CN110279869B - 一种葡聚糖-槲皮素前药聚合物的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于前药载体制备技术领域，公开了一种葡聚糖‑槲皮素前药聚合物的制备方法。该制备方法通过对槲皮素的羟基进行保护、选择性取代、脱保护、酰氯化等反应，引入酰氯基团，再将其与葡聚糖连接，制备葡聚糖‑槲皮素前药聚合物，该制备方法方便易行，反应条件温和。本发明为对槲皮素的衍生物进行研究构建理想的药物载体来改善其水溶性提供了基础，为提高生物利用度提供了前期方案。

Description

一种葡聚糖-槲皮素前药聚合物的制备方法
技术领域
本发明属于前药载体制备技术领域，本发明具体涉及一种葡聚糖-槲皮素前药聚合物的制备方法。
背景技术
槲皮素(Quercetin，3,3′,4′,5,7-五羟基黄酮，QT)广泛存在人们的食物中，如洋葱、西兰花、茶叶、苹果、浆果等。槲皮素属于黄酮类化合物，具有多方面的生物活性。为了更好的开发、充分利用其药用价值，近年来国内外学者对槲皮素做了大量的研究工作。随着科学技术的发展，人们逐渐认识到，从天然产物中获得的化合物如槲皮素，应用于防病治病效果更好。流行病学和营养学家认为槲皮素是一种最有希望应用于预防和治疗疾病的天然化合物。槲皮素具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒、预防和治疗心脑血管疾病等方面的作用。尤其是槲皮素具有化学预防与抗癌作用，由于其亲脂性，可以轻松地穿过细胞膜并发挥作用，可通过阻滞癌细胞侵袭及转移等多种途径发挥抗肿瘤作用，其抗肿瘤活性已成为国内外研究的热点。但
是因其生物利用度低、水溶性差、代谢迅速及酶降解等问题，使其作为药物应用于临床受到了限制，利用化学手段对其进行结构修饰，改善其性能，已成为目前研究的主要方向。
槲皮素结构中含有五个酚羟基，羟基位置的不同导致其性质不同，因此可以根据这一特性获得多种槲皮素的衍生物。槲皮素具有多种生物活性和药理作用。然而，槲皮素为平面型分子，分子堆积比较紧密，分子间引力作用大，不容易分散在溶剂中，使其水溶性较差，口服生物利用度较低。最高血浆浓度仅为0.13～7.6μM，因此大大限制了其临床研究。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种葡聚糖-槲皮素前药聚合物的制备方法，该制备方法通过对槲皮素的羟基进行保护、选择性取代、脱保护、酰氯化等反应，引入酰氯基团，再将其与葡聚糖连接，制备葡聚糖-槲皮素前药聚合物，该制备方法方便易行，反应条件温和。
本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：
一种葡聚糖-槲皮素前药聚合物的制备方法，具体步骤如下：
S1.五乙酰槲皮素FAQ的合成：将槲皮素QT溶于溶剂中，60℃加热搅拌至槲皮素QT完全溶解后将反应体系转移到-4℃冰浴条件下，向反应体系中滴加乙酰化试剂乙酸酐，室温搅拌；乙醇冰浴沉淀后进行除杂纯化处理，抽滤，乙醇清洗，最后真空干燥，得五乙酰槲皮素FAQ。
S2.7-槲皮素氧乙酸乙酯QEA的合成：将五乙酰槲皮素FAQ、除水剂无水碳酸钾、催化剂碘化钾加入丙酮溶解，使反应体系处于氮气保护状态下。60-80℃后滴加溴乙酸乙酯，60-80℃反应12-24h。将反应物进行后处理，抽滤，旋干，得7-槲皮素氧乙酸乙酯QEA。
