CN110129430A - 一种用于高血压患者用药的检测试剂盒及检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种用于高血压患者用药的检测试剂盒及检测方法。本发明所述的一种高血压患者用药基因位点组合总共包含了15基因位点，包括常用药物代谢酶基因位点、药物靶向基因位点以及H型高血压和其他高血压并发症常用药物的基因位点。其立足于荧光定量PCR技术，采用特异性的Taqman引物探针组极大提高了产品的准确性和特异性。位点覆盖合理，对药物的指导作用更加准确，为高血压患者的联合用药和个体化用药提供全面的参考，可以为患有高血压及其并发症的人群提供指导，使患者尽早得到最有效的治疗，整个检测过程从提取到结果判定只需要4小时即可。

Description

一种用于高血压患者用药的检测试剂盒及检测方法
技术领域
本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种用于高血压患者用药的检测试剂盒及检测方法。
背景技术
据《中国居民营养与慢性病状况报告(2015年)》显示，2012年中国≥18岁居民高血压患病率为25.2％，中国高血压患病人数为2.7亿。高血压同时是心脑血管病最重要的危险因素，主要并发症如脑卒中、心肌梗死、心力衰竭、动脉粥样硬化及慢性肾脏病等。
目前药物治疗是控制血压最主要的措施。临床上主要的降压药物有利尿剂、钙离子拮抗剂(calcium channel blocker，CCB)、血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensinconverting enzyme inhibitor，ACEI)、β受体阻滞剂、血管紧张素II受体拮抗剂(angiotensinⅡreceptor blocker，ARB)五大类，涉及到具体的高血压及合并高血压并发症的治疗药物更是品种繁多，且大多需长期服用。但不同患者对药物的个体反应不同，药物疗效差、出现不良反应的情况时有发生，主要与患者参与药物转运、代谢、靶点的基因状态相关。因此对高血压患者进行用药基因检测，预测患者对药物的疗效及不良反应情况，指导对不同个体的精准化用药，尽可能避免用药的不良反应同时使用药更加有效、经济，具有十分重要的临床应用价值。
目前市场上针对高血压用药指导的产品主要检测CYP2D6、ADRB1、CYP2C9、AGTR1、ACE五个基因，指导血管紧张素转换酶抑制剂、β受体阻滞剂、血管紧张素II受体拮抗剂三大类降压药用药。对于利尿剂和钙离子拮抗剂目前没有对应的用药基因检测，且药物在体内发挥药效受到人体吸收、转运、代谢、靶点等多种因素影响，只检测药效发挥过程中某一部分的基因往往会造成对药效及不良反应的预测不足。同时高血压患者中75％为H型高血压，且经常伴随脑卒中、心肌梗死、心力衰竭、动脉粥样硬化等疾病，此类患者往往需要多种药物联合治疗，此时不仅要选择合适的降压药，也应关注联合用药中非降压药的药效作用，而目前市场中尚未有对高血压患者联合用药进行基因检测指导的产品。
另外，目前市场上针对高血压用药指导的产品主要采用Sanger法、基因芯片法、PCR-熔解曲线法、荧光PCR法等。其中，sanger法操作复杂、成本较高，且检测时间长，检测位点少；基因芯片法检测成本高、操作复杂、检测时间长，且准确性低易污染；PCR-熔解曲线法操作简单、成本低，但是准确性较低；荧光PCR法操作简单、成本低、检测时间短，但特异性不足。
目前市场上已有的与高血压用药基因相关的产品主要存在以下问题：
(1)可指导药物种类不全，只针对一类或某几类甚至某一种降压药物。目前市场上产品主要指导血管紧张素转换酶抑制剂、β受体阻滞剂、血管紧张素II受体拮抗剂三大类降压药用药，而在高血压合理用药指南用药原则中第三条便是联合原则，第四条是个体化原则，指导药物种类不全直接影响了对患者的个体化联合用药。
(2)检测的位点单一，评价不够精准。药物发挥作用受人体吸收、转运、代谢、靶点等多种因素影响，如果只对某一类代谢酶基因或者药物靶向位点基因进行检测，则对药物疗效及不良反应预测不够精确，影响患者治疗效果。
(3)无高血压临床并发症常用药物相关基因位点检测。高血压患者中75％为H型高血压，且经常伴随脑卒中、心肌梗死、心力衰竭、动脉粥样硬化等疾病，往往需要和阿司匹林、他汀类药物联合治疗，目前产品缺少对常用联合用药基因用药检测，对相应的患病人群则不能提供全面的用药指导。
(4)检测方法多样，但均无明显优势。目前市场上针对高血压用药指导的产品主要采用Sanger法、基因芯片法、PCR-熔解曲线法、荧光PCR法等，以上方法或存在操作繁琐、成本高的问题，或存在准确度低、特异性不强的问题。
发明内容
本发明所述的一种高血压患者用药基因位点组合总共包含了15基因位点，包括常用药物代谢酶基因位点、药物靶向基因位点以及H型高血压和其他高血压并发症常用药物的基因位点。其立足于荧光定量PCR技术，采用特异性的Taqman引物探针组极大提高了产品的准确性和特异性。位点覆盖合理，对药物的指导作用更加准确，为高血压患者的联合用药和个体化用药提供全面的参考，可以为患有高血压及其并发症的人群提供指导，使患者尽早得到最有效的治疗，整个检测过程从提取到结果判定只需要4小时即可。
本发明通过下述技术方案实现上述技术效果：
一种高血压用药指导的基因位点检测方法，其包括对CYP2D6、ADRB1、CYP2C9、AGTR1、ACE、CYP11B2、CACNA1C、ADD1、CYP3A5、MTHFR、PTGS1、SLCO1B1、APOE、ABCB1基因的检测，确定突变的基因位点。
