CN110631881A - 一种人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及石蜡切片的技术领域，具体涉及一种人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法。一种人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：取样、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、贴片、脱蜡、水化、染色、去浮色和封片。一种人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，此制备方法制备出的人体脂肪石蜡切片结构完整、清晰、便于观察。
Description
技术领域
本发明涉及石蜡切片的技术领域，具体涉及一种人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法。
背景技术
人体脂肪也就是通俗意义上讲的肥肉，通过研究人体脂肪组织观察人体的健康状况，石蜡组织切片是生物科学研究中最为广泛应用的一种观察方法。不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，已广泛应用于众多学科领域的研究中。但由于生物组织结构特异性，不同组织的具体操作方法也不尽相同。
而目前，在人体脂肪的研究上虽然也有用石蜡组织切片，但是常规的石蜡组织切片应用在人体脂肪上的效果并不理想。
发明内容
本发明的目的在于提供一种人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，此制备方法制备出的人体脂肪石蜡切片结构完整、清晰、便于观察。
本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
本发明提出一种人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：固定：将离体人体脂肪组织用卡诺氏固定液固定；
步骤2：脱水：将固定后的人体脂肪组织用乙醇进行脱水处理；
步骤3：透明：先将脱水后的人体脂肪组织用无水乙醇与透明剂的混合液浸泡1.5-1.8h，再用纯透明剂浸泡1.5-1.8h；
步骤4：浸蜡：先将浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡和透明剂的混合液进行预浸蜡，经过预浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡浸泡，得到浸蜡人体脂肪组织；
步骤5：包埋：将浸蜡人体脂肪组织倒入包埋盒中进行冷却包埋，得到包埋人体脂肪组织蜡块，再将包埋人体脂肪组织蜡块进行修整；
步骤6：切片：将修整好的包埋人体脂肪组织蜡块用轮转式切片机切成人体脂肪组织蜡片带；
步骤7：贴片：将载玻片用无菌水冲洗，在烘干，在烘干上的载玻片上涂抹粘片剂，同时在载玻片上滴5-7滴无菌水，将人体脂肪组织蜡片带断开成人体脂肪组织蜡片，再将人体脂肪组织蜡片放置于载玻片上，将人体脂肪组织蜡片展开，再用滤纸吸掉载玻片上的无菌水，再将载玻片烘干；
步骤8：脱蜡：将将载玻片上的人体脂肪组织蜡片浸泡在二甲苯中进行脱蜡；
步骤9：水化：先将脱蜡后的人体脂肪组织蜡片用二甲苯与无水乙醇的混合液浸,8-10min，所述二甲苯与无水乙醇的比例为1:1，再将人体脂肪组织蜡片依次用无水乙醇、体积浓度为95％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液、体积浓度为90％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为30％的乙醇水溶液和蒸馏水依次浸泡150s-170s，得到水化后的人体脂肪组织蜡片；
步骤10：染色：将水化后的人体脂肪组织蜡片先用质量浓度为4％的铁矾溶液浸泡，然后再用无菌水洗，经过无菌水洗后人体脂肪组织蜡片用番红溶液进行染色，再将用番红染色后的人体脂肪组织蜡片用浓度为75％的乙醇溶液中浸泡，在放入固绿溶液中进行染色；
步骤11：去浮色：将染色后的人体脂肪组织蜡片依次放入体积浓度为 90％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液和无水乙醇中去浮色；
步骤12：封片：将去浮色后的人体脂肪组织蜡片用二甲苯浸湿，再向浸湿的人体脂肪组织蜡片滴入中性树胶，再盖片，再将载玻片烘烤得到人体脂肪石蜡切片。
进一步的，在本发明的一些实施例中，上述步骤2中的人体脂肪组织用卡诺氏固定液固定20min-40min。