S3.7-槲皮素氧乙酸QE的合成：用甲醇将7-槲皮素氧乙酸乙酯QEA溶解，升温至80℃，加入氢氧化钾溶液，溶液颜色发生变化；然后将反应体系冷却至-4℃，利用盐酸调节体系pH值至2-3；将反应物进行后处理，抽滤，水洗，并对其进行重结晶，旋干，最后真空干燥，得7-槲皮素氧乙酸QE。
S4.7-槲皮素氧乙酰氯QT-cl的合成：将7-槲皮素氧乙酸QE在-4℃冰浴条件下滴加二氯亚砜，于70-80℃条件下反应，并进行尾气回收，旋干，得7-槲皮素氧乙酰氯QT-cl。
S5.葡聚糖-槲皮素聚合物Dex-QT的合成：将7-槲皮素氧乙酰氯QT-cl和葡聚糖Dex粉末溶解于1～20mL的DMSO中，并加入缚酸剂，室温反应；反应结束后，将反应液透析，冷冻干燥，得葡聚糖-槲皮素聚合物Dex-QT。
进一步的，步骤S5所述的缚酸剂为吡啶、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺中任一种。
本发明提供的一种葡聚糖-槲皮素前药聚合物反应式如下所示：
Figure BDA0002114318600000021
进一步的，所述步骤S1中槲皮素与乙酸酐的摩尔比例为1：1～5，槲皮素与吡啶的摩尔比例为1～5：1。所述的除杂纯化处理为抽滤、乙醇清洗去除溶剂。所述的乙醇均为70％乙醇。
进一步的，所述步骤S1中的溶剂为吡啶、二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺中任一种。
进一步的，所述步骤S2中五乙酰槲皮素与溴乙酸乙酯的摩尔比例为1～10:1，五乙酰槲皮素与丙酮的质量比为3:1～5，五乙酰槲皮素与碘化钾的质量比为1～10:1，五乙酰槲皮素与催化剂的质量比例为1～5:1，所述的催化剂为无水碳酸钾。所述的后处理为抽滤、旋蒸去除溶剂。
进一步的，所述步骤S3中7-槲皮素氧乙酸乙酯与甲醇的用量为1:1～5。所述的氢氧化钾的质量分数为13％，加入量为5ml；盐酸的浓度为2.5mol/L。所述的后处理为抽滤去除残渣，对溶液水洗、重结晶，后旋干滤液。
进一步的，所述步骤S4中7-槲皮素氧乙酸与二氯亚砜的摩尔比例为5～10:1。所述的尾气为氯化氢和二氧化硫气体，所述的尾气回收的溶液选自氢氧化钾、碳酸钾、氢氧化钠或碳酸钠中的任一种。
进一步的，所述步骤S5中7-槲皮素氧乙酰氯与葡聚糖的摩尔比为1:1，7-槲皮素氧乙酰氯与缚酸剂的摩尔比为1:1，所述的透析为去离子水透析，每6h换一次水。
本发明与现有技术相比形成的化合物更加稳定，水溶性更好有益效果是：
1.本发明所提供的葡聚糖-槲皮素前药聚合物的制备方法方便易行，可以大大提高槲皮素作为一种多酚黄酮类化合物所具有抗氧化、抗病毒、抗炎、保护肾脏功能等多种药理作用，尤其对肝癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌等多种癌症均具有良好的抑制作用。本发明为对槲皮素的衍生物进行研究构建理想的药物载体来改善其水溶性提供了基础，为提高生物利用度提供了前期方案。
2.由于葡聚糖作为水溶性高分子聚合物，具有无毒，生物相容性高和可生物降解等优点。本发明将葡聚糖作为载体，与槲皮素形成的葡聚糖-槲皮素前药聚合物在保留葡聚糖现有优点的同时，还可与槲皮素发生耦合反应，生成具有特殊功能的前体药物和药物载体。相对于现有的槲皮素与其他载体的聚合物，本发明制备葡聚糖-槲皮素前药聚合物与槲皮素相比具有良好的水溶性和生物相容性，同时还可以实现药物的缓释和靶向供药。