如上所述的高血压用药指导的基因位点检测方法，所述的基因检测对应的位点分别为：CYP2D6基因的检测位点为c.100C>T，ADRB1基因的检测位点为c.1165G>C，CYP2C9基因的检测位点为c.1075A>C，AGTR1基因的检测位点为c.1166A>C，ACE基因的检测位点为
c.584-109_584-108ins289，CYP11B2基因的检测位点为c.-344T>C，CACNA1C基因的检测位点为c.50-1658T＞G，ADD1基因的检测位点为c.1378G>T，CYP3A5基因的检测位点为c.219-237G>A，MTHFR基因的检测位点为c.677C>T，PTGS1基因的检测位点为c.842A>G，SLCO1B1基因的检测位点为c.521T>C，APOE基因的检测位点为c.526C>T、c.388T>C，ABCB1基因的检测位点为c.2677T>G。
所述的基因检测位点和rs号的对应关系如下所示：
一种高血压用药指导的基因位点检测试剂盒，其包括检测反应液、野生型质控品、纯合突变型质控品、杂合突变型质控品和空白质控品，其中检测反应液包括：10×Buffer、10×Solution、dNTP、MgSO4、引物mix、探针mix、KCl、Taq酶、灭菌纯化水；所述的野生型质控品为各位点野生型质粒混合液；所述的纯合突变型质控品为各位点突变型质粒混合液；所述的杂合突变型质控品为各位点野生型和突变型质粒混合液，所述的空白质控品为灭菌纯化水。
其中所述的引物mix包括检测15种基因位点的正向引物和反向引物，具体地，所述的CYP2D6的引物如SEQ NO 1和SEQ NO 2所示、ADRB1的引物如SEQ NO 5和SEQ NO 6所示、CYP2C9的引物如SEQ NO 9和SEQ NO 10所示、AGTR1的引物如SEQ NO 13和SEQ NO 14所示、ACE的引物如SEQ NO 17和SEQ NO 18所示、CYP11B2的引物如SEQ NO 21和SEQ NO22所示、CACNA1C的引物如SEQ NO 25和SEQ NO 26所示、ADD1的引物如SEQ NO 29和SEQ NO30所示、CYP3A5的引物如SEQ NO 33和SEQ NO 34所示、MTHFR的引物如SEQ NO 37和SEQ NO 38所示、PTGS1的引物如SEQ NO 41和SEQ NO 42所示、SLCO1B1的引物如SEQ NO 45和SEQ NO 46所示、APOE的引物如SEQ NO 49和SEQ NO 50所示、APOE的引物如SEQ NO 53和SEQ NO 54所示、ABCB1的引物如SEQ NO 57和SEQ NO 58所示。
其中所述的探针mix包括检测15种基因位点的正向探针和反向探针，具体地，所述的CYP2D6的探针如SEQ NO 3和SEQ NO 4所示、ADRB1的探针如SEQ NO 7和SEQ NO 8所示、CYP2C9的探针如SEQ NO 11和SEQ NO 12所示、AGTR1的探针如SEQ NO 15和SEQ NO 16所示、ACE的探针如SEQ NO 19和SEQ NO 20所示、CYP11B2的探针如SEQ NO 23和SEQ NO24所示、CACNA1C的探针如SEQ NO 27和SEQ NO 28所示、ADD1的探针如SEQ NO 31和SEQ NO32所示、CYP3A5的探针如SEQ NO 35和SEQ NO 36所示、MTHFR的探针如SEQ NO 39和SEQ NO 40所示、PTGS1的探针如SEQ NO 43和SEQ NO 44所示、SLCO1B1的探针如SEQ NO 47和SEQ NO 48所示、APOE的探针如SEQ NO 51和SEQ NO 52所示、APOE的探针如SEQ NO 55和SEQ NO 56所示、ABCB1的探针如SEQ NO 59和SEQ NO 60所示。
具体地，引物探针组具体序列如下：
检测CYP2D6(rs1065852)多态性的引物探针序列包括：
引物1 GACCTGATGCACCGGCG SEQ NO 1
引物2 TTCTGGAAGTCCACATGCAGCA SEQ NO 2
探针1(野生型) FAM-CTGCACGCTACCCA-MGB SEQ NO 3
探针2(突变型) VIC-CTGCACGCTACTCA-MGB SEQ NO 4
检测ADRB1(rs1801253)多态性的引物探针序列包括：
检测CYP2C9(rs1057910)多态性的引物探针序列包括：
检测AGTR1(rs5186)多态性的引物探针序列包括：
引物7 ATGTGGCTTTGCTTTGTCTTGT SEQ NO 13
引物8 TTTGTGAAAGAAGGAGCAAGAGAA SEQ NO 14
探针7(野生型) FAM-ACCAAATGAGCATTAG-MGB SEQ NO 15
探针8(突变型) VIC-AAATGAGCCTTAGCTAC-MGB SEQ NO 16
检测ACE(rs4646994)多态性的引物探针序列包括：
引物9 CCATCCTTTCTCCCATTTCTCTAG SEQ NO 17
引物10 AGCCCTTAGCTCACCTCTGC SEQ NO 18
探针9(野生型) FAM-CCTGATACAGTCACTTT-MGB SEQ NO 19
探针10(突变型) VIC-CCTATACAGTCACTTT-MGB SEQ NO 20
