CN110106221B

CN110106221B - 海参寡肽及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN110106221B
Application number: CN201910451369.7A
Authority: CN
Inventors: 秦德文
Original assignee: Shandong Shengzhou Marine Biotechnology Co ltd
Current assignee: Shandong Shengzhou Marine Biotechnology Co ltd
Priority date: 2019-05-28
Filing date: 2019-05-28
Publication date: 2022-10-14
Anticipated expiration: 2039-05-28
Also published as: CN110106221A

Abstract

本发明涉及海洋生物技术及功能食品领域，尤其涉及海参寡肽及其制备方法与应用。本发明提供了海参寡肽的制备方法，该方法采用中性蛋白酶及木瓜蛋白酶对海参体壁进行酶解。该方法提取效率高，所得寡肽分子量小易吸收。以其制备的保健品具有良好的抗氧化、抗衰老的作用。

Description

海参寡肽及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及海洋生物技术及功能食品领域，尤其涉及海参寡肽及其制备方法与应用。

背景技术

自古以来，海参就是营养食品和保健食品。明代收入本草，清代中药典籍则将其列为补益药物，称“海参性温补，足敌人参”，有“补元气，益五脏六腑，生经壮阳、延年益寿”之效、此外，在《中药大辞典》中刺参属中药补洋药，主治经血亏损、虚弱老却、小便频数、肠燥便艰、神经衰弱等。而现代科学研究证实，海参体内含有50余种有益于人体生理活动的营养成分，其中蛋白质含量极高。干海参体壁有机成分中粗蛋白含量大约在40.7％～63.3％。

海参肽是指从海参中提取的具有特殊生理功能的活性肽，可以是由2～12个氨基酸组成的小肽或者是分子量更大的多肽，其生物利用率高，比氨基酸更容易吸收，研究发现海参肽具有降血压、抗氧化、抗肿瘤及抗疲劳等多种功能。

海参肽包括海参多肽和海参寡肽，经实验研究发现：海参寡肽中130～2000Da的占72.6％，2000～5000Da的占26.8％；海参多肽130～2000Da的占28.1％，130～2000Da的占71.3％；海参寡肽超氧阴离子和羟自由基的能力显著高于海参多肽，前者具有更强的抗氧化能力。

但是，目前的研究热点多集中在海参多肽，对于海参寡肽的提取工艺及保健功能的研究还不够深入。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供海参寡肽及其制备方法与应用，本发明所述的制备方法的得率较高，其制得的组合物具有良好的抗衰老、抗氧化的保健功能。

本发明提供的海参寡肽的制备方法，包括：

将海参体壁粉碎后，50℃为～55℃以中性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解3～7h后，经超滤获得分子量低于1000Da的海参寡肽溶液；

所述中性蛋白酶与木瓜蛋白酶的质量比为(2～4)：1；

所述木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的质量之和与海参体壁的质量比为100:(0.1～2)。

本发明所述海参体壁是将刺参剖开，去除内脏及其中夹杂的泥沙后获得的。本发明所述制备方法中，所述的海参体壁为新鲜的体壁。所述粉碎是指低温粉碎的步骤，具体为，0～4℃将海参在搅拌机内搅拌30分钟，使其完全成为肉糜状。所述搅拌过程不加水。

本发明所述中性蛋白酶与木瓜蛋白酶的质量比3：1，酶的添加量为6500U/g。

本发明所述超滤的截留分子量为1000Da，所述超滤的压力为0.1MPA～0.3MPA。

一些实施例中，所述酶解的条件为50℃，酶解3h，pH值为7.0。

一些实施例中，所述酶解的条件为53℃，酶解5.5h，pH值为7.0。

一些实施例中，所述酶解的条件为55℃，酶解7h，pH值为7.0。

超滤过得海参寡肽溶液后，还包括冻干的步骤。

所述冻干包括主干燥和后期干燥，所述主干燥干燥至去除90％的水分。

本发明所述制备方法制得的海参寡肽。

实验表明，以本发明提供的方法制备海参寡肽，寡肽得率为29.8％～37.13％；分子量小于1000Da的寡肽占比为15.73％～22.9％。其中，当温度为53℃，PH为7.0，时间为5.5h时，寡肽提取率以及分子量小于1000Da的百分含量最高，与其他参数下提取获得的效果存在显著性差异，p<0.05。

