CN110250209A - 一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂及其制备方法和应用,所述微生物菌剂包括以下重量份的组分：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)25～30份，解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)40～50份，胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)20～35份，吐温‑20 0.05～0.15份、氮酮0.005～0.015份；本发明的微生物菌剂，经验证具有防治烟草霉烂病的功能，通过生长优势在烟叶叶柄形成竞争占位，同时其代谢产物能够抑制有害真菌，从而抑制病原菌的生长。

Description

一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂及其制备方法和 应用
技术领域
本发明涉及微生物菌剂领域，尤其涉及一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂及其制备方法和应用。
背景技术
烟叶霉烂病是烟叶烘烤期发生的一种新的侵染性病害，其病原为米根霉，侵染时间为大田期，发病时间为烘烤期，该菌最适宜生长温度为35℃-40℃，pH值为5-8，适当的光照有利其生长发育。霉烂病分为“叶柄霉烂型”和“叶片霉烂型”，烘烤期的高温、烟叶表面的高湿度和烟叶组织较高含水量、烟叶创伤和采摘伤口是诱发烟叶霉烂病的重要条件。
近年来，全国个别烟区在烟叶在烘烤过程中均存在不同程度的“霉烂病”，尤其是东南烟区以及在成熟采烤期易遭遇低温多雨天气的烟区。2014年-2018年，我国西南某省市的烟叶在成熟采烤期出现部分叶片发霉的现象，主要从叶柄开始，逐渐往叶片蔓延，即“霉烂病”，烟叶霉烂病发病率为20-30％，并呈逐年上升的态势。
烟叶霉烂病会造成烟叶在烘烤过程中很大的损失，是烟叶烘烤损失的重要途径之一。目前防治烟叶霉烂病的主要方法是烘烤前期用二氧化氯和三氯异氰尿酸熏蒸处理烤房和上烤烟叶，对烟叶霉烂病具有一定的防治效果，但由于其属于化学药剂，对于烟叶的安全性有很大的影响，且防治效果仅能达到30-40％，所以并不建议使用。
鉴于烟叶的应用特性，绿色健康地进行烟叶的生产对于烟草行业的发展至关重要。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足而提供一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂的制备及应用，实现了对烟草霉烂病的生物防治，保证烟草制品的优质安全生产。
为达到上述目的，本发明通过以下技术方案来实现。
一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂，所述微生物菌剂包括以下重量份的组分：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)25～30份，解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)40～50份，胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)20～35份，吐温-20 0.05～0.15份、氮酮0.005～0.015份；
所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为：CGMCC NO.15841；
所述解淀粉芽孢杆菌的保藏编号为：CGMCC NO.15851；
所述胶质芽孢杆菌的保藏编号为：CGMCC NO.15845；
所述微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一，菌株发酵，分别将枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌进行单独发酵，发酵完成后菌株的发酵液中有效活菌数达到2.0×109cfu/ml以上；
步骤二，菌剂混配，取重量份的枯草芽孢杆菌25～30份、解淀粉芽孢杆菌40～50份、胶质芽孢杆菌20～35份、吐温-20 0.05～0.15份、氮酮0.005～0.015份进行混合，混合均匀即可。
进一步的，所述枯草芽孢杆菌的培养基包括以下重量份的组分：玉米粉5～10份、蔗糖5～15份、牛肉膏1～3份、黄豆粉5～10份、碳酸钙4～8份、酵母膏3～5份、氯化钾0.2～0.7份、硫酸锰0.1～0.5份、氯化钠5～15份、消泡剂1～3份；
所述枯草芽孢杆菌的接种量(质量百分数)为0.1％～0.5％；
所述枯草芽孢杆菌的好氧培养温度为35～37℃，培养2～3天；
