CN103858770B - 一种花叶玉簪快速繁殖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种花叶玉簪快速繁殖的方法，主要通过外植体的选择及消毒、继代增殖培养、生根培养以及炼苗移栽的步骤，特别是在继代过程中，提高了光强，培养基中减少了无机盐含量，增加了磷酸二氢钾和水解乳蛋白，同时采用了转换继代培养基的技术手段，达到了增殖速度快、遗传性状稳定、繁殖系数高的优良效果。
Description
技术领域
本发明涉及玉簪的繁殖方法，特别是一种花叶玉簪的快速繁殖方法。
背景技术
花叶玉簪(Hostaplantagineu)为百合科玉簪属植物，多年生宿根花卉，是著名观叶植物玉簪的变种，对喜光花卉有极强的互补性，是园林绿化的优良品种。花叶玉簪的引进与推广，极大地提高了其观赏效果，丰富了园林绿化的景观色彩。该品种株矮喜荫，复色叶面，带褶皱，金边银心相互交织，绚丽多彩的叶片呈现出魔幻般的花团锦簇。在城市高大楼群的背侧、立交桥下、庭院大树遮荫处、树篱边等喜阳花卉生长不利的地方均可种植。装盆后，可登堂入室，客厅、书房、大厅、会议室、窗台上均可用它来点缀、装饰，花叶玉簪的花还可散发出淡淡幽香，高雅不凡。
花叶玉簪常规的繁殖方法主要是通过分株，增殖率低，仅为3～5倍左右，短期内要形成大规模的生产困难较大，如果引进种苗，价格又很高。采用组织培养的繁殖方法，可以很好地解决上述难题，但通过花蕾诱导愈伤组织后形成的芽有变异现象发生，有些失去了原来的花叶特征，现有技术中有以下对花叶玉簪组织培养的研究：“花叶玉簪工厂化组培育苗技术研究”，吴国智等，《天津农业科学》，第15卷第5期；“花叶玉簪的组织培养与快速繁殖技术研究”，郝砚英等，《天津农业科学》，第12卷第2期等。上述现有技术虽然公开了不同阶段的培养基配方，然而其并没有公开具体操作条件，并且发明人在按照上述配方进行操作，用于工厂化育苗进行大量繁殖时，特别是在多次继代增殖过程中，发现随着继代次数的增加，变异率迅速提高，严重影响了工厂化生产，为此，发明人进行了有针对性的改进。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是提供一种花叶玉簪快速繁殖的方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：
一种花叶玉簪快速繁殖的方法，包括：
(1)外植体的选择及消毒：于3-4月选晴朗天气直接在大田中取块茎上的萌发芽做为外植体，或者在其它月份提前30天左右在地里挖出玉簪洗净后种植在以干净的珍珠岩为基质的盆中，后放在干净温室中只浇清水；用小刀削下块茎上的芽子，后浸于盛有饱和肥皂水的烧杯中5-10分钟，再用自来水冲洗到基本无泡沫，然后再重复上述浸泡冲洗的步骤一次，浸泡时间缩短至2-4分钟，自来水冲洗时间不易过长以免造成外植体二次污染，转入超净工作台，在超净台中先用70％的酒精浸泡1分钟，无菌水冲洗2次，用含有两滴吐温80的5％次氯酸钠溶液消毒10-15分钟，无菌水冲洗5次；再加入含有两滴吐温80的0.1％的升汞消毒10-15分钟，用无菌水冲洗6次；
(2)接种培养：取将步骤(1)所述的外植体，首先剥去芽的苞叶，尽量多剥几层，切取带有潜伏芽的外植体接种到接种培养基中，每瓶只接一块，培养基的PH6.2，培养温度为23±1℃，12h/d的光周期，光照强度600Lx左右，培养3-7天开始生长，所述接种培养基为1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L；
(3)继代培养：将不污染的带有新营养芽的外植体转入第一继代培养基中使芽增殖，所述第一继代培养基是1/2MS+6-BA0.5-2mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+磷酸二氢钾150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，继代5次左右，转入第二继代培养基或不添加任何激素的空白培养基中继代一次，所述第二继代培养基为1/2MS+IBA0.8mg/L+磷酸二氢钾150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，所述空白培养基为1/2MS+磷酸二氢钾150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，然后再转入第一继代培养基中继续增殖，根据需苗量重复上述步骤；继代培养过程中，培养基的PH6.2，培养温度为23±1℃，14-18h/d的光周期，光照强度2000Lx左右；
(4)生根培养：将继代培养得到的小芽直接转入生根培养基中，较大的苗从中间竖着劈开一分为二再转入生根培养基中，培养基的PH6.2，培养温度为23±1℃，12h/d的光周期，光照强度600Lx左右，所述生根培养基为1/2MS+NAA0.3mg\L+蔗糖20g/L，20天左右生根，当根生长到3cm左右出瓶，根生长过长或生根时间过长都会影响移栽成活；
