA；和

ii)至少一种能够将至少一部分的所述去饱和脂肪酰基-CoA转化为去饱和脂肪醇的异源脂肪酰基-CoA还原酶，从而产生所述去饱和脂肪醇；以及

iii)任选地，能够将至少一部分的所述去饱和脂肪醇转化为去饱和脂肪酰基乙酸酯的乙酰基转移酶，从而产生所述去饱和脂肪酰基乙酸酯；

其中所述去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性。

本文还提供了用于修饰酵母细胞的核酸构建体，所述构建体包含：

i)编码至少一种能够在碳链长为14的脂肪酰基-CoA中引入至少一个双键的异源去饱和酶的第一多核苷酸；和

ii)编码至少一种能够将至少一部分的所述去饱和脂肪酰基-CoA转化为去饱和脂肪醇的异源脂肪酰基-CoA还原酶(FAR)的第二多核苷酸；以及

iii)任选地，编码能够将至少一部分的所述去饱和脂肪醇转化为去饱和脂肪酰基乙酸酯的乙酰基转移酶的第三多核苷酸，

其中任选地，所述第一多核苷酸、所述第二多核苷酸和/或所述第三多核苷酸处于启动子的控制下。

还提供了部件试剂盒(kit of parts)，其包含：

a)如本文公开的酵母细胞和使用说明书；和/或

b)如本文公开的核酸构建体，其中所述构建体用于修饰酵母细胞；以及

c)任选地，待修饰的酵母细胞。

还提供了通过本文公开的方法可获得的去饱和脂肪醇。

还提供了通过本文公开的方法可获得的去饱和脂肪酰基乙酸酯。

还提供了如本文公开的去饱和脂肪醇的用途。

还提供了如本文公开的去饱和脂肪酰基乙酸酯的用途。

附图说明

图1：朝向Z9-C14:OAc的途径。(1)十四烷酰基-CoA(肉豆蔻酰基-CoA)，14:CoA；(2)(Z)9-十四碳烯-1-基-CoA，Z9-14:CoA；(3)(Z)9-十四碳烯-1-醇，Z9-14:OH；(4)(Z)9-十四碳烯-1-基乙酸酯，Z9-14:OAc；(5)(Z)9-十四碳烯醛，Z9-14:Ald。Δ9FAD-Z9-脂肪酰基去饱和酶；FAR-脂肪酰基-CoA还原酶；AcT-乙酰基-CoA转移酶。

图2：表达盒。A：Dmd9和HarFAR的表达盒(在质粒pCfB6969上编码)。B：Atf1的表达盒(在质粒pCfB7600上编码)。C：LIP2、LIP7或LIP8的表达盒。“Term.”代表终止子；“prom.”代表启动子。D：Atf1和Dmd9的表达盒(pCfB7235)。E：Dmd9的表达盒(pCfB7239)。F：SliDes11的表达盒(pCfB7240)。G：TesA(LL)/CcFATB1和Dmd9的表达盒(pCfB7251/pCfB7253)。

图3：解脂耶氏酵母(Y,lipolytica)中脂肪酶基因的缺失增高了脂肪醇滴度。

具体实施方式

定义

生物农药：术语“生物农药(biopesticide)”是“生物农药(biologicalpesticide)”的缩写，是指几种类型的害虫治理干预：通过捕食、寄生或化学关系。在欧盟，生物农药已经被定义为“一种基于微生物或天然产物的农药”。在美国，EPA将其定义为“包括防治害虫的天然存在的物质(生物化学农药)、防治害虫的微生物(微生物农药)以及含有添加的遗传材料(植物结合保护剂(plant-incorporated protectant))或PIP的植物产生的杀虫物质”。本公开文本更具体地涉及包含天然产物或天然存在的物质的生物农药。它们通常通过使天然存在的生物和/或其代谢物(包括细菌和其他微生物、真菌、线虫、蛋白质等)生长和浓缩而产生。它们通常被认为是害虫综合治理(IPM)计划的重要组成部分，并且作为合成化学植物保护产品(PPP)的替代品已经受到很大的实际关注。生物防治剂手册(2009年：以前的生物农药手册)对可用的生物杀虫剂(和其他基于生物学的防治)产品进行了综述。

去饱和的：术语“去饱和的(desaturated)”在本文中将可与术语“不饱和的(unsaturated)”互换使用，是指含有一个或多个碳-碳双碳或碳-碳三键的化合物。

衍生自：当提及衍生自生物的多肽或多核苷酸时，所述术语意指所述多肽或多核苷酸对于所述生物而言是天然的。

脂肪酸：术语“脂肪酸”是指具有长脂肪族链(即4与28个之间的碳原子(如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个碳原子)的脂肪族链)的羧酸。大多数天然存在的脂肪酸是无支链的。它们可以是饱和的或去饱和的。

脂肪酰基乙酸酯：所述术语在本文中将可与“脂肪乙酸酯”互换使用，是指具有脂肪碳链(即4与28个之间的碳原子(如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个碳原子)的脂肪族链)的乙酸酯。脂肪酰基乙酸酯可以是饱和的或去饱和的。

脂肪酰基-CoA：所述术语在本文中将可与“脂肪酰基-CoA酯”互换使用，是指通式R-CO-SCoA的化合物，其中R是碳链长为4至28个碳原子(如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个碳原子)的脂肪碳链。脂肪碳链通过硫酯键与辅酶A的-SH基团连接。脂肪酰基-CoA可以是饱和的或去饱和的，这取决于衍生出它的脂肪酸是饱和的还是去饱和的。

脂肪醇：术语“脂肪醇”在本文中是指衍生自脂肪酰基-CoA的醇，其具有4至28个碳原子(如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个碳原子)的碳链长。脂肪醇可以是饱和的或去饱和的。

脂肪醛：所述术语在本文中是指衍生自脂肪酰基-CoA的醛，其具有4至28个碳原子(如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个碳原子)的碳链长。脂肪醛可以是饱和的或去饱和的。

异源的：当提及多肽(如蛋白质或酶)或多核苷酸时，术语“异源的”在本文中应解释为指代不天然存在于野生型细胞中的多肽或多核苷酸。例如，当应用于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)时，术语“异源Δ9去饱和酶”是指不天然存在于野生型酿酒酵母细胞中的Δ9去饱和酶，例如衍生自黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)的Δ9去饱和酶。

天然的：当提及多肽(如蛋白质或酶)或多核苷酸时，术语“天然的”在本文中应解释为指代天然存在于野生型细胞中的多肽或多核苷酸。

害虫：如本文所用，术语“害虫”应指代对人类或人类关怀(特别是在农业或畜牧生产的背景下)有害的生物，特别是动物。害虫是对植物或动物、人类或人类关怀、牲畜、人类结构、野生生态系统等具侵入性或多产、有害、有麻烦、有毒、有破坏性、惹人讨厌的任何活生物。所述术语经常与相关术语害虫(vermin)、杂草、植物和动物寄生虫和病原体重叠。有可能生物在一种环境中是害虫，而在另一种环境中是有益的、驯化的或可接受的。

信息素：信息素是天然存在的化合物。鳞翅目(Lepidopteran)信息素由以醇、醛或乙酸酯官能团结尾并且在脂肪族主链中含有最多3个双键的无支链脂肪族链(9与18个之间的碳，如9、10、11、12、13、14、15、16、17或18个碳原子)指定。信息素组合物能以化学或生物化学方式产生，例如如本文所述。因此，信息素包含去饱和脂肪醇、脂肪醛和/或脂肪酰基乙酸酯，例如可以通过本文所述的方法和细胞获得。

饱和的：术语“饱和的”是指不含碳-碳双碳或碳-碳三键的化合物。

特异性：酶对给定底物的特异性是此酶表现的催化从所述底物开始的反应的优选性。在本公开文本中，与用十六烷酰基-CoA作为底物的反应相比，对十四烷酰基-CoA(肉豆蔻酰基-CoA)的特异性高于对十六烷酰基-CoA(棕榈酰基-CoA)的特异性的去饱和酶和/或脂肪酰基-CoA还原酶优选地催化用十四烷酰基-CoA作为底物的反应。确定去饱和酶或脂肪酰基-CoA还原酶的特异性的方法在本领域是已知的。例如，给定去饱和酶的特异性可以通过在包含肉豆蔻酸甲酯的溶液中孵育表达所述去饱和酶的细胞长达48小时，随后用甲醇提取和酯化产物来确定。然后可以通过GC-MS测定得到的脂肪酸甲酯的谱(profile)。对肉豆蔻酰基-CoA具有更高特异性且对棕榈酰基-CoA具有低特异性的去饱和酶将导致(Z)9-C14:Me的浓度高于(Z)9-C16:Me。例如，给定还原酶的特异性可以通过在包含(Z)9-肉豆蔻酸的甲酯的溶液中孵育表达所述还原酶的细胞长达48小时，随后通过GC-MS提取和分析得到的脂肪醇来确定。对(Z)9-C14:CoA具有更高特异性且对(Z)9-C16:CoA具有低特异性的还原酶将导致(Z)9-C14:OH的浓度高于(Z)9-C16:OH。

去饱和酶

在本公开文本中，术语“脂肪酰基-CoA去饱和酶”、“去饱和酶”、“脂肪酰基去饱和酶”和“FAD”将可互换使用。所述术语通常是指能够在链长为8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22个碳原子的酰基-CoA中引入至少一个E/Z构象的双键的酶。可以在任何位置中引入双键。例如，在位置3中引入双键的去饱和酶被称为Δ3去饱和酶。在位置5中引入双键的去饱和酶被称为Δ5去饱和酶。在位置6中引入双键的去饱和酶被称为Δ6去饱和酶。在位置7中引入双键的去饱和酶被称为Δ7去饱和酶。在位置8中引入双键的去饱和酶被称为Δ8去饱和酶。在位置9中引入双键的去饱和酶被称为Δ9去饱和酶。在位置10中引入双键的去饱和酶被称为Δ10去饱和酶。在位置11中引入双键的去饱和酶被称为Δ11去饱和酶。在位置12中引入双键的去饱和酶被称为Δ12去饱和酶。在位置13中引入双键的去饱和酶被称为Δ13去饱和酶。在位置14中引入双键的去饱和酶被称为Δ14去饱和酶。在位置15中引入双键的去饱和酶被称为Δ15去饱和酶。在位置16中引入双键的去饱和酶被称为Δ16去饱和酶。在位置17中引入双键的去饱和酶被称为Δ17去饱和酶。在位置18中引入双键的去饱和酶被称为Δ18去饱和酶。在位置19中引入双键的去饱和酶被称为Δ19去饱和酶。在位置20中引入双键的去饱和酶被称为Δ20去饱和酶。

去饱和酶催化以下反应(图1)：

脂肪酰基-CoA+2亚铁细胞色素b5+O(2)+2H(+)<＝>去饱和脂肪酰基-CoA+2高铁细胞色素b5+2H(2)O

出于本公开文本的目的，所述去饱和酶能够在碳链长为14的脂肪酰基-CoA中引入至少一个双键。

本文公开的酵母细胞表达对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性的去饱和酶和/或对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性的酰基-CoA还原酶。换句话说，与链长为16的底物相比，所述去饱和酶对碳链长为14的底物更具特异性。确定去饱和酶或脂肪酰基-CoA还原酶的特异性的方法在本领域是已知的。例如，给定去饱和酶的特异性可以通过在包含肉豆蔻酸甲酯的溶液中孵育表达所述去饱和酶的细胞长达48小时，随后用甲醇提取和酯化产物来确定。然后可以通过GC-MS测定得到的脂肪酸甲酯的谱。对肉豆蔻酰基-CoA具有更高特异性且对棕榈酰基-CoA具有低特异性的去饱和酶将导致(Z)9-C14:Me的浓度高于(Z)9-C16:Me。例如，给定还原酶的特异性可以通过在包含(Z)9-肉豆蔻酸的甲酯的溶液中孵育表达所述还原酶的细胞长达48小时，随后通过GC-MS提取和分析得到的脂肪醇来确定。对(Z)9-C14:CoA具有更高特异性且对(Z)9-C16:CoA具有低特异性的还原酶将导致(Z)9-C14:OH的浓度高于(Z)9-C16:OH。

在一个实施方案中，细胞能够表达至少一种异源Δ5去饱和酶。在另一个实施方案中，细胞能够表达至少一种异源Δ6去饱和酶。在另一个实施方案中，细胞能够表达至少一种异源Δ7去饱和酶。在另一个实施方案中，细胞能够表达至少一种异源Δ8去饱和酶。在另一个实施方案中，细胞能够表达至少一种异源Δ9去饱和酶。在另一个实施方案中，细胞能够表达至少一种异源Δ10去饱和酶。在另一个实施方案中，细胞能够表达至少一种异源Δ11去饱和酶。在另一个实施方案中，细胞能够表达至少一种异源Δ12去饱和酶。在另一个实施方案中，细胞能够表达至少一种异源Δ13去饱和酶。可以针对酵母细胞对编码异源去饱和酶的基因进行密码子优化，如本领域所已知的。

技术人员将根据所需的去饱和脂肪醇知道使用哪种去饱和酶。例如，为了产生在位置11中去饱和的脂肪醇，优选地使用Δ11去饱和酶。如果需要在位置9中去饱和的脂肪醇，则可以使用Δ9去饱和酶，如与如SEQ ID NO:10中所示的来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶或与如SEQ ID NO:12中所示的来自斜纹夜蛾(Spodoptera litura)的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶。

在一个实施方案中，所述至少一种异源去饱和酶是与如SEQ ID NO:10中所示的来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶，所述Δ9去饱和酶与如SEQID NO:10中所示的来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶具有如至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。

在另一个实施方案中，所述至少一种异源去饱和酶是与如SEQ ID NO:12中所示的来自斜纹夜蛾的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶，所述Δ9去饱和酶与如SEQ ID NO:12中所示的来自斜纹夜蛾的Δ9去饱和酶具有如至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。

在一个实施方案中，异源去饱和酶衍生自天竺葵(Pelargonium hortorum)。在另一个实施方案中，异源去饱和酶衍生自Chauliognathus lugubris。在一些实施方案中，异源去饱和酶衍生自黑腹果蝇。

异源去饱和酶可以衍生自属于鳞翅目的生物。因此，在一个实施方案中，异源去饱和酶衍生自斜纹夜蛾。在另一个实施方案中，异源去饱和酶衍生自玫瑰色卷蛾。在另一个实施方案中，异源去饱和酶衍生自斑点色卷蛾。

异源去饱和酶可以从在细胞中(例如在诸如质粒等载体上)引入的核酸表达，或通过基因组整合表达。可以针对所用的特定酵母细胞对核酸进行密码子优化，如本领域所已知的。

在一个实施方案中，所述至少一种异源去饱和酶由与如SEQ ID NO:9中所示的编码来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶的核酸具有至少60％同源性的核酸编码，所述核酸与如SEQID NO:9中所示的编码来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶的核酸具有如至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。

在另一个实施方案中，所述至少一种异源去饱和酶由与如SEQ ID NO:36中所示的编码来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶的核酸具有至少60％同源性的核酸编码，所述核酸与如SEQ ID NO:36中所示的编码来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶的核酸具有如至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。

在另一个实施方案中，所述至少一种异源去饱和酶由与如SEQ ID NO:11中所示的编码来自斜纹夜蛾的Δ9去饱和酶的核酸具有至少60％同源性的核酸编码，所述核酸与如SEQ ID NO:11中所示的编码来自斜纹夜蛾的Δ9去饱和酶的核酸具有如至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。

在一些实施方案中，所述至少一种异源去饱和酶是至少两种异源去饱和酶，例如两种异源去饱和酶。在一些实施方案中，所述两种异源去饱和酶是来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶Dmd9和来自脐橙螟(Amyelois transitella)的Δ11去饱和酶，分别如SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:68中所示。

待修饰的酵母细胞可以表达天然去饱和酶，其可能对去饱和脂肪醇和/或去饱和脂肪酰基乙酸酯的产生具有负面影响。因此，如果待修饰的酵母细胞表达这种天然去饱和酶，则可以优选地修饰细胞使得天然去饱和酶的活性降低或不存在。

为了确保缺乏天然去饱和酶的活性，可以使用本领域已知的方法。可以使编码天然去饱和酶的基因缺失或部分缺失，以便确保不表达天然去饱和酶。可替代地，可以使基因突变，使得表达天然去饱和酶但缺乏活性，例如通过使酶的催化位点突变。可替代地，可以通过诸如沉默RNA或siRNA等方法来阻止mRNA翻译为活性蛋白。可替代地，可以在包含抑制天然去饱和酶活性的抑制剂的培养基中孵育酵母细胞。还可以提供抑制编码天然去饱和酶的基因转录的化合物，使得当存在所述化合物时使转录失活。

因此，天然去饱和酶的失活可以是永久的或长期的，即经修饰的酵母细胞以稳定方式表现天然去饱和酶的降低的活性或没有活性，或者它可以是瞬时的，即经修饰的酵母细胞可以在一段时间内表现出天然去饱和酶的活性，但可以在其他时间段内抑制此活性。

成醇脂肪酰基-CoA还原酶(EC 1.2.1.84)

术语“成醇脂肪酰基-CoA还原酶”、“脂肪酰基-CoA还原酶”和“FAR”在本文中将可互换使用。术语“异源FAR”是指不是酵母细胞天然表达的FAR。

FAR催化两步反应(图1)

酰基-CoA+2NADPH<＝>CoA+醇+2NADP(+)

其中在第一步中，脂肪酰基-CoA被还原成脂肪醛，之后在第二步中脂肪醛被进一步还原成脂肪醇。脂肪酰基-CoA可以是去饱和脂肪酰基-CoA。

能够催化这种反应的FAR是EC编号为1.2.1.84的成醇脂肪酰基-CoA还原酶。

在一些实施方案中，所述FAR选自Har_FAR(SEQ ID NO:25，来自棉铃虫(Helicoverpa armigera)的FAR)或其变体(如经修饰的Har_FAR，如SEQ ID NO:27中所示)、Has_FAR(SEQ ID NO 29，来自烟夜蛾(Helicoverpa assulta)的FAR)或其变体(如经修饰的Has_FAR，如SEQ ID NO:31中所示)、Hs_FAR(SEQ ID:33，来自Heliothis subflexa的FAR)或其变体(如经修饰的Hs_FAR，如SEQ ID NO:35中所示)和Ban_FAR(SEQ ID NO:45，来自Bicyclus anynana的FAR)。在具体的实施方案中，所述FAR是如SEQ ID NO:25中所示的Har_FAR或其变体，如经修饰的Har_FAR，如SEQ ID NO:27中所示。

在一个实施方案中，所述FAR是Har_FAR(SEQ ID NO:25，来自棉铃虫的FAR)或与Har_FAR具有至少75％同源性的其变体，所述变体与Har_FAR(SEQ ID NO:25)具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。

在另一个实施方案中，所述FAR是经修饰的Har_FAR(SEQ ID NO:27，来自棉铃虫的FAR，其中信号肽已经被修饰为HDEL)或与其具有至少75％同源性的其变体，所述变体与如SEQ ID NO:27中所示的经修饰的Har_FAR具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。

在另一个实施方案中，所述FAR是Has_FAR(SEQ ID NO:29，来自烟夜蛾的FAR)或与Has_FAR具有至少75％同源性的其变体，所述变体与Has_FAR(SEQ ID NO:29)具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。

在另一个实施方案中，所述FAR是经修饰的Has_FAR(SEQ ID NO:31，来自烟夜蛾的FAR，其中信号肽已经被修饰为HDEL)或与其具有至少75％同源性的其变体，所述变体与如SEQ ID NO:31中所示的经修饰的Has_FAR具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。

在另一个实施方案中，所述FAR是Hs_FAR(SEQ ID NO:33，来自Heliothissubflexa的FAR)或与Hs_FAR具有至少75％同源性的其变体，所述变体与Hs_FAR(SEQ IDNO:33)具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。

在另一个实施方案中，所述FAR是经修饰的Hs_FAR(SEQ ID NO:35，来自Heliothissubflexa的FAR，其中信号肽已经被修饰为HDEL)或与其具有至少75％同源性的其变体，所述变体与如SEQ ID NO:35中所示的经修饰的Hs_FAR具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。

在另一个实施方案中，所述FAR是Ban_FAR(SEQ ID NO:45，来自Bicyclus anynana的FAR)或与Hs_FAR具有至少75％同源性的其变体，所述变体与Ban_FAR(SEQ ID NO:45)具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。

在一个实施方案中，所述FAR选自与SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:45具有至少60％同源性的FAR。在另一个实施方案中，所述FAR选自与SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ IDNO:31、SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:35具有至少60％同源性的FAR。在另一个实施方案中，所述FAR选自与SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:45具有至少60％同源性的FAR。在另一个实施方案中，所述FAR选自与SEQ ID NO:25、SEQ IDNO:27、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:45具有至少60％同源性的FAR。在另一个实施方案中，所述FAR选自与SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:45具有至少60％同源性的FAR。

在一些实施方案中，可以诱导去饱和酶和/或FAR的表达，例如如果编码这些酶的基因处于诱导型启动子的控制下的话，如本领域所已知的。将酵母细胞在合适的条件下(如在适当的培养基中且在适当的温度下)孵育，如本领域技术人员所已知的。支持酵母生长的合适培养基在本领域是已知的，并且包括但不限于：成分不明确的完全培养基，如YEPD(或YPD，Yeast Extract Peptone Dextrose)；成分明确的完全培养基，如SC(SyntheticComplete)；缺乏一种或多种要素(如氨基酸或诱导物)的成分明确的补偿(drop-out)培养基，如SD(Synthetic Dextrose)；或由盐、维生素和碳源组成的矿物质培养基等。

异源脂肪酰基-CoA还原酶可以从在细胞中(例如在诸如质粒等载体上)引入的核酸表达，或通过基因组整合表达。可以针对所用的特定酵母细胞对核酸进行密码子优化，如本领域所已知的。

在一些实施方案中，酵母细胞可以表达至少两种(如两种)异源还原酶。在一个具体实施方案中，酵母细胞表达来自棉铃虫的还原酶和来自H.subflexa的还原酶或如本文所述的其变体。

乙酰基转移酶(EC 2.3.1.84)

术语“乙酰基转移酶”是指EC编号2.3.1.84的酶，也可以称为“醇-O-乙酰基转移酶”或“AcT”。所述酶作用于脂肪族醇，并且催化如下反应(图1)：

乙酰基-CoA+醇<＝>CoA+乙酰基酯。

本公开文本的酵母细胞优选地过表达乙酰基转移酶。乙酰基转移酶可以是待修饰的细胞已经能够表达的天然乙酰基转移酶，或者它可以是异源乙酰基转移酶。如果酵母细胞表达天然乙酰基转移酶，则优选地修饰酵母细胞使得增加天然乙酰基转移酶的表达。这可以通过本领域已知的方法完成，如但不限于在基因组中或在载体上引入编码乙酰基转移酶的核酸的另外拷贝、将启动子修饰为具有高表达水平的组成型启动子或修饰为在诱导后导致高表达水平的诱导型启动子。

如果酵母细胞不表达天然乙酰基转移酶或者如果天然乙酰基转移酶的活性不足而导致滴度低，则可以在基因组位置中或在载体上将编码异源乙酰基转移酶的核酸引入细胞中，以使能够表达乙酰基转移酶。优选地，以高水平表达乙酰基转移酶，例如通过引入编码乙酰基转移酶的核酸的多个拷贝，或通过利用具有高表达水平的组成型启动子或利用在诱导后导致高表达水平的诱导型启动子。乙酰基转移酶可以从在细胞中(例如在诸如质粒等载体上)引入的核酸表达，或通过基因组整合表达。可以针对所用的特定酵母细胞对核酸进行密码子优化，如本领域所已知的。

因此，术语“过表达”是指与未经修饰以过表达乙酰基转移酶的酵母细胞(即亲本菌株)相比，酵母细胞中乙酰基转移酶的过表达。

在一些实施方案中，乙酰基转移酶是SEQ ID NO:21的AcT(Atf1，酿酒酵母AcT)或与Sc_Atf1具有至少75％同源性的其变体，所述变体与SEQ ID NO:21具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。

在其他实施方案中，以化学方式完成至少一部分的由本发明酵母细胞产生的去饱和脂肪醇向去饱和脂肪酰基乙酸酯的转化，如技术人员所已知的。例如，可以将乙酰氯添加到脂肪醇中，并且在混合后将混合物在室温下孵育。

去饱和脂肪醇的产生

本公开文本的酵母细胞可以用于产生去饱和脂肪醇和任选地去饱和脂肪酰基乙酸酯。酵母细胞优选地表达：

i)至少一种能够在碳链长为14的脂肪酰基-CoA中引入至少一个双键的异源去饱和酶；和

ii)至少一种能够将至少一部分的所述去饱和脂肪酰基-CoA转化为去饱和脂肪醇的异源脂肪酰基-CoA还原酶(FAR)；以及

iii)任选地，能够将至少一部分的所述去饱和脂肪醇转化为去饱和脂肪酰基乙酸酯的乙酰基转移酶；

其中所述去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性。

酵母细胞、去饱和酶、脂肪酰基-CoA还原酶和乙酰基转移酶都可以如上所述。

因此，本公开文本的酵母细胞可以用于产生一系列去饱和脂肪醇，如：

-碳链长为14的(Z)-Δ5去饱和脂肪醇；

-碳链长为14的(E)-Δ5去饱和脂肪醇；

-碳链长为14的(Z)-Δ6去饱和脂肪醇；

-碳链长为14的(E)-Δ6去饱和脂肪醇；

-碳链长为14的(Z)-Δ7去饱和脂肪醇；

-碳链长为14的(E)-Δ7去饱和脂肪醇；

-碳链长为14的(Z)-Δ8去饱和脂肪醇；

-碳链长为14的(E)-Δ8去饱和脂肪醇；

-碳链长为14的(Z)-Δ9去饱和脂肪醇；

-碳链长为14的(E)-Δ9去饱和脂肪醇；

-碳链长为14的(Z)-Δ10去饱和脂肪醇；

-碳链长为14的(E)-Δ10去饱和脂肪醇；

-碳链长为14的(Z)-Δ11去饱和脂肪醇；

-碳链长为14的(E)-Δ11去饱和脂肪醇；

-碳链长为14的(Z)-Δ12去饱和脂肪醇；

-碳链长为14的(E)-Δ12去饱和脂肪醇；

-碳链长为14的(Z)-Δ13去饱和脂肪醇；以及

-碳链长为14的(E)-Δ13去饱和脂肪醇。

因此，本文公开的酵母细胞可以表达异源Δ9去饱和酶和脂肪酰基-CoA还原酶，并且可以用于产生(Z)9-C14:OH，即碳链长为14的在位置9处具有Z构象的去饱和的脂肪醇。此脂肪醇是(Z)9-C14:OAc的前体，(Z)9-C14:OAc是衍生自多种物种(例如秋粘虫草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda))的信息素的重要组分。

在其他实施方案中，酵母细胞表达异源Δ11去饱和酶和脂肪酰基-CoA还原酶，并且可以用于产生(Z)11-C14:OH，即碳链长为14的在位置11处具有Z构象的去饱和的脂肪醇。此脂肪醇是(Z)11-C14:OAc的前体，(Z)11-C14:OAc是衍生自多种物种(例如欧洲玉米螟(European corn borer Ostrinia nubilalis)和红带卷蛾(red-banded leafrollerArgyrotaenia velutinana))的信息素的重要组分。

在其他实施方案中，酵母细胞表达异源Δ11去饱和酶和脂肪酰基-CoA还原酶，并且可以用于产生(E)11-C14:OH，即碳链长为14的在位置11处具有E构象的去饱和的脂肪醇。此脂肪醇是(E)11-C14:OAc的前体，(E)11-C14:OAc是衍生自多种物种(例如浅褐色苹果蛾苹果褐卷蛾(Epiphyas postvittana))的信息素的重要组分。

由本发明酵母细胞产生的去饱和脂肪醇可以在多于一个位置中去饱和。去饱和脂肪醇可以在至少两个位置(如至少三个位置、如四个位置)中去饱和。

例如，可以产生碳链长为14的(E)7,(Z)9去饱和脂肪醇。可以产生碳链长为14的(E)3,(Z)8,(Z)11去饱和脂肪醇。可以产生碳链长为14的(Z)9,(E)11,(E)13去饱和脂肪醇。

由此产生的去饱和脂肪醇可以如本领域所已知的那样进一步修饰，例如通过碳链缩短，以便获得具有小于14(如12、10、8、6或4)的碳链的去饱和脂肪醇。因此，可以产生碳链长为12的(E)7,(Z)9去饱和脂肪醇，可以产生碳链长为12的(E)3,(Z)8,(Z)11去饱和脂肪醇，并且可以产生碳链长为12的(Z)9,(E)11,(E)13去饱和脂肪醇。

为了进一步增加去饱和脂肪醇的产生，使编码脂肪酶的一种或多种基因突变以使对应的脂肪酶具有部分或完全的活性丧失可能是有益的。因此，在一些实施方案中，酵母细胞可以如本文所述并且另外携带一个或多个导致一种或多种脂肪酶的活性完全或部分丧失的突变。

本领域已知存在许多编码脂肪酶的基因。它们的表达和/或活性可以随培养酵母细胞的培养基而变。因此，培养基的选择可以帮助选择应该使哪种脂肪酶基因缺失或突变，以使对应的脂肪酶在所述培养基中具有降低的活性或完全的活性丧失。

几种脂肪酶可以同时在一种培养基中具有活性。因此，在一些实施方案中，酵母细胞具有几个导致几种脂肪酶的活性完全或部分丧失的突变。为了限制脂肪酰基乙酸酯的降解，在一些实施方案中，酵母细胞具有几个导致已知或怀疑在给定培养基中具有活性的所有脂肪酶的活性完全或部分丧失的突变。

举例来说，当使细胞在葡萄糖上生长时，脂肪酶2、脂肪酶5和脂肪酶8是在解脂耶氏酵母中有活性的主要脂肪酶。因此，如果使用基于葡萄糖的培养基，则可以考虑脂肪酶2、脂肪酶5和脂肪酶8中的一种、两种或全部的活性的完全或部分丧失。

在一些实施方案中，所述脂肪酶与如SEQ ID NO:72中所示的解脂耶氏酵母的脂肪酶2具有至少60％同源性，如至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。在其他实施方案中，所述脂肪酶与如SEQ ID NO:73中所示的解脂耶氏酵母的脂肪酶7具有至少60％同源性，如至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。在其他实施方案中，所述脂肪酶与如SEQ ID NO:74中所示的解脂耶氏酵母的脂肪酶8具有至少60％同源性，如至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。

在一些实施方案中，酵母细胞具有：

-导致与如SEQ ID NO:72中所示的解脂耶氏酵母的脂肪酶2具有至少60％同源性的脂肪酶的活性完全或部分丧失的突变；和

-导致与如SEQ ID NO:73中所示的解脂耶氏酵母的脂肪酶7具有至少60％同源性的脂肪酶的活性完全或部分丧失的突变。

在其他实施方案中，酵母细胞具有：

-导致与如SEQ ID NO:72中所示的解脂耶氏酵母的脂肪酶2具有至少60％同源性的脂肪酶的活性完全或部分丧失的突变；和

-导致与如SEQ ID NO:74中所示的解脂耶氏酵母的脂肪酶8具有至少60％同源性的脂肪酶的活性完全或部分丧失的突变。

在其他实施方案中，酵母细胞具有：

-导致与如SEQ ID NO:73中所示的解脂耶氏酵母的脂肪酶7具有至少60％同源性的脂肪酶的活性完全或部分丧失的突变；和

-导致与如SEQ ID NO:74中所示的解脂耶氏酵母的脂肪酶8具有至少60％同源性的脂肪酶的活性完全或部分丧失的突变。

在一些实施方案中，酵母细胞具有：

-导致与如SEQ ID NO:72中所示的解脂耶氏酵母的脂肪酶2具有至少60％同源性的脂肪酶的活性完全或部分丧失的突变；和

-导致与如SEQ ID NO:73中所示的解脂耶氏酵母的脂肪酶7具有至少60％同源性的脂肪酶的活性完全或部分丧失的突变；和

-导致与如SEQ ID NO:74中所示的解脂耶氏酵母的脂肪酶8具有至少60％同源性的脂肪酶的活性完全或部分丧失的突变。

去饱和脂肪酰基乙酸酯的产生

本公开文本的酵母细胞可以任选地表达或过表达能够将至少一部分的由细胞产生的去饱和脂肪醇转化为去饱和脂肪酰基乙酸酯的天然或异源乙酰基转移酶，并且因此可以用于产生一系列去饱和脂肪乙酸酯，如：

-碳链长为14的(Z)-Δ5去饱和脂肪乙酸酯；

-碳链长为14的(E)-Δ5去饱和脂肪乙酸酯；

-碳链长为14的(Z)-Δ6去饱和脂肪乙酸酯；

-碳链长为14的(E)-Δ6去饱和脂肪乙酸酯；

-碳链长为14的(Z)-Δ7去饱和脂肪乙酸酯；

-碳链长为14的(E)-Δ7去饱和脂肪乙酸酯；

-碳链长为14的(Z)-Δ8去饱和脂肪乙酸酯；

-碳链长为14的(E)-Δ8去饱和脂肪乙酸酯；

-碳链长为14的(Z)-Δ9去饱和脂肪乙酸酯；

-碳链长为14的(E)-Δ9去饱和脂肪乙酸酯；

-碳链长为14的(Z)-Δ10去饱和脂肪乙酸酯；

-碳链长为14的(E)-Δ10去饱和脂肪乙酸酯；

-碳链长为14的(Z)-Δ11去饱和脂肪乙酸酯；

-碳链长为14的(E)-Δ11去饱和脂肪乙酸酯；

-碳链长为14的(Z)-Δ12去饱和脂肪乙酸酯；

-碳链长为14的(E)-Δ12去饱和脂肪乙酸酯；

-碳链长为14的(Z)-Δ13去饱和脂肪乙酸酯；以及

-碳链长为14的(E)-Δ13去饱和脂肪乙酸酯。

因此，在一个实施方案中，酵母细胞表达异源Δ9去饱和酶、异源FAR和乙酰基转移酶，并且可以用于获得(Z)9-C14:OAc，即碳链长为14的在位置9处具有Z构象的去饱和的脂肪酰基乙酸酯。此脂肪酰基乙酸酯是衍生自多种物种(例如秋粘虫草地贪夜蛾)的信息素的重要组分。

在其他实施方案中，酵母细胞表达异源Δ11去饱和酶、异源FAR和乙酰基转移酶，并且可以用于产生(Z)11-C14:OAc，即碳链长为14的在位置11处具有Z构象的去饱和脂肪酰基乙酸酯。此脂肪酰基乙酸酯是衍生自多种物种(例如欧洲玉米螟(European corn borerOstrinia nubilalis)和红带卷蛾(red-banded leafroller Argyrotaenia velutinana))的信息素的重要组分。

在其他实施方案中，酵母细胞表达异源Δ11去饱和酶、异源FAR和乙酰基转移酶，并且可以用于产生(E)11-C14:OAc，即碳链长为14的在位置11处具有E构象的去饱和的脂肪酰基乙酸酯。此脂肪酰基乙酸酯是衍生自多种物种(例如浅褐色苹果蛾苹果褐卷蛾)的信息素的重要组分。

由本发明酵母细胞产生的去饱和脂肪乙酸酯可以在多于一个位置中去饱和。去饱和脂肪乙酸酯可以在至少两个位置(如至少三个位置、如四个位置)中去饱和。

例如，可以产生碳链长为14的(E)7,(Z)9去饱和脂肪乙酸酯。可以产生碳链长为14的(E)3,(Z)8,(Z)11去饱和脂肪乙酸酯。可以产生碳链长为14的(Z)9,(E)11,(E)13去饱和脂肪乙酸酯。

