CN106472317A - 核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法 - Google Patents

核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法 Download PDF

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    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Abstract

核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法，涉及一种核桃楸的植株再生方法。本发明是要解决现有核桃楸组织培养器官发生困难、褐化现象严重、诱导率和生根率低的问题。方法：一、对核桃楸合子胚进行预处理；二、取经过预处理的核桃楸合子胚接种于培养基中培养至出现愈伤组织；三、将愈伤组织接种于培养基中，进行光暗交替培养，至长出不定芽；四、将带有不定芽的愈伤组织切成块进行光照培养，进行不定芽伸长，转入培养基中进行不定芽的抽茎；五、将抽茎的不定芽转入培养基中进行不定芽生根；六、炼苗后移栽到温室培养。本方法的愈伤组织诱导率和不定芽诱导率高达100％，不定芽抽茎率和生根率较高，能够显著降低褐化率。用于核桃楸组织培养领域。

Description

核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法
技术领域
本发明涉及一种核桃楸的植株再生方法。
背景技术
核桃楸(Juglans mandshurica Maxim)为胡桃科核桃属植物，又名胡桃楸、东北核桃，俗称山核桃。产于我国东北、华北各地，由于遭受破坏严重，自然资源大量减少，因而被列为国家Ⅱ级珍稀树种。核桃楸木材质地细韧，色泽淡雅，纹理致密，为家具、建筑等优良用材。其果实山核桃，果仁含脂肪70％以上，风味独特，香味浓郁，既是高热能营养食品，又是补气养血、润肺健脑的绿色保健食品。在我国，早已把核桃楸的幼果、树皮、根皮作为清热解毒、消炎的中药材使用，核桃楸的青皮中含有胡桃醌、黄酮类、萜类等多种有效成分，对治疗肿瘤、冠心病、高血压等疾病具有一定作用。核桃楸的树叶提取物，可以制造杀虫剂，生产绿色环保农药。可以说，核桃楸从根到梢的各个部位都有用，浑身是宝。
目前核桃楸主要依靠种子和扦插两种途径繁育，速度慢，人工成本较高。研究核桃楸组培快繁技术已经成为扩大其人工种植种源的重要基础。但由于核桃楸细胞中含有丰富的酚类，因此在组织培养过程中褐化现象十分严重。另外现有的组培快繁方法诱导率和生根率并不高，难以满足核桃楸繁育的需要。
发明内容
本发明是要解决现有核桃楸组织培养器官发生困难、褐化现象严重、诱导率和生根率低的问题，提供一种核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法。
本发明核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法，包括以下步骤：
一、对核桃楸合子胚进行预处理
5月取材，先用洗衣粉水刷洗核桃楸果实表面，然后用流水冲洗1～2h，接着用无菌水冲洗3次，置于2～4℃条件下处理12～24h，然后移至超净台，利用紫外灯灭菌15～30min，用质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡2次，每次30s，再用质量浓度为0.1％的HgCl2溶液浸泡5-10min，然后用无菌水冲洗3-5次，备用；
二、取经过步骤一预处理的核桃楸合子胚接种于含有1.0～1.5mg/L噻苯隆(TDZ)、0.5～1.0mg/L 6-BA、350mg/L谷氨酰胺、500mg/L水解酪蛋白、0.5～1.0g/L Na2S2O3、0.5～1.0g/L PVP、6.0g/L琼脂和30g/L蔗糖的MS改良培养基中，进行暗培养至出现愈伤组织；
步骤二所述暗培养的温度为22-25℃；
三、将愈伤组织接种于含有0.5～1.0mg/L 6-BA、0.5～1.0g/L Na2S2O3、0.5～1.0g/L PVP和6.0g/L琼脂的MS改良培养基中，在光照强度为32～36μmol·m-2·s-1，温度为23～25℃的环境中进行光暗交替培养，光暗周期为14h/10h，至长出不定芽；