(5)炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗4d，然后解开封口膜，炼苗6d，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的基质中，温度控制在24-26℃，前7d湿度控制在70％左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽期间适当遮光，使光照强度为自然光的50％。
步骤(4)中所述小芽直径小于0.5mm；所述较大的芽直径0.5mm以上。
步骤(5)所述的基质为蛭石。
本发明的有益效果是：
(1)本申请以芽作为外植体，发明人经过大量长期实践操作，发现只有芽作为外植体才能保持花叶的特性；在除春季以外的其它月份，由于玉簪的芽都埋在土中，极易污染，如何防止外植体污染是以后繁殖的关键步骤，因此，发明人利用干净的珍珠岩作为基质培养花叶玉簪的母株，接种时每瓶接种一块，大大降低了外植体污染的概率，因为，发明人在具体操作期间，发现若每瓶接种3-4块外植体，只要有一块外植体污染，即便其它外植体没有污染，整瓶都不能用于后续的继代繁殖；
(2)发明人发现，在工厂化育苗过程中，继代超过5代左右，开始出现变异，发明人经研究发现，上述原因是激素累积导致，因此，在继代过程中，采用了转换培养基的方法，这也是本发明的重点之一；
(3)花叶玉簪在自然条件下，光照强、光周期长会抑制玉簪的生长，出现焦叶、休眠等现象，因此，玉簪喜欢弱光的条件，而在组培过程中，发明人发现弱光条件反而会导致组培苗徒长，而影响芽分化；另外，继代培养基中，发明人采用了1/2MS大量元素，以代替现有技术中广泛采用的MS，因为发明人经过大量的试验发现，MS大量元素同样容易导致组培苗徒长，而影响芽分化，因此，发明人创造性的以1/2MS代替MS，同时在培养基中增加了能够促进芽分化的磷酸二氢钾和水解乳蛋白，因此，在继代过程中，提高了光强，培养基中减少了无机盐含量，增加了磷酸二氢钾和水解乳蛋白，从而抑制了组培苗徒长，促进了芽分化，取得了意料不到的效果；
(4)生根时，将较大的苗竖着一分为二，每半都能形成完整的植株，因此，在最后阶段，使组培苗数量得到了成倍的增长，达到了大量繁殖的目的。
本发明培养过程速度快，再生频率较高，变异率较低，周期相对较短，能较好地保持花叶玉簪的遗传稳定性。
具体实施方式
下面对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
实施例一：
花叶玉簪快速繁殖的方法，包括：
(1)外植体的选择及消毒：于3月选晴朗天气直接在大田中取块茎上的萌发芽做为外植体，用小刀削下块茎上的芽子，后浸于盛有饱和肥皂水的烧杯中5分钟，再用自来水冲洗到基本无泡沫，然后再重复上述浸泡冲洗的步骤一次，浸泡时间缩短至2分钟，自来水冲洗时间不易过长以免造成外植体二次污染，转入超净工作台，在超净台中先用70％的酒精浸泡1分钟，无菌水中洗2次，用含有两滴吐温80的5％次氯酸钠溶液消毒10分钟，无菌水中洗5次；再用含有两滴吐温80的0.1％的升汞消毒10分钟，用无菌水冲洗6次；
(2)接种培养：取将步骤(1)所述的外植体，首先剥去芽的苞叶，尽量多剥几层，切取带有潜伏芽的外植体接种到接种培养基中，每瓶只接一块，培养基的PH6.2，培养温度为22℃，12h/d的光周期，光照强度1500Lx左右，培养5天开始生长，所述接种培养基为1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L；
(3)继代培养：将不污染的带有新营养芽的外植体转入第一继代培养基中使芽增殖，所述第一继代培养基是1/2MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+磷酸二氢钾150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，继代5次，转入第二继代培养基或不添加任何激素的空白培养基中继代一次，所述第二继代培养基为1/2MS+IBA0.8mg/L+磷酸二氢钾150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，所述空白培养基为1/2MS+磷酸二氢钾150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，然后再转入第一继代培养基中继续增殖5代；继代培养过程中，培养基的PH6.2，培养温度为22℃，14h/d的光周期，光照强度2000Lx左右；
(4)生根培养：将继代培养得到的直径小于0.5cm的小芽转入生根培养基中，将直径0.5cm以上较大的芽竖向劈开一分为二再转入生根培养基中，培养基的PH6.2，培养温度为22℃，12h/d的光周期，光照强度1500Lx左右，所述生根培养基为1/2MS+NAA0.3mg\L+蔗糖20g/L，20天左右生根，当根生长到3cm左右出瓶，根生长过长或生根时间过长都会影响移栽成活；
(5)炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗4d，然后解开封口膜，炼苗6d，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的蛭石中，温度控制在24-26℃，前7d湿度控制在70％左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽期间适当遮光，使光照强度为自然光的50％。
