JP2020091243A - 膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法 - Google Patents
膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法 Download PDFInfo
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Abstract
Description
[項1]
被検体由来試料中における、キニノーゲンIの不正常な切断の有無をインビトロで検知する工程を含む、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法。
[項2]
前記キニノーゲンIの不正常な切断が、該キニノーゲンI中のペプチド結合に1以上の切れ目をもたらす切断および/または該キニノーゲンIの1以上の箇所に、1または2以上のアミノ酸残基の欠損をもたらす切断である、項1記載の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法。
[項3]
前記被検体由来試料中における、キニノーゲンIの不正常な切断の有無をインビトロで検知する工程が、以下の(1)〜(4)からなる群より選択される少なくとも1つを含む、項1または2記載の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法:
(1)該被検体由来試料中における該キニノーゲンIの正常な構造を有するタンパク質の量の減少を検知すること;
(2)該被検体由来試料中における該キニノーゲンIのC末端側にアミノ酸残基の欠損があるタンパク質の量または存在を検知すること;
(3)該被検体由来試料中における該キニノーゲンIのN末端側にアミノ酸残基の欠損があるタンパク質の量または存在を検知すること;および
(4)該被検体由来試料中における該キニノーゲンIについて、アミノ酸配列の任意の中間部位の切断又は欠損の量または存在を検知すること。
[項4]
項1記載の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法であって、
前記キニノーゲンIの不正常な切断の有無をインビトロで検知する工程が、以下の(a)〜(e)からなる群より選択される少なくともいずれか1種の量または存在を検知することを含む、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法:
(a)ESNEELTESCETをC末端アミノ酸配列とするタンパク質断片;(b)IYPTVNCQPLGをC末端アミノ酸配列とするタンパク質断片;(c)IYPTVNCQPLGMISLをC末端アミノ酸配列とするタンパク質断片
;
(d)IYPTVNCQPLGMISをC末端アミノ酸配列とするタンパク質断片;および
(e)IYPTVNCQPLをC末端アミノ酸配列とするタンパク質断片。
[項5]
前記不正常な切断をインビトロで検知する工程が、
被検体試料中に存在するキニノーゲンI由来の正常な構造を有するタンパク質の量の減少、および/またはキニノーゲンI由来の不正常なタンパク質断片の量または存在を検知することを含む、項1〜4のいずれか1項記載の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法。
[項6]
前記被検体由来試料が、尿、血液、又は、痰、汗、髄液、消化液、および腹水から選択される、項1〜5のいずれか1項記載の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法。
[項7]
質量分析測定法、免疫化学的測定法、およびクロマトグラフィー法からなる群より選択される少なくとも1種の方法を用いる工程を含む、項1〜6のいずれか1項記載の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法。
[項8]
上記膵臓がんは、膵管から発生するがんであり、前記乳がんは乳房内の乳管又は小葉から発生するがんであり、前記胃がんは、胃粘膜上皮から発生するがんであり、前記大腸がんは、盲腸、結腸、又は直腸に発生するがんであり、前記胆道がんは、胆管、胆のう、又は十二指腸乳頭部の胆道に発生するがんであり、前記肝臓がんは、肝細胞から発生するがんであり、前記胚細胞腫瘍は、精巣又は卵巣の性腺組織、縦隔、後腹膜、又は脳などの性腺外に発生するがんである、項1〜7のいずれか1項記載のがんの検出方法。
[項9]
項1記載の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法であって、前記キニノーゲンIにおける不正常な切断の有無が、該キニノーゲンIの断片化率によって決定され、該断片化率が、
キニノーゲンIタンパク質断片化率(Fn)=Cn/In
Cn:各キニノーゲンIタンパク質断片の量
In:キニノーゲンIタンパク質由来タンパク質全量
で得られる、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法。
[項10]