四、将带有不定芽的愈伤组织切成块转入含有0.1～0.5mg/L噻苯隆、0.02～0.04mg/L NAA、0.5～1.0g/L Na2S2O3、0.5～1.0g/L PVP和6.0g/L琼脂的MS改良培养基中培养，每日光照12～14h，在光照强度为32～38μmol·m-2·s-1，温度为22～24℃的环境中进行光照培养，每2～3天继代培养一次，进行不定芽伸长，当不定芽伸长至2～3cm，将其转入含有0.05～0.5mg/L 6-BA、0.05～0.2mg/L NAA、0.5～1.0g/L Na2S2O3、0.5～1.0g/L PVP和6.0g/L琼脂的MS改良培养基中培养，进行不定芽的抽茎；
五、将抽茎的不定芽转入含有2.0mg/L吲哚乙酸、1.0mg/L NAA、6.0g/L琼脂和60g/L蔗糖的1/2MS改良培养基，在光照强度为32～38μmol·m-2·s-1，温度为22～24℃的环境中，进行光照培养以实现不定芽的生根；
六、将根长超过2cm的植株经炼苗2～3d后移栽到温室培养。
步骤六中炼苗移栽的具体方法为：取根长超过2cm的植株，移到自然光下，炼苗2～3d，然后洗去根系上的培养基，栽种到草炭:蛭石＝2:1(v/v)混合基质中，在自然光下培育20～25天，然后移栽到土壤中。所述蛭石经过0.5％高锰酸钾溶液消毒。
所述MS改良培养基包含以下成分：NH4NO3 1650mg·L-1、KNO3 1900mg·L-1、CaCl2·2H2O440mg·L-1、MgSO4·7H2O 560mg·L-1、KH2PO4170mg·L-1、KI 1.66mg·L-1、H3BO36.2mg·L-1、MnSO4·4H2O 22.3mg·L-1、ZnSO4·7H2O 8.6mg·L-1、NaMo4·2H2O 0.25mg·L-1、CuSO4·5H2O 0.05mg·L-1、CoCl2·6H2O 0.05mg·L-1、FeSO4·7H2O 27.8mg·L-1、Na2-EDTA25.6mg·L-1、肌醇1000mg·L-1、盐酸硫胺素1.0mg·L-1、烟酸1.0mg·L-1、盐酸吡哆素0.5mg·L-1、甘氨酸4.0mg·L-1和蒸馏水。
所述1/2MS改良培养基包含以下成分：NH4NO3 825mg·L-1、KNO3 950mg·L-1、CaCl2·2H2O 220mg·L-1、MgSO4·7H2O 280mg·L-1、KH2PO4 85mg·L-1、KI 0.83mg·L-1、H3BO36.2mg·L-1、MnSO4·4H2O 11.2mg·L-1、ZnSO4·7H2O 8.6mg·L-1、NaMo4·2H2O0.25mg·L-1、CuSO4·5H2O 0.025mg·L-1、CoCl2·6H2O 0.025mg·L-1、FeSO4·7H2O13.9mg·L-1、Na2-EDTA 12.8mg·L-1、肌醇500mg·L-1、盐酸硫胺素0.5mg·L-1、烟酸0.5mg·L-1、盐酸吡哆素0.25mg·L-1、甘氨酸2.0mg·L-1和蒸馏水。
本发明的有益效果：
本发明建立了高效、稳定的核桃楸不定芽诱导方法，利用本发明方法可解决核桃楸育种周期长、见效慢的问题，为核桃楸的基因工程育种和遗传改良工作奠定基础。
本发明以核桃楸的合子胚为外植体进行不定芽的诱导，获得愈伤组织，愈伤组织诱导率和不定芽诱导率高达100％，不定芽抽茎率高达85.36％，而不定芽生根率可达85％以上。本发明方法操作步骤简便可行，能够显著降低褐化程度，褐化率仅为8.9％～10.4％。本发明方法与现有技术相比产生了预料不到的技术效果，这对核桃楸离体培养而言是一大突破，对于核桃楸的大量扩繁和基因工程育种研究具有广泛的应用价值。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法，包括以下步骤：
一、对核桃楸合子胚进行预处理；
二、取经过步骤一预处理的核桃楸合子胚接种于含有1.0～1.5mg/L噻苯隆、0.5～1.0mg/L 6-BA、350mg/L谷氨酰胺、500mg/L水解酪蛋白、0.5～1.0g/L Na2S2O3、0.5～1.0g/LPVP、6.0g/L琼脂和30g/L蔗糖的MS改良培养基中，进行暗培养至出现愈伤组织；
三、将愈伤组织接种于含有0.5～1.0mg/L 6-BA、0.5～1.0g/L Na2S2O3、0.5～1.0g/L PVP和6.0g/L琼脂的MS改良培养基中，在光照强度为32～36μmol·m-2·s-1，温度为23～25℃的环境中进行光暗交替培养，至长出不定芽；
