CN115201189A - 一种利用花椒籽饲喂生长育肥猪对小肠组织的影响 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用花椒籽饲喂生长育肥猪对小肠组织的影响，属于动物饲喂技术领域。本发明通过样本采集、制作组织片段、HE染色、封片和图像采集测量这五个步骤来实现花椒籽饲喂生长育肥猪对小肠组织的影响。本发明中通过在回肠、空肠或十二指肠进行花椒籽对育肥猪饲喂，在回肠中，添加5％花椒籽可以显著增加回肠绒毛高度、降低隐窝深度，其绒隐比为2.59±0.16。在空肠中添加5％花椒籽可以显著增加空肠的肠壁厚度，从而加强空肠的消化吸收能力，其绒隐比为1.16±0.12。在十二指肠中添加5％花椒籽可以显著增加十二指肠的隐窝深度，降低绒毛宽度和绒隐比，其绒隐比为1.20±0.05。由此可知，花椒籽具有促进动物消化吸收的功能，促进其生长发育。
Description
技术领域
本发明属于动物饲喂技术领域，具体涉及一种利用花椒籽饲喂生长育肥猪对小肠组织的影响。
背景技术
我国一直以来都是农业大国，农业资源丰富，品种齐全，为我国农业发展提供了坚实的基础。近年来，研究者们关注到花椒籽作为农作物花椒的副产物之一具有很高的利用价值。研究发现，花椒籽可以用于营养保健品、生物柴油、缓蚀剂、涂料、花椒籽黑色素、保鲜剂、抗菌肽、膳食纤维以及动物饲料等方面。马养民等通过对花椒籽油脂肪酸组分分析，发现花椒籽不饱和脂肪酸高达78.4％，其中必需脂肪酸亚油酸和α–亚麻酸占47.56％。姚林杰等试验分析得出，花椒籽中蛋白质和不饱和脂肪酸的含量较高，营养价值丰富，作为饲料加入到动物饲粮中，不仅可以达到补充能量和节约蛋白的目的，还可以节约饲料成本，提高经济效益，所以花椒籽的开发研究对养殖业发展至关重要。
目前，花椒籽在家禽养殖、水产养殖和育肥猪养殖等方面都有涉及，但都是初步研究，没有广泛应用。侯玉洁等研究认为花椒籽对家禽生长发育有促进作用，能显著提高家禽的生产性能、增强免疫力、改善胴体品质、降低饲料成本，显著提高经济效益。因此，本发明亟待解决的问题是利用花椒籽对小肠组织的影响，并验证绒毛高度、隐窝深度、绒毛宽度和肠壁厚度对小肠消化吸收的影响。
发明内容
本发明的目的在于提供一种增加回肠绒毛高度、降低隐窝深度、促进动物消化吸收的利用花椒籽饲喂生长育肥猪对小肠组织的影响。
为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：
一种利用花椒籽饲喂生长育肥猪对小肠组织的影响，包括如下步骤：
1)样本采集：采集添加5％花椒籽饲喂的杜×长×大的三元杂交育肥猪的小肠组织片段，并立即保存于10％标准甲醛固定液，保持小肠组织形态完好；
2)制作组织片段，主要通过脱水、透明、包埋和切片处理，具体如下：
①脱水：固定组织经全自动脱水机脱水，其脱水酒精浓度为75％～95％，脱水时间为1～4h；
②透明：将经脱水处理的组织块浸入透明剂溶液中浸泡10min，再将组织块取出再次浸入透明剂溶液中10min进行透明处理；
③包埋：在步骤②透明处理后，立即将组织块投入到预先融化的石蜡液中，58℃浸渍1h、2h、3h，待石蜡完全包埋组织块后，迅速夹取组织块置于提前准备好的、预热的金属模具中，并倒入浸没组织块的石蜡液进行冷却；
④切片：待包埋石蜡的组织块完全冷却变硬后，小心从模具中取出包埋块，并置于切片机上切片，切片厚度以4～5μm为宜；
3)HE染色：
①脱蜡复水：组织切片依次经过二甲苯、100％酒精、95％酒精、85％酒精、75％酒精和蒸馏水进行处理，其处理时间为2～30min；
②染色：选用苏木精-伊红染色剂，在35℃条件下，将脱蜡后的组织切片按照HE常规染色进行染色；