3.从药效学角度来看，葡聚糖-槲皮素前药聚合物能够提高药物的溶解度，延长药物在体内的半衰期，改变药物的组织分布，降低毒副作用等，在聚合物-药物聚合物的研究中具有很大的优势。本发明选用高分子葡聚糖作为药物递送的载体，通过化学结构修饰制备葡聚糖-槲皮素前药聚合物。
4.本发明提供的葡聚糖-槲皮素前药聚合物的制备方法。反应条件温和，操作简便，反应迅速，各中间体无需进行复杂的纯化步骤，可直接参与下一步反应，且杂质对反应无影响。此外，生成的葡聚糖-槲皮素聚合物Dex-QT通过透析法即可得到纯品，方便快捷。
附图说明
图1是实施例5中的槲皮素和五乙酰槲皮素的红外光谱图，其中QT为槲皮素，FAQ为五乙酰槲皮素。
图2是实施例5中五乙酰槲皮素的质谱图。
图3是实施例5中五乙酰槲皮素的核磁氢谱图。
图4是实施例5中7-槲皮素氧乙酸乙酯的质谱图。
图5是实施例5中槲皮素和7-槲皮素氧乙酸的红外光谱图。
图6是实施例5中7-槲皮素氧乙酸的重结晶质谱图。
图7是实施例5中7-槲皮素氧乙酸的核磁图。
图8是实施例5中7-槲皮素氧乙酸和7-槲皮素氧乙酰氯的红外光谱图。
图9是实施例5中葡聚糖、7-槲皮素氧乙酰氯和葡聚糖-槲皮素聚合物的红外光谱图。
图10是实施例5中葡聚糖-槲皮素聚合物的核磁图。
具体实施方式
下面通过具体实施例详述本发明，但不限制本发明的保护范围。如无特殊说明，本发明所采用的实验方法均为常规方法，所用实验器材、材料、试剂等均可从商业途径获得。实施例中所述的氮气保护状态为氮气球充满氮气，真空泵将体系内其余气体抽走。
实施例1
一种葡聚糖-槲皮素前药聚合物的制备方法，具体步骤如下：
S1.将槲皮素(12g)中加入25mL二氯甲烷，60℃加热搅拌至槲皮素完全溶解后将反应体系转移到-4℃冰浴条件下。向反应体系中滴加28mL乙酸酐。室温，搅拌48h，将反应液倒入冷乙醇(500mL)溶液中析出固体沉淀。抽滤，乙醇清洗，真空干燥，即五乙酰槲皮素。
S2.将5g五乙酰槲皮素、3g无水碳酸钾、2g碘化钾加入200mL无水丙酮溶解，使反应体系处于氮气保护状态下。60℃，滴加1.3mL溴乙酸乙酯，60℃保温反应过夜。抽滤，旋干，即7-槲皮素氧乙酸乙酯。
S3.用50mL甲醇将7-槲皮素氧乙酸乙酯溶解，加入20mL氢氧化钾溶液(质量分数为40％)，溶液颜色发生变化。然后将反应体系冷却，利用4mol/L盐酸调节体系pH值调至2。于-4℃条件下放置过夜，析出黄色沉淀。抽滤，水洗，并对其进行重结晶，旋干，真空干燥，得7-槲皮素氧乙酸。
S4.将3g的7-槲皮素氧乙酸，冰浴下滴加20mL的二氯亚砜，逐渐恢复至室温，于80℃条件下剧烈反应，并进行尾气回收，旋干，得7-槲皮素氧乙酰氯。
S5.将7-槲皮素氧乙酰氯和葡聚糖粉末(葡聚糖糖单元与7-槲皮素氧乙酰氯的摩尔比为1:5)溶解于20mL DMSO中，并加入三乙胺作为缚酸剂(缚酸剂与7-槲皮素氧乙酰氯的摩尔比5:1)，室温反应。反应结束后，将反应液透析三天，冷冻干燥，得葡聚糖-槲皮素聚合物Dex-QT。
实施例2
一种葡聚糖-槲皮素前药聚合物的制备方法，具体步骤如下：
S1.将槲皮素(10g)中加入20mLDMF，60℃加热搅拌至槲皮素完全溶解后将反应体系转移到-4℃冰浴条件下。向反应体系中滴加22mL乙酸酐。室温，搅拌24h，将反应液倒入冷乙醇(400mL)溶液中析出固体沉淀。抽滤，乙醇清洗，真空干燥，即五乙酰槲皮素。