四、将带有不定芽的愈伤组织切成块转入含有0.1～0.5mg/L噻苯隆、0.02～0.04mg/L NAA、0.5～1.0g/L Na2S2O3、0.5～1.0g/L PVP和6.0g/L琼脂的MS改良培养基中培养，每日光照12～14h，在光照强度为32～38μmol·m-2·s-1，温度为22～24℃的环境中进行光照培养，每2～3天继代培养一次，进行不定芽伸长，当不定芽伸长至2～3cm，将其转入含有0.05～0.5mg/L 6-BA、0.05～0.2mg/L NAA、0.5～1.0g/L Na2S2O3、0.5～1.0g/L PVP和6.0g/L琼脂的MS改良培养基中培养，进行不定芽的抽茎；
五、将抽茎的不定芽转入含有2.0mg/L吲哚乙酸、1.0mg/L NAA、6.0g/L琼脂和60g/L蔗糖的1/2MS改良培养基，在光照强度为32～38μmol·m-2·s-1，温度为22～24℃的环境中，进行光照培养以实现不定芽的生根；
六、将根长超过2cm的植株经炼苗2～3d后移栽到温室培养。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤一中所述对核桃楸合子胚进行预处理的方法具体为：5月取材，先用洗衣粉水刷洗核桃楸果实表面，然后用流水冲洗1～2h，接着用无菌水冲洗3次，置于2～4℃条件下处理12～24h，然后移至超净台，利用紫外灯灭菌15～30min，用质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡2次，每次30s，再用质量浓度为0.1％的HgCl2溶液浸泡5-10min，然后用无菌水冲洗3-5次，备用。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：步骤二所述暗培养的温度为22-25℃。其它与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：步骤二所述暗培养的温度为23-24℃。其它与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是：步骤三中在光照强度为33～35μmol·m-2·s-1，温度为24℃的环境中进行光暗交替培养。其它与具体实施方式一至四之一相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是：步骤三中光暗交替培育的光暗周期为14h/10h。其它与具体实施方式一至五之一相同。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一至六之一不同的是：步骤六中炼苗移栽的具体方法为：取根长超过2cm的植株，移到自然光下，炼苗2～3d，然后洗去根系上的培养基，栽种到草炭:蛭石＝2:1混合基质中，在自然光下培育20～25天，然后移栽到土壤中。其它与具体实施方式一至六之一相同。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式七不同的是：所述蛭石经过0.5％高锰酸钾溶液消毒。其它与具体实施方式七相同。
具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式一至八之一不同的是：步骤二、三和四中所述MS改良培养基包含以下成分：NH4NO3 1650mg·L-1、KNO3 1900mg·L-1、CaCl2·2H2O440mg·L-1、MgSO4·7H2O 560mg·L-1、KH2PO4170mg·L-1、KI 1.66mg·L-1、H3BO36.2mg·L-1、MnSO4·4H2O 22.3mg·L-1、ZnSO4·7H2O 8.6mg·L-1、NaMo4·2H2O 0.25mg·L-1、CuSO4·5H2O 0.05mg·L-1、CoCl2·6H2O 0.05mg·L-1、FeSO4·7H2O 27.8mg·L-1、Na2-EDTA25.6mg·L-1、肌醇1000mg·L-1、盐酸硫胺素1.0mg·L-1、烟酸1.0mg·L-1、盐酸吡哆素0.5mg·L-1、甘氨酸4.0mg·L-1和蒸馏水。其它与具体实施方式一至八之一相同。