所述解淀粉芽孢杆菌的培养基包括以下重量份的组分：黄豆粉5～10份、蔗糖5～8份、蛋白胨2～5份、玉米粉5～8份、碳酸钙3～8份、鱼粉3～10份、磷酸二氢钾0.3～0.5份、硫酸锰0.1～0.3份、氢氧化钠0.1～0.4份、氯化钠5～8份、消泡剂1～2份；
所述解淀粉芽孢杆菌的接种量(质量百分数)为0.5％～1％；
所述解淀粉芽孢杆菌的好氧培养温度为33～37℃，培养1～3天；
所述胶质芽孢杆菌的培养基包括以下重量份的组分：黄豆粉7～11份、蔗糖20～28份、碳酸钙1～3份、硫酸镁2～8份、磷酸二氢钾2～6份、氯化铁0.1～0.3份、消泡剂1～2份；
所述胶质芽孢杆菌的接种量(质量百分数)为0.1％～0.5％；
所述胶质芽孢杆菌的好氧培养温度为33～38℃，培养1～3天。
所述微生物菌剂的使用方法为：将所述功能菌剂按照重量比用水稀释至50～200倍液，在烟叶烘烤前进行叶柄浸泡，浸泡时间10-30min，浸泡完成后将烟叶在阴凉处晾干，烟叶晾干后再进行烘烤，防效可达98％-100％。
所述微生物菌剂的使用方法为：将所述功能菌剂按照重量比用水稀释至50～200倍液，在烤烟烘烤前进行叶柄喷淋，喷淋完成后将烟叶在阴凉处晾干，烟叶晾干后再进行烘烤，防效可达95～100％。
一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂应用，应用在防治烟草烘烤霉烂病的微生物菌剂中。
本发明的微生物菌剂，经验证具有防治烟草霉烂病的功能，通过生长优势在烟叶叶柄形成竞争占位，同时其代谢产物能够抑制有害真菌，从而抑制病原菌的生长。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明，但不局限于说明书上的内容。
一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂，它包括以下重量份的组分，编号为WSWFJ-1的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)25～30份、编号为WSWFJ-11的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)40～50份、编号为WSWFJ-5的胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)20～35份、助剂吐温-20 0.05～0.15份、助剂氮酮0.005～0.015份。
所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为：CGMCC NO.15841；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏时间：2018年6月4日；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
所述解淀粉芽孢杆菌的保藏编号为：CGMCC NO.15851；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏时间：2018年6月4日；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
所述胶质芽孢杆菌的保藏编号为：CGMCC NO.15845；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏时间：2018年6月4日；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
所述枯草芽孢杆菌培养基配方按重量份数如下：玉米粉5～10份、蔗糖5～15份、牛肉膏1～3份、黄豆粉5～10份、碳酸钙4～8份、酵母膏3～5份、氯化钾0.2～0.7份、硫酸锰0.1～0.5份、氯化钠5～15份、消泡剂1～3份；
所述枯草芽孢杆菌的接种量(质量百分数)为0.1％～0.5％。
所述枯草芽孢杆菌的好氧培养温度为35～37℃，培养2～3天。
所述解淀粉芽孢杆菌培养基配方按重量份数如下：黄豆粉5～10份、蔗糖5～8份、蛋白胨2～5份、玉米粉5～8份、碳酸钙3～8份、鱼粉3～10份、磷酸二氢钾0.3～0.5份、硫酸锰0.1～0.3份、氢氧化钠0.1～0.4份、氯化钠5～8份、消泡剂1～2份；
所述解淀粉芽孢杆菌的接种量(质量百分数)为0.5％～1％。
所述解淀粉芽孢杆菌的好氧培养温度为33～37℃，培养1～3天。
所述胶质芽孢杆菌培养基配方按重量份数如下：黄豆粉7～11份、蔗糖20～28份、碳酸钙1～3份、硫酸镁2～8份、磷酸二氢钾2～6份、氯化铁0.1～0.3份、消泡剂1～2份；
所述胶质芽孢杆菌的接种量(质量百分数)为0.1％～0.5％。
所述胶质芽孢杆菌的好氧培养温度为33～38℃，培养1～3天。
制备方法：
a.菌株发酵：将上述三株功能菌株进行单独发酵，发酵完成后菌株的发酵液中有效活菌数均应达到2.0×109cfu/ml以上；
