CN105238832A - 一种重组人表皮生长因子发酵用培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种重组人表皮生长因子发酵用培养基，该培养基由以下重量比例成分制成：甘油5.0-7.0％、酵母碱基(YNB)3.0-3.5％、微量金属离子1.8-2.2％、生物素0.5-1.0％、促进剂0.5-1.0％、水余量；所述微量金属离子为三氯化铁、氯化钙、钼酸钠、氯化锌、硫酸铜、硼酸、硫酸铝中的一种；用磷酸盐缓冲液调pH为5.5-6.5。本发明使用的植物原料成分经过了蒸汽爆破、蒸馏、高剪切均质机处理，得到纳米乳状的植物油性成分，和培养基中其他配方的相容性好。本发明通过在培养基中添加植物原料成分作为促进剂，和现有技术相比，发酵液的产量会提高20-30％。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种重组人表皮生长因子发酵用培养基。
背景技术
表皮生长因子是由Cohen等人在上世纪60年代从小鼠颌下腺发现的一种生长调节蛋白，由53个氨基酸组成，研究证实它具有广泛的刺激细胞增殖的作用。1975年，Starkey、Cohen等人从人尿中提取了人表皮生长因子(humanEpidermalGrowthFactor，hEGF)，与鼠表皮生长因子具有高度一致的结构，并具有一致的生物学活性。表皮生长因子广泛存在于人体各种组织中，可刺激多种细胞增殖，主要是上皮细胞和内皮细胞的增殖，这是通过结合细胞膜上的表皮生长因子受体(EGFR)而起作用的。EGF通过与细胞受体的膜外部分结合，激活其酪氨酸激酶活性，诱导蛋白磷酸化，启动DNA合成，激活RNA、蛋白质合成，促进细胞增生、移行。
表皮生长因子广泛存在于人体内各种组织，含量极微，对于维持人体各种组织器官(如角结膜、皮肤、各种黏膜、腺体等)的正常生理功能具有重要作用。随着年龄的增长，体内表皮生长因子水平逐渐下降，表现为相关组织器官的衰老和退化，特别是上皮组织的衰老，因此，及时向人体补充表皮生长因子，可维护人体正常功能并延缓衰老，这是表皮生长因子在美容保健行业的应用基础。另外，在肌体受损等的情况下，内源性表皮生长因子不能满足组织修复的大量需要，及时向受损部位补充表皮生长因子，可促进受损肌体组织的修复，在临床上应用非常广泛，如用于创伤、炎症、手术、化学烧伤及干眼症等各种原因引起的角膜上皮缺损修复，烧伤、创伤、外科手术、炎症、溃疡等各种皮肤和黏膜缺损的修复。
目前，对表皮生长因子和重组表皮生长因子已有研究，例如中国专利97115284.5，公开了表皮生长因子工程菌及使用该菌制备表皮生长因子的方法，研究人员通过表皮生长因子可以得到重组人表皮生长因子(或者称为重组人表皮生长因子原液)。科技在不断进步，对于表皮生长因子和重组表皮生长因子的研究也在不断的进行当中。
发明内容
本发明的目的是提供一种重组人表皮生长因子发酵用培养基，该培养基由以下重量比例成分制成：
所述微量金属离子为三氯化铁、氯化钙、钼酸钠、氯化锌、硫酸铜、硼酸、硫酸铝中的一种；
用磷酸盐缓冲液调pH为5.5-6.5；
所述促进剂采用以下方法制备：
1)原料处理：将穿心莲洗净、干制、粉碎；
2)蒸汽爆破处理：将步骤1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破压力3.0-3.5Mpa，保压时间维持在150-200s；
3)蒸馏处理：将步骤2)得到的物料放入蒸馏器，在蒸馏器底部，加热燃烧或通入蒸汽，当炙热的蒸气充满在蒸馏器里，水蒸气通过冷凝管，被引入冷凝器内，再通过油水分离器，收集精油；
4)高剪切均质机处理：将步骤3)得到的精油通过高剪切均质机处理，线速度30-40m/s，时间3-5min，制成纳米乳，并用微孔滤膜过滤除菌得到。
进一步优选的，该培养基由以下重量比例成分制成：
所述微量金属离子为三氯化铁、氯化钙、钼酸钠、氯化锌、硫酸铜、硼酸、硫酸铝中的一种；
用磷酸盐缓冲液调pH为6.0；
所述促进剂采用以下方法制备：
1)原料处理：将穿心莲洗净、干制、粉碎；
2)蒸汽爆破处理：将步骤1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破压力3.0-3.5Mpa，保压时间维持在150-200s；
3)蒸馏处理：将步骤2)得到的物料放入蒸馏器，在蒸馏器底部，加热燃烧或通入蒸汽，当炙热的蒸气充满在蒸馏器里，水蒸气通过冷凝管，被引入冷凝器内，再通过油水分离器，收集精油；
4)高剪切均质机处理：将步骤3)得到的精油通过高剪切均质机处理，线速度30-40m/s，时间3-5min，制成纳米乳，并用微孔滤膜过滤除菌得到。
本发明所述用水符合制药行业标准。
本发明所述培养基按照现有技术制备。
本发明所述穿心莲的使用量，优选粉碎后的体积相当于蒸汽爆破罐体积的1/4-1/3。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
1、本发明使用的植物原料成分经过了蒸汽爆破、蒸馏、高剪切均质机处理，得到纳米乳状的植物油性成分，和培养基中其他配方的相容性好。