具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式一至九之一不同的是：步骤五中所述1/2MS改良培养基包含以下成分：NH4NO3 825mg·L-1、KNO3 950mg·L-1、CaCl2·2H2O220mg·L-1、MgSO4·7H2O 280mg·L-1、KH2PO4 85mg·L-1、KI 0.83mg·L-1、H3BO3 6.2mg·L-1、MnSO4·4H2O 11.2mg·L-1、ZnSO4·7H2O 8.6mg·L-1、NaMo4·2H2O 0.25mg·L-1、CuSO4·5H2O 0.025mg·L-1、CoCl2·6H2O 0.025mg·L-1、FeSO4·7H2O 13.9mg·L-1、Na2-EDTA12.8mg·L-1、肌醇500mg·L-1、盐酸硫胺素0.5mg·L-1、烟酸0.5mg·L-1、盐酸吡哆素0.25mg·L-1、甘氨酸2.0mg·L-1和蒸馏水。其它与具体实施方式一至九之一相同。
下面对本发明的实施例做详细说明，以下实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方案和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1：
本实施例核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法，包括以下步骤：
一、对核桃楸合子胚进行预处理
5月取材，先用洗衣粉水刷洗核桃楸果实表面，然后用流水冲洗2h，接着用无菌水冲洗3次，置于4℃条件下处理12h，然后移至超净台，利用紫外灯灭菌15min，用质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡2次，每次30s，再用质量浓度为0.1％的HgCl2溶液浸泡10min，然后用无菌水冲洗3次，备用；
二、取经过步骤一预处理的核桃楸合子胚接种于含有1.5mg/L噻苯隆、0.5mg/L 6-BA、350mg/L谷氨酰胺、500mg/L水解酪蛋白、0.5g/L Na2S2O3、1.0g/L PVP、6.0g/L琼脂和30g/L蔗糖的MS改良培养基中，进行暗培养至出现愈伤组织；所述暗培养的温度为26℃；
三、将愈伤组织接种于含有1.0mg/L 6-BA、0.5g/L Na2S2O3、1.0g/L PVP和6.0g/L琼脂的MS改良培养基中，在光照强度为33μmol·m-2·s-1，温度为24℃的环境中进行光暗交替培养，光暗周期为14h/10h，至长出不定芽；
四、将带有不定芽的愈伤组织切成块转入含有0.2mg/L噻苯隆、0.04mg/L NAA、0.5g/L Na2S2O3、1.0g/L PVP和6.0g/L琼脂的MS改良培养基中培养，每日光照14h，在光照强度为38μmol·m-2·s-1，温度为24℃的环境中进行光照培养，每2天继代培养一次，进行不定芽伸长，当不定芽伸长至2cm，将其转入含有1.0mg/L 6-BA、0.05mg/L NAA、0.5g/L Na2S2O3、1.0g/L PVP和6.0g/L琼脂的MS改良培养基中培养，进行不定芽的抽茎；
五、将抽茎的不定芽转入含有2.0mg/L吲哚乙酸、1.0mg/L NAA、6.0g/L琼脂和60g/L蔗糖的1/2MS改良培养基，在光照强度为38μmol·m-2·s-1，温度为24℃的环境中，进行光照培养以实现不定芽的生根；
六、将根长超过2cm的植株经炼苗3d后移栽到温室培养。
步骤六中练苗移栽的具体方法为：取根长超过2cm的植株，移到自然光下，炼苗3d，然后洗去根系上的培养基，栽种到草炭:蛭石＝2:1(v/v)混合基质中，在自然光下培育20天，然后移栽到土壤中。所述蛭石经过0.5％高锰酸钾溶液消毒。移栽成活率达到99％。
所述MS改良培养基和1/2MS改良培养基的配方如表1所示。
本实施例是方法中愈伤组织诱导率为100％，愈伤组织呈黄色疏松，生长较快。
愈伤组织表面有绿色的、颗粒状芽原基产生，且不定芽的诱导率为100％，不定芽生长旺盛，芽点大，呈嫩绿色。
本实施例的不定芽抽茎率为85.36％，不定芽生根的诱导率为89.4％，诱导形成的不定根数为2～5条，最长的不定根达5.0-6.0cm。再培养2周左右，不定根上长出许多侧根，这些侧根长达10cm以上，短达2cm左右。
本发明方法操作步骤简便可行，能够显著降低褐化程度，褐化率仅为8.9％。
从外植体培养至成苗仅用60d左右时间，极大地缩短了植株再生时间，不定芽分化仅需12d，小植株生根仅需6d。
实施例2：