項1記載の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法であって、前記キニノーゲンIにおける不正常な切断の有無が、該キニノーゲンIの断片化指数によって決定され、該断片化指数が、
キニノーゲンIタンパク質断片化指数(Fx)=Ix/Kx
Ix:不正常な切断により生じる各キニノーゲンIタンパク質断片の量
Kx:正常な切断により生じるキニノーゲンI由来タンパク質断片の量
で得られる、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法。
[項11]
前記膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法が、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の診断補助の為の検出、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の診断の為の検出、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の進行の検出、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の再発の有無の予測の為の検出、及び膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の治療効果の有無の為の検出からなる群より選択されるいずれか1つ以上である、項1〜10のいずれか1項記載の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法。
[項12]
被検体由来試料中における、キニノーゲンI由来の不正常な切断に由来するタンパク質断片の発現レベルに基づくデータを正常な切断として検知されるタンパク質断片の発現レベルデータと比較する比較工程を含み、比較により被検体由来試料のキニノーゲンIのタンパク質の不正常な切断に由来するペプチドの正常な切断に由来するペプチドに対する比が、正常値より高いことを基準として、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍を検出する、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍検出プログラム。
[項13]
被検体由来試料中における、キニノーゲンI由来の1つ以上のタンパク質分解酵素消化ペプチドの発現レベルデータを、正常値と比較する比較工程を含み、該ペプチドの量が正常値と比較して低いことを基準として、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍を検出する、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍検出プログラム。
本発明の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法は、本発明者らによる新たな発見に基づく。すなわち、本発明者らは、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍患者の体内では、キニノーゲン(Kininogen)Iが、健常者では切断されないような箇所で切断され、様々なタイプの欠損タンパク質または切れ目が生じた当該タンパク質が増加している場合があることを見出した。
A Ala Alanine アラニン
C Cys Cysteine システイン
D Asp Aspartic acid アスパラギン酸
E Glu Glutamic acid グルタミン酸
F Phe Phenylalanine フェニルアラニン
G Gly Glycine グリシン
H His Histidine ヒスチジン
I Ile Isoleucine イソロイシン
K Lys Lysine リシン
L Leu Leucine ロイシン
M Met Methionine メチオニン
N Asn Asparagine アスパラギン
P Pro Proline プロリン
Q Gln Glutamine グルタミン
R Arg Arginine アルギニン
S Ser Serine セリン
T Thr Threonine トレオニン
V Val Valine バリン
W Trp Tryptophan トリプトファン
Y Tyr Tyrosine チロシン
(2)該被検体由来試料中における該キニノーゲンIのC末端側にアミノ酸残基の欠損があるタンパク質断片の量または存在を検知すること;
(3)該被検体由来試料中における該キニノーゲンIのN末端側にアミノ酸残基の欠損があるタンパク質断片の量または存在を検知すること;および
(4)該被検体由来試料中における該キニノーゲンIについて、アミノ酸配列の任意の中間部位の切れ目又は欠損を有するタンパク質の量または存在を検知すること。
(a)ESNEELTESCETをC末端アミノ酸配列とするタンパク質断片(本明細書においてP1ともいう);
(b)IYPTVNCQPLGをC末端アミノ酸配列とするタンパク質断片(本明細書において、P2ともいう);
(c)IYPTVNCQPLGMISLをC末端アミノ酸配列とするタンパク質断片;
(d)IYPTVNCQPLGMISをC末端アミノ酸配列とするタンパク質断片;および
(e)IYPTVNCQPLをC末端アミノ酸配列とするタンパク質断片。
[式1]タンパク質断片化率(Fn)=Cn/In
Cn:各キニノーゲンIタンパク質断片の量
In:キニノーゲンIタンパク質由来のタンパク質全量
Inにおける元のタンパク質の量とは、(a)〜(e)のいずれか1つのタンパク質断片、正常な構造を有する全長タンパク質を含む、試料中のキニノーゲンI由来タンパク質の全量を指す。ここで、CnまたはInにおける量は、いずれも、例えばトリプシン消化ペプチドの量の測定によって検知することができる。Inは、キニノーゲンIタンパク質断片にも正常な構造を有するキニノーゲンIにも共通に含まれるトリプシン消化ペプチドの量によって示すことができる。測定方法は、実施例5記載の条件に準ずる。
YFIDFVAR(配列表の配列番号1の317〜324位)
[式2]タンパク質断片化指数(Fx)=Ix/Kx
本発明ではまた、被検体由来試料中のキニノーゲンIタンパク質断片を測定することができる抗体を含む、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍検出用抗体組成物が提供され得る。キニノーゲンIタンパク質断片を測定する抗体は、キニノーゲンIタンパク質断片を認識できる抗体であれば限定はされないが、好ましくは、キニノーゲンIタンパク質断片のC末端側の切断を特異的に認識することができ、かつ全長タンパク質などのその他のタンパク質を認識しない抗体である。抗体は、キニノーゲンIタンパク質断片を特異的に認識することができる抗体であれば、ポリクロ−ナル抗体でもモノクローナル抗体でもよい。これらの抗体は固相に固定化していてもよい。
本発明はまた、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍検出プログラムに関する。膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍検出プログラムは、被検体由来試料中における、キニノーゲンI由来の不正常な切断に由来するタンパク質断片の発現レベルに基づくデータを正常な切断として検知されるキニノーゲンIの発現レベルデータと比較する比較工程を含み、比較により被検体由来試料のキニノーゲンIのタンパク質の不正常な切断に由来するペプチドの比が、正常値より高いことを基準として、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍を検出することができる。
[式2]タンパク質断片化指数(Fx)=Ix/Kx
が、正常値より高いことを基準として、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍を検出する、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍検出プログラム。
画像検査または腹部超音波検査にて悪性腫瘍を疑う患者のうち、手術、内視鏡による生検、リンパ節生検または細胞診により、悪性細胞または悪性腫瘍を検出した患者を選定した。選定した悪性腫瘍患者および健常者から早朝中間尿を、滅菌コップを用いて採取した。採取した尿試料は解析までの間‐80℃で保存した。
尿試料(〜50mL)を採取し、前処理、分析データの取得、統計解析の手順でキニノーゲン1由来のマーカー探索を行った。前処理は、尿試料をアミコンウルトラ‐15(10kDa分子量カット)、及びアミコンウルトラ‐4(10kDa分子量カット)(メルクミリポア社)を用いて200〜250倍に濃縮し、100mM NaClを含む炭酸水素トリエチルアンモニウム水溶液3mLを用いて3回洗浄して、低分子を除去後、濃縮検体を得た。この濃縮検体のタンパク質定量を行い、全ての検体について、全タンパク質量10mg/mLの濃度に緩衝液を用いて調整して、その後の分析行程に用いた。続いて、試料を還元アルキル化の後に、一定濃度のH2 18Oを用いて調製した緩衝液中でトリプシン消化した(ペプチドC末端の安定同位体標識法)。
膵臓がん39例と健常者42例の尿試料から得られた、MS/MSスペクトルの各C末端トリプシン消化ペプチドのピーク強度(実施例2)について、コントロール検体のピーク強度に対する相対比をそれぞれ算出し、膵臓がん症例と健常者の間で比較検討した。キニノーゲン1由来の尿中タンパク質断片のピーク検出率をFisher’s exact testで検定し、p値が0.05未満であるものを抽出した。統計解析はJMP13(SAS Institute Inc、Cary、NC)を使用した。その結果、膵臓がん診断マーカーして計2種(表1)を同定した。キニノーゲン1由来のC末端アミノ酸配列をESNEELTESCETとするタンパク質断片は、膵臓がん39例中21例と健常者42例中8例で検出され、上記の基準を満たした(p値<0.05)。健常者で検出されたピーク強度の1.5倍を基準とした場合、該当基準値における感度、特異度およびROC−AUC値は、58.3%、80.0%および0.722であった。
腹部画像検査にて切除可能膵臓がんと臨床診断した患者のうち、手術で得られた切除検体の病理検査により膵臓がんの確定診断を行った。膵臓がんの手術適応の決定については、MDCT検査を用いた。尿中におけるキニノーゲンI由来のC末端アミノ酸配列をESNEELTESCETとするタンパク質断片が実施例2で高値を示した膵臓がん症例において、MDCTで膵頭部に1.8cm大の腫瘤を認め(図1)、切除検体の病理検査で高分化型管状腺がんとの病理診断を得た。この症例におけるキニノーゲンI由来のC末端アミノ酸配列をESNEELTESCETとするタンパク質断片のスペクトル面積は健常者の平均値の70倍であり、切除して1ヵ月後には4.9倍まで低下した。
検体を調製し、MRM法に供することで、悪性腫瘍患者のスクリーニングを行った。尿試料(〜50mL)を採取し、前処理および分析データの取得と解析を実行した。具体的には、前処理により、尿試料をアミコンウルトラ‐15(10kDa分子量カット)、及びアミコンウルトラ‐4(10kDa分子量カット)(メルクミリポア社)を用いて200〜250倍に濃縮し、低分子を洗浄により除去後、濃縮検体を得た。この濃縮検体のタンパク質定量を行い、全ての検体について、全タンパク質量10mg/mLの濃度に緩衝液を用いて調整して、その後の分析工程に用いた。
[式1]タンパク質断片化率(Fn)=Cn/In
Cn:各タンパク質断片の量((a)〜(f)のタンパク断片配列にあるペ
プチドの量)
In:各タンパク質断片由来の元のタンパク質の量
ここで、Cnにおける各タンパク質のC末端断片の量とは、キニノーゲンI
タンパク質断片の量を指す。Inにおける元のタンパク質の量とは、タンパク
質断片あるいは全長タンパク質に共通に含まれるトリプシン消化ペプチドの
量を指す。(共通に含まれるトリプシン消化ペプチドとしては、YFIDF
VAR)。
膵臓がん118例(切除可能膵がん19例、切除不能膵がん99例)と健常者30名の尿検体をMRM法に供し、キニノーゲンI由来のC末端アミノ酸配列をESNEELTESCETとするタンパク質断片の断片化率を測定した。健常者群の平均値に対して、患者試料で断片化率が1.25倍以上高いものを陽性とした場合、健常者5例が陽性、膵臓がん39例が陽性であった。断片化率が健常者群の平均値に対して1.5倍を基準とした場合、健常者5例が陽性、膵臓がん37例が陽性であり、当該基準値における感度は32.2%、特異度は83.3%、ROC−AUC値は0.704であった。
別途、膵臓がん118例と健常者30名の尿検体をMRM法に供し、キニノーゲンI由来のC末端アミノ酸配列をIYPTVNCQPLGMISLとするとするタンパク質断片の断片化率を測定した。健常者群の平均値に対して、患者試料で断片化率が1.25倍以上高いものを陽性とした場合、健常者9例が陽性、膵臓がん43例が陽性であった。断片化率が健常者群の平均値に対して1.5倍を基準とした場合、健常者6例が陽性、膵臓がん29例が陽性であり、当該基準値における感度は26.6%、特異度は80.0%、ROC−AUC値は0.518であった。
別途、膵臓がん118例と健常者30名の尿検体をMRM法に供し、キニノーゲンI由来のC末端アミノ酸配列をIYPTVNCQPLGMISとするとするタンパク質断片の断片化率を測定した。健常者群の平均値に対して、患者試料で断片化率が1.25倍以上高いものを陽性とした場合、健常者3例が陽性、膵臓がん34例が陽性であった。断片化率が健常者群の平均値に対して1.5倍を基準とした場合、健常者3例が陽性、膵臓がん23例が陽性であり、当該基準値における感度は19.5%、特異度は90.0%、ROC−AUC値は0.625であった。
別途、膵臓がん118例と健常者30名の尿検体をMRM法に供し、キニノーゲンI由来のC末端アミノ酸配列をIYPTVNCQPLGとするとするタンパク質断片の断片化率を測定した。健常者群の平均値に対して、患者試料で断片化率が1.25倍以上高いものを陽性とした場合、健常者3例が陽性、膵臓がん78例が陽性であった。断片化率が健常者群の平均値に対して1.5倍を基準とした場合、健常者3例が陽性、膵臓がん78例が陽性であり、当該基準値における感度は68.6%、特異度は90.0%、ROC−AUC値は0.857であった。
別途、膵臓がん118例と健常者30名の尿検体をMRM法に供し、キニノーゲンI由来のC末端アミノ酸配列をIYPTVNCQPLするとするタンパク質断片の断片化率を測定した。健常者群の平均値に対して、患者試料で断片化率が1.25倍以上高いものを陽性とした場合、健常者5例が陽性、膵臓がん70例が陽性であった。断片化率が健常者群の平均値に対して1.5倍を基準とした場合、健常者4例が陽性、膵臓がん56例が陽性であり、当該基準値における感度は47.5%、特異度は87.6%、ROC−AUC値は0.760であった。
切除可能膵がんの尿を、根治的切除術前、切除1か月後、切除3か月後、切除6か月後の時点で回収し、MRM法に供して、キニノーゲンI由来のC末端アミノ酸配列をESNEELTESCETとするタンパク質断片の断片化率を比較した。根治的切除術前(19検体)、切除1か月後(16検体)、切除3か月後(13検体)および切除6か月後(11検体)のキニノーゲンI由来のC末端アミノ酸配列をESNEELTESCETとするタンパク質断片の断片化率は、0.096(術前)、0.027(切除1か月後)、0.027(切除3か月後)および0.013(切除6か月後)であった。それぞれ、回収時点での生存者全員について、確認した。切除術前と切除6か月後と比較して、キニノーゲンI由来のC末端アミノ酸配列をESNEELTESCETとするタンパク質断片の断片化率は、37.1%減少した(p=0.05、図2)。
キニノーゲンIタンパク質の切断を効率的に検知するため、アミノ酸配列IYPTVNCQPLGMISLMをC末端とする正常な切断により生じるキニノーゲンI由来タンパク質断片の存在量(Kx)と、不正常な切断により生じるキニノーゲンI由来のタンパク質断片の存在量(Ix)の2種を用いて、キニノーゲンIタンパク質の断片化指数(Fx)を以下の計算式により求めた。健常者の平均値に対して、患者試料で断片化指数が1.25倍以上高いものを陽性とした。
[式2]タンパク質断片化指数(Fx)=Ix/Kx
肺転移を有する大腸がん3例と健常者34名の尿検体をMRM法に供し、キニノーゲンI由来のC末端アミノ酸配列をIYPTVNCQPLGMISとするタンパク質断片の断片化指数(Fx)を測定した。健常者群の平均値(2.042)に対して、患者試料での断片化指数の平均値は8.783であった。断片化率が1.25倍以上高いものを陽性とした場合、健常者65例が陽性、大腸がん2例が陽性であり、その陽性率はそれぞれ、17.6%と66.6%であった。
肺転移を有する乳がん1例と健常者34名の尿検体をMRM法に供し、キニノーゲンI由来のC末端アミノ酸配列をIYPTVNCQPLGMISとするタンパク質断片の断片化指数(Fx)を測定した。健常者群の平均値(2.042)に対して、乳がん患者試料での断片化指数は30.35であり、断片化率が1.25倍以上高いものを陽性とした場合、陽性と判定できた。
縦郭内を原発とする胚細胞腫瘍1例と健常者34名の尿検体をMRM法に供し、キニノーゲンI由来のC末端アミノ酸配列をIYPTVNCQPLGMISとするタンパク質断片の断片化指数(Fx)を測定した。健常者群の平均値(2.042)に対して、胚細胞腫瘍患者試料での断片化指数は3.49であり、断片化率が1.25倍以上高いものを陽性とした場合、陽性と判定できた。
ヒト正常気道上皮由来細胞株BEAS-2B、ヒト肝細胞がん由来細胞株HepG2、ヒト胃がん由来細胞株MKN45、ヒト乳がん由来細胞株MCF7によるキニノーゲンIのタンパク質断片化を検知するため、無血清培養液にキニノーゲンIを添加し、20μg/mlの濃度とした。キニノーゲンIを添加後72時間で培養液を回収してMRM法に供し、キニノーゲンI由来のC末端アミノ酸配列をIYPTVNCQPLGMISとするタンパク質断片の断片化指数(Fx)を測定した。ヒト正常気道上皮由来細胞株BEAS-2Bの断片化指数(0.31)と比較して、ヒト肝臓がん由来細胞株HepG2、ヒト胃がん由来細胞株MKN45、ヒト乳がん由来細胞株MCF7の断片化指数は、2.45、0.54、13.1であり、ヒト正常気道上皮由来細胞株BEAS-2Bの断片化指数の1.25倍(0.39)より高値であった。
Claims (13)
- 被検体由来試料中における、キニノーゲンIの不正常な切断の有無をインビトロで検知する工程を含む、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法。
- 前記キニノーゲンIの不正常な切断が、該キニノーゲンI中のペプチド結合に1以上の切れ目をもたらす切断および/または該キニノーゲンIの1以上の箇所に、1または2以上のアミノ酸残基の欠損をもたらす切断である、請求項1記載の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法。
- 前記被検体由来試料中における、キニノーゲンIの不正常な切断の有無をインビトロで検知する工程が、以下の(1)〜(4)からなる群より選択される少なくとも1つを含む、請求項1または2記載の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法:
(1)該被検体由来試料中における該キニノーゲンIの正常な構造を有するタンパク質の量の減少を検知すること;
(2)該被検体由来試料中における該キニノーゲンIのC末端側にアミノ酸残基の欠損があるタンパク質の量または存在を検知すること;
(3)該被検体由来試料中における該キニノーゲンIのN末端側にアミノ酸残基の欠損があるタンパク質の量または存在を検知すること;および
(4)該被検体由来試料中における該キニノーゲンIについて、アミノ酸配列の任意の中間部位の切断又は欠損の量または存在を検知すること。 - 請求項1記載の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法であって、
前記キニノーゲンIの不正常な切断の有無をインビトロで検知する工程が、以下の(a)〜(e)からなる群より選択される少なくともいずれか1種の量または存在を検知することを含む、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法:
(a)ESNEELTESCETをC末端アミノ酸配列とするタンパク質断片;
(b)IYPTVNCQPLGをC末端アミノ酸配列とするタンパク質断片;
(c)IYPTVNCQPLGMISLをC末端アミノ酸配列とするタンパク質断片;
(d)IYPTVNCQPLGMISをC末端アミノ酸配列とするタンパク質断片;および
(e)IYPTVNCQPLをC末端アミノ酸配列とするタンパク質断片。 - 前記不正常な切断をインビトロで検知する工程が、
被検体試料中に存在するキニノーゲンI由来の正常な構造を有するタンパク質の量の減少、および/またはキニノーゲンI由来のタンパク質断片の量または存在を検知することを含む、請求項1〜4のいずれか1項記載の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法。 - 前記被検体由来試料が、尿、血液、又は、痰、汗、髄液、消化液、および腹水から選択される、請求項1〜5のいずれか1項記載の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法。
- 質量分析測定法、免疫化学的測定法、およびクロマトグラフィー法からなる群より選択される少なくとも1種の方法を用いる工程を含む、請求項1〜6のいずれか1項記載の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法。
- 前記膵臓がんは、膵管から発生するがんであり、前記乳がんは乳房内の乳管又は小葉から発生するがんであり、前記胃がんは、胃粘膜上皮から発生するがんであり、前記大腸がんは、盲腸、結腸、又は直腸に発生するがんであり、前記胆道がんは、胆管、胆のう、又は十二指腸乳頭部の胆道に発生するがんであり、前記肝臓がんは、肝細胞から発生するがんであり、前記胚細胞腫瘍は、精巣又は卵巣の性腺組織、縦隔、後腹膜、又は脳などの性腺外に発生するがんである、請求項1〜7のいずれか1項記載のがんの検出方法。
- 請求項1記載の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法であって、前記キニノーゲンIにおける不正常な切断の有無が、該キニノーゲンIの断片化率によって決定され、該断片化率が、
キニノーゲンIタンパク質断片化率(Fn)=Cn/In
Cn:各キニノーゲンIタンパク質断片の量
In:キニノーゲンIタンパク質由来タンパク質全量
で得られる、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法。 - 請求項1記載の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法であって、前記キニノーゲンIにおける不正常な切断の有無が、該キニノーゲンIの断片化指数によって決定され、該断片化指数が、
キニノーゲンIタンパク質断片化指数(Fx)=Ix/Kx
Ix:不正常な切断により生じる各キニノーゲンIタンパク質断片の量
Kx:正常な切断により生じるキニノーゲンI由来タンパク質断片の量
で得られる、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法。 - 前記膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法が、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の診断補助の為の検出、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の診断の為の検出、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の進行の検出、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の再発の有無の予測の為の検出、及び膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の治療効果の有無の為の検出からなる群より選択されるいずれか1つ以上である、請求項1〜10のいずれか1項記載の膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍の検出方法。
- 被検体由来試料中における、キニノーゲンI由来の不正常な切断に由来するタンパク質断片の発現レベルに基づくデータを正常な切断として検知されるキニノーゲンIの発現レベルデータと比較する比較工程を含み、比較により被検体由来試料のキニノーゲンIのタンパク質の不正常な切断に由来するペプチドの比が、正常値より高いことを基準として、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍を検出する、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍検出プログラム。
- 被検体由来試料中における、キニノーゲンI由来の1つ以上のタンパク質分解酵素消化ペプチドの発現レベルデータを、正常値と比較する比較工程を含み、
該ペプチドの量が正常値と比較して低いことを基準として、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍を検出する、膵臓がん、食道がん、乳がん、胃がん、大腸がん、胆道がん、肝臓がん又は胚細胞腫瘍検出プログラム。
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