CN110124050B - 基于共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种基于共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备方法及其应用，构建了基于共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的药物系统。为了提高药物在肿瘤的穿透性和化疗效果，在该系统中，亲水性聚合物接在喜树碱（CPT）连接的聚合物CPADB‑PNPCF周围来提供正电荷，当复合物被运送到细胞膜上时，由于细胞膜带负电荷，细胞摄取增强。最后，CPT前药中的二硫键在肿瘤细胞内还原微环境中被破坏，导致CPT快速释放。其他的实验结果也证明了我们所发明的聚合物的优点。包括高载药率，可控药物释放等。

Description

基于共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备方法
技术领域
本发明涉及一种新颖的化疗药物传递策略。具体涉及一类具有高载药率，可控药物释放等的共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备及其应用。
背景技术
在临床医治肿瘤过程中，很多的抗癌药物具有水溶性差，毒副作用大，抗药性强且容易被网状内皮系统清除，导致医治效果不理想。因此需要有效的药物运输系统运输药物到病灶部位。肿瘤环境严重缺氧，且谷胱甘肽的含量是正常细胞的四倍，呈现还原环境，而二硫键在生理环境下能够稳定存在，在还原环境中容易断裂，当还原响应性聚合物前药到达病灶部位后，二硫键被破坏，药物能够有效的释放，杀死癌细胞。相对于原药，共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体具有以下优点：由于药物通过共价键与聚合物键合，所以在血循环过程中足够稳定；可以降低非特异性释药行为；提高载药率；降低药物毒性等。
发明内容
本发明的目的之一是基于一种共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备方法。为实现上述目的，采用以下技术方案：
一种基于共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备方法，其特征在于：包含以下步骤：
MABHD的制备，包含以下步骤：在冰浴和2-10Pa的氩气Ar条件下，将二硫代二乙二醇BHD溶于含三乙胺TEA的无水四氢呋喃溶液后，逐滴加入溶于四氢呋喃THF的甲基丙烯酰氯MA的溶液，搅拌0.5h,之后恢复至室温过夜，过滤除杂, 用旋转蒸发仪浓缩溶剂，进一步以乙酸乙酯、正己烷为洗脱剂过硅胶柱除去二取代产物，用旋转蒸发仪浓缩所收集溶液得到MABHD；其反应式如下所示;
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE002
（2）MABHD-CPT的制备,包含以下步骤：在2-10Pa的氩气Ar和避光条件下，喜树碱CPT与4-二甲氨基吡啶DMAP溶于二氯甲烷DCM，用注射器将含有二氯甲烷和三光气的溶液逐滴加入至含有CPT、DMAP的反应液中，室温搅拌0.5h后，将溶于四氢呋喃THF的MABHD溶液用注射器逐滴加入上述溶液, 室温搅拌24h，反应结束后，加乙酸乙酯稀释，依次用水、盐酸、饱和食盐水萃取，有机相用无水硫酸镁除水，浓缩，用乙醚洗三次得到淡黄色固体MABHD-CPT；其反应式如下所示；
Figure DEST_PATH_IMAGE004
（3）MA-NHBOC的制备，包含以下步骤：在2-10Pa氩气Ar条件下，将二碳酸二叔丁酯BOC溶于25mL乙腈MeCN，而后加入溶于15mL MeCN的乙醇胺溶液，室温搅拌0.5h,浓缩后分离出10g, 而后在冰浴和2-10Pa氩气Ar条件下，再溶于100mL二氯甲烷，加入N,N-二异丙基乙胺EDIA，搅拌0.5h后，逐滴加入甲基丙烯酰氯MA, 冰浴下搅拌0.5h恢复至室温反应12h,用少量二氯甲烷及大量正己烷洗，真空干燥得到MA-NHBOC；其反应式如下所示；
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE006
