CN110108886A - 针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的prdx2抗体胶体金检测试纸条 - Google Patents

针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的prdx2抗体胶体金检测试纸条 Download PDF

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Abstract

本发明涉及针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金检测试纸，所述试纸条包括PVC底板以及依次搭接在PVC底板上的样品垫、金标垫、层析膜和吸样垫，所述样品垫包括有吸附层、过滤层和样本层；所述吸样垫包括吸水纸，吸水纸下表面设有多孔固体材料层；本发明公开了一种针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金检测试纸条，具有检测特异性强，灵敏度高的特点；本发明创造采用了广泛应用的、高效的抗原抗体结合反应进行检测，可准确检测血样中蛋白的水平，且采用了高品质的单克隆抗原和抗体进行结合和捕捉，使核酸检测试纸条灵敏度大大提高。

Description

针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金 检测试纸条
技术领域
本发明涉及针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金检测试纸条，属于生物医学领域。
背景技术
COPD是一种具有气流受限特征的可以预防和治疗的疾病，气流受限不完全可逆、呈进行性发展，与肺部对香烟烟雾等有害气体或有害颗粒的异常炎症反应有关。COPD主要累及肺脏，但也可引起全身(或称肺外)的不良效应。
肺功能检查对确定气流受限有重要意义。在吸入支气管舒张剂后，第一秒用力呼气容积(FEV1)／用力肺活量(FVC)<70％表明存在气流受限，并且不能完全逆转。慢性咳嗽、咳痰常先于气流受限许多年存在；但不是所有有咳嗽、咳痰症状的患者均会发展为COPD。部分患者可仅有不可逆气流受限改变而无慢性咳嗽、咳痰症状。
胶体金技术是上世纪80年代继三大标记技术（荧光素、放射性同位素和酶）后发展起来的固相标记免疫测定技术。最初该方法仅用于免疫电镜技术，但随着生物技术的不断发展，现在已经出现免疫斑点渗滤以及免疫层析技术等。胶体金免疫层析技术已经广泛应用于临床诊断，如早孕、乙肝、寄生虫、性病和病毒细菌的检测。该方法最大的特点是价格低廉、简单快速、特异敏感、不需要任何仪器设备和试剂，几分钟就可用肉眼观察到颜色鲜明的实验结果。
针对COPD进行性发展的特点，早期诊断和治疗显得尤为重要。而目前的金标准-肺功能检查对仪器精度。场地的要求较高，耗时较长，不适合社区或工厂等环境的大规模快速筛查。
发明内容
本发明针对现有技术中存在的不足，提供了一种针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金检测试纸条，完善现有COPD早期筛查耗时过长的问题。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金检测试纸条，所述试纸条包括PVC底板以及依次搭接在PVC底板上的样品垫、金标垫、层析膜和吸样垫，所述样品垫包括从上到下依次进行设置的吸附层、过滤层和样本层；所述吸样垫包括吸水纸，吸水纸下表面设有多孔固体材料层。
作为本发明的一种改进，所述吸附层为多孔固体材料层。
作为本发明的一种改进，所述过滤层为定性滤纸。
作为本发明的一种改进，所述层析膜为硝酸纤维素膜。
作为本发明的一种改进，所述硝酸纤维素膜上设置有检测线T线以及质控线C线。
作为本发明的一种改进，所述质控线C线包被有羊抗鼠IgG，所述检测线T线包被有抗PRDX2抗体。
作为本发明的一种改进，所述金标垫包括玻璃纤维膜，玻璃纤维膜上喷洒金液。
作为本发明的一种改进，所述金液为标记抗PRDX2抗体和鼠IgG的胶体金颗粒。
由于采用了以上技术，本发明较现有技术相比，具有的有益效果如下：
(1)本发明公开了一种针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金检测试纸条，具有检测特异性强，灵敏度高的特点。本发明创造采用了广泛应用的、高效的抗原抗体结合反应进行检测，可准确检测血样中蛋白的水平，且采用了高品质的单克隆抗原和抗体进行结合和捕捉，使核酸检测试纸条灵敏度大大提高。
(2)本发明中的试纸条操作简单，且结果判读简单，无需特殊仪器，技术要求低，只需将被筛查人员的一滴血滴到检测试纸条上即可，且仅需几分钟反应即可直接肉眼观察结果，结果判读直观，无需借助特殊仪器，对实验人员技术要求低，可广泛应用于基层及偏远农村医疗机构。
(3)本发明中的试纸条检测结果快速，耗时短，且价格便宜，检测成本低。通过该试纸条进行检测，只需5min左右即可进行结果判读，且费用远比现有的ELISA和蛋白定量等检测方法的费用低。
(4)本发明中试纸条的样品垫中包含有吸附层，该吸附层选用可吸附和灭活病毒的多孔固体材料制作，在不影响COPDPRDX2抗原检测效果的同时，使吸附层具有针对吸附和灭活其他潜在病原体的特异性；而试纸条的吸样垫中也加入一层经过处理的多孔固体材料，可以在检测结束后对血样进一步吸附和灭活，进一步降低检测完成后检测卡上可能存在的病原体给检测人员带来的危险性。
附图说明
图1是一种针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金检测试纸条的结构示意图；
图2是检测卡用于针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金检测的试验结果；
图中：1、PVC底板，2、样品垫，3、金标垫，4、层析膜，5、吸样垫，6、检测线T线，7、质控线C线。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式，进一步阐明本发明。
实施例1
一种针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金检测试纸条，所述试纸条包括PVC底板1以及依次搭接在PVC底板1上的样品垫2、金标垫3、层析膜4和吸样垫5，所述样品垫2包括从上到下依次进行设置的吸附层、过滤层和样本层；所述吸附层为多孔固体材料层。
所述吸样垫5包括吸水纸，吸水纸下表面设有多孔固体材料层。所述过滤层为定性滤纸。
所述层析膜4为硝酸纤维素膜；所述硝酸纤维素膜上设置有检测线T线6以及质控线C线7。
实施例2
