CN108938693A - 一种忧遁草发酵液提取物及其在制备ii型糖尿病药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及天然药物化学领域,公开了一种忧遁草发酵液提取物及其在制备Ⅱ型糖尿病药物中的应用。具体为忧遁草发酵液提取物是将忧遁草原料洗净、切碎、晾干,然后加水、红糖发酵所得忧遁草发酵液,发酵液经有机溶剂提取减压回收溶剂获得粗浸膏,真空干燥浸膏后得到忧遁草发酵液提取物。该提取物在α‑葡萄糖苷酶体外抑制活性实验中具有显著的抑制活性,可以用于制备Ⅱ型糖尿病药物。
Description
技术领域
本发明涉及天然药物化学领域,具体地涉及一种忧遁草发酵液提取物的制备方法及其在α-葡萄糖苷酶抑制剂药物中的应用。
背景技术
国际糖尿病联盟(IDF)2011年最新统计数据显示,全球有超过3.7亿糖尿病患者,预计到2030年,糖尿病患病人数将达5.5亿,其中Ⅱ型糖尿病在成年糖尿病患者中占90%~95%。因此,II型糖尿病被认为是21世纪全球各国公共卫生安全最严峻的挑战之一。在Ⅱ型糖尿病中,机体能够产生胰岛素,但因胰岛素分泌相对不足或作用缺陷(也称为胰岛素抵抗),导致血糖升高。而α-葡萄糖苷酶是治疗早期II型糖尿病的一种重要靶标,它是一类能够从含有α-葡萄糖苷键底物的非还原端催化水解α-葡萄糖基的酶的总称。研究证实,α-葡萄糖苷酶抑制剂可以防治餐后高血糖症和缓解高胰岛素血症。临床上,α-葡萄糖苷酶抑制剂被用于治疗II型糖尿病。随着我国经济发展、人口老龄化、日益城市化,糖尿病的发病率不断上升,开发新的有效的治疗药物,具有重大社会效应。
忧遁草,学名鳄嘴花(Clinacanthusnutans),别名千里追、柔刺草、汉帝草、沙巴蛇草,在海南被称为接骨草,是一种生长在靠近赤道的低海拔疏林中或灌丛内潮湿砂质土壤里的野生灌木状草本植物。忧遁草全株可入药,微苦,是一种营养价值很高、无毒的野菜,富含氨基酸、叶绿素,并含有羽扇醇、白桦脂醇、类黄酮等功能成分,具有清热解毒、散瘀消肿、消炎解酒、防癌抗癌等作用。目前,忧遁草产品主要为干制品与粉末,加工比较初级,因其具有较强的青草味,不容易被大众接受。植物发酵原液通常是指一些天然新鲜蔬菜、水果、药食同源中药等植物经一种或多种益生菌发酵,产生的含有丰富的酵素、维生素、矿物质、氨基酸、各种有机酸、多糖等营养成分的混合液并经过滤除去杂质后得到的液体。通过发酵,原材料的货架期、风味、质地都可以得到改善,还可以去除不良成分,使对人身体有益的成分得到加强,并新生出许多有益于身体的酵素。目前鲜见对忧遁草发酵液在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂药物中的应用研究报道。
发明内容
针对上述情况,本发明的目的在于提供一种忧遁草发酵液提取物及其在制备Ⅱ型糖尿病药物中的应用。
一种忧遁草发酵液提取物,由如下方法制成:将忧遁草原料洗净、切碎、晾干,然后加水、红糖进行发酵得到忧遁草发酵液;忧遁草发酵液再经有机溶剂提取减压回收溶剂获得粗浸膏,真空干燥浸膏后得到忧遁草发酵液提取物。
在上述的忧遁草发酵液提取物中,所述忧遁草原料、水、红糖重量比例为10:15-25:0.5-5。
在上述的忧遁草发酵液提取物中,所述发酵为将忧遁草原料、水、红糖经混合后密封发酵3个月所得发酵原液,发酵原液经过滤后进入储存罐密封发酵6个月以上所得忧遁草发酵液。
在上述的忧遁草发酵液提取物中,所述有机溶剂为正己烷、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇中的一种或多种。
上述的忧遁草发酵液提取物在制备Ⅱ型糖尿病药物中的应用。所述忧遁草发酵液提取物制成注射剂或口服制剂药物。
上述的忧遁草发酵液提取物在制备抑制α-葡萄糖苷酶活性药物中的应用。
本发明的优势在于
1.找到了一种忧遁草发酵液具有α-葡萄糖苷酶抑制活性作用的提取物,体外酶抑制活性试验表明,能有效抑制α-葡萄糖苷酶的活性。因此,在制备型糖尿病药物中具有重要意义。
2.找到一种忧遁草发酵液具有α-葡萄糖苷酶抑制活性作用提取物的制备方法,避免了纷繁复杂的分离单体化合物。该方法简单有效、成本低,在实际生产中易于控制。
具体实施方式
下面结合实施例,对本发明的具体实施方式进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法通常按照常规条件。