（4）PCPT的制备，包含以下步骤：在2-10Pa氩气Ar条件下，以ß-CD-21Br为原子转移自由基聚合ATRP反应的大分子引发剂，与步骤(3)所制备MA-NHBOC,以及步骤(2)所制备的MABHD-CPT一并溶于等体积的N,N-二甲基甲酰胺DMF与二甲亚砜DMSO形成的混合液中，加入溴化亚铜CuBr后，冷冻－解冻循环三次,加入三-(N，N-二甲氨基乙基)胺Me6TREN 配体，冷冻解冻一次，在室温下避光反应24h，用冰乙醚沉淀，溶于少量二氯甲烷再沉淀真空干燥后得到聚合物ß-CD-P((MABHD-CPT)x-co-(MA-NHBOC)y)，简称为PCPT，其中x表示MABHD-CPT的聚合度，它的范围为6~40，y表示MA-NHBOC的聚合度，它的范围为3~110；其反应式如下所示；
Figure DEST_PATH_IMAGE008
（5）CPADB-P((OEGMA)m-co-(MABHD)n)的制备，包含以下步骤：在2-10Pa氩气Ar条件下，以4-氰基-4-(苯基硫代甲酰硫基)戊酸CPADB为可逆加成-断裂链转移聚合RAFT反应的引发剂，与步骤(1)所制备MABHD,以及甲基丙烯酸酯OEGMA一并溶于二氧六环Dio中，加入自由基引发剂偶氮异丁二腈AIBN后，冷冻－解冻循环三次,在70℃避光反应24h，用冰乙醚沉淀，溶于少量二氯甲烷再沉淀，真空干燥后得到聚合物CPADB-P((OEGMA)m-co-(MABHD)n)，其中m表示OEGMA的聚合度，它的范围为2~160， n表示MABHD的聚合度，它的范围为3~80；其反应式如下所示；
Figure DEST_PATH_IMAGE010
（6）CPADB-PNPCF的制备，包含以下步骤：在冰浴和2-10Pa氩气Ar条件下，将步骤（5）制备的CPADB-P((OEGMA)m-co-(MABHD)n)与对硝基苯基氯甲酸酯一起溶于二氯甲烷中，搅拌0.5h后，逐滴加入吡啶，冰浴条件下再搅拌0.5h,在室温条件下反应24h, 加3~5mL二氯甲烷稀释，用截留分子量MWCO为3500Da的透析袋在等体积二氯甲烷与甲醇形成的混合液中透析24h,浓缩后得到CPADB-PNPCF；其反应式如下所示；
Figure DEST_PATH_IMAGE012
（7）PCPT纳米颗粒的制备，包含以下步骤：称量 5mg步骤(4)所制备的PCPT，溶于DMF溶液中，搅拌0.5h，用200 µL移液枪逐滴加至二次水中搅拌0.5h后,用MWCO为3500Da的透析袋在水中透析24h，得到纳米颗粒水溶液；
（8）共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备，包含以下步骤：将10mg 步骤（6）制备的CPADB-PNPCF溶于1mL无水N,N-二甲基甲酰胺中，搅拌条件下，用200µL移液枪逐滴加入溶于0.5mL无水DMF的PCPT溶液，所述的PCPT为1mg；室温搅拌12h后，加入1.3µL氨基-三聚乙二醇-氨基,避光搅拌12h, 用MWCO为14000Da的透析袋在甲醇中透析24h，在水中再透析24h，得到共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的纳米颗粒水溶液。
进一步，所述步骤（1）中二硫代二乙二醇与甲基丙烯酰氯的摩尔浓度比为1：0.5；TEA与THF的体积比为1:15；乙酸乙酯与正己烷的体积比为1:4。
进一步，所述步骤(2)中MABHD、CPT、三光气、DMAP的摩尔比为1:1:0.4 :0.3；四氢呋喃、二氯甲烷、乙酸乙酯、水、盐酸、饱和食盐水的体积比为1:8 :30:10 :10:2。
进一步，所述步骤(3) 中二碳酸二叔丁酯、乙醇胺、N,N-二异丙基乙胺、甲基丙烯酰氯的摩尔浓度比为1:1:9.3:6.8；二氯甲烷与正己烷的体积比为1:7。
进一步，所述步骤(4) 中ß-CD-21Br、MABHD-CPT、MA-NHBOC、CuBr、Me6TREN的摩尔浓度比为1:10:10 :1.1:3；DMF与DMSO的体积比为1:1。
进一步，所述步骤(5) 中4-氰基-4-(苯基硫代甲酰硫基)戊、MABHD、甲基丙烯酸酯、偶氮异丁二腈的摩尔浓度比为1:10:10:0.1；二氯甲烷、二氧六环、冰乙醚的体积比为1:1:5。