b.菌剂混配：按重量份数，将编号为WSWFJ-1的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)25～30份、编号为WSWFJ-11的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)40～50份、编号为WSWFJ-5的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)20～35份、助剂吐温-200.05～0.15份、助剂氮酮0.005～0.015份进行混合，即得一种具有防治烟草霉烂病功能的功能微生物菌剂。
所述的助剂吐温-20与氮酮均为工业级吐温-20，添加到复合菌剂中可以增加微生物菌剂的粘着性，加强其在烟叶上的附着力，增强菌剂对烟草霉烂病的防控效果。
使用方法：①将功能菌剂按照重量比用水稀释至50～200倍液，用于烟叶烘烤前进行叶柄浸泡，浸泡时间10-30min，浸泡完成后将烟叶在阴凉处晾干，再进行烘烤，防效可达98％-100％(例如该防效率使用本微生物菌剂处理后，100片烟叶中发霉1片，防效率就是99％)。
②将功能菌剂按照重量比用水稀释至50～200倍液，用于烤烟烘烤前进行叶柄喷淋，喷淋完成后将烟叶在阴凉处晾干，再进行烘烤，防效可达95～100％。
具体实施例1
一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂，由编号为WSWFJ-1的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、编号为WSWFJ-11的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)及编号为WSWFJ-5的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)经过单独发酵，按照一定比例与助剂复配而成。
一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂的制备方法如下：
(1)菌株发酵：将上述三株功能菌株进行单独发酵，发酵完成后菌株的发酵液中有效活菌数均达到2.0×109cfu/ml以上；
(2)菌剂混配：按重量百分比将编号为WSWFJ-1的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)25份、编号为WSWFJ-11的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)40份、编号为WSWFJ-5的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)35份、助剂吐温-20 0.05份、助剂氮酮0.005份进行混合，即得一种具有防治烟草霉烂病功能的功能微生物菌剂。
所述的助剂吐温-20与氮酮均为工业级，添加到复合菌剂中可以增加微生物菌剂的粘着性，加强其在烟叶上的附着力，增强菌剂对烟草霉烂病的防控效果。
一种具有防治烟草霉烂病功能的功能微生物菌剂的施用，可以采用以下方法：将功能菌剂按照重量比用水稀释至50倍液，用于烟叶烘烤前进行叶柄浸泡，浸泡时间10min，浸泡完成后将烟叶在阴凉处晾干，再进行烘烤，防效可达98％-100％。
编号为WSWFJ-1的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、编号为WSWFJ-11的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)及编号为WSWFJ-5的胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)按照一定比例配伍，经验证具有防治烟草霉烂病的功能，通过生长优势在烟叶叶柄形成竞争占位，同时其代谢产物能够抑制有害真菌，从而抑制病原菌的生长。
所述枯草芽孢杆菌培养基配方按重量份数如下：玉米粉5份、蔗糖10份、牛肉膏2份、黄豆粉8份、碳酸钙6份、酵母膏4份、氯化钾0.2份、硫酸锰0.1份、氯化钠5份、消泡剂1份；
所述枯草芽孢杆菌的接种量(质量百分数)为0.1％％。
所述枯草芽孢杆菌的好氧培养温度为37℃，培养2天。
所述解淀粉芽孢杆菌培养基配方按重量份数如下：黄豆粉10份、蔗糖5份、蛋白胨2份、玉米粉8份、碳酸钙6份、鱼粉5份、磷酸二氢钾0.3份、硫酸锰0.1份、氢氧化钠0.1份、氯化钠8份、消泡剂2份；
所述解淀粉芽孢杆菌的接种量(质量百分数)为0.5％。
所述解淀粉芽孢杆菌的好氧培养温度为33℃，培养3天。
所述胶质芽孢杆菌培养基配方按重量份数如下：黄豆粉9份、蔗糖24份、碳酸钙1份、硫酸镁3份、磷酸二氢钾4份、氯化铁0.1份、消泡剂1份；
所述胶质芽孢杆菌的接种量(质量百分数)为0.5％。