进一步的，在本发明的一些实施例中，上述步骤3中脱水具体为：先将固定后的人体脂肪组织用体积浓度为30％的乙醇冲洗两次，再依次采用体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液、体积浓度为90％的乙醇水溶液和无水乙醇浸泡，所述人体脂肪组织在体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液和体积浓度为90％的乙醇水溶液中均浸泡 2-2.5h，人体脂肪组织最后在无水乙醇中浸泡1-1.5h。
进一步的，在本发明的一些实施例中，上述步骤4中采用的无水乙醇与透明剂的混合液中无水乙醇与透明剂的体积比为1:1。
进一步的，在本发明的一些实施例中，上述步骤5中液体石蜡和透明剂的混合液中液体石蜡与透明剂的体积比为1:1，预浸蜡过程中将透明后人体脂肪组织在液体石蜡和透明剂的混合液中浸泡41-43h，混合液的温度保持在65-68℃；将所述预浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡浸泡3-4h，液体石蜡的温度保持在63-66℃。
进一步的，在本发明的一些实施例中，上述步骤8中采用的粘片剂为明胶甘油液。
进一步的，在本发明的一些实施例中，上述步骤9脱蜡的具体操作为：将载玻片上的人体脂肪组织蜡片浸泡在纯的二甲苯溶液中进行第一次脱蜡1h，再更换二甲苯溶液，将第一次脱蜡后的人体脂肪组织蜡片放入新的二甲苯溶液进行第二次脱蜡45min，再次更换二甲苯溶液，将第二次脱蜡后的人体脂肪组织蜡片放入新的二甲苯溶液进行第三次脱蜡30min。
进一步的，在本发明的一些实施例中，上述步骤11中先将水化后的人体脂肪组织蜡片先用质量浓度为4％的铁矾溶液浸泡7-9min，然后再用无菌水洗两次，将经过无菌水洗后人体脂肪组织蜡片用番红溶液进行染色 13-14h，再将用番红染色后的人体脂肪组织蜡片用浓度为75％的乙醇溶液中浸,3-5s，75％的乙醇溶液中滴入醋酸，乙醇溶液与醋酸的体积比为 1200-1300:1，再将人体脂肪组织蜡片放入固绿溶液中染色3-5s。
进一步的，在本发明的一些实施例中，上述步骤12中将染色后的人体脂肪组织蜡片依次放入体积浓度为90％的乙醇水溶液、体积浓度为 95％的乙醇水溶液和无水乙醇中10-12s去浮色。
进一步的，在本发明的一些实施例中，上述步骤13中中性树胶的使用量为15～18μL/片。
本发明中的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法至少具有以下有益效果：
本发明制备得到的石蜡切片质量高、组织结构清晰完整、效果明显、可操作性强、可重复性高、实用性强；本发明在固绿染色前在乙醇溶液中加入醋酸进行分色醋酸的加入有利于分色，使得番红固绿染色不同部位效果更明显。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考具体实施例来详细说明本发明。
一种人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：固定：将离体人体脂肪组织用卡诺氏固定液固定；
步骤2：脱水：将固定后的人体脂肪组织用乙醇进行脱水处理；
步骤3：透明：先将脱水后的人体脂肪组织用无水乙醇与透明剂的混合液浸泡1.5-1.8h，再用纯透明剂浸泡1.5-1.8h；
步骤4：浸蜡：先将浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡和透明剂的混合液进行预浸蜡，经过预浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡浸泡，得到浸蜡人体脂肪组织；
步骤5：包埋：将浸蜡人体脂肪组织倒入包埋盒中进行冷却包埋，得到包埋人体脂肪组织蜡块，再将包埋人体脂肪组织蜡块进行修整；
步骤6：切片：将修整好的包埋人体脂肪组织蜡块用轮转式切片机切成人体脂肪组织蜡片带；
步骤7：贴片：将载玻片用无菌水冲洗，在烘干，在烘干上的载玻片上涂抹粘片剂，同时在载玻片上滴5-7滴无菌水，将人体脂肪组织蜡片带断开成人体脂肪组织蜡片，再将人体脂肪组织蜡片放置于载玻片上，将人体脂肪组织蜡片展开，再用滤纸吸掉载玻片上的无菌水，再将载玻片烘干；
步骤8：脱蜡：将将载玻片上的人体脂肪组织蜡片浸泡在二甲苯中进行脱蜡；
步骤9：水化：先将脱蜡后的人体脂肪组织蜡片用二甲苯与无水乙醇的混合液浸,8-10min，所述二甲苯与无水乙醇的比例为1:1，再将人体脂肪组织蜡片依次用无水乙醇、体积浓度为95％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液、体积浓度为90％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为30％的乙醇水溶液和蒸馏水依次浸泡150s-170s，得到水化后的人体脂肪组织蜡片；