2、本发明通过在培养基中添加植物原料成分作为促进剂，和现有技术相比，表达产量会提高20-30％。
具体实施方式
下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1：
一种重组人表皮生长因子发酵用培养基，该培养基由以下重量比例成分制成：
所述微量金属离子为三氯化铁；
用磷酸盐缓冲液调pH为5.5；
所述促进剂采用以下方法制备：
1)原料处理：将穿心莲洗净、干制、粉碎；
2)蒸汽爆破处理：将步骤1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，体积相当于蒸汽爆破罐体积的1/3，爆破压力3.5Mpa，保压时间维持在150s；
3)蒸馏处理：将步骤2)得到的物料放入蒸馏器，在蒸馏器底部，加热燃烧或通入蒸汽，当炙热的蒸气充满在蒸馏器里，水蒸气通过冷凝管，被引入冷凝器内，再通过油水分离器，收集精油；
4)高剪切均质机处理：将步骤3)得到的精油通过高剪切均质机处理，线速度40m/s，时间3min，制成纳米乳，并用微孔滤膜过滤除菌得到。
实施例2：
一种重组人表皮生长因子发酵用培养基，该培养基由以下重量比例成分制成：
所述微量金属离子为氯化钙；
用磷酸盐缓冲液调pH为6.5；
所述促进剂采用以下方法制备：
1)原料处理：将穿心莲洗净、干制、粉碎；
2)蒸汽爆破处理：将步骤1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，体积相当于蒸汽爆破罐体积的1/4，爆破压力3.0Mpa，保压时间维持在200s；
3)蒸馏处理：将步骤2)得到的物料放入蒸馏器，在蒸馏器底部，加热燃烧或通入蒸汽，当炙热的蒸气充满在蒸馏器里，水蒸气通过冷凝管，被引入冷凝器内，再通过油水分离器，收集精油；
4)高剪切均质机处理：将步骤3)得到的精油通过高剪切均质机处理，线速度30m/s，时间5min，制成纳米乳，并用微孔滤膜过滤除菌得到。
实施例3：
一种重组人表皮生长因子发酵用培养基，该培养基由以下重量比例成分制成：
所述微量金属离子为钼酸钠、氯化锌、硫酸铜、硼酸、硫酸铝中；
用磷酸盐缓冲液调pH为6.0；
所述促进剂采用以下方法制备：
1)原料处理：将穿心莲洗净、干制、粉碎；
2)蒸汽爆破处理：将步骤1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，体积相当于蒸汽爆破罐体积的1/3，爆破压力3.0Mpa，保压时间维持在180s；
3)蒸馏处理：将步骤2)得到的物料放入蒸馏器，在蒸馏器底部，加热燃烧或通入蒸汽，当炙热的蒸气充满在蒸馏器里，水蒸气通过冷凝管，被引入冷凝器内，再通过油水分离器，收集精油；
4)高剪切均质机处理：将步骤3)得到的精油通过高剪切均质机处理，线速度35m/s，时间4min，制成纳米乳，并用微孔滤膜过滤除菌得到。
Claims (3)
1.一种重组人表皮生长因子发酵用培养基，其特征在于，该培养基由以下重量比例成分制成：
所述微量金属离子为三氯化铁、氯化钙、钼酸钠、氯化锌、硫酸铜、硼酸、硫酸铝中的一种；
用磷酸盐缓冲液调pH为5.5-6.5；
所述促进剂采用以下方法制备：
1)原料处理：将穿心莲洗净、干制、粉碎；
2)蒸汽爆破处理：将步骤1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破压力3.0-3.5Mpa，保压时间维持在150-200s；
3)蒸馏处理：将步骤2)得到的物料放入蒸馏器，在蒸馏器底部，加热燃烧或通入蒸汽，当炙热的蒸气充满在蒸馏器里，水蒸气通过冷凝管，被引入冷凝器内，再通过油水分离器，收集精油；
4)高剪切均质机处理：将步骤3)得到的精油通过高剪切均质机处理，线速度30-40m/s，时间3-5min，制成纳米乳，并用微孔滤膜过滤除菌得到。
2.根据权利要求1所述的一种重组人表皮生长因子发酵用培养基，其特征在于，该培养基由以下重量比例成分制成：
所述微量金属离子为三氯化铁、氯化钙、钼酸钠、氯化锌、硫酸铜、硼酸、硫酸铝中的一种；
用磷酸盐缓冲液调pH为6.0；
所述促进剂采用以下方法制备：
1)原料处理：将穿心莲洗净、干制、粉碎；
2)蒸汽爆破处理：将步骤1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破压力3.0-3.5Mpa，保压时间维持在150-200s；
3)蒸馏处理：将步骤2)得到的物料放入蒸馏器，在蒸馏器底部，加热燃烧或通入蒸汽，当炙热的蒸气充满在蒸馏器里，水蒸气通过冷凝管，被引入冷凝器内，再通过油水分离器，收集精油；
4)高剪切均质机处理：将步骤3)得到的精油通过高剪切均质机处理，线速度30-40m/s，时间3-5min，制成纳米乳，并用微孔滤膜过滤除菌得到。
3.根据权利要求1或2所述的一种重组人表皮生长因子发酵用培养基，其特征在于：所述穿心莲的使用量，粉碎后的体积相当于蒸汽爆破罐体积的1/4-1/3。
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