实施例二：
花叶玉簪快速繁殖的方法，包括：
(1)外植体的选择及消毒：于4月选晴朗天气直接在大田中取块茎上的萌发芽做为外植体，用小刀削下块茎上的芽子，后浸于盛有饱和肥皂水的烧杯中7分钟，再用自来水冲洗到基本无泡沫，然后再重复上述浸泡冲洗的步骤一次，浸泡时间缩短至3分钟，自来水冲洗时间不易过长以免造成外植体二次污染，转入超净工作台，在超净台中先用70％的酒精浸泡1分钟，无菌水冲洗2次，用含有两滴吐温80的5％次氯酸钠溶液消毒12分钟，无菌水冲洗5次；再加入含有两滴吐温80的0.1％的升汞消毒12分钟，用无菌水冲洗6次；
(2)接种培养：取将步骤(1)所述的外植体，首先剥去芽的苞叶，尽量多剥几层，切取带有潜伏芽的外植体接种到接种培养基中，每瓶只接一块，培养基的PH6.2，培养温度为23℃，12h/d的光周期，光照强度1500Lx左右，培养3天开始生长，所述接种培养基为1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L；
(3)继代培养：将不污染的带有新营养芽的外植体转入第一继代培养基中使芽增殖，所述第一继代培养基是1/2MS+6-BA1.2mg/L+NAA0.3mg/L+磷酸二氢钾150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，继代5次，转入第二继代培养基或不添加任何激素的空白培养基中继代一次，所述第二继代培养基为1/2MS+IBA0.8mg/L+磷酸二氢钾150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，所述空白培养基为1/2MS+磷酸二氢钾150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，然后再转入第一继代培养基中继续增殖3代；继代培养过程中，培养基的PH6.2，培养温度为23℃，18h/d的光周期，光照强度2000Lx左右；
(4)生根培养：将继代培养得到的直径小于0.5cm的小芽转入生根培养基中，将直径0.5cm以上较大的芽竖向劈开一分为二再转入生根培养基中，培养基的PH6.2，培养温度为23℃，12h/d的光周期，光照强度1500Lx左右，所述生根培养基为1/2MS+NAA0.3mg\L+蔗糖20g/L，20天左右生根，当根生长到3cm左右出瓶，根生长过长或生根时间过长都会影响移栽成活；
(5)炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗4d，然后解开封口膜，炼苗6d，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的蛭石中，温度控制在24-26℃，前7d湿度控制在70％左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽期间适当遮光，使光照强度为自然光的50％。
实施例三：
一种花叶玉簪快速繁殖的方法，
(1)外植体的选择及消毒：若在8月初开始取外植体，则在7月初在地里挖出玉簪洗净后种植在以干净的珍珠岩为基质的盆中，后放在干净温室中只浇清水；用小刀削下块茎上的芽子，后浸于盛有饱和肥皂水的烧杯中10分钟，再用自来水中洗到基本无泡沫，然后再重复上述浸泡中洗的步骤一次，浸泡时间缩短至4分钟，自来水冲洗时间不易过长以免造成外植体二次污染，转入超净工作台，在超净台中先用70％的酒精浸泡1分钟，无菌水中洗2次，用含有两滴吐温80的5％次氯酸钠溶液消毒15分钟，无菌水冲洗5次；再加入含有两滴吐温80的0.1％的升汞消毒15分钟，用无菌水中洗6次；
(2)接种培养：取将步骤(1)所述的外植体，首先剥去芽的苞叶，尽量多剥几层，切取带有潜伏芽的外植体接种到接种培养基中，每瓶只接一块，培养基的PH6.2，培养温度为24℃，12h/d的光周期，光照强度1500Lx左右，培养7天开始生长，所述接种培养基为1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L；
(3)继代培养：将不污染的带有新营养芽的外植体转入第一继代培养基中使芽增殖，所述第一继代培养基是1/2MS+6-BA2mg/L+NAA0.5mg/L+磷酸二氢钾150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，继代5次，转入第二继代培养基或不添加任何激素的空白培养基中继代1次，所述第二继代培养基为1/2MS+IBA0.8mg/L+磷酸二氢钾150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，所述空白培养基为1/2MS+磷酸二氢钾150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，然后再转入第一继代培养基中继续增殖5代，后转入第二继代培养基中继代1代，然后再转入第一继代培养基中继续增殖2代；继代培养过程中，培养基的PH6.2，培养温度为24℃，16h/d的光周期，光照强度2000Lx左右；