本发明所述制备方法制得的海参寡肽在制备抗氧化和/或抗衰老的保健品中的应用。

本发明还提供了一种抗氧化和/或抗衰老的保健品，其包括本发明所述制备方法制得的海参寡肽。

具体的，本发明提供的抗氧化和/或抗衰老的保健品，其由如下质量份的组分组成：

一些实施例中，所述保健品由如下质量份的组分组成：

一些实施例中，所述保健品由如下质量分的组分组成：

一些实施例中，所述保健品由如下质量分的组分组成：

一些实施例中，所述保健品由如下质量分的组分组成：

一些实施例中，所述保健品由如下质量分的组分组成：

一些实施例中，所述保健品由如下质量分的组分组成：

实验表明，本发明所述的组合物能够延长果蝇的寿命，当海参寡肽粉、枸杞提取物、罗汉果提取物、生姜提取物的比例为10:1:1:2时，延长寿命的效果最为显著。并且，本发明所述的组合物能够有效的增强SOD和GSH-Px的活性，抑制血清和脑中脂质和蛋白质的过氧化，延缓机体的衰老。

本发明所述保健品的制备方法，包括：将本发明所述海参寡肽、枸杞子提取物、罗汉果提取物、生姜提取物混合，经研磨至粒度为100～160目，制得所述保健品。

本发明所述保健品的剂型为胶囊剂。

本发明还提供了抗衰老或抗氧化的方法，其为给予本发明所述的保健品。

本发明提供了海参寡肽的制备方法，该方法采用中性蛋白酶及木瓜蛋白酶对海参体壁进行酶解。该方法提取效率高，所得寡肽分子量小易吸收。以其制备的保健品具有良好的抗氧化、抗衰老的作用。

具体实施方式

本发明提供了海参寡肽及其制备方法与应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明采用的仪器皆为普通市售品，皆可于市场购得。

本发明中，所述枸杞子提取物为枸杞子经微波提取提取，获得的提取物，其主要成分为枸杞多糖；所述罗汉果提取物为罗汉果经乙醇提取，获得的提取物，其主要成分为罗汉果皂甙；所述生姜提取物为生姜经超临界流体提取，获得的提取物，其主要成分为姜黄素；本发明中，所述枸杞子提取物、生姜提取物、罗汉果提取物可为市场购得，可以为自制，本发明对此不做限定。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1～3海参寡肽的提取

1、将挑选合格的刺参，剖开，去除海参中的内脏及其中夹杂的泥沙，洗净，沥干备用。

2、在4℃低温下将活海参在不加水的情况下在搅拌机里面搅拌30分钟，使其完全成为肉糜状态。

3、低温粉碎好的海参液投入到反应釜中，加入中性蛋白酶和木瓜蛋白酶(质量比3:1)，每100g海参液加入1g的复合酶；或者，酶的添加量为6500U/g。

4、采用膜分离技术对海参酶解液进行分级分离，具体的，使用截留量分子量为1000Da的卷式超滤膜组件进行超滤，控制压力在0.1-0.3MPA，收集滤出液为分子量为1000Da以下的的海参寡肽溶液。

5、将海参寡肽溶液入圆形托盘上，厚度不超过1cm，打开程序冷冻干燥机，进入主干燥，根据干燥情况适当调整时间，去除90％的水分后，进入后期干燥，出去残余水分，粉碎，得到最后的粉末状海参寡肽样品。

6、测定多肽的提取率和及分子量的分布范围。

表1酶解条件及提取效果

组别	酶解温度/℃	酶解时间/h	酶解pH值	寡肽得率	小于1000Da(％)
						实施例1	50	3	7.0	29.8±1.4	15.73±1.31
实施例2	53	5.5	7.0	37.13±1.03	22.9±1.6
						实施例3	55	7	7.0	34.27±1.33	18.65±1.33

通过上述实验结果得出：当温度为53℃，PH为7.0，时间为5.5h时，寡肽提取率以及分子量小于1000Da的百分含量最高。该效果与实施例1和实施例3相比存在显著性差异，p<0.05。

实施例4～7组合物制备

采用实施例2制得的海参寡肽，根据表2配方制备组合物：

表2组合物配方(质量份)

将海参寡肽粉，枸杞子提取物，罗汉果提取物，生姜提取物按比例进行混合之后，将混合物研磨成粒度为100-160目的颗粒，得胶囊内容物。

功效验证

1.抗衰老效果

以果蝇为实验动物，配置基础培养基，培养基中:玉米粉(58g/L)，酵母粉(2.5g/L)，白糖(50g/L)，细菌琼脂(7.5g/L)，苯甲酸0.25ml/L，加水500ml。将配置好的基础培养基和实验培养基灭菌后倒入牛奶瓶中，用纱布包裹的棉花球作为瓶塞。将840只雄性果蝇随机分为7组，每组120只果蝇，分别在6个牛奶瓶中进行饲养，密度为每瓶20只果蝇。饲养时保持温度25℃，相对湿度65％左右，光照时间设置黑暗/光照各12h，每天记录活果蝇的数量，培养基2天更换一次。剩余的活果蝇转移到新鲜的培养基中，持续饲养至所有果蝇死亡。