S2.将3.5g五乙酰槲皮素、2g无水碳酸钾、1g碘化钾加入150mL无水丙酮溶解，使反应体系处于氮气保护状态下。65℃，滴加1.04mL溴乙酸乙酯，65℃保温反应过夜。抽滤，旋干，即7-槲皮素氧乙酸乙酯。
S3.用40mL甲醇将7-槲皮素氧乙酸乙酯溶解，加入15mL氢氧化钾溶液(质量分数为39％)，溶液颜色发生变化。然后将反应体系冷却，利用4mol/L盐酸将体系pH值调至2.5。于-4℃条件下放置过夜，析出黄色沉淀。抽滤，水洗，并对其进行重结晶，旋干，真空干燥，得7-槲皮素氧乙酸。
S4.将2g的7-槲皮素氧乙酸，冰浴下滴加18mL的二氯亚砜，逐渐恢复至室温，于80℃条件下剧烈反应，并进行尾气回收，旋干，得7-槲皮素氧乙酰氯。
S5.将7-槲皮素氧乙酰氯和葡聚糖粉末(葡聚糖糖单元与7-槲皮素氧乙酰氯的摩尔比1:4)溶解于15mL DMSO中，并加入N,N-二异丙基乙胺作为缚酸剂(缚酸剂与7-槲皮素氧乙酰氯的摩尔比4:1)，室温反应。反应结束后，将反应液透析三天，冷冻干燥，得葡聚糖-槲皮素聚合物Dex-QT。
实施例3
一种葡聚糖-槲皮素前药聚合物的制备方法，具体步骤如下：
S1.将槲皮素(8g)中加入15mL二氯甲烷，60℃加热搅拌至槲皮素完全溶解后将反应体系转移到-4℃冰浴条件下。向反应体系中滴加17mL乙酸酐。室温，搅拌12h，将反应液倒入冷乙醇(300mL)溶液中析出固体沉淀。抽滤，乙醇清洗，真空干燥，得五乙酰槲皮素。
S2.将2.5g五乙酰槲皮素、2.5g无水碳酸钾、0.5g碘化钾加入100mL无水丙酮溶解，使反应体系处于氮气保护状态下。70℃，滴加0.78mL溴乙酸乙酯，70℃保温反应过夜。抽滤，旋干，即7-槲皮素氧乙酸乙酯。
S3.用30mL甲醇将7-槲皮素氧乙酸乙酯溶解，加入10mL氢氧化钾溶液(质量分数为26％)，溶液颜色发生变化。然后将反应体系冷却，利用3mol/L盐酸将体系pH值调至3。于-4℃条件下放置过夜，析出黄色沉淀。抽滤，水洗，并对其进行重结晶，旋干，真空干燥，得7-槲皮素氧乙酸。
S4.将1.5g的7-槲皮素氧乙酸，冰浴下滴加15mL的二氯亚砜，逐渐恢复至室温，于80℃条件下剧烈反应，并进行尾气回收，旋干，得7-槲皮素氧乙酰氯。
S5.将7-槲皮素氧乙酰氯和葡聚糖粉末(葡聚糖糖单元与7-槲皮素氧乙酰氯的摩尔比1:3)溶解于5mL DMSO中，并加入吡啶作为缚酸剂(缚酸剂与7-槲皮素氧乙酰氯摩尔比3:1)，室温反应。反应结束后，将反应液透析三天，冷冻干燥，得葡聚糖-槲皮素聚合物Dex-QT。
实施例4
一种葡聚糖-槲皮素前药聚合物的制备方法，具体步骤如下：
S1.将槲皮素(6.76g)中加入14mL吡啶，60℃加热搅拌至槲皮素完全溶解后将反应体系转移到-4℃冰浴条件下。向反应体系中滴加16mL乙酸酐。将体系恢复至室温，搅拌48h，将反应液倒入冷乙醇(200mL)溶液中析出固体沉淀。抽滤，乙醇清洗，真空干燥，即五乙酰槲皮素。
S2.将2g五乙酰槲皮素、1.42g无水碳酸钾、0.336g碘化钾加入100mL无水丙酮溶解，使反应体系处于氮气保护状态下。75℃，滴加0.52mL溴乙酸乙酯，75℃保温反应过夜。抽滤，旋干，即7-槲皮素氧乙酸乙酯。
S3.用20mL甲醇将7-槲皮素氧乙酸乙酯溶解，氮气保护下升温，加入10mL氢氧化钾溶液(质量分数为13％)，溶液颜色发生变化。然后将反应体系冷却，利用2.5mol/L盐酸将体系pH值调至3。于-4℃条件下放置过夜，析出黄色沉淀。抽滤，水洗，并对其进行重结晶，滤液旋干后将产物进行真空干燥，得7-槲皮素氧乙酸。
