CN105601358A - 一种防治草莓红中柱病的微生物有机肥及其生产方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种防治草莓红中柱病的微生物有机肥及其生产方法，将山东链霉菌、热噬淀粉芽孢杆菌分别制备得到一级种子液、二级种子液，然后进行发酵培养，将发酵培养后的菌液按体积比(1-3)：(5-10)混合，将混合后的菌液加入到粪料和蘑菇菌渣的初次堆肥发酵后的有机质中，进行再次发酵，混合后的菌液的加入量为10-20％；将再次发酵后的培养物低温干燥，即得。本发明的微生物有机肥所选用的微生物菌株之间不存在拮抗作用，各菌株及其代谢产物能够协同作用，共同抑制植物病原菌的增殖，起到防治病虫害的作用，特别是对于草莓红中柱病的防治效果显著，见效快，不会产生抗药性。

Description

一种防治草莓红中柱病的微生物有机肥及其生产方法
技术领域
本发明涉及一种防治草莓红中柱病的微生物有机肥及其生产方法。
背景技术
日光温室草莓红中柱根腐病(又称红心病、红心根腐病、褐心病)是近几年温室草莓生产上大面积发生的一种根部病害。在河北、辽宁、山东等草莓主栽区危害严重,常见有急性型和慢性型两种。急性型多在春夏两季发生，雨后叶尖突然萎凋，不久呈青枯状，引起全株迅速枯死。慢性型定植后至冬初均可发生，下部老叶叶缘变紫红色或紫褐色，逐渐向上扩展，全株萎蔫或枯死。草莓红中柱根腐病的发生在草莓大棚生产过程中越来越严重,草莓植株一旦感染该病，死亡率一般在90％以上，也就是说发生率就等于损失率。随着草莓连作年限增加，发病率逐年加重。
草莓红中柱病的病原为国内外的报道多为疫霉菌(Phytophthorafragariae)茄腐镰孢菌(Fusariumsolani)、尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)等真菌引起的。这些菌种腐生性强，寄主范围广，具有持久性的特点。病原真菌的孢子、孢子囊在没有寄主时能在土壤中存活很长时间,仍具浸染性。发病后病部长出孢子囊,灌溉水成雨水传播蔓延,进行再传染。lO月中、下旬扣棚后,棚室在闷湿情况下极易发病,重茬连作地,植株长势衰弱,发病重。温室大棚草莓的生长环境都较适合于红中柱菌病原菌的侵染与扩散，发病尤为严重，严重制约了草莓生产的进一步发展。
目前对于草莓红中柱病的防治主要采用化学防治，但是用于化学防治的药剂持效期短、施用次数多，长时间使用化学防治药剂病菌容易对其产生抗药性，防治效果降低，而且还会增加果实中的农药残留，对于食品安全造成影响。因此，寻求一种防治效果好、高效无残留、对人畜安全、无抗药性的草莓红中柱病的防治药物是目前亟待解决的问题。
发明内容
针对上述现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种防治草莓红中柱病的微生物有机肥及其生产方法。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种防治草莓红中柱病的微生物有机肥的生产方法，步骤如下：
(1)将粪料和蘑菇菌渣按质量比(30-60)：(40-70)混合，在湿度为40-70％的条件下进行初次堆肥发酵，得有机质；
(2)一级种子液的制备：将山东链霉菌、热噬淀粉芽孢杆菌分别接种到高氏一号培养基、LB培养基上进行培养，分别得到2株菌的一级种子液；
(3)将步骤(2)制备的山东链霉菌、热噬淀粉芽孢杆菌的一级种子液分别按体积分数为4％的接种量接种到发酵培养基上进行培养，分别得到各株菌的二级种子液；
(4)将步骤(3)制备的山东链霉菌、热噬淀粉芽孢杆菌的二级种子液分别按体积分数为10％、5％的接种量接种到发酵罐中，发酵培养；
(5)将步骤(4)中发酵培养后的山东链霉菌、热噬淀粉芽孢杆菌按体积比(1-3)：(5-10)混合，将混合后的菌液按重量百分含量为10-20％加入到步骤(1)的初次堆肥发酵后的有机质中，进行再次发酵；发酵温度为28-32℃，每天翻堆一次，发酵6-7天即可结束。
(6)将步骤(5)中再次发酵后的培养物，低温干燥，即得。
步骤(2)中，高氏一号培养基的组成为：按质量百分数计，可溶性淀粉20‰、KNO31‰、NaCl0.5‰、K2HPO40.5‰、MgSO40.5‰、FeSO40.01‰、琼脂20g，水1000ml，pH7.2-7.4。
LB培养基的组成为：蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠10g/L，PH7.2。
步骤(2)中，山东链霉菌一级种子液的培养条件为：26-30℃(优选为28℃)摇瓶培养48-52h(优选为50h)。热噬淀粉芽孢杆菌一级种子液的培养条件为：30-34℃(优选为32℃)摇瓶培养14-18h；
步骤(3)中，发酵培养基的组成为：麸皮5-20g/L、豆饼粉4-10g/L、玉米粉5-15g/L。