(4)生根培养：将继代培养得到的直径小于0.5cm的小芽转入生根培养基中，将直径0.5cm以上较大的芽竖向劈开一分为二再转入生根培养基中，培养基的PH6.2，培养温度为24℃，12h/d的光周期，光照强度1500Lx左右，所述生根培养基为1/2MS+NAA0.3mg\L+蔗糖20g/L，20天左右生根，当根生长到3cm左右出瓶，根生长过长或生根时间过长都会影响移栽成活；
(5)炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗4d，然后解开封口膜，炼苗6d，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的蛭石中，温度控制在24-26℃，前7d湿度控制在70％左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽期间适当遮光，使光照强度为自然光的50％。
对比例：
对比例的条件、步骤和实施例三相同，并且都是继代14代，唯一的区别是不转换培养基，只是在第一继代培养基中继代增殖。
上述三个实施例中，花叶玉簪的变异率分别为1.5％，1.2％，1.3％，增值倍数平均达到了4倍左右，生根率达到了96％，最终的成活率达到了100％，并且质量得到了较好的保证，而对比例中，由于在继代培养中没有转换培养基，继代到第8代时，变异率达到了22％，继代到第11代时，变异率达到了48％，继代到第14代时，变异率达到了76％左右，严重影响了花叶玉簪的工厂化育苗。
除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。
Claims (3)
1.一种花叶玉簪繁殖的方法，其特征在于，包括：
(1)外植体的选择及消毒：于3-4月选晴朗天气直接在大田中取块茎上的萌发芽做为外植体，或者在其它月份提前30天左右在地里挖出玉簪洗净后种植在以干净的珍珠岩为基质的盆中，后放在干净温室中只浇清水；用小刀削下块茎上的芽子，后浸于盛有饱和肥皂水的烧杯中5-10分钟，再用自来水冲洗到基本无泡沫，然后再重复上述浸泡冲洗的步骤一次，浸泡时间缩短至2-4分钟，自来水冲洗时间不易过长以免造成外植体二次污染，转入超净工作台，在超净台中先用70％的酒精浸泡1分钟，无菌水冲洗2次，用含有两滴吐温80的5％次氯酸钠溶液消毒10-15分钟，无菌水冲洗5次；再用含有两滴吐温80的0.1％的升汞消毒10-15分钟，用无菌水冲洗6次；
(2)接种培养：取将步骤(1)所述的外植体，首先剥去芽的苞叶，尽量多剥几层，切取带有潜伏芽的外植体接种到接种培养基中，每瓶只接一块，培养基的pH6.2，培养温度为23±1℃，12h/d的光周期，光照强度600Lx左右，培养3-7天开始生长，所述接种培养基为1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L；
(3)继代培养：将不污染的带有新营养芽的外植体转入第一继代培养基中使芽增殖，所述第一继代培养基是1/2MS+6-BA0.5-2mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+磷酸二氢钾150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，继代5次左右，转入第二继代培养基或不添加任何激素的空白培养基中继代一次，所述第二继代培养基为1/2MS+IBA0.8mg/L+磷酸二氢钾150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，所述空白培养基为1/2MS+磷酸二氢钾150mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L，然后再转入第一继代培养基中继续增殖，根据需苗量重复上述步骤；继代培养过程中，培养基的pH6.2，培养温度为23±1℃，14-18h/d的光周期，光照强度1000Lx左右；
(4)生根培养：将继代培养得到的小芽直接转入生根培养基中，较大的苗从中间竖着劈开一分为二再转入生根培养基中，培养基的pH6.2，培养温度为23±1℃，12h/d的光周期，光照强度600Lx左右，所述生根培养基为1/2MS+NAA0.3mg/L+蔗糖20g/L，20天左右生根，当根生长到3cm左右出瓶，根生长过长或生根时间过长都会影响移栽成活；
(5)炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗4d，然后解开封口膜，炼苗6d，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的基质中，温度控制在24-26℃，前7d湿度控制在70％左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽期间适当遮光，使光照强度为自然光的50％。
2.根据权利要求1所述的花叶玉簪繁殖的方法，其特征在于，步骤(4)中所述小芽直径小于0.5mm；所述较大的芽直径0.5mm以上。
3.根据权利要求1或2所述的花叶玉簪繁殖的方法，其特征在于，步骤(5)所述的基质为蛭石。
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