CN110122334B - 一种芦竹快速繁殖专用培养基及其培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种芦竹快速繁殖专用培养基，由以下成分组成：MS基本培养基、6‑苄氨基腺嘌呤(6‑BA)1‑8mg/L、吲哚丁酸(IBA)0.2‑1.5mg/L、氯化钠50‑300mmol/L、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)0.05‑0.5mg/L。该专用培养基在传统的MS基本培养基和细胞分裂素的基础上，加入了氯化钠和ATP，尤其是采用分批次加入ATP的方式，可以显著提升芦竹的繁殖效率。

Description

一种芦竹快速繁殖专用培养基及其培养方法
技术领域
本发明涉及芦竹培育技术领域，尤其涉及一种芦竹快速繁殖专用培养基及其培养方法。
背景技术
目前，芦竹(Arundo donax)为禾本科芦竹属多年生高大丛生草本植物，具有发达的根状茎。其适应能力强，对盐碱、干旱、贫瘠具有一定的忍耐力，被称为低洼盐碱地的“先锋植物”。芦竹不仅具有防治土壤退化和增加土壤含碳量及有机质的生态效益，对于修复湿地重金属污染也具有较大潜力。近年来，芦竹作为清洁生物能源的利用价值也在逐渐受到人们的重视，多年生草本木质纤维素植物被认为最符合生物质生物能源生产。
由于芦竹不能靠种子繁育，传统的分蘖繁殖，远不能满足园林需求及生态需求。因此，利用植物组织培养技术通过研发专用培养基及培养方法，加速芦竹的繁殖周期，提高繁殖效率，是芦竹大规模工厂化生产关键。
为了在传统方法的基础上进一步提升芦竹的繁殖效率，本发明提出了一种芦竹快速繁殖专用培养基及其培养方法。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种芦竹快速繁殖专用培养基及其培养方法。
本发明的技术方案如下：
一种芦竹快速繁殖专用培养基，由以下成分组成：MS基本培养基、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)1-8mg/L、吲哚丁酸(IBA)0.2-1.5mg/L、氯化钠50-300mmol/L、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)0.05-0.5mg/L。
优选的，所述的芦竹快速繁殖专用培养基，由以下成分组成：MS基本培养基、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)2-5mg/L、吲哚丁酸(IBA)0.5-1mg/L、氯化钠120-200mmol/L、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)0.1-0.2mg/L。
一种利用上述专用培养基的芦竹快速繁殖培养方法，包括如下步骤：
(1)外植体的选择和消毒选取芦竹腋芽作为外植体，在流水下冲洗1.5-3小时后，移入超净工作台中，在70-75％的酒精中浸泡20-60s，移入装有次氯酸钠溶液的超声波清洗机中震荡5-7min，再用无菌水冲洗2-5次；
(2)接种及无菌系的培养在无菌条件下，切取0.5-2cm带芽茎段，接种到装有专用培养基的培养瓶中，8-10天后，获得无菌系；
(3)转接与扩繁
将步骤(2)的无菌系中的无菌芽在无菌条件下剥取5-10毫米带顶端生长点的组织，接种在专用培养基上，进行增殖培养，15-18天重复继代一次；
(4)生根培养及驯化取步骤(3)中获得的无菌芽2-3株为一组移至生根培养基中，继续培养10-12天后将植株取出洗净使用多菌灵稀释液浸泡5-20min后，移栽至育苗基质中，之后采用50％遮阳率的遮阳网遮光7-10天，即可。
优选的，所述的步骤(2)中，所述的专用培养基中，先将MS基本培养基、6-BA、IBA、氯化钠混合均匀组成培养基，然后从24-30小时开始，将ATP每隔48小时分批次平均加入。
优选的，所述的步骤(3)中，所述的专用培养基中，先将MS基本培养基、6-BA、IBA、氯化钠混合均匀组成培养基，然后从24-30小时开始，将ATP每隔2-3天分批次平均加入。
本发明的有益之处在于：本发明的专用培养基在传统的MS基本培养基和细胞分裂素的基础上，加入了氯化钠和ATP，尤其是采用分批次加入ATP的方式，可以显著提升芦竹的繁殖效率。