步骤10：染色：将水化后的人体脂肪组织蜡片先用质量浓度为4％的铁矾溶液浸泡，然后再用无菌水洗，经过无菌水洗后人体脂肪组织蜡片用番红溶液进行染色，再将用番红染色后的人体脂肪组织蜡片用浓度为75％的乙醇溶液中浸泡，在放入固绿溶液中进行染色；
步骤11：去浮色：将染色后的人体脂肪组织蜡片依次放入体积浓度为 90％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液和无水乙醇中去浮色；
步骤12：封片：将去浮色后的人体脂肪组织蜡片用二甲苯浸湿，再向浸湿的人体脂肪组织蜡片滴入中性树胶，再盖片，再将载玻片烘烤得到人体脂肪石蜡切片。
在本发明的一些实施例中，上述步骤1中的人体脂肪组织用卡诺氏固定液固定20min-40min。
在本发明的一些实施例中，上述步骤2中脱水具体为：先将固定后的人体脂肪组织用体积浓度为30％的乙醇冲洗两次，再依次采用体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液、体积浓度为90％的乙醇水溶液和无水乙醇浸泡，所述人体脂肪组织在体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液和体积浓度为90％的乙醇水溶液中均浸泡2-2.5h，人体脂肪组织最后在无水乙醇中浸泡1-1.5h。
在本发明的一些实施例中，上述步骤3中采用的无水乙醇与透明剂的混合液中无水乙醇与透明剂的体积比为1:1。
在本发明的一些实施例中，上述步骤4中液体石蜡和透明剂的混合液中液体石蜡与透明剂的体积比为1:1，预浸蜡过程中将透明后人体脂肪组织在液体石蜡和透明剂的混合液中浸泡41-43h，混合液的温度保持在65-68℃；将所述预浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡浸泡3-4h，液体石蜡的温度保持在63-66℃。
在本发明的一些实施例中，上述步骤7中采用的粘片剂为明胶甘油液。
在本发明的一些实施例中，上述步骤8脱蜡的具体操作为：将载玻片上的人体脂肪组织蜡片浸泡在纯的二甲苯溶液中进行第一次脱蜡1h，再更换二甲苯溶液，将第一次脱蜡后的人体脂肪组织蜡片放入新的二甲苯溶液进行第二次脱蜡45min，再次更换二甲苯溶液，将第二次脱蜡后的人体脂肪组织蜡片放入新的二甲苯溶液进行第三次脱蜡30min。
在本发明的一些实施例中，上述步骤10中先将水化后的人体脂肪组织蜡片先用质量浓度为4％的铁矾溶液浸泡7-9min，然后再用无菌水洗两次，将经过无菌水洗后人体脂肪组织蜡片用番红溶液进行染色13-14h，再将用番红染色后的人体脂肪组织蜡片用浓度为75％的乙醇溶液中浸,3-5s， 75％的乙醇溶液中滴入醋酸，乙醇溶液与醋酸的体积比为1200-1300:1，再将人体脂肪组织蜡片放入固绿溶液中染色3-5s。
在本发明的一些实施例中，上述步骤11中将染色后的人体脂肪组织蜡片依次放入体积浓度为90％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液和无水乙醇中10-12s去浮色。
在本发明的一些实施例中，上述步骤12中性树胶的使用量为15～ 18μL/片。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：固定：将离体人体脂肪组织用卡诺氏固定液固定20min；
步骤2：脱水：先将固定后的人体脂肪组织用体积浓度为30％的乙醇冲洗两次，再依次采用体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液、体积浓度为90％的乙醇水溶液和无水乙醇浸泡，所述人体脂肪组织在体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液和体积浓度为90％的乙醇水溶液中均浸泡2h，人体脂肪组织最后在无水乙醇中浸泡1h；
步骤3：透明：先将脱水后的人体脂肪组织用无水乙醇与透明剂的混合液浸泡1.5h，所用无水乙醇与透明剂的混合液中无水乙醇与透明剂的体积比为1:1，再用纯透明剂浸泡1.5h；
步骤4：浸蜡：先将浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡和透明剂的混合液进行预浸蜡，液体石蜡与透明剂的体积比为1:1，预浸蜡过程中将透明后人体脂肪组织在液体石蜡和透明剂的混合液中浸泡41h，混合液的温度保持在65℃；经过预浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡浸泡3h，液体石蜡的温度保持在63℃，得到浸蜡人体脂肪组织；
步骤5：包埋：将浸蜡人体脂肪组织倒入包埋盒中进行冷却包埋，得到包埋人体脂肪组织蜡块，再将包埋人体脂肪组织蜡块进行修整；
步骤6：切片：将修整好的包埋人体脂肪组织蜡块用轮转式切片机切成人体脂肪组织蜡片带；
