CN112379008B - 一种检测红细胞中Prx2蛋白的Asp46外消旋化程度的方法 - Google Patents

一种检测红细胞中Prx2蛋白的Asp46外消旋化程度的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112379008B
CN112379008B CN202011057886.5A CN202011057886A CN112379008B CN 112379008 B CN112379008 B CN 112379008B CN 202011057886 A CN202011057886 A CN 202011057886A CN 112379008 B CN112379008 B CN 112379008B
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
reagent
prx2
copd
asp
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202011057886.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112379008A (zh
Inventor
李博
狄斌
王佳凤
王丽敏
高准
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute Of Innovative Medicine China Pharmaceutical University Hangzhou
China Pharmaceutical University
Original Assignee
Institute Of Innovative Medicine China Pharmaceutical University Hangzhou
China Pharmaceutical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute Of Innovative Medicine China Pharmaceutical University Hangzhou, China Pharmaceutical University filed Critical Institute Of Innovative Medicine China Pharmaceutical University Hangzhou
Priority to CN202011057886.5A priority Critical patent/CN112379008B/zh
Publication of CN112379008A publication Critical patent/CN112379008A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112379008B publication Critical patent/CN112379008B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Library & Information Science (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Prx2中Asp46作为检测靶点用于COPD早期诊断及其试剂盒和应用。COPD早期诊断试剂包括下列试剂：细胞裂解试剂、阴离子交换层析柱填料、还原试剂、烷基化试剂、重组糜蛋白酶试剂、起始缓冲液、洗脱液、酶解缓冲液及YPLDF五肽标准品溶液。本发明的慢性阻塞性肺病(COPD)早期检测的试剂盒可用于来筛查COPD早期患者，通过检测红细胞中Prx2中D/L‑Asp46比例变化的情况，预警COPD疾病的发生,并为COPD疾病的确诊提供一定依据。该发明的慢性阻塞性肺病(COPD)早期检测的试剂盒，使用简便，易于推广，可应用于临床诊断。