由此产生的去饱和脂肪乙酸酯可以如本领域所已知的那样进一步修饰，例如通过碳链缩短，以便获得具有小于14(如12、10、8、6或4)的碳链的去饱和脂肪乙酸酯。因此，可以产生碳链长为12的(E)7,(Z)9去饱和脂肪乙酸酯，可以产生碳链长为12的(E)3,(Z)8,(Z)11去饱和脂肪乙酸酯，并且可以产生碳链长为12的(Z)9,(E)11,(E)13去饱和脂肪乙酸酯。

去饱和脂肪醛的产生

虽然本公开文本提供了用于产生去饱和脂肪醇和去饱和脂肪酰基乙酸酯的方法，但是可能感兴趣的是将所述脂肪醇进一步转化为对应的醛。因此，在一些实施方案中，所述方法还可以包括将至少一部分的脂肪醇转化为脂肪醛的步骤，从而产生脂肪醛。这可以通过化学方法或通过进一步工程化酵母细胞来实现。

在一些实施方案中，将至少一部分的脂肪醇转化为对应的醛的步骤是化学转化的步骤。化学转化是基于将脂肪醇氧化成对应的醛。用于进行这种转化的方法在本领域是已知的。优选的方法是环境友好的并且使有害废物的量最小化。

因此，在一些实施方案中，化学转化可以是不含金属的，避免有毒的重金属基试剂，如氧化锰、氧化铬(Jones ox.PDC、PCC)或钌化合物(TPAP、Ley-Griffith ox.)。在一些实施方案中，转化不涉及与活化的二甲基亚砜的反应，例如Swern氧化或Pfitzner-Moffat类型。此类反应可能涉及刻板形成痕量的可能难以从目标产物中除去的有强烈气味的有机硫化合物，如二甲基硫醚。

在一些实施方案中，所述方法包括Dess-Martin反应(Yadav等人,2004；Meyer等人,1994)。在一些实施方案中，所述方法包括铜(I)/ABNO催化的需氧醇氧化反应(Steves&Stahl,2013)。

在其他实施方案中，化学转化包括在水/有机两相条件下用次氯酸钠氧化(Okada等人,2014；Tamura等人,2012；Li等人,2009)。在一些实施方案中，可以在含有25％吡啶的二氯甲烷介质中用1-氯苯并三唑进行化学氧化(Ferrell和Yao,1972)。

可替代地，脂肪醇氧化成对应的脂肪醛可以通过醇脱氢酶酶促地进行。技术人员将知道如何进行酶促氧化。例如，可以通过使经纯化的酶、细胞提取物或全细胞与脂肪醇接触来进行酶促氧化。

通过引入编码成醛脂肪酰基-CoA还原酶EC 1.2.1.50(FAR')的基因，可以将通过本文所述的细胞和方法可获得的脂肪醇进一步转化为脂肪醛。以这种方式，至少一部分的去饱和脂肪酰基-CoA可以被成醛脂肪酰基-CoA还原酶(FAR')转化为对应的脂肪醛。能够催化此转化的酶可以催化还原反应，其中脂肪酰基-CoA被还原成脂肪醛。此类酶是EC编号为1.2.1.50的成醛脂肪酰基-CoA还原酶，在本文中也称为FAR'或“成醛FAR'”。它们催化以下反应：

脂肪酰基-CoA+NADPH＝脂肪醛+NADP++辅酶A。

在一些实施方案中，可以诱导成醛FAR'的表达，例如如果编码此酶的基因处于诱导型启动子的控制下的话，如本领域所已知的。将酵母细胞在合适的条件下(如在适当的培养基中且在适当的温度下)孵育，如本领域技术人员所已知的。支持酵母生长的合适培养基在本领域是已知的，并且包括但不限于：成分不明确的完全培养基，如YEPD(或YPD，YeastExtract Peptone Dextrose)；成分明确的完全培养基，如SC(Synthetic Complete)；或缺乏一种或多种要素(如氨基酸或诱导物)的成分明确的补偿培养基，如SD(SyntheticDextrose)。

因此，可以获得以下醛：

-碳链长为14的(Z)-Δ5去饱和脂肪醛；

-碳链长为14的(E)-Δ5去饱和脂肪醛；

-碳链长为14的(Z)-Δ6去饱和脂肪醛；

-碳链长为14的(E)-Δ6去饱和脂肪醛；

-碳链长为14的(Z)-Δ7去饱和脂肪醛；

-碳链长为14的(E)-Δ7去饱和脂肪醛；

-碳链长为14的(Z)-Δ8去饱和脂肪醛；

-碳链长为14的(E)-Δ8去饱和脂肪醛；

-碳链长为14的(Z)-Δ9去饱和脂肪醛；

-碳链长为14的(E)-Δ9去饱和脂肪醛；

-碳链长为14的(Z)-Δ10去饱和脂肪醛；

-碳链长为14的(E)-Δ10去饱和脂肪醛；

-碳链长为14的(Z)-Δ11去饱和脂肪醛；

-碳链长为14的(E)-Δ11去饱和脂肪醛；

-碳链长为14的(Z)-Δ12去饱和脂肪醛；

-碳链长为14的(E)-Δ12去饱和脂肪醛；

-碳链长为14的(Z)-Δ13去饱和脂肪醛；以及

-碳链长为14的(E)-Δ13去饱和脂肪醛。

由本发明酵母细胞产生的去饱和脂肪醛可以在多于一个位置中去饱和。去饱和脂肪醛可以在至少两个位置(如至少三个位置、如四个位置)中去饱和。

例如，可以产生碳链长为14的(E)7,(Z)9去饱和脂肪醛。可以产生碳链长为14的(E)3,(Z)8,(Z)11去饱和脂肪醛。可以产生碳链长为14的(Z)9,(E)11,(E)13去饱和脂肪醛。

由此产生的去饱和脂肪醛可以如本领域所已知的那样进一步修饰，例如通过碳链缩短，以便获得具有小于14(如12、10、8、6或4)的碳链的去饱和脂肪醛。因此，可以产生碳链长为12的(E)7,(Z)9去饱和脂肪醛，可以产生碳链长为12的(E)3,(Z)8,(Z)11去饱和脂肪醛，并且可以产生碳链长为12的(Z)9,(E)11,(E)13去饱和脂肪醛。

脂肪酰基-CoA

为了使酵母细胞产生如本文所述的去饱和脂肪醇和去饱和脂肪酰基乙酸酯，需要提供以脂肪酰基-CoA作为底物的酵母细胞。优选地，脂肪酰基-CoA的碳链长为14并且是肉豆蔻酰基-CoA。

此类脂肪酰基-CoA可以在孵育酵母细胞的培养基中提供，或者酵母细胞可以天然地能够产生这种脂肪酰基-CoA，或者可以将酵母细胞工程化以便产生或以便增加此类脂肪酰基-CoA的产生。优选地，为酵母细胞提供肉豆蔻酰基-CoA或者酵母细胞能够产生肉豆蔻酰基-CoA。

在一些实施方案中，酵母细胞不能天然地产生碳链长为14的脂肪酰基-CoA。在这种情况下，可以如本领域所已知的那样工程化酵母细胞，例如通过引入异源硫酯酶。因此，在一些实施方案中，将编码硫酯酶的核酸引入酵母细胞中、引入载体上或通过基因组整合引入。硫酯酶基因可以处于诱导型启动子的控制下，或者处于组成型启动子的控制下。可以针对酵母细胞对编码硫酯酶的核酸进行密码子优化，如本领域所已知的。特别地，可以针对耶氏酵母属(Yarrowia)细胞(如解脂耶氏酵母细胞)对核酸进行密码子优化。

在一些实施方案中，硫酯酶衍生自选自湿地萼距花(Cuphea palustris)、萼距花(Cuphea hookeriana)、香樟(Cinnamomum camphora)或选自大肠杆菌(Escherichia coli)的生物。在优选的实施方案中，硫酯酶衍生自大肠杆菌或香樟。在一些实施方案中，所述硫酯酶与选自以下的硫酯酶具有至少60％同源性：如SEQ ID NO:23中所示的衍生自湿地萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:38中所示的衍生自萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶和如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶。优选地，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶或如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ IDNO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性，如与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。

在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性，如与如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。

可以对编码硫酯酶的核酸进行密码子优化，如本领域所已知的。在一个实施方案中，酵母细胞是耶氏酵母属细胞，优选地解脂耶氏酵母细胞，并且相应地对核酸进行密码子优化。

在一个实施方案中，所述至少一种硫酯酶由与如SEQ ID NO:39中所示的编码衍生自香樟的硫酯酶的核酸具有至少60％同源性的核酸编码，所述核酸与如SEQ ID NO:39中所示的编码来自香樟的硫酯酶的核酸具有如至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。

在一个实施方案中，所述至少一种硫酯酶由与如SEQ ID NO:41中所示的编码衍生自大肠杆菌的硫酯酶的核酸具有至少60％同源性的核酸编码，所述核酸与如SEQ ID NO:41中所示的编码来自大肠杆菌的硫酯酶的核酸具有如至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。

在一些实施方案中，可以增加或进一步增加链长为14的脂肪酸的可用性。例如，可以工程化脂肪酸合酶复合物，使得增加C14-脂肪酰基-CoA的形成。脂肪酸合酶复合物(EC2.3.1.86)由两个亚基Fas1(β亚基)和Fas2(α亚基)组成。α亚基包含酮酰基合酶结构域(“结合口袋”)，其被假设参与决定合成的脂肪酸的长度。在解脂耶氏酵母中，天然(野生型)FAS2如SEQ ID NO:71中所示。

因此，为了将代谢流引导至产生链长为14C的去饱和脂肪醇、乙酸酯或醛，酵母细胞还可以表达具有经修饰的酮合酶结构域的脂肪酰基合酶变体。不受理论束缚，假设经修饰的酮合酶结构域产生经修饰的结合口袋，其因此更容易适应中等长度的底物(如C14底物)，从而产生更高比例的C14产物。

在一个实施方案中，酵母细胞是如本文所述的解脂耶氏酵母细胞，其中细胞还表达经修饰的脂肪酸合酶复合物。在一个实施方案中，通过使编码复合物的α亚基的基因突变来修饰脂肪酸合酶复合物。在一些实施方案中，突变在编码FAS2的基因中。突变可以导致SEQ ID NO:71的残基1220(I1220)、残基1217(M1217)或残基1226(M1226)中的一个或多个的修饰，产生变体FAS2。技术人员将知道如何设计此类突变。

优选地，突变产生I1220F变体、I1220W变体、I1220Y变体或I1220H变体。在一个具体实施方案中，突变产生I1220F变体。在一些实施方案中，突变产生M1217F变体、M1217W变体、M1217Y变体或M1217H变体。在其他实施方案中，突变产生M1226F变体、M1226W变体、M1226Y变体或M1226H变体。还考虑了具有多于一个上述突变(如在残基I1220、M1217或M1226处的两个突变或三个突变)的酵母细胞。

酵母细胞

本公开文本提供了酵母细胞，其已经经修饰以产生去饱和脂肪醇和任选地去饱和脂肪酰基乙酸酯。去饱和脂肪醇和去饱和脂肪酰基乙酸酯是信息素的组分，特别是蛾信息素的组分。因此，本文公开的酵母细胞为环境友好的蛾信息素生产提供了平台。

酵母细胞可以是非天然存在的酵母细胞，例如已经工程化以产生去饱和脂肪醇和去饱和脂肪酰基乙酸酯的酵母细胞。

在一些实施方案中，细胞已经在基因组水平上进行了修饰，例如通过在基因组中进行基因编辑。还可以通过插入至少一种核酸构建体(如至少一种载体)来修饰细胞。可以如技术人员所已知的那样设计载体，以使核酸序列能够整合到基因组中，或者能够在不进行基因组整合的情况下表达由包含在载体中的核酸序列编码的多肽。

酵母细胞可以属于选自酵母属(Saccharomyces)、毕赤酵母属(Pichia)、耶氏酵母属、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、假丝酵母属(Candida)、红酵母属(Rhodotorula)、红冬孢酵母属(Rhodosporidium)、隐球酵母属(Cryptococcus)、丝孢酵母属(Trichosporon)和油脂酵母属(Lipomyces)的属。在一个优选的实施方案中，所述属是酵母属或耶氏酵母属，最优选地所述属是耶氏酵母属。

酵母细胞可以属于选自酿酒酵母、毕赤酵母(Pichia pastoris)、马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)、浅白隐球酵母(Cryptococcus albidus)、产油油脂酵母(Lipomyces lipofera)、斯达油脂酵母(Lipomyces starkeyi)、圆红冬孢酵母(Rhodosporidium toruloides)、黏红酵母(Rhodotorula glutinis)、普鲁兰丝孢酵母(Trichosporon pullulan)和解脂耶氏酵母的物种。在优选的实施方案中，酵母细胞是酿酒酵母细胞或解脂耶氏酵母细胞，最优选地酵母细胞是解脂耶氏酵母细胞。

待修饰的酵母细胞(也称为宿主细胞)可以表达天然酶，其与产生去饱和脂肪醇和去饱和脂肪酰基乙酸酯所必需的酶属于相同类别。然而，在一些情况下，此类天然酶可能对可以获得的去饱和脂肪醇和/或去饱和脂肪酰基乙酸酯的滴度产生负面影响；因此，可以通过本领域已知的方法(如基因编辑)使天然酶失活。例如，可以使编码对滴度具有负面影响的天然酶的基因缺失或突变，从而导致天然酶的活性完全或部分丧失。

本公开文本的酵母细胞表达至少一种如本文所述的能够在碳链长为14的脂肪酰基-CoA中引入至少一个双键的异源去饱和酶、至少一种如本文所述的能够将至少一部分的所述去饱和脂肪酰基-CoA转化为去饱和脂肪醇的异源脂肪酰基-CoA还原酶和任选地能够将至少一部分的所述去饱和脂肪醇转化为去饱和脂肪酰基乙酸酯的乙酰基转移酶，其中所述去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性。在一些实施方案中，酵母还表达乙酰基转移酶。在一些实施方案中，酵母还表达硫酯酶。

在一个实施方案中，酵母细胞表达：

i)至少一种异源Δ3去饱和酶；和

ii)至少一种异源FAR；并且

iii)任选地过表达乙酰基转移酶，并且

iv)任选地过表达硫酯酶，

其中Δ3去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性，由此酵母细胞产生碳链长为14且在位置3中去饱和的脂肪醇。乙酰基转移酶可以是SEQ ID NO:21的AcT(Atf1，酿酒酵母AcT)或与Sc_Atf1具有至少75％同源性的其变体，所述变体与SEQ ID NO:21具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。在一些实施方案中，所述硫酯酶与选自以下的硫酯酶具有至少60％同源性：如SEQ ID NO:23中所示的衍生自湿地萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:38中所示的来自萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:40中所示的来自香樟的硫酯酶和如SEQ ID NO:42中所示的来自大肠杆菌的硫酯酶。优选地，所述硫酯酶衍生自香樟(如SEQ ID NO:40中所示)或衍生自大肠杆菌(如SEQ ID NO:42中所示)。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在一个实施方案中，酵母细胞表达：

i)至少一种异源Δ5去饱和酶；和

ii)至少一种异源FAR；并且

iii)任选地过表达乙酰基转移酶，并且

iv)任选地过表达硫酯酶，

其中Δ5去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性，由此酵母细胞产生碳链长为14且在位置5中去饱和的脂肪醇。乙酰基转移酶可以是SEQ ID NO:21的AcT(Atf1，酿酒酵母AcT)或与Sc_Atf1具有至少75％同源性的其变体，所述变体与SEQ ID NO:21具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。在一些实施方案中，所述硫酯酶与选自以下的硫酯酶具有至少60％同源性：如SEQ ID NO:23中所示的衍生自湿地萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:38中所示的来自萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:40中所示的来自香樟的硫酯酶和如SEQ ID NO:42中所示的来自大肠杆菌的硫酯酶。优选地，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶或如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在一个实施方案中，酵母细胞表达：

i)至少一种异源Δ6去饱和酶；和

ii)至少一种异源FAR；并且

iii)任选地过表达乙酰基转移酶，并且

iv)任选地过表达硫酯酶，

其中Δ6去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性，由此酵母细胞产生碳链长为14且在位置6中去饱和的脂肪醇。乙酰基转移酶可以是SEQ ID NO:21的AcT(Atf1，酿酒酵母AcT)或与Sc_Atf1具有至少75％同源性的其变体，所述变体与SEQ ID NO:21具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。在一些实施方案中，所述硫酯酶与选自以下的硫酯酶具有至少60％同源性：如SEQ ID NO:23中所示的衍生自湿地萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:38中所示的来自萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:40中所示的来自香樟的硫酯酶和如SEQ ID NO:42中所示的来自大肠杆菌的硫酯酶。优选地，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶或如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在一个实施方案中，酵母细胞表达：

i)至少一种异源Δ7去饱和酶；和

ii)至少一种异源FAR；并且

iii)任选地过表达乙酰基转移酶，并且

iv)任选地过表达硫酯酶，

其中Δ7去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性，由此酵母细胞产生碳链长为14且在位置7中去饱和的脂肪醇。乙酰基转移酶可以是SEQ ID NO:21的AcT(Atf1，酿酒酵母AcT)或与Sc_Atf1具有至少75％同源性的其变体，所述变体与SEQ ID NO:21具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。在一些实施方案中，所述硫酯酶与选自以下的硫酯酶具有至少60％同源性：如SEQ ID NO:23中所示的衍生自湿地萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:38中所示的来自萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:40中所示的来自香樟的硫酯酶和如SEQ ID NO:42中所示的来自大肠杆菌的硫酯酶。优选地，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶或如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在一个实施方案中，酵母细胞表达：

i)至少一种异源Δ8去饱和酶；和

ii)至少一种异源FAR；并且

iii)任选地过表达乙酰基转移酶，并且

iv)任选地过表达硫酯酶，

其中Δ8去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性，由此酵母细胞产生碳链长为14且在位置8中去饱和的脂肪醇。乙酰基转移酶可以是SEQ ID NO:21的AcT(Atf1，酿酒酵母AcT)或与Sc_Atf1具有至少75％同源性的其变体，所述变体与SEQ ID NO:21具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。在一些实施方案中，所述硫酯酶与选自以下的硫酯酶具有至少60％同源性：如SEQ ID NO:23中所示的衍生自湿地萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:38中所示的来自萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:40中所示的来自香樟的硫酯酶和如SEQ ID NO:42中所示的来自大肠杆菌的硫酯酶。优选地，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶或如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在一个实施方案中，酵母细胞表达：

i)至少一种异源Δ9去饱和酶；和

ii)至少一种异源FAR；并且

iii)任选地过表达乙酰基转移酶，并且

iv)任选地过表达硫酯酶，

其中Δ9去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性，由此酵母细胞产生碳链长为14且在位置9中去饱和的脂肪醇。乙酰基转移酶可以是SEQ ID NO:21的AcT(Atf1，酿酒酵母AcT)或与Sc_Atf1具有至少75％同源性的其变体，所述变体与SEQ ID NO:21具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。在一些实施方案中，所述硫酯酶与选自以下的硫酯酶具有至少60％同源性：如SEQ ID NO:23中所示的衍生自湿地萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:38中所示的来自萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:40中所示的来自香樟的硫酯酶和如SEQ ID NO:42中所示的来自大肠杆菌的硫酯酶。优选地，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶或如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在一个特定实施方案中，酵母细胞表达：

-与如SEQ ID NO:10中所示的来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶，所述Δ9去饱和酶与如SEQ ID NO:10中所示的来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶具有如至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性；和

-与如SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:27中所示的Har_FAR具有至少75％同源性的FAR，所述FAR与如SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:27中所示的Har_FAR具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性；

-并且任选地表达或过表达乙酰基转移酶和/或硫酯酶。优选地，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶或如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在另一个特定实施方案中，酵母细胞表达：

-与如SEQ ID NO:10中所示的来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶，所述Δ9去饱和酶与如SEQ ID NO:10中所示的来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶具有如至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性；和

-与如SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:31中所示的Has_FAR具有至少75％同源性的FAR，所述FAR与如SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:31中所示的Has_FAR具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性；

-并且任选地表达或过表达乙酰基转移酶和/或硫酯酶。优选地，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶或如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在另一个特定实施方案中，酵母细胞表达：

-与如SEQ ID NO:10中所示的来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶，所述Δ9去饱和酶与如SEQ ID NO:10中所示的来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶具有如至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性；和

-与如SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:35中所示的Hs_FAR具有至少75％同源性的FAR，所述FAR与如SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:35中所示的Hs_FAR具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性；

-并且任选地表达或过表达乙酰基转移酶和/或硫酯酶。优选地，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶或如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在另一个特定实施方案中，酵母细胞表达：

-与如SEQ ID NO:10中所示的来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶，所述Δ9去饱和酶与如SEQ ID NO:10中所示的来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶具有如至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性；和

-与如SEQ ID NO:45中所示的Ban_FAR具有至少75％同源性的FAR，所述FAR与如SEQ ID NO:45中所示的Ban_FAR具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性；

-并且任选地表达或过表达乙酰基转移酶和/或硫酯酶。优选地，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶或如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在一个特定实施方案中，酵母细胞表达：

-与如SEQ ID NO:12中所示的来自斜纹夜蛾的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶，所述Δ9去饱和酶与如SEQ ID NO:12中所示的来自斜纹夜蛾的Δ9去饱和酶具有如至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性；和

-与如SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:27中所示的Har_FAR具有至少75％同源性的FAR，所述FAR与如SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:27中所示的Har_FAR具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性；

-并且任选地表达或过表达乙酰基转移酶和/或硫酯酶。优选地，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶或如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在另一个特定实施方案中，酵母细胞表达：

-与如SEQ ID NO:12中所示的来自夜斜纹蛾的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶，所述Δ9去饱和酶与如SEQ ID NO:12中所示的来自夜斜纹蛾的Δ9去饱和酶具有如至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性；和

-与如SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:31中所示的Has_FAR具有至少75％同源性的FAR，所述FAR与如SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:31中所示的Has_FAR具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性；

-并且任选地表达或过表达乙酰基转移酶和/或硫酯酶。优选地，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶或如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在另一个特定实施方案中，酵母细胞表达：

-与如SEQ ID NO:12中所示的来自斜纹夜蛾的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶，所述Δ9去饱和酶与如SEQ ID NO:12中所示的来自斜纹夜蛾的Δ9去饱和酶具有如至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性；和

-与如SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:35中所示的Hs_FAR具有至少75％同源性的FAR，所述FAR与如SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:35中所示的Hs_FAR具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性；

-并且任选地表达或过表达乙酰基转移酶和/或硫酯酶。优选地，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶或如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在另一个特定实施方案中，酵母细胞表达：

-与如SEQ ID NO:12中所示的来自斜纹夜蛾的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶，所述Δ9去饱和酶与如SEQ ID NO:12中所示的来自斜纹夜蛾的Δ9去饱和酶具有如至少61％同源性、如至少62％同源性、如至少63％同源性、如至少64％同源性、如至少65％同源性、如至少66％同源性、如至少67％同源性、如至少68％同源性、如至少69％同源性、如至少70％同源性、如至少71％同源性、如至少72％、如至少73％、如至少74％、如至少75％、如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性；和

-与如SEQ ID NO:45中所示的Ban_FAR具有至少75％同源性的FAR，所述FAR与如SEQ ID NO:45中所示的Ban_FAR具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性；

-并且任选地表达或过表达乙酰基转移酶和/或硫酯酶。优选地，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶或如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在一个实施方案中，酵母细胞表达：

i)至少一种异源Δ10去饱和酶；和

ii)至少一种异源FAR；并且

iii)任选地过表达乙酰基转移酶，并且

iv)任选地过表达硫酯酶，

其中Δ10去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性，由此酵母细胞产生碳链长为14且在位置10中去饱和的脂肪醇。乙酰基转移酶可以是SEQ ID NO:21的AcT(Atf1，酿酒酵母AcT)或与Sc_Atf1具有至少75％同源性的其变体，所述变体与SEQ ID NO:21具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。在一些实施方案中，所述硫酯酶与选自以下的硫酯酶具有至少60％同源性：如SEQ ID NO:23中所示的衍生自湿地萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:38中所示的来自萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:40中所示的来自香樟的硫酯酶和如SEQ ID NO:42中所示的来自大肠杆菌的硫酯酶。优选地，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶或如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在一个实施方案中，酵母细胞表达：

i)至少一种异源Δ11去饱和酶；和

ii)至少一种异源FAR；并且

iii)任选地过表达乙酰基转移酶，并且

iv)任选地过表达硫酯酶，

其中Δ11去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性，由此酵母细胞产生碳链长为14且在位置11中去饱和的脂肪醇。乙酰基转移酶可以是SEQ ID NO:21的AcT(Atf1，酿酒酵母AcT)或与Sc_Atf1具有至少75％同源性的其变体，所述变体与SEQ ID NO:21具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。在一些实施方案中，所述硫酯酶与选自以下的硫酯酶具有至少60％同源性：如SEQ ID NO:23中所示的衍生自湿地萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:38中所示的来自萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:40中所示的来自香樟的硫酯酶和如SEQ ID NO:42中所示的来自大肠杆菌的硫酯酶。优选地，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶或如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在一个实施方案中，酵母细胞表达：

i)至少一种异源Δ12去饱和酶；和

ii)至少一种异源FAR；并且

iii)任选地过表达乙酰基转移酶，并且

iv)任选地过表达硫酯酶，

其中Δ12去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性，由此酵母细胞产生碳链长为14且在位置12中去饱和的脂肪醇。乙酰基转移酶可以是SEQ ID NO:21的AcT(Atf1，酿酒酵母AcT)或与Sc_Atf1具有至少75％同源性的其变体，所述变体与SEQ ID NO:21具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。在一些实施方案中，所述硫酯酶与选自以下的硫酯酶具有至少60％同源性：如SEQ ID NO:23中所示的衍生自湿地萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:38中所示的来自萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:40中所示的来自香樟的硫酯酶和如SEQ ID NO:42中所示的来自大肠杆菌的硫酯酶。优选地，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶或如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在一个实施方案中，酵母细胞表达：

i)至少一种异源Δ13去饱和酶；和

ii)至少一种异源FAR；并且

iii)任选地过表达乙酰基转移酶，并且

iv)任选地过表达硫酯酶，

其中Δ13去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性，由此酵母细胞产生碳链长为14且在位置13中去饱和的脂肪醇。乙酰基转移酶可以是SEQ ID NO:21的AcT(Atf1，酿酒酵母AcT)或与Sc_Atf1具有至少75％同源性的其变体，所述变体与SEQ ID NO:21具有如至少76％、如至少77％、如至少78％、如至少79％、如至少80％、如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如100％同源性。在一些实施方案中，所述硫酯酶与选自以下的硫酯酶具有至少60％同源性：如SEQ ID NO:23中所示的衍生自湿地萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:38中所示的来自萼距花的硫酯酶、如SEQ ID NO:40中所示的来自香樟的硫酯酶和如SEQ ID NO:42中所示的来自大肠杆菌的硫酯酶。优选地，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶或如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。在一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的衍生自香樟的硫酯酶具有至少60％同源性。在另一个实施方案中，所述硫酯酶与如SEQ ID NO:42中所示的衍生自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

在一些实施方案中，酵母细胞还具有一个或多个导致一种或多种脂肪酶的活性部分或完全丧失的突变，如上文所详述。在一些实施方案中，酵母细胞还具有导致脂肪酰基合酶复合物的一个或多个亚基修饰的突变；特别是考虑了导致酮合酶结构域修饰的突变，如上文所详述。

在一些实施方案中，酵母细胞还具有一个或多个导致一种或多种脂肪酶的活性部分或完全丧失的突变以及导致脂肪酰基合酶复合物的一个或多个亚基的一种或多种修饰的突变，特别是导致酮合酶结构域修饰的突变，如上文所详述。

核酸

应理解，贯穿本公开文本，术语“编码活性的核酸”应指代能够编码具有所述活性的肽、蛋白质或其片段的核酸分子。此类核酸分子可以是开放阅读框或基因或其片段。核酸构建体也可以是一组核酸分子，它们一起可以编码具有目标活性的几种肽、蛋白质或其片段。术语“活性”或“目标活性”是指以下活性中的一种：如本文所述的去饱和酶、脂肪酰基-CoA还原酶、成醛脂肪酰基coA还原酶、硫酯酶和/或乙酰基转移酶活性。所述一种或多种目标活性的性质将取决于希望用本发明方法获得的所需产物的性质。

在本发明方法的一些实施方案中，编码本发明活性中的每一种(即如本文所述的去饱和酶、脂肪酰基-CoA还原酶、成醛脂肪酰基-CoA还原酶、硫酯酶和/或乙酰基转移酶)的核酸中的每一种可以包含在酵母细胞的基因组内或包含在酵母细胞内包含的载体内。

在一些实施方案中，编码本发明活性中的每一种的核酸中的每一种可以存在于所述酵母细胞的基因组中，或者因为核酸编码天然蛋白质，或者因为它已经通过基因组工程或基因组编辑或者通过使不同交配类型的酵母细胞杂交整合在其中。用于整合核酸的方法在本领域是熟知的。因此，在一些实施方案中，通过在酵母细胞中引入异源核酸来编码目标活性。可以对编码所述活性的异源核酸进行密码子优化，或者所述异源核酸可以包含可以帮助改善活性的特征。例如，可以修饰异源核酸以编码经修饰的蛋白质。此类修饰包括但不限于引入定位信号、功能获得或功能丧失突变、蛋白质与标记或标签(如荧光标签)的融合、插入诱导型启动子、引入赋予提高的稳定性和/或半衰期的修饰。

编码目标活性的异源核酸的引入可以通过本领域已知的方法进行。技术人员将认识到此类方法包括但不限于：基于克隆和同源重组的方法。克隆方法可以涉及在诸如大肠杆菌等生物中设计和构建质粒。质粒可以是整合型或非整合型载体。无克隆方法包括基于同源重组的方法，如适配体介导的PCR或缺口修复。此类方法通常导致异源核酸整合到酵母细胞的基因组中。

编码目标活性的核酸能以高拷贝数存在。

用于产生去饱和脂肪醇和/或去饱和脂肪酰基乙酸酯的方法

本文提供了用于在酵母细胞中产生去饱和脂肪酸和任选地去饱和脂肪酰基乙酸酯的方法，所述方法包括提供酵母细胞以及在培养基中孵育所述酵母细胞的步骤，其中所述酵母细胞表达：

i)至少一种能够在碳链长为14的脂肪酰基-CoA中引入至少一个双键的异源去饱和酶，从而将至少一部分的所述脂肪酰基-CoA转化为去饱和脂肪酰基-CoA；和

ii)至少一种能够将至少一部分的所述去饱和脂肪酰基-CoA转化为去饱和脂肪醇的异源脂肪酰基-CoA还原酶，从而产生所述去饱和脂肪醇；以及

iii)任选地，能够将至少一部分的所述去饱和脂肪醇转化为去饱和脂肪酰基乙酸酯的乙酰基转移酶，从而产生所述去饱和脂肪酰基乙酸酯；

其中所述去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性。

酵母细胞可以能够天然地合成十四烷酰基-CoA，或者可以被工程化以合成十四烷酰基-CoA，或者可以在孵育细胞的培养基中提供十四烷酰基-CoA，如部分“脂肪酰基-CoA”中所述。所述至少一种异源去饱和酶和至少一种异源脂肪酰基-CoA还原酶可以如本文其他地方所述。酵母细胞可以如上所述。

本文所述的酵母细胞可以用于产生具有前所未有的滴度的链长为14的去饱和脂肪醇和/或去饱和脂肪酰基乙酸酯的方法中。

特别地，在一些实施方案中，去饱和十四烷酰基-CoA与去饱和十六烷酰基-CoA的比率为至少0.1，如至少0.2、如至少0.3、如至少0.4、如至少0.5、如至少0.75、如至少1、如至少2、如至少3、如至少4、如至少5、如至少6、如至少7、如至少8、如至少9、如至少10、如至少12.5、如至少15或更高。

在一些实施方案中，所述方法产生滴度为至少1mg/L(如至少1.5mg/L、如至少5mg/L、如至少10mg/L、如至少25mg/L、如至少50mg/L、如至少100mg/L、如至少250mg/L、如至少500mg/L、如至少750mg/L、如至少1g/L、如至少2g/L、如至少3g/L、如至少4g/L、如至少5g/L或更高)的去饱和脂肪醇。

在一些实施方案中，所述方法产生滴度为至少1mg/L(如至少1.5mg/L、如至少5mg/L、如至少10mg/L、如至少25mg/L、如至少50mg/L、如至少100mg/L、如至少250mg/L、如至少500mg/L、如至少750mg/L、如至少1g/L、如至少2g/L、如至少3g/L、如至少4g/L、如至少5g/L或更高)的链长为14的去饱和脂肪醇。

在一些实施方案中，所述方法产生去饱和脂肪醇，其包含至少1％(如至少1.5％、如至少2％、如至少2.5％、如至少3％、如至少3.5％、如至少4％、如至少4.5％、如至少5％、如至少7.5％、如至少10％或更多)的链长为14的去饱和脂肪醇。

在一些实施方案中，所述方法产生滴度为至少1mg/L(如至少1.5mg/L、如至少5mg/L、如至少10mg/L、如至少25mg/L、如至少50mg/L、如至少100mg/L、如至少250mg/L、如至少500mg/L、如至少750mg/L、如至少1g/L、如至少2g/L、如至少3g/L、如至少4g/L、如至少5g/L或更高)的去饱和脂肪乙酸酯。

在一些实施方案中，所述方法产生滴度为至少1mg/L(如至少1.5mg/L、如至少5mg/L、如至少10mg/L、如至少25mg/L、如至少50mg/L、如至少100mg/L、如至少250mg/L、如至少500mg/L、如至少750mg/L、如至少1g/L、如至少2g/L、如至少3g/L、如至少4g/L、如至少5g/L或更高)的链长为14的去饱和脂肪乙酸酯。

在一些实施方案中，所述方法产生去饱和脂肪乙酸酯，其包含至少1％(如至少1.5％、如至少2％、如至少2.5％、如至少3％、如至少3.5％、如至少4％、如至少4.5％、如至少5％、如至少7.5％、如至少10％)的链长为14的去饱和脂肪乙酸酯。

在一些实施方案中，酵母细胞还可以表达如上文所述的成醛脂肪酰基-CoA还原酶EC 1.2.1.50(FAR')。

回收

可能需要回收通过本文公开的方法获得的产物。因此，本发明方法可以包括回收由本发明酵母细胞产生的去饱和脂肪醇和/或去饱和脂肪酰基乙酸酯的另外的步骤。

在一些实施方案中，所述方法包括回收去饱和脂肪醇的步骤。在一个特定实施方案中，所述方法包括回收碳链长为14的去饱和脂肪醇的步骤。在其他实施方案中，所述方法包括回收脂肪酰基乙酸酯的步骤。在一个特定实施方案中，所述方法包括回收碳链长为14的脂肪酰基乙酸酯的步骤。

用于回收通过本发明获得的产物的方法在本领域是已知的，并且可以包括用疏水性溶剂(如癸烷、己烷或植物油)进行提取。

可以进一步修饰所回收的产物，例如如上所述，可以将去饱和脂肪醇转化为对应的去饱和脂肪醛。

也可以将所回收的产物(即去饱和脂肪醇和/或去饱和脂肪酰基乙酸酯)配制成信息素组合物。所述组合物还可以包含一种或多种另外的化合物，如液体或固体载体或基质。由所述去饱和脂肪醇得到的脂肪醛也可以包含在此类组合物中。

试剂盒

本文提供了用于进行本发明方法的部件试剂盒。所述部件试剂盒可以包含如本文所述的“即用型”的酵母细胞。在一个实施方案中，酵母细胞是耶氏酵母属细胞，如解脂耶氏酵母细胞。

在另一个实施方案中，所述部件试剂盒包含编码待引入酵母细胞中的目标活性的核酸构建体。核酸构建体可以作为多种核酸构建体来提供，如多种载体，其中每种载体编码一种或几种所需活性。