步骤7：贴片：将载玻片用无菌水冲洗，在烘干，在烘干上的载玻片上涂抹粘片剂明胶甘油液，同时在载玻片上滴5滴无菌水，将人体脂肪组织蜡片带断开成人体脂肪组织蜡片，再将人体脂肪组织蜡片放置于载玻片上，将人体脂肪组织蜡片展开，再用滤纸吸掉载玻片上的无菌水，再将载玻片烘干；
步骤8：脱蜡：将载玻片上的人体脂肪组织蜡片浸泡在纯的二甲苯溶液中进行第一次脱蜡1h，再更换二甲苯溶液，将第一次脱蜡后的人体脂肪组织蜡片放入新的二甲苯溶液进行第二次脱蜡45min，再次更换二甲苯溶液，将第二次脱蜡后的人体脂肪组织蜡片放入新的二甲苯溶液进行第三次脱蜡30min；
步骤9：水化：先将脱蜡后的人体脂肪组织蜡片用二甲苯与无水乙醇的混合液浸,8min，所述二甲苯与无水乙醇的比例为1:1，再将人体脂肪组织蜡片依次用无水乙醇、体积浓度为95％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液、体积浓度为90％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为30％的乙醇水溶液和蒸馏水依次浸泡150ss，得到水化后的人体脂肪组织蜡片；
步骤10：染色：将水化后的人体脂肪组织蜡片先用质量浓度为4％的铁矾溶液浸泡7min，然后再用无菌水洗两次，将经过无菌水洗后人体脂肪组织蜡片用番红溶液进行染色13h，再将用番红染色后的人体脂肪组织蜡片用浓度为75％的乙醇溶液中浸,3s，75％的乙醇溶液中滴入醋酸，乙醇溶液与醋酸的体积比为1200:1，再将人体脂肪组织蜡片放入固绿溶液中染色3s；
步骤11：去浮色：将染色后的人体脂肪组织蜡片依次放入体积浓度为 90％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液和无水乙醇中10s去浮色；
步骤12：封片：将去浮色后的人体脂肪组织蜡片用二甲苯浸湿，再向浸湿的人体脂肪组织蜡片滴入15μL中性树胶，再盖片，再将载玻片烘烤得到人体脂肪石蜡切片。
实施例2
人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：固定：将离体人体脂肪组织用卡诺氏固定液固定40min；
步骤2：脱水：先将固定后的人体脂肪组织用体积浓度为30％的乙醇冲洗两次，再依次采用体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液、体积浓度为90％的乙醇水溶液和无水乙醇浸泡，所述人体脂肪组织在体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液和体积浓度为90％的乙醇水溶液中均浸泡2.5h，人体脂肪组织最后在无水乙醇中浸泡1.5h；
步骤3：透明：先将脱水后的人体脂肪组织用无水乙醇与透明剂的混合液浸泡1.8h，所用无水乙醇与透明剂的混合液中无水乙醇与透明剂的体积比为1:1，再用纯透明剂浸泡1.8h；
步骤4：浸蜡：先将浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡和透明剂的混合液进行预浸蜡，液体石蜡与透明剂的体积比为1:1，预浸蜡过程中将透明后人体脂肪组织在液体石蜡和透明剂的混合液中浸泡43h，混合液的温度保持在68℃；经过预浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡浸泡4h，液体石蜡的温度保持在66℃，得到浸蜡人体脂肪组织；
步骤5：包埋：将浸蜡人体脂肪组织倒入包埋盒中进行冷却包埋，得到包埋人体脂肪组织蜡块，再将包埋人体脂肪组织蜡块进行修整；
步骤6：切片：将修整好的包埋人体脂肪组织蜡块用轮转式切片机切成人体脂肪组织蜡片带；
步骤7：贴片：将载玻片用无菌水冲洗，在烘干，在烘干上的载玻片上涂抹粘片剂明胶甘油液，同时在载玻片上滴7滴无菌水，将人体脂肪组织蜡片带断开成人体脂肪组织蜡片，再将人体脂肪组织蜡片放置于载玻片上，将人体脂肪组织蜡片展开，再用滤纸吸掉载玻片上的无菌水，再将载玻片烘干；
步骤8：脱蜡：将载玻片上的人体脂肪组织蜡片浸泡在纯的二甲苯溶液中进行第一次脱蜡1h，再更换二甲苯溶液，将第一次脱蜡后的人体脂肪组织蜡片放入新的二甲苯溶液进行第二次脱蜡45min，再次更换二甲苯溶液，将第二次脱蜡后的人体脂肪组织蜡片放入新的二甲苯溶液进行第三次脱蜡 30min；
步骤9：水化：先将脱蜡后的人体脂肪组织蜡片用二甲苯与无水乙醇的混合液浸,10min，所述二甲苯与无水乙醇的比例为1:1，再将人体脂肪组织蜡片依次用无水乙醇、体积浓度为95％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液、体积浓度为90％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为30％的乙醇水溶液和蒸馏水依次浸泡170s，得到水化后的人体脂肪组织蜡片；