Description

一种检测红细胞中Prx2蛋白的Asp46外消旋化程度的方法
技术领域
本发明属于诊断试剂领域，涉及一种检测红细胞中Prx2蛋白的Asp46外消旋化程度的方法。
背景技术
生物体组成蛋白质中的D-型氨基酸是L-型氨基酸通过外消旋化所产生的，这种外消旋化是一种蛋白质翻译后修饰类型(PTM)，以天冬氨酸(Asp)的外消旋化最为常见。蛋白质中天冬氨酸外消旋化与特定疾病的发生存在关联，已有报道发现衰老、白内障、阿尔兹海默症、慢性阻塞性肺病(COPD)等疾病都伴随着氨基酸外消旋化修饰程度的异常，D-Asp在这些病变组织中较正常蛋白显著增加，呈现出年龄依赖性外消旋化情况。
Prx2是过氧化物还原酶(Prxs)超级家族中的一员，Prx2有多种重要的生理功能，不仅具有强大的清除过氧化物的能力，而且在调节细胞内H2O2浓度、信号转导和对感应并调节氧化压力等方面也起着重要作用。Prx2活性中心肽段与过氧化物接触频繁，更易发生外消旋化，而Asp发生外消旋化的过程中会形成中间体，受到分子内部的协同作用力的影响，其外消旋化速率最快，因此研究Prx2活性中心中Asp外消旋化显得格外重要。
为了研究人体血液Prx2活性中心肽段处的天冬氨酸外消旋化情况，需从红细胞中提取纯化Prx2蛋白，通过合适的酶进行酶切，在LC-MS/MS系统中分离和检测酶切后的活性中心肽段。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一个COPD早期检测的新靶点的应用。
本发明的另一个目的是提供一种慢性阻塞性肺病(COPD)早期辅助诊断试剂盒。
红细胞中Prx2蛋白活性中心内Asp46作为检测靶点在制备慢性阻塞性肺病早期诊断试剂中的应用。
检测红细胞中Prx2蛋白的Asp46外消旋化程度的试剂在制备慢性阻塞性肺病早期诊断试剂中的应用。
我们通过计算机模拟分子对接来比较Prx2中Asp46外消旋化修饰对蛋白质空间结构及活性的影响。Asp46位于Prx2活性中心肽段PLD46FTFVC，以发生Asp46外消旋化的活性肽段为配体与受体蛋白分子进行对接，同时在受体蛋白不做改变的情况下，将配体替换为未经外消旋化修饰的活性肽段，由计算机模拟分子对接结果可见在Asp46发生外消旋化后，对Prx2活性中心的空间结构有显著的影响，与受体之间形成的口袋并不能与原来完全吻合，与原受体之间形成空间位阻，其结合自由能绝对值较低，可能导致Prx2与受体结合能力与亲和力下降，甚至使其丧失生物活性。
通过检测红细胞中Prx2蛋白活性中心内Asp46外消旋化程度进行慢性阻塞性肺病早期诊断；所述的Asp46外消旋化程度以D/L-Asp46比例表征,并以D/L-Asp46比例10‰作为阈值。高于 10‰为阳性，判定为COPD；低于10‰为阴性，判定为非COPD。
一种慢性阻塞性肺病早期辅助诊断试剂盒，包含：红细胞细胞裂解试剂、阴离子交换层析柱填料、还原试剂、烷基化试剂、重组糜蛋白酶试剂、起始缓冲液、洗脱液、酶解缓冲液和 YPLLDF和YPLDDF五肽标准品溶液。
所述的细胞裂解试剂优选红细胞裂解液。
所述的阴离子交换层析柱填料优选DEAE-Selfinose FF琼脂糖离子交换填料，包含20％乙醇。
所述的还原试剂优选7-8mg/mL二硫苏糖醇溶液,进一步优选7.71mg/mL二硫苏糖醇溶液。
所述的烷基化试剂优选27-28mg/mL碘代乙酰胺溶液,进一步优选27.74mg/mL碘代乙酰胺 (IAM)溶液。
所述的重组糜蛋白酶试剂优选0.1-5μg/μL测序级重组糜蛋白酶溶液,进一步优选1μg/ μL重组糜蛋白酶溶液(测序级)；该溶液包含重组糜蛋白酶100微克，100μL 50mM乙酸，1.5mL的50mM碳酸氢铵溶液。
所述的起始缓冲液优选含1-1.5mM EDTA的18-25mM pH7.0的Tris-HCl溶液；所述的起始缓冲液进一步优选20mM pH7.0的Tris-HCl溶液(含1mM EDTA)。即1L溶液包含2.4228克Tris-base，0.3722克EDTA·2Na。
所述的洗脱液优选添加250-300mM NaCl的起始缓冲液。所述的洗脱液进一步优选添加 300mM NaCl的起始缓冲液。即1L溶液包含17.53克氯化钠，1L起始缓冲液。
所述的酶解缓冲液优选40-50mM pH7.2的碳酸氢铵缓冲盐溶液；所述的酶解缓冲液进一步优选50mM pH7.2的碳酸氢铵缓冲盐溶液，即1L溶液包含3.953克NH4HCO3。
所述的YPLLDF和YPLDDF五肽标准品优选0.2-0.5mg/mL的YPLLDF和YPLDDF溶液。所述的 YPLLDF和YPLDDF五肽标准品进一步优选0.2mg/mL的YPLLDF和YPLDDF溶液。该溶液可由2毫克YPLLDF或2毫克YPLDDF，加入0.5％甲酸溶液溶解并加水稀释至10mL制得。