ACE基因ID多态性包含289bp的插入片段，本发明设计一对包含插入片段的扩增引物和两条探针，探针9覆盖插入位置，探针10与插入片段互补。
检测CYP11B2(rs1799998)多态性的引物探针序列包括：
引物11 GGAACCAGTGCGCTCCTGT SEQ NO 21
引物12 CCCCATTGCTGCAAGTCC SEQ NO 22
探针11(野生型) FAM-TGAGAGGGAGCCTT-MGB SEQ NO 23
探针12(突变型) VIC-ATGAGAGGGGGCCT-MGB SEQ NO 24
检测CACNA1C(rs2238032)多态性的引物探针序列包括：
检测ADD1(rs4961)多态性的引物探针序列包括：
检测CYP3A5(rs7767461)多态性的引物探针序列包括：
引物17 AGATACCCACGTATGTACCACCC SEQ NO 33
引物18 CCCAGGAAGCCAGACTTTGA SEQ NO 34
探针17(野生型) FAM-AGAGATATTGAAAGACAAA-MGB SEQ NO 35
探针18(突变型) VIC-AAGAGATACTGAAAGAC-MGB SEQ NO 36
检测MTHFR(rs1801133)多态性的引物探针序列包括：
引物19 GGGAGCTTTGAGGCTGACC SEQ NO 37
引物20 GCAAGTGATGCCCATGTCG SEQ NO 38
探针19(野生型) FAM-AAATCGGCTCCCGC-MGB SEQ NO 39
探针20(突变型) VIC-AAATCGACTCCCGCAGA-MGB SEQ NO 40
检测PTGS1(rs10306114)多态性的引物探针序列包括：
引物21 ATCCCAGAGGGTGGTTGTAAGA SEQ NO 41
引物22 AATTCGGCGGTGGATGTG SEQ NO 42
探针21(野生型) FAM-ACATGCTGGACACTG-MGB SEQ NO 43
探针22(突变型) VIC-ACATGCTGGGCACT-MGB SEQ NO 44
检测SLCO1B1(rs4149056)多态性的引物探针序列包括：
检测APOE(rs7412)多态性的引物探针序列包括：
引物25 GCCCCGGCCTGGTACACT SEQ NO 49
引物26 CACCTGCGCAAGCTGCGT SEQ NO 50
探针25(野生型) FAM-CAGGCGCTTCTG-MGB SEQ NO 51
探针26(突变型) VIC-CCAGGCACTTCTG-MGB SEQ NO 52
检测APOE(rs429358)多态性的引物探针序列包括：
引物27 CACCTCGCCGCGGTACTG SEQ NO 53
引物28 AAGGAGCTGCAGGCGGC SEQ NO 54
探针27(野生型) FAM-CCGCACACGTCC-MGB SEQ NO 55
探针28(突变型) VIC-CGCGCACGTCC-MGB SEQ NO 56
检测ABCB1(rs2032582)多态性的引物探针序列包括：
内标基因GAPDH引物探针序列包括：
本发明相应的提供了一种检测方法，按照如下操作步骤操作：
1)取人类外周抗凝血液样本，使用商业化的DNA提取试剂盒处理样本，提取DNA；所提DNA应满足OD260/OD280＝1.8-2.0，浓度＞0.5ng/μL；
2)将检测反应液分装到PCR反应孔中18μL/孔，分别加入待测样本DNA，野生型质控品，突变型质控品，杂合型质控品与阴性质控品各2μL；
3)按如下PCR扩增条件运行；
4)结果判读
内标基因GAPDH：ROX通道Ct≤33，核酸质量合格，可进行结果分析。
野生型：FAM通道Ct≤35，对应的VIC通道Ct>35，检测结果为野生型；
纯合突变型：FAM通道Ct>35，对应VIC通道Ct≤35，检测结果为纯合突变型；
杂合突变型：FAM通道Ct≤35，对应VIC通道Ct≤35，检测结果为杂合突变型；
5)检测报告：依据样本检测结果使用配套报告系统出具检测报告。
本发明提供了一种高血压患者用药基因位点组合，总共包含了15基因位点如下所示：这15个基因位点包含治疗高血压5大类药物β-受体阻滞剂、血管紧张素II受体拮抗剂、血管紧张素转换酶抑制剂、利尿剂、钙离子拮抗剂的代谢酶基因位点、药物靶向基因位点以及H型高血压和其他高血压并发症常用药物(阿司匹林、他汀类)的基因位点。这一位点组合主要有一下优点：
(1)全面覆盖了高血压治疗的主要药物，为高血压患者的联合用药和个体化用药提供全面的参考。
(2)检测位点包括了药物的代谢位点和药物靶向基因位点，位点覆盖合理，对药物的指导作用更加准确。
(3)包含H型高血压和其他高血压并发症常用药的基因位点，可以为患有高血压及其并发症的人群提供指导，使患者尽早得到最有效的治疗。
(4)本方法立足于荧光定量PCR技术，采用特异性的Taqman引物探针组极大提高了产品的准确性和特异性。整个检测过程从提取到结果判定只需要4小时即可。
具体实施方式
以下通过具体实施例进一步描述本发明，但所述实施例并不以任何方式限定本发明的保护范围。
实施例1
扩增引物探针主要包含14个基因的15个位点。引物的合成是根据相应基因对应位点的区域，设计出扩增引物，引物和探针的序列如本发明发明内容部分所述。所述探针为TaqMan探针，野生型的荧光报告基团为FAM，突变型的荧光报告基团为VIC。
实施例2