所述部件试剂盒可以任选地包含待修饰的酵母细胞。

在一些实施方案中，所述部件试剂盒包含所有上述项。

信息素组合物

因此，本公开文本提供了化合物(特别是脂肪醇和脂肪酰基乙酸酯)以及它们的衍生物和它们的用途。特别地，使用本发明细胞和方法可获得的化合物可用作信息素组合物的组分。此类信息素组合物可用于综合害虫治理。它们可以如本领域所已知的那样用于例如交配干扰。

可以将通过本发明方法或使用本发明酵母细胞可获得的去饱和脂肪醇和去饱和脂肪酰基乙酸酯配制在信息素组合物中。

此类信息素组合物可以用作综合害虫治理产品，其可以用于监测害虫存在的方法中或用于干扰害虫交配的方法中。

如本文公开的信息素组合物可以用作生物农药。可以将此类组合物喷洒或分配在培养物上、在田间或在果园中。如本领域所已知的，也可以将它们浸泡在例如橡胶隔垫上，或者与其他组分混合。这可以导致交配干扰，从而防止害虫繁殖，或者它可以与诱捕装置组合使用以捕获害虫。可以使用本发明信息素组合物对抗的害虫的非限制性例子是：棉铃虫(cotton bollworm/Helicoverpa armigera)、条纹螟虫(striped stemborer)(二化螟(Chilo suppressalis))、小菜蛾(diamond back moth/Plutella xylostella)、甘蓝夜蛾(cabbage moth/Mamestra brassicae)、大甘蓝心毛毛虫(large cabbage-heartcaterpillar)(大菜螟(Crocidolomia binotalis))、欧洲玉米秆蛀虫(European cornstalk borer)(蛀茎夜蛾(Sesamia nonagrioides))、醋栗透翅蛾(currant clearwing)(茶藨子透翅蛾(Synanthedon tipuliformis))和洋蓟羽蛾(artichoke plume moth/Platyptilia carduidactylal)。因此，将本发明组合物用于培养物可以提高作物产量，基本上没有环境影响。

本发明信息素组合物中脂肪醇和脂肪酰基乙酸酯的相对量可以根据作物的性质和/或待控制的害虫而变化；也可能存在地理差异。因此，确定最佳相对量可能需要常规优化。所述信息素组合物还可包含脂肪醛。

用作驱虫剂的组合物的例子可见于Kehat&Dunkelblum,1993(针对棉铃虫)；Alfaro等人,2009(针对二化螟)；Eizaguirre等人,2002(针对蛀茎夜蛾)；Wu等人,2012(针对小菜蛾)；Bari等人,2003(针对洋蓟羽蛾)。

在一些实施方案中，所述信息素组合物还可以包含一种或多种另外的化合物，如液体或固体载体或基质。例如，合适的载体或基质包括植物油、精制矿物油或其馏分、橡胶、塑料、二氧化硅、硅藻土、蜡模和纤维素粉末。

可以如本领域所已知的那样配制信息素组合物。例如，它可以呈溶液、凝胶、粉末的形式。可以配制信息素组合物使得其易于分配，如本领域所已知的。

实施例

实施例1：质粒和菌株的构建

以解脂耶氏酵母的密码子优化形式通过GeneArt(Life Technologies)合成编码来自天竺葵(SEQ ID NO:1)和蓖麻(SEQ ID NO:3)的去饱和酶的基因。以酿酒酵母的密码子优化形式通过GeneArt合成编码来自脐橙螟(SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:7)、来自黑腹果蝇(SEQ ID NO:9)的去饱和酶和来自酿酒酵母的OLE1的基因。编码脐橙螟去饱和酶和酿酒酵母去饱和酶OLE1的合成基因掺入了attB1-attB2位点，其允许通过Gateway克隆系统(Invitrogen：Technology Manual)将这些基因克隆到载体pDONR221中。[http://tools.invitrogen.com/content/sfs/manuals/gatewayman.pdf]。从酿酒酵母菌株CEN.PK102-5B的基因组DNA制剂中扩增编码醇乙酰基转移酶ATF1的基因(SEQ ID NO:19)。修饰编码来自棉铃虫的脂肪酰基还原酶的基因，使得其推定的天然KKSYE信号被来自酿酒酵母的HDEL信号替换，并且也以酿酒酵母的密码子优化形式通过GeneArt(LifeTechnologies)合成此基因。通过PCR扩增所有基因以获得用于克隆到酵母表达载体中的片段。引物列于表1中，并且得到的DNA片段列于表2中。在含有RedSafe^TM(iNtRONBiotechnology)的1％琼脂糖凝胶上分离PCR产物。从凝胶上切下正确大小的PCR产物，并使用凝胶和PCR清理试剂盒(Macherey-Nagel)纯化。

表1：引物。

表2：使用所指示模板和引物通过PCR获得的DNA片段。

实施例2：载体pYEX-CHT-Dmd9、pYEX-CHT-Phd9、pYEX-CHT-Rcd9、pYEX-CHT-Atrd1432、pYEX-CHT-Atrd236和pYEX-CHT-OLE1的克隆

根据制造商的方案，通过使用Maxima Hot Start Green PCR Master Mix(2X)(ThermoFisher Scientific)分别从质粒pCfB5316、pCfB4584和pCfB4585中扩增DNA片段BB1870、BB1871和BB1872。PCR混合物含有20μl水、25μl Maxima Hot Start Green PCRMaster Mix、2.5μl正向引物(10μM)、2.5μl反向引物(10μM)和5ng DNA模板，并且使用以下PCR程序：94℃持续2min，35个循环的[94℃持续15sec、55℃持续30sec、72℃持续2min30sec]，72℃持续7min。在1％琼脂糖凝胶上分离PCR产物。从凝胶上切下正确大小的PCR产物，并使用凝胶和PCR清理试剂盒(Macherey-Nagel)纯化。

通过Gateway克隆技术将得到的DNA片段(BB1870、BB1871和BB1872)克隆到pDONR221中，产生所谓的“入门克隆”(ThermoFisher Scientific)。通过混合100ng合成基因、100ng pDONR 221和1μL BP克隆酶(Life Technologies)进行BP反应。将反应在室温下孵育1小时。将反应混合物通过热休克转化到大肠杆菌感受态HB101细胞(Life Technologies)中，并且将细胞铺板在含50mg/L卡那霉素的Lysogeny Broth(LB)琼脂板上，并且在37℃下孵育过夜。将单菌落接种到13-ml无菌管中的含50mg/L卡那霉素的5ml液体LB中，并且伴随振荡培养过夜。从过夜大肠杆菌培养物中纯化质粒，并且测序以确认正确的克隆。通过将100ng入门克隆与100ng指定载体pYEX-CHT-DEST和1μL LR克隆酶(Invitrogen)混合，使基因从入门克隆穿梭到指定酵母表达载体pYEX-CHT-DEST中(Ding BJ,Carraher C,C.2016.Sequence variation determining stereochemistry of aΔ11desaturaseactive in moth sex pheromone biosynthesis.Insect Biochem Mol Biol.74:68-75.doi:10.1016/j.ibmb.2016.05.002.)。将反应在室温下孵育1小时，然后通过热休克转化到大肠杆菌感受态HB101细胞中。将细胞铺板在含100mg/L氨苄青霉素的Lysogeny Broth(LB)琼脂板上。从过夜大肠杆菌培养物中纯化质粒，并且通过测序确认正确的克隆。

实施例3：载体pCfB5316、pCfB4584、pCfB4585、pCfB4580的克隆

如下通过PCR扩增DNA生物砖BB0410、BB1696、BB0301、BB1420、BB0301、BB1421、BB0464、BB0915和BB1422。PCR混合物含有32μl水、10μl高保真聚合酶缓冲液(5x)、1μl dNTP(10mM)、1μl Phusion U聚合酶、2.5μl正向引物(10μM)、2.5μl反向引物(10μM)和1μl DNA模板，并且使用以下PCR程序：94℃持续2min，30个循环的[94℃持续15sec、52℃持续20sec、68℃持续1min 30sec]，68℃持续2min，在10℃下暂停。

整合型载体EasyClone 2.0pCfB2909(XII-5-MarkerFree)描述于Jessop-Fabre等人,2016中，并且pCfB2190描述于Stovicek等人,2015中。如Stovicek等人,2015中所述，通过DNA片段BB0593(含有pCfB387载体主链)和BB0598(含有诺尔丝菌素抗性盒)的USER融合构建质粒pCfB2912。将所有整合型载体用AsiSI(Fermentas)在37℃下线性化2小时，然后用Nb.BsmI(New England Biolabs)在65℃下切口1小时。将得到的含有粘性末端的载体通过凝胶电泳分离，切下并使用凝胶和PCR清理试剂盒(Macherey-Nagel)进行凝胶纯化。经由以下方案通过USER-克隆将DNA片段克隆到如此制备的载体中：将1μl线性化质粒、1μl启动子片段、1.5μl基因片段、1μl高保真聚合酶缓冲液(5x)和0.5μl USER酶(New England Biolabs)混合并且在37℃下孵育25min且在25℃下孵育25min。将反应转化到化学感受态大肠杆菌DHα细胞中并且将细胞铺板在含100mg/L氨苄青霉素的Lysogeny Broth(LB)琼脂板上。将板在37℃下孵育过夜，并且通过菌落PCR筛选得到的菌落。从过夜大肠杆菌培养物中纯化质粒，并且通过测序确认正确的克隆。所构建的载体列于表3中。

表3：表达载体。

实施例4：菌株的构建

使用酿酒酵母易酵母转化试剂盒(Life Technologies)将含有不同去饱和酶基因的pYEX-CHT衍生的重组表达载体引入OLE1和ELO1有缺陷的酿酒酵母(MATa elo1::HIS3ole1::LEU2ade2his3leu2ura3；(Schneiter等人,2000))中。为了选择尿嘧啶和亮氨酸原养型克隆，将转化后的酵母细胞铺板在由0.7％YNB(不含氨基酸，含硫酸铵)、1.546％缺乏尿嘧啶和亮氨酸的补偿混合物(Formedium^TMLTD，英格兰诺里奇)、2％葡萄糖、1％tergitol(型号Nonidet NP-40，Sigma-Aldrich Sweden AB，瑞典斯德哥尔摩)、0.01％腺嘌呤(Sigma)和0.5mM油酸(Sigma)组成的培养基上。所构建的酵母菌株列于表4中。

用NotI(Fermentas)将整合型表达载体pCfB4580和pCfB5316线性化。使用乙酸锂方案(Gietz&Schiestl,2007)将pCfB4580转化到酿酒酵母CEN.PK102-5B中，产生菌株ST4854。在不含亮氨酸的酵母合成补偿板(Sigma-Aldrich)上选择阳性转化体。通过菌落PCR确认表达构建体在酿酒酵母的基因组中的正确整合。通过使用(Jessop-Fabre等人,2016)中描述的方法将pCfB5316整合到ST4854中来构建菌株ST5290。所构建的菌株列于表5中。

实施例5：Δ9去饱和酶活性和特异性

在具有分别编码Δ9-脂肪酸去饱和酶和中链酰基延长酶的OLE1和ELO1基因的缺失的酿酒酵母菌株中测试去饱和酶的活性和特异性(Schneiter等人,2000)。

将菌株ST_Atr1432、ST_Atr236、ST_Phd9、ST_Rcd9、ST_ScOLE1和ST_DmeD9的三个单独菌落接种到1mL选择性培养基(SC-Ura-Leu)中，并且在30℃和300rpm下孵育48h。在补充有2mM CuSO4和0.5mM肉豆蔻酸甲酯(14:Me)(Larodan Fine Chemicals，瑞典)的5mL选择性培养基中将培养物稀释至OD600为0.4。将肉豆蔻酸甲酯原液制备成在96％乙醇中的浓度为100mM。将酵母培养物在30℃下以300rpm孵育48小时。

取样1mL培养物并且添加3.12μg十九烷酸甲酯作为内标。在玻璃小瓶中使用3.75mL甲醇/氯仿(2:1，v/v)提取总脂质。向管中添加1mL乙酸(0.15M)和1.25mL水。将管剧烈涡旋并以2,000xg离心2min。将含有总脂质的底部氯仿相(约1mL)转移到新的玻璃小瓶中，并且蒸发溶剂至干。通过酸甲醇分解由此总脂质提取物制备脂肪酸甲酯(FAME)。向管中添加1mL硫酸的2％甲醇溶液(v/v)，剧烈涡旋，并且在90℃下孵育1h。孵育后，添加1mL水并充分混合，然后用1mL己烷提取FAME。

在与质量选择检测器HP 5973连接的Hewlett Packard 6890GC上对甲酯样品进行GC-MS分析。GC配备有INNOWax柱(30m×0.25mm×0.25μm)，并且将氦气用作载气(平均速度：33cm/s)。以电子撞击模式(70eV)操作MS，并且在220℃下以不分流模式配置注射器。烘箱温度设定如下：在80℃下持续1min，然后以10℃/min的速率增加至210℃，随后在210℃下保持15min，然后以10℃/min的速率增加至230℃，随后在230℃下保持20min。通过将它们的保留时间和质谱与合成标准品的保留时间和质谱进行比较来鉴定单不饱和脂肪酸产物。通过ChemStation软件(Agilent,Technologies，美国)分析数据。

Z9-14:Me和Z9-16:Me的测量浓度(表4)显示表达来自黑腹果蝇的去饱和酶的菌株ST_DmeD9产生最高浓度的Z9-14:Me(3.67mg/L)和Z9-14:Me与Z9-16:Me的最大比率。这表明在所测试的去饱和酶中，黑腹果蝇去饱和酶对C14-CoA底物具有最高的活性和特异性。

表4：异源去饱和酶在酵母中的活性和特异性。

实施例6：(Z)9-十四碳烯-1-基乙酸酯的产生

在具有活性OLE1和ELO1基因的酿酒酵母CEN.PK102-5B的基础上产生用于产生信息素的菌株。所获得的菌株列于表5中。

将菌株ST4854和ST5290接种到5ml合成完全培养基(缺乏组氨酸、亮氨酸、色氨酸，补充有20mg/L尿嘧啶和76mg/L组氨酸)中，并且在带有金属labocap盖(Lüdiswiss，瑞士弗拉维尔)的12-ml玻璃管(Duran，德国沃特海姆)中在30℃下伴随以250rpm振荡培养过夜。第二天，将过夜培养物离心，弃去上清液，并且将沉淀重悬于2ml矿物质培养基中，所述培养基具有如(Jensen等人,2014)所述的组成。所述培养基补充有76mg/L组氨酸和20mg/L尿嘧啶。将培养物在30℃下伴随以250rpm振荡孵育48小时。

将1mL培养物样品转移到4-mL玻璃小瓶中，并且添加10μL内标原液(1μg/μl(Z)10-庚-1-基甲酯的100％乙醇溶液)。用小块铝箔覆盖小瓶，我们用针刺穿箔盖上的小孔。将样品涡旋并置于-80℃下储存直至分析。将样品在-40℃下冷冻干燥(Freezone6andStoppening盘式干燥器，Labconco，美国堪萨斯城)，然后添加1mL氯仿:甲醇2:1以破坏细胞。将混合物涡旋45s并在室温下放置4小时。在氮气流下缓慢蒸发有机溶剂。添加1ml己烷，将样品涡旋10s，离心并且将200μl转移到新的玻璃小瓶中。如实施例5中所述进行GC-MS分析。基于内标计算(Z)-9-十四碳烯-1-基乙酸酯的浓度。

从结果中可以看出，黑腹果蝇去饱和酶的过表达使Z9:14:OAc的滴度增高了超过5倍。此外，总脂肪酰基乙酸酯的产物分数从2％增加到10％。

表5：通过酵母产生(Z)-9-十四碳烯-1-基乙酸酯

实施例7：产生Z11-C14:OAc的方法

在酵母菌株中与HarFAR和Atf1一起过表达编码优先产生Z11-C14:CoA的Δ11去饱和酶的基因。使得到的菌株在培养基中生长并产生Z11-14:OAc。所述基因编码例如来自斜带叶卷蛾玫瑰色卷蛾(oblique banded leaf roller moth Choristoneura rosaceana)的Δ11去饱和酶(SEQ ID NO:65)。从发酵液中回收信息素并且将其配制成交配干扰产品以控制害虫，例如欧洲玉米螟(European corn borer Ostrinia nubilalis)。

实施例8：产生E11-C14:OAc的方法

在酵母菌株中与HarFAR和Atf1一起过表达编码优先产生E11-C14:CoA的Δ11去饱和酶的基因。使得到的菌株在培养基中生长并产生E11-14:OAc。所述基因编码例如来自斑点色卷蛾(spotted fireworm moth Choristoneura parallela)的Δ11去饱和酶(SEQ IDNO:66)。从发酵液中回收信息素并且将其配制成交配干扰产品以控制害虫，例如浅褐色苹果蛾苹果褐卷蛾。

实施例9：质粒和解脂耶氏酵母菌株的构建

以解脂耶氏酵母的密码子优化形式通过GeneArt(Life Technologies)合成编码来自脐橙螟(SEQ ID NO:68)、斜纹夜蛾(SEQ ID NO:12)和黑腹果蝇(Dmd9；SEQ ID NO:10)的去饱和酶，棉铃虫的脂肪酰基还原酶(HarFAR；SEQ ID NO:25)，来自大肠杆菌(SEQ IDNO:42)和来自香樟(SEQ ID NO:40)的硫酯酶以及酿酒酵母的醇乙酰基转移酶(Atf1；SEQID NO:21)的基因。以酿酒酵母的密码子优化形式通过GeneArt(Life technologies)合成Heliothis subflexa的脂肪酰基还原酶(SEQ ID NO:70)。

在菌株ST6629中，使基因HFD4(YALI0B01298g)、HFD3(YALI0A17875)、HFD2(YALI0E15400)和HFD1(YALI0F23793g)的开放阅读框以及GPAT(YALI0C00209g)编码序列上游的核苷酸-1130至-100缺失。将过早终止密码子和移码引入PEX10(YALI0C01023g)和FAO1(YALI0B14014g)中，产生非功能性基因。

菌株ST7394是基于ST6629，并且表达来自染色体C(核苷酸2192680-2193710)和D(核苷酸1842294-1843343)上的基因间区的如pCfB6969和pCfB7600中所述的Dmd9、HarFAR和Atf1(图2)。

在菌株ST6365中，HFD1、HFD4、PEX10和FAO1的开放阅读框被选择标记盒替换。ST6365表达来自脐橙螟的Δ11去饱和酶和来自Heliothis subflexa的脂肪酰基还原酶。

菌株ST6357表达来自染色体E(核苷酸1722042-1723055)上的基因间区的如pCfB7235中所述的Atf1和HarFAR(图2)。

菌株ST6359表达来自染色体E(核苷酸1722042-1723055)上的基因间区的如pCfB7235中所述的Atf1和HarFAR(图2)和来自染色体E(2881519-2882566)上的基因间区的如pCfB7239中所述的Dmd9(图2)。

菌株ST6360表达来自染色体E(核苷酸1722042-1723055)上的基因间区的如pCfB7235中所述的Atf1和HarFAR和来自染色体E(2881519-2882566)上的基因间区的如pCfB7240中所述的SliDes11(图2)。

菌株ST6373表达来自染色体E(核苷酸1722042-1723055)上的基因间区的如pCfB7235中所述的Atf1和HarFAR和来自染色体E(2881519-2882566)上的基因间区的如pCfB7251中所述的Dmd9和TesA(LL)(图2)。

菌株ST6375表达来自染色体E(核苷酸1722042-1723055)上的基因间区的如pCfB7235中所述的Atf1和HarFAR和来自染色体E(2881519-2882566)上的基因间区的如pCfB7253中所述的Dmd9和CcFATB1(图2)。

在菌株ST7010中，解脂耶氏酵母天然脂肪酰基合成酶2基因(YALI19382)的核苷酸3658-3660(ATC)被TTC替换。

在菌株ST7895和ST7944中，分别使基因LIP2和LIP2LIP8的开放阅读框缺失。

实施例10：用于通过异源表达硫酯酶增加解脂耶氏酵母中(Z)9-14:OH和(Z)9-14:Ac的产生的方法

将表9中的菌株接种到2mL YPG培养基(20g/L蛋白胨、10g/L酵母提取物和70g/L甘油)中，至光密度(600nm)为1，并且在带有金属labocap盖(Lüdiswiss，瑞士弗拉维尔)的在12-ml玻璃管(Duran，德国沃特海姆)中在30℃下以250rpm振荡培养48小时。如果指出，则所述培养基补充有1g/L肉豆蔻酸甲酯。

为了提取脂肪醇，将1mL培养物转移到4-mL玻璃小瓶中，并且添加10μL内标溶液(2μg/μL(Z)-10-庚-1-基甲酯的100％乙醇溶液)。用小块铝箔覆盖小瓶，并且用针刺穿箔盖上的小孔。将样品涡旋并置于-80℃下储存直至分析。将样品在冷冻干燥系统(Freezone6andStoppening盘式干燥器，Labconco，美国堪萨斯城)中于-40℃下冷冻干燥，然后添加1mL氯仿:甲醇2:1以破坏细胞。将混合物涡旋45s并在室温下放置4小时。在氮气流下缓慢蒸发有机溶剂。添加1ml己烷，将样品涡旋10s，离心并且将200μl转移到新的玻璃小瓶中。用配备有INNOWax 30m×0.25mm×0.25μm柱的SCION TQ GC-MS(Bruker)进行定量，其中氦气作为载气。在250℃下以不分流模式配置注射器，烘箱温度设定如下：在80℃下持续1min，然后以10℃/min的速率增加至210℃，随后在210℃下保持10min，然后以10℃/min的速率增加至230℃，随后在230℃下保持5min。以电子撞击模式(70eV)操作MS，在m/z 30与350之间扫描。通过将保留时间和质谱与参考化合物的保留时间和质谱进行比较来鉴定化合物。通过记录的总离子电流(TIC)定量化合物。通过BrukerMSWorkstation软件分析数据。基于内标计算脂肪醇的浓度(表9)。

所述实施例显示在解脂耶氏酵母中产生(Z)9-14:OH和(Z)9-14:OAc。来自大肠杆菌或香樟的硫酯酶的额外表达分别使化合物的产量提高了20％和25％。

表9.通过异源表达硫酯酶增加的解脂耶氏酵母中(Z)9-14:OH和(Z)9-14:OAc的产生。在右边的两列中，上面一行表示C14的产物，下面一行表示C16的产物。N.A.：没有得到。

实施例11：用于通过在解脂耶氏酵母脂肪酰基合成酶(FAS2)中引入点突变来增加解脂耶氏酵母中(Z)9-14:OH的产生的方法

如实施例10中所述培养表10中的菌株，但不补充培养基。

通过在天然脂肪酰基合成酶(FAS2)中引入点突变(I1220F)，(Z)9-14:OH的产量提高了大约15倍。

表10

实施例12：用于通过使解脂耶氏酵母脂肪酶基因缺失来增加解脂耶氏酵母中(Z)9-14:Ac的产生的方法

如实施例10中所述培养表11中的菌株。所述培养基补充有1g/L肉豆蔻酸甲酯。使脂肪酶2单独缺失或使脂肪酶2和脂肪酶8一起缺失导致脂肪醇滴度增高，如可以从图3中所见到的。

表11

序列

概述

SEQ ID NO:1-来自天竺葵的Δ9去饱和酶的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:2-来自天竺葵的Δ9去饱和酶

SEQ ID NO:3-来自蓖麻的Δ9去饱和酶的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:4-来自蓖麻的Δ9去饱和酶

SEQ ID NO:5-来自脐橙螟的Δ9去饱和酶Atr236的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:6-来自脐橙螟的Δ9去饱和酶Atr236

SEQ ID NO:7-来自脐橙螟的Δ9去饱和酶Atr1432的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:8-来自脐橙螟的Δ9去饱和酶Atr1432

SEQ ID NO:9-来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶Dmd9的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:10-来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶Dmd9

SEQ ID NO:11–来自斜纹夜蛾的Δ9去饱和酶Des11的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:12-来自斜纹夜蛾的Δ9去饱和酶Des11

SEQ ID NO:13-来自Chauliognathus lugubris的Δ9去饱和酶Cld9的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:14-来自Chauliognathus lugubris的Δ9去饱和酶Cld9

SEQ ID NO:15-来自赤拟谷盗(Tribolium castaneum)的去饱和酶D6的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:16-来自赤拟谷盗的去饱和酶D6

SEQ ID NO:17-来自赤拟谷盗的去饱和酶D8的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:18-来自赤拟谷盗的去饱和酶D8

SEQ ID NO:19-酿酒酵母ATF1DNA序列；DNA编码序列。

SEQ ID NO:20-来自酿酒酵母的醇乙酰基转移酶ATF1的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:21-酿酒酵母ATF1p氨基酸序列

SEQ ID NO:22-来自湿地萼距花的硫酯酶CpFATB2的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:23-来自湿地萼距花的硫酯酶CpFATB2的蛋白质序列

SEQ ID NO:24-棉铃虫脂肪酰基还原酶的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列；mRNA编码序列

SEQ ID NO:25-棉铃虫脂肪酰基还原酶

SEQ ID NO:26-信号肽变为HDEL的棉铃虫脂肪酰基还原酶的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列；DNA编码序列。

SEQ ID NO:27-信号肽变为HDEL的棉铃虫脂肪酰基还原酶

SEQ ID NO:28-烟夜蛾脂肪酰基还原酶的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列；mRNA编码序列。

SEQ ID NO:29-烟夜蛾脂肪酰基还原酶的氨基酸序列

SEQ ID NO:30-信号肽变为HDEL的烟夜蛾脂肪酰基还原酶的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列；mRNA编码序列

SEQ ID NO:31-信号肽变为HDEL的烟夜蛾脂肪酰基还原酶的氨基酸序列

SEQ ID NO:32-Heliothis subflexa脂肪酰基还原酶的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列；mRNA编码序列。

SEQ ID NO:33-H.subflexa脂肪酰基还原酶的氨基酸序列

SEQ ID NO:34-信号肽变为HDEL的H.subflexa脂肪酰基还原酶的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列；mRNA编码序列

SEQ ID NO:35-信号肽变为HDEL的H.subflexa脂肪酰基还原酶的氨基酸序列

SEQ ID NO:36–来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶Dmd9的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:37–来自萼距花的硫酯酶ChFatB3的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:38–来自萼距花的硫酯酶ChFatB3的氨基酸序列

SEQ ID NO:39-来自香樟的硫酯酶CcFatB1的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:40–来自香樟的硫酯酶CcFatB1的氨基酸序列

SEQ ID NO:41–没有前导序列的称为TesA(LL)的来自大肠杆菌的硫酯酶TesA的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:42-没有前导序列的称为TesA(LL)的来自大肠杆菌的硫酯酶TesA的蛋白质序列

SEQ ID NO:43–来自棉铃虫的脂肪酰基还原酶Har_FAR的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:44–来自Bicyclus anynana的脂肪酰基还原酶Ban-wFAR2的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:45-来自Bicyclus anynana的脂肪酰基还原酶Ban-wFAR2的蛋白质序列

SEQ ID NO:46-PR-1852(PTDH3_fw)

SEQ ID NO:47PR-1853(PTDH3_rv)

SEQ ID NO:48PR-1565(PTEF1)

SEQ ID NO:49PR-8332(Har_FAR_U1_fw)

SEQ ID NO:50PR-10739(Har_FAR_HDEL_U1_rev)

SEQ ID NO:51PR-14318(Phd9_U2_fw)

SEQ ID NO:52PR-14276(Phd9_U2_rev)

SEQ ID NO:53PR-14319(RCd9_U2_fw)

SEQ ID NO:54PR-14278(RCd9_U2_rev)

SEQ ID NO:55PR-14320(Atf1_U2_fw)

SEQ ID NO:56PR-14321(Atf1_U2_rev)

SEQ ID NO:57PR-15974(Dmd9_U1_fw)

SEQ ID NO:58PR-15975(Dmd9_U1_rev)

SEQ ID NO:59PR-15976(attB1_Dmd9_F)

SEQ ID NO:60PR-15977(attB2_Dmd9_R)

SEQ ID NO:61PR-15978(attB1_Phd9_F)

SEQ ID NO:62PR-15979(attB2_Phd9_R)

SEQ ID NO:63PR-15980(attB1_Rcd9_F)

SEQ ID NO:64PR-15981(attB1_Rcd9_R)

SEQ ID NO:65来自玫瑰色卷蛾的Δ11去饱和酶。

SEQ ID NO:66-来自斑点色卷蛾的Δ11去饱和酶

SEQ ID NO:67-脐橙螟Δ11去饱和酶的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:68–来自脐橙螟的Δ11去饱和酶

SEQ ID NO:69-棉铃虫脂肪酰基还原酶的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:70-Heliothis subflexa脂肪酰基还原酶的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列

SEQ ID NO:71：FAS2序列(野生型)

SEQ ID NO:72：来自解脂耶氏酵母的LIP2的序列。

SEQ ID NO:73：来自解脂耶氏酵母的LIP7的序列

SEQ ID NO:74：来自解脂耶氏酵母的LIP8的序列

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项目

1.一种能够产生去饱和脂肪醇和任选地去饱和脂肪酰基乙酸酯的酵母细胞，所述酵母细胞表达：

i)至少一种能够在碳链长为14的脂肪酰基-CoA中引入至少一个双键的异源去饱和酶；和

ii)至少一种能够将至少一部分的所述去饱和脂肪酰基-CoA转化为去饱和脂肪醇的异源脂肪酰基-CoA还原酶(FAR)；以及

iii)任选地，能够将至少一部分的所述去饱和脂肪醇转化为去饱和脂肪酰基乙酸酯的乙酰基转移酶；

其中所述去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性。

2.根据项目1的酵母细胞，其中所述至少一种异源去饱和酶选自Δ3去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ7去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ9去饱和酶、Δ10去饱和酶、Δ11去饱和酶、Δ12去饱和酶和Δ13去饱和酶。

3.根据前述项目中任一项的酵母细胞，其中所述去饱和酶能够在位置5、6、7、8、9、10、11、12或13中引入至少一个双键。

4.根据前述项目中任一项的酵母细胞，其中所述去饱和酶衍生自选自天竺葵、蓖麻、黑腹果蝇、斜纹夜蛾和赤拟谷盗的生物，优选地所述去饱和酶衍生自黑腹果蝇。

5.根据前述项目中任一项的酵母细胞，其中所述至少一种异源去饱和酶选自：

i)与如SEQ ID NO:2中所示的来自天竺葵的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶；

ii)与如SEQ ID NO:4中所示的来自蓖麻的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶；

iii)与如SEQ ID NO:10中所示的来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶；

iv)与如SEQ ID NO:12中所示的来自斜纹夜蛾的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶；

v)与如SEQ ID NO:14中所示的来自Chauliognathus lugubris的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶；

vi)与如SEQ ID NO:16中所示的来自赤拟谷盗的去饱和酶具有至少60％同源性的去饱和酶；和

vii)与如SEQ ID NO:18中所示的来自赤拟谷盗的去饱和酶具有至少60％同源性的去饱和酶；

viii)与如SEQ ID NO:65中所示的来自玫瑰色卷蛾的去饱和酶具有至少60％同源性的Δ11去饱和酶；

ix)与如SEQ ID NO:66中所示的来自斑点色卷蛾的去饱和酶具有至少60％同源性的Δ11去饱和酶，

优选地，所述去饱和酶是与如SEQ ID NO:10中所示的来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶或与如SEQ ID NO:12中所示的来自斜纹夜蛾的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶。

6.根据前述项目中任一项的酵母细胞，其中所述至少一种异源去饱和酶选自：

i)与如SEQ ID NO:10中所示的来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶；

ii)与如SEQ ID NO:12中所示的来自斜纹夜蛾的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶；

iii)与如SEQ ID NO:14中所示的来自Chauliognathus lugubris的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶；

iv)与如SEQ ID NO:16中所示的来自赤拟谷盗的去饱和酶具有至少60％同源性的去饱和酶；和

v)与如SEQ ID NO:18中所示的来自赤拟谷盗的去饱和酶具有至少60％同源性的去饱和酶；

vi)与如SEQ ID NO:65中所示的来自玫瑰色卷蛾的去饱和酶具有至少60％同源性的Δ11去饱和酶；

vii)与如SEQ ID NO:66中所示的来自斑点色卷蛾的去饱和酶具有至少60％同源性的Δ11去饱和酶。

7.根据前述项目中任一项的酵母细胞，其中所述脂肪酰基-CoA还原酶(FAR)选自：

i)与如SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:27中所示的来自棉铃虫的FAR具有至少80％同源性的FAR；

ii)与如SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:31中所示的来自烟夜蛾的FAR具有至少80％同源性的FAR；

iii)与如SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:35中所示的来自Heliothis

subflexa的FAR具有至少80％同源性的FAR；以及

iv)与如SEQ ID NO:45中所示的来自Bicyclus anynana的FAR具有至少80％同源性的FAR，

优选地，所述FAR是与如SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:27中所示的来自棉铃虫的FAR具有至少80％同源性的FAR。

8.根据前述项目中任一项的酵母细胞，其中所述乙酰基转移酶是从所述酵母细胞表达的异源乙酰基转移酶或从所述酵母细胞过表达的天然乙酰基转移酶。

9.根据前述项目中任一项的酵母细胞，其中所述乙酰基转移酶与如SEQ ID NO:21中所示的来自酿酒酵母的乙酰基转移酶Atf1具有至少75％同源性。

10.根据前述项目中任一项的酵母细胞，其中所述酵母属于选自酵母属、毕赤酵母属、耶氏酵母属、克鲁维酵母属、假丝酵母属、红酵母属、红冬孢酵母属、隐球酵母属、丝孢酵母属和油脂酵母属的属，优选地所述属是酵母属或耶氏酵母属，最优选地所述属是耶氏酵母属。

11.根据前述项目中任一项的酵母细胞，其中所述酵母属于选自酿酒酵母、毕赤酵母、马克斯克鲁维酵母、浅白隐球酵母、产油油脂酵母、斯达油脂酵母、圆红冬孢酵母、黏红酵母、普鲁兰丝孢酵母和解脂耶氏酵母的物种，优选地所述酵母细胞是酿酒酵母细胞或解脂耶氏酵母细胞，最优选地所述酵母细胞是解脂耶氏酵母细胞。

12.根据前述项目中任一项的酵母细胞，其中所述细胞：

i)表达与如SEQ ID NO:10中所示的来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶相同或具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶；并且

ii)表达与如SEQ ID NO:25中所示的来自棉铃虫的脂肪酰基-CoA还原酶相同或具有至少80％同源性的脂肪酰基-CoA还原酶；并且

iii)表达或过表达与如SEQ ID NO:21中所示的来自酿酒酵母的乙酰基转移酶相同或具有至少75％同源性的乙酰基转移酶。

13.根据前述项目中任一项的酵母细胞，其中与野生型酵母细胞相比，过表达所述乙酰基转移酶。

14.根据前述项目中任一项的酵母细胞，其中编码所述去饱和酶、所述脂肪酰基-CoA还原酶或所述乙酰基转移酶的基因包含在所述酵母细胞的基因组内或包含在所述酵母细胞内包含的一种或多种载体内。

15.根据前述项目中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还表达或过表达硫酯酶。

16.根据前述项目中任一项的酵母细胞，其中所述硫酯酶与如SEQ ID NO:23中所示的来自湿地萼距花的硫酯酶、与如SEQ ID NO:38中所示的来自萼距花的硫酯酶、与如SEQID NO:40中所示的来自香樟的硫酯酶或与如SEQ ID NO:42中所示的来自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性，优选地所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的来自香樟的硫酯酶或与如SEQ ID NO:42中所示的来自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

17.根据前述项目中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还表达具有经修饰的酮合酶结构域的脂肪酰基合酶变体，其中所述变体优选地结合较短的脂肪酸。