进一步，所述步骤(6) 中CPADB-P((OEGMA)m-co-(MABHD)n)、对硝基苯基氯甲酸酯、吡啶的摩尔浓度比为1:1.2:1.2；二氯甲烷甲醇的体积比为1:1。
进一步，所述步骤（7）中DMF和水的体积比为1:500; 所述步骤（7）中透析后所得的纳米颗粒粒径范围为1~1000nm。
进一步，所述步骤（8）中CPADB-PNPCF、PCPT的摩尔浓度比为1:0.027；氨基-三聚乙二醇-氨基、DMF的体积比为1:384.6；甲醇和水的体积比为1:1；所述步骤（8）中的共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的纳米颗粒粒径范围为1~1000nm。
主要优点：
针对抗癌药物水溶性差，毒副作用强，肿瘤部位药物浓度低等问题，本项目提出了一类共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备方法及其生物应用。该体系具有可控的缓释智能药物载体以其高效释放药物、毒副作用小和生物可降解的优点。
附图说明
为了更加清楚的展现本发明的目的及其技术方案，本发明提供如下附图：
图1为本发明实施例1中的共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备流程示意图。
图2为本发明实施例 1中的中间产物PCPT的核磁图。
图3为本发明实施例 1中的中间产物CPADB-P((OEGMA)m-co-(MABHD)n和CPADB-PNPCF的核磁图。
图4为本发明实施例 1中的共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的TEM和DLS图。
图5为本发明实施例1中的共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的毒性示意图。
具体实施方式
下面将结合附图，对本发明的实施例进行详细的描述
实施例1 共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备
按照图1所示的共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的流程示意图进行如下制备：
1)MABHD的制备：冰浴和2-10Pa氩气Ar条件下，6.25g二硫代二乙二醇BHD溶于含3.3mL三乙胺TEA的50mL无水四氢呋喃THF溶液后，将2.2mL甲基丙烯酰氯MA溶于15mL四氢呋喃所形成的混合溶液逐滴加入，搅拌0.5h,恢复至室温过夜，过滤除杂, 用旋转蒸发仪浓缩溶剂，进一步以乙酸乙酯、正己烷为洗脱剂过硅胶柱除去二取代产物，用旋转蒸发仪浓缩所收集溶液即得纯的MABHD；
2)MABHD-CPT的制备：在2-10Pa氩气Ar和避光条件下，1.39g的喜树碱CPT与1.56g的4-二甲氨基吡啶DMAP溶于70mL二氯甲烷DCM中，将500mg三光气溶于10mL二氯甲烷中，用注射器将三光气和二氯甲烷的混合液逐滴加入至含CPT、DMAP的反应液中，室温搅拌0.5h后，1g MABHD溶于11mL四氢呋喃THF所形成的溶液用注射器逐滴加入至上述反应液中, 室温搅拌24h，反应结束后，加乙酸乙酯稀释，依次用水，盐酸，饱和食盐水萃取，有机相用无水硫镁除水，浓缩，用乙醚洗三次得到淡黄色固体MABHD-CPT；
3)MA-NHBOC的制备，包含以下步骤：在2-10Pa氩气Ar条件下，将2.18g二碳酸二叔丁酯BOC溶于15mL 乙腈MeCN，而后加入溶于15mL MeCN的611mg乙醇胺溶液，室温搅拌0.5h,浓缩后分离出10g, 而后在冰浴和2-10Pa氩气Ar条件下，再溶于100mL二氯甲烷，加入16.2mL的N,N-二异丙基乙胺EDIA，搅拌0.5h后，逐滴加入6.7mL甲基丙烯酰氯MA, 冰浴下搅拌0.5h恢复至室温反应12h,用少量二氯甲烷及大量正己烷洗，真空干燥得到MA-NHBOC；
4)PCPT的制备：在2-10Pa氩气Ar条件下，以12.0mg ß-CD-21Br为原子转移自由基聚合ATRP反应的大分子引发剂，与步骤(3)所制备115.0mg MA-NHBOC以及步骤(2)所制备的316mg MABHD-CPT一并溶于等体积的N,N-二甲基甲酰胺DMF与二甲亚砜DMSO形成的混合液中，加入8mg的溴化亚铜CuBr后，冷冻－解冻循环三次,加入15μL 三-(N , N-二甲氨基乙基)胺Me6TREN 配体，冷冻解冻一次，在室温下避光反应24h，用冰乙醚沉淀，溶于少量二氯甲烷再沉淀真空干燥后得到星形两亲性聚合物ß-CD-P((MABHD-CPT)x-co-(MA-NHBOC)y)，简称为PCPT；