本实施例核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法，包括以下步骤：
一、对核桃楸合子胚进行预处理
5月取材，先用洗衣粉水刷洗核桃楸果实表面，然后用流水冲洗2h，接着用无菌水冲洗3次，置于4℃条件下处理12h，然后移至超净台，利用紫外灯灭菌15min，用质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡2次，每次30s，再用质量浓度为0.1％的HgCl2溶液浸泡10min，然后用无菌水冲洗3次，备用；
二、取经过步骤一预处理的核桃楸合子胚接种于含有1.0mg/L噻苯隆、1.0mg/L 6-BA、350mg/L谷氨酰胺、500mg/L水解酪蛋白、0.5g/L Na2S2O3、1.0g/L PVP、6.0g/L琼脂和30g/L蔗糖的MS改良培养基中，进行暗培养至出现愈伤组织；所述暗培养的温度为26℃；
三、将愈伤组织接种于含有1.0mg/L 6-BA、0.5g/L Na2S2O3、1.0g/L PVP和6.0g/L琼脂的MS改良培养基中，在光照强度为35μmol·m-2·s-1，温度为24℃的环境中进行光暗交替培养，光暗周期为14h/10h，至长出不定芽；
四、将带有不定芽的愈伤组织切成块转入含有0.5mg/L噻苯隆、0.02mg/L NAA、0.5g/L Na2S2O3、1.0g/L PVP和6.0g/L琼脂的MS改良培养基中培养，每日光照14h，在光照强度为38μmol·m-2·s-1，温度为22℃的环境中进行光照培养，每3天继代培养一次，进行不定芽伸长，当不定芽伸长至2cm，将其转入含有0.4mg/L 6-BA、0.2mg/L NAA、0.5g/L Na2S2O3、1.0g/L PVP和6.0g/L琼脂的MS改良培养基中培养，进行不定芽的抽茎；
五、将抽茎的不定芽转入含有2.0mg/L吲哚乙酸、1.0mg/L NAA、6.0g/L琼脂和60g/L蔗糖的1/2MS改良培养基，在光照强度为38μmol·m-2·s-1，温度为24℃的环境中，进行光照培养以实现不定芽的生根；
六、将根长超过2cm的植株经炼苗3d后移栽到温室培养。
步骤六中练苗移栽的具体方法为：取根长超过2cm的植株，移到自然光下，炼苗3d，然后洗去根系上的培养基，栽种到草炭:蛭石＝2:1(v/v)混合基质中，在自然光下培育20天，然后移栽到土壤中。所述蛭石经过0.5％高锰酸钾溶液消毒。移栽成活率达到98％。
所述MS改良培养基和1/2MS改良培养基的配方如表1所示。
本实施例是方法中愈伤组织诱导率为100％，愈伤组织呈黄色疏松，生长较快。
愈伤组织表面有绿色的、颗粒状芽原基产生，且不定芽的诱导率为100％，不定芽生长旺盛，芽点大，呈嫩绿色。
本实施例的不定芽抽茎率为86.16％，不定芽生根的诱导率为91.22％，诱导形成的不定根数为2～5条，最长的不定根达5.0-6.0cm。再培养2周左右，不定根上长出许多侧根，这些侧根长达10cm以上，短达2cm左右。
本发明方法操作步骤简便可行，能够显著降低褐化程度，褐化率仅为9.4％。
从外植体培养至成苗仅用60d左右时间，极大地缩短了植株再生时间，不定芽分化仅需12d，小植株生根仅需6d。
表1

Claims (10)

1.核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
一、对核桃楸合子胚进行预处理；
二、取经过步骤一预处理的核桃楸合子胚接种于含有1.0～1.5mg/L噻苯隆、0.5～1.0mg/L6-BA、350mg/L谷氨酰胺、500mg/L水解酪蛋白、0.5～1.0g/L Na2S2O3、0.5～1.0g/LPVP、6.0g/L琼脂和30g/L蔗糖的MS改良培养基中，进行暗培养至出现愈伤组织；
三、将愈伤组织接种于含有0.5～1.0mg/L 6-BA、0.5～1.0g/L Na2S2O3、0.5～1.0g/LPVP和6.0g/L琼脂的MS改良培养基中，在光照强度为32～36μmol·m-2·s-1，温度为23～25℃的环境中进行光暗交替培养，至长出不定芽；