一种检测红细胞中Prx2蛋白的Asp46外消旋化程度的方法，利用本发明所述的试剂盒，提取红细胞中Prx2蛋白，重组糜蛋白酶酶解后，LC-MS/MS法测定酶解产物中YPLDD和YPLLDF的比例，作为红细胞中Prx2蛋白的Asp46外消旋化程度的表征。
利用本发明试剂盒对人体红细胞内Prx2活性中心内Asp46外消旋化的方法，优选包括以下步骤：
第一步：红细胞中Prx2蛋白的提取纯化
第二步：Prx2的还原烷基化
第三步：Chymotrypsin酶解反应；
第四步：五肽标准品线性溶液配制
第五步：LC-MS/MS检测酶解后肽段及五肽标准品线性溶液
第六步：计算Prx2中D/L-Asp46外消旋化比例。
作为进一步优选，Prx2中Asp46外消旋化的检测方法是：
第一步：红细胞中Prx2蛋白的提取纯化
(1)红细胞清洗
取红细胞置于EP管中，离心弃去上层血浆。下层加入2倍体积的生理盐水，轻摇混匀，2000 rpm离心6min(4℃)，弃去上清，重复5次。加入生理盐水，制备成红细胞悬液。
(2)红细胞裂解
取红细胞悬液，加入10倍体积的红细胞裂解液，1000g离心5min，摇晃均匀，重复2次，11000rpm离心5min，收集上清。取上清置于Amicon Ultra-15 30K超滤离心管，5000 g离心5min(4℃)；往浓缩裂解液中加入10倍体积起始缓冲液，置于Amicon Ultra-15 30K 超滤离心管，5000g离心5min(4℃)。
(3)Prx2蛋白提取纯化
将浓缩裂解液缓慢加到阴离子交换层析柱中，再以缓慢加入起始缓冲液，用考马斯亮蓝 G-250试剂检测流出液中，待溶液颜色不变蓝时，可缓慢加入洗脱液，收集考马斯亮蓝G-250 试剂检测为蓝色期间的洗脱液；使用Amicon Ultra-15 30K超滤离心管超滤离心，并测定蛋白浓度。
第二步：Prx2还原烷基化
取Prx2溶液加入酶解缓冲液至终浓度为1mg/mL；取10μL的7.71mg/mL DTT溶液进行还原反应，60℃水浴反应20min；取10μL的27.74mg/mL IAM溶液，置于暗处进行烷基化反应15min。
第三步：重组糜蛋白酶酶解反应
在还原烷基化后溶液中，按照酶：蛋白＝1：50的比例加入1μg/μL的重组糜蛋白酶溶液，置于30℃水浴反应24h加入50％的甲酸至终止酶解反应，12000rpm离心10min，取上清(4℃)。
第四步：取0.2mg/mL五肽标准品溶液，以水为溶剂逐级稀释至100、70、50、20、10、5ng/mL。
第五步：使用LC-MS/MS测定酶解后肽段及五肽标准品线性溶液。
(1)色谱条件
流动相A：去离子水(含0.1％甲酸)
流动相B：乙腈(含0.1％甲酸)
流速：0.4mL/min
柱温：40℃
上样量：10μL
梯度洗脱程序如表1：
表1梯度洗脱程序表
Figure BDA0002711361810000041
(2)质谱条件
电喷雾正离子MRM扫描；定量通道：YPLDF[M+H]+m/z 654.3→m/z 491.2；定性通道： YPLDF[M+H]+m/z 654.3→m/z 507.2；
第六步：计算Prx2中D/L-Asp46外消旋化比例
分别以YPLLDF和YPLDDF的浓度C(ng/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标，用加权最小二乘法(W＝1/A2)进行回归计算，求得直线回归方程，即为标准曲线。将酶解后溶液中测得的YPLLDF 和YPLDDF峰面积分别代入标准曲线，计算出YPLLDF和YPLDDF的浓度，根据YPLDDF与YPLLDF 浓度的比值可得出Asp46外消旋化程度(即Prx2中D/L-Asp46外消旋化比例)。
根据Prx2中Asp46外消旋化程度可判定患者是否处于COPD早期阶段，可作为一种疾病生物标志物，相较于其他检测手段更加便捷高效。
本发明的技术效果为，本发明的慢性阻塞性肺病(COPD)早期检测的方法和试剂盒可对人体红细胞中Prx2蛋白中Asp46外消旋化程度进行测定从而对处于COPD早期阶段人群进行筛选诊断。
COPD患者肺组织中含有D-Asp含量异常的四种蛋白质,其中包括Prx2蛋白。COPD这一疾病的发生常常会引起对活性氧分子(Reactive oxygen species,ROS)的控制异常，过氧化物、自由基的损伤扮演着重要的作用，而Prx2也具有很强的清除ROS作用。因此COPD疾病导致细胞内过氧化物和自由基的累积，促使Prx2中氨基酸发生外消旋化，其中Asp46最易受到自由基和过氧化物的影响转变为D-型，进一步对Prx2蛋白结构及功能活性产生影响，本发明以Prx2 蛋白中Asp46外消旋化程度作为COPD早期临床诊断的指标，在COPD患者和其他患者中进行验证，结果证明Prx2中Asp46外消旋化修饰程度也可作为COPD早期临床诊断的指标。