试剂盒包括：检测反应液、野生型质控品、纯合突变型质控品、杂合突变型质控品和空白质控品。检测反应液包括：10×Buffer、10×Solution、dNTP、MgSO4、引物mix、探针mix、KCl、Taq酶、灭菌纯化水。野生型质控品：野生型质粒，纯合突变型质控品：突变型质粒，杂合突变型质控品：野生型和突变型质粒混合液，空白质控品：灭菌纯化水。
具体的在一个PCR扩增实施例中，所用的体系如下：
组分(浓度) 用量(μL)
10×Buffer 2
10×Solution 2
dNTPs(2.5mM) 1-2
MgSO4(25mM) 0.5-1.5
KCl(1mol/L) 0.5-1.5
引物 mix(10μM) 0.1-0.6
探针 mix(10μM) 0.1-0.5
Taq 酶(5U/μL) 0.01-0.1
样本DNA 2
灭菌纯化水 加水至20
其中引物mix包含内标基因检测引物，探针mix包含内标基因检测探针。
具体用量如下表：
组分(浓度) 用量(μL)
10×Buffer 2
10×Solution 2
dNTP(2.5mM) 1.8
MgSO<sub>4</sub>(25mM) 1.2
KCl(1mol/L) 0.8
引物 mix(10μM) 0.4
探针 mix(10μM) 0.25
Taq 酶(5U/μL) 0.04
样本DNA 2
灭菌纯化水 加水至20
质控品浓度
质控品 质粒 浓度
野生型质控品 野生型质粒 10<sup>4</sup>-10<sup>7</sup>Copies/μL
纯合突变型质控品 突变型质粒 10<sup>4</sup>-10<sup>7</sup>Copies/μL
杂合突变型质控品 野生型质粒与突变型质粒 10<sup>4</sup>-10<sup>7</sup>Copies/μL
空白质控品 灭菌纯化水 /
具体的浓度是
实施例3
使用如上所述试剂盒进行人样本的基因型检测如下步骤：
1)取人类外周抗凝血，使用商业化的DNA提取试剂盒处理样本，提取DNA。所提DNA应满足OD260/OD280＝1.8-2.0，浓度＞0.5ng/μL；
2)将检测反应液分装到PCR反应孔中18μL/孔，分别加入待测样本DNA，野生型质控品，纯合突变型质控品，杂合突变型质控品与空白质控品各2μL；
3)按如下PCR扩增条件运行；
4)结果判读
内标基因GAPDH：ROX通道Ct≤33，核酸质量合格，可进行结果分析。
野生型：FAM通道Ct≤35，对应的VIC通道Ct>35，检测结果为野生型；
纯合突变型：FAM通道Ct>35，对应VIC通道Ct≤35，检测结果为纯合突变型；
杂合突变型：FAM通道Ct≤35，对应VIC通道Ct≤35，检测结果为杂合突变型。
5)检测报告
依据样本检测结果使用配套报告系统出具检测报告。
取1例高血压患者临床样本，在荧光定量PCR仪上进行检测，其15个基因位点的检测结果为：CYP2D6(rs1065852)杂合突变型、ADRB1(rs1801253)纯合突变型、CYP2C9(rs1057910)野生型、AGTR1(rs5186)野生型、ACE(rs4646994)纯合插入突变、CYP11B2(rs1799998)野生型、CACNA1C(rs2238032)野生型、ADD1(rs4961)纯合突变型、CYP3A5(rs776746)野生型、MTHFR(rs1801133)野生型、PTGS1(rs10306114)野生型、SLCO1B1(rs4149056)野生型、APOE(rs7412)野生型、APOE(rs429358)野生型、ABCB1(rs2032582)杂合突变型。
实施例4
临床样本20例，使用本发明所提供的试剂盒按照实施例3所述过程对样本进行检测，与此同时对这20例样本采用金标准--一代测序进行检测，结果如下：
注：W表示检测结果为野生型、H表示检测结果为杂合突变型，M检测结果为纯合突变型。
使用本发明提供的试剂盒的检测结果与一代测序结果的符合率是100％，本试剂盒检测结果准确。
实施例5
对一名临床高血压患者进行基因检测，检测结果显示发现其基因在ADRB1(rs1801253)、CYP11B2(rs1799998)、ADD1(rs4961)、MTHFR(rs1801133)、PTGS1(rs10306114)、SLCO1B1(rs4149056)位点发生突变，则相应的预期疗效和建议如下：
序列表
<110> 广州海思医疗科技有限公司
<120> 一种用于高血压患者用药的检测试剂盒及检测方法
<160> 63
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gacctgatgc accggcg 17
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ttctggaagt ccacatgcag ca 22
<210> 3
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ctgcacgcta ccca 14
<210> 4
<211> 14
<212> DNA
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ctgcacgcta ctca 14
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atgattcaga cgaggattgt gg 22