实施例1
将忧遁草原料洗净、切碎、晾干,取500克忧遁草原料加1000克水、50克红糖发酵3个月所得忧遁草发酵液原液,原液经过滤后进入储存罐密封发酵6个月所得忧遁草发酵液,发酵液用等体积的石油醚萃取3次,得到石油醚萃取液,将剩余发酵液用等体积正己烷萃取3次,得到正己烷萃取液,将剩余发酵液用等体积乙酸乙酯萃取3次,得到乙酸乙酯萃取液,将剩余发酵液用等体积正丁醇萃取3次,得到正丁醇萃取液,分别将石油醚萃取液、正己烷萃取液、乙酸乙酯萃取液以及正丁醇萃取液减压浓缩得浸膏,真空干燥后获得忧遁草发酵液石油醚提取物、正己烷提取物、乙酸乙酯提取物以及正丁醇提取物。
实施例2
将忧遁草原料洗净、切碎、晾干,取1000克忧遁草原料加2000克水、100克红糖发酵3个月所得忧遁草发酵液原液,原液经过滤后进入储存罐密封发酵7个月所得忧遁草发酵液,发酵液用等体积的石油醚萃取4次,得到石油醚萃取液,将剩余发酵液用等体积正己烷萃取4次得到正己烷萃取液,将剩余发酵液用等体积乙酸乙酯萃取4次,得到乙酸乙酯萃取液,将剩余发酵液用等体积正丁醇萃取4次,得到正丁醇萃取液,分别将石油醚萃取液、正己烷萃取液、乙酸乙酯萃取液以及正丁醇萃取液减压浓缩得浸膏,真空干燥后获得忧遁草发酵液石油醚提取物、正己烷提取物、乙酸乙酯提取物以及正丁醇提取物。
试验例
忧遁草发酵液α-葡萄糖苷酶抑制活性体外试验:
以对硝基苯-β-半乳糖苷(pNPG)为底物,在溶液pH=7.0且浓度为0.01M的磷酸缓冲液(PBS)中进行体外活性测试。pNPG被α-葡萄糖苷酶酶解为对硝基苯酚,利用酶标仪检测该化合物在波长405nm处的吸光度的变化值,最后计算得到α-葡萄糖苷酶的抑制活性。将实施例1制得的忧遁草发酵液石油醚提取物、正己烷提取物、乙酸乙酯提取物以及正丁醇提取物溶解于中DMSO,然后用PBS配制样品液,使得样品终浓度分别为200、100、50、25、12.5μg/mL,酶和底物用0.01M 磷酸缓冲液配成适宜浓度溶液,1mL初始反应体系内含0.1unit酶,20μL底物,20μL DMSO。取适量酶液,加入空白DMSO溶液或样品的DMSO溶液,混匀,37℃下,恒温 20分钟,加入底物,混匀,立即在405nm 波长处检测1min 内体系的吸光度的变化值。用如下公式来计算酶活性:抑制率(%) = [(B – S ) / B] × 100%,其中B为加空白DMSO时的吸光度变化值,S为样品的吸光度变化值。测定5个浓度的样品,绘制剂量—抑制率曲线,得出其IC50值。每个样品重复测定三次,结果用平均值±标准偏差表示。实验结果如表1所示。
表1 忧遁草发酵液α-葡萄糖苷酶抑制活性结果
测试样品 | 200μg/mL时抑制率(%) | IC50(μg/mL) |
石油醚提取物 | 80±1.0 | 30±1.2 |
正己烷提取物 | 82±1.1 | 28±1.0 |
乙酸乙酯提取物 | 89±1.0 | 20±1.5 |
正丁醇提取物 | 85±1.0 | 25±1.5 |
结果表明忧遁草发酵液提取物对α-葡萄糖苷酶具有抑制活性。
Claims (7)
1.一种忧遁草发酵液提取物,其特征在于由如下方法制成:将忧遁草原料洗净、切碎、晾干,然后加水、红糖进行发酵得到忧遁草发酵液;忧遁草发酵液再经有机溶剂提取减压回收溶剂获得粗浸膏,真空干燥浸膏后得到忧遁草发酵液提取物。
2.根据权利要求1所述的忧遁草发酵液提取物,其特征在于:所述忧遁草原料、水、红糖重量比例为10:15-25:0.5-5。
3.根据权利要求1所述的忧遁草发酵液提取物,其特征在于:所述发酵为将忧遁草原料、水、红糖经混合后密封发酵3个月所得发酵原液,发酵原液经过滤后进入储存罐密封发酵6个月以上所得忧遁草发酵液。
4.根据权利要求1所述的忧遁草发酵液提取物,其特征在于:所述有机溶剂为正己烷、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇中的一种或多种。
5.权利要求1所述的忧遁草发酵液提取物在制备Ⅱ型糖尿病药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:所述忧遁草发酵液提取物制成注射剂或口服制剂药物。
7.权利要求1所述的忧遁草发酵液提取物在制备抑制α-葡萄糖苷酶活性药物中的应用。
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