附图说明
图1：YPLLDF标准曲线
图2：YPLDDF标准曲线
图3：酶解后肽段的LC-MS/MS图
具体实施方式
实施例1试剂盒的使用方法
第一步：红细胞中Prx2蛋白的提取纯化
(1)红细胞清洗
取2mL红细胞置于EP管中，离心弃去上层血浆。下层加入2倍体积的生理盐水，轻摇混匀，2000rpm离心6min(4℃)，弃去上清，重复5次。加入等体积生理盐水，制备成红细胞悬液。
(2)红细胞裂解
取500μL红细胞悬液，加入10倍体积的红细胞裂解液，1000g离心5min，摇晃均匀，重复2次，11000rpm离心5min，收集上清。取上清置于Amicon Ultra-15 30K超滤离心管，5000g离心5min(4℃)；往浓缩裂解液中加入10倍体积起始缓冲液，置于Amicon Ultra-1530K超滤离心管，5000g离心5min(4℃)。
(3)Prx2蛋白提取纯化
将浓缩裂解液缓慢加到阴离子交换层析柱中，再以缓慢加入起始缓冲液，用考马斯亮蓝 G-250试剂检测流出液中，待溶液颜色不变蓝时，可缓慢加入洗脱液，收集考马斯亮蓝G-250 试剂检测为蓝色期间的洗脱液；使用Amicon Ultra-15 30K超滤离心管超滤离心，并用BCA 试剂测定蛋白浓度。
第二步：Prx2还原烷基化
取Prx2溶液加入酶解缓冲液至终浓度为1mg/mL；取1mL Prx2溶液加入10μL的7.71mg/mL DTT溶液进行还原反应，60℃水浴反应20min；取10μL的27.74mg/mL IAM溶液，置于暗处进行烷基化反应15min。
第三步：重组糜蛋白酶酶解反应
在还原烷基化后溶液中，按照酶：蛋白＝1：50的比例加入1μg/μL的重组糜蛋白酶溶液，置于30℃水浴反应24h加入50％的甲酸至终止酶解反应，12000rpm离心10min，取上清(4℃)。
第四步：取0.2mg/mL五肽标准品溶液，以水为溶剂逐级稀释至100、70、50、20、10、5ng/mL。
第五步：使用LC-MS/MS测定酶解后肽段及五肽标准品线性溶液。
(2)色谱条件
流动相A：去离子水(含0.1％甲酸)
流动相B：乙腈(含0.1％甲酸)
流速：0.4mL/min
柱温：40℃
上样量：10μL
梯度洗脱程序如表1。
(2)质谱条件
电喷雾正离子MRM扫描；定量通道：YPLDF[M+H]+m/z 654.3→m/z 491.2；定性通道： YPLDF[M+H]+m/z 654.3→m/z 507.2；
第六步：计算Prx2中D/L-Asp46外消旋化比例
分别以YPLLDF和YPLDDF的浓度C(ng/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标，用加权最小二乘法(W＝1/A2)进行回归计算，求得直线回归方程，即为标准曲线。将酶解后溶液中测得的YPLLDF 和YPLDDF峰面积分别代入标准曲线，计算出YPLLDF和YPLDDF的浓度，根据YPLDDF与YPLLDF 浓度的比值可得出Asp46外消旋化程度。
使用的重组糜蛋白酶(测序级)购自上海雅心生物技术有限公司，产品编号SRCT10，五肽标准品的YPLLDF和YPLDDF购自南京肽业生物科技有限公司，DEAE-SelfinoseFF琼脂糖离子交换填料购自上海生工生物工程股份有限公司，红细胞裂解液均购自上海碧云天生物技术有限公司。
实施例2五肽标准品线性浓度测定
用不同的五肽标准品浓度100、70、50、20、10、5ng/mL等平行三次进行LC-MS/MS测定后，记录不同浓度标准品的峰面积，见表2，表3，表4。
表2 YPLLDF的标准曲线测定结果
Figure BDA0002711361810000071
表3 YPLDDF的标准曲线测定结果
Figure BDA0002711361810000081
表4 YPLLDF和YPLDDF的标准曲线回归方程
Figure BDA0002711361810000082
实施例3慢性阻塞性肺病(COPD)早期检测试剂盒使用试验
慢性阻塞性肺病(COPD)患者具有慢性咳嗽、咳痰、进行性加重的呼吸困难等症状。COPD 的判定依据为：经肺功能检查，使用支气管扩张剂后，以FEV1/FVC为指标判断是否存在不可逆的气流受阻，如<70％则判定为COPD。
使用本发明COPD早期检测试剂盒对COPD患者及其他患者进行Asp46外消旋化检测，以Asp46 AAR比例10‰作为阈值判定，高于10‰为阳性，判定为COPD；低于10‰为阴性，判定为非COPD。检测结果见表5，表6。
表5 COPD患者检测结果
Figure BDA0002711361810000083
Figure BDA0002711361810000091
表6其他患者检测结果
Figure BDA0002711361810000092