S4.将1g的7-槲皮素氧乙酸，冰浴下滴加10mL的二氯亚砜，逐渐恢复至室温，于80℃条件下剧烈反应，并进行尾气回收，旋干，得7-槲皮素氧乙酰氯。
S5.将7-槲皮素氧乙酰氯和葡聚糖粉末(葡聚糖糖单元与7-槲皮素氧乙酰氯摩尔比1:2)溶解于1mL DMSO中，并加入三乙胺作为缚酸剂(缚酸剂与7-槲皮素氧乙酰氯摩尔比2:1)，室温反应。反应结束后，将反应液透析三天，冷冻干燥，得葡聚糖-槲皮素聚合物Dex-QT。
实施例5
一种葡聚糖-槲皮素前药聚合物的制备方法，具体步骤如下：
S1.将槲皮素(3.38g)中加入7mL吡啶，60℃加热搅拌至槲皮素完全溶解后将反应体系转移到-4℃冰浴条件下。向反应体系中滴加8mL乙酸酐。将体系恢复至室温，搅拌48h，将反应液倒入冷乙醇(100mL)溶液中析出固体沉淀。抽滤，乙醇清洗，真空干燥，即五乙酰槲皮素。
S2.将1g五乙酰槲皮素、0.71g无水碳酸钾、0.168g碘化钾加入50mL无水丙酮溶解，使反应体系处于氮气保护状态下。80℃，滴加0.26mL溴乙酸乙酯，80℃保温反应过夜。抽滤，旋干，即7-槲皮素氧乙酸乙酯。
S3.用10mL甲醇将7-槲皮素氧乙酸乙酯溶解，加入5mL氢氧化钾溶液(质量分数为13％)，溶液颜色发生变化。然后将反应体系冷却，利用2.5mol/L盐酸将体系pH值调至3。于-4℃条件下放置过夜，析出黄色沉淀。抽滤，水洗，并对其进行重结晶，旋干，真空干燥，得7-槲皮素氧乙酸。
S4.将0.5g的7-槲皮素氧乙酸，冰浴下滴加5mL的二氯亚砜，逐渐恢复至室温，于80℃条件下剧烈反应，并进行尾气回收，旋干，得7-槲皮素氧乙酰氯。
S5.将7-槲皮素氧乙酰氯和葡聚糖粉末(葡聚糖糖单元与7-槲皮素氧乙酰氯摩尔比1:2)溶解于5mL DMSO中，并加入吡啶作为缚酸剂(缚酸剂与7-槲皮素氧乙酰氯摩尔比1:2)，室温反应。反应结束后，将反应液透析三天，冷冻干燥，得葡聚糖-槲皮素聚合物Dex-QT。
对实施例5中的槲皮素和五乙酰槲皮素进行红外光谱检测，如图1所示，槲皮素中3408cm-1处为-OH的伸缩振动峰，波数范围在1657cm-1～1562cm-1之间的吸收峰，主要为苯环上C＝C伸缩振动和C＝O的伸缩振动峰，波数范围在1500cm-1～1100cm-1之间的吸收峰，主要为C-H的面内摇摆振动和C-O的伸缩和弯曲振动耦合。五乙酰槲皮素中，位于3408cm-1处的吸收峰消失，说明槲皮素中的五个酚羟基全部发生了反应，而在2936cm-1处出现了新的吸收峰，此为乙酰基中C-H的伸缩振动峰，1776cm-1处出现的强峰为新生成的酯键中C＝O的吸收峰，苯环骨架吸收峰基本没有变化，初步证明成功合成了目标化合物。对实施例5中的五乙酰槲皮素进行质谱检测分析，如图2所示，质荷比m/z＝586.20为五乙酰槲皮素的[M+CH3OH+CH3CN+H]+峰，进一步证明成功合成了目标化合物。
对实施例5中的五乙酰槲皮素进行核磁氢谱测定分析，如图3所示：化学位移为2.34处出现了新的质子信号峰，以8位上的氢为基准，积分面积为1，计算得出新的质子峰的相对积分面积为15.28，积分面积比约为1:15，因此判断2.34为五乙酰槲皮素中甲基氢的质子信号峰。1H-NMR中氢质子信号峰的出峰位置和相对积分面积，证明了五乙酰槲皮素结构正确。
对实施例5中的7-槲皮素氧乙酸乙酯进行质谱检测分析，如图4所示，图中质荷比m/z＝595.15为7-槲皮素氧乙酸乙酯的[M+K+H]+峰，质荷比m/z＝579.15为7-槲皮素氧乙酸乙酯的[M+Na+H]+峰，证明成功合成了目标化合物，且含量较高。