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如《分子克隆：实验室指南》第4版中所述的条件进行。
本实施例在于提供实施例1所述的试纸条4的制备方法，步骤如下：
一种针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金检测试纸条的制备方法，
一、抗PRDX2抗体及鼠IgG标记胶体金颗粒
利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金：将200ml去离子水加入到经泡酸和硅化处理过的圆底烧瓶中，并用电热套将其加热煮沸，200r/min搅拌；迅速加入2ml 1％氯金酸溶液至沸腾；加入6ml柠檬酸三钠溶液，溶液逐渐变为酒红色，至颜色不变后，再加热10min，后停止加热，搅拌15min；恢复至室温后，恢复体积至200ml，4℃冰箱保存。
将配置好的胶体金溶液用碳酸钾溶液调节pH为9.0，分至两管中，分别加入抗PRDX2抗体（购于abcam公司，加入量为10ug/ml）及鼠IgG（购于abcam公司，加入量为5ug/ml），震荡30min；加入封闭液（5％BSA）至终浓度为1％，震荡20min；1000r/min离心10min，弃上清，沉淀用原体积1/10的0.01mol/L Tris-HCl溶液（含1％BSA和1％蔗糖）重悬，即为免疫胶体金；将制备好免疫胶体金滴加到金标垫3（玻璃纤维膜）上，室温下自然干燥，密封。
二、慢性阻塞性肺炎抗PRDX2抗体胶体金检测试纸的制备
在制备胶体金检测试纸时需要的主要原材料：玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、样本垫、PVC底板1等。
1、金标垫3的制备：将已滴加免疫胶体金的玻璃纤维膜切割成0.5×1cm见方小模块，封闭保存备用。
2、喷膜：抗PRDX2抗体用于检测线（T线）显示，兔抗鼠IgG抗体用于质控线（C线）显示。将硝酸纤维素膜放在Biodot ZX 1000喷点仪平台上，将两抗体分别放于样品池中，开启机器，让抗PRDX2抗体及兔抗鼠IgG抗体分别点射于膜上形成两条线，剂量为3μl/cm，喷膜完毕后，将膜条放于37℃洁净恒温箱内干燥5-6小时，存于干燥环境中备用；
3、试纸条组装
将硝酸纤维素膜贴于PVC底板1中间，然后将吸样垫9及金标垫3分别以稍稍重叠的方式贴于硝酸纤维素膜两侧，再将样品垫2稍稍压住金标垫3并贴于底板上；用Biodot CM4000切条机切成4mm的试纸条，并将试纸条装在胶体金塑料卡板上，4℃保存。
三、使用针对慢性阻塞性肺炎的抗PRDX2抗体胶体金检测试纸检测COPD患者血清中PRDX2的含量
分别取100ulCOPD患者及健康体检者新鲜血清标本分别缓慢滴加至样品垫2上，将试纸平放5-7min，若待检样品为阳性，则试纸条会出现两条红色条带；若待检样品为阴性，则仅在Ｃ线处出现一条红色条带；若无条带产生或仅在Ｔ线处出现共色条带，说明本试纸条已经失效。用拍照采集颜色变化图像，检测血中PRDX2的含量。
上述实施例仅为本发明的优选技术方案，而不应视为对于本发明的限制，本发明的保护范围应以权利要求记载的技术方案，包括权利要求记载的技术方案中技术特征的等同替换方案为保护范围，即在此范围内的等同替换改进，也在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金检测试纸条，其特征在于：所述试纸条包括PVC底板以及依次搭接在PVC底板上的样品垫、金标垫、层析膜和吸样垫，所述样品垫包括从上到下依次进行设置的吸附层、过滤层和样本层；所述吸样垫包括吸水纸，吸水纸下表面设有多孔固体材料层。
2.根据权利要求1所述的一种针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金检测试纸条，其特征在于：所述吸附层为多孔固体材料层。
3.根据权利要求1所述的一种针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金检测试纸条，其特征在于：所述过滤层为定性滤纸。
4.根据权利要求1所述的一种针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金检测试纸条，其特征在于：所述层析膜为硝酸纤维素膜。
5.根据权利要求4所述的一种针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金检测试纸条，其特征在于：所述硝酸纤维素膜上设置有检测线T线以及质控线C线。
6.根据权利要求5述的一种针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金检测试纸条，其特征在于：所述质控线C线包被有羊抗鼠IgG，所述检测线T线包被有抗PRDX2抗体。
7.根据权利要求1所述的一种针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金检测试纸条，其特征在于：所述金标垫包括玻璃纤维膜，玻璃纤维膜上喷洒金液。
8.根据权利要求7述的一种针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的PRDX2抗体胶体金检测试纸条，其特征在于：所述金液为标记抗PRDX2抗体和鼠IgG的胶体金颗粒。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112379008A (zh) * 2020-09-30 2021-02-19 中国药科大学 一种检测红细胞中Prx2蛋白的Asp46外消旋化程度的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009294096A (ja) * 2008-06-05 2009-12-17 St Marianna Univ School Of Medicine 高安動脈炎の診断方法およびそれに用いられる診断キット
CN103038645A (zh) * 2010-04-13 2013-04-10 普罗诺塔股份有限公司 用于妊娠的高血压疾病的生物标志物
CN103065065A (zh) * 2012-11-18 2013-04-24 浙江大学 一种活动性肺结核蛋白表达差异质谱模型及构建方法
WO2018168779A1 (ja) * 2017-03-14 2018-09-20 国立大学法人大阪大学 慢性閉塞性肺疾患バイオマーカー
CN109406781A (zh) * 2018-12-27 2019-03-01 正元盛邦(天津)生物科技有限公司 一种可降低传染风险的hiv（1+2）抗体检测卡及其适配试纸条