所述胶质芽孢杆菌的好氧培养温度为35℃，培养2天。
具体实施例2
一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂，由编号为WSWFJ-1的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、编号为WSWFJ-11的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)及编号为WSWFJ-5的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)经过单独发酵，按照一定比例与助剂复配而成。
一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂的制备方法如下：
(1)菌株发酵：将上述三株功能菌株进行单独发酵，发酵完成后菌株的发酵液中有效活菌数均达到2.0×109cfu/ml以上；
(2)菌剂混配：按重量百分比将编号为WSWFJ-1的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)30份、编号为WSWFJ-11的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)50份、编号为WSWFJ-5的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)20份、助剂吐温-20 0.15份、助剂氮酮0.015份进行混合，即得一种具有防治烟草霉烂病功能的功能微生物菌剂。
所述的助剂吐温-20与氮酮均为工业级，添加到复合菌剂中可以增加微生物菌剂的粘着性，加强其在烟叶上的附着力，增强菌剂对烟草霉烂病的防控效果。
一种具有防治烟草霉烂病功能的功能微生物菌剂的施用，可以采用以下方法：将功能菌剂按照重量比用水稀释至200倍液，用于烤烟烘烤前进行叶柄喷淋，喷淋完成后将烟叶在阴凉处晾干，再进行烘烤，防效可达95～100％。
编号为WSWFJ-1的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、编号为WSWFJ-11的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)及编号为WSWFJ-5的胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)按照一定比例配伍，经验证具有防治烟草霉烂病的功能，通过生长优势在烟叶叶柄形成竞争占位，同时其代谢产物能够抑制有害真菌，从而抑制病原菌的生长。
所述枯草芽孢杆菌培养基配方按重量份数如下：玉米粉10份、蔗糖15份、牛肉膏1份、黄豆粉5份、碳酸钙4份、酵母膏3份、氯化钾0.2份、硫酸锰0.1份、氯化钠15份、消泡剂3份；
所述枯草芽孢杆菌的接种量(质量百分数)为0.3％，
所述枯草芽孢杆菌的好氧培养温度为36℃，培养2天。
所述解淀粉芽孢杆菌培养基配方按重量份数如下：黄豆粉10份、蔗糖8份、蛋白胨2份、玉米粉5份、碳酸钙4份、鱼粉7份、磷酸二氢钾0.4份、硫酸锰0.2份、氢氧化钠0.2份、氯化钠6份、消泡剂2份；
所述解淀粉芽孢杆菌的接种量(质量百分数)为1％，
所述解淀粉芽孢杆菌的好氧培养温度为35℃，培养2天。
所述胶质芽孢杆菌培养基配方按重量份数如下：黄豆粉11份、蔗糖28份、碳酸钙1份、硫酸镁2份、磷酸二氢钾2份、氯化铁0.2份、消泡剂1.5份；
所述胶质芽孢杆菌的接种量(质量百分数)为0.2％，
所述胶质芽孢杆菌的好氧培养温度为37℃，培养2天。
具体实施例3
一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂，由编号为WSWFJ-1的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、编号为WSWFJ-11的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)及编号为WSWFJ-5的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)经过单独发酵，按照一定比例与助剂复配而成。
一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂的制备方法如下：
(1)菌株发酵：将上述三株功能菌株进行单独发酵，发酵完成后菌株的发酵液中有效活菌数均达到2.0×109cfu/ml以上；
(2)菌剂混配：按重量百分比将编号为WSWFJ-1的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)28份、编号为WSWFJ-11的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)45份、编号为WSWFJ-5的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)27份、助剂吐温-20 0.1份、助剂氮酮0.01份进行混合，即得一种具有防治烟草霉烂病功能的功能微生物菌剂。