对实施例5中的槲皮素和7-槲皮素氧乙酸进行红外光谱检测，如图5所示，与槲皮素QT的红外吸收峰相比，7-槲皮素氧乙酸在1735cm-1处出现了新的吸收峰，游离羧酸的C＝O的伸缩振动峰位于1770～1750cm-1之间，由于形成二缔合体，受氢键的影响，C＝O的吸收峰向低波段移动，所以判断该峰为羧基中C＝O的伸缩振动峰。位于3000～2300cm-1之间有一宽而散的吸收峰，游离羧酸的-OH伸缩振动吸收峰位于3400cm-1左右，其二聚体的吸收峰向低波段移动，所以判断该峰为缔合体羧基中-OH的吸收峰。其他位置的峰形与槲皮素QT基本一致，初步证明成功合成了目标化合物。
对实施例5中的7-槲皮素氧乙酸的重结晶进行质谱检测分析，如图6所示，质荷比m/z＝359.10为7-槲皮素氧乙酸的[M-H]+峰，质荷比m/z＝719.10为7-槲皮素氧乙酸的[2M-H]+峰，证明成功合成了目标产物。
对实施例5中的7-槲皮素氧乙酸进行核磁检测分析，如图7所示：化学位移2.51为氘代二甲基亚砜的溶剂峰，化学位移6.25为6位上氢的质子信号峰，化学位移6.49为8位上氢的质子信号峰，化学位移6.87为5’位上氢的质子信号峰，化学位移7.58为6’位上氢的质子信号峰，化学位移7.72为2’位上氢的质子信号峰。化学位移4.38处出现了新的质子信号峰，以8位上的氢为基准，积分面积为1，计算得出新的质子信号峰的相对积分面积为2.15，积分面积比约为1:2，由此判断化学位移4.38为7-槲皮素氧乙酸中-CH2的氢质子信号峰。结合1H-NMR中氢质子信号峰的出峰位置和相对积分面积，证明7-槲皮素氧乙酸结构正确。
对实施例5中的7-槲皮素氧乙酸和7-槲皮素氧乙酰氯进行红外光谱检测，如图8所示，由图8可知，与7-槲皮素氧乙酸相比，7-槲皮素氧乙酰氯在1799cm-1处出现了新的吸收峰，为酰氯中C＝O的伸缩振动峰，证明该反应成功生成了目标化合物。然而1710cm-1处出现了新的吸收峰，推测可能为槲皮素QT母环上3-OH发生了酮式-烯醇式互变异。
对实施例5中的葡聚糖、7-槲皮素氧乙酰氯和葡聚糖-槲皮素聚合物进行红外光谱检测，如图9所示，由图9可知，葡聚糖Dex的谱图中，3400cm-1左右为-OH的伸缩振动峰，2975cm-1处为C-H的伸缩振动峰，1656cm-1处为-OH的弯曲振动峰。葡聚糖-槲皮素聚合物的谱图中，2924cm-1处为聚合物连接键上-CH2的伸缩振动峰，1640cm-1处为新生成的酯键的吸收峰，初步证明成功合成了目标产物。对比7-槲皮素氧乙酰氯与葡聚糖-槲皮素聚合物的谱图，发现两者在1509cm-1处都存在吸收峰，而Dex在此处无吸收，这也侧面证实了葡聚糖Dex与槲皮素QT的成功缀合。
对实施例5中的葡聚糖-槲皮素聚合物进行核磁检测分析，如图10所示：化学位移4.64为氘代水的溶剂峰，化学位移3.39为葡萄糖单元4位上氢的质子信号峰，化学位移3.44为葡萄糖单元2位上氢的质子信号峰，化学位移3.58为葡萄糖单元3位上氢的质子信号峰，化学位移3.60为葡萄糖单元6位上氢的质子信号峰，化学位移3.76为葡萄糖单元5位上氢的质子信号峰，化学位移3.84为葡萄糖单元6’位上氢的质子信号峰，化学位移4.84为葡萄糖单元1位上氢的质子信号峰。在化学位移5.93、7.92、8.46、8.64和δ1.17处出现了新的化学信号峰。结合1H-NMR中氢质子信号峰的出峰位置和相对积分面积，证明成功合成了葡聚糖-槲皮素聚合物。