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ggggccgcct cgga 14
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cttccaggga ctgc 14
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tccagcgact gct 13
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gaacgtgtga ttggcagaaa cc 22
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gggaatgaga tagtttctga atttaat 27
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cagagataca ttgaccttct ccccacca 28
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cagagatacc ttgaccttct ccccaca 27
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atgtggcttt gctttgtctt gt 22
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tttgtgaaag aaggagcaag agaa 24
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accaaatgag cattag 16
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aaatgagcct tagctac 17
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ccatcctttc tcccatttct ctag 24
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agcccttagc tcacctctgc 20
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cctgatacag tcacttt 17
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cctatacagt cacttt 16
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ggaaccagtg cgctcctgt 19
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ccccattgct gcaagtcc 18
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tgagagggag cctt 14
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atgagagggg gcct 14
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gagccagcaa ccttaggacc c 21
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tggcatctga ggacacttca gc 22
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ttgggtgtca tgtatgt 17
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acatacatga cccccaa 17
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actatgaaca gtaaggtagg cacagac 27
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cagcagcggg agaagacaa 19
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ttccgaggaa ggg 13
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cttccgagga atgg 14
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agatacccac gtatgtacca ccc 23
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cccaggaagc cagactttga 20
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agagatattg aaagacaaa 19
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aagagatact gaaagac 17
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gggagctttg aggctgacc 19
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gcaagtgatg cccatgtcg 19
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aaatcggctc ccgc 14
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aaatcgactc ccgcaga 17
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atcccagagg gtggttgtaa ga 22
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aattcggcgg tggatgtg 18
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acatgctgga cactgmgb 18
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acatgctggg cact 14
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caaaagtaga caaagggaaa gtgatc 26
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gttgtttaaa ggaatctggg tcatac 26
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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atatatgtgt tcatgggtaa 20
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atgtggatat atgcgttc 18
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gccccggcct ggtacact 18
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cacctgcgca agctgcgt 18
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caggcgcttc tg 12
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ccaggcactt ctg 13
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cacctcgccg cggtactg 18
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aaggagctgc aggcggc 17
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ccgcacacgt cc 12
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cgcgcacgtc c 11
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atagcaaatc ttgggacagg aata 24
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cttagagcat agtaagcagt agggagta 28
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ttcccagaac cttcta 16
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accttcccag cacc 14
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acatggccgc ttctcctgga 20
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ggctggcctg gcttaaggca t 21
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 63
ccaacacccc cagtcatacg aagcc 25

Claims (10)

1.一种高血压用药指导的基因位点检测方法，其包括对CYP2D6、ADRB1、CYP2C9、AGTR1、ACE、CYP11B2、CACNA1C、ADD1、CYP3A5、MTHFR、PTGS1、SLCO1B1、APOE、ABCB1基因的检测，确定突变的基因位点。