步骤10：染色：将水化后的人体脂肪组织蜡片先用质量浓度为4％的铁矾溶液浸泡9min，然后再用无菌水洗两次，将经过无菌水洗后人体脂肪组织蜡片用番红溶液进行染色14h，再将用番红染色后的人体脂肪组织蜡片用浓度为75％的乙醇溶液中浸,5s，75％的乙醇溶液中滴入醋酸，乙醇溶液与醋酸的体积比为1300:1，再将人体脂肪组织蜡片放入固绿溶液中染色5s；
步骤11：去浮色：将染色后的人体脂肪组织蜡片依次放入体积浓度为 90％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液和无水乙醇中12s去浮色；
步骤12：封片：将去浮色后的人体脂肪组织蜡片用二甲苯浸湿，再向浸湿的人体脂肪组织蜡片滴入18μL中性树胶，再盖片，再将载玻片烘烤得到人体脂肪石蜡切片。
实施例3
人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：固定：将离体人体脂肪组织用卡诺氏固定液固定30min；
步骤2：脱水：先将固定后的人体脂肪组织用体积浓度为30％的乙醇冲洗两次，再依次采用体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液、体积浓度为90％的乙醇水溶液和无水乙醇浸泡，所述人体脂肪组织在体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液和体积浓度为90％的乙醇水溶液中均浸泡2.3h，人体脂肪组织最后在无水乙醇中浸泡1.25h；
步骤3：透明：先将脱水后的人体脂肪组织用无水乙醇与透明剂的混合液浸泡1.6h，所用无水乙醇与透明剂的混合液中无水乙醇与透明剂的体积比为1:1，再用纯透明剂浸泡1.6h；
步骤4：浸蜡：先将浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡和透明剂的混合液进行预浸蜡，液体石蜡与透明剂的体积比为1:1，预浸蜡过程中将透明后人体脂肪组织在液体石蜡和透明剂的混合液中浸泡42h，混合液的温度保持在65-68℃；经过预浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡浸泡3.5h，液体石蜡的温度保持在65℃，得到浸蜡人体脂肪组织；
步骤5：包埋：将浸蜡人体脂肪组织倒入包埋盒中进行冷却包埋，得到包埋人体脂肪组织蜡块，再将包埋人体脂肪组织蜡块进行修整；
步骤6：切片：将修整好的包埋人体脂肪组织蜡块用轮转式切片机切成人体脂肪组织蜡片带；
步骤7：贴片：将载玻片用无菌水冲洗，在烘干，在烘干上的载玻片上涂抹粘片剂明胶甘油液，同时在载玻片上滴6滴无菌水，将人体脂肪组织蜡片带断开成人体脂肪组织蜡片，再将人体脂肪组织蜡片放置于载玻片上，将人体脂肪组织蜡片展开，再用滤纸吸掉载玻片上的无菌水，再将载玻片烘干；
步骤8：脱蜡：将载玻片上的人体脂肪组织蜡片浸泡在纯的二甲苯溶液中进行第一次脱蜡1h，再更换二甲苯溶液，将第一次脱蜡后的人体脂肪组织蜡片放入新的二甲苯溶液进行第二次脱蜡45min，再次更换二甲苯溶液，将第二次脱蜡后的人体脂肪组织蜡片放入新的二甲苯溶液进行第三次脱蜡 30min；
步骤9：水化：先将脱蜡后的人体脂肪组织蜡片用二甲苯与无水乙醇的混合液浸,9min，所述二甲苯与无水乙醇的比例为1:1，再将人体脂肪组织蜡片依次用无水乙醇、体积浓度为95％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液、体积浓度为90％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为30％的乙醇水溶液和蒸馏水依次浸泡160s，得到水化后的人体脂肪组织蜡片；
步骤10：染色：将水化后的人体脂肪组织蜡片先用质量浓度为4％的铁矾溶液浸泡8min，然后再用无菌水洗两次，将经过无菌水洗后人体脂肪组织蜡片用番红溶液进行染色13-14h，再将用番红染色后的人体脂肪组织蜡片用浓度为75％的乙醇溶液中浸,4s，75％的乙醇溶液中滴入醋酸，乙醇溶液与醋酸的体积比为1250:1，再将人体脂肪组织蜡片放入固绿溶液中染色4s；
步骤11：去浮色：将染色后的人体脂肪组织蜡片依次放入体积浓度为 90％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液和无水乙醇中11s去浮色；
步骤12：封片：将去浮色后的人体脂肪组织蜡片用二甲苯浸湿，再向浸湿的人体脂肪组织蜡片滴入17μL中性树胶，再盖片，再将载玻片烘烤得到人体脂肪石蜡切片。人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，包括如下步骤：
实施例4
步骤1：固定：将离体人体脂肪组织用卡诺氏固定液固定25min；