18.根据前述项目中任一项的酵母细胞，所述酵母细胞还具有导致一种或多种脂肪酶的活性部分或完全丧失的突变。

19.根据项目18的酵母细胞，其中所述一种或多种脂肪酶与如SEQ ID NO:72中所示的解脂耶氏酵母的脂肪酶2、如SEQ ID NO:73中所示的解脂耶氏酵母的脂肪酶7或如SEQID NO:74中所示的解脂耶氏酵母的脂肪酶8具有至少60％同源性。

20.根据项目18至19中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞是解脂耶氏酵母，并且所述一种或多种脂肪酶选自如SEQ ID NO:72中所示的脂肪酶2、如SEQ ID NO:73中所示的脂肪酶7和如SEQ ID NO:74中所示的脂肪酶8。

21.根据前述项目中任一项的酵母细胞，其中编码所述去饱和酶、所述脂肪酰基-CoA还原酶、所述乙酰基转移酶或所述硫酯酶的基因中的至少一种以高拷贝数存在。

22.根据前述项目中任一项的酵母细胞，其中编码所述去饱和酶、所述脂肪酰基-CoA还原酶、所述乙酰基转移酶或所述硫酯酶的基因中的至少一种处于诱导型启动子的控制下。

23.根据前述项目中任一项的酵母细胞，其中编码所述去饱和酶、所述脂肪酰基-CoA还原酶、所述乙酰基转移酶或所述硫酯酶的基因中的至少一种针对所述酵母细胞进行了密码子优化。

24.一种用于在酵母细胞中产生去饱和脂肪酸和任选地去饱和脂肪酰基乙酸酯的方法，所述方法包括提供酵母细胞以及在培养基中孵育所述酵母细胞的步骤，其中所述酵母细胞表达：

i)至少一种能够在碳链长为14的脂肪酰基-CoA中引入至少一个双键的异源去饱和酶，从而将至少一部分的所述脂肪酰基-CoA转化为去饱和脂肪酰基-CoA；和

ii)至少一种能够将至少一部分的所述去饱和脂肪酰基-CoA转化为去饱和脂肪醇的异源脂肪酰基-CoA还原酶，从而产生所述去饱和脂肪醇；以及

iii)任选地，能够将至少一部分的所述去饱和脂肪醇转化为去饱和脂肪酰基乙酸酯的乙酰基转移酶，从而产生所述去饱和脂肪酰基乙酸酯；

其中所述去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性。

25.根据项目24的方法，其中所述酵母细胞如项目1至23中任一项所定义。

26.根据项目24至25中任一项的方法，其中去饱和十四烷酰基-CoA与去饱和十六烷酰基-CoA的比率为至少0.1，如至少0.2、如至少0.3、如至少0.4、如至少0.5、如至少0.75、如至少1、如至少2、如至少3、如至少4、如至少5、如至少6、如至少7、如至少8、如至少9、如至少10、如至少12.5、如至少15。

27.根据项目25至26中任一项的方法，其中所述方法产生滴度为至少1mg/L如至少1.5mg/L、如至少5mg/L、如至少10mg/L、如至少25mg/L、如至少50mg/L、如至少100mg/L、如至少250mg/L、如至少500mg/L、如至少750mg/L、如至少1g/L、如至少2g/L、如至少3g/L、如至少4g/L、如至少5g/L或更高的去饱和脂肪醇。

28.根据项目25至27中任一项的方法，其中所述方法产生滴度为至少1mg/L如至少1.5mg/L、如至少5mg/L、如至少10mg/L、如至少25mg/L、如至少50mg/L、如至少100mg/L、如至少250mg/L、如至少500mg/L、如至少750mg/L、如至少1g/L、如至少2g/L、如至少3g/L、如至少4g/L、如至少5g/L或更高的链长为14的去饱和脂肪醇。

29.根据项目25至28中任一项的方法，其中所述方法产生滴度为至少1mg/L如至少1.5mg/L、如至少5mg/L、如至少10mg/L、如至少25mg/L、如至少50mg/L、如至少100mg/L、如至少250mg/L、如至少500mg/L、如至少750mg/L、如至少1g/L、如至少2g/L、如至少3g/L、如至少4g/L、如至少5g/L或更高的去饱和脂肪酰基乙酸酯。

30.根据项目25至29中任一项的方法，其中所述方法产生滴度为至少1mg/L如至少1.5mg/L、如至少5mg/L、如至少10mg/L、如至少25mg/L、如至少50mg/L、如至少100mg/L、如至少250mg/L、如至少500mg/L、如至少750mg/L、如至少1g/L、如至少2g/L、如至少3g/L、如至少4g/L、如至少5g/L或更高的链长为14的去饱和脂肪酰基乙酸酯。

31.根据项目25至30中任一项的方法，其中所述去饱和脂肪酰基乙酸酯包含至少1％如至少1.5％、如至少2％、如至少2.5％、如至少3％、如至少3.5％、如至少4％、如至少4.5％、如至少5％、如至少7.5％、如至少10％的链长为14的去饱和脂肪酰基乙酸酯。

32.根据项目25至31中任一项的方法，其中所述酵母细胞还能够表达硫酯酶。

33.根据项目25至32中任一项的方法，其中所述硫酯酶与如SEQ ID NO:23中所示的来自湿地萼距花的硫酯酶、与如SEQ ID NO:38中所示的来自萼距花的硫酯酶、与如SEQID NO:40中所示的来自香樟的硫酯酶或与如SEQ ID NO:42中所示的来自大肠杆菌的硫酯酶具有至少60％同源性。

34.根据项目25至33中任一项的方法，其还包括回收所述去饱和脂肪醇和/或去饱和脂肪酰基乙酸酯的步骤。

35.根据项目25至34中任一项的方法，其还包括将所回收的去饱和脂肪醇和/或去饱和脂肪酰基乙酸酯配制到信息素组合物中的步骤。

36.根据项目25至35中任一项的方法，其中所述信息素组合物还包含一种或多种另外的化合物，如液体或固体载体或基质。

37.一种用于修饰酵母细胞的核酸构建体，所述构建体包含：

i)编码至少一种能够在碳链长为14的脂肪酰基-CoA中引入至少一个双键的异源去饱和酶的第一多核苷酸；和

ii)编码至少一种能够将至少一部分的所述去饱和脂肪酰基-CoA转化为去饱和脂肪醇的异源脂肪酰基-CoA还原酶(FAR)的第二多核苷酸；以及

iii)任选地，编码能够将至少一部分的所述去饱和脂肪醇转化为去饱和脂肪酰基乙酸酯的乙酰基转移酶的第三多核苷酸，

其中任选地，所述第一多核苷酸、所述第二多核苷酸和/或所述第三多核苷酸处于启动子的控制下。

38.一种部件试剂盒，其包含：

a)根据项目1至24中任一项的酵母细胞和使用说明书；和/或

b)根据项目37的核酸构建体，其中所述构建体用于修饰酵母细胞；以及

c)任选地，待修饰的酵母细胞。

39.一种通过根据项目25至36中任一项的方法可获得的去饱和脂肪醇。

40.一种通过根据项目35至36中任一项的方法可获得的去饱和脂肪酰基乙酸酯。

41.根据项目1至24或39中任一项的去饱和脂肪醇的用途。

42.根据项目1至24或40中任一项的去饱和脂肪脂肪酰基乙酸酯的用途。

序列表

<110> 丹麦技术大学（Danmarks Tekniske Universitet）

<120> 在酵母中产生去饱和脂肪醇和去饱和脂肪酰基乙酸酯

<130> P4386PC00

<160> 74

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 1107

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1107)

<223> 来自天竺葵的Δ9去饱和酶的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 1

atgggcgtgc tgctgaacat ctgttcgtct cccttccccg tggtggcctc tgccgcctct 60

acctctatct ctaaggtgaa ccacatccga aaggtgggcg tgaccggcgt gatggctccc 120

cagaagatcg agatcttcaa gtctatggag gagtggggca agcacaacat cctgcccctg 180

gccaagcccg tcgagaagtc ttggcagcct accgacttcc tgcccgaccc ctcgtctgag 240

ggcttcatgg aggagtacaa cgccttcaag gagcgaactc gagagctgcc cgacgagtac 300

ttcgtggtgc tggccggcga catgatcacc gaggaggccc tgcccaccta ccagaccctg 360

gtgaaccgac ccgacgaggt ggccgacgag actggccact ctgagtctcc ctgggccgtg 420

tggtcccgag cctggaccgc cgaggagaac cgacacggcg acctgctgaa caagtacctg 480

tacctgtctg gcaagctgga catgcgacag gtcgagaaga ccatccagta cctgatcgct 540

ctgggccagg acatcggcac cgagaagaac ccctaccacc tgttcatcta cacctcgttc 600

caggagcgag ccaccttcat ctctcacgcc aacaccgcca agctggccca gcagcacggc 660

gacaagcagc tggctcagat ctgcggcacc attgccgccg acgagaagcg acatgagact 720

gcctacaccc gaatcgtgga caagctgttc gagctggacc ccgacgagac tatgtcttgc 780

ctggcccaca tgatgaagcg aaagatcacc atgcccgccc acctgatgcg agatggccga 840

gatccccacc tgttccagca cttctctgtg gtggcctccc gaaccggcgt gtacaccgtg 900

atggactaca tcaacatcct cgagcacttc gtcgagaagt ggaacatcga gaagatcacc 960

gccggactgt ctgacaaggg ccgagaggcc caggactacg tgtgcaagct gggcgagcga 1020

ctgcgaaagg tcgaggagcg agctcatcag cgagtggtgc aggccgaccc catccccttc 1080

tcttggatct tcgaccgaaa ggtgtaa 1107

<210> 2

<211> 368

<212> PRT

<213> 天竺葵

<400> 2

Met Gly Val Leu Leu Asn Ile Cys Ser Ser Pro Phe Pro Val Val Ala

1 5 10 15

Ser Ala Ala Ser Thr Ser Ile Ser Lys Val Asn His Ile Arg Lys Val

20 25 30

Gly Val Thr Gly Val Met Ala Pro Gln Lys Ile Glu Ile Phe Lys Ser

35 40 45

Met Glu Glu Trp Gly Lys His Asn Ile Leu Pro Leu Ala Lys Pro Val

50 55 60

Glu Lys Ser Trp Gln Pro Thr Asp Phe Leu Pro Asp Pro Ser Ser Glu

65 70 75 80

Gly Phe Met Glu Glu Tyr Asn Ala Phe Lys Glu Arg Thr Arg Glu Leu

85 90 95

Pro Asp Glu Tyr Phe Val Val Leu Ala Gly Asp Met Ile Thr Glu Glu

100 105 110

Ala Leu Pro Thr Tyr Gln Thr Leu Val Asn Arg Pro Asp Glu Val Ala

115 120 125

Asp Glu Thr Gly His Ser Glu Ser Pro Trp Ala Val Trp Ser Arg Ala

130 135 140

Trp Thr Ala Glu Glu Asn Arg His Gly Asp Leu Leu Asn Lys Tyr Leu

145 150 155 160

Tyr Leu Ser Gly Lys Leu Asp Met Arg Gln Val Glu Lys Thr Ile Gln

165 170 175

Tyr Leu Ile Ala Leu Gly Gln Asp Ile Gly Thr Glu Lys Asn Pro Tyr

180 185 190

His Leu Phe Ile Tyr Thr Ser Phe Gln Glu Arg Ala Thr Phe Ile Ser

195 200 205

His Ala Asn Thr Ala Lys Leu Ala Gln Gln His Gly Asp Lys Gln Leu

210 215 220

Ala Gln Ile Cys Gly Thr Ile Ala Ala Asp Glu Lys Arg His Glu Thr

225 230 235 240

Ala Tyr Thr Arg Ile Val Asp Lys Leu Phe Glu Leu Asp Pro Asp Glu

245 250 255

Thr Met Ser Cys Leu Ala His Met Met Lys Arg Lys Ile Thr Met Pro

260 265 270

Ala His Leu Met Arg Asp Gly Arg Asp Pro His Leu Phe Gln His Phe

275 280 285

Ser Val Val Ala Ser Arg Thr Gly Val Tyr Thr Val Met Asp Tyr Ile

290 295 300

Asn Ile Leu Glu His Phe Val Glu Lys Trp Asn Ile Glu Lys Ile Thr

305 310 315 320

Ala Gly Leu Ser Asp Lys Gly Arg Glu Ala Gln Asp Tyr Val Cys Lys

325 330 335

Leu Gly Glu Arg Leu Arg Lys Val Glu Glu Arg Ala His Gln Arg Val

340 345 350

Val Gln Ala Asp Pro Ile Pro Phe Ser Trp Ile Phe Asp Arg Lys Val

355 360 365

<210> 3

<211> 1191

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1191)

<223> 来自蓖麻的∆9去饱和酶的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 3

atggccctga agctgaaccc cttcctgtct caaacccaga agctgccctc tttcgccctg 60

cctcccatgg cctctacccg atctcccaag ttctacatgg cctccaccct gaagtctggc 120

tctaaggagg tcgagaacct gaagaagccc ttcatgcctc cccgagaggt gcacgtgcag 180

gtcacccact ctatgcctcc ccagaagatc gagatcttca agtctctgga caactgggcc 240

gaggagaaca tcctggtcca cctgaagccc gtcgagaagt gctggcagcc ccaggacttc 300

ctgcccgacc ccgcctctga cggcttcgac gagcaggtcc gagagctgcg agagcgagcc 360

aaggagatcc ccgacgacta cttcgtggtg ctggtgggcg acatgatcac cgaggaggcc 420

ctgcccacct accagaccgc cctgaaccga ggcgacggcg tgcgagatga gactggcgcc 480

tctcccacct cttgggccat ctggacccga gcctggaccg ctgaggagaa ccgacacggc 540

gacctgctga acaagtacct gtacctgtct ggccgagtgg acatgcgaca gatcgagaag 600

accatccagt acctgatcgg ctctggcatg gacgtgcgag tcgagaactc tccctacctg 660

ctgttcatct acacctcgtt ccaggagcga gccaccttca tctctcacgg caacaccgcc 720

cgacaggcca aggagcacgg cgacatcaag ctggcccaga tctgcggcac cattgccgcc 780

gacgagaagc gacacgagac tgcctacacc aagatcgtcg agaagctgtt cgagatcgac 840

cccgacggca ccgtgctggc cttcgccgac atgatgcgaa agaagatctc tatgcccgcc 900

cacctgatgt acgacggccg agatgacaac ctgttcgacc acttctctgc cgtggctcag 960

cgactgggcg tgtacaccgc caaggactac gccgacatcc tcgagtttct ggtgggccga 1020

tggaaggtgg acaagctgac cggcctgtct gccgagggcc agaaggccca ggactacgtc 1080

tgccgactgc ctccccgaat ccgacgactc gaggagcgag ctcagggccg agctaaggag 1140

gctcccacca tgcccttctc ttggatcttc gaccgacagg tgaagctgta a 1191

<210> 4

<211> 396

<212> PRT

<213> 蓖麻

<400> 4

Met Ala Leu Lys Leu Asn Pro Phe Leu Ser Gln Thr Gln Lys Leu Pro

1 5 10 15

Ser Phe Ala Leu Pro Pro Met Ala Ser Thr Arg Ser Pro Lys Phe Tyr

20 25 30

Met Ala Ser Thr Leu Lys Ser Gly Ser Lys Glu Val Glu Asn Leu Lys

35 40 45

Lys Pro Phe Met Pro Pro Arg Glu Val His Val Gln Val Thr His Ser

50 55 60

Met Pro Pro Gln Lys Ile Glu Ile Phe Lys Ser Leu Asp Asn Trp Ala

65 70 75 80

Glu Glu Asn Ile Leu Val His Leu Lys Pro Val Glu Lys Cys Trp Gln

85 90 95

Pro Gln Asp Phe Leu Pro Asp Pro Ala Ser Asp Gly Phe Asp Glu Gln

100 105 110

Val Arg Glu Leu Arg Glu Arg Ala Lys Glu Ile Pro Asp Asp Tyr Phe

115 120 125

Val Val Leu Val Gly Asp Met Ile Thr Glu Glu Ala Leu Pro Thr Tyr

130 135 140

Gln Thr Ala Leu Asn Arg Gly Asp Gly Val Arg Asp Glu Thr Gly Ala

145 150 155 160

Ser Pro Thr Ser Trp Ala Ile Trp Thr Arg Ala Trp Thr Ala Glu Glu

165 170 175

Asn Arg His Gly Asp Leu Leu Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Ser Gly Arg

180 185 190

Val Asp Met Arg Gln Ile Glu Lys Thr Ile Gln Tyr Leu Ile Gly Ser

195 200 205

Gly Met Asp Val Arg Val Glu Asn Ser Pro Tyr Leu Leu Phe Ile Tyr

210 215 220

Thr Ser Phe Gln Glu Arg Ala Thr Phe Ile Ser His Gly Asn Thr Ala

225 230 235 240

Arg Gln Ala Lys Glu His Gly Asp Ile Lys Leu Ala Gln Ile Cys Gly

245 250 255

Thr Ile Ala Ala Asp Glu Lys Arg His Glu Thr Ala Tyr Thr Lys Ile

260 265 270

Val Glu Lys Leu Phe Glu Ile Asp Pro Asp Gly Thr Val Leu Ala Phe

275 280 285

Ala Asp Met Met Arg Lys Lys Ile Ser Met Pro Ala His Leu Met Tyr

290 295 300

Asp Gly Arg Asp Asp Asn Leu Phe Asp His Phe Ser Ala Val Ala Gln

305 310 315 320

Arg Leu Gly Val Tyr Thr Ala Lys Asp Tyr Ala Asp Ile Leu Glu Phe

325 330 335

Leu Val Gly Arg Trp Lys Val Asp Lys Leu Thr Gly Leu Ser Ala Glu

340 345 350

Gly Gln Lys Ala Gln Asp Tyr Val Cys Arg Leu Pro Pro Arg Ile Arg

355 360 365

Arg Leu Glu Glu Arg Ala Gln Gly Arg Ala Lys Glu Ala Pro Thr Met

370 375 380

Pro Phe Ser Trp Ile Phe Asp Arg Gln Val Lys Leu

385 390 395

<210> 5

<211> 1059

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1059)

<223> 来自脐橙螟的∆9去饱和酶Atr236的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 5

atgccgcctc agggtcaaga tcgcgagtcc tgggttctgt acgagaccga cgacaagacg 60

caagatggtg gcactcacgt ggtgcctccc tccgccgaga aaagagtgtg gaaaatcgtc 120

tggaggaatg tcatcgcatt tgctctgctc cacatcggag gcgtttacgg cgcttatttg 180

ttcctcttca aagctatgtg gctgaccgat ttgtttgcgg tatttctgta cctgtgctcc 240

ggcctgggcg tcactgcggg cgcgcaccgg ctgtgggcac acaagtcgta caaggcgcgg 300

ctgcctctcc gcctgttgct tactgtcttc aacaccatag cttttcagga tgccgtgatc 360

gactgggctc gcgaccaccg cctgcaccat aagtactcgg agacggacgc cgatccccac 420

aacgcaacaa gggggttctt cttctcccac attggctggt tgctcgtcag gaaacaccca 480

caaatcaagg agaaagggcc caccatcgac ctgaacgact tgagggccga tcccgtactc 540

cacttccaga agaaatacta tttatacctt atgcccttgg catgtttcgt catgcccaca 600

ttagtaccta cactctgggg tgaatctcta tggaacgcgt atttcgtatg cgctatcttc 660

agatacatat atgttctaaa cgtcacttgg ctcgtaaact cagctgcgca cgcttgggga 720

agcaaaccgt acgacaaaaa catcaaccct gtggaaacca agcctgtatc cttggtggtc 780

cttggagaag gcttccacaa ttaccaccac actttcccgt gggattacaa gactgccgaa 840

ttaggagatt actctttaaa cttctccaaa ttattcatcg atgctatggc aaaaataggt 900

tgggcttatg acctgaaaac ggtctctcct gatgtgatcg agaagcgtgt gaagaggacg 960

ggagacggca gtcaccacgt ctggggctgg gacgacaaag acgtcccggt tgaagaaaaa 1020

gaagaagcca ccatctttaa cccttcgaaa gatgaataa 1059

<210> 6

<211> 352

<212> PRT

<213> 脐橙螟

<400> 6

Met Pro Pro Gln Gly Gln Asp Arg Glu Ser Trp Val Leu Tyr Glu Thr

1 5 10 15

Asp Asp Lys Thr Gln Asp Gly Gly Thr His Val Val Pro Pro Ser Ala

20 25 30

Glu Lys Arg Val Trp Lys Ile Val Trp Arg Asn Val Ile Ala Phe Ala

35 40 45

Leu Leu His Ile Gly Gly Val Tyr Gly Ala Tyr Leu Phe Leu Phe Lys

50 55 60

Ala Met Trp Leu Thr Asp Leu Phe Ala Val Phe Leu Tyr Leu Cys Ser

65 70 75 80

Gly Leu Gly Val Thr Ala Gly Ala His Arg Leu Trp Ala His Lys Ser

85 90 95

Tyr Lys Ala Arg Leu Pro Leu Arg Leu Leu Leu Thr Val Phe Asn Thr

100 105 110

Ile Ala Phe Gln Asp Ala Val Ile Asp Trp Ala Arg Asp His Arg Leu

115 120 125

His His Lys Tyr Ser Glu Thr Asp Ala Asp Pro His Asn Ala Thr Arg

130 135 140

Gly Phe Phe Phe Ser His Ile Gly Trp Leu Leu Val Arg Lys His Pro

145 150 155 160

Gln Ile Lys Glu Lys Gly Pro Thr Ile Asp Leu Asn Asp Leu Arg Ala

165 170 175

Asp Pro Val Leu His Phe Gln Lys Lys Tyr Tyr Leu Tyr Leu Met Pro

180 185 190

Leu Ala Cys Phe Val Met Pro Thr Leu Val Pro Thr Leu Trp Gly Glu

195 200 205

Ser Leu Trp Asn Ala Tyr Phe Val Cys Ala Ile Phe Arg Tyr Ile Tyr

210 215 220

Val Leu Asn Val Thr Trp Leu Val Asn Ser Ala Ala His Ala Trp Gly

225 230 235 240

Ser Lys Pro Tyr Asp Lys Asn Ile Asn Pro Val Glu Thr Lys Pro Val

245 250 255

Ser Leu Val Val Leu Gly Glu Gly Phe His Asn Tyr His His Thr Phe

260 265 270

Pro Trp Asp Tyr Lys Thr Ala Glu Leu Gly Asp Tyr Ser Leu Asn Phe

275 280 285

Ser Lys Leu Phe Ile Asp Ala Met Ala Lys Ile Gly Trp Ala Tyr Asp

290 295 300

Leu Lys Thr Val Ser Pro Asp Val Ile Glu Lys Arg Val Lys Arg Thr

305 310 315 320

Gly Asp Gly Ser His His Val Trp Gly Trp Asp Asp Lys Asp Val Pro

325 330 335

Val Glu Glu Lys Glu Glu Ala Thr Ile Phe Asn Pro Ser Lys Asp Glu

340 345 350

<210> 7

<211> 1059

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1059)

<223> 来自脐橙螟的∆9去饱和酶Atr1432的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 7

atggctccaa atgccacaga tgctaatggg gttctgtttg agacggatgc agctacccca 60

gacctggccc tacctcacgc ccctgtacag caagcggaca attaccctaa aaaatatgtg 120

tggagaaata taatattatt tgcctatctc cacattgctg cactctatgg tggctacttg 180

ttcttgttcc atgctaaatg gcagacagat atatttgctt acattctgta tgtgatgtca 240

ggcttgggaa taacggcagg agcccatcgt ctgtgggccc acaagtccta caaagctaaa 300

tggccactca gattgatact tgtcatcttt aacactctgg cattccagga ctctgcaatc 360

gactggtctc gcgaccaccg aatgcaccac aaatactcgg aaactgatgc tgatccccac 420

aacgcgaccc gcggtttctt cttctcccac attggctggc tgctggttag gaagcaccct 480

gaacttaaga ggaaaggcaa aggtctggac cttagtgact tatatgctga ccccattttg 540

agattccaaa agaagtacta cttgatcctg atgcccctca cttgcttcgt gttacctacg 600

gtcatccccg tgtattactg gggcgagact tggaccaacg ccttcttcgt ggccgctctt 660

ttccggtatg ccttcatcct taacgtcacc tggctggtca attctgctgc tcacaagtgg 720

ggcgataagc cttacgatag aaacatcaag ccttcggaaa atatttccgt ctccatgttc 780

gcgctcggag aaggcttcca caactaccac catactttcc cctgggacta caagaccgcg 840

gaacttggca acaacatgct caatttcacg actaacttca tcaatttctt tgctaaaatc 900

ggttgggcgt acgatctgaa aactgtttcc gatgaaattg ttaggagccg cgctaagaga 960

acaggagatg gttctcacca tctatggggc tggggtgata aggatcactc tcgtgaggaa 1020

atggccgccg ctataaggat acacccgaaa gatgactag 1059

<210> 8

<211> 352

<212> PRT

<213> 脐橙螟

<400> 8

Met Ala Pro Asn Ala Thr Asp Ala Asn Gly Val Leu Phe Glu Thr Asp

1 5 10 15

Ala Ala Thr Pro Asp Leu Ala Leu Pro His Ala Pro Val Gln Gln Ala

20 25 30

Asp Asn Tyr Pro Lys Lys Tyr Val Trp Arg Asn Ile Ile Leu Phe Ala

35 40 45

Tyr Leu His Ile Ala Ala Leu Tyr Gly Gly Tyr Leu Phe Leu Phe His

50 55 60

Ala Lys Trp Gln Thr Asp Ile Phe Ala Tyr Ile Leu Tyr Val Met Ser

65 70 75 80

Gly Leu Gly Ile Thr Ala Gly Ala His Arg Leu Trp Ala His Lys Ser

85 90 95

Tyr Lys Ala Lys Trp Pro Leu Arg Leu Ile Leu Val Ile Phe Asn Thr

100 105 110

Leu Ala Phe Gln Asp Ser Ala Ile Asp Trp Ser Arg Asp His Arg Met

115 120 125

His His Lys Tyr Ser Glu Thr Asp Ala Asp Pro His Asn Ala Thr Arg

130 135 140

Gly Phe Phe Phe Ser His Ile Gly Trp Leu Leu Val Arg Lys His Pro

145 150 155 160

Glu Leu Lys Arg Lys Gly Lys Gly Leu Asp Leu Ser Asp Leu Tyr Ala

165 170 175

Asp Pro Ile Leu Arg Phe Gln Lys Lys Tyr Tyr Leu Ile Leu Met Pro

180 185 190

Leu Thr Cys Phe Val Leu Pro Thr Val Ile Pro Val Tyr Tyr Trp Gly

195 200 205

Glu Thr Trp Thr Asn Ala Phe Phe Val Ala Ala Leu Phe Arg Tyr Ala

210 215 220

Phe Ile Leu Asn Val Thr Trp Leu Val Asn Ser Ala Ala His Lys Trp

225 230 235 240

Gly Asp Lys Pro Tyr Asp Arg Asn Ile Lys Pro Ser Glu Asn Ile Ser

245 250 255

Val Ser Met Phe Ala Leu Gly Glu Gly Phe His Asn Tyr His His Thr

260 265 270

Phe Pro Trp Asp Tyr Lys Thr Ala Glu Leu Gly Asn Asn Met Leu Asn

275 280 285

Phe Thr Thr Asn Phe Ile Asn Phe Phe Ala Lys Ile Gly Trp Ala Tyr

290 295 300

Asp Leu Lys Thr Val Ser Asp Glu Ile Val Arg Ser Arg Ala Lys Arg

305 310 315 320

Thr Gly Asp Gly Ser His His Leu Trp Gly Trp Gly Asp Lys Asp His

325 330 335

Ser Arg Glu Glu Met Ala Ala Ala Ile Arg Ile His Pro Lys Asp Asp

340 345 350

<210> 9

<211> 1086

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1086)

<223> 来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶Dmd9的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 9

atggctccat actctagaat ctaccaccaa gataagtcct ctagagaaac tggtgttttg 60

ttcgaagatg atgctcaaac cgttgattct gatttgacta ccgatagatt ccaattgaag 120

agagccgaaa aaagaagatt gccattggtt tggagaaaca tcatcttgtt cgctttggtt 180

catttggctg ccttgtatgg tttacattcc attttcacta gagctaagtt ggctactact 240

ttgtttgctg ctggtttgta cattatcggt atgttgggtg ttactgctgg tgctcataga 300

ttgtgggctc atagaactta caaagctaaa tggcctttga gattgttgtt ggtcatcttc 360

aacaccattg ctttccaaga tgctgtttat cattgggcca gagatcatag agttcatcac 420

aaatactctg aaaccgatgc tgatccacat aatgctacta gaggtttctt cttctctcat 480

gttggttggt tgttgtgcaa gaaacaccca gatatcaaag aaaagggtag aggtttggat 540

ttgtccgatt tgagagctga tccaatcttg atgtttcaaa gaaagcacta ctacatcttg 600

atgccattgg cttgttttgt tttgccaacc gttattccaa tggtctactg gaacgaaact 660

ttggcttctt cttggtttgt tgctactatg ttcagatggt gcttccaatt gaatatgacc 720

tggttggtta attccgctgc tcataagttt ggtaatagac catacgataa gaccatgaac 780

ccaactcaaa atgctttcgt ttctgctttc acttttggtg aaggttggca taattaccat 840

catgcttttc catgggatta caagactgct gaatggggtt gttactcttt gaacattact 900

accgccttca ttgatttgtt cgctaaaatt ggttgggcct acgatttgaa aactgttgct 960

ccagatgtta tccaaagaag agttttgaga actggtgatg gttctcatga attgtggggt 1020

tggggtgata aggatttgac cgctgaagat gctagaaacg ttttgttggt tgacaagtcc 1080

agataa 1086

<210> 10

<211> 361

<212> PRT

<213> 黑腹果蝇

<400> 10

Met Ala Pro Tyr Ser Arg Ile Tyr His Gln Asp Lys Ser Ser Arg Glu

1 5 10 15

Thr Gly Val Leu Phe Glu Asp Asp Ala Gln Thr Val Asp Ser Asp Leu

20 25 30

Thr Thr Asp Arg Phe Gln Leu Lys Arg Ala Glu Lys Arg Arg Leu Pro

35 40 45

Leu Val Trp Arg Asn Ile Ile Leu Phe Ala Leu Val His Leu Ala Ala

50 55 60

Leu Tyr Gly Leu His Ser Ile Phe Thr Arg Ala Lys Leu Ala Thr Thr

65 70 75 80

Leu Phe Ala Ala Gly Leu Tyr Ile Ile Gly Met Leu Gly Val Thr Ala

85 90 95

Gly Ala His Arg Leu Trp Ala His Arg Thr Tyr Lys Ala Lys Trp Pro

100 105 110

Leu Arg Leu Leu Leu Val Ile Phe Asn Thr Ile Ala Phe Gln Asp Ala

115 120 125

Val Tyr His Trp Ala Arg Asp His Arg Val His His Lys Tyr Ser Glu

130 135 140

Thr Asp Ala Asp Pro His Asn Ala Thr Arg Gly Phe Phe Phe Ser His

145 150 155 160

Val Gly Trp Leu Leu Cys Lys Lys His Pro Asp Ile Lys Glu Lys Gly

165 170 175

Arg Gly Leu Asp Leu Ser Asp Leu Arg Ala Asp Pro Ile Leu Met Phe

180 185 190

Gln Arg Lys His Tyr Tyr Ile Leu Met Pro Leu Ala Cys Phe Val Leu

195 200 205

Pro Thr Val Ile Pro Met Val Tyr Trp Asn Glu Thr Leu Ala Ser Ser

210 215 220

Trp Phe Val Ala Thr Met Phe Arg Trp Cys Phe Gln Leu Asn Met Thr

225 230 235 240

Trp Leu Val Asn Ser Ala Ala His Lys Phe Gly Asn Arg Pro Tyr Asp

245 250 255

Lys Thr Met Asn Pro Thr Gln Asn Ala Phe Val Ser Ala Phe Thr Phe

260 265 270

Gly Glu Gly Trp His Asn Tyr His His Ala Phe Pro Trp Asp Tyr Lys

275 280 285

Thr Ala Glu Trp Gly Cys Tyr Ser Leu Asn Ile Thr Thr Ala Phe Ile

290 295 300

Asp Leu Phe Ala Lys Ile Gly Trp Ala Tyr Asp Leu Lys Thr Val Ala

305 310 315 320

Pro Asp Val Ile Gln Arg Arg Val Leu Arg Thr Gly Asp Gly Ser His

325 330 335

Glu Leu Trp Gly Trp Gly Asp Lys Asp Leu Thr Ala Glu Asp Ala Arg

340 345 350

Asn Val Leu Leu Val Asp Lys Ser Arg

355 360

<210> 11

<211> 1062

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1062)

<223> 来自斜纹夜蛾的∆9去饱和酶Des11的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 11

atggctccca acatctctga ggacgtgaac ggcgtgctgt tcgagtctga cgccgctact 60

cccgacctgg ctctggcccg acctcctgtg cagaaggccg acaacaagcc caagcagctg 120

gtgtggcgaa acatcatcct gttcgcctac ctgcacctgg ccgctctgta cggcggctac 180

ctgttcctgt tctctgccaa gtggcagacc gacatcttcg cctacatcct gtacgtgatc 240

tctggcctgg gcatcaccgc tggcgcccac cgactgtggg ctcacaagtc ttacaaggct 300

aagtggcccc tgaaggtgat cctgatcatc ttcaacaccg tggccttcca ggacgccgcc 360

atggactggg cccgagatca ccgaatgcac cacaagtact ctgagactga cgctgaccct 420

cacaacgcta cccgaggctt cttcttctct cacatcggct ggctgctggt gcgaaagcac 480

cccgacctga aggaaaaggg caagggcctc gacatgtctg acctgctggc tgaccccgtg 540

ctgcgattcc agaagaagta ctacctgctg ctgatgcccc tggcctgctt cgtcatgccc 600

accgtgattc ccgtgtacct gtggggcgag acttggacca acgccttctt cgtggccgcc 660

atgttccgat acgccttcat tctgaacgtg acctggctgg tgaactctgc tgcccacaag 720

tggggcgaca agccctacga caagtctatc aagccctctg agaacatgtc tgtggccatg 780

ttcgccctcg gcgagggatt ccacaactac caccacacat tcccttggga ctacaagacc 840

gccgagttcg gcaacaacaa gctgaacttc actaccgcct tcatcaactt tttcgccaag 900

atcggctggg cttacgacat gaagaccgtg tctgaggaca tcgtgaagaa ccgagtgaag 960

cgaaccggcg acggctctca ccacctctgg ggctggggcg acgagaacca gcctaaggaa 1020

gagatcgagg ccgccatccg aatcaacccc aaggacgact aa 1062

<210> 12

<211> 353

<212> PRT

<213> 斜纹夜蛾

<400> 12

Met Ala Pro Asn Ile Ser Glu Asp Val Asn Gly Val Leu Phe Glu Ser

1 5 10 15

Asp Ala Ala Thr Pro Asp Leu Ala Leu Ala Arg Pro Pro Val Gln Lys

20 25 30

Ala Asp Asn Lys Pro Lys Gln Leu Val Trp Arg Asn Ile Ile Leu Phe

35 40 45

Ala Tyr Leu His Leu Ala Ala Leu Tyr Gly Gly Tyr Leu Phe Leu Phe

50 55 60

Ser Ala Lys Trp Gln Thr Asp Ile Phe Ala Tyr Ile Leu Tyr Val Ile

65 70 75 80

Ser Gly Leu Gly Ile Thr Ala Gly Ala His Arg Leu Trp Ala His Lys

85 90 95

Ser Tyr Lys Ala Lys Trp Pro Leu Lys Val Ile Leu Ile Ile Phe Asn

100 105 110

Thr Val Ala Phe Gln Asp Ala Ala Met Asp Trp Ala Arg Asp His Arg

115 120 125

Met His His Lys Tyr Ser Glu Thr Asp Ala Asp Pro His Asn Ala Thr

130 135 140

Arg Gly Phe Phe Phe Ser His Ile Gly Trp Leu Leu Val Arg Lys His

145 150 155 160

Pro Asp Leu Lys Glu Lys Gly Lys Gly Leu Asp Met Ser Asp Leu Leu

165 170 175

Ala Asp Pro Val Leu Arg Phe Gln Lys Lys Tyr Tyr Leu Leu Leu Met

180 185 190

Pro Leu Ala Cys Phe Val Met Pro Thr Val Ile Pro Val Tyr Leu Trp

195 200 205

Gly Glu Thr Trp Thr Asn Ala Phe Phe Val Ala Ala Met Phe Arg Tyr

210 215 220

Ala Phe Ile Leu Asn Val Thr Trp Leu Val Asn Ser Ala Ala His Lys

225 230 235 240

Trp Gly Asp Lys Pro Tyr Asp Lys Ser Ile Lys Pro Ser Glu Asn Met

245 250 255

Ser Val Ala Met Phe Ala Leu Gly Glu Gly Phe His Asn Tyr His His

260 265 270

Thr Phe Pro Trp Asp Tyr Lys Thr Ala Glu Phe Gly Asn Asn Lys Leu

275 280 285

Asn Phe Thr Thr Ala Phe Ile Asn Phe Phe Ala Lys Ile Gly Trp Ala

290 295 300

Tyr Asp Met Lys Thr Val Ser Glu Asp Ile Val Lys Asn Arg Val Lys

305 310 315 320

Arg Thr Gly Asp Gly Ser His His Leu Trp Gly Trp Gly Asp Glu Asn

325 330 335

Gln Pro Lys Glu Glu Ile Glu Ala Ala Ile Arg Ile Asn Pro Lys Asp

340 345 350

Asp

<210> 13

<211> 1050

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1050)

