CN107648289A - 忧遁草提取物的制备及其在抗肿瘤方面的应用 - Google Patents

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Abstract

一种忧遁草提取物的制备方法，具体为将忧遁草植物部位烘干粉碎过筛，然后用乙醇提取，减压回乙醇剂获得乙醇提物粗浸膏，乙醇提物加水稀释，然后用有机溶剂萃取，将萃取液减压浓缩得浸膏，真空干燥浸膏得到粉末即为忧遁草提取物。该提取物通过体外细胞毒活性试验发现对人白血病、肝癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌细胞具有显著的抑制作用，具有较好的抗肿瘤活性，可以用于制备抗肿瘤药物。

Description

忧遁草提取物的制备及其在抗肿瘤方面的应用
技术领域
本发明属植物应用领域，涉及一种植物活性提取物及其应用，具体是一种忧遁草提取物制备及其在抗肿瘤方面的应用。
背景技术
恶性肿瘤已经成为危害人类生命健康的重要原因，成为仅次于心脑血管疾病的人类第二号杀手，目前还未有治疗肿瘤疾病的特效药物，传统的西药对于治疗肿瘤效果并不显著，因此从天然的药用植物中寻找具有抗肿瘤活性的药物，成为当代药物研究的主流趋势。天然产物由于结构的复杂性、多样性、新颖性以及功能的独特性，一直是药物和药物先导化合物的重要来源。据美国国家癌症研究所的Newman DJ博士统计，自上世纪40年代以来，已上市的155个小分子抗肿瘤药物中73%是非合成药，其中有47%是天然产物及其衍生物。在植物来源的抗肿瘤药物当中，为大家所熟知的有来源于红豆杉科红豆杉属植物的紫杉醇（Taxol）是从天然产物中发现的新的抗肿瘤机理的成功例证，其独特的作用机制是通过抑制微管蛋白解聚而使肿瘤细胞分裂终止于G2/M期，是目前公认的强活性广谱抗癌药物，已于1992年获得FDA批准上市。在此基础上，通过从同属植物中获得含量较高的与紫杉醇同核的无抗肿瘤活性的10-deactylbaccatin III，将其结构改造为水溶性更大、活性更强的多西他赛（docetaxel）。多西他赛的研发成功掀起了寻找具有相同作用机理的新的天然产物的研究热潮。
忧遁草为爵床科（Acanthaceae）鳄嘴花属植物鳄嘴花（Clinacanthus nutans），广布于华南热带至中南半岛、马来半岛、爪哇、加里曼丹，产我国云南、广西广东、海南等地，生于低海拔疏林中或灌丛内，全株入药，有调经、消肿、去瘀、止痛、接骨之效，可治跌打、贫血、黄疽、风湿等。由于马来西亚的一名癌症患者发现食用忧遁草对治疗恶性肿瘤具有很好的功效，近年来忧遁草风靡东南亚，引起世界各地医药研究者的关注。在泰国民间，忧遁草作为药用植物被用于昆虫或毒蛇咬伤。目前鲜见对忧遁草抗肿瘤作用机制的研究报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种方法简单的忧遁草提取物的制备及其抗肿瘤方面的应用。
本发明所述的忧遁草提取物是将忧遁草原料烘干粉碎过筛，然后用醇提取减压回收溶剂获得醇提物粗浸膏，醇提物加水稀释，然后用有机溶剂萃取，将萃取液减压浓缩得浸膏，真空干燥浸膏得到粉末即为忧遁草提取物。
所述忧遁草原料优选为忧遁草根、茎、叶。
所述有机溶剂依次为石油醚、乙酸乙酯和正丁醇中的一种或多种。
本发明所述的忧遁草提取物还具有在抗肿瘤方面的应用，具体是将忧遁草或忧遁草提取物制成注射剂或口服制剂药物，其中口服制剂药物包括胶囊制剂、片剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、口服剂、合剂、散剂等常用制剂。
所述的注射剂包括各种注射液和注射用无菌粉末。
所述的忧遁草提取物还具有在抗肿瘤方面的应用，具体为忧遁草提取物在肿瘤测试细胞中具备良好的活性。
所述的肿瘤测试细胞包括人白血病、肝癌、肺癌、乳腺癌和结肠癌细胞。
本发明的优势在于：
1、找到了一种忧遁草具有抗肿瘤作用的提取物，体外抗肿瘤试验表明，能够有效抑制五种人肿瘤细胞白血病、肝癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌的生长。因此，在制备抗肿瘤药物具有重要意义。
2、找到一种忧遁草具有抗肿瘤作用提取物的制备方法，避免了纷繁复杂的分离单体化合物。该方法简单有效、成本低在实际生产中易于控制。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明的具体实施方式进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法通常按照常规条件。
实施例一
将忧遁草茎烘干粉碎并过筛，粉末用95%乙醇室温下提取3次，每次6天，合并提取液，过滤，减压浓缩回收乙醇得乙醇粗浸膏，将乙醇粗浸膏加2L蒸馏水稀释，然后用等体积的石油醚萃取5次，得到石油醚萃取液，将剩余水溶液用等体积的乙酸乙酯萃取至有机相接近无色，得到乙酸乙酯萃取液，剩余水溶液再用水饱和的正丁醇萃取6次，得到正丁醇萃取液。