步骤2：脱水：先将固定后的人体脂肪组织用体积浓度为30％的乙醇冲洗两次，再依次采用体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液、体积浓度为90％的乙醇水溶液和无水乙醇浸泡，所述人体脂肪组织在体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液和体积浓度为90％的乙醇水溶液中均浸泡2.1h，人体脂肪组织最后在无水乙醇中浸泡1.2h；
步骤3：透明：先将脱水后的人体脂肪组织用无水乙醇与透明剂的混合液浸泡1.7h，所用无水乙醇与透明剂的混合液中无水乙醇与透明剂的体积比为1:1，再用纯透明剂浸泡1.6h；
步骤4：浸蜡：先将浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡和透明剂的混合液进行预浸蜡，液体石蜡与透明剂的体积比为1:1，预浸蜡过程中将透明后人体脂肪组织在液体石蜡和透明剂的混合液中浸泡41.5，混合液的温度保持在66℃；经过预浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡浸泡3.25h，液体石蜡的温度保持在64℃，得到浸蜡人体脂肪组织；
步骤5：包埋：将浸蜡人体脂肪组织倒入包埋盒中进行冷却包埋，得到包埋人体脂肪组织蜡块，再将包埋人体脂肪组织蜡块进行修整；
步骤6：切片：将修整好的包埋人体脂肪组织蜡块用轮转式切片机切成人体脂肪组织蜡片带；
步骤7：贴片：将载玻片用无菌水冲洗，在烘干，在烘干上的载玻片上涂抹粘片剂明胶甘油液，同时在载玻片上滴5.5滴无菌水，将人体脂肪组织蜡片带断开成人体脂肪组织蜡片，再将人体脂肪组织蜡片放置于载玻片上，将人体脂肪组织蜡片展开，再用滤纸吸掉载玻片上的无菌水，再将载玻片烘干；
步骤8：脱蜡：将载玻片上的人体脂肪组织蜡片浸泡在纯的二甲苯溶液中进行第一次脱蜡1h，再更换二甲苯溶液，将第一次脱蜡后的人体脂肪组织蜡片放入新的二甲苯溶液进行第二次脱蜡45min，再次更换二甲苯溶液，将第二次脱蜡后的人体脂肪组织蜡片放入新的二甲苯溶液进行第三次脱蜡 30min；
步骤9：水化：先将脱蜡后的人体脂肪组织蜡片用二甲苯与无水乙醇的混合液浸,7min，所述二甲苯与无水乙醇的比例为1:1，再将人体脂肪组织蜡片依次用无水乙醇、体积浓度为95％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液、体积浓度为90％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为30％的乙醇水溶液和蒸馏水依次浸泡155s，得到水化后的人体脂肪组织蜡片；
步骤10：染色：将水化后的人体脂肪组织蜡片先用质量浓度为4％的铁矾溶液浸泡7.5min，然后再用无菌水洗两次，将经过无菌水洗后人体脂肪组织蜡片用番红溶液进行染色13.5h，再将用番红染色后的人体脂肪组织蜡片用浓度为75％的乙醇溶液中浸,3.5s，75％的乙醇溶液中滴入醋酸，乙醇溶液与醋酸的体积比为1225:1，再将人体脂肪组织蜡片放入固绿溶液中染色 3.5s；
步骤11：去浮色：将染色后的人体脂肪组织蜡片依次放入体积浓度为 90％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液和无水乙醇中11.5s去浮色；
步骤12：封片：将去浮色后的人体脂肪组织蜡片用二甲苯浸湿，再向浸湿的人体脂肪组织蜡片滴入17μL中性树胶，再盖片，再将载玻片烘烤得到人体脂肪石蜡切片。人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，包括如下步骤：
实施例5
步骤1：固定：将离体人体脂肪组织用卡诺氏固定液固定35min；
步骤2：脱水：先将固定后的人体脂肪组织用体积浓度为30％的乙醇冲洗两次，再依次采用体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液、体积浓度为90％的乙醇水溶液和无水乙醇浸泡，所述人体脂肪组织在体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液和体积浓度为90％的乙醇水溶液中均浸泡2-2.5h，人体脂肪组织最后在无水乙醇中浸泡1-1.5h；
步骤3：透明：先将脱水后的人体脂肪组织用无水乙醇与透明剂的混合液浸泡1.5-1.8h，所用无水乙醇与透明剂的混合液中无水乙醇与透明剂的体积比为1:1，再用纯透明剂浸泡1.5-1.8h；
步骤4：浸蜡：先将浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡和透明剂的混合液进行预浸蜡，液体石蜡与透明剂的体积比为1:1，预浸蜡过程中将透明后人体脂肪组织在液体石蜡和透明剂的混合液中浸泡41-43h，混合液的温度保持在65-68℃；经过预浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡浸泡3-4h，液体石蜡的温度保持在63-66℃，得到浸蜡人体脂肪组织；