步骤(3)中，山东链霉菌二级种子液的培养条件为：26-30℃(优选为28℃)培养48-52h(优选为50h)。热噬淀粉芽孢杆菌二级种子液的培养条件为：30-34℃(优选为32℃)培养14h-24h；
步骤(4)中，山东链霉菌的发酵培养条件为26-30℃(优选为28℃)培养4-8天。热噬淀粉芽孢杆菌的发酵培养条件为：30-34℃(优选为32℃)培养24h-36h；
所述山东链霉菌为论文“高温链霉菌24#的初步研究”(李德舜，微生物学报2004年5期)记载的山东链霉菌(Streptomycesshandongensis).所述热噬淀粉芽孢杆菌(Bacillusthermoamylovorans)为常规的市售产品。
优选的，所述热噬淀粉芽孢杆菌，具体可以为中国高校微生物菌种目录编号为CICIMB1594的菌株；该菌株具有广泛地抑制真菌的能力，具有生物农药开发潜力的微生物。
采用本发明的方法生产得到的微生物有机肥中，有效活菌数≥5亿/g。
本发明的有益效果：
(1)本发明前期采用多种微生物对生物有机质进行发酵，能够大量分解有机质为植物所必须的葡萄糖、氨基酸、维生素群、生长素等活性物质和氮、磷、钾、微量元素，通过有机物料矿质化和腐殖化，养分由无效态和缓态变为有效态和速效态；这些物质是良好的植物生长调节剂物质，这些物质可以促进草莓生长，提高草莓的抗病能力，抑制红中柱菌的增殖，起到防治病害的作用。
(2)本发明所选用的微生物菌株之间不存在拮抗作用，其中山东链霉菌、热噬淀粉芽孢杆菌对植物病原真菌具有较强的抑制作用，各菌株及其代谢产物能够协同作用，对于草莓红中柱病的防治效果显著，见效快，不会产生抗药性。
(3)本发明的微生物有机肥，绿色环保，并通过对食用菌菌渣的再次利用，降低了生产成本。用于草莓基肥、蘸根，可促进作物生长发育，提高抗病能力，增加基土养分，增加产量，提高品质，降低成本。
具体实施方式
结合实施例对本发明作进一步的说明，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。
实施例1：用于防治草莓红中柱病的微生物有机肥的制备：
1.材料：
1.1菌株：山东链霉菌为山东大学论文“高温链霉菌24#的初步研究”(李德舜，微生物学报2004年5期)记载的山东链霉菌(Streptomycesshandongensis)；热噬淀粉芽孢杆菌为中国高校微生物菌种目录编号为CICIMB1594的菌株。
1.2培养基：
LB培养基：蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠10g/L，pH7.2，121℃20min灭菌。
高氏一号培养基：按质量百分数计，可溶性淀粉20‰、KNO31‰、NaCl0.5‰、K2HPO40.5‰、MgSO40.5‰、FeSO40.01‰、琼脂20g，水1000ml，pH7.2-7.4。
发酵培养基：麸皮10g/L、豆饼粉6g/L、玉米粉10g/L。
2.制备方法：
(1)将鸡粪和蘑菇菌渣按照质量比45：50混合，在湿度为60％的条件下进行堆肥发酵，当温度升到70℃后，每隔1-2天翻堆一次，发酵15天,得有机质。
(2)一级种子液制备：将山东链霉菌接种到高氏一号培养基,28℃摇瓶培养50h,得到山东链霉菌的一级种子液；将热噬淀粉芽孢杆菌接种到LB培养基上，32℃摇瓶培养18h，得到热噬淀粉芽孢杆菌的一级种子液。
(3)二级种子制备：将山东链霉菌、热噬淀粉芽孢杆菌的一级种子液分别按体积分数为4％的接种量接种到发酵培养基上进行培养，分别得到各株菌的二级种子液；山东链霉菌二级种子液的培养条件为：28℃培养50h。热噬淀粉芽孢杆菌二级种子液的培养条件为：32℃培养14h-24h。
(4)将步骤(3)制备的山东链霉菌、热噬淀粉芽孢杆菌的二级种子液分别按体积分数为10％、5％的接种量接种到发酵罐中，发酵培养；山东链霉菌的发酵培养条件为28℃培养6天。热噬淀粉芽孢杆菌的发酵培养条件为：32℃培养36h。
(5)将步骤(4)中发酵培养后的山东链霉菌、热噬淀粉芽孢杆菌按体积比2：7混合，将混合后的菌液按重量百分含量为15％加入到步骤(1)的初次堆肥发酵后的有机质中，进行再次发酵，发酵温度为28-32℃，每天翻堆一次，发酵6-7天即可结束。
(6)将步骤(5)中再次发酵后的培养物，低温干燥，装袋。
本实施例制备的得到的微生物有机肥中，有效活菌数为5亿/克。
实施例2：本发明的微生物有机肥对草莓红中柱病的防治作用
选取草莓红中柱病的发病田块，设计三个处理：处理1：对照(对照CK为施用普通有机肥)；处理2：施用复合木霉菌(广州市微生物科技有限公司)；处理3：施用本发明实施例1制备的微生物有机肥。
每个处理重复3次，施用量均为50Kg/亩，施用30天后进行统计分析。
测定方法：
病情指数和防治效果的测定：参照许博方法(许博.草莓根腐病的药剂防治效果。江苏农业科学，2011.39(4):131.132)
测定结果见表1.
