CN110495395A - 一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，具体包括如下步骤：(1)外植体的选择；(2)外植体的预处理；(3)愈伤组织的诱导；(4)愈伤组织增殖分化培养；(5)生根培养；(6)炼苗移栽；(7)工厂化育苗。所述增殖分化分为3个阶段，且每个阶段的培养基不一样，均采用特制的增殖分化培养基，使得奇异核桃丛生芽增殖系数达到10～15倍；生根培养分为2个阶段，且每个阶段的培养基不一样，均采用特制的生根培养基，使得奇异核桃生根率最高可达85％以上；移栽成活率在90％以上，在短时间内可培育出大量适合栽培种植的奇异核桃幼苗，实现规模化生产。

Description

一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法
技术领域
本发明涉及苗木无性繁殖技术领域，特别涉及一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法。
背景技术
奇异核桃系美国北加州黑核桃(Juglans hind-sii)与核桃(J.regia)的杂交种。该树种杂种优势明显，速生性状强，适生范围广，不仅是核桃生产中的重要砧木资源，还是城镇绿化和农田林网化的优良材料。用奇异核桃作核桃砧木，不仅树体生长强壮，而且树体抗黑线病、根颈朽等病害，对根部寄生线虫也有较大的耐受性，具有很高的经济、生态和社会价值。但奇异核桃为异花授粉，故利用实生苗繁殖面临繁育系数低、核桃苗供给受季节限制性强等问题。而核桃扦插难以生根、嫁接则接口处伤流严重及氧化褐变，成活率很低，所以传统繁殖方法速度缓慢，严重影响了奇异核桃优质苗木的大规模推广。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，采用本发明所述的培养方法得到的奇异核桃丛生芽增殖系数达到10～15倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根，生根率可达85％以上，移栽成活率在90％以上，实现规模化生产，满足生产上的需要。
本发明是这样实现的：
本发明提供一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，具体包括如下步骤：
步骤1、外植体的选择；
步骤2、外植体的处理：将外植体进行预处理；
步骤3、愈伤组织的诱导：将预处理后的外植体接种于诱导培养基中于15℃～17℃低温避光培养8～10天后，于常温条件下培养，诱导得到愈伤组织；所述诱导培养基为以核桃专用培养基DKW为基础培养基，添加0.4～0.6mg/L 6-BA、0.04～0.06mg/L 2-BA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、20％硫代硫酸钠、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
步骤4、愈伤组织增殖分化培养：将步骤3中得到的愈伤组织依次置于3个增殖分化培养基中进行3个阶段的增殖分化培养获得丛芽；其中，
第一阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.7～0.9mg/L 6-BA、0.04～0.06mg/L 2-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
第二阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.9～1.1mg/L 6-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
第三阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加1.1～1.3mg/L 6-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
步骤5、生根培养：将步骤4中得到的丛芽分成单芽依次置于2个生根培养基中进行2个阶段的培养得到完整带根苗，其中，
第一阶段的生根培养基为以1/4 DKW为基础培养基，添加4.0～6.0mg/L 2-BA、1.4～1.6g/L的活性炭、15g/L蔗糖和4～5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
第二阶段的生根培养基为1/4 DKW、15g/L蔗糖和4～5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
步骤6、移栽炼苗：将步骤5得到的完整带根苗洗净后移至工厂化棚炼苗；
步骤7、工厂化育苗。
本发明具有以下有益效果：