<223> 来自Chauliognathus lugubris的Δ9去饱和酶Cld9的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 13

atggctccca actctaacga cgccaccggc gtgctgcaag agactgacga cgacgtgtcc 60

tctaaccagg tcctgcagca gatcaccaag tctgagaagt ctaagctgat catcgtgtgg 120

tctaacgtga tgtacttcgt gatcctgcac gtgggcgccc tgtacggcct gtggctgctg 180

ctgacctctg ctcagatctg gacctgcctg tgggtgttcg ccatgtacga gttcggcgag 240

atctgcatca ccgctggcgt gcaccgactg tggtcccacc gatcttacaa ggccaagtgg 300

cccctgcgac tgttccacac catgggacag accctggcct tccaggacgc cgtggtggac 360

tgggcccgag atcaccgagt gcaccacaag tactctgaaa ccgacgctga ccctcacaac 420

gccaagcgag gcttcttctt ctctcacatg ggctggctga tgtgccgaaa gtccaagcag 480

gtcaaggaaa agggcaagga acccgacatc tctgacctgt acgctgatcc catcctgcga 540

taccaaaaga agtactacat gctgttcatg cccctgatgt gcttcgcttt ccccaccgtg 600

gtgcccctgt acttctggaa cgagtctctc aagaccgcct tcttcgtgaa catcttccgg 660

tacatcttct ccctgcacgc cacctggctg gtgaactctg ccgctcacct ctacggcgag 720

aagccctaca acaagcacat taaccccgcc gagaacctgg ccgtgtctct gatcgtgaac 780

ggcgaacgat ggcacaacta ccaccacaca ttcccttggg actacaaggc cggcgagttc 840

ggacgatacg gcaccaacct gaccaccgtg ttcatcaacg ccatggccaa gatcggcctg 900

gcctacgacc tgaagttcgt gcccgaggac gtggtgaagc gacgagtgca caagaccggc 960

gacggctctc acgccgtgtg gggctggggc gacaaggacc agaccgtgga agagatttct 1020

aagaccatcg tggcctacaa ccagtcttaa 1050

<210> 14

<211> 349

<212> PRT

<213> Chauliognathus lugubris

<400> 14

Met Ala Pro Asn Ser Asn Asp Ala Thr Gly Val Leu Gln Glu Thr Asp

1 5 10 15

Asp Asp Val Ser Ser Asn Gln Val Leu Gln Gln Ile Thr Lys Ser Glu

20 25 30

Lys Ser Lys Leu Ile Ile Val Trp Ser Asn Val Met Tyr Phe Val Ile

35 40 45

Leu His Val Gly Ala Leu Tyr Gly Leu Trp Leu Leu Leu Thr Ser Ala

50 55 60

Gln Ile Trp Thr Cys Leu Trp Val Phe Ala Met Tyr Glu Phe Gly Glu

65 70 75 80

Ile Cys Ile Thr Ala Gly Val His Arg Leu Trp Ser His Arg Ser Tyr

85 90 95

Lys Ala Lys Trp Pro Leu Arg Leu Phe His Thr Met Gly Gln Thr Leu

100 105 110

Ala Phe Gln Asp Ala Val Val Asp Trp Ala Arg Asp His Arg Val His

115 120 125

His Lys Tyr Ser Glu Thr Asp Ala Asp Pro His Asn Ala Lys Arg Gly

130 135 140

Phe Phe Phe Ser His Met Gly Trp Leu Met Cys Arg Lys Ser Lys Gln

145 150 155 160

Val Lys Glu Lys Gly Lys Glu Pro Asp Ile Ser Asp Leu Tyr Ala Asp

165 170 175

Pro Ile Leu Arg Tyr Gln Lys Lys Tyr Tyr Met Leu Phe Met Pro Leu

180 185 190

Met Cys Phe Ala Phe Pro Thr Val Val Pro Leu Tyr Phe Trp Asn Glu

195 200 205

Ser Leu Lys Thr Ala Phe Phe Val Asn Ile Phe Arg Tyr Ile Phe Ser

210 215 220

Leu His Ala Thr Trp Leu Val Asn Ser Ala Ala His Leu Tyr Gly Glu

225 230 235 240

Lys Pro Tyr Asn Lys His Ile Asn Pro Ala Glu Asn Leu Ala Val Ser

245 250 255

Leu Ile Val Asn Gly Glu Arg Trp His Asn Tyr His His Thr Phe Pro

260 265 270

Trp Asp Tyr Lys Ala Gly Glu Phe Gly Arg Tyr Gly Thr Asn Leu Thr

275 280 285

Thr Val Phe Ile Asn Ala Met Ala Lys Ile Gly Leu Ala Tyr Asp Leu

290 295 300

Lys Phe Val Pro Glu Asp Val Val Lys Arg Arg Val His Lys Thr Gly

305 310 315 320

Asp Gly Ser His Ala Val Trp Gly Trp Gly Asp Lys Asp Gln Thr Val

325 330 335

Glu Glu Ile Ser Lys Thr Ile Val Ala Tyr Asn Gln Ser

340 345

<210> 15

<211> 909

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(909)

<223> 来自赤拟谷盗的去饱和酶D6的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 15

atgttcctgc gaaccatcac ctctaagttc tactctgacc agatcgtgtg gcgaaacgtg 60

ttcctgctgc tgatcctgca catcatctcc ctgcaaggct ggtacttcgt gctgaccacc 120

accaactggc ccactctgat ctacggcttc atcttcggcg ccctgaccgg ccagggaatc 180

aagctgggag cccaccgact gtgggctcac cgatgctaca aggccaagct gcccctgcga 240

atcttcctgt gcttcctgca gaccgtgact ctgcagaacc ctctgtacga gtgggtgcga 300

gatcaccagg tgcaccacaa gtacaccgac accaacgctg accctctgaa cgctacccga 360

ggcttcttct tctctcacat gggctggctg ctggtgcgaa agcaccccaa cgtgatcgcc 420

aagggcaaga ccctggacct gtctgacctg gaagaggacc ccgtggtgat gttccagaag 480

aagtactaca agatcattgc ccctgtgctg accctggcta tccccgctct gatcccctgg 540

tactttttcg gcgaggacct gtacctgtct tgggtgacca cctgtgtgct gccctacttc 600

atcaccctgc actctacctg ggccgtgaac tctgtggccc acatctgggg caccaagcct 660

tacaacaaga acattctgcc caccgagaac attgccgtgg ccattgtggc ctacggcgaa 720

ggctggcaca actaccacca cgtgttccct tgggactaca aggctgccga gctgggcaac 780

taccgaccta acctgtctac cgccttcatc gacttcatgg ccaagatcgc ctgggcctac 840

gacctgaagt ctgtgtctcc cgagatgctg cgaaagcgaa agatgcgaac cggcgactgc 900

gactactaa 909

<210> 16

<211> 302

<212> PRT

<213> 赤拟谷盗

<400> 16

Met Phe Leu Arg Thr Ile Thr Ser Lys Phe Tyr Ser Asp Gln Ile Val

1 5 10 15

Trp Arg Asn Val Phe Leu Leu Leu Ile Leu His Ile Ile Ser Leu Gln

20 25 30

Gly Trp Tyr Phe Val Leu Thr Thr Thr Asn Trp Pro Thr Leu Ile Tyr

35 40 45

Gly Phe Ile Phe Gly Ala Leu Thr Gly Gln Gly Ile Lys Leu Gly Ala

50 55 60

His Arg Leu Trp Ala His Arg Cys Tyr Lys Ala Lys Leu Pro Leu Arg

65 70 75 80

Ile Phe Leu Cys Phe Leu Gln Thr Val Thr Leu Gln Asn Pro Leu Tyr

85 90 95

Glu Trp Val Arg Asp His Gln Val His His Lys Tyr Thr Asp Thr Asn

100 105 110

Ala Asp Pro Leu Asn Ala Thr Arg Gly Phe Phe Phe Ser His Met Gly

115 120 125

Trp Leu Leu Val Arg Lys His Pro Asn Val Ile Ala Lys Gly Lys Thr

130 135 140

Leu Asp Leu Ser Asp Leu Glu Glu Asp Pro Val Val Met Phe Gln Lys

145 150 155 160

Lys Tyr Tyr Lys Ile Ile Ala Pro Val Leu Thr Leu Ala Ile Pro Ala

165 170 175

Leu Ile Pro Trp Tyr Phe Phe Gly Glu Asp Leu Tyr Leu Ser Trp Val

180 185 190

Thr Thr Cys Val Leu Pro Tyr Phe Ile Thr Leu His Ser Thr Trp Ala

195 200 205

Val Asn Ser Val Ala His Ile Trp Gly Thr Lys Pro Tyr Asn Lys Asn

210 215 220

Ile Leu Pro Thr Glu Asn Ile Ala Val Ala Ile Val Ala Tyr Gly Glu

225 230 235 240

Gly Trp His Asn Tyr His His Val Phe Pro Trp Asp Tyr Lys Ala Ala

245 250 255

Glu Leu Gly Asn Tyr Arg Pro Asn Leu Ser Thr Ala Phe Ile Asp Phe

260 265 270

Met Ala Lys Ile Ala Trp Ala Tyr Asp Leu Lys Ser Val Ser Pro Glu

275 280 285

Met Leu Arg Lys Arg Lys Met Arg Thr Gly Asp Cys Asp Tyr

290 295 300

<210> 17

<211> 1170

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1170)

<223> 来自赤拟谷盗的去饱和酶D8的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 17

atggctccca acctgctggg caactctacc ctgttcctgg ccgagactaa ctctgctgag 60

cccatccaga tcatctctaa gcccggcctg caggacgtgc tgccccaggt gaagccccag 120

atctcttctc gatcttctgt gtctcagtac cgatggcaga tcgtgtggcg aaacgtgctg 180

atcttcatct acctgcacat tgccggcatc tacggcctgt actacgccat tgctcaggcc 240

cagtggaaga ccctgctgtg gggctacctg gtgatcctgg cctctggcat cggcgtgacc 300

gctggcgccc accgactgtg ggctcaccga acctacaagg ccaagctgcc cctgcgaatc 360

tacctggcct tctgccagac cgtggctctg cagaacgaca tctacgagtg ggtgcgagat 420

caccgagtgc accacaagtt caccgacacc gacgctgacc ctcacaactc taaccgaggc 480

ttcttcttct ctcacatggg ctggctgctg gtgaagaagc acaaggacgt tttcgtgaag 540

ggcaagaccg tggacatgtc tgacgtcgag gctgaccccg tggtgcgatt ccagcgaaag 600

tactacatca ttctgacccc tatcctgacc ttcgtgttcc ccgctatcgt gccctggtac 660

ttctggaacg agactcccac cgtgtgcttc tactctgtgg ccatcttccg atatatcctg 720

actctgcacg gcacctggct ggtgaactct gccgctcaca tctggggata ccgaccttac 780

gacaagaaca tcaacgccac cgagaacaag tctgtgtcta ttctggcctt cggcgaagga 840

tggcacaact accaccacgt gttcccttgg gactacaagg ctgccgagct gggaaactac 900

cgaatgaact tcaccaccgc ctttctggac ctgatgtcta agatcggcca ggcctacgac 960

ctcaagactg tgtctgtgga catgatcaac aagcgacgaa agcgaaccgg cgacggaacc 1020

ggcctggtgg acgaggaact gctcgagaac gaggacaagc accaccacca tcacgacgac 1080

tctatttggg gctggggcga caaggacatg aagcaggacg acatggacat ggtccaggtg 1140

cacaaccctt ctcgagagaa gttcgactaa 1170

<210> 18

<211> 389

<212> PRT

<213> 赤拟谷盗

<400> 18

Met Ala Pro Asn Leu Leu Gly Asn Ser Thr Leu Phe Leu Ala Glu Thr

1 5 10 15

Asn Ser Ala Glu Pro Ile Gln Ile Ile Ser Lys Pro Gly Leu Gln Asp

20 25 30

Val Leu Pro Gln Val Lys Pro Gln Ile Ser Ser Arg Ser Ser Val Ser

35 40 45

Gln Tyr Arg Trp Gln Ile Val Trp Arg Asn Val Leu Ile Phe Ile Tyr

50 55 60

Leu His Ile Ala Gly Ile Tyr Gly Leu Tyr Tyr Ala Ile Ala Gln Ala

65 70 75 80

Gln Trp Lys Thr Leu Leu Trp Gly Tyr Leu Val Ile Leu Ala Ser Gly

85 90 95

Ile Gly Val Thr Ala Gly Ala His Arg Leu Trp Ala His Arg Thr Tyr

100 105 110

Lys Ala Lys Leu Pro Leu Arg Ile Tyr Leu Ala Phe Cys Gln Thr Val

115 120 125

Ala Leu Gln Asn Asp Ile Tyr Glu Trp Val Arg Asp His Arg Val His

130 135 140

His Lys Phe Thr Asp Thr Asp Ala Asp Pro His Asn Ser Asn Arg Gly

145 150 155 160

Phe Phe Phe Ser His Met Gly Trp Leu Leu Val Lys Lys His Lys Asp

165 170 175

Val Phe Val Lys Gly Lys Thr Val Asp Met Ser Asp Val Glu Ala Asp

180 185 190

Pro Val Val Arg Phe Gln Arg Lys Tyr Tyr Ile Ile Leu Thr Pro Ile

195 200 205

Leu Thr Phe Val Phe Pro Ala Ile Val Pro Trp Tyr Phe Trp Asn Glu

210 215 220

Thr Pro Thr Val Cys Phe Tyr Ser Val Ala Ile Phe Arg Tyr Ile Leu

225 230 235 240

Thr Leu His Gly Thr Trp Leu Val Asn Ser Ala Ala His Ile Trp Gly

245 250 255

Tyr Arg Pro Tyr Asp Lys Asn Ile Asn Ala Thr Glu Asn Lys Ser Val

260 265 270

Ser Ile Leu Ala Phe Gly Glu Gly Trp His Asn Tyr His His Val Phe

275 280 285

Pro Trp Asp Tyr Lys Ala Ala Glu Leu Gly Asn Tyr Arg Met Asn Phe

290 295 300

Thr Thr Ala Phe Leu Asp Leu Met Ser Lys Ile Gly Gln Ala Tyr Asp

305 310 315 320

Leu Lys Thr Val Ser Val Asp Met Ile Asn Lys Arg Arg Lys Arg Thr

325 330 335

Gly Asp Gly Thr Gly Leu Val Asp Glu Glu Leu Leu Glu Asn Glu Asp

340 345 350

Lys His His His His His Asp Asp Ser Ile Trp Gly Trp Gly Asp Lys

355 360 365

Asp Met Lys Gln Asp Asp Met Asp Met Val Gln Val His Asn Pro Ser

370 375 380

Arg Glu Lys Phe Asp

385

<210> 19

<211> 1578

<212> DNA

<213> 酿酒酵母

<400> 19

atgaatgaaa tcgatgagaa aaatcaggcc cccgtgcaac aagaatgcct gaaagagatg 60

attcagaatg ggcatgctcg gcgtatggga tctgttgaag atctgtatgt tgctctcaac 120

agacaaaact tatatcgaaa cttctgcaca tatggagaat tgagtgatta ctgtactagg 180

gatcagctca cattagcttt gagggaaatc tgcctgaaaa atccaactct tttacatatt 240

gttctaccaa caagatggcc aaatcatgaa aattattatc gcagttccga atactattca 300

cggccacatc cagtgcatga ttatatttca gtattacaag aattgaaact gagtggtgtg 360

gttctcaatg aacaacctga gtacagtgca gtaatgaagc aaatattaga agaattcaaa 420

aatagtaagg gttcctatac tgcaaaaatt tttaaactta ctaccacttt gactattcct 480

tactttggac caacaggacc gagttggcgg ctaatttgtc ttccagaaga gcacacagaa 540

aagtggaaaa aatttatctt tgtatctaat cattgcatgt ctgatggtcg gtcttcgatc 600

cacttttttc atgatttaag agacgaatta aataatatta aaactccacc aaaaaaatta 660

gattacattt tcaagtacga ggaggattac caattattga ggaaacttcc agaaccgatc 720

gaaaaggtga tagactttag accaccgtac ttgtttattc cgaagtcact tctttcgggt 780

ttcatctaca atcatttgag attttcttca aaaggtgtct gtatgagaat ggatgatgtg 840

gaaaaaaccg atgatgttgt caccgagatc atcaatattt caccaacaga atttcaagcg 900

attaaagcaa atattaaatc aaatatccaa ggtaagtgta ctatcactcc gtttttacat 960

gtttgttggt ttgtatctct tcataaatgg ggtaaatttt tcaaaccatt gaacttcgaa 1020

tggcttacgg atatttttat ccccgcagat tgccgctcac aactaccaga tgatgatgaa 1080

atgagacaga tgtacagata tggcgctaac gttggattta ttgacttcac cccctggata 1140

agcgaatttg acatgaatga taacaaagaa aatttttggc cacttattga gcactaccat 1200

gaagtaattt cggaagcttt aagaaataaa aagcatctcc atggcttagg gttcaatata 1260

caaggcttcg ttcaaaaata tgtgaacatt gacaaggtaa tgtgcgatcg tgccatcggg 1320

aaaagacgcg gaggtacatt gttaagcaat gtaggtctgt ttaatcagtt agaggagccc 1380

gatgccaaat attctatatg cgatttggca tttggccaat ttcaaggatc ctggcaccaa 1440

gcattttcct tgggtgtttg ttcgactaat gtaaagggga tgaatattgt tgttgcttca 1500

acaaagaatg ttgttggtag tcaagaatct ctcgaagagc tttgctccat ttacaaagct 1560

ctccttttag gcccttag 1578

<210> 20

<211> 1578

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1578)

<223> 来自酿酒酵母的醇乙酰基转移酶ATF1的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 20

atgaacgaga tcgacgagaa gaaccaggct cctgtgcagc aagagtgcct gaaggaaatg 60

atccagaacg gacacgcccg acgaatgggc tctgtcgagg acctgtacgt ggccctgaac 120

cgacagaacc tgtaccgaaa cttctgcacc tacggcgagc tgtctgacta ctgcacccga 180

gatcagctga ccctggctct gcgagagatc tgcctgaaga accctactct gctgcatatc 240

gtgctgccca ctcgatggcc caaccacgag aactactacc gatcttctga gtactactct 300

cgaccccatc ctgtgcacga ctacatctcc gtgctgcaag agctgaagct gtctggcgtg 360

gtgctgaacg agcagcccga gtactctgcc gtgatgaagc agatcctgga agagttcaag 420

aactctaagg gctcttacac cgccaagatc ttcaagctga ctactaccct gaccattcct 480

tacttcggcc ccactggacc ctcttggcga ctgatctgtc tgcccgagga acacaccgag 540

aagtggaaga agttcatctt cgtttctaac cactgcatgt ctgacggacg atcctctatc 600

cacttctttc acgacctgcg agatgagctg aacaacatca agacccctcc aaagaagctg 660

gactacattt tcaagtacga agaggactac cagctgctgc gaaagctgcc cgagcctatc 720

gagaaggtga tcgacttccg acctccttac ctgttcatcc ccaagtctct gctgtctgga 780

ttcatctaca accacctccg attctcttcg aagggcgtgt gcatgcgaat ggacgacgtg 840

gaaaagaccg acgacgttgt gaccgagatc atcaacatct ctcccaccga gttccaggcc 900

atcaaggcca acattaagtc taacatccag ggcaagtgta ccatcactcc ctttctgcac 960

gtgtgctggt tcgtgtctct gcacaagtgg ggcaagttct ttaagcccct gaacttcgag 1020

tggctgaccg acatcttcat ccccgccgac tgccgatctc agctgcctga cgacgacgag 1080

atgcgacaga tgtaccgata cggcgccaac gtgggcttca tcgacttcac cccttggatc 1140

tctgagttcg acatgaacga caacaaggaa aacttctggc ccctgatcga gcactaccac 1200

gaggtgattt ctgaggccct gcgaaacaag aagcacctcc acggcctggg cttcaacatt 1260

cagggcttcg tccagaagta cgtcaacatt gacaaggtga tgtgcgaccg agccatcggc 1320

aagcgacgag gcggcaccct gctgtctaac gtgggcctgt tcaaccagct cgaggaaccc 1380

gacgccaagt actctatctg cgacctggcc ttcggccagt tccaaggctc ttggcaccag 1440

gctttctccc tgggcgtgtg ttctaccaac gtgaagggca tgaacatcgt ggtggcctct 1500

accaagaacg tggtgggctc tcaagagtct ctggaagaac tgtgctctat ctacaaggcc 1560

ctgctgctgg gcccctaa 1578

<210> 21

<211> 525

<212> PRT

<213> 酿酒酵母

<400> 21

Met Asn Glu Ile Asp Glu Lys Asn Gln Ala Pro Val Gln Gln Glu Cys

1 5 10 15

Leu Lys Glu Met Ile Gln Asn Gly His Ala Arg Arg Met Gly Ser Val

20 25 30

Glu Asp Leu Tyr Val Ala Leu Asn Arg Gln Asn Leu Tyr Arg Asn Phe

35 40 45

Cys Thr Tyr Gly Glu Leu Ser Asp Tyr Cys Thr Arg Asp Gln Leu Thr

50 55 60

Leu Ala Leu Arg Glu Ile Cys Leu Lys Asn Pro Thr Leu Leu His Ile

65 70 75 80

Val Leu Pro Thr Arg Trp Pro Asn His Glu Asn Tyr Tyr Arg Ser Ser

85 90 95

Glu Tyr Tyr Ser Arg Pro His Pro Val His Asp Tyr Ile Ser Val Leu

100 105 110

Gln Glu Leu Lys Leu Ser Gly Val Val Leu Asn Glu Gln Pro Glu Tyr

115 120 125

Ser Ala Val Met Lys Gln Ile Leu Glu Glu Phe Lys Asn Ser Lys Gly

130 135 140

Ser Tyr Thr Ala Lys Ile Phe Lys Leu Thr Thr Thr Leu Thr Ile Pro

145 150 155 160

Tyr Phe Gly Pro Thr Gly Pro Ser Trp Arg Leu Ile Cys Leu Pro Glu

165 170 175

Glu His Thr Glu Lys Trp Lys Lys Phe Ile Phe Val Ser Asn His Cys

180 185 190

Met Ser Asp Gly Arg Ser Ser Ile His Phe Phe His Asp Leu Arg Asp

195 200 205

Glu Leu Asn Asn Ile Lys Thr Pro Pro Lys Lys Leu Asp Tyr Ile Phe

210 215 220

Lys Tyr Glu Glu Asp Tyr Gln Leu Leu Arg Lys Leu Pro Glu Pro Ile

225 230 235 240

Glu Lys Val Ile Asp Phe Arg Pro Pro Tyr Leu Phe Ile Pro Lys Ser

245 250 255

Leu Leu Ser Gly Phe Ile Tyr Asn His Leu Arg Phe Ser Ser Lys Gly

260 265 270

Val Cys Met Arg Met Asp Asp Val Glu Lys Thr Asp Asp Val Val Thr

275 280 285

Glu Ile Ile Asn Ile Ser Pro Thr Glu Phe Gln Ala Ile Lys Ala Asn

290 295 300

Ile Lys Ser Asn Ile Gln Gly Lys Cys Thr Ile Thr Pro Phe Leu His

305 310 315 320

Val Cys Trp Phe Val Ser Leu His Lys Trp Gly Lys Phe Phe Lys Pro

325 330 335

Leu Asn Phe Glu Trp Leu Thr Asp Ile Phe Ile Pro Ala Asp Cys Arg

340 345 350

Ser Gln Leu Pro Asp Asp Asp Glu Met Arg Gln Met Tyr Arg Tyr Gly

355 360 365

Ala Asn Val Gly Phe Ile Asp Phe Thr Pro Trp Ile Ser Glu Phe Asp

370 375 380

Met Asn Asp Asn Lys Glu Asn Phe Trp Pro Leu Ile Glu His Tyr His

385 390 395 400

Glu Val Ile Ser Glu Ala Leu Arg Asn Lys Lys His Leu His Gly Leu

405 410 415

Gly Phe Asn Ile Gln Gly Phe Val Gln Lys Tyr Val Asn Ile Asp Lys

420 425 430

Val Met Cys Asp Arg Ala Ile Gly Lys Arg Arg Gly Gly Thr Leu Leu

435 440 445

Ser Asn Val Gly Leu Phe Asn Gln Leu Glu Glu Pro Asp Ala Lys Tyr

450 455 460

Ser Ile Cys Asp Leu Ala Phe Gly Gln Phe Gln Gly Ser Trp His Gln

465 470 475 480

Ala Phe Ser Leu Gly Val Cys Ser Thr Asn Val Lys Gly Met Asn Ile

485 490 495

Val Val Ala Ser Thr Lys Asn Val Val Gly Ser Gln Glu Ser Leu Glu

500 505 510

Glu Leu Cys Ser Ile Tyr Lys Ala Leu Leu Leu Gly Pro

515 520 525

<210> 22

<211> 1236

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1236)

<223> 来自湿地萼距花的硫酯酶CpFATB2的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 22

atggtggccg ctgccgcctc cgccgccttc ttctctgtgg ccacccctcg aactaacatc 60

tctccctcgt ctctgtctgt gcccttcaag cccaagtcta accacaacgg cggcttccag 120

gtgaaggcca acgcctctgc ccaccccaag gccaacggat ctgccgtgtc tctgaagtct 180

ggctctctcg agactcagga ggacaagacc tcttcttcgt cgcctcctcc ccgaaccttc 240

atcaaccagc tgcccgtgtg gtctatgctg ctgtctgccg tgaccaccgt gttcggcgtg 300

gccgagaagc agtggcccat gctggaccga aagtctaagc gacccgacat gctggtcgag 360

cccctgggcg tggaccgaat cgtgtacgac ggcgtgtctt tccgacagtc tttctctatc 420

cgatcttacg agatcggcgc tgaccgaacc gcctctatcg agactctgat gaacatgttc 480

caggagactt ctctgaacca ctgcaagatc atcggcctgc tgaacgacgg cttcggccga 540

acccctgaga tgtgcaagcg agatctgatt tgggtggtga ccaagatgca gatcgaggtg 600

aaccgatacc ccacctgggg cgacaccatt gaggtgaaca cctgggtgtc tgcctctggc 660

aagcacggca tgggccgaga ctggctgatc tctgactgcc acaccggcga gatcctgatc 720

cgagccacct ctgtgtgggc catgatgaac cagaagaccc gacgactgtc taagatcccc 780

tacgaggtgc gacaggagat cgagccccag ttcgtggact ctgctcccgt gatcgtggac 840

gaccgaaagt tccacaagct ggacctcaag accggcgact ctatctgcaa cggcctgacc 900

cctcgatgga ccgacctgga cgtgaaccag cacgtgaaca acgtgaagta catcggctgg 960

atcctgcagt ctgtgcccac cgaggtgttt gagactcagg agctgtgcgg cctgaccctc 1020

gagtaccgac gagagtgcgg ccgagactct gtgctcgagt ctgtgaccgc catggacccc 1080

tctaaggagg gcgaccgatc tctgtaccag cacctcctgc gactcgagga cggcgccgac 1140

atcgtgaagg gccgaaccga gtggcgaccc aagaacgctg gcgccaaggg cgccatcctg 1200

accggcaaga cctctaacgg caactctatc tcttaa 1236

<210> 23

<211> 411

<212> PRT

<213> 湿地萼距花

<400> 23

Met Val Ala Ala Ala Ala Ser Ala Ala Phe Phe Ser Val Ala Thr Pro

1 5 10 15

Arg Thr Asn Ile Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Pro Phe Lys Pro Lys

20 25 30

Ser Asn His Asn Gly Gly Phe Gln Val Lys Ala Asn Ala Ser Ala His

35 40 45

Pro Lys Ala Asn Gly Ser Ala Val Ser Leu Lys Ser Gly Ser Leu Glu

50 55 60

Thr Gln Glu Asp Lys Thr Ser Ser Ser Ser Pro Pro Pro Arg Thr Phe

65 70 75 80

Ile Asn Gln Leu Pro Val Trp Ser Met Leu Leu Ser Ala Val Thr Thr

85 90 95

Val Phe Gly Val Ala Glu Lys Gln Trp Pro Met Leu Asp Arg Lys Ser

100 105 110

Lys Arg Pro Asp Met Leu Val Glu Pro Leu Gly Val Asp Arg Ile Val

115 120 125

Tyr Asp Gly Val Ser Phe Arg Gln Ser Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu

130 135 140

Ile Gly Ala Asp Arg Thr Ala Ser Ile Glu Thr Leu Met Asn Met Phe

145 150 155 160

Gln Glu Thr Ser Leu Asn His Cys Lys Ile Ile Gly Leu Leu Asn Asp

165 170 175

Gly Phe Gly Arg Thr Pro Glu Met Cys Lys Arg Asp Leu Ile Trp Val

180 185 190

Val Thr Lys Met Gln Ile Glu Val Asn Arg Tyr Pro Thr Trp Gly Asp

195 200 205

Thr Ile Glu Val Asn Thr Trp Val Ser Ala Ser Gly Lys His Gly Met

210 215 220

Gly Arg Asp Trp Leu Ile Ser Asp Cys His Thr Gly Glu Ile Leu Ile

225 230 235 240

Arg Ala Thr Ser Val Trp Ala Met Met Asn Gln Lys Thr Arg Arg Leu

245 250 255

Ser Lys Ile Pro Tyr Glu Val Arg Gln Glu Ile Glu Pro Gln Phe Val

260 265 270

Asp Ser Ala Pro Val Ile Val Asp Asp Arg Lys Phe His Lys Leu Asp

275 280 285

Leu Lys Thr Gly Asp Ser Ile Cys Asn Gly Leu Thr Pro Arg Trp Thr

290 295 300

Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp

305 310 315 320

Ile Leu Gln Ser Val Pro Thr Glu Val Phe Glu Thr Gln Glu Leu Cys

325 330 335

Gly Leu Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu

340 345 350

Glu Ser Val Thr Ala Met Asp Pro Ser Lys Glu Gly Asp Arg Ser Leu

355 360 365

Tyr Gln His Leu Leu Arg Leu Glu Asp Gly Ala Asp Ile Val Lys Gly

370 375 380

Arg Thr Glu Trp Arg Pro Lys Asn Ala Gly Ala Lys Gly Ala Ile Leu

385 390 395 400

Thr Gly Lys Thr Ser Asn Gly Asn Ser Ile Ser

405 410

<210> 24

<211> 1368

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1368)

<223> 棉铃虫脂肪酰基还原酶的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列；mRNA编码序列

<400> 24

atggttgtct tgacctccaa agaaactaag ccatctgttg ctgaatttta cgctggtaag 60

tctgttttca ttactggtgg tactggtttc ttgggtaagg ttttcattga aaagttgttg 120

tactcctgcc cagatatcgg taatatctac atgttgatca gagaaaagaa gggtttgtcc 180

gtttccgaaa gaatcaagca ctttttggat gatcctttgt tcaccagatt gaaagaaaaa 240

agaccagccg acttggaaaa gatcgttttg attccaggtg atattactgc tccagatttg 300

ggtattacct ccgaaaacga aaagatgttg atcgaaaagg tcagtgtcat tattcattct 360

gctgctaccg ttaagttcaa cgaaccattg ccaactgctt ggaagattaa cgttgaaggt 420

actagaatga tgttggcctt gtctagaaga atgaagagaa tcgaagtttt catccatatc 480

tctaccgctt acactaacac caacagagaa gttgttgacg aaatcttgta tccagctcca 540

gctgatattg atcaagttca cagatatgtt aaggacggta tctctgaaga agaaactgaa 600

aaaatcttga acggtagacc aaacacttac actttcacta aggctttgac cgaacatttg 660

gttgctgaaa atcaagctta cgttccaacc attatcgtta gaccatcagt tgttgctgcc 720

attaaggatg aacctattaa gggttggttg ggtaattggt atggtgctac aggtttgact 780

gtttttactg ctaagggttt gaacagagtt atctacggtc actcttctaa catcgttgat 840

ttgatcccag ttgattacgt tgccaacttg gttattgctg ctggtgctaa atcttctaag 900

tctactgaat tgaaggtcta caactgctgt tcttctgctt gtaacccaat tactatcggt 960

aagttgatgt ccatgtttgc tgaagatgct atcaagcaaa agtcttacgc tatgccattg 1020

ccaggttggt acatttttac taagtacaag tggttggtct tgttgttgac cattttgttc 1080

caagttattc cagcctacat taccgacttg tacagacatt tgattggtaa gaacccaaga 1140

tatatcaagt tgcaatcctt ggtcaatcaa accagatcct ccattgattt cttcacctct 1200

cattcttggg ttatgaaggc tgatagagtc agagaattat tcgcttcttt gtctccagca 1260

gataagtact tgtttccatg tgatccaacc gatattaact ggacccatta cattcaagat 1320

tactgctggg gtgttagaca tttcttggaa aaaaaaagct acgaataa 1368

<210> 25

<211> 455

<212> PRT

<213> 棉铃虫

<400> 25

Met Val Val Leu Thr Ser Lys Glu Thr Lys Pro Ser Val Ala Glu Phe

1 5 10 15

Tyr Ala Gly Lys Ser Val Phe Ile Thr Gly Gly Thr Gly Phe Leu Gly

20 25 30

Lys Val Phe Ile Glu Lys Leu Leu Tyr Ser Cys Pro Asp Ile Gly Asn

35 40 45

Ile Tyr Met Leu Ile Arg Glu Lys Lys Gly Leu Ser Val Ser Glu Arg

50 55 60

Ile Lys His Phe Leu Asp Asp Pro Leu Phe Thr Arg Leu Lys Glu Lys

65 70 75 80

Arg Pro Ala Asp Leu Glu Lys Ile Val Leu Ile Pro Gly Asp Ile Thr

85 90 95

Ala Pro Asp Leu Gly Ile Thr Ser Glu Asn Glu Lys Met Leu Ile Glu

100 105 110

Lys Val Ser Val Ile Ile His Ser Ala Ala Thr Val Lys Phe Asn Glu

115 120 125

Pro Leu Pro Thr Ala Trp Lys Ile Asn Val Glu Gly Thr Arg Met Met

130 135 140

Leu Ala Leu Ser Arg Arg Met Lys Arg Ile Glu Val Phe Ile His Ile

145 150 155 160

Ser Thr Ala Tyr Thr Asn Thr Asn Arg Glu Val Val Asp Glu Ile Leu

165 170 175

Tyr Pro Ala Pro Ala Asp Ile Asp Gln Val His Arg Tyr Val Lys Asp

180 185 190

Gly Ile Ser Glu Glu Glu Thr Glu Lys Ile Leu Asn Gly Arg Pro Asn

195 200 205

Thr Tyr Thr Phe Thr Lys Ala Leu Thr Glu His Leu Val Ala Glu Asn

210 215 220

Gln Ala Tyr Val Pro Thr Ile Ile Val Arg Pro Ser Val Val Ala Ala

225 230 235 240

Ile Lys Asp Glu Pro Ile Lys Gly Trp Leu Gly Asn Trp Tyr Gly Ala

245 250 255

Thr Gly Leu Thr Val Phe Thr Ala Lys Gly Leu Asn Arg Val Ile Tyr

260 265 270

Gly His Ser Ser Asn Ile Val Asp Leu Ile Pro Val Asp Tyr Val Ala

275 280 285

Asn Leu Val Ile Ala Ala Gly Ala Lys Ser Ser Lys Ser Thr Glu Leu

290 295 300

Lys Val Tyr Asn Cys Cys Ser Ser Ala Cys Asn Pro Ile Thr Ile Gly

305 310 315 320

Lys Leu Met Ser Met Phe Ala Glu Asp Ala Ile Lys Gln Lys Ser Tyr

325 330 335

Ala Met Pro Leu Pro Gly Trp Tyr Ile Phe Thr Lys Tyr Lys Trp Leu

340 345 350

Val Leu Leu Leu Thr Ile Leu Phe Gln Val Ile Pro Ala Tyr Ile Thr

355 360 365

Asp Leu Tyr Arg His Leu Ile Gly Lys Asn Pro Arg Tyr Ile Lys Leu

370 375 380

Gln Ser Leu Val Asn Gln Thr Arg Ser Ser Ile Asp Phe Phe Thr Ser

385 390 395 400

His Ser Trp Val Met Lys Ala Asp Arg Val Arg Glu Leu Phe Ala Ser

405 410 415

Leu Ser Pro Ala Asp Lys Tyr Leu Phe Pro Cys Asp Pro Thr Asp Ile

420 425 430

Asn Trp Thr His Tyr Ile Gln Asp Tyr Cys Trp Gly Val Arg His Phe

435 440 445

Leu Glu Lys Lys Ser Tyr Glu

450 455

<210> 26

<211> 1365

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1365)