5)CPADB-P((OEGMA)m-co-(MABHD)n)的制备：在2-10Pa氩气Ar条件下，以56mg 4-氰基-4-(苯基硫代甲酰硫基)戊酸CPADB为可逆加成-断裂链转移聚合RAFT反应的引发剂，与步骤(1)所制备445mg MABHD, 以及1.0g甲基丙烯酸酯OEGMA一并溶于3mL的二氧六环Dio中，加入自由基引发剂3.2mg偶氮异丁二腈AIBN后，冷冻－解冻循环三次,在70℃避光反应24h，用冰乙醚沉淀，溶于少量二氯甲烷再沉淀，真空干燥后得到CPADB-P((OEGMA)m-co-(MABHD)n)；
6)CPADB-PNPCF的制备：在冰浴和2-10Pa氩气Ar条件下，将步骤（5）制备的1.0gCPADB-P((OEGMA)m-co-(MABHD)n)与325mg对硝基苯基氯甲酸酯一起溶于5mL二氯甲烷中，搅拌0.5h后，逐滴加入130μL吡啶，冰浴条件下再搅拌0.5h,在室温条件下反应24h, 加3~5mL二氯甲烷稀释，用截留分子量MWCO为3500Da的透析袋在等体积二氯甲烷与甲醇形成的混合液中透析24h,浓缩后得到CPADB-PNPCF；
7)PCPT纳米颗粒的制备：称量 5mg步骤(4)所制备的PCPT，溶于DMF溶液中，搅拌0.5h，用200µL移液枪逐滴加至二次水中搅拌0.5h后,用MWCO为3500Da的透析袋在水中透析24h，得到纳米颗粒水溶液；
8)共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备，包含以下步骤：将10mg 步骤（6）制备的CPADB-PNPCF溶于1mL无水N,N-二甲基甲酰胺中，搅拌条件下，用200µL移液枪逐滴加入溶于0.5mL无水DMF的PCPT溶液，所述的PCPT为1mg；室温搅拌12h后，加入1.3µL氨基-三聚乙二醇-氨基,避光搅拌12h, 用MWCO为14000Da的透析袋在甲醇中透析24h，在水中再透析24h，得到共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的纳米颗粒水溶液。
图2为PCPT的核磁图，通过核磁我们知道了在氘代氯仿CDCl3中PCPT的氢谱1HNMR结果为u（1.58ppm），s（4.01ppm）和t（3.49ppm）代表MA-NHBOC的甲基和亚甲基。苯环中的氢信号（8.37-7.27ppm）出现，双键信号（6.11和5.60ppm）消失，表明聚合物PCPT合成成功。
图3为CPADB-P((OEGMA)m-co-(MABHD)n和CPADB-PNPCF的核磁图，图中a-c属于RAFT引发剂CPADB的苯环氢，峰f（3.65ppm），峰h（3.65ppm）和峰i（3.38ppm）代表OEGMA的亚甲基和甲氧基氢。来自MABHD的亚甲基的信号峰出现在4.34-3.98ppm（标记为e和i）和2.15-1.72ppm（标记为f和h）,表明CPADB-P((OEGMA)m-co-(MABHD)n合成成功；在峰值a（8.30ppm）和峰值o（7.41ppm）处苯环信号的出现表明PNPCF的成功装饰，说明CPADB-PNPCF合成成功。
图4为共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的纳米颗粒CPADB-PNPCF的TEM和DLS图，由图可以知道CPADB-PNPCF呈均匀的球形颗粒，粒径为134.8nm。
图5为CPT,PCPT,CPADB-PNPCF药物对HeLa和MCF-7细胞毒性，用含有0.1μg/ mL至10μg/ mL CPT的不同药物处理HeLa和MCF-7癌细胞。在药物作用了72小时后，对于用10µg/mL CPT处理的贴壁细胞，HeLa细胞中CPT,PCPT,CPADB-PNPCF细胞死亡率分别达到81.6%,47.5%,75.1%，MCF-7细胞中CPT,PCPT,CPADB-PNPCF细胞死亡率分别达到87.4%,66.4%,,84.3%。说明了制备的共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体具有良好的抗肿瘤能力。