所述的助剂吐温-20与氮酮均为工业级，添加到复合菌剂中可以增加微生物菌剂的粘着性，加强其在烟叶上的附着力，增强菌剂对烟草霉烂病的防控效果。
一种具有防治烟草霉烂病功能的功能微生物菌剂的施用，可以采用以下方法：将功能菌剂按照重量比用水稀释至200倍液，用于烤烟烘烤前进行叶柄喷淋，喷淋完成后将烟叶在阴凉处晾干，再进行烘烤，防效可达95～100％。
编号为WSWFJ-1的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、编号为WSWFJ-11的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)及编号为WSWFJ-5的胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)按照一定比例配伍，经验证具有防治烟草霉烂病的功能，通过生长优势在烟叶叶柄形成竞争占位，同时其代谢产物能够抑制有害真菌，从而抑制病原菌的生长。
所述枯草芽孢杆菌培养基配方按重量份数如下：玉米粉8份、蔗糖10份、牛肉膏2份、黄豆粉7份、碳酸钙6份、酵母膏4份、氯化钾0.4份、硫酸锰0.3份、氯化钠10份、消泡剂2份；
所述枯草芽孢杆菌的接种量(质量百分数)为0.2％，
所述枯草芽孢杆菌的好氧培养温度为36℃，培养3天。
所述解淀粉芽孢杆菌培养基配方按重量份数如下：黄豆粉8份、蔗糖6份、蛋白胨4份、玉米粉6份、碳酸钙5份、鱼粉7份、磷酸二氢钾0.4份、硫酸锰0.2份、氢氧化钠0.3份、氯化钠7份、消泡剂1份；
所述解淀粉芽孢杆菌的接种量(质量百分数)为0.8％，
所述解淀粉芽孢杆菌的好氧培养温度为36℃，培养2天。
所述胶质芽孢杆菌培养基配方按重量份数如下：黄豆粉9份、蔗糖25份、碳酸钙2份、硫酸镁5份、磷酸二氢钾4份、氯化铁0.2份、消泡剂1份；
所述胶质芽孢杆菌的接种量(质量百分数)为0.3％，
所述胶质芽孢杆菌的好氧培养温度为34℃，培养3天。
以下是本发明功能微生物菌剂的试验效果
效果验证一：采用实施例1中得到的产品及其施用方法进行验证一、目的及意义
烟叶霉烂病是烟叶烘烤期发生的一种新的侵染性病害，会造成烟叶在烘烤过程20％左右的损失，是烟叶烘烤损失的重要途径之一。本方案根据生防菌的防治功能，通过使用微生物菌剂浸泡叶柄，抑制病原菌的生长，达到防治的目的。
二、材料与方法
1、试验地点
云南省曲靖市宣威市格宜镇石磨村
2、试验材料
防霉烂病功能微生物菌剂
3、供试品种
云烟87
1.4、试验设计
试验设2个处理，每处理一个烤房，不设重复，各处理除使用农用微生物菌剂外，其他措施一致，按优质烟烘烤管理进行烘烤，试验设置如下：
处理一：当地常规烘烤；
处理二：农用微生物菌剂50倍液浸泡；
浸泡处理要求按照稀释倍数准确稀释，在编烟前或编烟后将烟叶叶柄在稀释液中浸泡10分钟，拿出后在阴凉处晾干，叶片不再滴水即可上架烘烤。
三、防治效果统计
四、结果与分析
通过对处理一与处理二的防治效果进行对比，可以看出施用防霉烂病功能微生物菌剂的烟叶病情指数较常规大大降低，相对防治效果达到98.15％，是一种绿色、高效、便捷的烟草霉烂病防控产品。
效果验证一：采用实施例2中得到的产品及其施用方法进行验证一、目的及意义
烟叶霉烂病是烟叶烘烤期发生的一种新的侵染性病害，会造成烟叶在烘烤过程20％左右的损失，是烟叶烘烤损失的重要途径之一。本方案根据生防菌的防治功能，通过使用微生物菌剂喷淋叶柄，抑制病原菌的生长，达到防治的目的。
二、材料与方法
1、试验地点
云南省曲靖市宣威市热水镇色卡村
2、试验材料
防霉烂病功能微生物菌剂
3、供试品种
云烟87
1.4、试验设计
试验设2个处理，每处理一个烤房，不设重复，各处理除使用农用微生物菌剂外，其他措施一致，按优质烟烘烤管理进行烘烤，试验设置如下：
处理一：当地常规烘烤；
处理二：农用微生物菌剂200倍液喷淋；
喷淋处理要求按照稀释倍数准确稀释，喷淋在烟柄部位，均匀喷淋，确保每片烟叶叶柄都喷淋均匀，喷淋后在阴凉处晾干，叶片不再滴水即可上架烘烤。
三、防治效果统计
处理 病情指数 发病率(％) 相对防治效果(％)
处理一 21.11±0.04a 50±0.44a -
处理二 0.04±0.06b 0.33±0.58c 99.82±0.58
四、结果与分析
通过对处理一与处理二的防治效果进行对比，可以看出施用防霉烂病功能微生物菌剂的烟叶病情指数较常规大大降低，相对防治效果达到99.82％，喷淋施用对于烟草霉烂病的防治效果非常好。
显然，本发明的上述实施方式仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。

