CN110146356A - 一种实验小鼠脂肪组织石蜡切片组织处理方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种实验小鼠脂肪组织石蜡切片组织处理方法，属于病理组织制片技术领域，解决传统脂肪组织处理流程用时间长、效率低的技术问题，本发明包括以下步骤：S1、将实验小鼠离体脂肪组织在浓度为10%的中性缓冲福尔马林溶液中固定24h，然后将离体脂肪组织取出留待后步使用；S2、依次采用以下梯度浓度乙醇溶液对离体脂肪组织进行脱水，获得脱水处理后的离体脂肪组织，留待后续包埋。本发明制作实验小鼠脂肪组织石蜡切片用时比传统程序缩短16h，极大地提高了工作效率，而且切片完整，无空洞、皱褶，镜下脂肪组织形态完整、细胞饱满，胞核清晰，细胞膜无断裂，无皱缩，为HE染色、免疫组织化学等后续科研提供了优质的切片基础。
Description
技术领域
本发明属于病理组织制片技术领域，具体涉及的是一种实验小鼠脂肪组织石蜡切片组织处理方法。
背景技术
脂肪组织是机体重要的能量仓库，其广泛存在于全身的皮下及内脏各处。脂肪组织主要由含有脂滴的脂肪细胞组成。近年来，科学家们越来越重视对脂肪组织的研究，如研究脂肪源性肿瘤，肝病等等，这些疾病首先需要我们通过实验动物来研究，而这都离不开形态学方面（如HE染色，免疫组织化学）的观察。因此，制作良好的脂肪组织标本切片至关重要。
但是，由于脂肪组织结构特殊，含有大量的油脂成份，如果组织固定和脱水不完全，就很难制作出形态完整的组织石蜡切片。在常规实验室流程制作石蜡切片时往往出现组织碎裂，有空洞，组织触摸较软、放置后出现凹陷等各种问题，而且如果脂肪组织按照一般组织的展片温度（45℃）来进行展片，温度过高，切片容易变散，无法捞片，从而影响后续的染色、观察及研究。虽然文献报道过许多经验和方法，但是按照文献所述的传统流程制作脂肪组织石蜡切片虽能制作出较完整的脂肪组织石蜡切片，基本满足形态学研究，但整个流程所用时间较长，效率明显降低，减慢了科研的进程。
发明内容
为了解决现有技术中的不足，本发明提供一种实验小鼠脂肪组织石蜡切片组织处理方法。
本发明通过以下技术方案予以实现。
一种实验小鼠脂肪组织石蜡切片组织处理方法，包括以下步骤：
S1、将实验小鼠离体脂肪组织在浓度为10%的中性缓冲福尔马林溶液中固定24h，然后将离体脂肪组织取出留待后步使用；
S2、依次采用以下梯度浓度乙醇溶液对离体脂肪组织进行脱水处理：
a、浓度为70%的乙醇溶液浸泡离体脂肪组织4h；
b、浓度为80%的乙醇溶液浸泡离体脂肪组织3h；
c、浓度为90%的乙醇溶液浸泡离体脂肪组织2h；
d、浓度为95%的乙醇Ⅰ溶液浸泡离体脂肪组织2h；
e、浓度为95%的乙醇Ⅱ溶液浸泡离体脂肪组织2h；
f、浓度为100%的乙醇Ⅰ溶液浸泡离体脂肪组织1h；
g、浓度为100%的乙醇Ⅱ溶液浸泡离体脂肪组织1h；
h、二甲苯Ⅰ溶液浸泡离体脂肪组织30min；
i、二甲苯Ⅱ溶液浸泡离体脂肪组织30min；
j、液态石蜡Ⅰ溶液浸泡离体脂肪组织2h；
k、液态石蜡Ⅱ溶液浸泡离体脂肪组织2h；
获得脱水处理后的离体脂肪组织，留待后续包埋。
进一步地，在所述步骤S2中，将获得脱水预处理后的离体脂肪组织采用石蜡包埋机制备包埋组织块，然后采用半自动旋转式切片机切片，切片厚度为4μm；最后，向展片仪的捞片池中加入蒸馏水，设置展片温度为42℃，将制备的脂肪组织切片平铺于水面上，待切片褶皱展平，用载玻片将切片捞起。
与现有技术相比本发明的有益效果为：