Claims (6)

1.检测红细胞中Prx2蛋白的Asp46外消旋化程度的试剂用于制备COPD早期诊断试剂盒中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于所述的试剂盒包含检测红细胞中Prx2蛋白的Asp46外消旋化程度的试剂,具体包含：红细胞细胞裂解试剂、阴离子交换层析柱填料、还原试剂、烷基化试剂、重组糜蛋白酶试剂、起始缓冲液、洗脱液、酶解缓冲液和YPLLDF和YPLDDF五肽标准品溶液。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的阴离子交换层析柱填料为DEAE-Selfinose FF琼脂糖离子交换填料。
4.根据权利要求2所述的应用，特征在于所述的还原试剂为7-8mg/mL二硫苏糖醇溶液；所述的烷基化试剂为27-28 mg/mL碘代乙酰胺溶液;所述的重组糜蛋白酶试剂为0.1-5μg/μL测序级重组糜蛋白酶溶液；所述的起始缓冲液为含1-1.5mM EDTA 的18-25 mM pH7.0 的Tris-HCl溶液；所述的洗脱液为添加250-300 mM NaCl的起始缓冲液。
5.根据权利要求2所述的应用，特征在于所述的酶解缓冲液为40-50 mM pH7.2的碳酸氢铵缓冲盐溶液；所述的YPLLDF和YPLDDF五肽标准品为0.2-0.5 mg/mL的YPLLDF和YPLDDF溶液。
6.检测红细胞中Prx2蛋白的Asp46外消旋化程度的试剂在制备慢性阻塞性肺病早期诊断试剂中的应用。
CN202011057886.5A 2020-09-30 2020-09-30 一种检测红细胞中Prx2蛋白的Asp46外消旋化程度的方法 Active CN112379008B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011057886.5A CN112379008B (zh) 2020-09-30 2020-09-30 一种检测红细胞中Prx2蛋白的Asp46外消旋化程度的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011057886.5A CN112379008B (zh) 2020-09-30 2020-09-30 一种检测红细胞中Prx2蛋白的Asp46外消旋化程度的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112379008A CN112379008A (zh) 2021-02-19
CN112379008B true CN112379008B (zh) 2022-12-23

Family

ID=74580879

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011057886.5A Active CN112379008B (zh) 2020-09-30 2020-09-30 一种检测红细胞中Prx2蛋白的Asp46外消旋化程度的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112379008B (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110108886A (zh) * 2019-04-22 2019-08-09 东南大学 针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的prdx2抗体胶体金检测试纸条