具体实施方式
实施例1：
一种芦竹快速繁殖专用培养基，由以下成分组成：MS基本培养基、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)3.5mg/L、吲哚丁酸(IBA)0.8mg/L、氯化钠150mmol/L、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)0.15mg/L。
一种利用上述专用培养基的芦竹快速繁殖培养方法，包括如下步骤：
(1)外植体的选择和消毒选取芦竹腋芽作为外植体，在流水下冲洗2小时后，移入超净工作台中，在72％的酒精中浸泡45s，移入装有次氯酸钠溶液的超声波清洗机中震荡6min，再用无菌水冲洗4次；
(2)接种及无菌系的培养在无菌条件下，切取0.5-2cm带芽茎段，接种到装有专用培养基的培养瓶中，9天后，获得无菌系；
(3)转接与扩繁
将步骤(2)的无菌系中的无菌芽在无菌条件下剥取5-10毫米带顶端生长点的组织，接种在专用培养基上，进行增殖培养，16天重复继代一次；
(4)生根培养及驯化取步骤(3)中获得的无菌芽2-3株为一组移至生根培养基中，继续培养11天后将植株取出洗净使用多菌灵稀释液浸泡12min后，移栽至育苗基质中，之后采用50％遮阳率的遮阳网遮光8天，即可。
所述的步骤(2)中，所述的专用培养基中，先将MS基本培养基、6-BA、IBA、氯化钠混合均匀组成培养基，然后从28小时开始，将ATP每隔48小时分批次平均加入。
所述的步骤(3)中，所述的专用培养基中，先将MS基本培养基、6-BA、IBA、氯化钠混合均匀组成培养基，然后从25小时开始，将ATP每隔60小时分批次平均加入。
实施例2：
一种芦竹快速繁殖专用培养基，由以下成分组成：MS基本培养基、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)5mg/L、吲哚丁酸(IBA)0.5mg/L、氯化钠200mmol/L、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)0.1mg/L。
一种利用上述专用培养基的芦竹快速繁殖培养方法，包括如下步骤：
(1)外植体的选择和消毒选取芦竹腋芽作为外植体，在流水下冲洗3小时后，移入超净工作台中，在70％的酒精中浸泡60s，移入装有次氯酸钠溶液的超声波清洗机中震荡5min，再用无菌水冲洗5次；
(2)接种及无菌系的培养在无菌条件下，切取0.5-2cm带芽茎段，接种到装有专用培养基的培养瓶中，8天后，获得无菌系；
(3)转接与扩繁
将步骤(2)的无菌系中的无菌芽在无菌条件下剥取5-10毫米带顶端生长点的组织，接种在专用培养基上，进行增殖培养，18天重复继代一次；
(4)生根培养及驯化取步骤(3)中获得的无菌芽2-3株为一组移至生根培养基中，继续培养10天后将植株取出洗净使用多菌灵稀释液浸泡20min后，移栽至育苗基质中，之后采用50％遮阳率的遮阳网遮光10天，即可。
所述的步骤(2)中，所述的专用培养基中，先将MS基本培养基、6-BA、IBA、氯化钠混合均匀组成培养基，然后从24小时开始，将ATP每隔48小时分批次平均加入。
所述的步骤(3)中，所述的专用培养基中，先将MS基本培养基、6-BA、IBA、氯化钠混合均匀组成培养基，然后从30小时开始，将ATP每隔48小时分批次平均加入。
实施例3：
一种芦竹快速繁殖专用培养基，由以下成分组成：MS基本培养基、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)2mg/L、吲哚丁酸(IBA)1mg/L、氯化钠120mmol/L、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)0.2mg/L。
一种利用上述专用培养基的芦竹快速繁殖培养方法，包括如下步骤：
(1)外植体的选择和消毒选取芦竹腋芽作为外植体，在流水下冲洗1.5小时后，移入超净工作台中，在75％的酒精中浸泡20s，移入装有次氯酸钠溶液的超声波清洗机中震荡7min，再用无菌水冲洗2次；
(2)接种及无菌系的培养在无菌条件下，切取0.5-2cm带芽茎段，接种到装有专用培养基的培养瓶中，10天后，获得无菌系；