本发明提供的一种实验小鼠脂肪组织石蜡切片预处理方法，制作实验小鼠脂肪组织石蜡切片用时比传统程序缩短16h，极大地提高了工作效率，而且切片完整，无空洞、皱褶，镜下脂肪组织形态完整、细胞饱满，胞核清晰，细胞膜无断裂，无皱缩，为HE染色、免疫组织化学等后续科研提供了优质的切片基础。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。
在本实施例中，将本发明提供的技术方案与传统的切片脱水处理方法进行了对比，具体实验过程如下。
步骤一、取材及固定。取实验小鼠全身不同部位的离体脂肪组织，包括睾丸脂肪垫，肾周脂肪及肠系膜脂肪，将其分为两组，即本发明记载的技术方案组（实施例组）与传统的切片脱水处理方法组（对比例组）。
步骤二、离体脂肪组织进行脱水过程见下表：
步骤三、包埋。采用石蜡包埋机包埋组织块。
步骤四、切片。采用半自动旋转式切片机切片，切片厚度4μm。
步骤五、展片及捞片。展片仪加入蒸馏水，设置展片温度42℃，将切好的脂肪组织切片平铺于水面上，待切片褶皱展平，用载玻片将切片捞起。
步骤六、烘片。设置烘片温度为60℃，将捞好的片放置于烘片机上烤30min~1h。
需要说明的是：同一浓度的乙醇Ⅰ溶液与乙醇Ⅱ溶液完全相同，离体脂肪组织在乙醇Ⅰ溶液中浸泡2h后，由于离体脂肪组织中的水分在乙醇Ⅰ溶液中析出，导致乙醇Ⅰ溶液浓度降低，所以需要将离体脂肪组织取出，放入浓度相同的乙醇Ⅱ溶液中继续浸泡，避免乙醇溶液浓度影响切片质量。所述的二甲苯Ⅰ溶液、二甲苯Ⅱ溶液，以及液态石蜡Ⅰ溶液、液态石蜡Ⅱ溶液，与上述使用乙醇Ⅰ溶液与乙醇Ⅱ溶液的道理相同，均是为了保证浸泡溶液的浓度。
通过上述对比实验，本发明制作实验小鼠脂肪组织石蜡切片用时比传统程序缩短16h，极大地提高了工作效率，而且切片完整，无空洞、皱褶，镜下脂肪组织形态完整、细胞饱满，胞核清晰，细胞膜无断裂，无皱缩，为HE染色、免疫组织化学等后续科研提供了优质的切片基础。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。
Claims (2)
1.一种实验小鼠脂肪组织石蜡切片组织处理方法，其特征在于包括以下步骤：
S1、将实验小鼠离体脂肪组织在浓度为10%的中性缓冲福尔马林溶液中固定24h，然后将离体脂肪组织取出留待后步使用；
S2、依次采用以下梯度浓度乙醇溶液对离体脂肪组织进行脱水处理：
a、浓度为70%的乙醇溶液浸泡离体脂肪组织4h；
b、浓度为80%的乙醇溶液浸泡离体脂肪组织3h；
c、浓度为90%的乙醇溶液浸泡离体脂肪组织2h；
d、浓度为95%的乙醇Ⅰ溶液浸泡离体脂肪组织2h；
e、浓度为95%的乙醇Ⅱ溶液浸泡离体脂肪组织2h；
f、浓度为100%的乙醇Ⅰ溶液浸泡离体脂肪组织1h；
g、浓度为100%的乙醇Ⅱ溶液浸泡离体脂肪组织1h；
h、二甲苯Ⅰ溶液浸泡离体脂肪组织30min；
i、二甲苯Ⅱ溶液浸泡离体脂肪组织30min；
j、液态石蜡Ⅰ溶液浸泡离体脂肪组织2h；
k、液态石蜡Ⅱ溶液浸泡离体脂肪组织2h；
获得脱水处理后的离体脂肪组织，留待后续包埋。
2.根据权利要求1所述的一种实验小鼠脂肪组织石蜡切片组织处理方法，其特征在于：在所述步骤S2中，将获得脱水预处理后的离体脂肪组织采用石蜡包埋机制备包埋组织块，然后采用半自动旋转式切片机切片，切片厚度为4μm；最后，向展片仪的捞片池中加入蒸馏水，设置展片温度为42℃，将制备的脂肪组织切片平铺于水面上，待切片褶皱展平，用载玻片将切片捞起。
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