本发明提供的一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，采用本发明所述的培养方法得到的奇异核桃丛生芽增殖系数达到10～15倍，生根率最高可达85％以上，移栽成活率在90％以上，可在短时间内提供成活率高的奇异核桃优质种苗，有效解决奇异核桃的规模化育苗问题；具体地：
(1)本发明人经过大量的创新性实验发现，诱导培养基采用“为以核桃专用培养基DKW为基础培养基，添加0.4～0.6mg/L 6-BA、0.04～0.06mg/L 2-BA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、20％硫代硫酸钠、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0”；且诱导培养时先于15℃～17℃低温避光培养8～10天，可有效防止褐变。
(2)本发明人经过大量的创新性实验发现，将增殖分化分为3个阶段，且每个阶段的培养基不一样，均采用特制的增殖分化培养基，使得奇异核桃丛生芽增殖系数达到10～15倍。
(3)本发明人经过大量的创新性实验发现，将生根培养分为2个阶段，且每个阶段的培养基不一样，均采用特制的生根培养基，使得奇异核桃生根率最高可达85％以上。
(4)移栽成活率在90％以上，实现规模化生产，满足生产上的需要。
具体实施方式
实施例1
步骤1、外植体的选择：
先将奇异核桃苗在营养钵内于25℃培养20天，所述营养钵内的基质为体积比为1：1：1.2的海藻土：蛭石：火山灰；
然后将得到的奇异核桃苗移至大棚内培养，大棚的培养基质为体积比为6：1的草炭土：蛭石；
当大棚内的温度＜35℃，所述外植体选择顶芽；当大棚内的温度＝35℃，所述外植体选择第一腋芽；当大棚内的温度＞35℃，所述外植体选择第三腋芽和/或第四腋芽；
步骤2、将外植体进行预处理：
S1、清洗：用洗洁精水溶液清洗表面污垢后，进行流水冲洗；
S2、将清洗后的嫩枝条于2℃～4℃冷藏避光处理4～8h；
S3、移至超净工作台上，用0.1％v/v HgC12浸泡、用75％v/v酒精将种子和芽浸泡30s，20％的Na2S2O3浸泡1min，无菌水冲洗8-10次，用无菌滤纸吸干外植体表面水分；
步骤3、愈伤组织的诱导：将预处理后的外植体接种于诱导培养基中于16℃低温避光培养9天后，于常温条件下培养，诱导得到愈伤组织；所述诱导培养基为以核桃专用培养基DKW为基础培养基，添加0.5mg/L 6-BA、0.05mg/L 2-BA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、20％硫代硫酸钠、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
所述诱导培养基中还添加了益培隆(包括益培隆A液和益培隆B液，购自chembaseNO.B0019K0315114)、清菌益(购自chembase NO.B0018K1015000)和灰黄霉素(购自广东台城制药股份有限公司，批准文号：国药准字H44020861)；所述常温培养条件为：培养温度为23～27℃，培养时间为8～12天，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天。40L的诱导培养基中添加益培隆A液10mL和益培隆B液435mg，清菌益13g，灰黄霉素片5片(灰黄霉素片需要在112℃条件下灭菌30min后再添加到诱导培养基中)；
步骤4、愈伤组织增殖分化培养：将步骤3中得到的愈伤组织依次置于3个增殖分化培养基中进行3个阶段的增殖分化培养获得丛芽；其中，
第一阶段(14天)：该阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.8mg/L6-BA、0.05mg/L 2-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
第二阶段(10天)：该阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加1mg/L 6-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
第三阶段(10天)：该阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加1.2mg/L6-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
步骤5、生根培养：将步骤4中得到的丛芽分成单芽依次置于2个生根培养基中进行2个阶段的培养得到完整带根苗，其中，
第一阶段(12天)：该阶段的生根培养基为以1/4 DKW为基础培养基，添加5.0mg/L2-BA、1.5g/L的活性炭、15g/L蔗糖和4.5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；所述活性炭的添加可以诱导根原基的形成，蔗糖和琼脂浓度降低有利于长出肉质根；