4)封片：将切片从二甲苯中拿出来稍微晾干，然后滴加中性树胶封片，最后利用显微镜进行镜检，观察组织形态上发生的改变；
5)图像采集测量：采用pannoramic250型全景数字幻灯片扫描仪对切片进行图像采集，采集图像时先在低倍镜下观察全部组织，然后再选择要观察的区域在40倍镜下采集图片。
进一步地，所述步骤1)中小肠组织为回肠、空肠或十二指肠中的一种。
进一步地，所述步骤2)中的②中透明剂为二甲苯。
进一步地，所述步骤3)中①中二甲苯、100％酒精、95％酒精、85％酒精、75％酒精和2min、蒸馏水的处理时间分别为20～30min、2～3min、2min、2min、3min。
进一步地，所述步骤4)中进行封片处理时取中性树胶滴入载玻片的组织上，取盖玻片从一端逐步盖下。
本发明的有益效果是：
本发明中通过在回肠、空肠或十二指肠进行花椒籽对育肥猪饲喂，在回肠中，添加5％花椒籽可以显著增加回肠绒毛高度、降低隐窝深度，其绒隐比为2.59±0.16。在空肠中添加5％花椒籽可以显著增加空肠的肠壁厚度，从而加强空肠的消化吸收能力，其绒隐比为1.16±0.12。在十二指肠中添加5％花椒籽可以显著增加十二指肠的隐窝深度，降低绒毛宽度和绒隐比，其绒隐比为1.20±0.05。由此可知，花椒籽具有促进动物消化吸收的功能，促进其生长发育。
附图说明
图1为本发明试验组与对照组回肠组织切片示意图。
图2为本发明试验组与对照组空肠组织切片示意图。
图3为本发明试验组与对照组十二指肠测量示意图。
具体实施方式
下面将参照附图更详细地描述本发明的实施例。虽然附图中显示了本发明的实施例，然而应该理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了使本发明更加透彻和完整，并且能够将本发明的范围完整地传达给本领域的技术人员。本领域的技术人员可以在不偏离本发明精神和保护范围的基础上从下述描述得到替代技术方案。
一、试验材料
1.试验动物
选择90日龄、体重33kg的健康杜×(长×大)三元杂交猪288只，随机分成四组，每组四个重复，每个重复18头。预试期7d后，正试期100d。试验猪正常饮水和饮食。试验在临夏州众惠猪业科技有限公司进行。本试验以饲喂5％花椒籽替代基础饲粮中玉米作为试验组，饲喂基础饲粮作为对照组，采集对照组与试验组的小肠组织样品。
2.试剂耗材
苏木素染液、伊红染液、组织标本固定液(10％中性甲醛固定液)、梯度酒精(75％、85％、95％、100％)，透明试剂(二甲苯)、盐酸一乙醇分化液、封片试剂(中性树胶)。
3.试验器材
载玻片、盖玻片、切片盒、组织包埋盒、刀片、高效切片石蜡、转轮式切片机、JT-12S自动组织脱水机、BMJ-A型包埋机、RS36型全自动染色机、PHY-Ⅲ型病理组织漂烘仪、数字切片扫描仪。
4.实验方法
一种利用花椒籽饲喂生长育肥猪对小肠组织的影响，包括如下步骤：
1)样本采集：采集添加5％花椒籽饲喂的杜×长×大的三元杂交育肥猪的小肠组织片段，并立即保存于10％标准甲醛固定液，保持小肠组织形态完好；所述小肠组织为回肠、空肠或十二指肠中的一种或者两种以上的混合物。
2)制作组织片段，主要通过脱水、透明、包埋和切片处理，具体如下：
①脱水：固定组织经全自动脱水机脱水，其脱水酒精浓度为75％～95％，脱水时间为1～4h；具体如表1所示：
②透明：将经脱水处理的组织块浸入透明剂溶液中浸泡10min，再将组织块取出再次浸入透明剂溶液中10min进行透明处理；所述透明剂为二甲苯。
③包埋：在步骤②透明处理后，立即将组织块投入到预先融化的石蜡液中，58℃浸渍1h、2h、3h，待石蜡完全包埋组织块后，迅速夹取组织块置于提前准备好的、预热的金属模具中，并倒入浸没组织块的石蜡液进行冷却；
④切片：待包埋石蜡的组织块完全冷却变硬后，小心从模具中取出包埋块，并置于切片机上切片，切片厚度以4～5μm为宜；