步骤5：包埋：将浸蜡人体脂肪组织倒入包埋盒中进行冷却包埋，得到包埋人体脂肪组织蜡块，再将包埋人体脂肪组织蜡块进行修整；
步骤6：切片：将修整好的包埋人体脂肪组织蜡块用轮转式切片机切成人体脂肪组织蜡片带；
步骤7：贴片：将载玻片用无菌水冲洗，在烘干，在烘干上的载玻片上涂抹粘片剂明胶甘油液，同时在载玻片上滴5-7滴无菌水，将人体脂肪组织蜡片带断开成人体脂肪组织蜡片，再将人体脂肪组织蜡片放置于载玻片上，将人体脂肪组织蜡片展开，再用滤纸吸掉载玻片上的无菌水，再将载玻片烘干；
步骤8：脱蜡：将载玻片上的人体脂肪组织蜡片浸泡在纯的二甲苯溶液中进行第一次脱蜡1h，再更换二甲苯溶液，将第一次脱蜡后的人体脂肪组织蜡片放入新的二甲苯溶液进行第二次脱蜡45min，再次更换二甲苯溶液，将第二次脱蜡后的人体脂肪组织蜡片放入新的二甲苯溶液进行第三次脱蜡 30min；
步骤9：水化：先将脱蜡后的人体脂肪组织蜡片用二甲苯与无水乙醇的混合液浸,9.5min，所述二甲苯与无水乙醇的比例为1:1，再将人体脂肪组织蜡片依次用无水乙醇、体积浓度为95％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液、体积浓度为90％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为30％的乙醇水溶液和蒸馏水依次浸泡165s，得到水化后的人体脂肪组织蜡片；
步骤10：染色：将水化后的人体脂肪组织蜡片先用质量浓度为4％的铁矾溶液浸泡8.5min，然后再用无菌水洗两次，将经过无菌水洗后人体脂肪组织蜡片用番红溶液进行染色13-14h，再将用番红染色后的人体脂肪组织蜡片用浓度为75％的乙醇溶液中浸,4.5s，75％的乙醇溶液中滴入醋酸，乙醇溶液与醋酸的体积比为1275:1，再将人体脂肪组织蜡片放入固绿溶液中染色4.5s；
步骤11：去浮色：将染色后的人体脂肪组织蜡片依次放入体积浓度为 90％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液和无水乙醇中10.5s去浮色；
步骤12：封片：将去浮色后的人体脂肪组织蜡片用二甲苯浸湿，再向浸湿的人体脂肪组织蜡片滴入16.5μL中性树胶，再盖片，再将载玻片烘烤得到人体脂肪石蜡切片。
综上所述，本发明制备得到的石蜡切片质量高、组织结构清晰完整、效果明显、可操作性强、可重复性高、实用性强；本发明在固绿染色前在乙醇溶液中加入醋酸进行分色醋酸的加入有利于分色，使得番红固绿染色不同部位效果更明显。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
Claims (10)
1.一种人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：固定：将离体人体脂肪组织用卡诺氏固定液固定；
步骤2：脱水：将固定后的人体脂肪组织用乙醇进行脱水处理；
步骤3：透明：先将脱水后的人体脂肪组织用无水乙醇与透明剂的混合液浸泡1.5-1.8h，再用纯透明剂浸泡1.5-1.8h；
步骤4：浸蜡：先将浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡和透明剂的混合液进行预浸蜡，经过预浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡浸泡，得到浸蜡人体脂肪组织；
步骤5：包埋：将浸蜡人体脂肪组织倒入包埋盒中进行冷却包埋，得到包埋人体脂肪组织蜡块，再将包埋人体脂肪组织蜡块进行修整；
步骤6：切片：将修整好的包埋人体脂肪组织蜡块用轮转式切片机切成人体脂肪组织蜡片带；
步骤7：贴片：将载玻片用无菌水冲洗，在烘干，在烘干上的载玻片上涂抹粘片剂，同时在载玻片上滴5-7滴无菌水，将人体脂肪组织蜡片带断开成人体脂肪组织蜡片，再将人体脂肪组织蜡片放置于载玻片上，将人体脂肪组织蜡片展开，再用滤纸吸掉载玻片上的无菌水，再将载玻片烘干；
步骤8：脱蜡：将将载玻片上的人体脂肪组织蜡片浸泡在二甲苯中进行脱蜡；
步骤9：水化：先将脱蜡后的人体脂肪组织蜡片用二甲苯与无水乙醇的混合液浸,8-10min，所述二甲苯与无水乙醇的比例为1:1，再将人体脂肪组织蜡片依次用无水乙醇、体积浓度为95％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液、体积浓度为90％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为30％的乙醇水溶液和蒸馏水依次浸泡150s-170s，得到水化后的人体脂肪组织蜡片；