第二阶段的生根培养基为1/4 DKW、15g/L蔗糖和4.5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；该阶段的时间为长出根及以后；
步骤6、移栽炼苗：将步骤5得到的完整带根苗洗净后移至工厂化棚炼苗；炼苗所采用的基质为体积比为1：1：1.2的珍珠岩：蛭石：草炭土；且完整带根苗洗净后采用杜菌林浸泡再移至工厂化棚的基质中。
步骤7、工厂化育苗；所述工厂化育苗条件为：移栽5天内，温度25℃及以下，空气相对湿度95％及以上，工厂化棚中的光照强度为2600～2800KHZ；移栽5天后，逐渐减低温度，逐渐增加光照强度至自然光；移栽后21-40天，施0.2％硝酸钾、0.2％硫酸钾、0.2％磷酸二氢钾和EDTA螯合的铁盐的叶面肥。
实施例2
步骤1、外植体的选择：
先将奇异核桃苗在营养钵内于24℃培养18天，所述营养钵内的基质为体积比为1：1：1的海藻土：蛭石：火山灰；
然后将得到的奇异核桃苗移至大棚内培养，大棚的培养基质为体积比为6：1的草炭土：蛭石；
当大棚内的温度＜35℃，所述外植体选择顶芽；当大棚内的温度＝35℃，所述外植体选择第一腋芽；当大棚内的温度＞35℃，所述外植体选择第三腋芽和/或第四腋芽；
步骤2、将外植体进行预处理：
S1、清洗：用洗洁精水溶液清洗表面污垢后，进行流水冲洗；
S2、将清洗后的嫩枝条于2℃～4℃冷藏避光处理4～8h；
S3、移至超净工作台上，用0.1％v/v HgC12浸泡、用75％v/v酒精将种子和芽浸泡30s，20％的Na2S2O3浸泡1min，无菌水冲洗8-10次，用无菌滤纸吸干外植体表面水分；
步骤3、愈伤组织的诱导：将预处理后的外植体接种于诱导培养基中于15℃低温避光培养8天后，于常温条件下培养，诱导得到愈伤组织；所述诱导培养基为以核桃专用培养基DKW为基础培养基，添加0.4mg/L 6-BA、0.04mg/L 2-BA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、20％硫代硫酸钠、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
所述诱导培养基中还添加了益培隆(包括益培隆A液和益培隆B液，购自chembaseNO.B0019K0315114)、清菌益(购自chembase NO.B0018K1015000)和灰黄霉素(购自广东台城制药股份有限公司，批准文号：国药准字H44020861)；所述常温培养条件为：培养温度为23～27℃，培养时间为8～12天，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天。40L的诱导培养基中添加益培隆A液10mL和益培隆B液435mg，清菌益13g，灰黄霉素片5片(灰黄霉素片需要在112℃条件下灭菌30min后再添加到诱导培养基中)；
步骤4、愈伤组织增殖分化培养：将步骤3中得到的愈伤组织依次置于3个增殖分化培养基中进行3个阶段的增殖分化培养获得丛芽；其中，
第一阶段(13天)：该阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.7mg/L6-BA、0.04mg/L 2-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
第二阶段(9天)：该阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.9mg/L6-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
第三阶段(9天)：该阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加1.1mg/L6-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
步骤5、生根培养：将步骤4中得到的丛芽分成单芽依次置于2个生根培养基中进行2个阶段的培养得到完整带根苗，其中，
第一阶段(11天)：该阶段的生根培养基为以1/4 DKW为基础培养基，添加4.0mg/L2-BA、1.4g/L的活性炭、15g/L蔗糖和4g/L琼脂，pH为5.5～6.0；所述活性炭的添加可以诱导根原基的形成，蔗糖和琼脂浓度降低有利于长出肉质根；
第二阶段的生根培养基为1/4 DKW、15g/L蔗糖和4g/L琼脂，pH为5.5～6.0；该阶段的时间为长出根及以后；
步骤6、移栽炼苗：将步骤5得到的完整带根苗洗净后移至工厂化棚炼苗；炼苗所采用的基质为体积比为1：1：1的珍珠岩：蛭石：草炭土；且完整带根苗洗净后采用杜菌林浸泡再移至工厂化棚的基质中。
步骤7、工厂化育苗；所述工厂化育苗条件为：移栽5天内，温度25℃及以下，空气相对湿度95％及以上，工厂化棚中的光照强度为2600～2800KHZ；移栽5天后，逐渐减低温度，逐渐增加光照强度至自然光；移栽后21-40天，施0.2％硝酸钾、0.2％硫酸钾、0.2％磷酸二氢钾和EDTA螯合的铁盐的叶面肥。