Claims (5)

1.一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂，其特征在于：所述微生物菌剂包括以下重量份的组分：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)25～30份，解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)40～50份，胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)20～35份，吐温-20 0.05～0.15份、氮酮0.005～0.015份；
所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为：CGMCC NO.15841；
所述解淀粉芽孢杆菌的保藏编号为：CGMCC NO.15851；
所述胶质芽孢杆菌的保藏编号为：CGMCC NO.15845；
所述微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一，菌株发酵，分别将枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌进行单独发酵，发酵完成后菌株的发酵液中有效活菌数达到2.0×109cfu/ml以上；
步骤二，菌剂混配，取重量份的枯草芽孢杆菌25～30份、解淀粉芽孢杆菌40～50份、胶质芽孢杆菌20～35份、吐温-20 0.05～0.15份、氮酮0.005～0.015份进行混合，混合均匀即可。
2.根据权利要求1所述的一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂，其特征在于：
所述枯草芽孢杆菌的培养基包括以下重量份的组分：玉米粉5～10份、蔗糖5～15份、牛肉膏1～3份、黄豆粉5～10份、碳酸钙4～8份、酵母膏3～5份、氯化钾0.2～0.7份、硫酸锰0.1～0.5份、氯化钠5～15份、消泡剂1～3份；
所述枯草芽孢杆菌的接种量(质量百分数)为0.1％～0.5％；
所述枯草芽孢杆菌的好氧培养温度为35～37℃，培养2～3天；
所述解淀粉芽孢杆菌的培养基包括以下重量份的组分：黄豆粉5～10份、蔗糖5～8份、蛋白胨2～5份、玉米粉5～8份、碳酸钙3～8份、鱼粉3～10份、磷酸二氢钾0.3～0.5份、硫酸锰0.1～0.3份、氢氧化钠0.1～0.4份、氯化钠5～8份、消泡剂1～2份；
所述解淀粉芽孢杆菌的接种量(质量百分数)为0.5％～1％；
所述解淀粉芽孢杆菌的好氧培养温度为33～37℃，培养1～3天；
所述胶质芽孢杆菌的培养基包括以下重量份的组分：黄豆粉7～11份、蔗糖20～28份、碳酸钙1～3份、硫酸镁2～8份、磷酸二氢钾2～6份、氯化铁0.1～0.3份、消泡剂1～2份；
所述胶质芽孢杆菌的接种量(质量百分数)为0.1％～0.5％；
所述胶质芽孢杆菌的好氧培养温度为33～38℃，培养1～3天。
3.根据权利要求1所述的一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂：其特征在于：所述微生物菌剂的使用方法为：将所述功能菌剂按照重量比用水稀释至50～200倍液，在烟叶烘烤前进行叶柄浸泡，浸泡时间10-30min，浸泡完成后将烟叶在阴凉处晾干，烟叶晾干后再进行烘烤，防效可达98％-100％。
4.根据权利要求1所述的一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂：其特征在于：所述微生物菌剂的使用方法为：将所述功能菌剂按照重量比用水稀释至50～200倍液，在烤烟烘烤前进行叶柄喷淋，喷淋完成后将烟叶在阴凉处晾干，烟叶晾干后再进行烘烤，防效可达95～100％。
5.根据权利要求1所述的一种具有防治烟草霉烂病功能的微生物菌剂应用，应用在防治烟草烘烤霉烂病的微生物菌剂中。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110786532A (zh) * 2019-11-20 2020-02-14 云南省烟草农业科学研究院 一种利用菌种降低不同品种烤烟TSNAs的烘烤方法
CN111286472A (zh) * 2019-12-20 2020-06-16 云南省微生物发酵工程研究中心有限公司 一种具有产香功能的解淀粉芽孢杆菌及其制备方法和应用
CN112500223A (zh) * 2020-11-30 2021-03-16 云南省微生物发酵工程研究中心有限公司 一种适用于红花大金元的生物有机无机肥料及其制备方法
CN114717006A (zh) * 2022-03-11 2022-07-08 四川爱隆植物营养科技有限公司 一种微生物松土剂