表1不同处理对草莓红中柱病的防治效果
由表1可知，采用本发明的微生物有机肥对草莓红中柱病的防效达79.1％，与处理1和处理2相比，对草莓红中柱病的防治效果最好。

Claims (10)

1.一种防治草莓红中柱病的微生物有机肥的生产方法，其特征在于，步骤如下：
(1)将粪料和蘑菇菌渣按质量比(30-60)：(40-70)混合，在湿度为40-70％的条件下进行初次堆肥发酵，得有机质；
(2)一级种子液的制备：将山东链霉菌、热噬淀粉芽孢杆菌分别接种到高氏一号培养基、LB培养基上进行培养，分别得到各株菌的一级种子液；
(3)将步骤(2)制备的山东链霉菌、热噬淀粉芽孢杆菌的一级种子液分别接种到发酵培养基上进行培养，分别得到各株菌的二级种子液；
(4)将步骤(3)制备的山东链霉菌、热噬淀粉芽孢杆菌的二级种子液分别接种到发酵罐中，发酵培养；
(5)将步骤(4)中发酵培养后的山东链霉菌、热噬淀粉芽孢杆菌按体积比(1-3)：(5-10)混合，将混合后的菌液按重量百分含量为10-20％加入到步骤(1)的初次堆肥发酵后的有机质中，进行再次发酵；
(6)将步骤(5)中再次发酵后的培养物，低温干燥，即得。
2.根据权利要求1所述的防治草莓红中柱病的微生物有机肥的生产方法，其特征在于，步骤(2)中，高氏一号培养基的组成为：按质量百分数计，可溶性淀粉20‰、KNO31‰、NaCl0.5‰、K2HPO40.5‰、MgSO40.5‰、FeSO40.01‰、琼脂20g，水1000ml，pH7.2-7.4。
3.根据权利要求1所述的防治草莓红中柱病的微生物有机肥的生产方法，其特征在于，步骤(2)中，LB培养基的组成为：蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠10g/L，PH7.2。
4.根据权利要求1所述的防治草莓红中柱病的微生物有机肥的生产方法，其特征在于，步骤(2)中，山东链霉菌一级种子液的培养条件为：26-30℃摇瓶培养48-52h；热噬淀粉芽孢杆菌一级种子液的培养条件为：30-34℃摇瓶培养14-18h。
5.根据权利要求1所述的防治草莓红中柱病的微生物有机肥的生产方法，其特征在于，步骤(3)中，发酵培养基的组成为：麸皮5-20g/L、豆饼粉4-10g/L、玉米粉5-15g/L。
6.根据权利要求1所述的防治草莓红中柱病的微生物有机肥的生产方法，其特征在于，步骤(3)中，山东链霉菌二级种子液的培养条件为：26-30℃培养48-52h；热噬淀粉芽孢杆菌二级种子液的培养条件为：30-34℃培养14h-24h。
7.根据权利要求1所述的防治草莓红中柱病的微生物有机肥的生产方法，其特征在于，步骤(4)中，山东链霉菌的发酵培养条件为26-30℃培养4-8天；热噬淀粉芽孢杆菌的发酵培养条件为：30-34℃培养24h-36h。
8.根据权利要求1所述的防治草莓红中柱病的微生物有机肥的生产方法，其特征在于，所述热噬淀粉芽孢杆菌为中国高校微生物菌种目录编号为CICIMB1594的菌株。
9.权利要求1至8任一项所述的生产方法制备得到的微生物有机肥，其特征在于，微生物有机肥中，有效活菌数≥5亿/g。
10.权利要求9所述的微生物有机肥在防治草莓红中柱病中的应用。
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