实施例3
步骤1、外植体的选择：
先将奇异核桃苗在营养钵内于26℃培养22天，所述营养钵内的基质为体积比为1：1：1.5的海藻土：蛭石：火山灰；
然后将得到的奇异核桃苗移至大棚内培养，大棚的培养基质为体积比为6：1的草炭土：蛭石；
当大棚内的温度＜35℃，所述外植体选择顶芽；当大棚内的温度＝35℃，所述外植体选择第一腋芽；当大棚内的温度＞35℃，所述外植体选择第三腋芽和/或第四腋芽；
步骤2、将外植体进行预处理：
S1、清洗：用洗洁精水溶液清洗表面污垢后，进行流水冲洗；
S2、将清洗后的嫩枝条于2℃～4℃冷藏避光处理4～8h；
S3、移至超净工作台上，用0.1％v/v HgC12浸泡、用75％v/v酒精将种子和芽浸泡30s，20％的Na2S2O3浸泡1min，无菌水冲洗8-10次，用无菌滤纸吸干外植体表面水分；
步骤3、愈伤组织的诱导：将预处理后的外植体接种于诱导培养基中于17℃低温避光培养10天后，于常温条件下培养，诱导得到愈伤组织；所述诱导培养基为以核桃专用培养基DKW为基础培养基，添加0.6mg/L 6-BA、0.06mg/L 2-BA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、20％硫代硫酸钠、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
所述诱导培养基中还添加了益培隆(包括益培隆A液和益培隆B液，购自chembaseNO.B0019K0315114)、清菌益(购自chembase NO.B0018K1015000)和灰黄霉素(购自广东台城制药股份有限公司，批准文号：国药准字H44020861)；所述常温培养条件为：培养温度为23～27℃，培养时间为8～12天，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天。40L的诱导培养基中添加益培隆A液10mL和益培隆B液435mg，清菌益13g，灰黄霉素片5片(灰黄霉素片需要在112℃条件下灭菌30min后再添加到诱导培养基中)；
步骤4、愈伤组织增殖分化培养：将步骤3中得到的愈伤组织依次置于3个增殖分化培养基中进行3个阶段的增殖分化培养获得丛芽；其中，
第一阶段(15天)：该阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.9mg/L6-BA、0.06mg/L 2-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
第二阶段(11天)：该阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加1.1mg/L6-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
第三阶段(11天)：该阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加1.3mg/L6-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
步骤5、生根培养：将步骤4中得到的丛芽分成单芽依次置于2个生根培养基中进行2个阶段的培养得到完整带根苗，其中，
第一阶段(13天)：该阶段的生根培养基为以1/4 DKW为基础培养基，添加6.0mg/L2-BA、1.6g/L的活性炭、15g/L蔗糖和5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；所述活性炭的添加可以诱导根原基的形成，蔗糖和琼脂浓度降低有利于长出肉质根；
第二阶段的生根培养基为1/4 DKW、15g/L蔗糖和5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；该阶段的时间为长出根及以后；
步骤6、移栽炼苗：将步骤5得到的完整带根苗洗净后移至工厂化棚炼苗；炼苗所采用的基质为体积比为1：1：1.5的珍珠岩：蛭石：草炭土；且完整带根苗洗净后采用杜菌林浸泡再移至工厂化棚的基质中。
步骤7、工厂化育苗；所述工厂化育苗条件为：移栽5天内，温度25℃及以下，空气相对湿度95％及以上，工厂化棚中的光照强度为2600～2800KHZ；移栽5天后，逐渐减低温度，逐渐增加光照强度至自然光；移栽后21-40天，施0.2％硝酸钾、0.2％硫酸钾、0.2％磷酸二氢钾和EDTA螯合的铁盐的叶面肥。
实验例1
1、以上实施例1～实施例3均同时至少重复3次，分别观察并计算以上实施例1～实施例3中奇异核桃的出芽繁殖倍数(即一个芽接进培养基里它能长出多少个芽来)和生根率并统计如下：
表1
实施例1 实施例2 实施例3
出牙繁殖倍数(倍) 15 10 12
生根率 85.1％ 82.6％ 83.4％
由表1可知，本发明中奇异核桃丛生芽增殖系数达到10～15倍。奇异核桃生根率最高可达85％以上。