3)HE染色：
①脱蜡复水：组织切片依次经过二甲苯、100％酒精、95％酒精、85％酒精、75％酒精和蒸馏水进行处理，其处理时间为2～30min；所述二甲苯、100％酒精、95％酒精、85％酒精、75％酒精和2min、蒸馏水的处理时间分别为20～30min、2～3min、2min、2min、3min，具体如表2所示：
②染色：选用苏木精-伊红染色剂，在35℃条件下，将脱蜡后的组织切片按照HE常规染色进行染色，具体如表3所示：
4)封片：将切片从二甲苯中拿出来稍微晾干，然后滴加中性树胶封片，最后利用显微镜进行镜检，观察组织形态上发生的改变；所述进行封片处理时取中性树胶滴入载玻片的组织上，取盖玻片从一端逐步盖下。
5)图像采集测量：采用pannoramic250型全景数字幻灯片扫描仪对切片进行图像采集，采集图像时先在低倍镜下观察全部组织，然后再选择要观察的区域在40倍镜下采集图片。所述pannoramic250型全景数字幻灯片扫描仪为南丹吉尔电子有限公司生产的，利用Caseviewer图像分析软件Annotation中的Draw an open polygon测量工具对各组织的绒毛高度、隐窝深度、绒毛宽度、肠壁厚度进行测量。
6)数据整理与分析：本次试验共测量小肠组织(空肠、回肠、十二指肠)的绒毛高度、隐窝深度、绒毛宽度和肠壁厚度四个指标，将所测得的数据整理到Excel表格中，计算绒毛高度与隐窝深度的比值；再用SPSS26.0中的单因子方差分析和独立样本T检验对各组数据进行统计分析，检验各组间的差异显著性，结果表示为平均值标准误。
5.实验结果
5.1、花椒籽对回肠组织形态的影响
由表1和图1可知，添加5％花椒籽与对照组的回肠组织绒毛高度、隐窝深度、肠壁厚度和绒隐比均存在显著差异(P<0.05)，而绒毛宽度无显著差异(P>0.05)；添加5％花椒籽的绒毛高度为542.91μm，显著高于对照组的370.39μm，隐窝深度为214.37μm，显著低于对照组的515.15μm，绒隐比为2.59，显著高于对照0.80。试验结果表明，在回肠中，添加5％花椒籽可以显著增加回肠绒毛高度、降低隐窝深度。
5.2、花椒籽对空肠组织形态的影响
由表2和图2可知，添加5％花椒籽与对照组生长育肥猪的空肠肠壁厚度存在显著差异(P<0.05)，绒毛高度、隐窝深度、绒毛宽度和绒隐比均无显著差异(P>0.05)，添加5％花椒籽的肠壁厚度为448.35μm，显著高于对照组325.94μm。试验表明，添加5％花椒籽可以显著增加空肠的肠壁厚度，从而加强空肠的消化吸收能力。
5.3、花椒籽对十二指肠组织形态的影响
由表3和图3可知，添加5％花椒籽与对照组的十二指肠的隐窝深度、绒毛高度和绒隐比存在显著差异(P<0.05)，绒毛高度和肠壁厚度无显著差异(P>0.05)；添加5％花椒籽的隐窝深度347.69μm，显著高于对照358.14μm，绒毛宽度为94.01μm，显著低于对照177.75μm，绒隐比值为1.20，显著低于对照1.56。试验表明，添加5％花椒籽可以显著增加十二指肠的隐窝深度，降低绒毛宽度和绒隐比。
以上所述，仅为本公开的具体实施方式，但本公开实施例的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本公开实施例揭露的技术范围内或者在本公开实施例揭露的思想下，可轻易想到变化、替换或组合，都应涵盖在本公开实施例的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种利用花椒籽饲喂生长育肥猪对小肠组织的影响，其特征在于包括如下步骤：
1)样本采集：采集添加5％花椒籽饲喂的杜×长×大的三元杂交育肥猪的小肠组织片段，并立即保存于10％标准甲醛固定液，保持小肠组织形态完好；