步骤10：染色：将水化后的人体脂肪组织蜡片先用质量浓度为4％的铁矾溶液浸泡，然后再用无菌水洗，经过无菌水洗后人体脂肪组织蜡片用番红溶液进行染色，再将用番红染色后的人体脂肪组织蜡片用浓度为75％的乙醇溶液中浸泡，在放入固绿溶液中进行染色；
步骤11：去浮色：将染色后的人体脂肪组织蜡片依次放入体积浓度为90％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液和无水乙醇中去浮色；
步骤12：封片：将去浮色后的人体脂肪组织蜡片用二甲苯浸湿，再向浸湿的人体脂肪组织蜡片滴入中性树胶，再盖片，再将载玻片烘烤得到人体脂肪石蜡切片。
2.根据权利要求1所述的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤1中的人体脂肪组织用卡诺氏固定液固定20min-40min。
3.根据权利要求1所述的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤2中脱水具体为：先将固定后的人体脂肪组织用体积浓度为30％的乙醇冲洗两次，再依次采用体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液、体积浓度为90％的乙醇水溶液和无水乙醇浸泡，所述人体脂肪组织在体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液和体积浓度为90％的乙醇水溶液中均浸泡2-2.5h，所述人体脂肪组织最后在无水乙醇中浸泡1-1.5h。
4.根据权利要求1所述的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤3中采用的无水乙醇与透明剂的混合液中无水乙醇与透明剂的体积比为1:1。
5.根据权利要求1所述的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤4中液体石蜡和透明剂的混合液中液体石蜡与透明剂的体积比为1:1，所述预浸蜡过程中将透明后人体脂肪组织在液体石蜡和透明剂的混合液中浸泡41-43h，所述混合液的温度保持在65-68℃；将所述预浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡浸泡3-4h，所述液体石蜡的温度保持在63-66℃。
6.根据权利要求1所述的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤7中采用的粘片剂为明胶甘油液。
7.根据权利要求1所述的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤8脱蜡的具体操作为：将载玻片上的人体脂肪组织蜡片浸泡在纯的二甲苯溶液中进行第一次脱蜡1h，再更换二甲苯溶液，将第一次脱蜡后的人体脂肪组织蜡片放入新的二甲苯溶液进行第二次脱蜡45min，再次更换二甲苯溶液，将第二次脱蜡后的人体脂肪组织蜡片放入新的二甲苯溶液进行第三次脱蜡30min。
8.根据权利要求1所述的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤10中先将水化后的人体脂肪组织蜡片先用质量浓度为4％的铁矾溶液浸泡7-9min，然后再用无菌水洗两次，将经过无菌水洗后人体脂肪组织蜡片用番红溶液进行染色13-14h，再将用番红染色后的人体脂肪组织蜡片用浓度为75％的乙醇溶液中浸,3-5s，所述75％的乙醇溶液中滴入醋酸，所述乙醇溶液与醋酸的体积比为1200-1300:1，再将人体脂肪组织蜡片放入固绿溶液中染色3-5s。
9.根据权利要求1所述的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤11中将染色后的人体脂肪组织蜡片依次放入体积浓度为90％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液和无水乙醇中10-12s去浮色。
10.根据权利要求1所述的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤12中中性树胶的使用量为15～18μL/片。
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Citations (3)
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|---|---|---|---|---|
| CN107843470A (zh) * | 2017-10-13 | 2018-03-27 | 济南金域医学检验中心有限公司 | 一种皮肤组织切片的制作方法 |
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