<223> 信号肽变为HDEL的棉铃虫脂肪酰基还原酶的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列；DNA编码序列。

<400> 26

atggttgtct tgacctccaa agaaactaag ccatctgttg ctgaatttta cgctggtaag 60

tctgttttca ttactggtgg tactggtttc ttgggtaagg ttttcattga aaagttgttg 120

tactcctgcc cagatatcgg taatatctac atgttgatca gagaaaagaa gggtttgtcc 180

gtttccgaaa gaatcaagca ctttttggat gatcctttgt tcaccagatt gaaagaaaaa 240

agaccagccg acttggaaaa gatcgttttg attccaggtg atattactgc tccagatttg 300

ggtattacct ccgaaaacga aaagatgttg atcgaaaagg tcagtgtcat tattcattct 360

gctgctaccg ttaagttcaa cgaaccattg ccaactgctt ggaagattaa cgttgaaggt 420

actagaatga tgttggcctt gtctagaaga atgaagagaa tcgaagtttt catccatatc 480

tctaccgctt acactaacac caacagagaa gttgttgacg aaatcttgta tccagctcca 540

gctgatattg atcaagttca cagatatgtt aaggacggta tctctgaaga agaaactgaa 600

aaaatcttga acggtagacc aaacacttac actttcacta aggctttgac cgaacatttg 660

gttgctgaaa atcaagctta cgttccaacc attatcgtta gaccatcagt tgttgctgcc 720

attaaggatg aacctattaa gggttggttg ggtaattggt atggtgctac aggtttgact 780

gtttttactg ctaagggttt gaacagagtt atctacggtc actcttctaa catcgttgat 840

ttgatcccag ttgattacgt tgccaacttg gttattgctg ctggtgctaa atcttctaag 900

tctactgaat tgaaggtcta caactgctgt tcttctgctt gtaacccaat tactatcggt 960

aagttgatgt ccatgtttgc tgaagatgct atcaagcaaa agtcttacgc tatgccattg 1020

ccaggttggt acatttttac taagtacaag tggttggtct tgttgttgac cattttgttc 1080

caagttattc cagcctacat taccgacttg tacagacatt tgattggtaa gaacccaaga 1140

tatatcaagt tgcaatcctt ggtcaatcaa accagatcct ccattgattt cttcacctct 1200

cattcttggg ttatgaaggc tgatagagtc agagaattat tcgcttcttt gtctccagca 1260

gataagtact tgtttccatg tgatccaacc gatattaact ggacccatta cattcaagat 1320

tactgctggg gtgttagaca tttcttggaa catgatgaat tgtaa 1365

<210> 27

<211> 454

<212> PRT

<213> 棉铃虫

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(454)

<223> 信号肽变为HDEL的棉铃虫脂肪酰基还原酶

<400> 27

Met Val Val Leu Thr Ser Lys Glu Thr Lys Pro Ser Val Ala Glu Phe

1 5 10 15

Tyr Ala Gly Lys Ser Val Phe Ile Thr Gly Gly Thr Gly Phe Leu Gly

20 25 30

Lys Val Phe Ile Glu Lys Leu Leu Tyr Ser Cys Pro Asp Ile Gly Asn

35 40 45

Ile Tyr Met Leu Ile Arg Glu Lys Lys Gly Leu Ser Val Ser Glu Arg

50 55 60

Ile Lys His Phe Leu Asp Asp Pro Leu Phe Thr Arg Leu Lys Glu Lys

65 70 75 80

Arg Pro Ala Asp Leu Glu Lys Ile Val Leu Ile Pro Gly Asp Ile Thr

85 90 95

Ala Pro Asp Leu Gly Ile Thr Ser Glu Asn Glu Lys Met Leu Ile Glu

100 105 110

Lys Val Ser Val Ile Ile His Ser Ala Ala Thr Val Lys Phe Asn Glu

115 120 125

Pro Leu Pro Thr Ala Trp Lys Ile Asn Val Glu Gly Thr Arg Met Met

130 135 140

Leu Ala Leu Ser Arg Arg Met Lys Arg Ile Glu Val Phe Ile His Ile

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Ser Thr Ala Tyr Thr Asn Thr Asn Arg Glu Val Val Asp Glu Ile Leu

165 170 175

Tyr Pro Ala Pro Ala Asp Ile Asp Gln Val His Arg Tyr Val Lys Asp

180 185 190

Gly Ile Ser Glu Glu Glu Thr Glu Lys Ile Leu Asn Gly Arg Pro Asn

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Thr Tyr Thr Phe Thr Lys Ala Leu Thr Glu His Leu Val Ala Glu Asn

210 215 220

Gln Ala Tyr Val Pro Thr Ile Ile Val Arg Pro Ser Val Val Ala Ala

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Ile Lys Asp Glu Pro Ile Lys Gly Trp Leu Gly Asn Trp Tyr Gly Ala

245 250 255

Thr Gly Leu Thr Val Phe Thr Ala Lys Gly Leu Asn Arg Val Ile Tyr

260 265 270

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275 280 285

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Val Leu Leu Leu Thr Ile Leu Phe Gln Val Ile Pro Ala Tyr Ile Thr

355 360 365

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Gln Ser Leu Val Asn Gln Thr Arg Ser Ser Ile Asp Phe Phe Thr Ser

385 390 395 400

His Ser Trp Val Met Lys Ala Asp Arg Val Arg Glu Leu Phe Ala Ser

405 410 415

Leu Ser Pro Ala Asp Lys Tyr Leu Phe Pro Cys Asp Pro Thr Asp Ile

420 425 430

Asn Trp Thr His Tyr Ile Gln Asp Tyr Cys Trp Gly Val Arg His Phe

435 440 445

Leu Glu His Asp Glu Leu

450

<210> 28

<211> 1371

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1371)

<223> 烟夜蛾脂肪酰基还原酶的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列；mRNA编码序列

<400> 28

atggttgtct tgacctccaa agaaactaag ccatctgttg ctgaatttta cgctggtaag 60

tctgttttca ttactggtgg tactggtttc ttgggtaaga tcttcattga aaagttgttg 120

tactcctgcc cagatatcgg taatatctac atgttgatca gagaaaagaa gggtttgtcc 180

gtttccgaaa gaatcaagca atttttggat gaccctttgt tcaccagatt gaaagaaaaa 240

agaccagccg acttggaaaa gatcgttttg attccaggtg atattactgc tccagatttg 300

ggtattacct ccgaaaacga aaagatgttg atcgaaaagg tcagtgtcat tattcattct 360

gctgctaccg ttaagttcaa cgaaccattg ccaactgctt ggaagattaa cgttgaaggt 420

actagaatga tgttggcctt gtctagaaga atgaagagaa tcgaagtttt catccatatc 480

tctaccgctt acactaacac caacagagaa gttgttgacg aaatcttgta tccagctcca 540

gctgatattg atcaagttca ccaatatgtt aaggacggta tctctgaaga agaaactgaa 600

aaaatcttga acggtagacc aaacacttac actttcacta aggctttgac cgaacatttg 660

gttgctgaaa atcaagctta cgttccaacc attatcgtta gaccatcagt tgttgctgcc 720

attaaggatg aacctattaa gggttggttg ggtaattggt atggtgctac aggtttgact 780

gtttttactg ctaagggttt gaacagagtt atctacggtc attcctctta catcgttgat 840

ttgatcccag ttgattacgt tgccaacttg gttattgctg ctggtgctaa atcttctaag 900

tctactgaat tgaaggtcta caactgctgt tcttctgctt gtaacccaat tactatcggt 960

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ccaggttggt atgtttttac aaagtacaag tggttggtct tgttgttgac cattttgttc 1080

caagttattc cagcctacat taccgacttg tacagacatt tgattggtaa gaacccaaga 1140

tatatcaagt tgcaatcctt ggtcaatcaa accagatcct ccattgattt cttcacctct 1200

cattcttggg ttatgaaggc tgatagagtc agagaattat tcgcttcttt gtctccagca 1260

gataagtact tgtttccatg tgatccaacc gatattaact ggacccatta cattcaagat 1320

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<210> 29

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<212> PRT

<213> 烟夜蛾

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Ile Lys Gln Phe Leu Asp Asp Pro Leu Phe Thr Arg Leu Lys Glu Lys

65 70 75 80

Arg Pro Ala Asp Leu Glu Lys Ile Val Leu Ile Pro Gly Asp Ile Thr

85 90 95

Ala Pro Asp Leu Gly Ile Thr Ser Glu Asn Glu Lys Met Leu Ile Glu

100 105 110

Lys Val Ser Val Ile Ile His Ser Ala Ala Thr Val Lys Phe Asn Glu

115 120 125

Pro Leu Pro Thr Ala Trp Lys Ile Asn Val Glu Gly Thr Arg Met Met

130 135 140

Leu Ala Leu Ser Arg Arg Met Lys Arg Ile Glu Val Phe Ile His Ile

145 150 155 160

Ser Thr Ala Tyr Thr Asn Thr Asn Arg Glu Val Val Asp Glu Ile Leu

165 170 175

Tyr Pro Ala Pro Ala Asp Ile Asp Gln Val His Gln Tyr Val Lys Asp

180 185 190

Gly Ile Ser Glu Glu Glu Thr Glu Lys Ile Leu Asn Gly Arg Pro Asn

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355 360 365

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370 375 380

Gln Ser Leu Val Asn Gln Thr Arg Ser Ser Ile Asp Phe Phe Thr Ser

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<210> 30

<211> 1365

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1365)

<223> 信号肽变为HDEL的烟夜蛾脂肪酰基还原酶的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列；mRNA编码序列

<400> 30

atggttgtct tgacctccaa agaaactaag ccatctgttg ctgaatttta cgctggtaag 60

tctgttttca ttactggtgg tactggtttc ttgggtaaga tcttcattga aaagttgttg 120

tactcctgcc cagatatcgg taatatctac atgttgatca gagaaaagaa gggtttgtcc 180

gtttccgaaa gaatcaagca atttttggat gaccctttgt tcaccagatt gaaagaaaaa 240

agaccagccg acttggaaaa gatcgttttg attccaggtg atattactgc tccagatttg 300

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attaaggatg aacctattaa gggttggttg ggtaattggt atggtgctac aggtttgact 780

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ccaggttggt atgtttttac aaagtacaag tggttggtct tgttgttgac cattttgttc 1080

caagttattc cagcctacat taccgacttg tacagacatt tgattggtaa gaacccaaga 1140

tatatcaagt tgcaatcctt ggtcaatcaa accagatcct ccattgattt cttcacctct 1200

cattcttggg ttatgaaggc tgatagagtc agagaattat tcgcttcttt gtctccagca 1260

gataagtact tgtttccatg tgatccaacc gatattaact ggacccatta cattcaagat 1320

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<210> 31

<211> 454

<212> PRT

<213> 烟夜蛾

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(454)

<223> 信号肽变为HDEL的烟夜蛾脂肪酰基还原酶的氨基酸序列

<400> 31

Met Val Val Leu Thr Ser Lys Glu Thr Lys Pro Ser Val Ala Glu Phe

1 5 10 15

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Ile Tyr Met Leu Ile Arg Glu Lys Lys Gly Leu Ser Val Ser Glu Arg

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Ile Lys Gln Phe Leu Asp Asp Pro Leu Phe Thr Arg Leu Lys Glu Lys

65 70 75 80

Arg Pro Ala Asp Leu Glu Lys Ile Val Leu Ile Pro Gly Asp Ile Thr

85 90 95

Ala Pro Asp Leu Gly Ile Thr Ser Glu Asn Glu Lys Met Leu Ile Glu

100 105 110

Lys Val Ser Val Ile Ile His Ser Ala Ala Thr Val Lys Phe Asn Glu

115 120 125

Pro Leu Pro Thr Ala Trp Lys Ile Asn Val Glu Gly Thr Arg Met Met

130 135 140

Leu Ala Leu Ser Arg Arg Met Lys Arg Ile Glu Val Phe Ile His Ile

145 150 155 160

Ser Thr Ala Tyr Thr Asn Thr Asn Arg Glu Val Val Asp Glu Ile Leu

165 170 175

Tyr Pro Ala Pro Ala Asp Ile Asp Gln Val His Gln Tyr Val Lys Asp

180 185 190

Gly Ile Ser Glu Glu Glu Thr Glu Lys Ile Leu Asn Gly Arg Pro Asn

195 200 205

Thr Tyr Thr Phe Thr Lys Ala Leu Thr Glu His Leu Val Ala Glu Asn

210 215 220

Gln Ala Tyr Val Pro Thr Ile Ile Val Arg Pro Ser Val Val Ala Ala

225 230 235 240

Ile Lys Asp Glu Pro Ile Lys Gly Trp Leu Gly Asn Trp Tyr Gly Ala

245 250 255

Thr Gly Leu Thr Val Phe Thr Ala Lys Gly Leu Asn Arg Val Ile Tyr

260 265 270

Gly His Ser Ser Tyr Ile Val Asp Leu Ile Pro Val Asp Tyr Val Ala

275 280 285

Asn Leu Val Ile Ala Ala Gly Ala Lys Ser Ser Lys Ser Thr Glu Leu

290 295 300

Lys Val Tyr Asn Cys Cys Ser Ser Ala Cys Asn Pro Ile Thr Ile Gly

305 310 315 320

Lys Leu Met Ser Met Phe Ala Glu Asp Ala Ile Lys Gln Lys Ser Tyr

325 330 335

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340 345 350

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355 360 365

Asp Leu Tyr Arg His Leu Ile Gly Lys Asn Pro Arg Tyr Ile Lys Leu

370 375 380

Gln Ser Leu Val Asn Gln Thr Arg Ser Ser Ile Asp Phe Phe Thr Ser

385 390 395 400

His Ser Trp Val Met Lys Ala Asp Arg Val Arg Glu Leu Phe Ala Ser

405 410 415

Leu Ser Pro Ala Asp Lys Tyr Leu Phe Pro Cys Asp Pro Thr Asp Ile

420 425 430

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435 440 445

Leu Glu His Asp Glu Leu

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<210> 32

<211> 1362

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1362)

<223> Heliothis subflexa脂肪酰基还原酶的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列；mRNA编码序列。

<400> 32

atggttgtct tgacctccaa agaaactaag ccatctgttg ctgaatttta cgctggtaag 60

tctgttttca ttactggtgg tactggtttc ttgggtaagg ttttcattga aaagttgttg 120

tactcctgcc cagatatcgg taatatctac atgttgatca gagaaaagaa gggtttgtcc 180

gtttccgaaa gaatcaagca ctttttggat gatcctttgt tcaccagatt gaaagaaaaa 240

agaccagccg acttggaaaa gatcgttttg attccaggtg atattactgc tccagatttg 300

ggtattacct ccgaaaacga aaagatgttg atcgaaaagg tcagtgtcat tattcattct 360

gctgctaccg ttaagttcaa cgaaccattg ccaactgctt ggaagattaa cgttgaaggt 420

actagaatga tgttggcctt gtctagaaga atgaagagaa tcgaagtttt catccatatc 480

tctaccgctt acactaacac caacagagaa gttgttgacg aaatcttgta tccagctcca 540

gctgatattg atcaagttca ccaatatgtt aaggacggta tctctgaaga agaaactgaa 600

aaaatcttga acggtagacc aaacacttac actttcacta aggctttgac cgaacatttg 660

gttgctgaaa atcaagctta cgttccaacc attatcgtta gaccatcagt tgttgctgcc 720

attaaggatg aacctattaa gggttggttg ggtaattggt atggtgctac aggtttgact 780

gtttttactg ctaagggttt gaacagagtt atctacggtc actcttctaa catcgttgat 840

ttgatcccag ttgattacgt tgccaacttg gttattgctg ctggtgctaa atcttctaag 900

tctactgaat tgaaggtcta caactgctgt tcttctgctt gtaacccaat tactatcggt 960

aagttgatgt ccatgtttgc tgaagatgct atcaagcaaa agtcttacgc tatgccattg 1020

ccaggttggt acatttttac taagtacaag tggttggtct tgttgttgac cattttgttc 1080

caagttattc cagcctacat taccgacttg tacagacatt tgattggtaa gaacccaaga 1140

tatatcaagt tgcaatcctt ggtcaatcaa accagatcct ccattgattt cttcaccaac 1200

cattcttggg ttatgaaggc tgatagagtc agagaattat tcgcttcttt gtctccagca 1260

gataagtact tgtttccatg tgatccagtc aacatcaatt ggagacaata tatccaagat 1320

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<211> 453

<212> PRT

<213> Heliothis subflexa

<400> 33

Met Val Val Leu Thr Ser Lys Glu Thr Lys Pro Ser Val Ala Glu Phe

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Lys Val Phe Ile Glu Lys Leu Leu Tyr Ser Cys Pro Asp Ile Gly Asn

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Ile Tyr Met Leu Ile Arg Glu Lys Lys Gly Leu Ser Val Ser Glu Arg

50 55 60

Ile Lys His Phe Leu Asp Asp Pro Leu Phe Thr Arg Leu Lys Glu Lys

65 70 75 80

Arg Pro Ala Asp Leu Glu Lys Ile Val Leu Ile Pro Gly Asp Ile Thr

85 90 95

Ala Pro Asp Leu Gly Ile Thr Ser Glu Asn Glu Lys Met Leu Ile Glu

100 105 110

Lys Val Ser Val Ile Ile His Ser Ala Ala Thr Val Lys Phe Asn Glu

115 120 125

Pro Leu Pro Thr Ala Trp Lys Ile Asn Val Glu Gly Thr Arg Met Met

130 135 140

Leu Ala Leu Ser Arg Arg Met Lys Arg Ile Glu Val Phe Ile His Ile

145 150 155 160

Ser Thr Ala Tyr Thr Asn Thr Asn Arg Glu Val Val Asp Glu Ile Leu

165 170 175

Tyr Pro Ala Pro Ala Asp Ile Asp Gln Val His Gln Tyr Val Lys Asp

180 185 190

Gly Ile Ser Glu Glu Glu Thr Glu Lys Ile Leu Asn Gly Arg Pro Asn

195 200 205

Thr Tyr Thr Phe Thr Lys Ala Leu Thr Glu His Leu Val Ala Glu Asn

210 215 220

Gln Ala Tyr Val Pro Thr Ile Ile Val Arg Pro Ser Val Val Ala Ala

225 230 235 240

Ile Lys Asp Glu Pro Ile Lys Gly Trp Leu Gly Asn Trp Tyr Gly Ala

245 250 255

Thr Gly Leu Thr Val Phe Thr Ala Lys Gly Leu Asn Arg Val Ile Tyr

260 265 270

Gly His Ser Ser Asn Ile Val Asp Leu Ile Pro Val Asp Tyr Val Ala

275 280 285

Asn Leu Val Ile Ala Ala Gly Ala Lys Ser Ser Lys Ser Thr Glu Leu

290 295 300

Lys Val Tyr Asn Cys Cys Ser Ser Ala Cys Asn Pro Ile Thr Ile Gly

305 310 315 320

Lys Leu Met Ser Met Phe Ala Glu Asp Ala Ile Lys Gln Lys Ser Tyr

325 330 335

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340 345 350

Val Leu Leu Leu Thr Ile Leu Phe Gln Val Ile Pro Ala Tyr Ile Thr

355 360 365

Asp Leu Tyr Arg His Leu Ile Gly Lys Asn Pro Arg Tyr Ile Lys Leu

370 375 380

Gln Ser Leu Val Asn Gln Thr Arg Ser Ser Ile Asp Phe Phe Thr Asn

385 390 395 400

His Ser Trp Val Met Lys Ala Asp Arg Val Arg Glu Leu Phe Ala Ser

405 410 415

Leu Ser Pro Ala Asp Lys Tyr Leu Phe Pro Cys Asp Pro Val Asn Ile

420 425 430

Asn Trp Arg Gln Tyr Ile Gln Asp Tyr Cys Trp Gly Val Arg His Phe

435 440 445

Leu Glu Lys Lys Thr

450

<210> 34

<211> 1362

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1362)

<223> 信号肽变为HDEL的H. subflexa脂肪酰基还原酶的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列；mRNA编码序列

<400> 34

atggttgtct tgacctccaa agaaactaag ccatctgttg ctgaatttta cgctggtaag 60

tctgttttca ttactggtgg tactggtttc ttgggtaagg ttttcattga aaagttgttg 120

tactcctgcc cagatatcgg taatatctac atgttgatca gagaaaagaa gggtttgtcc 180

gtttccgaaa gaatcaagca ctttttggat gatcctttgt tcaccagatt gaaagaaaaa 240

agaccagccg acttggaaaa gatcgttttg attccaggtg atattactgc tccagatttg 300

ggtattacct ccgaaaacga aaagatgttg atcgaaaagg tcagtgtcat tattcattct 360

gctgctaccg ttaagttcaa cgaaccattg ccaactgctt ggaagattaa cgttgaaggt 420

actagaatga tgttggcctt gtctagaaga atgaagagaa tcgaagtttt catccatatc 480

tctaccgctt acactaacac caacagagaa gttgttgacg aaatcttgta tccagctcca 540

gctgatattg atcaagttca ccaatatgtt aaggacggta tctctgaaga agaaactgaa 600

aaaatcttga acggtagacc aaacacttac actttcacta aggctttgac cgaacatttg 660

gttgctgaaa atcaagctta cgttccaacc attatcgtta gaccatcagt tgttgctgcc 720

attaaggatg aacctattaa gggttggttg ggtaattggt atggtgctac aggtttgact 780

gtttttactg ctaagggttt gaacagagtt atctacggtc actcttctaa catcgttgat 840

ttgatcccag ttgattacgt tgccaacttg gttattgctg ctggtgctaa atcttctaag 900

tctactgaat tgaaggtcta caactgctgt tcttctgctt gtaacccaat tactatcggt 960

aagttgatgt ccatgtttgc tgaagatgct atcaagcaaa agtcttacgc tatgccattg 1020

ccaggttggt acatttttac taagtacaag tggttggtct tgttgttgac cattttgttc 1080

caagttattc cagcctacat taccgacttg tacagacatt tgattggtaa gaacccaaga 1140

tatatcaagt tgcaatcctt ggtcaatcaa accagatcct ccattgattt cttcaccaac 1200

cattcttggg ttatgaaggc tgatagagtc agagaattat tcgcttcttt gtctccagca 1260

gataagtact tgtttccatg tgatccagtc aacatcaatt ggagacaata tatccaagat 1320

tactgctggg gtgttagaca tttcttgcat gatgaattgt aa 1362

<210> 35

<211> 453

<212> PRT

<213> Heliothis subflexa

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(453)

<223> 信号肽变为HDEL的H. subflexa脂肪酰基还原酶的氨基酸序列

<400> 35

Met Val Val Leu Thr Ser Lys Glu Thr Lys Pro Ser Val Ala Glu Phe

1 5 10 15

Tyr Ala Gly Lys Ser Val Phe Ile Thr Gly Gly Thr Gly Phe Leu Gly

20 25 30

Lys Val Phe Ile Glu Lys Leu Leu Tyr Ser Cys Pro Asp Ile Gly Asn

35 40 45

Ile Tyr Met Leu Ile Arg Glu Lys Lys Gly Leu Ser Val Ser Glu Arg

50 55 60

Ile Lys His Phe Leu Asp Asp Pro Leu Phe Thr Arg Leu Lys Glu Lys

65 70 75 80

Arg Pro Ala Asp Leu Glu Lys Ile Val Leu Ile Pro Gly Asp Ile Thr

85 90 95

Ala Pro Asp Leu Gly Ile Thr Ser Glu Asn Glu Lys Met Leu Ile Glu

100 105 110

Lys Val Ser Val Ile Ile His Ser Ala Ala Thr Val Lys Phe Asn Glu

115 120 125

Pro Leu Pro Thr Ala Trp Lys Ile Asn Val Glu Gly Thr Arg Met Met

130 135 140

Leu Ala Leu Ser Arg Arg Met Lys Arg Ile Glu Val Phe Ile His Ile

145 150 155 160

Ser Thr Ala Tyr Thr Asn Thr Asn Arg Glu Val Val Asp Glu Ile Leu

165 170 175

Tyr Pro Ala Pro Ala Asp Ile Asp Gln Val His Gln Tyr Val Lys Asp

180 185 190

Gly Ile Ser Glu Glu Glu Thr Glu Lys Ile Leu Asn Gly Arg Pro Asn

195 200 205

Thr Tyr Thr Phe Thr Lys Ala Leu Thr Glu His Leu Val Ala Glu Asn

210 215 220

Gln Ala Tyr Val Pro Thr Ile Ile Val Arg Pro Ser Val Val Ala Ala

225 230 235 240

Ile Lys Asp Glu Pro Ile Lys Gly Trp Leu Gly Asn Trp Tyr Gly Ala

245 250 255

Thr Gly Leu Thr Val Phe Thr Ala Lys Gly Leu Asn Arg Val Ile Tyr

260 265 270

Gly His Ser Ser Asn Ile Val Asp Leu Ile Pro Val Asp Tyr Val Ala

275 280 285

Asn Leu Val Ile Ala Ala Gly Ala Lys Ser Ser Lys Ser Thr Glu Leu

290 295 300

Lys Val Tyr Asn Cys Cys Ser Ser Ala Cys Asn Pro Ile Thr Ile Gly

305 310 315 320

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325 330 335

Ala Met Pro Leu Pro Gly Trp Tyr Ile Phe Thr Lys Tyr Lys Trp Leu

340 345 350

Val Leu Leu Leu Thr Ile Leu Phe Gln Val Ile Pro Ala Tyr Ile Thr

355 360 365

Asp Leu Tyr Arg His Leu Ile Gly Lys Asn Pro Arg Tyr Ile Lys Leu

370 375 380

Gln Ser Leu Val Asn Gln Thr Arg Ser Ser Ile Asp Phe Phe Thr Asn

385 390 395 400

His Ser Trp Val Met Lys Ala Asp Arg Val Arg Glu Leu Phe Ala Ser

405 410 415

Leu Ser Pro Ala Asp Lys Tyr Leu Phe Pro Cys Asp Pro Val Asn Ile

420 425 430

Asn Trp Arg Gln Tyr Ile Gln Asp Tyr Cys Trp Gly Val Arg His Phe

435 440 445

Leu His Asp Glu Leu

450

<210> 36

<211> 1086

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1086)

<223> 来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶Dmd9的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 36

atggctccct actctcgaat ctaccaccag gacaagtcgt cccgagagac tggcgtgctg 60

ttcgaggacg acgcccagac cgtggactct gacctgacca ccgaccgatt ccagctgaag 120

cgagccgaga agcgacgact gcccctggtg tggcgaaaca tcatcctgtt cgccctggtg 180

cacctggccg ctctgtacgg cctgcactct atcttcaccc gagccaagct ggccaccact 240

ctgttcgctg ccggcctgta catcatcggc atgctgggcg tgaccgctgg cgcccaccga 300

ctgtgggctc accgaaccta caaggccaag tggcccctgc gactgctgct ggtgatcttc 360

aacaccattg ccttccagga cgccgtgtac cactgggccc gagatcaccg agtgcaccac 420

aagtactctg agactgacgc tgaccctcac aacgctaccc gaggcttctt cttctctcac 480

gtcggctggc tgctgtgcaa gaagcacccc gacatcaagg aaaagggccg aggcctggac 540

ctgtctgacc tgcgagctga ccccatcctg atgttccagc gaaagcacta ctacattctg 600

atgcccctgg cctgcttcgt gctgcccacc gtgattccca tggtgtactg gaacgagact 660

ctggcctctt cctggttcgt ggccaccatg ttccgatggt gcttccagct caacatgacc 720

tggctggtga actctgccgc tcacaagttc ggcaaccgac cttacgacaa gactatgaac 780

cccactcaga acgccttcgt gtctgccttc accttcggcg aaggctggca caactaccac 840

cacgcattcc cttgggacta caagaccgcc gagtggggct gctactctct gaacatcacc 900

accgccttca tcgacctgtt cgctaagatc ggctgggcct acgacctcaa gaccgtggct 960

cccgacgtga tccagcgacg agtgctgcga accggcgacg gctctcacga gctgtggggc 1020

tggggcgaca aggacctgac cgctgaggac gcccgaaacg tcctgctggt ggacaagtct 1080

cgataa 1086

<210> 37

<211> 1185

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1185)

<223> 来自萼距花的硫酯酶ChFatB3的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 37

atggtggccg ctgccgcctc ttctgccttc ttctcggtgc ccactcctgg catctctccc 60

aagcctggca agttcggcaa cggcggcttc caggtgaagg ccaacgccaa cgctcacccc 120

tcgctgaagt ctggctctct cgagactgag gacgacacct cttcctcttc tccaccacct 180

cgaaccttca tcaaccagct gcctgactgg tctatgctgc tgtctgccat caccaccatc 240

ttcggagccg ccgagaagca gtggatgatg ctggaccgaa agtctaagcg acccgacatg 300

ctgatggaac ccttcggcgt ggactctatc gtgcaggacg gcgtgttctt ccgacagtct 360

ttctctatcc gatcttacga gattggcgcc gaccgaacca cctctatcga gactctgatg 420

aacatgtttc aagagacttc tctgaaccac tgcaagtcta acggcctgct gaacgacggc 480

ttcggacgaa cccctgagat gtgcaagaag ggcctgatct gggtcgtgac caagatgcag 540

gtcgaggtga acagataccc catctggggc gactctattg aggtcaacac ctgggtgtct 600

gagtctggca agaacggcat gggccgagac tggctgatct ctgactgctc taccggcgag 660

atcctggtgc gagccacctc tgtgtgggcc atgatgaacc agaagacccg acgactgtct 720

aagttcccat tcgaggtgcg acaagagatc gctcccaact tcgtcgactc tgtccccgtg 780

atcgaggacg accgaaagct gcacaagctg gacgtcaaga ccggcgactc catccacaac 840

ggactgaccc ctcgatggaa cgacctggac gtgaaccagc acgtgaacaa cgtgaagtac 900

atcggctgga tcctgaagtc ggtgcccacc gacgtgttcg aggcccaaga gctgtgcggc 960

gtgaccctcg agtaccgacg agagtgcgga cgagactccg tgatggaatc tgtgaccgct 1020

atggacccct ctaaagaagg cgaccgatct gtctaccagc acctcctgcg actcgaggac 1080

ggcgccgaca ttgccatcgg ccgaaccgag tggcgaccca agaacgctgg cgccaacggc 1140

gccatctcta ccggaaagac ctctaaccga aactctgtgt cttaa 1185

<210> 38

<211> 394

<212> PRT

<213> 萼距花

<400> 38

Met Val Ala Ala Ala Ala Ser Ser Ala Phe Phe Ser Val Pro Thr Pro

1 5 10 15

Gly Ile Ser Pro Lys Pro Gly Lys Phe Gly Asn Gly Gly Phe Gln Val

20 25 30

Lys Ala Asn Ala Asn Ala His Pro Ser Leu Lys Ser Gly Ser Leu Glu

35 40 45

Thr Glu Asp Asp Thr Ser Ser Ser Ser Pro Pro Pro Arg Thr Phe Ile

50 55 60

Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu Leu Ser Ala Ile Thr Thr Ile

65 70 75 80

Phe Gly Ala Ala Glu Lys Gln Trp Met Met Leu Asp Arg Lys Ser Lys

85 90 95

Arg Pro Asp Met Leu Met Glu Pro Phe Gly Val Asp Ser Ile Val Gln

100 105 110

Asp Gly Val Phe Phe Arg Gln Ser Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile

115 120 125

Gly Ala Asp Arg Thr Thr Ser Ile Glu Thr Leu Met Asn Met Phe Gln

130 135 140

Glu Thr Ser Leu Asn His Cys Lys Ser Asn Gly Leu Leu Asn Asp Gly

145 150 155 160

Phe Gly Arg Thr Pro Glu Met Cys Lys Lys Gly Leu Ile Trp Val Val

165 170 175

Thr Lys Met Gln Val Glu Val Asn Arg Tyr Pro Ile Trp Gly Asp Ser

180 185 190

Ile Glu Val Asn Thr Trp Val Ser Glu Ser Gly Lys Asn Gly Met Gly

195 200 205

Arg Asp Trp Leu Ile Ser Asp Cys Ser Thr Gly Glu Ile Leu Val Arg

210 215 220

Ala Thr Ser Val Trp Ala Met Met Asn Gln Lys Thr Arg Arg Leu Ser

225 230 235 240

Lys Phe Pro Phe Glu Val Arg Gln Glu Ile Ala Pro Asn Phe Val Asp

245 250 255

Ser Val Pro Val Ile Glu Asp Asp Arg Lys Leu His Lys Leu Asp Val

260 265 270

Lys Thr Gly Asp Ser Ile His Asn Gly Leu Thr Pro Arg Trp Asn Asp

275 280 285

Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile

290 295 300

Leu Lys Ser Val Pro Thr Asp Val Phe Glu Ala Gln Glu Leu Cys Gly

305 310 315 320

Val Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Met Glu

325 330 335

Ser Val Thr Ala Met Asp Pro Ser Lys Glu Gly Asp Arg Ser Val Tyr

340 345 350

Gln His Leu Leu Arg Leu Glu Asp Gly Ala Asp Ile Ala Ile Gly Arg

355 360 365

Thr Glu Trp Arg Pro Lys Asn Ala Gly Ala Asn Gly Ala Ile Ser Thr

370 375 380

Gly Lys Thr Ser Asn Arg Asn Ser Val Ser

385 390

<210> 39

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1149)

