CN101743907B - 一种仙茅繁殖技术 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种仙茅繁殖技术，包括外植体消毒、再生植株诱导、炼苗和移栽等步骤，本发明从接种到生根的时间大概为45天左右，繁殖系数为8以上，移栽成活率可达96％以上，本发明繁殖系数高，减少了操作环节，培养周期短，成本低，可以为仙茅大规模快速种植提供种苗。
Description
技术领域
本发明涉及一种仙茅繁殖技术，主要是一种利用仙茅根状茎作为外植体进行组织培养达到快速繁殖目的的技术。
背景技术
仙茅(Curculigo orchioides Gaertn)主要产于四川宜宾市、雅安市、云南昭通地区以及贵州等地，常用中药材。仙茅以根状茎入药，具有补肾壮阳、祛风湿的功效。近年来仙茅野生资源日渐减少，而人工栽培仙茅繁殖速度又较慢，采用组织培养技术则能很好地解决这个问题。在仙茅组织培养方面，国内外学者对仙茅叶片的器官发生和植株再生进行了研究，但一直未有人利用仙茅地下茎段进行植株再生，且前人研究培养的再生植株其愈伤组织的诱导、丛生芽、生根等环节需在不同配方的培养基上进行，操作环节多，成本高，周期长。据查，目前中国发明专利局尚没有关于仙茅组织培养和快速繁殖方面的专利公布。
发明目的
本发明的目的是提供的一种利用仙茅根状茎作为外植体速度快、成本低的繁殖技术。
发明内容
本发明的技术方案是：
(1)外植体采集与消毒：采集仙茅根状茎作为外植体，并进行消毒处理；
(2)接种、培养，诱导植株再生：将无菌外植体接种于含一定基本培养基、一定浓度和种类激素、一定浓度碳水化合物和一定浓度琼脂的培养基上，经20左右诱导出愈伤组织，30天左右长出丛生芽，45天左右开始生根；
(3)炼苗、移栽；
(4)生长周期：从接种到生根的时间大概为45天左右；
(5)繁殖系数(丛生芽数与接种的外植体数的比)为8以上；
(6)移栽成活率(移栽的苗数与成活的苗数之比)可达96％以上。
以上所述，基本培养基是MS(Murashigc&Skoog，1962)或B5(Gamborg et al.，1976)或N6(朱至清，1974)；
以上所述，激素配比：激素a为0.6-1.2mg·L-1，激素b为0.2-0.8mg·L-1，激素a和激素b在此浓度范围内配比。
以上所述，培养基中碳水化合物浓度为20-40g·L-1，琼脂的量为6-8g·L-1。
发明优点
本发明培养的再生植株其愈伤组织诱导、丛生芽、生根等环节是在同一种培养基上完成的，减少了操作环节，多缩短了周期，减少了成本，增加了繁殖系数和生根率，繁殖系数高达到8以上，移栽成活率可达96％以上，可以为大规模种植仙茅提供种苗。
以下通过具体实施例来进一步说明本发明，但实施例仅用于说明并不能限制本发明的范围。
具体实施方式
实施例1
一种仙茅繁殖技术具体实施步骤为：
1.无菌苗的获得：取仙茅生长植株的根状茎，刷掉表面的泥土，置于自来水下冲洗2~3h，用0.1％的KMnO4(高锰酸钾)溶液浸泡4-5min，蒸馏水洗5~7次；再在超净工作台上，用75％的酒精漂洗30s，用无菌水清洗3~5次，然后用0.1％的升汞+吐温3~4滴，漂洗10min，最后用无菌水处理6~8次(直至无泡沫为止)。
2.再生植株的诱导：将无菌根状茎段切成1cm左右接种于MS+6-BA(6-苄氨基嘌呤)0.2mg·L-1+NAA(a-萘乙酸)0.5mg·L-1培养基上，20天后长出愈伤组织，30天后长丛生芽，45天后生根，繁殖系数为5。
以上所述培养基的蔗糖浓度为20g·L-1，琼脂的量为6.5g·L-1，pH值5.8，25℃光照条件下培养。
3.炼苗与移栽仙茅长到一定高度进行移栽，移栽前先去掉封口膜在培养室中锻炼2~3d。然后把经过炼苗的幼苗基部的残留琼脂洗净，移栽至小盆内，移栽基质用蛭石和营养土以2∶3比例混匀配制而成大概炼苗5天后移栽至大田。移栽成活率97％。
实施例2
一种仙茅繁殖技术包括实施步骤为：
1.无菌苗的获得：取仙茅生长植株的根状茎，刷掉表面的泥土，置于自来水下冲洗2~3h，用0.1％的KMnO4溶液浸泡4-5min，蒸馏水洗5~7次；再在超净工作台上，用75％的酒精漂洗30s，用无菌水清洗3~5次，然后用0.1％的升汞+吐温3~4滴，漂洗10min，最后用无菌水处理6~8次(直至无泡沫为止)。
2.再生植株的诱导：将无菌地下茎段切成1cm左右接种于MS+6-BA0.5mg·L-1+NAA0.5mg·L-1培养基上，20天后长出愈伤组织，30天后长丛生芽，45天后生根，繁殖系数为8。
以上所述培养基的蔗糖浓度为30g·L-1，琼脂的量为7g·L-1，pH值5.8，25℃光照条件下培养；培养基均高温高压灭菌；所有接种均在无菌条件下进行。
3.炼苗及移栽：炼苗与移栽仙茅长到一定高度进行移栽，移栽前先去掉封口膜在培养室中锻炼2~3d。然后把经过炼苗的幼苗基部的残留琼脂洗净，移栽至小盆内，移栽基质用蛭石和营养土以2∶3比例混匀配制而成大概炼苗5天后移栽至大田。移栽成活率97％。
Claims (1)
1.一种仙茅繁殖方法，其特征在于，具体实施步骤为：
1)无菌苗的获得：取仙茅生长植株的根状茎，刷掉表面的泥土，置于自来水下冲洗2～3h，用0.1％的KMnO4溶液浸泡4～5min，蒸馏水洗5～7次；再在超净工作台上，用75％的酒精漂洗30s，用无菌水清洗3～5次，然后用0.1％的升汞+吐温3～4滴，漂洗10min，最后用无菌水处理6～8次，直至无泡沫为止；
2)再生植株的诱导：将无菌根状茎切成1cm左右的茎段接种于MS+6-BA0.2mg·L-1+NAA0.5mg·L-1培养基上，培养基的蔗糖浓度为30g·L-1，琼脂的量为6-8g·L-1，pH值5.8，25℃光照条件下培养；
3)炼苗与移栽 仙茅长到一定高度进行移栽，移栽前先去掉封口膜在培养室中锻炼2～3天，然后把经过炼苗的幼苗基部的残留琼脂洗净，移栽至小盆内，移栽基质用蛭石和营养土以2∶3比例混匀，炼苗5天后移栽至大田。
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