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其做出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (9)

1.一种基于共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备方法，其特征在于：包含以下步骤：
（1）MABHD的制备，包含以下步骤：在冰浴和2-10Pa氩气Ar条件下，将二硫代二乙二醇BHD溶于含三乙胺TEA的无水四氢呋喃溶液后，逐滴加入溶于四氢呋喃THF的甲基丙烯酰氯MA的溶液，搅拌0.5h,之后恢复至室温过夜，过滤除杂, 用旋转蒸发仪浓缩溶剂，进一步以乙酸乙酯、正己烷为洗脱剂过硅胶柱除去二取代产物，用旋转蒸发仪浓缩所收集溶液得到MABHD；其反应式如下所示;
Figure DEST_PATH_IMAGE001
（2）MABHD-CPT的制备,包含以下步骤：在2-10Pa氩气Ar和避光条件下，喜树碱CPT与4-二甲氨基吡啶DMAP溶于二氯甲烷DCM，将三光气溶于二氯甲烷中，用注射器将三光气和二氯甲烷的混合液逐滴加入至含CPT、DMAP的反应液中，室温搅拌0.5h后，将溶于四氢呋喃THF的MABHD溶液用注射器逐滴加入至上述反应液, 室温搅拌24h，反应结束后，加乙酸乙酯稀释，依次用水、盐酸、饱和食盐水萃取，有机相用无水硫酸镁除水，浓缩，用乙醚洗三次得到淡黄色固体MABHD-CPT；其反应式如下所示；
Figure DEST_PATH_IMAGE002
（3）MA-NHBOC的制备，包含以下步骤：在2-10Pa氩气Ar条件下，将二碳酸二叔丁酯BOC溶于25mL 乙腈MeCN，而后加入溶于15mL MeCN的乙醇胺溶液，室温搅拌0.5h,浓缩后分离出10g, 而后在冰浴和2-10Pa氩气Ar条件下，再溶于100mL二氯甲烷，加入N,N-二异丙基乙胺EDIA，搅拌0.5h后，逐滴加入甲基丙烯酰氯MA, 冰浴下搅拌0.5h恢复至室温反应12h,用少量二氯甲烷及大量正己烷洗，真空干燥得到MA-NHBOC；其反应式如下所示；
Figure DEST_PATH_IMAGE003
（4）PCPT的制备，包含以下步骤：在2-10Pa氩气Ar条件下，以 ß-CD-21Br为原子转移自由基聚合ATRP反应的大分子引发剂，与步骤(3)所制备的MA-NHBOC以及步骤(2)所制备的MABHD-CPT一并溶于等体积的N,N-二甲基甲酰胺DMF与二甲亚砜DMSO形成的混合液中，加入溴化亚铜CuBr后，冷冻－解冻循环三次, 加入三-(N,N-二甲氨基乙基)胺Me6TREN 配体，冷冻解冻一次，在室温下避光反应24h，用冰乙醚沉淀，溶于少量二氯甲烷再沉淀真空干燥后得到聚合物ß-CD-P((MABHD-CPT)x-co-(MA-NHBOC)y)，简称为PCPT，其中x表示MABHD-CPT的聚合度，它的范围为6~40，y表示MA-NHBOC的聚合度，它的范围为3~110；其反应式如下所示；
Figure DEST_PATH_IMAGE005
（5）CPADB-P((OEGMA)m-co-(MABHD)n)的制备，包含以下步骤：在2-10Pa氩气Ar条件下，以4-氰基-4-(苯基硫代甲酰硫基)戊酸CPADB为可逆加成-断裂链转移聚合RAFT反应的引发剂，与步骤(1)所制备的MABHD, 以及OEGMA一并溶于二氧六环Dio中，加入自由基引发剂偶氮异丁二腈AIBN后，冷冻－解冻循环三次,在70℃避光反应24h，用冰乙醚沉淀，溶于少量二氯甲烷再沉淀，真空干燥后得到聚合物CPADB-P((OEGMA)m-co-(MABHD)n)，其中m表示OEGMA的聚合度，它的范围为2~160， n表示MABHD的聚合度，它的范围为3~80；其反应式如下所示；
Figure DEST_PATH_IMAGE006
（6）CPADB-PNPCF的制备，包含以下步骤：在冰浴和2-10Pa氩气Ar条件下，将步骤（5）制备的CPADB-P((OEGMA)m-co-(MABHD)n)与对硝基苯基氯甲酸酯一起溶于二氯甲烷中，搅拌0.5h后，逐滴加入吡啶，冰浴条件下再搅拌0.5h,在室温条件下反应24h, 加3~5mL二氯甲烷稀释，用截留分子量MWCO为3500Da的透析袋在等体积二氯甲烷与甲醇形成的混合液中透析24h,浓缩后得到CPADB-PNPCF；其反应式如下所示；