2、移栽成活率(％)＝(每处理移栽奇异核桃组培苗成活株(丛)数/每处理移栽奇异核桃组培苗总株(丛)数)×100％。实施例1～实施例3中奇异核桃的移栽存活率如表2所示。
表2
由表2可知：奇异核桃组培苗移栽总成活率最高可达90％，移栽后返青期早，易于成活。
综上所述，采用本发明所述的培养方法得到的奇异核桃丛生芽增殖系数达到10～15倍，生根率最高可达85％以上，移栽成活率在90％以上，可在短时间内提供成活率高的奇异核桃优质种苗，有效解决奇异核桃的规模化育苗问题。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
步骤1、外植体的选择；
步骤2、外植体的预处理；
步骤3、愈伤组织的诱导：将预处理后的外植体接种于诱导培养基中于15℃～17℃低温避光培养8～10天后，于常温条件下培养，诱导得到愈伤组织；所述诱导培养基为以核桃专用培养基DKW为基础培养基，添加0.4～0.6mg/L6-BA、0.04～0.06mg/L 2-BA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、20％硫代硫酸钠、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
步骤4、愈伤组织增殖分化培养：将步骤3中得到的愈伤组织依次置于3个增殖分化培养基中进行3个阶段的增殖分化培养获得丛芽；其中，
第一阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.7～0.9mg/L6-BA、0.04～0.06mg/L 2-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
第二阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.9～1.1mg/L6-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
第三阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加1.1～1.3mg/L6-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
步骤5、生根培养：将步骤4中得到的丛芽分成单芽依次置于2个生根培养基中进行2个阶段的培养得到完整带根苗，其中，
第一阶段的生根培养基为以1/4DKW为基础培养基，添加4.0～6.0mg/L2-BA、1.4～1.6g/L的活性炭、15g/L蔗糖和4～5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
第二阶段的生根培养基为1/4DKW、15g/L蔗糖和4～5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
步骤6、移栽炼苗：将步骤5得到的完整带根苗洗净后移至工厂化棚炼苗；
步骤7、工厂化育苗。
2.如权利要求1所述的奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，其特征在于，所述步骤1的具体方法为：先将奇异核桃苗在营养钵内于24℃～26℃培养18～22天，所述营养钵内的基质为体积比为1：1：1～1.5的海藻土：蛭石：火山灰；然后将得到的奇异核桃苗移至大棚内培养，大棚的培养基质为体积比为6：1：1的草炭土：蛭石；当大棚内的温度＜35℃，所述外植体选择顶芽；当大棚内的温度＝35℃，所述外植体选择第一腋芽；当大棚内的温度＞35℃，所述外植体选择第三腋芽和/或第四腋芽。
3.如权利要求1所述的奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，其特征在于，所述步骤2的预处理具体包括如下步骤：
S1、清洗：用洗洁精水溶液清洗表面污垢后，进行流水冲洗；
S2、将清洗后的嫩枝条于2℃～4℃冷藏避光处理4～8h；
S3、移至超净工作台上，用0.1％v/v HgC12浸泡、用75％v/v酒精将种子和芽浸泡30s，20％的Na2S2O3浸泡1min，无菌水冲洗8-10次，用无菌滤纸吸干外植体表面水分。
4.如权利要求1所述的奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，其特征在于，所述步骤3中，其中所述诱导培养基中还添加了益培隆、清菌益和灰黄霉素；所述常温培养条件为：培养温度为23～27℃，培养时间为8～12天，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天。