CN115678810A (zh) * 2022-11-18 2023-02-03 云南省烟草农业科学研究院 用于防治烟草霉烂病的复合菌剂、发酵方法及其施用方法

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103131655A (zh) * 2013-03-06 2013-06-05 江苏苏滨生物农化有限公司 解淀粉芽孢杆菌k-8及其菌剂
CN105410030A (zh) * 2015-12-29 2016-03-23 西南大学 叶面喷施微生物菌剂防治烟叶烘烤中白粉菌侵染的方法
CN106047747A (zh) * 2016-05-18 2016-10-26 中国烟草总公司广东省公司 一株耐高温解淀粉芽孢杆菌ytk1及其在烟叶烘烤中的应用
CN106187613A (zh) * 2016-07-19 2016-12-07 华南农业大学 一种用于紫色土烤烟根系调理产品及制备方法与应用
CN107523524A (zh) * 2017-10-12 2017-12-29 天津坤禾生物科技股份有限公司 一种防治番茄黄萎病的复合菌剂及其制备方法和应用
CN107723258A (zh) * 2017-10-11 2018-02-23 杨建设 防治烟草青枯病的复合菌剂及其制备方法
CN109652329A (zh) * 2018-12-28 2019-04-19 云南省微生物发酵工程研究中心有限公司 一种芽孢杆菌属固体微生物菌剂的制备及应用
CN109674081A (zh) * 2018-12-25 2019-04-26 贵州省烟草科学研究院 一种用于防治烘烤期烟叶霉烂病的烟熏剂、其制备方法及用途

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103131655A (zh) * 2013-03-06 2013-06-05 江苏苏滨生物农化有限公司 解淀粉芽孢杆菌k-8及其菌剂
CN105410030A (zh) * 2015-12-29 2016-03-23 西南大学 叶面喷施微生物菌剂防治烟叶烘烤中白粉菌侵染的方法
CN106047747A (zh) * 2016-05-18 2016-10-26 中国烟草总公司广东省公司 一株耐高温解淀粉芽孢杆菌ytk1及其在烟叶烘烤中的应用
CN106187613A (zh) * 2016-07-19 2016-12-07 华南农业大学 一种用于紫色土烤烟根系调理产品及制备方法与应用
CN107723258A (zh) * 2017-10-11 2018-02-23 杨建设 防治烟草青枯病的复合菌剂及其制备方法
CN107523524A (zh) * 2017-10-12 2017-12-29 天津坤禾生物科技股份有限公司 一种防治番茄黄萎病的复合菌剂及其制备方法和应用
CN109674081A (zh) * 2018-12-25 2019-04-26 贵州省烟草科学研究院 一种用于防治烘烤期烟叶霉烂病的烟熏剂、其制备方法及用途
CN109652329A (zh) * 2018-12-28 2019-04-19 云南省微生物发酵工程研究中心有限公司 一种芽孢杆菌属固体微生物菌剂的制备及应用

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110786532A (zh) * 2019-11-20 2020-02-14 云南省烟草农业科学研究院 一种利用菌种降低不同品种烤烟TSNAs的烘烤方法
CN110786532B (zh) * 2019-11-20 2021-07-23 云南省烟草农业科学研究院 一种利用菌种降低不同品种烤烟TSNAs的烘烤方法
CN111286472A (zh) * 2019-12-20 2020-06-16 云南省微生物发酵工程研究中心有限公司 一种具有产香功能的解淀粉芽孢杆菌及其制备方法和应用
CN111286472B (zh) * 2019-12-20 2022-07-05 云南省微生物发酵工程研究中心有限公司 一种具有产香功能的解淀粉芽孢杆菌及其制备方法和应用
CN112500223A (zh) * 2020-11-30 2021-03-16 云南省微生物发酵工程研究中心有限公司 一种适用于红花大金元的生物有机无机肥料及其制备方法
CN114717006A (zh) * 2022-03-11 2022-07-08 四川爱隆植物营养科技有限公司 一种微生物松土剂
CN115678810A (zh) * 2022-11-18 2023-02-03 云南省烟草农业科学研究院 用于防治烟草霉烂病的复合菌剂、发酵方法及其施用方法
CN115678810B (zh) * 2022-11-18 2023-07-28 云南省烟草农业科学研究院 用于防治烟草霉烂病的复合菌剂、发酵方法及其施用方法

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