实验分组为：

1、空白对照组：不给予任何保健品；

2、阳性对照组1：培养基中添加海参寡肽，至浓度为8g/L。

3、阳性对照组2：培养基中添加质量比为1:1:2的枸杞子提取物，罗汉果提取物，生姜提取物，至浓度为8g/L。

4、实验组1：培养基中添加实施例4的组合物，至浓度为8g/L。

5、实验组2：培养基中添加实施例5的组合物，至浓度为8g/L。

6、实验组3：培养基中添加实施例6的组合物，至浓度为8g/L。

7、实验组4：培养基中添加实施例7的组合物，至浓度为8g/L。

统计各组果蝇半数死亡时间、平均寿命、最大寿命，结果如表3：

表3果蝇寿命

实验结果，与基础培养基相比，样品1实验组没有显著的寿命延长作用，样品2、3、4、5实验组饲养的果蝇半数死亡时间分别比基础培养基高10.5％、25％、18％、16％；样品2、3、4、5实验组饲养的果蝇平均寿命分别比基础培养基高9％、18％、15％、12％，样品2、3、4、5显著延长果蝇的最大寿命为12％、23％、18％、16％，上述实验结果表明，胶囊内容物能够延长果蝇的寿命，当海参寡肽粉、枸杞、罗汉果、生姜比例为10:1:1:2时，延长寿命的效果最为显著，p<0.05。

2.抗氧化效果

选取84只3月龄雄性SPF级小鼠在温度20℃，相对湿度55％左右，光照/黑暗12:12h的环境中进行培养，建立D-半乳糖诱导小鼠衰老模型。将胶囊内容物溶解于0.85％生理盐水中，作为灌胃悬浮液备用。实验共分为7个实验组，每个实验组12只。

空白组每天口服灌胃0.85％的生理盐水；

模型组每天经皮下注射D-半乳糖(120mg/kg体重)，口服灌胃生理盐水；

阳性对照组，每日一次经皮下注射D-半乳糖(120mg/kg体重),口服灌胃质量比为1:1:2的枸杞子提取物，罗汉果提取物，生姜提取物；

实验组1，每日一次经皮下注射D-半乳糖(120mg/kg体重),口服灌胃实施例4的组合物；

实验组2，每日一次经皮下注射D-半乳糖(120mg/kg体重),口服灌胃实施例5的组合物；

实验组3，每日一次经皮下注射D-半乳糖(120mg/kg体重),口服灌胃实施例6的组合物；

实验组4，每日一次经皮下注射D-半乳糖(120mg/kg体重),口服灌胃实施例7的组合物；

实验结束后测定5组实验中小鼠血清及脑中MDA含量、抗氧化酶(SOD和GSH-Px)的活性。

表4抗氧化效果

实验结果显示：模型组小鼠血清中MDA含量显著高于空白组及阳性对照、实验组1、2、3、4；其中，阳性对照组、实验组1、2、3、4处理的小鼠与模型组相比，MDA水平分别下降8.4％，29.8％，53.5％，45.2％，35.6％；脑中MDA水平分别下降了9.5％，22.3％，33.2％，32.6％，27.2％。与空白组相比，D-半乳糖处理后，小鼠血清和脑中SOD和GSH-PX水平显著升高，说明小鼠机体的抗氧化能力受损。与模型组相比，阳性对照、实验组1、2、3、4小鼠血清和脑中SOD和GSH-PX活性有显著的上升，尤其是实验组2，血清和脑中SOD活性分别增加20.6％和50.8％；实验组2小鼠血清和脑中GSH-Px活性分别增加了24.8％和29.4％。结果表明：海参寡肽胶囊内容物能够有效的增强SOD和GSH-Px的活性，抑制血清和脑中脂质和蛋白质的过氧化，延缓机体的衰老。其中效果最优者为实验组2，与其他各组皆产生显著性差异，p<0.05。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种抗氧化和/或抗衰老的保健品，其由如下质量份的组分组成：

海参寡肽 6~12份；枸杞子提取物 1份；罗汉果提取物 1份；生姜提取物 2份；

其中，所述枸杞子提取物为枸杞子经微波提取，获得的提取物，其主要成分为枸杞多糖；所述罗汉果提取物为罗汉果经乙醇提取，获得的提取物，其主要成分为罗汉果皂甙；所述生姜提取物为生姜经超临界流体提取，获得的提取物，其主要成分为姜黄素；

所述海参寡肽按照以下方法制备：

将海参体壁粉碎后，53℃以中性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解5.5h后，经超滤获得分子量低于1000Da的海参寡肽溶液；

所述中性蛋白酶与木瓜蛋白酶的质量比为3：1，酶的添加量为6500U/g；

所述木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的质量之和与海参体壁的质量比为1:100；

所述超滤的压力为0.1 MPa ~0.3MPa 。

2.权利要求1所述保健品的制备方法，包括：

将海参寡肽、枸杞子提取物、罗汉果提取物、生姜提取物混合，经研磨至粒度为100~160目，制得所述保健品。