四、将带有不定芽的愈伤组织切成块转入含有0.1～0.5mg/L噻苯隆、0.02～0.04mg/LNAA、0.5～1.0g/L Na2S2O3、0.5～1.0g/L PVP和6.0g/L琼脂的MS改良培养基中培养，每日光照12～14h，在光照强度为32～38μmol·m-2·s-1，温度为22～24℃的环境中进行光照培养，每2～3天继代培养一次，进行不定芽伸长，当不定芽伸长至2～3cm，将其转入含有0.05～0.5mg/L 6-BA、0.05～0.2mg/L NAA、0.5～1.0g/L Na2S2O3、0.5～1.0g/L PVP和6.0g/L琼脂的MS改良培养基中培养，进行不定芽的抽茎；
五、将抽茎的不定芽转入含有2.0mg/L吲哚乙酸、1.0mg/L NAA、6.0g/L琼脂和60g/L蔗糖的1/2MS改良培养基，在光照强度为32～38μmol·m-2·s-1，温度为22～24℃的环境中，进行光照培养以实现不定芽的生根；
六、将根长超过2cm的植株经炼苗2～3d后移栽到温室培养。
2.根据权利要求1所述的核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法，其特征在于步骤一中所述对核桃楸合子胚进行预处理的方法具体为：5月取材，先用洗衣粉水刷洗核桃楸果实表面，然后用流水冲洗1～2h，接着用无菌水冲洗3次，置于2～4℃条件下处理12～24h，然后移至超净台，利用紫外灯灭菌15～30min，用质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡2次，每次30s，再用质量浓度为0.1％的HgCl2溶液浸泡5-10min，然后用无菌水冲洗3-5次，备用。
3.根据权利要求1所述的核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法，其特征在于步骤二所述暗培养的温度为22-25℃。
4.根据权利要求1所述的核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法，其特征在于步骤二所述暗培养的温度为23-24℃。
5.根据权利要求1所述的核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法，其特征在于步骤三中在光照强度为33～35μmol·m-2·s-1，温度为24℃的环境中进行光暗交替培养。
6.根据权利要求1所述的核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法，其特征在于步骤三中光暗交替培育的光暗周期为14h/10h。
7.根据权利要求1所述的核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法，其特征在于步骤六中炼苗移栽的具体方法为：取根长超过2cm的植株，移到自然光下，炼苗2～3d，然后洗去根系上的培养基，栽种到草炭:蛭石＝2:1混合基质中，在自然光下培育20～25天，然后移栽到土壤中。
8.根据权利要求7所述的核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法，其特征在于所述蛭石经过0.5％高锰酸钾溶液消毒。
9.根据权利要求1所述的核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法，其特征在于步骤二、三和四中所述MS改良培养基包含以下成分：NH4NO3 1650mg·L-1、KNO3 1900mg·L-1、CaCl2·2H2O440mg·L-1、MgSO4·7H2O 560mg·L-1、KH2PO4170mg·L-1、KI 1.66mg·L-1、H3BO36.2mg·L-1、MnSO4·4H2O 22.3mg·L-1、ZnSO4·7H2O 8.6mg·L-1、NaMo4·2H2O0.25mg·L-1、CuSO4·5H2O 0.05mg·L-1、CoCl2·6H2O 0.05mg·L-1、FeSO4·7H2O 27.8mg·L-1、Na2-EDTA25.6mg·L-1、肌醇1000mg·L-1、盐酸硫胺素1.0mg·L-1、烟酸1.0mg·L-1、盐酸吡哆素0.5mg·L-1、甘氨酸4.0mg·L-1和蒸馏水。