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2990217B1 (fr) * 2012-05-03 2016-02-05 Biomerieux Sa Procede d'obtention de peptides
CA2836750A1 (en) * 2013-12-17 2015-06-17 Agada Biosciences, LLC Method and agents to quantify proteins from tissues
CN106146607A (zh) * 2015-04-09 2016-11-23 深圳华大基因研究院 一种多肽提取纯化方法和试剂盒
WO2016185385A1 (en) * 2015-05-18 2016-11-24 The University Of British Columbia Methods and systems of detecting plasma protein biomarkers for diagnosing acute exacerbation of copd
CN106770812A (zh) * 2015-12-17 2017-05-31 中国医科大学 可实现牛ɑs1‑酪蛋白鉴定及绝对定量的试剂盒及测定方法
CN109839303B (zh) * 2017-11-29 2021-06-08 中国科学院大连化学物理研究所 一种交联肽段富集方法及其在蛋白质相互作用研究中的应用
CN111208243B (zh) * 2018-11-21 2022-05-17 中国科学院大连化学物理研究所 一种基于阴离子交换色谱柱的sumo化肽段的富集方法
CN111721939B (zh) * 2020-06-23 2023-09-19 谱度众合(武汉)生命科技有限公司 一种蛋白质凝胶样品的质谱检测前处理方法及处理试剂盒

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110108886A (zh) * 2019-04-22 2019-08-09 东南大学 针对现场快速筛查慢性阻塞性肺炎病人的prdx2抗体胶体金检测试纸条

Also Published As

Publication number Publication date
CN112379008A (zh) 2021-02-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101874501B1 (ko) 암 요법을 지시하는 srm 검정
CZ294729B6 (cs) Způsob in vitro zjišťování stavu organismu stanovením peptidů
EP3260866B1 (en) Novel biomarkers for cognitive impairment and methods for detecting cognitive impairment using such biomarkers
KR101219519B1 (ko) 렉틴을 이용한 암 진단 방법
KR101541206B1 (ko) 인간 폐조직 병변의 지표가 되는 인간 혈청 내 단백질의 동정
EP3521828A1 (en) Method for the diagnosis of hereditary angioedema
EP2437064B1 (de) Biomarker für Leberentzündung
EP2444814B9 (en) Biomarker for mental disorders including cognitive disorders, and method using said biomarker to detect mental disorders including cognitive disorders
JP2013534315A (ja) ｃ−Ｓｒｃ選択反応モニタリングアッセイ
CN112379008B (zh) 一种检测红细胞中Prx2蛋白的Asp46外消旋化程度的方法
JP2000513439A (ja) 遺伝的に引き起こされた病原性の局部変異体を直接診断的に検出する方法
CN102336828B (zh) 一种多发性骨髓瘤特异性蛋白及其专用检测试剂盒
Xu et al. Identification of Urinary Biomarkers for Exercise-Induced Immunosuppression by iTRAQ Proteomics
CN111141863A (zh) 一种抑郁症诊断标志物及其制备方法
JP4847668B2 (ja) 糖化アルブミンの検出方法
CN107817353B (zh) 预测肿瘤坏死因子抑制剂疗效的试剂和方法
CN114324693B (zh) 一种血液中转甲状腺素蛋白(ttr)四聚体浓度测定的预处理方法和检测方法
CN115032377B (zh) 一种粘多糖贮积症生物标记物及应用
CN112394177B (zh) ApoF蛋白在制备或筛选精神分裂症诊断产品中的用途
EP2839290A1 (de) Verfahren zur präsymptomatischen diagnostik von zöliakie und glutensensitivität
CN112986452B (zh) 测定人血浆中坦度螺酮浓度的方法
WO2022091793A1 (ja) 糞便由来タンパク質を用いた膵臓がんバイオマーカーの開発
CN115015550A (zh) 丝甘蛋白聚糖蛋白作为男性川崎病的特异性标志物的应用
CN114984195A (zh) 脂肪膜相关蛋白及其相关编码基因和片段的新用途
Alaiya et al. Protein profiles of indigenous and commercial extracts of amaranthus pollen for the diagnosis of allergy and asthma patients

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant