CN115015550A - 丝甘蛋白聚糖蛋白作为男性川崎病的特异性标志物的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了丝甘蛋白聚糖蛋白作为男性川崎病的特异性标志物的应用。本发明通过测定患儿和小鼠血清以及心脏冠状动脉组织发现，丝甘蛋白聚糖蛋白(SRGN)在男性川崎病患儿和雄性川崎病小鼠模型中显著高表达，而在女性川崎病患儿和雌性川崎病组小鼠中没有显著差异变化，表明可以将SRGN作为诊断川崎病男性患儿的特异性生物标志物，以此作为川崎病男性患儿的诊断依据，或以此制备川崎病相关试剂或试剂盒，用于辅助诊断川崎病。

Description

丝甘蛋白聚糖蛋白作为男性川崎病的特异性标志物的应用

技术领域

本发明涉及疾病诊断领域，特别涉及丝甘蛋白聚糖蛋白作为男性川崎病的特异性标志物的应用。

背景技术

川崎病(Kawasaki disease，KD)是一种病因和致病机制未明的、以全身血管炎为主要病变的急性发热出疹性疾病，KD多发于5岁以下婴幼儿，其中以冠状动脉损伤(CAL)最常见，其主要危害是导致冠状动脉扩张或形成冠状动脉瘤，晚期则可发生冠状动脉狭窄或血栓，甚至发生心肌梗死，目前是儿童后天获得性心脏病的首位病因。越来越多的研究表明，KD 是发生动脉粥样硬化及缺血性心脏病新的危险因素，CAL后遗症是青少年及成人心肌梗死和猝死发生的重要原因。各国的流行病学及临床资料显示KD发病具有明显的性别差异，在KD 患儿中，男性患儿的发病率明显高于女性患儿，男性患儿冠状动脉损伤发生率和冠状动脉瘤的发生率也明显高于女性患儿。

1967年，日本学者川崎富作首先报道了KD，随后世界各地均有报道，以亚洲地区的发病率为最高。日本2011～2012年报道，男女比例为1.33:1～1.49:1，KD发病高峰年龄为1岁以下，并且研究发现男女分布在小年龄组更加明显，男性更易形成冠脉损伤，男孩心脏病变普遍多于女孩^[1]。韩国报道显示，2007-2014年男女比例略高于日本，为1.37:1～1.52:1^[2]。部分地区流行病学调查显示，5岁以下患儿男女比例随年龄下降而增加，男孩冠脉损伤明显高于女孩，男性是KD致冠状动脉瘤的独立高危因素^[3-5]，而且95％的巨型动脉瘤患者是男孩^[6]。此外，KD男性患儿给予丙种球蛋白(IVIG)或类固醇治疗后复发率高于女性患儿^[7]。至今为止，仅有一篇文章报道了FCGR2A基因多态性与川崎病男性患儿有关联^[8]。

到目前为止，KD中男性患儿的发病率和冠脉异常明显高于女性患儿的研究国内外主要集中在对临床数据进行的流行病学的统计分析，关于其分子机制的研究未见报道。在KD中为什么男性患儿冠状动脉的病理损伤要比女性患儿严重的致病机制未见报道。因此探索男性 KD患儿冠脉损伤高于女性患儿的分子机制，寻找减少男性KD患儿冠脉损伤的潜在药靶用于针对性的预防和治疗，降低男性KD患儿的冠脉损伤率，成为目前KD临床上急需解决的难题。对KD防治具有重要理论意义，可为临床上男性KD患儿针对性的精准治疗提供线索。

公开号为201280070975.0的中国专利申请，公开了利用PDFGC基因的表达作为川崎病的诊断生物标志物；公开号为201711452354.X的中国专利申请，公开了CD247、TNFRSF1A、SMAD2、MMP9、BMP2、ACVR2B、CXCL14和CD14等8个基因和蛋白质可以作为川崎病冠状动脉病变风险诊断的检测试剂盒的生物标志物；公开号为201811602267.2和201610194943.1的中国专利申请，公开了miRNA分子可以作为川崎病诊断或者并发症风险诊断检测试剂盒的生物标志物。

丝甘蛋白聚糖(serglycin，SRGN)属于小分子蛋白聚糖家族，由较小的核心蛋白和各种多糖侧链如GAG链、硫酸软骨素、肝素等修饰组成^[9]。SRGN蛋白有3个主要功能域：一个信号肽区域，由外显子1编码；N端结构由外显子2编码；糖基化结构域由外显子3编码，是迄今为止唯一的细胞内蛋白多糖，主要参与肽水解酶、炎症趋化因子或其他的细胞因子的储存和释放。

SRGN己被证明可作为急性髓细胞性白血病(AML)的标志物，并且用于鉴别急性淋巴细胞白血病和费城染色体阴性慢性骨髓增殖性疾病^[10]。此外，SRGN可通过自身结构中的硫酸软骨素链抑制补体的经典途径和凝集素途径，从而保护肿瘤细胞免于补体系统的攻击^[11]。 SRGN也有助于骨髓瘤细胞粘附于骨髓细胞外基质中，在肿瘤的侵袭迁移中起重要作用^[12]。在造血来源的耐药肿瘤细胞内发现SRGN表达上调，表明SRGN可能与肿瘤细胞的化疗耐受相关^[13]。其中高水平的SRGN可独立作为原发性鼻咽癌无病生存和远处无转移生存期的一个预后指标，与患者的复发率和生存率相关。在细胞外基质内，SRGN可通过活化MMPs在炎症的发生，伤口的修复，细胞侵袭中发挥重要作用^[14]。这些研究都证明SRGN可能促进肿瘤的恶性程度，但潜在的相关机制仍需进一步探讨研究。但到目前为止，尚未有利用SRGN对川崎病冠状动脉瘤高发的男性患儿人群的诊断以及作为冠状动脉损伤程度评估和监控的生物标志物的相关报道。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供丝甘蛋白聚糖蛋白作为男性川崎病的特异性标志物的应用。

本发明的另一目的在于提供丝甘蛋白聚糖蛋白作为特异性标志物在制备男性川崎病的诊断工具中的应用。

本发明的再一目的在于提供丝甘蛋白聚糖蛋白作为特异性标志物在制备防治男性川崎病的药物中的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

丝甘蛋白聚糖蛋白作为男性川崎病的特异性标志物的应用。

所述的丝甘蛋白聚糖(serglycin，SRGN)是由核心蛋白、丝甘氨酸重复序列和各种糖胺聚糖(glycosaminogiycan，GAG)链组成，主要参与肽水解酶、炎症趋化因子或其他的细胞因子的储存和释放；SRGN的结构由核心肽链以及连接在N或O位上的多聚糖链组成，主要在胚胎干细胞、造血细胞以及内皮细胞中表达。

所述的丝甘蛋白聚糖蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；丝甘蛋白聚糖在男性川崎病患者中高表达。

所述的男性为男性儿童；优选为5岁以下的男性婴幼儿。

丝甘蛋白聚糖蛋白作为特异性标志物在制备男性川崎病的诊断工具(产品)中的应用。

所述的诊断工具包括诊断试剂或试剂盒，丝甘蛋白聚糖蛋白(SRGN)特异性抗体，抗体集合特异性指示试剂等。

所述的男性为男性儿童；优选为5岁以下的男性婴幼儿。

所述的应用为将来自受试者的生物样品对丝甘蛋白聚糖蛋白进行检测和/或分析。

所述的生物样品为血清或冠状动脉组织。

所述的冠状动脉组织为心脏冠状动脉组织。

所述的对丝甘蛋白聚糖蛋白进行检测可以通过质谱定量方法、Western-Blot定量方法、ELISA、免疫磁珠和免疫组化中的至少一种方法进行检测。

丝甘蛋白聚糖蛋白作为特异性标志物或药物靶点在制备防治男性川崎病的药物中的应用。

所述的男性为男性儿童；优选为5岁以下的男性婴幼儿。

所述的药物包括药物学上可以接受的载体；所述的载体为稀释剂、缓冲剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、包囊剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、喷雾剂、透皮吸收剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、着色剂、矫味剂或吸附载体等。

丝甘蛋白聚糖蛋白作为特异性标志物在筛选治疗男性川崎病的药物中的应用。

所述的男性为男性儿童；优选为5岁以下的男性婴幼儿。

所述的筛选为在体外环境下进行筛选。

用于检测血清或冠状动脉组织中丝甘蛋白聚糖蛋白表达水平，和/或用于测定血清或冠状动脉组织中丝甘蛋白聚糖蛋白含量的试剂在制备诊断男性川崎病的试剂或试剂盒中的应用。

所述的冠状动脉组织为心脏冠状动脉组织。

所述的男性为男性儿童；优选为5岁以下的男性婴幼儿。

丝甘蛋白聚糖蛋白抑制剂在制备防治男性川崎病的药物中的应用。

所述的男性为男性儿童；优选为5岁以下的男性婴幼儿。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

(1)本发明提供了一种特异性针对男性川崎病患儿的KD疾病相关诊断的SRGN蛋白标志物及其检测方法，该标志物未见报导，这也是首次提出具有性别特异性的川崎病疾病诊断的检测标志物方法，该标志物SRGN蛋白的主要包括质谱定量方法和Western-Blot定量方法、其他方法ELISA，免疫磁珠和免疫组化等方法，通过测定血清(如患儿血清和小鼠血清)及心脏冠状动脉组织等SRGN蛋白的表达水平用于辅助诊断川崎病。

(2)本发明涉及利用川崎病患者的临床标本、小鼠模型结合使用质谱分析技术，Western-Blot分析技术获得具有性别特异性差异的蛋白标志物：在川崎病男性与女性患儿的血清样本中通过蛋白组学及Western bloting分析，结果显示与女性川崎病患儿相比，SRGN在男性川崎病患儿中显著高表达；此外，在川崎病雄性小鼠中SRGN的表达也与临床样本一致，该标志物在川崎病男性患儿以及雄性川崎病小鼠模型中高表达，这些现象表明，我们可以将 SRGN作为诊断川崎病男性患儿的特异性生物标志物，以此作为川崎病男性患儿的诊断依据，或制备川崎病相关试剂或试剂盒(包括SRGN特异性抗体以及抗体集合特异性指示试剂)用于辅助诊断川崎病。

附图说明

图1是利用蛋白质质谱方法分析川崎病男性和女性患儿差异蛋白的表达情况图；其中， A为男性川崎病患儿与正常组蛋白质谱分析的显著差异蛋白质(一共有115种蛋白质)；B 为女性川崎病患儿与正常组蛋白质谱分析的显著差异蛋白质(一共有100种蛋白质)。

图2是图1中川崎病男性患儿和女性患儿差异蛋白质(DEPs)的韦恩图(37种蛋白质为男性川崎病患儿特异的差异蛋白质，其中SRGN表达差异最为显著)。

图3是川崎病临床患者与正常对照组(C)血清中SRGN蛋白的表达验证结果图(“*”与“ns”用于表示统计差异显著性，“***”p<0.001；“**”p<0.01；“*”p<0.05；“ns”p>＝0.05)；其中，A为男性正常对照组，男性川崎病患儿组血清中SRGN蛋白的表达量；B为女性正常对照组，女性川崎病患儿组血清中SRGN蛋白的表达量；C为A的定量结果分析；D为B的定量结果分析。

图4是川崎病小鼠和正常对照组血清中SRGN蛋白的表达验证结果图(“*”与“ns”用于表示统计差异显著性，“***”p<0.001；“**”p<0.01；“*”p<0.05；“ns”p>＝0.05)；其中，A为雄性正常对照组，雄性川崎病小鼠组血清中SRGN蛋白的表达量；B为雌性正常对照组，雌性川崎病小鼠组血清中SRGN蛋白的表达量；C为A的定量结果分析；D为B的定量结果分析。

图5是川崎病小鼠和正常对照组心脏冠状动脉组织中SRGN蛋白的表达验证结果图(“*”与“ns”用于表示统计差异显著性，“***”p<0.001；“**”p<0.01；“*”p<0.05；“ns”p>＝0.05)；其中，A为雄性正常对照组，雄性川崎病小鼠组冠状动脉组织中SRGN蛋白的表达量；B为雌性正常对照组，雌性川崎病小鼠组冠状动脉组织中SRGN蛋白的表达量；C为A的定量结果分析；D为B的定量结果分析。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。除非特别说明，本发明所用试剂和原材料均可通过市售获得。

本发明中的丝甘蛋白聚糖蛋白(serglycin，SRGN)(UniProt ID:P10124)的蛋白序列如下所示(SEQ ID NO.1)：

MMQKLLKCSRLVLALALILVLESSVQGYPTRRARYQWVRCNPDSNSANCLEEKGPMFE LLPGESNKIPRLRTDLFPKTRIQDLNRIFPLSEDYSGSGFGSGSGSGSGSGSGFLTEMEQDYQL VDESDAFHDNLRSLDRNLPSDSQDLGQHGLEEDFML。

实施例1具有性别特异性的蛋白生物标志物的鉴定

在男，女川崎病患儿血清中，鉴定具有性别特异性的蛋白生物标志物：

(1)临床样本收集及处理：分别随机挑选5名年龄和性别匹配(男性和女性人数相等，川崎病患儿和健康儿童的年龄均在5岁以下，且年龄段接近)的健康男性和女性儿童作为健康对照组，10名川崎病患儿(5名男性川崎病患儿，5名女性川崎病患儿)，所有的川崎病患儿是根据美国心脏协会2017年发表的川崎病诊断指南^[6]来诊断的。这些临床样本的血液通过以1,000×g离心10分钟分离血清样品，收集血清组分并储存在-80℃冰箱中。

(2)对这5名男性川崎病患儿、5名男性健康儿童、5名女性川崎病患儿及5名女性健康儿童的血清，使用ProteoPrep Blue Albumin&IgG Depletion Kit(Sigma,St.Louis,MO,USA)来除去白蛋白和免疫球蛋白G(IgG)；接着使用裂解缓冲液(Beyotime Institute ofBiotechnology， Haimen，China)提取血清中的蛋白质；然后使用Bradford蛋白质测定试剂盒(Bio-Rad Laboratories Inc.，Hercules，CA，USA)测定这些蛋白质的浓度。在每个样本中取上述步骤获得的等量总蛋白质，最后通过非标(Label-Free)蛋白质定量方法分析以上样本的蛋白表达量，具体步骤如下：

①每个样品取100μg总蛋白质，用终浓度为5mM Tris(2-carboxyethyl)-phosphine(TCEP, Sciex)还原剂在60℃下将蛋白质二硫键还原打开，并在室温下用甲基硫代磺酸盐半胱氨酸阻断剂碘乙酰胺(iodoacetamide；Sciex公司)烷基化30分钟。

②通过2％Promega Corporation(Madison，Wi，USA)在37℃以1:50(试剂盒的蛋白酶和样本总蛋白质按照质量比1:50的量混合)的比例将蛋白质消化过夜；每个样品的酶解肽段溶液用真空离心机中以6000×g的速度在25℃的温度下离心4小时。

③接着用H₂O缓冲液(NH₃·H₂O，pH＝10)将酶解肽段样品稀释至100μl，然后通过C-18 Stagetips吸附柱脱盐，然后在Qbitrap Fusion Lumos Mass质谱仪(ThermoScientific)偶连的 Proxeon EASY-nLC 1200U HPLC液相分离系统(Thermo Scientific)中进行肽段分离：流动相乙腈(ACN)，线性梯度为6～30％(含0.1％(v/v)甲酸)；分离洗脱速度为270nL/min，分离时间100～130min，洗脱最后20min时线性增加ACN浓度值至90％。

④质谱MS分析在Qbitrap Fusion Lumos Mass质谱仪(Thermo Scientific)上进行，具有以下参数：DDA扫描模式；源工作条件2.0kV；在400-1500m/z的高扫描范围内获得MS谱；分辨率为60,000FWHM，AGC设置为4E5(最大注入时间为50ms)；接着进行MS/MS扫描，分辨率设置为15,000FWHM，AGC设置为4E5(最大注入时间为30ms)；数据收集相关模式设置为最高速度；间隔窗口设置为1.6，动态排阻设置为90s；通过MaxQuant(ver.1.5.8.3) 针对人类蛋白质数据库对MS原始数据进行比对搜索分析，前体离子耐受性设置为20ppm,碎裂离子耐受性窗口设置为0.5m/z；肽段最多允许两个漏切位点，容许半胱氨酸残基的甲酰甲基化和甲硫氨酰的氧化修饰；同时把人类蛋白质组序列反库用于错误发现率(FDR)的计算，设定FDR<0.01。

(3)蛋白质谱数据分析结果：

通过质谱蛋白鉴定和定量技术，我们在健康对照组和男性川崎病患儿鉴定了115种差异蛋白质，以及在健康对照组与女性川崎病患儿之间鉴定了100种差异表达蛋白(定义为川崎病与正常对照组的蛋白质表达量倍数变化率Fold Change>1.50或Fold Change<0.67)，这些蛋白质的相对表达量变化水平显示在热图中(图1)。

在该结果中(图2和表1)，我们确定了丝甘蛋白聚糖(serglycin，SRGN)特异在男性川崎病患儿中高表达(Fold change＝7.844,q value<0.01)，而在女性川崎病患儿中没有显著差异变化。

表1男性川崎病患儿特异性差异蛋白质(DEPs)的质谱定量结果

实施例2川崎病患儿血清中SRGN蛋白表达量Western-Blot检测

为了进一步确认SRGN蛋白能够作为男性川崎病患儿特异性的诊断标志物，本实施例使用Western-Blot技术进行验证：

(1)分别随机挑选30名男性健康儿童以及30名女性健康儿童作为对照组，30名男性川崎病患儿以及30名女性川崎病患儿作为实验组(健康孩子和川崎病患儿年龄都在5岁以下)。按照实施例1方法，提取这些儿童血清中的蛋白质，并使用裂解缓冲液(BeyotimeInstitute of Biotechnology，Haimen，China)和Bradford蛋白质测定试剂盒(Bio-RadLaboratories，Inc) 测定蛋白浓度。

(2)每个样品取25μg蛋白质，然后经过10～15％SDS-PAGE电泳分离，将分离的蛋白质转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上，并用5％(w/v)脱脂奶粉在室温下封闭2小时。然后与一抗Anti-Serglycin抗体(abcam，目录号ab156991)按照稀释比例1：1000在4℃冰箱中孵育12小时；随后，在室温下将辣根过氧化物酶羊抗兔二抗(abcam，目录号ab6721)以1：2,000的比例稀释，室温孵育2小时，再用ECL方法显影，最后使用Image J软件(version 2.0) 定量分析蛋白条带强度，并通过GraphPad Prism(版本5.04)进行统计分析。

(3)临床川崎病患儿血清中SRGN蛋白Western-Blot分析结果如图3所示：在图3A和相应的定量分析结果(图3C)中可以看到男性川崎病患儿组的血清中SRGN蛋白表达量均比男性正常对照组高，而图3B和图3D显示，女性川崎病患儿组的血清中SRGN蛋白表达量与女性正常对照组相比没有显著差异(图中用“*”与“ns”表示不同组别差异比较的统计显著性，“***”p<0.001；“**”p<0.01；“*”p<0.05；“ns”p>＝0.05)。以上实施例显示了SRGN蛋白的高表达可以作为男性川崎病患儿诊断的特异性蛋白标志物。

实施例3川崎病小鼠样本中SRGN蛋白表达量的Western-Blot检测

(1)按照文献(Exp Ther Med.2017Jun；13(6):3438-3442.doi:10.3892/etm.2017.4434.)报道干酪乳杆菌细胞壁成分(Lactobacillus casei cell WallExtract，LCWE)诱导小鼠KD的方法建立本项目需要的雄性川崎病小鼠和雌性川崎病小鼠模型，具体实验步骤如下：

①把干酪乳杆菌(Cat.GDMCC 1.80，广东省微生物菌种保藏中心)培养于乳酸菌肉汤培养基(Cat.022010,广东环凯微生物科技有限公司)中，收集处于对数生长期的细菌。在干酪乳杆菌加入4％SDS裂解过夜，分别加入RNA酶、DNA酶和胰酶37℃孵育，收集细菌碎片，进行超声裂解，取上清液即为LCWE。

②利用酚/硫酸比色法，检测上清液中鼠李糖浓度来判断LCWE的含量。用PBS稀释LCWE至lmg/m1，过滤以后-80℃保存备用。

③向BALB/C小鼠(南方医科大学实验动物中心，4周大，16g)腹腔分别注射0.5mlLCWE 和PBS缓冲液，分别进行眼眶取血(于10天后眼眶取血)，分离血清样本和取小鼠心脏冠脉组织用HE染色和EVG染色检查其病理变化，取小鼠血清用TNF-a、IL-1B和IL-6检测其炎症情况，确定川崎病小鼠模型建立成功，获得雄性川崎病小鼠和雌性川崎病小鼠模型。

(2)参考上述实施例2的步骤，分别在30只雄性健康小鼠(对照)，30只雌性健康小鼠(对照)，30只雄性川崎病小鼠和30只雌性川崎小鼠的血清和心脏冠状动脉组织中检测SRGN蛋白的变化。

(3)结果如图4和图5(图中用“*”与“ns”表示不同组别差异比较的统计显著性，“***”p <0.001；“**”p<0.01；“*”p<0.05；“ns”p>＝0.05)所示：

在图4A和相应的定量分析结果图4C中，雄性川崎病组小鼠的血清中SRGN蛋白表达量较雄性正常对照组小鼠明显升高，而图4B和图4D显示，雌性川崎病组小鼠的血清中SRGN蛋白表达量与雌性正常对照组小鼠相比没有显著差异。

在图5A和相应的定量分析结果图5C中，雄性川崎病组小鼠的心脏冠状动脉组织中SRGN 蛋白表达量较雄性正常对照组小鼠高，而图5B和图5D显示，雌性川崎病组小鼠的心脏冠状动脉组织SRGN蛋白表达量与雌性正常对照组小鼠相比没有显著差异。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

参考文献：

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序列表

<110> 暨南大学

<120> 丝甘蛋白聚糖蛋白作为男性川崎病的特异性标志物的应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 158

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 丝甘蛋白聚糖蛋白

<400> 1

Met Met Gln Lys Leu Leu Lys Cys Ser Arg Leu Val Leu Ala Leu Ala

1 5 10 15

Leu Ile Leu Val Leu Glu Ser Ser Val Gln Gly Tyr Pro Thr Arg Arg

20 25 30

Ala Arg Tyr Gln Trp Val Arg Cys Asn Pro Asp Ser Asn Ser Ala Asn

35 40 45

Cys Leu Glu Glu Lys Gly Pro Met Phe Glu Leu Leu Pro Gly Glu Ser

50 55 60

Asn Lys Ile Pro Arg Leu Arg Thr Asp Leu Phe Pro Lys Thr Arg Ile

65 70 75 80

Gln Asp Leu Asn Arg Ile Phe Pro Leu Ser Glu Asp Tyr Ser Gly Ser

85 90 95

Gly Phe Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Phe

100 105 110

Leu Thr Glu Met Glu Gln Asp Tyr Gln Leu Val Asp Glu Ser Asp Ala

115 120 125

Phe His Asp Asn Leu Arg Ser Leu Asp Arg Asn Leu Pro Ser Asp Ser

130 135 140

Gln Asp Leu Gly Gln His Gly Leu Glu Glu Asp Phe Met Leu

145 150 155

Claims (10)

1.丝甘蛋白聚糖蛋白作为男性川崎病的特异性标志物的应用。

2.丝甘蛋白聚糖蛋白作为特异性标志物在制备男性川崎病的诊断工具中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：

所述的诊断工具包括诊断试剂或试剂盒、丝甘蛋白聚糖蛋白特异性抗体或抗体集合特异性指示试剂。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：

所述的应用为将来自受试者的生物样品对丝甘蛋白聚糖蛋白进行检测和/或分析；

所述的生物样品为血清或冠状动脉组织。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：

所述的对丝甘蛋白聚糖蛋白进行检测为通过质谱定量方法、Western-Blot定量方法、ELISA、免疫磁珠和免疫组化中的至少一种方法进行检测。

6.丝甘蛋白聚糖蛋白作为特异性标志物或药物靶点在制备防治男性川崎病的药物中的应用。

7.丝甘蛋白聚糖蛋白作为特异性标志物在筛选治疗男性川崎病的药物中的应用。

8.用于检测血清或冠状动脉组织中丝甘蛋白聚糖蛋白表达水平、和/或用于测定血清或冠状动脉组织中丝甘蛋白聚糖蛋白含量的试剂在制备诊断男性川崎病的试剂或试剂盒中的应用。

9.丝甘蛋白聚糖蛋白抑制剂在制备防治男性川崎病的药物中的应用。

10.根据权利要求1～9任一项所述的应用，其特征在于：

所述的男性为5岁以下的男性婴幼儿；

所述的丝甘蛋白聚糖蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

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