10.根据权利要求1所述的核桃楸离体培养不定芽诱导植株再生的方法，其特征在于步骤五中所述1/2MS改良培养基包含以下成分：NH4NO3 825mg·L-1、KNO3 950mg·L-1、CaCl2·2H2O 220mg·L-1、MgSO4·7H2O 280mg·L-1、KH2PO4 85mg·L-1、KI 0.83mg·L-1、H3BO36.2mg·L-1、MnSO4·4H2O 11.2mg·L-1、ZnSO4·7H2O 8.6mg·L-1、NaMo4·2H2O0.25mg·L-1、CuSO4·5H2O 0.025mg·L-1、CoCl2·6H2O 0.025mg·L-1、FeSO4·7H2O13.9mg·L-1、Na2-EDTA12.8mg·L-1、肌醇500mg·L-1、盐酸硫胺素0.5mg·L-1、烟酸0.5mg·L-1、盐酸吡哆素0.25mg·L-1、甘氨酸2.0mg·L-1和蒸馏水。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109121779A (zh) * 2018-08-09 2019-01-04 兴义市天瑞核桃种植农民专业合作社 一种山核桃树的嫁接方法
CN109729977A (zh) * 2019-03-04 2019-05-10 沈阳农业大学 一种抑制胡桃楸茎段培养过程中外植体污染褐变的方法
CN110495395A (zh) * 2019-08-28 2019-11-26 湖北丰年农业开发有限公司 一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法
CN113598059A (zh) * 2021-09-23 2021-11-05 沈阳农业大学 一种胡桃楸成熟胚不定芽诱导植株快速再生的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103960130A (zh) * 2014-05-09 2014-08-06 黑龙江省林业科学研究所 胡桃楸诱导不定芽的方法
CN104839028A (zh) * 2015-06-02 2015-08-19 东北林业大学 杂种落叶松离体培养不定芽诱导植株再生的方法
KR20160004734A (ko) * 2014-07-04 2016-01-13 대한민국(산림청 국립산림과학원장) 체세포배 발생 및 발아체 유도 기술을 이용한 가래나무의 무성번식 방법
CN105638482A (zh) * 2016-03-25 2016-06-08 山西省农业科学院果树研究所 核桃与核桃楸种间杂交幼胚培养的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103960130A (zh) * 2014-05-09 2014-08-06 黑龙江省林业科学研究所 胡桃楸诱导不定芽的方法
KR20160004734A (ko) * 2014-07-04 2016-01-13 대한민국(산림청 국립산림과학원장) 체세포배 발생 및 발아체 유도 기술을 이용한 가래나무의 무성번식 방법
CN104839028A (zh) * 2015-06-02 2015-08-19 东北林业大学 杂种落叶松离体培养不定芽诱导植株再生的方法
CN105638482A (zh) * 2016-03-25 2016-06-08 山西省农业科学院果树研究所 核桃与核桃楸种间杂交幼胚培养的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张海峰等: "核桃楸成熟合子胚无菌萌发条件的研究", 《安徽农业科学》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109121779A (zh) * 2018-08-09 2019-01-04 兴义市天瑞核桃种植农民专业合作社 一种山核桃树的嫁接方法
CN109729977A (zh) * 2019-03-04 2019-05-10 沈阳农业大学 一种抑制胡桃楸茎段培养过程中外植体污染褐变的方法
CN109729977B (zh) * 2019-03-04 2022-09-06 沈阳农业大学 一种抑制胡桃楸茎段培养过程中外植体污染褐变的方法
CN110495395A (zh) * 2019-08-28 2019-11-26 湖北丰年农业开发有限公司 一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法
CN113598059A (zh) * 2021-09-23 2021-11-05 沈阳农业大学 一种胡桃楸成熟胚不定芽诱导植株快速再生的方法

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