以上所述实施方式仅为本发明的优选实施例，而并非本发明可行实施的全部实施例。对于本领域一般技术人员而言，在不背离本发明原理和精神的前提下对其所作出的任何显而易见的改动，都应当被认为包含在本发明的权利要求保护范围之内。

Claims (6)

1.一种葡聚糖-槲皮素前药聚合物的制备方法，其特征是，
葡聚糖-槲皮素前药聚合物反应式如下所示：
Figure 453472DEST_PATH_IMAGE001
制备方法具体步骤如下：
S1. 五乙酰槲皮素FAQ的合成：将槲皮素QT溶于溶剂吡啶中，60℃加热搅拌至槲皮素QT完全溶解后将反应体系转移到-4℃冰浴条件下，向反应体系中滴加乙酰化试剂乙酸酐，室温搅拌；乙醇冰浴沉淀后进行除杂纯化处理，抽滤，乙醇清洗，最后真空干燥，得五乙酰槲皮素FAQ；
S2. 7-槲皮素氧乙酸乙酯QEA的合成：将五乙酰槲皮素FAQ、除水剂无水碳酸钾、催化剂碘化钾加入丙酮溶解，使反应体系处于氮气保护状态下；60-80℃后滴加溴乙酸乙酯，60-80℃反应12-24h；将反应物进行后处理，抽滤，旋干，得7-槲皮素氧乙酸乙酯QEA；
S3. 7-槲皮素氧乙酸QE的合成：用甲醇将7-槲皮素氧乙酸乙酯QEA溶解，升温至80℃，加入氢氧化钾溶液，溶液颜色发生变化；然后将反应体系冷却至-4℃，利用盐酸调节体系pH值至2-3；将反应物进行后处理，抽滤，水洗，并对其进行重结晶，旋干，最后真空干燥，得7-槲皮素氧乙酸QE；
S4. 7-槲皮素氧乙酰氯QE-Cl的合成：将7-槲皮素氧乙酸QE在-4℃冰浴条件下滴加二氯亚砜，于70-80℃条件下反应，并进行尾气回收，旋干，得7-槲皮素氧乙酰氯QE-Cl；
S5. 葡聚糖-槲皮素聚合物Dex-QT的合成：将7-槲皮素氧乙酰氯QE-Cl和葡聚糖Dex粉末溶解于1~20 mL的DMSO中，并加入缚酸剂吡啶，室温反应；反应结束后，将反应液透析，冷冻干燥，得葡聚糖-槲皮素聚合物Dex-QT。
2.如权利要求1所述的一种葡聚糖-槲皮素前药聚合物的制备方法，其特征是，所述步骤S1中槲皮素与乙酸酐的摩尔比例为1：1~5，槲皮素与吡啶的摩尔比例为1~5：1；所述的除杂纯化处理为抽滤、乙醇清洗去除溶剂；所述的乙醇均为70 %乙醇。
3.如权利要求1所述的一种葡聚糖-槲皮素前药聚合物的制备方法，其特征是，所述步骤S2中五乙酰槲皮素与溴乙酸乙酯的摩尔比例为1~10:1，五乙酰槲皮素与丙酮的质量比为3:1~5，五乙酰槲皮素与碘化钾的质量比为1~10:1；所述的后处理为抽滤、旋蒸去除溶剂。
4.如权利要求1所述的一种葡聚糖-槲皮素前药聚合物的制备方法，其特征是，所述步骤S3中的氢氧化钾的质量分数为13%，盐酸的浓度为2.5 mol/L，所述的后处理为抽滤去除残渣，对溶液水洗、重结晶，后旋干滤液。
5.如权利要求1所述的一种葡聚糖-槲皮素前药聚合物的制备方法，其特征是，所述步骤S4中7-槲皮素氧乙酸与二氯亚砜的摩尔比例为5~10:1，所述的尾气为氯化氢和二氧化硫气体，所述的尾气回收的溶液选自氢氧化钾、碳酸钾、氢氧化钠或碳酸钠中的任一种。
6.如权利要求1所述的一种葡聚糖-槲皮素前药聚合物的制备方法，其特征是，所述步骤S5中7-槲皮素氧乙酰氯与葡聚糖的摩尔比为1:1，7-槲皮素氧乙酰氯与缚酸剂吡啶的摩尔比为1:1，所述的透析为去离子水透析，每6h换一次水。
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