JP2005345196A - 超音波を使った脂肪組織の迅速処理法 - Google Patents

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Abstract

【課題】
乳腺などの主に脂肪から成る組織の脱脂処理は、通常であればホルマリンによる固定工程を行った後、アルコールやキシレン等に浸けるが、５ｍｍ厚の脂肪で常温だと１日〜２日と長時間を要する。また、脂肪から成る組織のホルマリン固定から最終的な組織切片の完成まで約６４時間と長時間を要している。
【解決手段】
脱脂液に漬けた状態で超音波を照射し且つ脱脂液を約６０℃に保持することで従来よりも短時間での脱脂が可能となる。また、脂肪組織の固定工程、脱脂工程、脱水工程、中間処理工程、パラフィン浸透工程で超音波を照射し、連続して行うことにより短時間で最終的な組織切片が得られる
【選択図】
図１

Description

本発明は、脂肪組織切片作成時に超音波を照射することによって迅速かつ高感度な病理組織検体の作成を可能にする方法に関するものである。
従来の病理診断用の脂肪組織切片作成は、組織のホルマリンによる固定工程からアルコールやキシレン等による脱脂工程、アルコールによる脱水工程、キシレンによる中間処理工程、パラフィンによるパラフィン浸透工程等の工程を経た後、パラフィンの充填を行いパラフィンブロックを作成する。その後パラフィンブロックの薄切を行い、スライドガラスに貼り付けた後キシレンによる脱パラフィン・脱キシレン・脱アルコール等を行い、各種の染色法で染色してカバーグラスをかけるという手順を踏む。
脂肪組織の脱脂には１〜２日を要す。
従来の脂肪組織処理法のフローチャートは次のようになる。
１、厚さ５mmの脂肪組織の固定工程（常温）
１０％〜２０％緩衝ホルマリン液：１〜２時間
２、脱水工程（常温）
７０％アルコール ２時間
８０％アルコール １時間
９０％アルコール １時間
９５％アルコール １時間
１００％アルコール１ ４時間
１００％アルコール２ ４時間
１００％アルコール３ ４時間
３、中間処理工程（常温）
キシレン１ ４時間
キシレン２ ４時間
キシレン３ ４時間
４、パラフィン浸透工程（６０℃）
パラフィン１ ２時間
パラフィン２ ２時間
パラフィン３ ２時間
パラフィン４ ２時間
５、パラフィンの充填と冷却
６、薄切
７、６０℃で伸展３０分
８、脱パラフィン、脱キシレン、脱アルコール約２０分
９、染色約１５分
超音波は高周波電気エネルギーを機械エネルギーに変換する振動子により発生し、容器の中の液に伝達され液中に高低の圧力波を交互に起こすことによって効果を発揮する。液中に無数の微小な泡が形成され低圧力波の間に空洞(キャビテーション)をつくり、次の高圧力波の間にこれらの空洞は破裂し、その機械的な衝撃で液の浸透性を高めることが出来る。
浅野伍朗 診断・研究のための病理技術詳細 ３．免疫組織化学法 藤田企画出版会社 慶應義塾大学医学部病理学教室編 病理組織標本の作り方 医学書院 五十嵐久喜 他 マイクロウエーブを利用した病理組織標本の作り方 検査と技術１９９３第２１巻１０１１−１０１６ 日本組織細胞化学会 組織細胞化学２００２ 学際企画 水平敏和 マイクロウエーブ照射による生物試料の固定・染色法の基本とその応用 学際企画
乳腺などの主に脂肪から成る組織の脱脂処理は、通常であればホルマリンによる固定工程を行った後、アルコールやキシレン等に浸けるが、５ｍｍ厚の脂肪で常温だと１日〜２日と長時間を要する。
また、脂肪から成る組織のホルマリンによる固定から最終的な組織切片の完成まで約６４時間と長時間を要している。
本発明は上記課題を解決することを目的とし、その手段は、脂肪組織を脱脂液（無水アルコール）に漬けた状態で超音波を照射し且つ脱脂液を約６０℃に保持することで従来よりも短時間での脱脂が可能となる。
また、脂肪組織の固定工程、脱脂工程、脱水工程、中間処理工程、パラフィン浸透工程で超音波を照射し、連続して行うことにより短時間で最終的な組織切片が得られる。
脱脂工程で超音波を照射することで５ｍｍ厚の脂肪組織であれば約４時間〜５時間で脱脂が完了する。
また、脂肪組織の固定工程、脱脂工程、脱水工程、中間処理工程、パラフィン浸透工程で超音波を連続的に照射することによりホルマリンによる固定から最終的な組織切片の完成まで約１０時間できあがり、従来の１／４に短縮される。
本発明の超音波を使った脂肪組織処理法のフローチャートは次のようになる。
１、厚さ５ｍｍの脂肪組織の固定工程
１０％〜２０％緩衝ホルマリン液（６０℃）：１時間
２、脱脂工程（６０℃）
無水アルコール：１時間
無水アルコール：１時間
３、脱水工程
１００％アルコール＋キシレン（１：１）：１時間
１００％アルコール＋キシレン（１：１）：１時間
４、中間処理工程（６０℃）
キシレン：１時間
キシレン：１時間
５、パラフィン浸透工程（６０℃）
パラフィン：３０分
パラフィン：３０分
６、パラフィンの充填と冷却
７、薄切
８、６０℃で伸展３０分
９、脱パラフィン、脱キシレン、脱アルコール約２０分
１０、染色約１５分
手術等で採取された主に乳腺のような脂肪が主体の組織を約５ｍｍの厚さにトリミングし、１０％或いは２０％の緩衝ホルマリンを満たしたステンレス槽に入れ約１時間超音波を照射する。この時温度を約６０℃に保持する。その後ステンレス槽に水を入れてその中に強化ガラス製のビーカーを浸し、ビーカー内に無水アルコール等の脱脂液と固定工程後の脂肪組織を入れる。
ステンレス槽の底部から超音波を照射する。水温及びビーカー内の脱脂液の温度は約６０℃に保持する。超音波の周波数は４０ＫＨｚ〜５０ＫＨｚとする。
脂肪組織の固定工程から脱脂工程、脱水工程、中間処理工程、パラフィン浸透工程まで超音波を照射し連続して行う。
尚、本発明は、上記実施形態に限定されない。例えば、脂肪組織の脱脂温度は６０℃に限定されず、組織の種類・大きさ等によって加温する温度範囲は任意である。超音波は、作用、効果を示す限り、通常の意味での超音波に限らず、その上、下限を越えた音波を照射しても良い。また、超音波は一方向に限らず、多方向から照射しても良い。
本発明の構成の例を示す模式図である。
符号の説明
１ ステンレス槽
２ 超音波振動子
３ 上ブタ
４ ビーカー
５ 無水アルコール
６ 脂肪組織
７ 水

Claims (3)

  1. 脂肪組織切片作成において、脱脂液に脂肪組織を浸漬した状態又は接触した状態で脂肪組織に前記液を浸透させる工程で、前記液又は組織を介して超音波を照射することを特徴とする脂肪組織処理法。
  2. 脱脂液を４０℃〜７０℃に保持することを特徴とする請求項１記載の脂肪組織処理法。
  3. 脂肪組織の固定をする工程から、上記請求項１又は２に示した処理を施す工程、脱水工程、中間処理工程、パラフィン浸透工程までの工程の一部の工程又はすべての工程を連続して行うことを特徴とする脂肪組織処理法。
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