(3)转接与扩繁
将步骤(2)的无菌系中的无菌芽在无菌条件下剥取5-10毫米带顶端生长点的组织，接种在专用培养基上，进行增殖培养，15天重复继代一次；
(4)生根培养及驯化取步骤(3)中获得的无菌芽2-3株为一组移至生根培养基中，继续培养12天后将植株取出洗净使用多菌灵稀释液浸泡5min后，移栽至育苗基质中，之后采用50％遮阳率的遮阳网遮光7天，即可。
所述的步骤(2)中，所述的专用培养基中，先将MS基本培养基、6-BA、IBA、氯化钠混合均匀组成培养基，然后从30小时开始，将ATP每隔48小时分批次平均加入。
所述的步骤(3)中，所述的专用培养基中，先将MS基本培养基、6-BA、IBA、氯化钠混合均匀组成培养基，然后从24小时开始，将ATP每隔72小时分批次平均加入。
对比例1
将实施例1中的ATP去除，其余配比和培养方法不变。
该培养方法，相比于实施例1的方法，培养的时间延长8-12天。
对比例2
将实施例1中的ATP的加入方式替换为与其余原料同时加入，其余配比和培养方法不变。
该培养方法，相比于实施例1的方法，培养的时间延长5-8天。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种芦竹快速繁殖培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)外植体的选择和消毒：选取芦竹腋芽作为外植体，在流水下冲洗1.5-3小时后，移入超净工作台中，在70-75%的酒精中浸泡20-60s，移入装有次氯酸钠溶液的超声波清洗机中震荡5-7min，再用无菌水冲洗2-5次；
(2)接种及无菌系的培养：在无菌条件下，切取0.5-2cm带芽茎段，接种到装有专用培养基的培养瓶中，8-10天后，获得无菌系；
(3)转接与扩繁：将步骤(2)的无菌系中的无菌芽在无菌条件下剥取5-10毫米带顶端生长点的组织，接种在专用培养基上，进行增殖培养，15-18天重复继代一次；
(4)生根培养及驯化：取步骤(3)中获得的无菌芽2-3株为一组移至生根培养基中，继续培养10-12天后将植株取出洗净使用多菌灵稀释液浸泡5-20min后，移栽至育苗基质中，之后采用50%遮阳率的遮阳网遮光7-10天，即可；
所述的专用培养基，由以下成分组成：MS基本培养基、6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）1-8mg/L、吲哚丁酸（IBA）0.2-1.5mg/L、氯化钠 50-300mmol/L、腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）0.05-0.5mg/L；
步骤(2)中，所述的专用培养基中，先将MS基本培养基、6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）、吲哚丁酸（IBA）、氯化钠混合均匀组成培养基，然后从24-30小时开始，将腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）每隔48小时分批次平均加入；
步骤(3)中，所述的专用培养基中，先将MS基本培养基、6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）、吲哚丁酸（IBA）、氯化钠混合均匀组成培养基，然后从24-30小时开始，将腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）每隔2-3天分批次平均加入。
2.如权利要求1所述的芦竹快速繁殖培养方法，其特征在于，所述的专用培养基，由以下成分组成：MS基本培养基、6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）2-5mg/L、吲哚丁酸（IBA）0.5-1mg/L、氯化钠 120-200mmol/L、腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）0.1-0.2mg/L。
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