<223> 来自香樟的硫酯酶CcFatB1的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 39

atggctacca cctctctggc ctctgccttc tgctctatga aggccgtgat gctggcccga 60

gatggccgag gaatgaagcc ccgatcttct gacctgcagc tgcgagccgg caacgcccag 120

acctctctga agatgatcaa cggcaccaag ttctcttaca ccgagtcgct gaagaagctg 180

cccgactggt ctatgctgtt cgccgtgatc accaccatct tctctgccgc cgagaagcag 240

tggaccaacc tcgagtggaa gcccaagcct aaccctcctc agctgctgga cgaccacttc 300

ggaccccacg gcctggtgtt ccgacgaacc ttcgccatcc gatcttacga ggtgggcccc 360

gaccgatcta cctctatcgt ggccgtcatg aaccacctcc aagaggccgc tctgaaccac 420

gccaagtctg tgggcatcct cggcgacggc ttcggcacca ctctcgagat gtctaagcga 480

gatctgattt gggtcgtgaa gcgaacccac gtcgccgtcg agcgataccc cgcctggggc 540

gacaccgtcg aggtcgagtg ctgggtgggc gcctctggca acaacggccg acgacacgac 600

tttctggtgc gagactgcaa gaccggcgag attctgaccc gatgtacctc tctgtctgtg 660

atgatgaaca cccgaactcg acgactgtct aagatccccg aggaagtgcg aggcgagatc 720

ggacccgcct tcatcgacaa cgtggccgtg aaggacgagg aaatcaagaa gccccagaag 780

ctgaacgact ctaccgccga ctacatccaa ggcggactga cccctcgatg gaacgacctg 840

gacatcaacc agcacgtgaa caacatcaag tacgtggact ggatcctcga gactgtgccc 900

gactctatct tcgagtctca ccacatctct tcgttcacca tcgagtaccg acgagagtgc 960

accatggact ctgtgctgca gtctctgacc accgtgtctg gcggctcctc tgaggccgga 1020

ctggtgtgcg agcacctcct gcagctcgaa ggcggctctg aggtcctgcg agccaagacc 1080

gagtggcgac ccaagctgac tgactctttc cgaggcatct ctgtgatccc cgccgagtcc 1140

tctgtgtaa 1149

<210> 40

<211> 382

<212> PRT

<213> 香樟

<400> 40

Met Ala Thr Thr Ser Leu Ala Ser Ala Phe Cys Ser Met Lys Ala Val

1 5 10 15

Met Leu Ala Arg Asp Gly Arg Gly Met Lys Pro Arg Ser Ser Asp Leu

20 25 30

Gln Leu Arg Ala Gly Asn Ala Gln Thr Ser Leu Lys Met Ile Asn Gly

35 40 45

Thr Lys Phe Ser Tyr Thr Glu Ser Leu Lys Lys Leu Pro Asp Trp Ser

50 55 60

Met Leu Phe Ala Val Ile Thr Thr Ile Phe Ser Ala Ala Glu Lys Gln

65 70 75 80

Trp Thr Asn Leu Glu Trp Lys Pro Lys Pro Asn Pro Pro Gln Leu Leu

85 90 95

Asp Asp His Phe Gly Pro His Gly Leu Val Phe Arg Arg Thr Phe Ala

100 105 110

Ile Arg Ser Tyr Glu Val Gly Pro Asp Arg Ser Thr Ser Ile Val Ala

115 120 125

Val Met Asn His Leu Gln Glu Ala Ala Leu Asn His Ala Lys Ser Val

130 135 140

Gly Ile Leu Gly Asp Gly Phe Gly Thr Thr Leu Glu Met Ser Lys Arg

145 150 155 160

Asp Leu Ile Trp Val Val Lys Arg Thr His Val Ala Val Glu Arg Tyr

165 170 175

Pro Ala Trp Gly Asp Thr Val Glu Val Glu Cys Trp Val Gly Ala Ser

180 185 190

Gly Asn Asn Gly Arg Arg His Asp Phe Leu Val Arg Asp Cys Lys Thr

195 200 205

Gly Glu Ile Leu Thr Arg Cys Thr Ser Leu Ser Val Met Met Asn Thr

210 215 220

Arg Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile

225 230 235 240

Gly Pro Ala Phe Ile Asp Asn Val Ala Val Lys Asp Glu Glu Ile Lys

245 250 255

Lys Pro Gln Lys Leu Asn Asp Ser Thr Ala Asp Tyr Ile Gln Gly Gly

260 265 270

Leu Thr Pro Arg Trp Asn Asp Leu Asp Ile Asn Gln His Val Asn Asn

275 280 285

Ile Lys Tyr Val Asp Trp Ile Leu Glu Thr Val Pro Asp Ser Ile Phe

290 295 300

Glu Ser His His Ile Ser Ser Phe Thr Ile Glu Tyr Arg Arg Glu Cys

305 310 315 320

Thr Met Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Thr Val Ser Gly Gly Ser

325 330 335

Ser Glu Ala Gly Leu Val Cys Glu His Leu Leu Gln Leu Glu Gly Gly

340 345 350

Ser Glu Val Leu Arg Ala Lys Thr Glu Trp Arg Pro Lys Leu Thr Asp

355 360 365

Ser Phe Arg Gly Ile Ser Val Ile Pro Ala Glu Ser Ser Val

370 375 380

<210> 41

<211> 627

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(627)

<223> 没有前导序列的称为TesA(LL)的来自大肠杆菌的硫酯酶TesA的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 41

atgatgaact tcaacaacgt gttccgatgg catctgccct ttctgtttct ggtgctgctg 60

accttccgag ccgccgctgc tgacaccctg ctgatcctgg gcgactctct gtctgccggc 120

taccgaatgt ctgcctctgc cgcttggccc gctctgctga acgacaagtg gcagtctaag 180

acctctgtgg tgaacgcctc tatctctggc gacacctctc agcagggcct cgctcgactg 240

cctgctctgc tcaagcagca tcagccccga tgggtgctcg tcgagcttgg cggcaacgac 300

ggcctgcgag gcttccagcc tcagcagacc gagcagaccc tgcgacagat tctgcaggac 360

gtgaaggccg ccaacgctga gcctctgctg atgcagattc gactgcccgc caactacggc 420

cgacgataca acgaggcctt ctctgctatc taccccaagc tggccaagga attcgacgtg 480

cccctgctgc cattcttcat ggaagaggtg tacctgaagc ctcagtggat gcaggacgac 540

ggcattcacc ccaaccgaga tgctcagccc ttcattgccg actggatggc caagcagctg 600

cagcctctgg tgaaccacga ctcttaa 627

<210> 42

<211> 208

<212> PRT

<213> 大肠杆菌

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(208)

<223> 没有前导序列的称为TesA(LL)的来自大肠杆菌的硫酯酶TesA的蛋白质序列

<400> 42

Met Met Asn Phe Asn Asn Val Phe Arg Trp His Leu Pro Phe Leu Phe

1 5 10 15

Leu Val Leu Leu Thr Phe Arg Ala Ala Ala Ala Asp Thr Leu Leu Ile

20 25 30

Leu Gly Asp Ser Leu Ser Ala Gly Tyr Arg Met Ser Ala Ser Ala Ala

35 40 45

Trp Pro Ala Leu Leu Asn Asp Lys Trp Gln Ser Lys Thr Ser Val Val

50 55 60

Asn Ala Ser Ile Ser Gly Asp Thr Ser Gln Gln Gly Leu Ala Arg Leu

65 70 75 80

Pro Ala Leu Leu Lys Gln His Gln Pro Arg Trp Val Leu Val Glu Leu

85 90 95

Gly Gly Asn Asp Gly Leu Arg Gly Phe Gln Pro Gln Gln Thr Glu Gln

100 105 110

Thr Leu Arg Gln Ile Leu Gln Asp Val Lys Ala Ala Asn Ala Glu Pro

115 120 125

Leu Leu Met Gln Ile Arg Leu Pro Ala Asn Tyr Gly Arg Arg Tyr Asn

130 135 140

Glu Ala Phe Ser Ala Ile Tyr Pro Lys Leu Ala Lys Glu Phe Asp Val

145 150 155 160

Pro Leu Leu Pro Phe Phe Met Glu Glu Val Tyr Leu Lys Pro Gln Trp

165 170 175

Met Gln Asp Asp Gly Ile His Pro Asn Arg Asp Ala Gln Pro Phe Ile

180 185 190

Ala Asp Trp Met Ala Lys Gln Leu Gln Pro Leu Val Asn His Asp Ser

195 200 205

<210> 43

<211> 1368

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1368)

<223> 来自棉铃虫的脂肪酰基还原酶Har_FAR的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 43

atggtggtcc tgacctctaa ggagactaag ccctccgtgg ccgagttcta cgctggcaag 60

tctgtcttca tcaccggcgg aaccggtttc ctgggcaagg tcttcattga gaagctgctg 120

tactcctgtc ccgacatcgg caacatctac atgctgatcc gagagaagaa gggactgtct 180

gtgtccgagc gaattaagca cttcctggac gaccccctgt tcacccgact gaaggagaag 240

cgacccgccg acctggagaa gatcgtgctg attcccggag acatcaccgc tcccgacctg 300

ggtattacct ctgagaacga gaagatgctg atcgagaagg tgtctgtcat cattcactcc 360

gccgctaccg tcaagttcaa cgagcccctg cccaccgcct ggaagatcaa cgtggaggga 420

acccgaatga tgctggctct gtctcgacga atgaagcgaa ttgaggtctt catccacatt 480

tccaccgcct acaccaacac caaccgagag gtggtggacg agatcctgta ccctgctcct 540

gctgacattg accaggtgca ccgatacgtc aaggacggta tctctgagga agagactgag 600

aagattctga acggccgacc caacacctac accttcacca aggccctgac cgagcacctg 660

gtggctgaga accaggctta cgtgcccacc atcattgtcc gaccctccgt ggtcgccgct 720

atcaaggacg agcccattaa gggatggctg ggtaactggt acggagctac cggactgacc 780

gtgttcaccg ctaagggtct gaaccgagtc atctacggcc actcttccaa catcgtggac 840

ctgattcccg tggactacgt cgccaacctg gtcattgccg ctggcgctaa gtcttccaag 900

tccaccgagc tgaaggtgta caactgttgc tcttccgcct gcaaccccat caccattgga 960

aagctgatgt ctatgttcgc cgaggacgct atcaagcaga agtcctacgc tatgcccctg 1020

cccggttggt acatcttcac caagtacaag tggctggtcc tgctgctgac cattctgttc 1080

caggtcatcc ccgcctacat taccgacctg taccgacacc tgatcggcaa gaacccccga 1140

tacattaagc tgcagtctct ggtcaaccag acccgatctt ccattgactt cttcacctct 1200

cactcctggg tcatgaaggc tgaccgagtc cgagagctgt tcgcctctct gtcccccgct 1260

gacaagtacc tgttcccctg tgaccccacc gacatcaact ggacccacta cattcaggac 1320

tactgctggg gagtgcgaca cttcctggag aagaagtcct acgagtag 1368

<210> 44

<211> 1437

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 密码子优化的核苷酸序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1437)

<223> 来自Bicyclus anynana的脂肪酰基还原酶Ban-wFAR2的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 44

atgtaccgaa acgtgaacaa caactacaag ggccactctg tgtacaccaa cggcgctggc 60

tctcgagtga agtctctgct gtcctctgcc accgacaaca ccaacgagta ccagtctatc 120

gccgagtgct acaagggaca gtccgtgttc atcaccggcg gcaccggctt cgtcggcaag 180

gtgctgctcg agaagctgct gtactcttgc cccggcatcg acaaggtgta cctgctggtg 240

cgagagactc agggcgccac cgctcaccag cgaatgcaga agctcctgga agaacccgcc 300

ttctcgcgaa tcaaggaaga gaaccctcag gccttcgaga aggtgatccc catcgtgggc 360

gacatcaccc agcctcagct gggcatcatg gccgagaacg aggaactgct gattaaggaa 420

gtgtctttcg tctaccacgt ggccgccacc accaagttca acgagactct ggacattgcc 480

atgaacgtga acgtggccgg aaccggacga gtgctggacc tgtctaagcg aatggaaaac 540

atcaaggcct tcgtgtacgt gtctaccgcc tactctaaca ccgaccgaga ggtggtggaa 600

gaggtgctgt accccgctcc tgtgtctctg aacgaggtgc acaagctgct gaagatcggc 660

atcaccgacg ctcaggtgaa ggaactgatc aagggacgac ccaacaccta caccttcacc 720

aaggctctgg ctgagaacct ggtggccgac aaccacggac acgtgcccgc catcatcgtg 780

cgaccctcta tcgtgtcctc gtctaagaag gaacccatca ccggatggat cgactcttgg 840

tacggcgcca ccttcctggc caccgtgacc atgaagggct tcaaccgagt gttcgtgtcg 900

tcttacgagt acaacctgga cttcatcccc gtggactacg tgtccaacct gatcatcgtg 960

gccgctgctc gatgcaagtg ctctgacaag gtggacgtgt acaactcttc tacctccggc 1020

gaaaaccctc tgaagattgg cgccttcttc gacgacatca ttgcctactc ttgcaagcac 1080

aagttctacg acatccctct gcctatggcc tacctgactc gataccgatg ggtcatgttc 1140

ctgatcaccc tgctgctgca gaccctgcct gcctatatcg ccgacctgtt cctgctgatc 1200

gtgggcaaga agccccgata cgtcaagctg gcctctaaga tctctgccgc tcacgaggtc 1260

ctggactact tcccctctcg aacctggtct atgtctgccc gacagaccac cgctctgttc 1320

cagtctctgt ctccctcgga ccgagatcag tttccttgcg accccaccga catcgactgg 1380

aaggagtaca tcgtcaccta ctgccaggga atccgacagt tcctgtgcaa gtcttaa 1437

<210> 45

<211> 478

<212> PRT

<213> Bicyclus anynana

<400> 45

Met Tyr Arg Asn Val Asn Asn Asn Tyr Lys Gly His Ser Val Tyr Thr

1 5 10 15

Asn Gly Ala Gly Ser Arg Val Lys Ser Leu Leu Ser Ser Ala Thr Asp

20 25 30

Asn Thr Asn Glu Tyr Gln Ser Ile Ala Glu Cys Tyr Lys Gly Gln Ser

35 40 45

Val Phe Ile Thr Gly Gly Thr Gly Phe Val Gly Lys Val Leu Leu Glu

50 55 60

Lys Leu Leu Tyr Ser Cys Pro Gly Ile Asp Lys Val Tyr Leu Leu Val

65 70 75 80

Arg Glu Thr Gln Gly Ala Thr Ala His Gln Arg Met Gln Lys Leu Leu

85 90 95

Glu Glu Pro Ala Phe Ser Arg Ile Lys Glu Glu Asn Pro Gln Ala Phe

100 105 110

Glu Lys Val Ile Pro Ile Val Gly Asp Ile Thr Gln Pro Gln Leu Gly

115 120 125

Ile Met Ala Glu Asn Glu Glu Leu Leu Ile Lys Glu Val Ser Phe Val

130 135 140

Tyr His Val Ala Ala Thr Thr Lys Phe Asn Glu Thr Leu Asp Ile Ala

145 150 155 160

Met Asn Val Asn Val Ala Gly Thr Gly Arg Val Leu Asp Leu Ser Lys

165 170 175

Arg Met Glu Asn Ile Lys Ala Phe Val Tyr Val Ser Thr Ala Tyr Ser

180 185 190

Asn Thr Asp Arg Glu Val Val Glu Glu Val Leu Tyr Pro Ala Pro Val

195 200 205

Ser Leu Asn Glu Val His Lys Leu Leu Lys Ile Gly Ile Thr Asp Ala

210 215 220

Gln Val Lys Glu Leu Ile Lys Gly Arg Pro Asn Thr Tyr Thr Phe Thr

225 230 235 240

Lys Ala Leu Ala Glu Asn Leu Val Ala Asp Asn His Gly His Val Pro

245 250 255

Ala Ile Ile Val Arg Pro Ser Ile Val Ser Ser Ser Lys Lys Glu Pro

260 265 270

Ile Thr Gly Trp Ile Asp Ser Trp Tyr Gly Ala Thr Phe Leu Ala Thr

275 280 285

Val Thr Met Lys Gly Phe Asn Arg Val Phe Val Ser Ser Tyr Glu Tyr

290 295 300

Asn Leu Asp Phe Ile Pro Val Asp Tyr Val Ser Asn Leu Ile Ile Val

305 310 315 320

Ala Ala Ala Arg Cys Lys Cys Ser Asp Lys Val Asp Val Tyr Asn Ser

325 330 335

Ser Thr Ser Gly Glu Asn Pro Leu Lys Ile Gly Ala Phe Phe Asp Asp

340 345 350

Ile Ile Ala Tyr Ser Cys Lys His Lys Phe Tyr Asp Ile Pro Leu Pro

355 360 365

Met Ala Tyr Leu Thr Arg Tyr Arg Trp Val Met Phe Leu Ile Thr Leu

370 375 380

Leu Leu Gln Thr Leu Pro Ala Tyr Ile Ala Asp Leu Phe Leu Leu Ile

385 390 395 400

Val Gly Lys Lys Pro Arg Tyr Val Lys Leu Ala Ser Lys Ile Ser Ala

405 410 415

Ala His Glu Val Leu Asp Tyr Phe Pro Ser Arg Thr Trp Ser Met Ser

420 425 430

Ala Arg Gln Thr Thr Ala Leu Phe Gln Ser Leu Ser Pro Ser Asp Arg

435 440 445

Asp Gln Phe Pro Cys Asp Pro Thr Asp Ile Asp Trp Lys Glu Tyr Ile

450 455 460

Val Thr Tyr Cys Gln Gly Ile Arg Gln Phe Leu Cys Lys Ser

465 470 475

<210> 46

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(29)

<223> PR-1852 (PTDH3_fw)

n = 尿嘧啶

<400> 46

cacgcganat aaaaaacacg ctttttcag 29

<210> 47

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(34)

<223> pr-1853 (ptdh3_rv)

n = 尿嘧啶

<400> 47

acctgcacnt ttgtttgttt atgtgtgttt attc 34

<210> 48

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(26)

<223> pr-1565 (ptef1)

n = 尿嘧啶

<400> 48

atgacagant tgtaattaaa acttag 26

<210> 49

<211> 37

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(37)

<223> pr-8332 (har_far_u1_fw)

n = 尿嘧啶

<400> 49

agtgcaggna aaacaatggt tgtcttgacc tccaaag 37

<210> 50

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(43)

<223> pr-10739 (har_far_hdel_u1_rev)

n = 尿嘧啶

<400> 50

cgtgcgantt acaattcatc atgttccaag aaatgtctaa cac 43

<210> 51

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(33)

<223> pr-14318 (phd9_u2_fw)

n = 尿嘧啶

<400> 51

atctgtcana aaacaatggg cgtcctgctg aac 33

<210> 52

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(21)

<223> PR-14276 (Phd9_U2_rev)

n = 尿嘧啶

<400> 52

cacgcgantt agacctttcg g 21

<210> 53

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(27)

<223> pr-14319 (rcd9_u2_fw)

n = 尿嘧啶

<400> 53

atctgtcana aaacaatggc cctgaag 27

<210> 54

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(23)

<223> pr-14278 (rcd9_u2_rev)

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(23)

<223> pr-14278 (rcd9_u2_rev)

n = 尿嘧啶

<400> 54

cacgcgantt acagcttcac ctg 23

<210> 55

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(33)

<223> pr-14320 (atf1_u2_fw)

n = 尿嘧啶

<400> 55

atctgtcana aaacaatgaa tgaaatcgat gag 33

<210> 56

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(33)

<223> pr-14321 (atf1_u2_rev)

n = 尿嘧啶

<400> 56

cacgcganct aagggcctaa aaggagagct ttg 33

<210> 57

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(36)

<223> pr-15974 (dmd9_u1_fw)

n = 尿嘧啶

<400> 57

agtgcaggna aaacaatggc tccatactct agaatc 36

<210> 58

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(27)

<223> pr-15975 (dmd9_u1_rev)

n = 尿嘧啶

<400> 58

cgtgcgantt atctggactt gtcaacc 27

<210> 59

<211> 53

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(53)

<223> pr-15976 (attb1_dmd9_f)

<400> 59

ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggcta tggctccata ctctagaatc tac 53

<210> 60

<211> 64

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(64)

<223> pr-15977 (attb2_dmd9_r)

<400> 60

ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtt tatctggact tgtcaaccaa caaaacgttt 60

ctag 64

<210> 61

<211> 53

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(53)

<223> pr-15978 (attb1_phd9_f)

<400> 61

ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggcta tggccctgaa gctgaacccc ttc 53

<210> 62

<211> 54

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(54)

<223> pr-15979 (attb2_phd9_r)

<400> 62

ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtt tacagcttca cctgtcggtc gaag 54

<210> 63

<211> 52

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(52)

<223> pr-15980 (attb1_rcd9_f)

<400> 63

ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggcta tgggcgtcct gctgaacatc tg 52

<210> 64

<211> 53

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(53)

<223> pr-15981 (attb1_rcd9_r)

<400> 64

ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtt tagacctttc ggtcgaagat cca 53

<210> 65

<211> 335

<212> PRT

<213> 玫瑰色卷蛾

<400> 65

Met Ala Pro Asn Val Glu Asp Met Glu Ser Asp Leu Pro Glu Ser Glu

1 5 10 15

Glu Lys Leu Glu Lys Leu Val Ala Pro Gln Ala Ala Pro Arg Lys Tyr

20 25 30

Gln Ile Ile Tyr Thr Asn Leu Leu Thr Phe Gly Tyr Trp His Ile Ala

35 40 45

Gly Leu Tyr Gly Leu Tyr Leu Cys Phe Thr Ser Ala Lys Trp Gln Thr

50 55 60

Ile Ile Leu Ala Leu Ile Leu Asn Glu Met Ala Ile Leu Gly Ile Thr

65 70 75 80

Ala Gly Ala His Arg Leu Trp Ala His Arg Ser Tyr Lys Ala Thr Val

85 90 95

Pro Leu Gln Ile Ile Leu Ile Ile Phe Asn Ser Leu Ser Phe Gln Asn

100 105 110

Ser Ala Ile His Trp Ile Arg Asp His Arg Met His His Lys Tyr Ser

115 120 125

Asp Thr Asp Gly Asp Pro His Asn Ala Ser Arg Gly Phe Phe Tyr Ser

130 135 140

His Val Gly Trp Leu Leu Val Lys Lys His Pro Glu Val Lys Lys Arg

145 150 155 160

Ala Lys Thr Ile Asp Met Ser Asp Ile Tyr Ser Asn Pro Ile Leu Arg

165 170 175

Phe Gln Lys Lys Tyr Ala Ile Pro Phe Ile Gly Met Ile Cys Phe Val

180 185 190

Leu Pro Thr Ile Ile Pro Met Tyr Phe Trp Gly Glu Thr Leu Ser Asn

195 200 205

Ala Trp His Ile Thr Met Leu Arg Tyr Val Phe Ser Leu Asn Ser Ile

210 215 220

Phe Leu Val Asn Ser Ala Ala His Leu Tyr Gly Tyr Arg Pro Tyr Asp

225 230 235 240

Lys Asn Ile Leu Pro Ala Glu Asn Lys Met Thr Phe Ile Ala Cys Leu

245 250 255

Gly Glu Asn Phe His Asn Tyr His His Val Phe Pro Trp Asp Tyr Arg

260 265 270

Ala Ser Glu Leu Gly Asn Ile Gly Met Asn Trp Thr Ala Lys Phe Ile

275 280 285

Asp Phe Phe Ala Trp Ile Gly Trp Ala Tyr Asp Leu Lys Thr Ala Ser

290 295 300

Asp Glu Asn Ile Lys Ser Arg Met Lys Arg Thr Gly Asp Gly Thr Asp

305 310 315 320

Val Ser Gly Gln Lys Tyr Ser Cys Glu Ser Ser Glu Val Leu Gln

325 330 335

<210> 66

<211> 334

<212> PRT

<213> 斑点色卷蛾

<400> 66

Met Ala Pro Asn Val Glu Asp Met Glu Ser Asp Met Pro Glu Ser Glu

1 5 10 15

Lys Trp Glu Lys Leu Val Ala Pro Gln Ala Ala Pro Arg Lys Tyr Glu

20 25 30

Ile Ile Tyr Thr Asn Leu Leu Thr Phe Gly Tyr Gly His Ile Ala Gly

35 40 45

Leu Tyr Gly Leu Tyr Leu Cys Phe Thr Ser Ala Lys Trp Gln Thr Val

50 55 60

Ile Leu Ala Ile Ile Leu Asn Glu Met Ala Ile Leu Gly Ile Thr Ala

65 70 75 80

Gly Ala His Arg Leu Trp Ser His Arg Ser Tyr Lys Ala Ala Val Pro

85 90 95

Leu Gln Ile Ile Leu Met Ile Phe Asn Ser Leu Ala Phe Gln Asn Ser

100 105 110

Ala Ile Asn Trp Val Arg Asp His Arg Met His His Lys Tyr Ser Asp

115 120 125

Thr Asp Gly Asp Pro His Asn Ala Ser Arg Gly Phe Phe Tyr Ser His

130 135 140

Val Gly Trp Leu Leu Val Lys Lys His Pro Glu Val Lys Lys Arg Gly

145 150 155 160

Lys Met Ile Asp Met Ser Asp Ile Tyr Ser Asn Pro Val Leu Arg Phe

165 170 175

Gln Lys Lys Tyr Ala Ile Pro Phe Ile Gly Met Ile Cys Phe Val Leu

180 185 190

Pro Thr Ile Ile Pro Met Tyr Phe Trp Gly Glu Thr Leu Ser Asn Ala

195 200 205

Trp His Ile Thr Met Leu Arg Tyr Val Phe Ser Leu Asn Ser Ile Phe

210 215 220

Leu Val Asn Ser Ala Ala His Leu Tyr Gly Tyr Arg Pro Tyr Asp Lys

225 230 235 240

Asn Ile Leu Pro Ala Glu Asn Lys Ile Ala Leu Ile Ala Cys Leu Gly

245 250 255

Asp Ser Phe His Asn Tyr His His Val Phe Pro Trp Asp Tyr Arg Ala

260 265 270

Ser Glu Leu Gly Asn Ile Gly Met Asn Trp Thr Ala Gln Phe Ile Asp

275 280 285

Phe Phe Ala Trp Ile Gly Trp Ala Tyr Asp Leu Lys Thr Ala Ser Asp

290 295 300

Glu Asn Ile Asn Ser Arg Met Lys Arg Thr Gly Asp Gly Thr Asp Ile

305 310 315 320

Ser Gly Gln Lys Tyr Ser Cys Glu Ser Ser Glu Val Leu Gln

325 330

<210> 67

<211> 981

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(981)

<223> 解脂耶氏酵母密码子优化的

<400> 67

atg gtg ccc aac aag ggt tct tcc gac gtc ctg tct gag cac tcc gag 48

Met Val Pro Asn Lys Gly Ser Ser Asp Val Leu Ser Glu His Ser Glu

1 5 10 15

ccc cag ttc acc aag ctg att gct ccc cag gct ggc ccc cga aag tac 96

Pro Gln Phe Thr Lys Leu Ile Ala Pro Gln Ala Gly Pro Arg Lys Tyr

20 25 30

aag atc gtg tac cga aac ctg ctg acc ttc gga tac tgg cac ctg tct 144

Lys Ile Val Tyr Arg Asn Leu Leu Thr Phe Gly Tyr Trp His Leu Ser

35 40 45

gcc gtc tac ggt ctg tac ctg tgt ttc acc tgc gcc aag tgg gct acc 192

Ala Val Tyr Gly Leu Tyr Leu Cys Phe Thr Cys Ala Lys Trp Ala Thr

50 55 60

att ctg ttc gcc ttc ttc ctg tac gtg atc gct gag atc ggc att acc 240

Ile Leu Phe Ala Phe Phe Leu Tyr Val Ile Ala Glu Ile Gly Ile Thr

65 70 75 80

ggc gga gcc cac cga ctg tgg gct cac cga acc tac aag gcc aag ctg 288

Gly Gly Ala His Arg Leu Trp Ala His Arg Thr Tyr Lys Ala Lys Leu

85 90 95

ccc ctg gag atc ctg ctg ctg att atg aac tct atc gct ttc cag gac 336

Pro Leu Glu Ile Leu Leu Leu Ile Met Asn Ser Ile Ala Phe Gln Asp

100 105 110

acc gcc ttc acc tgg gct cga gat cac cga ctg cac cac aag tac tct 384

Thr Ala Phe Thr Trp Ala Arg Asp His Arg Leu His His Lys Tyr Ser

115 120 125

gac acc gac gct gac cct cac aac gct acc cga ggt ttc ttc tac tcc 432

Asp Thr Asp Ala Asp Pro His Asn Ala Thr Arg Gly Phe Phe Tyr Ser

130 135 140

cac gtg ggc tgg ctg ctg gtc aag aag cac ccc gag gtg aag gcc cgg 480

His Val Gly Trp Leu Leu Val Lys Lys His Pro Glu Val Lys Ala Arg

145 150 155 160

gga aag tac ctg tcc ctg gac gac ctg aag aac aac ccc ctg ctg aag 528

Gly Lys Tyr Leu Ser Leu Asp Asp Leu Lys Asn Asn Pro Leu Leu Lys

165 170 175

ttc cag aag aag tac gct atc ctg gtc att ggc acc ctg tgt ttc ctg 576

Phe Gln Lys Lys Tyr Ala Ile Leu Val Ile Gly Thr Leu Cys Phe Leu

180 185 190

atg ccc acc ttc gtg ccc gtc tac ttc tgg ggt gag ggc att tct acc 624

Met Pro Thr Phe Val Pro Val Tyr Phe Trp Gly Glu Gly Ile Ser Thr

195 200 205

gcc tgg aac atc aac ctg ctg cga tac gtg atg aac ctg aac atg acc 672

Ala Trp Asn Ile Asn Leu Leu Arg Tyr Val Met Asn Leu Asn Met Thr

210 215 220

ttc ctg gtc aac tcc gcc gct cac att ttc ggc aac aag ccc tac gac 720

Phe Leu Val Asn Ser Ala Ala His Ile Phe Gly Asn Lys Pro Tyr Asp

225 230 235 240

aag tct att gcc tcc gtg cag aac atc tct gtc tcc ctg gct acc ttc 768

Lys Ser Ile Ala Ser Val Gln Asn Ile Ser Val Ser Leu Ala Thr Phe

245 250 255

gga gag ggt ttc cac aac tac cac cac acc tac cct tgg gac tac cga 816

Gly Glu Gly Phe His Asn Tyr His His Thr Tyr Pro Trp Asp Tyr Arg

260 265 270

gct gct gag ctg ggc aac aac cga ctg aac atg acc acc gcc ttc att 864

Ala Ala Glu Leu Gly Asn Asn Arg Leu Asn Met Thr Thr Ala Phe Ile

275 280 285

gac ttc ttc gcc tgg atc gga tgg gct tac gac ctg aag tcc gtc ccc 912

Asp Phe Phe Ala Trp Ile Gly Trp Ala Tyr Asp Leu Lys Ser Val Pro

290 295 300

cag gaa gcc atc gct aag cga tgc gct aag acc ggc gac gga acc gac 960

Gln Glu Ala Ile Ala Lys Arg Cys Ala Lys Thr Gly Asp Gly Thr Asp

305 310 315 320

atg tgg gga cga aag cga tag 981

Met Trp Gly Arg Lys Arg

325

<210> 68

<211> 326

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 68

Met Val Pro Asn Lys Gly Ser Ser Asp Val Leu Ser Glu His Ser Glu

1 5 10 15

Pro Gln Phe Thr Lys Leu Ile Ala Pro Gln Ala Gly Pro Arg Lys Tyr

20 25 30

Lys Ile Val Tyr Arg Asn Leu Leu Thr Phe Gly Tyr Trp His Leu Ser

35 40 45

Ala Val Tyr Gly Leu Tyr Leu Cys Phe Thr Cys Ala Lys Trp Ala Thr

50 55 60

Ile Leu Phe Ala Phe Phe Leu Tyr Val Ile Ala Glu Ile Gly Ile Thr

65 70 75 80

Gly Gly Ala His Arg Leu Trp Ala His Arg Thr Tyr Lys Ala Lys Leu

85 90 95

Pro Leu Glu Ile Leu Leu Leu Ile Met Asn Ser Ile Ala Phe Gln Asp

100 105 110

Thr Ala Phe Thr Trp Ala Arg Asp His Arg Leu His His Lys Tyr Ser

115 120 125

Asp Thr Asp Ala Asp Pro His Asn Ala Thr Arg Gly Phe Phe Tyr Ser

130 135 140

His Val Gly Trp Leu Leu Val Lys Lys His Pro Glu Val Lys Ala Arg

145 150 155 160

Gly Lys Tyr Leu Ser Leu Asp Asp Leu Lys Asn Asn Pro Leu Leu Lys

165 170 175

Phe Gln Lys Lys Tyr Ala Ile Leu Val Ile Gly Thr Leu Cys Phe Leu

180 185 190

Met Pro Thr Phe Val Pro Val Tyr Phe Trp Gly Glu Gly Ile Ser Thr

195 200 205

Ala Trp Asn Ile Asn Leu Leu Arg Tyr Val Met Asn Leu Asn Met Thr

210 215 220

Phe Leu Val Asn Ser Ala Ala His Ile Phe Gly Asn Lys Pro Tyr Asp

225 230 235 240

Lys Ser Ile Ala Ser Val Gln Asn Ile Ser Val Ser Leu Ala Thr Phe

245 250 255

Gly Glu Gly Phe His Asn Tyr His His Thr Tyr Pro Trp Asp Tyr Arg

260 265 270

Ala Ala Glu Leu Gly Asn Asn Arg Leu Asn Met Thr Thr Ala Phe Ile

275 280 285

Asp Phe Phe Ala Trp Ile Gly Trp Ala Tyr Asp Leu Lys Ser Val Pro

290 295 300

Gln Glu Ala Ile Ala Lys Arg Cys Ala Lys Thr Gly Asp Gly Thr Asp

305 310 315 320

Met Trp Gly Arg Lys Arg

325

<210> 69

<211> 1368

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1368)

<223> 棉铃虫脂肪酰基还原酶的解脂耶氏酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 69

atggtggtcc tgacctctaa ggagactaag ccctccgtgg ccgagttcta cgctggcaag 60

tctgtcttca tcaccggcgg aaccggtttc ctgggcaagg tcttcattga gaagctgctg 120

tactcctgtc ccgacatcgg caacatctac atgctgatcc gagagaagaa gggactgtct 180

gtgtccgagc gaattaagca cttcctggac gaccccctgt tcacccgact gaaggagaag 240

cgacccgccg acctggagaa gatcgtgctg attcccggag acatcaccgc tcccgacctg 300

ggtattacct ctgagaacga gaagatgctg atcgagaagg tgtctgtcat cattcactcc 360

gccgctaccg tcaagttcaa cgagcccctg cccaccgcct ggaagatcaa cgtggaggga 420

acccgaatga tgctggctct gtctcgacga atgaagcgaa ttgaggtctt catccacatt 480

tccaccgcct acaccaacac caaccgagag gtggtggacg agatcctgta ccctgctcct 540

gctgacattg accaggtgca ccgatacgtc aaggacggta tctctgagga agagactgag 600

aagattctga acggccgacc caacacctac accttcacca aggccctgac cgagcacctg 660

gtggctgaga accaggctta cgtgcccacc atcattgtcc gaccctccgt ggtcgccgct 720

atcaaggacg agcccattaa gggatggctg ggtaactggt acggagctac cggactgacc 780

gtgttcaccg ctaagggtct gaaccgagtc atctacggcc actcttccaa catcgtggac 840

ctgattcccg tggactacgt cgccaacctg gtcattgccg ctggcgctaa gtcttccaag 900

tccaccgagc tgaaggtgta caactgttgc tcttccgcct gcaaccccat caccattgga 960

aagctgatgt ctatgttcgc cgaggacgct atcaagcaga agtcctacgc tatgcccctg 1020

cccggttggt acatcttcac caagtacaag tggctggtcc tgctgctgac cattctgttc 1080

caggtcatcc ccgcctacat taccgacctg taccgacacc tgatcggcaa gaacccccga 1140

tacattaagc tgcagtctct ggtcaaccag acccgatctt ccattgactt cttcacctct 1200

cactcctggg tcatgaaggc tgaccgagtc cgagagctgt tcgcctctct gtcccccgct 1260

gacaagtacc tgttcccctg tgaccccacc gacatcaact ggacccacta cattcaggac 1320

tactgctggg gagtgcgaca cttcctggag aagaagtcct acgagtag 1368

<210> 70

<211> 1362

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1362)

