CN110105202B - 一种高效、快速分离制备大黄酸衍生物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种高效、快速分离制备大黄酸衍生物的方法，将待分离混合物加入高速逆流色谱进行分离，分别得到大黄酸、1‑乙酰大黄酸、8‑乙酰大黄酸和双醋瑞因的流份，再经过减压浓缩、干燥得到大黄酸、1‑乙酰大黄酸、8‑乙酰大黄酸和双醋瑞因单体；所述的高速逆流色谱采用的溶剂体系为烃类溶剂‑酯类溶剂‑醇类溶剂‑水‑有机酸体系。该方法可以有效地分离大黄酸、1‑乙酰大黄酸、8‑乙酰大黄酸和双醋瑞因这几种难以分离的单体，具有高效提纯，大制备量，低使用成本，易工艺放大，高回收率等独特优势。

Description

一种高效、快速分离制备大黄酸衍生物的方法
技术领域
本发明属于分离制备领域，具体涉及高速逆流色谱法分离大黄酸、1-乙酰大黄酸、8-乙酰大黄酸和双醋瑞因混合物的方法。
背景技术
大黄酸为蓼科植物大黄、何首乌、虎杖等多种传统中药的主要成分之一，具有抗肿瘤、抗炎、抗纤维化、抗菌、免疫抑制、利尿、泻下等多种药理活性，加之其低毒、安全的特点，受到了广大研究者的关注。
大黄酸因水溶性差、生物利用度低等缺陷，极大程度上限制了它的临床应用。因此，药物化学家们通过母核取代、羟基取代、羧基修饰等方面的改造，提高药效、改善理化性质等，进一步深入对大黄酸及其衍生物的研究，以期从中开发出新的具有临床价值的药物。大黄酸乙酰化合成产物双醋瑞因是一种新型的白细胞介素-1抑制剂，1994年，双醋瑞因首先在法国开始用于临床。目前已在欧洲、亚洲和美洲的许多国家得到广泛的应用。
在合成双醋瑞的过程中，会产生大黄酸单乙酰化合成产物。大黄酸单乙酰化合成产物1-乙酰大黄酸和8-乙酰大黄酸结构相似，常规色谱法难于对其进行分离，致使无法对其进行进一步的活性研究，因此找出一种高效、快速制备大黄酸衍生物的方法具有十分重要的意义。其中，大黄酸(1)、1-乙酰大黄酸(2)、8-乙酰大黄酸(3)和双醋瑞因(4)结构式如下：
Figure BDA0002061228710000011
本发明所涉及得采用高速逆流色谱法分离大黄酸、1-乙酰大黄酸、8-乙酰大黄酸和双醋瑞因混合物的方法，迄今为止，以上研究成果尚未有专利或文献报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用高速逆流色谱制备大黄酸、1-乙酰大黄酸、8-乙酰大黄酸和双醋瑞因单体的方法，该方法操作简单，分离效率高。
一种高效、快速分离制备大黄酸衍生物的方法，将待分离混合物加入高速逆流色谱进行分离，分别得到大黄酸、1-乙酰大黄酸、8-乙酰大黄酸和双醋瑞因的流份，再经过减压浓缩、干燥得到大黄酸、1-乙酰大黄酸、8-乙酰大黄酸和双醋瑞因单体；
所述的高速逆流色谱采用的溶剂体系为烃类溶剂-酯类溶剂-醇类溶剂-水-有机酸体系。
作为优选，所述的烃类溶剂为石油醚、正己烷或者环己烷；
所述的酯类溶剂为乙酸乙酯、乙酸丙酯或者乙酸丁酯；
所述的醇类溶剂为甲醇或者乙醇；
所述的有机酸为冰乙酸、甲酸或者三氟乙酸。
作为进一步的优选，所述的溶剂体系为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水-冰乙酸；
所述的石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水-冰乙酸的体积比为3～5:0.5～2:2～5:0.5～2:0.005～0.5。采用该溶剂体系时，分离效率高，得到的各个单体具有更高的纯度。
作为优选，高速逆流色谱仪采用的连接方式为正接反转。
作为优选，所述的高速逆流色谱仪转速为700～1000r/min，流动相流速为2.0-3.0ml/min，柱温为20～30℃。
作为优选，所述的高速逆流色谱仪采用紫外检测器进行检测。
作为进一步的优选，本发明的分离方法包括以下具体步骤：
以体积比为3～5:0.5～2:2～5:0.5～2:0.005～0.5的石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水-冰乙酸溶剂系统，充分混合后静置分层，取上相作为固定相，下相为流动相，连接方式采用正接反转，设定高速逆流色谱仪，柱温：20～30℃，转速：700～1000r/min，流动相流速：2.0～3.0ml/min，检测波长：254nm，流动相流入后，直到色谱图基线保持稳定，取大黄酸、1-乙酰大黄酸、8-乙酰大黄酸和双醋瑞因混合物混合样品，用下相溶剂溶解后进样，根据色谱图收集流份，分别收集大黄酸、1-乙酰大黄酸、8-乙酰大黄酸和双醋瑞因色谱峰(见图1)，减压浓缩，干燥，制得大黄酸、1-乙酰大黄酸、8-乙酰大黄酸和双醋瑞单体。分别取分离后的大黄酸、1-乙酰大黄酸、8-乙酰大黄酸和双醋瑞单体，用高效液相色谱仪检测其纯度,高效液相色谱条件为：流动相乙腈-0.1％磷酸水(36：64)，色谱柱温：25℃，检测波长：254nm。