分别将石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液以及正丁醇萃取液减压浓缩得浸膏，真空干燥后获得粉末即为忧遁草茎石油醚提取物、乙酸乙酯提取物以及正丁醇提取物。
实施例二
将忧遁草叶烘干粉碎并过筛，粉末用85%乙醇室温下提取4次，每次7天，合并提取液，过滤，减压浓缩回收乙醇得乙醇粗浸膏，将乙醇粗浸膏加3L蒸馏水稀释，然后用等体积的石油醚萃取4次，得到石油醚萃取液，将剩余水溶液用等体积的乙酸乙酯萃取至有机相接近无色，得到乙酸乙酯萃取液，剩余水溶液再用水饱和的正丁醇萃取5次，得到正丁醇萃取液。
分别将石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液以及正丁醇萃取液减压浓缩得浸膏，真空干燥后获得粉末即为忧遁草叶石油醚提取物、乙酸乙酯提取物以及正丁醇提取物。
实施例三
将忧遁草根烘干粉碎并过筛，粉末用75%乙醇室温下提取4次，每次7天，合并提取液，过滤，减压浓缩回收乙醇得乙醇粗浸膏，将乙醇粗浸膏加3L蒸馏水稀释，然后用等体积的石油醚萃取4次，得到石油醚萃取液，将剩余水溶液用等体积的乙酸乙酯萃取至有机相接近无色，得到乙酸乙酯萃取液，剩余水溶液再用水饱和的正丁醇萃取5次，得到正丁醇萃取液。
分别将石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液以及正丁醇萃取液减压浓缩得浸膏，真空干燥后获得粉末即为忧遁草根石油醚提取物、乙酸乙酯提取物以及正丁醇提取物。
试验例
忧遁草提取物体外抗肿瘤活性试验：
将对数生长期的肿瘤细胞株（人白血病细胞HL-60、人肝癌细胞SMMC-7721、人肺癌细胞A-549、人乳腺癌细胞MCF-7、人结肠癌细胞SW480），用0.25%的胰蛋白酶消化，10% 新生小牛血清的RPMI-1640培养液调制成5×104个/mL的细胞悬液，接种于96孔板中，每孔接种200 μL。在37℃, 5%CO2饱和湿度条件下培养8-10 h，待其贴壁。
将实施例1制得的忧遁草茎石油醚提取物、乙酸乙酯提取物以及正丁醇提取物溶解于DMSO中，然后用PBS配制样品液，使得样品终浓度分别为1.25, 2.5, 5, 10, 和20 μg/mL。每个浓度平行3孔，继续培养44 h后，每孔加入50 μL MTT (1 mg/mL-1，PBS配制)，在37℃, 5% CO2条件下继续温育4 h，吸弃孔内培养上清液，每孔加入150 μL DMSO，在微型振荡器上摇匀15 min，结晶溶解后，在酶联免疫检测仪上选择570 nm，测定各孔吸光值，同时设置空白组(仅加入含细胞的培养液)和对照组(以培养液替代药物)，计算细胞增殖抑制率。抑制率(%)=(1-实验组3孔OD值平均值/对照组3孔OD值平均值)×100%。以浓度为横坐标，抑制率为纵坐标，作回归曲线，计算出样品IC50值。采用SPSS13.0统计软件包进行数据处理及统计分析，实验结果如表1所示。
结果表明忧遁草茎提取物对人白血病细胞HL-60、人肝癌细胞SMMC-7721、人肺癌细胞A-549、人乳腺癌细胞MCF-7、人结肠癌细胞SW480均具有显著的抑制活性，其中乙酸乙酯部位对人白血病细胞HL-60具有很好的抑制活性。
以实施例2-3得到的忧遁草叶提取物以及根提取物重复本试验例得到相同结果。

Claims (6)

1.一种忧遁草提取物，其特征在于：将忧遁草原料烘干粉碎过筛，然后用乙醇提取，减压回乙醇剂获得乙醇提物粗浸膏，乙醇提物加水稀释，然后用有机溶剂萃取，将萃取液减压浓缩得浸膏，真空干燥浸膏得到粉末即为忧遁草提取物。
2.根据权利要求1所述的忧遁草提取物的制备方法，其特征在于：所述忧遁草原料为忧遁草根、茎、叶。
3.根据权利要求1所述的忧遁草提取物在抗肿瘤方面的应用，其特征在于：所述有机溶剂依次为石油醚、乙酸乙酯和正丁醇中的一种或多种。
4.权利要求1所述的忧遁草提取物在抗肿瘤方面的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：将忧遁草或忧遁草提取物制成注射剂或口服制剂药物，其中口服制剂药物包括胶囊制剂、片剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、口服剂、合剂、散剂等常用制剂；注射剂包括各种注射液和注射用无菌粉末。
6.权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的肿瘤测试细胞包括人白血病、肝癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌。
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