2.根据权利要求1所述的高血压用药指导的基因位点检测方法，其特征在于，所述的基因检测对应的位点分别为：CYP2D6基因的检测位点为c.100C>T，ADRB1基因的检测位点为c.1165G>C，CYP2C9基因的检测位点为c.1075A>C，AGTR1基因的检测位点为c.1166A>C，ACE基因的检测位点为c.584-109_584-108ins289，CYP11B2基因的检测位点为c.-344T>C，CACNA1C基因的检测位点为c.50-1658T＞G，ADD1基因的检测位点为c.1378G>T，CYP3A5基因的检测位点为c.219-237G>A，MTHFR基因的检测位点为c.677C>T，PTGS1基因的检测位点为c.842A>G，SLCO1B1基因的检测位点为c.521T>C，APOE基因的检测位点为c.526C>T、c.388T>C，ABCB1基因的检测位点为c.2677T>G。
3.一种高血压用药指导的基因位点检测试剂盒，其包括检测反应液、野生型质控品、纯合突变型质控品、杂合突变型质控品和空白质控品，其中检测反应液包括：10×Buffer、10×Solution、dNTP、MgSO4、引物mix、探针mix、KCl、Taq酶、灭菌纯化水；所述的野生型质控品为各位点野生型质粒混合液；所述的纯合突变型质控品为各位点突变型质粒混合液；所述的杂合突变型质控品为各位点野生型和突变型质粒混合液，所述的空白质控品为灭菌纯化水。
4.根据权利要求3所述的高血压用药指导的基因位点检测试剂盒，其特征在于，所述的引物mix包括检测15种基因位点的正向引物和反向引物，具体地，所述的CYP2D6的引物如SEQ NO 1和SEQ NO 2所示、ADRB1的引物如SEQ NO 5和SEQ NO 6所示、CYP2C9的引物如SEQNO 9和SEQ NO 10所示、AGTR1的引物如SEQ NO 13和SEQ NO 14所示、ACE的引物如SEQ NO17和SEQ NO 18所示、CYP11B2的引物如SEQ NO 21和SEQ NO 22所示、CACNA1C的引物如SEQNO 25和SEQ NO 26所示、ADD1的引物如SEQ NO 29和SEQ NO 30所示、CYP3A5的引物如SEQNO 33和SEQ NO 34所示、MTHFR的引物如SEQ NO 37和SEQ NO 38所示、PTGS1的引物如SEQNO 41和SEQ NO 42所示、SLCO1B1的引物如SEQ NO 45和SEQ NO 46所示、APOE的引物如SEQNO 49和SEQ NO 50所示、APOE的引物如SEQ NO 53和SEQ NO 54所示、ABCB1的引物如SEQ NO57和SEQ NO 58所示。
5.根据权利要求3所述的高血压用药指导的基因位点检测试剂盒，其特征在于，所述的探针mix包括检测15种基因位点的正向探针和反向探针，具体地，所述的CYP2D6的探针如SEQ NO 3和SEQ NO 4所示、ADRB1的探针如SEQ NO 7和SEQ NO 8所示、CYP2C9的探针如SEQNO 11和SEQ NO 12所示、AGTR1的探针如SEQ NO 15和SEQ NO 16所示、ACE的探针如SEQ NO19和SEQ NO 20所示、CYP11B2的探针如SEQ NO 23和SEQ NO24所示、CACNA1C的探针如SEQNO 27和SEQ NO 28所示、ADD1的探针如SEQ NO 31和SEQ NO 32所示、CYP3A5的探针如SEQNO 35和SEQ NO 36所示、MTHFR的探针如SEQ NO 39和SEQ NO 40所示、PTGS1的探针如SEQNO 43和SEQ NO 44所示、SLCO1B1的探针如SEQ NO 47和SEQ NO 48所示、APOE的探针如SEQNO 51和SEQ NO 52所示、APOE的探针如SEQ NO 55和SEQ NO 56所示、ABCB1的探针如SEQ NO59和SEQ NO 60所示。
6.根据权利要求3所述的高血压用药指导的基因位点检测试剂盒，其特征在于，所述的检测液的组成为：
7.根据权利要求6所述的高血压用药指导的基因位点检测试剂盒，其特征在于，所述的检测液的组成为：
8.根据权利要求3所述的高血压用药指导的基因位点检测试剂盒，其特征在于，所述的野生型质控品、纯合突变型质控品、杂合突变型质控品的浓度均为104-107 Copies/μL。
9.一种运用权利要求3所述试剂盒进行人样本的基因型检测的方法，其包括如下步骤：
1)取人类外周抗凝血，使用商业化的DNA提取试剂盒处理样本，提取DNA；
2)将检测反应液分装到PCR反应孔中18μL/孔，分别加入待测样本DNA，野生型质控品，纯合突变型质控品，杂合突变型质控品与空白质控品各2μL；
3)按如下PCR扩增条件运行；
4)结果判读
内标基因GAPDH：ROX通道Ct≤33，核酸质量合格，可进行结果分析。
野生型：FAM通道Ct≤35，对应的VIC通道Ct>35，检测结果为野生型；
纯合突变型：FAM通道Ct>35，对应VIC通道Ct≤35，检测结果为纯合突变型；
杂合突变型：FAM通道Ct≤35，对应VIC通道Ct≤35，检测结果为杂合突变型；
5)检测报告：依据样本检测结果使用配套报告系统出具检测报告。
10.根据权利要求9所述的人样本的基因型检测的方法，其特征在于，所提DNA应满足OD260/OD280＝1.8-2.0，浓度＞0.5ng/μL。
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