5.如权利要求1所述的奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，其特征在于，所述步骤4中，增殖分化培养的第一阶段时间为13～15天；增殖分化培养的第二阶段时间为9～11天；增殖分化培养的第三阶段时间为9～11天；培养条件为：在培养温度23～27℃、光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养。
6.如权利要求1所述的奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，其特征在于，所述步骤5中，生根培养的第一阶段时间为11～13天；生根培养的第二阶段时间为直至长出完整带根苗后；培养条件为：在培养温度23～27℃、光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养。
7.如权利要求1所述的奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，其特征在于，所述步骤6中，炼苗所采用的基质为体积比为1：1：1～1.5的珍珠岩：蛭石：草炭土；且完整带根苗洗净后采用杜菌林浸泡再移至工厂化棚的基质中。
8.如权利要求1所述的奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，其特征在于，所述步骤7中，工厂化育苗条件为：移栽5天内，温度25℃及以下，空气相对湿度95％及以上，工厂化棚中的光照强度为2600～2800KHZ；移栽5天后，逐渐减低温度，逐渐增加光照强度至自然光；移栽后21-40天，施0.2％硝酸钾、0.2％硫酸钾、0.2％磷酸二氢钾和EDTA螯合的铁盐的叶面肥。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116034865A (zh) * 2022-12-28 2023-05-02 成县兴丰农林科技有限责任公司 一种核桃半同胞家系育种方法
CN117158315A (zh) * 2023-05-19 2023-12-05 淮南师范学院 一种小叶栀子的组织培养方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101297637A (zh) * 2008-06-18 2008-11-05 中国科学院新疆理化技术研究所 薄皮核桃的组培快繁方法
CN103004602A (zh) * 2012-12-26 2013-04-03 安徽农业大学 一种抑制山核桃外植体褐化的方法
CN104381132A (zh) * 2014-10-31 2015-03-04 上海杉一植物科技有限公司 奇异核桃乌拉克组培苗瓶内的生根方法
CN106472317A (zh) * 2016-10-19 2017-03-08 黑龙江省林业科学研究所 核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101297637A (zh) * 2008-06-18 2008-11-05 中国科学院新疆理化技术研究所 薄皮核桃的组培快繁方法
CN103004602A (zh) * 2012-12-26 2013-04-03 安徽农业大学 一种抑制山核桃外植体褐化的方法
CN104381132A (zh) * 2014-10-31 2015-03-04 上海杉一植物科技有限公司 奇异核桃乌拉克组培苗瓶内的生根方法
CN106472317A (zh) * 2016-10-19 2017-03-08 黑龙江省林业科学研究所 核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张建瑛等: "核桃楸腋芽再生体系研究 ", 《植物研究》 *
朱丽华: "核桃生物技术的应用研究与进展 ", 《世界林业研究》 *
李明军等: "美国黑核桃组织培养的初步研究 ", 《河南科学》 *
樊靖等: "核桃离体培养和植株再生 ", 《园艺学报》 *
牛青: ""金薄香"核桃组织培养及试管外嫁接体系的建立", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》 *
王华: "美国奇异核桃Vlach(乌拉克)组培技术研究", 《山西林业科技》 *
袁巧平等: "离体培养条件下核桃器官发生和体细胞胚胎发生 ", 《林业科学》 *
裘晓梅等: "奇异核桃快繁技术研究 ", 《内蒙古林业科技》 *
裴东等: "核桃品种试管嫩茎生根的研究 ", 《林业科学》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116034865A (zh) * 2022-12-28 2023-05-02 成县兴丰农林科技有限责任公司 一种核桃半同胞家系育种方法
CN117158315A (zh) * 2023-05-19 2023-12-05 淮南师范学院 一种小叶栀子的组织培养方法

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