<223> Heliothis subflexa脂肪酰基还原酶的酿酒酵母密码子优化的核苷酸序列

<400> 70

atggttgtct tgacctccaa agaaactaag ccatctgttg ctgaatttta cgctggtaag 60

tctgttttca ttactggtgg tactggtttc ttgggtaagg ttttcattga aaagttgttg 120

tactcctgcc cagatatcgg taatatctac atgttgatca gagaaaagaa gggtttgtcc 180

gtttccgaaa gaatcaagca ctttttggat gatcctttgt tcaccagatt gaaagaaaaa 240

agaccagccg acttggaaaa gatcgttttg attccaggtg atattactgc tccagatttg 300

ggtattacct ccgaaaacga aaagatgttg atcgaaaagg tcagtgtcat tattcattct 360

gctgctaccg ttaagttcaa cgaaccattg ccaactgctt ggaagattaa cgttgaaggt 420

actagaatga tgttggcctt gtctagaaga atgaagagaa tcgaagtttt catccatatc 480

tctaccgctt acactaacac caacagagaa gttgttgacg aaatcttgta tccagctcca 540

gctgatattg atcaagttca ccaatatgtt aaggacggta tctctgaaga agaaactgaa 600

aaaatcttga acggtagacc aaacacttac actttcacta aggctttgac cgaacatttg 660

gttgctgaaa atcaagctta cgttccaacc attatcgtta gaccatcagt tgttgctgcc 720

attaaggatg aacctattaa gggttggttg ggtaattggt atggtgctac aggtttgact 780

gtttttactg ctaagggttt gaacagagtt atctacggtc actcttctaa catcgttgat 840

ttgatcccag ttgattacgt tgccaacttg gttattgctg ctggtgctaa atcttctaag 900

tctactgaat tgaaggtcta caactgctgt tcttctgctt gtaacccaat tactatcggt 960

aagttgatgt ccatgtttgc tgaagatgct atcaagcaaa agtcttacgc tatgccattg 1020

ccaggttggt acatttttac taagtacaag tggttggtct tgttgttgac cattttgttc 1080

caagttattc cagcctacat taccgacttg tacagacatt tgattggtaa gaacccaaga 1140

tatatcaagt tgcaatcctt ggtcaatcaa accagatcct ccattgattt cttcaccaac 1200

cattcttggg ttatgaaggc tgatagagtc agagaattat tcgcttcttt gtctccagca 1260

gataagtact tgtttccatg tgatccagtc aacatcaatt ggagacaata tatccaagat 1320

tactgctggg gtgttagaca tttcttggaa aaaaagactt aa 1362

<210> 71

<211> 1850

<212> PRT

<213> 解脂耶氏酵母

<400> 71

Met His Pro Glu Val Glu Gln Glu Leu Ala His Val Leu Leu Thr Glu

1 5 10 15

Leu Leu Ala Tyr Gln Phe Ala Ser Pro Val Arg Trp Ile Glu Thr Gln

20 25 30

Asp Val Leu Phe Lys Gln Phe Asn Val Glu Arg Val Val Glu Val Gly

35 40 45

Pro Ser Pro Thr Leu Ala Gly Met Ala Gln Arg Thr Leu Lys Ser Lys

50 55 60

Tyr Glu Ser Tyr Asp Ala Ala Leu Ser Leu Gln Arg Glu Ile Leu Cys

65 70 75 80

Tyr Ser Lys Asp Gln Lys Asp Ile Tyr Tyr Leu Ala Asp Glu Ala Asp

85 90 95

Glu Ala Pro Ala Pro Ala Ala Gly Gly Asp Ala Pro Ala Ala Pro Ala

100 105 110

Ala Ala Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Pro

115 120 125

Ser Gly Pro Val Ala Lys Val Glu Asp Ala Pro Val Lys Ala Gln Glu

130 135 140

Ile Leu His Ala Leu Val Ala His Lys Leu Lys Lys Thr Pro Glu Gln

145 150 155 160

Val Pro Leu Ser Lys Ala Ile Lys Asp Leu Val Gly Gly Lys Ser Thr

165 170 175

Ile Gln Asn Glu Ile Leu Gly Asp Leu Gly Lys Glu Phe Gly Ala Thr

180 185 190

Pro Glu Lys Pro Glu Asp Thr Pro Leu Gly Glu Leu Ala Glu Ser Phe

195 200 205

Gln Ala Ser Phe Asp Gly Lys Leu Gly Lys Gln Ser Ser Ser Leu Ile

210 215 220

Ala Arg Leu Met Ser Ser Lys Met Pro Gly Gly Phe Ser Leu Thr Ser

225 230 235 240

Ala Arg Ser Tyr Leu Asp Ser Arg Trp Gly Leu Ala Ala Gly Arg Gln

245 250 255

Asp Ser Val Leu Leu Val Ala Leu Met Asn Glu Pro Lys Asn Arg Leu

260 265 270

Gly Ser Glu Ala Glu Ala Lys Ala Tyr Leu Asp Glu Gln Thr Gln Lys

275 280 285

Tyr Ala Ala Ser Ala Gly Leu Asn Leu Ser Ala Pro Ala Gly Gly Ala

290 295 300

Glu Gly Gly Asn Gly Gly Gly Ala Val Ile Asp Ser Ala Ala Phe Asp

305 310 315 320

Ala Leu Thr Lys Asp Gln Arg Tyr Leu Val Gln Gln Gln Leu Glu Leu

325 330 335

Phe Ala Asn Tyr Leu Lys Gln Asp Leu Arg Gln Gly Ser Lys Val Ala

340 345 350

Ala Ala Gln Lys Glu Ala Met Asp Ile Leu Gln Ala Glu Leu Asp Leu

355 360 365

Trp Asn Ser Glu His Gly Glu Val Tyr Ala Glu Gly Ile Lys Pro Ala

370 375 380

Phe Ser Ala Leu Lys Ala Arg Val Tyr Asp Ser Tyr Trp Asn Trp Ala

385 390 395 400

Arg Gln Asp Ser Leu Ser Met Tyr Phe Asp Ile Val Phe Gly Arg Leu

405 410 415

Ser Thr Val Asp Arg Glu Ile Met Ala Lys Cys Ile His Leu Met Asn

420 425 430

Arg Thr Asn His Asn Leu Ile Asp Tyr Met Gln Tyr His Met Asp His

435 440 445

Val Pro Val His Lys Gly Ala Thr Tyr Glu Leu Ala Lys Gln Leu Gly

450 455 460

Leu Gln Leu Leu Glu Asn Cys Lys Glu Thr Leu Thr Glu Ala Pro Val

465 470 475 480

Tyr Lys Asp Val Ser Tyr Pro Thr Gly Pro Gln Thr Thr Ile Asp Val

485 490 495

Lys Gly Asn Ile Val Tyr Asn Glu Val Pro Arg Pro Asn Val Arg Lys

500 505 510

Leu Glu Gln Tyr Val His Glu Met Ala Cys Gly Gly Glu Leu Thr Lys

515 520 525

Asp Pro Ser Phe Val Gly Glu Gly Val Gln Gly Glu Leu Lys Lys Leu

530 535 540

Tyr Ser Gln Ile Ser Ala Leu Ala Lys Thr Gln Thr Gly Ser Thr Leu

545 550 555 560

Asp Ile Glu Ala Leu Tyr Ser Asp Leu Val Ala Lys Ile Ser Gln Ala

565 570 575

Glu Asp Ala Ser Lys Pro Val Val Glu Asn Lys Ala Val Ser Ala Ser

580 585 590

Ile Thr Pro Gly Thr Leu Pro Phe Leu His Ile Lys Lys Lys Thr Glu

595 600 605

Leu Gly Ala Trp Asn Tyr Asp Ser Glu Thr Thr Ala Thr Tyr Leu Asp

610 615 620

Gly Leu Glu Val Ala Ala Arg Asp Gly Leu Thr Phe Gln Gly Lys Thr

625 630 635 640

Ala Leu Ile Thr Gly Ala Gly Ala Gly Ser Ile Gly Ala Ser Ile Leu

645 650 655

Gln Gly Leu Ile Ser Gly Gly Cys Lys Val Ile Val Thr Thr Ser Arg

660 665 670

Tyr Ser Arg Lys Val Thr Glu Tyr Tyr Gln Ser Leu Tyr Thr Lys Phe

675 680 685

Gly Ala Lys Gly Ser Thr Leu Ile Val Val Pro Phe Asn Gln Gly Ser

690 695 700

Lys Lys Asp Val Asp Glu Leu Val Ser Phe Ile Tyr Asn Asp Pro Lys

705 710 715 720

Asn Gly Gly Leu Gly Trp Asp Leu Asp Phe Val Val Pro Phe Ala Ala

725 730 735

Leu Pro Glu Asn Gly Ile Glu Leu Glu His Ile Asp Ser Lys Ser Glu

740 745 750

Leu Ala His Arg Ile Met Leu Thr Asn Leu Leu Arg Leu Leu Gly Asn

755 760 765

Val Lys Lys Gln Lys Val Ala His Ser Tyr Glu Thr Arg Pro Ala Gln

770 775 780

Val Met Leu Pro Leu Ser Pro Asn His Gly Asn Phe Gly Ser Asp Gly

785 790 795 800

Leu Tyr Ser Glu Ser Lys Ile Ser Leu Glu Thr Leu Phe Asn Arg Trp

805 810 815

His Thr Glu Ser Trp Gly Ser Tyr Leu Thr Ile Val Gly Val Val Ile

820 825 830

Gly Trp Thr Arg Gly Thr Gly Leu Met Ser Ala Asn Asn Ile Thr Ala

835 840 845

Glu Gly Leu Glu Gln Leu Gly Val Arg Thr Phe Ser Gln Thr Glu Met

850 855 860

Ala Phe Ser Ile Met Gly Leu Met Thr Lys Asp Ile Val Arg Leu Ala

865 870 875 880

Gln Asn Ser Pro Val Trp Ala Asp Leu Asn Gly Gly Phe Gln Tyr Ile

885 890 895

Pro Asp Leu Lys Gly Val Val Gly Lys Ile Arg Arg Asp Ile Val Glu

900 905 910

Thr Ser Glu Ile Arg Arg Ala Val Ala Gln Glu Thr Ala Ile Glu Gln

915 920 925

Lys Val Val Asn Gly Pro His Ala Asp Leu Pro Tyr Gln Lys Val Glu

930 935 940

Val Lys Pro Arg Ala Asn Leu Lys Phe Asp Phe Pro Thr Leu Lys Ser

945 950 955 960

Tyr Ala Glu Val Lys Glu Leu Ser Pro Ala Gly Asp Ala Leu Glu Gly

965 970 975

Leu Leu Asp Leu Ser Ser Val Ile Val Val Thr Gly Phe Ala Glu Val

980 985 990

Gly Pro Trp Gly Asn Ala Arg Thr Arg Trp Asp Met Glu Ala Asn Gly

995 1000 1005

Val Phe Ser Leu Glu Gly Ala Ile Glu Met Ala Trp Ile Met Gly

1010 1015 1020

Leu Ile Lys His His Asn Gly Pro Leu Pro Gly Met Pro Gln Tyr

1025 1030 1035

Ser Gly Trp Ile Asp Thr Lys Thr Lys Gln Pro Val Asp Asp Arg

1040 1045 1050

Asp Ile Lys Thr Lys Tyr Glu Asp Tyr Leu Leu Glu His Ala Gly

1055 1060 1065

Ile Arg Leu Ile Glu Pro Glu Leu Phe His Gly Tyr Asn Pro Lys

1070 1075 1080

Lys Lys Thr Phe Leu Gln Glu Val Ile Val Glu His Asp Leu Glu

1085 1090 1095

Pro Phe Glu Ala Ser Lys Glu Ser Ala Glu Gln Phe Ala Leu Glu

1100 1105 1110

Gln Gly Ala Asn Val Glu Ile Phe Ala Val Pro Glu Ser Asp Gln

1115 1120 1125

Trp Thr Val Arg Leu Leu Lys Gly Ala Lys Leu Leu Ile Pro Lys

1130 1135 1140

Ala Leu Lys Phe Asp Arg Leu Val Ala Gly Gln Ile Pro Thr Gly

1145 1150 1155

Trp Asp Ala Arg Arg Tyr Gly Ile Pro Glu Asp Ile Cys Asp Gln

1160 1165 1170

Val Asp Pro Ile Thr Leu Tyr Ala Leu Val Ser Thr Val Glu Ala

1175 1180 1185

Leu Leu Ala Ser Gly Ile Thr Asp Pro Tyr Glu Phe Tyr Lys Tyr

1190 1195 1200

Val His Val Ser Glu Val Gly Asn Cys Ser Gly Ser Gly Met Gly

1205 1210 1215

Gly Ile Thr Ala Leu Arg Gly Met Phe Lys Asp Arg Phe Met Asp

1220 1225 1230

Lys Pro Val Gln Asn Asp Ile Leu Gln Glu Ser Phe Ile Asn Thr

1235 1240 1245

Met Ser Ala Trp Val Asn Met Leu Leu Leu Ser Ser Ser Gly Pro

1250 1255 1260

Ile Lys Thr Pro Val Gly Ala Cys Ala Thr Ala Val Glu Ser Val

1265 1270 1275

Asp Ile Gly Cys Glu Thr Ile Leu Ser Gly Lys Ala Arg Ile Cys

1280 1285 1290

Leu Val Gly Gly Tyr Asp Asp Phe Gln Glu Glu Ser Ser Gln Glu

1295 1300 1305

Phe Ala Asn Met Asn Ala Thr Ser Asn Ala Glu Thr Glu Ile Thr

1310 1315 1320

His Gly Arg Thr Pro Ala Glu Met Ser Arg Pro Ile Thr Ser Thr

1325 1330 1335

Arg Ala Gly Phe Met Glu Ala Gln Gly Ala Gly Thr Gln Val Leu

1340 1345 1350

Met Ala Ala Asp Leu Ala Ile Ala Met Gly Val Pro Ile Tyr Cys

1355 1360 1365

Ile Val Gly Tyr Val Asn Thr Ala Thr Asp Lys Ile Gly Arg Ser

1370 1375 1380

Val Pro Ala Pro Gly Lys Gly Ile Leu Thr Thr Ala Arg Glu His

1385 1390 1395

Gln Thr Leu Lys His Ala Asn Pro Leu Leu Asn Ile Lys Tyr Arg

1400 1405 1410

Lys Arg Gln Leu Asp Ser Arg Leu Arg Asp Ile Lys Arg Trp Ala

1415 1420 1425

Glu Gly Glu Met Glu Ala Ile Asp Ile Glu Leu Asp Asp Val Ser

1430 1435 1440

Asp Ala Asp Lys Glu Ser Phe Ile Gln Glu Arg Ser Ala His Ile

1445 1450 1455

Gln Ser Gln Ser Asp Arg Met Ile Arg Glu Ala Lys Asn Ser Trp

1460 1465 1470

Gly Asn Ala Phe Phe Lys Gln Asp Ala Arg Ile Ser Pro Ile Arg

1475 1480 1485

Gly Ala Leu Ala Thr Tyr Gly Leu Thr Ile Asp Asp Ile Ser Val

1490 1495 1500

Ala Ser Phe His Gly Thr Ser Thr Lys Ala Asn Glu Lys Asn Glu

1505 1510 1515

Thr Thr Thr Val Asn Ala Met Leu Glu His Leu Gly Arg Thr Arg

1520 1525 1530

Gly Asn Pro Val Tyr Gly Ile Phe Gln Lys Tyr Leu Thr Gly His

1535 1540 1545

Pro Lys Gly Ala Ala Gly Ala Trp Met Leu Asn Gly Ala Ile Gln

1550 1555 1560

Cys Leu Asn Ser Gly Ile Ile Pro Gly Asn Arg Asn Ala Asp Asn

1565 1570 1575

Val Asp Ala Tyr Phe Glu Gln Cys Gln His Val Val Phe Pro Ser

1580 1585 1590

Arg Ser Leu Gln Thr Asp Gly Leu Lys Ala Ala Ser Val Thr Ser

1595 1600 1605

Phe Gly Phe Gly Gln Lys Gly Ala Gln Ala Ile Val Ile His Pro

1610 1615 1620

Asp Tyr Leu Tyr Ala Ala Leu Thr Pro Ser Glu Tyr Ser Glu Tyr

1625 1630 1635

Thr Thr Arg Val Ala Gln Arg Tyr Lys Lys Ala Tyr Arg Tyr Tyr

1640 1645 1650

His Asn Ala Ile Ala Glu Glu Ser Met Phe Gln Ala Lys Asp Lys

1655 1660 1665

Ala Pro Tyr Ser Ala Glu Leu Glu Gln Glu Val Tyr Leu Asp Pro

1670 1675 1680

Leu Val Arg Val His Gln Asn Glu Asp Thr Glu Gln Tyr Ser Phe

1685 1690 1695

Asn Ala Lys Asp Leu Ala Ala Ser Ala Phe Val Lys Asn Ser His

1700 1705 1710

Lys Asp Thr Ala Lys Val Leu Ala Asn Leu Thr Ser Gln Val Ser

1715 1720 1725

Gly Ser Gly Lys Asn Val Gly Val Asp Val Glu Ala Ile Ser Ala

1730 1735 1740

Ile Asn Ile Asp Asn Asp Thr Phe Leu Asp Arg Asn Phe Thr Ala

1745 1750 1755

Asn Glu Gln Ala Tyr Cys Phe Lys Ala Pro Ser Pro Gln Ser Ser

1760 1765 1770

Phe Ala Gly Thr Trp Ser Ala Lys Glu Ala Val Phe Lys Ser Leu

1775 1780 1785

Gly Val Lys Ser Gln Gly Gly Gly Ala Glu Leu Lys Ser Ile Glu

1790 1795 1800

Ile Thr Arg Asp Gly Asn Gly Ala Pro Val Val Val Leu His Gly

1805 1810 1815

Ala Ala Lys Asp Ala Ala Ala Ser Lys Gly Ile Ser Thr Val Lys

1820 1825 1830

Val Ser Ile Ser His Asp Asp Ser Gln Ala Val Ala Val Ala Val

1835 1840 1845

Ala Glu

1850

<210> 72

<211> 334

<212> PRT

<213> 解脂耶氏酵母

<400> 72

Met Lys Leu Ser Thr Ile Leu Phe Thr Ala Cys Ala Thr Leu Ala Ala

1 5 10 15

Ala Leu Pro Ser Pro Ile Thr Pro Ser Glu Ala Ala Val Leu Gln Lys

20 25 30

Arg Val Tyr Thr Ser Thr Glu Thr Ser His Ile Asp Gln Glu Ser Tyr

35 40 45

Asn Phe Phe Glu Lys Tyr Ala Arg Leu Ala Asn Ile Gly Tyr Cys Val

50 55 60

Gly Pro Gly Thr Lys Ile Phe Lys Pro Phe Asn Cys Gly Leu Gln Cys

65 70 75 80

Ala His Phe Pro Asn Val Glu Leu Ile Glu Glu Phe His Asp Pro Arg

85 90 95

Leu Ile Phe Asp Val Ser Gly Tyr Leu Ala Val Asp His Ala Ser Lys

100 105 110

Gln Ile Tyr Leu Val Ile Arg Gly Thr His Ser Leu Glu Asp Val Ile

115 120 125

Thr Asp Ile Arg Ile Met Gln Ala Pro Leu Thr Asn Phe Asp Leu Ala

130 135 140

Ala Asn Ile Ser Ser Thr Ala Thr Cys Asp Asp Cys Leu Val His Asn

145 150 155 160

Gly Phe Ile Gln Ser Tyr Asn Asn Thr Tyr Asn Gln Ile Gly Pro Lys

165 170 175

Leu Asp Ser Val Ile Glu Gln Tyr Pro Asp Tyr Gln Ile Ala Val Thr

180 185 190

Gly His Ser Leu Gly Gly Ala Ala Ala Leu Leu Phe Gly Ile Asn Leu

195 200 205

Lys Val Asn Gly His Asp Pro Leu Val Val Thr Leu Gly Gln Pro Ile

210 215 220

Val Gly Asn Ala Gly Phe Ala Asn Trp Val Asp Lys Leu Phe Phe Gly

225 230 235 240

Gln Glu Asn Pro Asp Val Ser Lys Val Ser Lys Asp Arg Lys Leu Tyr

245 250 255

Arg Ile Thr His Arg Gly Asp Ile Val Pro Gln Val Pro Phe Trp Asp

260 265 270

Gly Tyr Gln His Cys Ser Gly Glu Val Phe Ile Asp Trp Pro Leu Ile

275 280 285

His Pro Pro Leu Ser Asn Val Val Met Cys Gln Gly Gln Ser Asn Lys

290 295 300

Gln Cys Ser Ala Gly Asn Thr Leu Leu Gln Gln Val Asn Val Ile Gly

305 310 315 320

Asn His Leu Gln Tyr Phe Val Thr Glu Gly Val Cys Gly Ile

325 330

<210> 73

<211> 366

<212> PRT

<213> 解脂耶氏酵母

<400> 73

Met Val Ser Phe Gly Ala Arg Ile Lys Asp Phe Phe Ser Val Leu Leu

1 5 10 15

Phe Gly Ala Ala Ser Thr Ser Ser Ser Thr Lys Thr Ala Leu Val Ser

20 25 30

Gln Gly Phe Tyr Asp Ala Ala Leu Asp Phe Ser His Leu Ser Asn Ile

35 40 45

Ala Tyr Cys Val Asn Ala Pro Ile Thr Pro Leu Lys Ser Asp Phe Ser

50 55 60

Cys Gly Gln Ser Cys Val His Phe Pro Asp Ile Glu Leu Val His Ile

65 70 75 80

Phe Gly Gly Asp Phe Phe Ser Thr Ser Ile Thr Gly Tyr Leu Ala Leu

85 90 95

Asp His Val Lys Lys Glu Lys Tyr Val Val Phe Arg Gly Thr Phe Ser

100 105 110

Ile Ala Asp Ala Ile Thr Asp Ile Gln Phe Gln Gln Ser Ser Phe Leu

115 120 125

Val Asn Val Pro Ala Leu Asn Thr Phe Ile Ala Asn Asp Thr Ala Pro

130 135 140

Glu Ala Gln Ile Asp Cys Lys Gln Cys Lys Ile His Asp Gly Phe Ser

145 150 155 160

Lys Ala Phe Thr Glu Thr Trp His Asn Ile Gly Asp Leu Leu Glu Gln

165 170 175

His Leu Asp Ser Tyr Pro Asp Tyr Gln Leu Tyr Val Thr Gly His Ser

180 185 190

Leu Gly Ala Ala Met Ala Leu Leu Gly Ala Thr Ser Ile Lys Leu Arg

195 200 205

Gly Tyr Asp Pro Ile Leu Ile Asn Tyr Gly Gln Pro Arg Val Gly Asn

210 215 220

Lys Ala Phe Ala Asp Tyr Ile Ser Ala Leu Trp Phe Gly Asn Gly Asp

225 230 235 240

Gly Leu Glu Ile Asn Gln Gln Arg Arg Leu Tyr Arg Met Thr His Trp

245 250 255

Asn Asp Val Phe Val Gly Leu Pro Asn Trp Asp Gly Tyr Thr His Ser

260 265 270

Asn Gly Glu Val Tyr Ile Lys Gly Lys Tyr Val Asn Pro Pro Leu Lys

275 280 285

Asp Val Phe Ser Cys Ala Gly Gly Glu Asn Ser Lys Cys Tyr Arg Ser

290 295 300

Glu Phe Asn Leu Leu Ala Gln Ile Asn Leu Leu Gln Asn His Leu Cys

305 310 315 320

Tyr Ile Asp Tyr Ile Gly Phe Cys Ala Leu Asn Val Gly Arg Arg Glu

325 330 335

Leu Asn Asp Leu Pro His Tyr Asn Gly Pro Tyr Lys Tyr Gly His Lys

340 345 350

Thr Glu Glu Gln Phe Ile Ala Glu Gly Leu Glu Leu Ser Asn

355 360 365

<210> 74

<211> 371

<212> PRT

<213> 解脂耶氏酵母

<400> 74

Met Val Ser Leu Ser Ala Arg Ile Lys Asp Phe Phe Ser Val Leu Leu

1 5 10 15

Leu Gly Ala Ala Thr Ile Thr Pro Ser Thr Gln Thr Ala Gly Val Ser

20 25 30

Gln Gly Phe Tyr Asp Phe Ala Arg Asp Phe Ala His Leu Ser Asn Ile

35 40 45

Ala Tyr Cys Val Asn Ala Pro Ile Thr Pro Leu Asn Pro Asp Phe Thr

50 55 60

Cys Gly Asn Ser Cys Lys His Phe Pro Glu Ile Glu Leu Val Lys Thr

65 70 75 80

Phe Gly Gly Asn Phe Phe Lys Thr Ser Ile Thr Gly Tyr Leu Ala Val

85 90 95

Asp His Val Lys Lys Glu Lys Tyr Val Val Phe Arg Gly Thr Phe Ser

100 105 110

Leu Ala Asp Ala Ile Thr Asp Met Gln Phe Gln Leu Ser Pro Phe Leu

115 120 125

Val Asp Val Pro Ala Leu Asn Thr Phe Ser Ala Asn Asp Thr Thr Ala

130 135 140

Glu Ala Gln Thr His Cys Glu Gly Cys Lys Ile His Asp Gly Phe Ser

145 150 155 160

Lys Ala Phe Thr Glu Thr Trp Gly Asn Ile Gly Glu Asp Leu Gln Lys

165 170 175

His Leu Asp Ala Asn Pro Asp Tyr Gln Leu Tyr Val Thr Gly His Ser

180 185 190

Leu Gly Ala Ala Met Ala Leu Leu Gly Ala Thr Ser Ile Lys Leu Lys

195 200 205

Gly Tyr Asp Pro Ile Leu Ile Asn Tyr Gly Gln Pro Arg Val Gly Asn

210 215 220

Lys Pro Phe Ala Glu Phe Ile Asn Lys Leu Trp Phe Gly Glu Gly Asn

225 230 235 240

Gly Leu Glu Ile Thr Pro Glu Arg Lys Leu Tyr Arg Met Thr His Trp

245 250 255

Asn Asp Ile Phe Val Gly Leu Pro Asn Trp Glu Gly Tyr Thr His Ser

260 265 270

Asn Gly Glu Val Tyr Ile Asn Asn Arg Phe Ile Asn Pro Pro Leu Lys

275 280 285

Asp Val Ile Ser Cys Ala Gly Gly Glu Asn Ser Lys Cys Tyr Arg Ser

290 295 300

Ser Phe Ser Leu Leu Ser Gln Ile Asn Leu Leu Gln Asn His Leu Ala

305 310 315 320

Tyr Ile Asp Tyr Ile Gly Tyr Cys Ala Leu Asn Ile Gly Arg Arg Glu

325 330 335

Leu Ala Asp Gln Glu His Tyr Thr Gly Pro Tyr Tyr Tyr Gly His Arg

340 345 350

Ser Glu Glu Asp Phe Lys Lys Leu Gly Leu Glu Leu Ser Thr Pro Gln

355 360 365

Val Glu Asn

370

Claims (19)

1.一种能够产生去饱和脂肪醇和任选地去饱和脂肪酰基乙酸酯的酵母细胞，所述酵母细胞表达：

i)至少一种能够在碳链长为14的脂肪酰基-CoA中引入至少一个双键的异源去饱和酶；和

ii)至少一种能够将至少一部分的所述去饱和脂肪酰基-CoA转化为去饱和脂肪醇的异源脂肪酰基-CoA还原酶(FAR)；以及

iii)任选地，能够将至少一部分的所述去饱和脂肪醇转化为去饱和脂肪酰基乙酸酯的乙酰基转移酶；

其中所述去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性。

2.根据前述权利要求中任一项的酵母细胞，其中所述去饱和酶衍生自选自天竺葵(Pelargonium hortorum)、蓖麻(Ricinus communis)、黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)、斜纹夜蛾(Spodoptera litura)和赤拟谷盗(Tribolium castaneum)的生物，优选地所述去饱和酶衍生自黑腹果蝇。

3.根据前述权利要求中任一项的酵母细胞，其中所述至少一种异源去饱和酶选自：

i)与如SEQ ID NO:10中所示的来自黑腹果蝇的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶；

ii)与如SEQ ID NO:12中所示的来自斜纹夜蛾的Δ9去饱和酶具有至少60％同源性的Δ9去饱和酶。

4.根据前述权利要求中任一项的酵母细胞，其中所述脂肪酰基-CoA还原酶(FAR)选自：

i)与如SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:27中所示的来自棉铃虫(Helicoverpa armigera)的FAR具有至少80％同源性的FAR；

ii)与如SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:31中所示的来自烟夜蛾(Helicoverpa assulta)的FAR具有至少80％同源性的FAR；

iii)与如SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:35中所示的来自Heliothis subflexa的FAR具有至少80％同源性的FAR；以及

iv)与如SEQ ID NO:45中所示的来自Bicyclus anynana的FAR具有至少80％同源性的FAR，

优选地，所述FAR是与如SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:27中所示的来自棉铃虫的FAR具有至少80％同源性的FAR。

5.根据前述权利要求中任一项的酵母细胞，其中所述乙酰基转移酶是从所述酵母细胞表达的异源乙酰基转移酶或从所述酵母细胞过表达的天然乙酰基转移酶，优选地所述乙酰转移酶与如SEQ ID NO:21中所示的来自酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的乙酰基转移酶Atf1具有至少75％同源性。

6.根据前述权利要求中任一项的酵母细胞，其中所述酵母属于选自酵母属(Saccharomyces)、毕赤酵母属(Pichia)、耶氏酵母属(Yarrowia)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、假丝酵母属(Candida)、红酵母属(Rhodotorula)、红冬孢酵母属(Rhodosporidium)、隐球酵母属(Cryptococcus)、丝孢酵母属(Trichosporon)和油脂酵母属(Lipomyces)的属，优选地所述属是酵母属或耶氏酵母属，最优选地所述属是酵母属或耶氏酵母属，优选地所述酵母属于选自酿酒酵母、毕赤酵母(Pichia pastoris)、马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)、浅白隐球酵母(Cryptococcus albidus)、产油油脂酵母(Lipomyces lipofera)、斯达油脂酵母(Lipomyces starkeyi)、圆红冬孢酵母(Rhodosporidium toruloides)、黏红酵母(Rhodotorula glutinis)、普鲁兰丝孢酵母(Trichosporon pullulan)和解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)的物种，优选地所述酵母细胞是酿酒酵母细胞或解脂耶氏酵母细胞，最优选地所述酵母细胞是解脂耶氏酵母细胞。

7.根据前述权利要求中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还表达或过表达硫酯酶，优选地所述硫酯酶与如SEQ ID NO:40中所示的来自香樟(Cinnamomum camphora)的硫酯酶或与如SEQ ID NO:42中所示的来自大肠杆菌(Escherichia coli)的硫酯酶具有至少60％同源性。

8.根据前述权利要求中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还表达具有经修饰的酮合酶结构域的脂肪酰基合酶变体，由此所述酵母细胞比表达天然脂肪酰基合酶的酵母细胞在相同条件下合成更高比例的C14脂肪酸。

9.根据前述权利要求中任一项的酵母细胞，所述酵母细胞还具有导致一种或多种脂肪酶的活性部分或完全丧失的突变。

10.根据权利要求9的酵母细胞，其中所述一种或多种脂肪酶与如SEQ ID NO:72中所示的解脂耶氏酵母的脂肪酶2、如SEQ ID NO:73中所示的解脂耶氏酵母的脂肪酶7或如SEQ IDNO:74中所示的解脂耶氏酵母的脂肪酶8具有至少60％同源性。

11.根据权利要求9至10中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞是解脂耶氏酵母，并且所述一种或多种脂肪酶选自如SEQ ID NO:72中所示的脂肪酶2、如SEQ ID NO:73中所示的脂肪酶7和如SEQ ID NO:74中所示的脂肪酶8。

12.一种用于在酵母细胞中产生去饱和脂肪酸和任选地去饱和脂肪酰基乙酸酯的方法，所述方法包括提供酵母细胞以及在培养基中孵育所述酵母细胞的步骤，其中所述酵母细胞表达：

i)至少一种能够在碳链长为14的脂肪酰基-CoA中引入至少一个双键的异源去饱和酶，从而将至少一部分的所述脂肪酰基-CoA转化为去饱和脂肪酰基-CoA；和

ii)至少一种能够将至少一部分的所述去饱和脂肪酰基-CoA转化为去饱和脂肪醇的异源脂肪酰基-CoA还原酶，从而产生所述去饱和脂肪醇；以及

iii)任选地，能够将至少一部分的所述去饱和脂肪醇转化为去饱和脂肪酰基乙酸酯的乙酰基转移酶，从而产生所述去饱和脂肪酰基乙酸酯；

其中所述去饱和酶对十四烷酰基-CoA的特异性高于对十六烷酰基-CoA的特异性和/或其中所述脂肪酰基-CoA还原酶对去饱和十四烷酰基-CoA的特异性高于对去饱和十六烷酰基-CoA的特异性。

13.根据权利要求12的方法，其中所述酵母细胞如权利要求1至7中任一项所定义。

14.根据权利要求12至13中任一项的方法，其中所述方法产生滴度为至少1mg/L如至少1.5mg/L、如至少5mg/L、如至少10mg/L、如至少25mg/L、如至少50mg/L、如至少100mg/L、如至少250mg/L、如至少500mg/L、如至少750mg/L、如至少1g/L、如至少2g/L、如至少3g/L、如至少4g/L、如至少5g/L或更高的链长为14的去饱和脂肪醇。

15.一种用于修饰酵母细胞的核酸构建体，所述构建体包含：

i)编码至少一种能够在碳链长为14的脂肪酰基-CoA中引入至少一个双键的异源去饱和酶的第一多核苷酸；和

ii)编码至少一种能够将至少一部分的所述去饱和脂肪酰基-CoA转化为去饱和脂肪醇的异源脂肪酰基-CoA还原酶(FAR)的第二多核苷酸；以及

iii)任选地，编码能够将至少一部分的所述去饱和脂肪醇转化为去饱和脂肪酰基乙酸酯的乙酰基转移酶的第三多核苷酸，

其中任选地，所述第一多核苷酸、所述第二多核苷酸和/或所述第三多核苷酸处于启动子的控制下。

16.一种部件试剂盒，其包含：

a)根据权利要求1至11中任一项的酵母细胞和使用说明书；和/或

b)根据权利要求15的核酸构建体，其中所述构建体用于修饰酵母细胞；以及

c)任选地，待修饰的酵母细胞。

17.一种去饱和脂肪醇或去饱和脂肪酰基乙酸酯，其通过根据权利要求12至14中任一项的方法可获得。

18.根据权利要求1至11或17中任一项的去饱和脂肪醇的用途。

19.根据权利要求1至7或17中任一项的去饱和脂肪酰基乙酸酯的用途。