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009294096A (ja) * 2008-06-05 2009-12-17 St Marianna Univ School Of Medicine 高安動脈炎の診断方法およびそれに用いられる診断キット
CN103038645A (zh) * 2010-04-13 2013-04-10 普罗诺塔股份有限公司 用于妊娠的高血压疾病的生物标志物
CN103065065A (zh) * 2012-11-18 2013-04-24 浙江大学 一种活动性肺结核蛋白表达差异质谱模型及构建方法
WO2018168779A1 (ja) * 2017-03-14 2018-09-20 国立大学法人大阪大学 慢性閉塞性肺疾患バイオマーカー
CN109406781A (zh) * 2018-12-27 2019-03-01 正元盛邦(天津)生物科技有限公司 一种可降低传染风险的hiv（1+2）抗体检测卡及其适配试纸条

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
M.D. PASTOR，ET AL: "Identification of proteomic signatures associated with lung cancer and COPD", 《JOURNAL OF PROTEOMICS》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112379008A (zh) * 2020-09-30 2021-02-19 中国药科大学 一种检测红细胞中Prx2蛋白的Asp46外消旋化程度的方法
CN112379008B (zh) * 2020-09-30 2022-12-23 中国药科大学 一种检测红细胞中Prx2蛋白的Asp46外消旋化程度的方法

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