Figure DEST_PATH_IMAGE007
（7）PCPT纳米颗粒的制备，包含以下步骤：称量 5mg步骤(4)所制备的PCPT，溶于DMF溶液中，搅拌0.5h，用200μL移液枪逐滴加至二次水中搅拌0.5h后,用MWCO为3500Da的透析袋在水中透析24h，得到纳米颗粒水溶液；
（8）共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备，包含以下步骤：将10mg 步骤（6）制备的CPADB-PNPCF溶于1mL无水N,N-二甲基甲酰胺中，搅拌条件下，用200 µL移液枪逐滴加入溶于0.5mL无水DMF的PCPT溶液，所述的PCPT为1mg；室温搅拌12h后，加入1.3 µL氨基-三聚乙二醇-氨基,避光搅拌12h, 用MWCO为14000Da的透析袋在甲醇中透析24h，在水中再透析24h，得到共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的纳米颗粒水溶液。
2.根据权利要求1所述的一种基于共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中二硫代二乙二醇与甲基丙烯酰氯的摩尔浓度比为1:0.5；TEA与THF的体积比为1:15；乙酸乙酯与正己烷的体积比为1:4。
3.根据权利要求1所述的一种基于共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中MABHD、CPT、三光气、DMAP的摩尔比为1:1:0.4 :0.3；四氢呋喃、二氯甲烷、乙酸乙酯、水、盐酸、饱和食盐水的体积比为1:8 :30:10 :10:2。
4.根据权利要求1所述的一种基于共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备方法，其特征在于：所述步骤(3) 中二碳酸二叔丁酯、乙醇胺、N,N-二异丙基乙胺、甲基丙烯酰氯的摩尔浓度比为1:1:9.3:6.8；二氯甲烷与正己烷的体积比为1:7。
5.根据权利要求1所述的一种基于共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备方法，其特征在于：所述步骤(4) 中ß-CD-21Br、MABHD-CPT、MA-NHBOC、CuBr、Me6TREN的摩尔浓度比为1:10:10 :1.1:3；DMF与DMSO的体积比为1:1。
6.根据权利要求1所述的一种基于共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备方法，其特征在于：所述步骤(5) 中4-氰基-4-(苯基硫代甲酰硫基)戊酸 、MABHD、甲基丙烯酸酯、偶氮异丁二腈的摩尔浓度比为1:10:10:0.1；二氯甲烷、二氧六环、冰乙醚的体积比为1:1:5。
7.根据权利要求1所述的一种基于共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备方法，其特征在于：所述步骤(6) 中CPADB-P((OEGMA)m-co-(MABHD)n)、对硝基苯基氯甲酸酯、吡啶的摩尔浓度比为1:1.2:1.2；二氯甲烷甲醇的体积比为1:1。
8.根据权利要求1所述的一种基于共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备方法，其特征在于：所述步骤（7）中DMF和水的体积比为1:500; 所述步骤（7）中透析后所得的纳米颗粒粒径范围为1~1000nm。
9.根据权利要求1所述的一种基于共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的制备方法，其特征在于：所述步骤（8）中CPADB-PNPCF、PCPT的摩尔浓度比为1:0.027；氨基-三聚乙二醇-氨基、DMF的体积比为1:384.6；甲醇和水的体积比为1:1；所述步骤（8）中的共价自组装策略的电荷翻转型聚合物载体的纳米颗粒粒径范围为1~1000nm。
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