2)制作组织片段，主要通过脱水、透明、包埋和切片处理，具体如下：
①脱水：固定组织经全自动脱水机脱水，其脱水酒精浓度为75％～95％，脱水时间为1～4h；
②透明：将经脱水处理的组织块浸入透明剂溶液中浸泡10min，再将组织块取出再次浸入透明剂溶液中10min进行透明处理；
③包埋：在步骤②透明处理后，立即将组织块投入到预先融化的石蜡液中，58℃浸渍1h、2h、3h，待石蜡完全包埋组织块后，迅速夹取组织块置于提前准备好的、预热的金属模具中，并倒入浸没组织块的石蜡液进行冷却；
④切片：待包埋石蜡的组织块完全冷却变硬后，小心从模具中取出包埋块，并置于切片机上切片，切片厚度以4～5μm为宜；
3)HE染色：
①脱蜡复水：组织切片依次经过二甲苯、100％酒精、95％酒精、85％酒精、75％酒精和蒸馏水进行处理，其处理时间为2～30min；
②染色：选用苏木精-伊红染色剂，在35℃条件下，将脱蜡后的组织切片按照HE常规染色进行染色；
4)封片：将切片从二甲苯中拿出来稍微晾干，然后滴加中性树胶封片，最后利用显微镜进行镜检，观察组织形态上发生的改变；
5)图像采集测量：采用pannoramic250型全景数字幻灯片扫描仪对切片进行图像采集，采集图像时先在低倍镜下观察全部组织，然后再选择要观察的区域在40倍镜下采集图片。
2.根据权利要求1所述的一种利用花椒籽饲喂生长育肥猪对小肠组织的影响，其特征在于所述步骤1)中小肠组织为回肠、空肠或十二指肠中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种利用花椒籽饲喂生长育肥猪对小肠组织的影响，其特征在于所述步骤2)中的②中透明剂为二甲苯。
4.根据权利要求1所述的一种利用花椒籽饲喂生长育肥猪对小肠组织的影响，其特征在于所述步骤3)中①中二甲苯、100％酒精、95％酒精、85％酒精、75％酒精和2min、蒸馏水的处理时间分别为20～30min、2～3min、2min、2min、3min。
5.根据权利要求1所述的一种利用花椒籽饲喂生长育肥猪对小肠组织的影响，其特征在于所述步骤4)中进行封片处理时取中性树胶滴入载玻片的组织上，取盖玻片从一端逐步盖下。
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|---|---|---|---|
| CN202110905210.5A CN115201189A (zh) | 2021-08-08 | 2021-08-08 | 一种利用花椒籽饲喂生长育肥猪对小肠组织的影响 |
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| CN115201189A true CN115201189A (zh) | 2022-10-18 |
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| CN (1) | CN115201189A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2024103250A1 (zh) * | 2022-11-15 | 2024-05-23 | 中国农业大学 | 一种基于全景扫描的肌肉组织纤维总数的测定方法 |
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2021
- 2021-08-08 CN CN202110905210.5A patent/CN115201189A/zh active Pending
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