本发明中，所述的待分离混合物包含大黄酸、1-乙酰大黄酸、8-乙酰大黄酸和双醋瑞因，其比例无特殊要求。作为优选，所述的待分离混合物为合成双醋瑞过程中得到的粗产物。
同现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
本发明的高速逆流色谱技术不需使用固体填料，应用两相互不溶的溶剂系统在支撑管内高速行星运动的方式下进行分离纯化，因而没有不可逆吸附，具有高效提纯，大制备量，低使用成本，易工艺放大，高回收率等独特优势。
附图说明
图1为实施例1对大黄酸乙酰化产物(大黄酸、1-乙酰大黄酸、8-乙酰大黄酸和双醋瑞因混合物)的高速逆流分离色谱图；
图2为实施例2对(大黄酸、1-乙酰大黄酸、8-乙酰大黄酸和双醋瑞因混合物)混合物的高速逆流分离色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明，但本发明要求保护的范围并不局限于下实施案例。
实施例1
取石油醚600ml，乙酸乙酯450m1，甲醇600m1，水300m1，冰乙酸4m1置3000m1分液漏斗中，振荡摇匀，分层后静置15min，取上相作为固定相，下相为流动相。超声脱气20min，备用。称取混合样品粉末60.0mg，用20ml流动相溶解作为样品溶液。设定仪器柱温25℃，以20ml/min的流速将上相注入四氟乙烯管中，待管路中充满上相后，连接方式选择正接反转，将主机转速调至900r/min，以2.5ml/min的流速导入流动相，当流动相从主机口中流出后，再持续泵入10min让两相溶剂体系在管路中达到动态平衡，色谱图上基线保持平稳，然后从进样口注入20m1样品溶液，254nm波长下检测，根据色谱图收集各组分，回收溶剂，获得大黄酸、1-乙酰大黄酸、8-乙酰大黄酸和双醋瑞因单体。
取上述步骤得到的大黄酸、1-乙酰大黄酸、8-乙酰大黄酸和双醋瑞因单体样品5.0mg，溶解在10.0m1甲醇溶液里，利用高效液相色谱归一化法进行纯度检验。流动相为乙腈-0.1％磷酸水(36：64)，检测波长254nm。结果表明大黄酸纯度98.5％(11.3mg)，1-乙酰大黄酸纯度96.7％(13.6mg)，8-乙酰大黄酸纯度95.3％(16.4mg)，双醋瑞因纯度98.1％(17.8mg)。
实施例2
取石油醚600ml，乙酸乙酯450m1，甲醇600m1，水300m1，置3000m1分液漏斗中，振荡摇匀，分层后静置15min，取上相作为固定相，下相为流动相。超声脱气20min，备用。称取混合样品粉末60mg，用20ml流动相溶解作为样品溶液。设定仪器柱温25℃，以20ml/min的流速将上相注入四氟乙烯管中，待管路中充满上相后，连接方式选择正接反转，将主机转速调至900r/min，以2.5ml/min的流速导入流动相，当流动相从主机口中流出后，再持续泵入10min让两相溶剂体系在管路中达到动态平衡，色谱图上基线保持平稳，然后从进样口注入20m1样品溶液，254nm波长下检测，根据色谱图收集各组分，回收溶剂，获得大黄酸单体、1-乙酰大黄酸和8-乙酰大黄酸混合物和双醋瑞因单体。
取上述步骤得到的大黄酸、1-乙酰大黄酸、8-乙酰大黄酸和双醋瑞因单体样品5.0mg，溶解在10.0m1甲醇溶液里，利用高效液相色谱归一化法进行纯度检验。流动相为乙腈-0.1％磷酸水(36：64)，检测波长254nm。结果表明大黄酸纯度93.6％(11.6mg)，1-乙酰大黄酸纯度和8-乙酰大黄酸混合物(27.3mg；其中1-乙酰大黄酸纯度48.1％，8-乙酰大黄酸混合物49.1％)，双醋瑞因纯度94.2％(16.4mg)。
实施例1和2的结果表明，少量冰乙酸的存在，明显提高了分离效率。

Claims (2)

1.一种高效、快速分离制备大黄酸衍生物的方法，其特征在于，包括以下具体步骤：
(1)以体积比为3～5:0.5～2:2～5:0.5～2:0.005～0.5的石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水-冰乙酸溶剂系统，充分混合后静置分层，取上相作为固定相，下相为流动相，备用；
(2)设定高速逆流色谱仪，柱温：20～30℃，转速：700～1000r/min，流动相流速：2.0～3.0ml/min，检测波长：254nm，连接方式采用正接反转，通入流动相，直到色谱图基线保持稳定；
(3)将待分离的混合物混合样品用流动相溶解进样，根据色谱图分别收集大黄酸、1-乙酰大黄酸、8-乙酰大黄酸和双醋瑞因流份，减压浓缩，干燥，制得大黄酸、1-乙酰大黄酸、8-乙酰大黄酸和双醋瑞单体；
所述待分离的混合物为包含大黄酸、1-乙酰大黄酸、8-乙酰大黄酸和双醋瑞因的混合物。
2.根据权利要求1所述的高效、快速分离制备大黄酸衍生物的方法，其特征在于，所述的高速逆流色谱仪采用紫外检测器进行检测。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0928781A1 (en) * 1997-12-30 1999-07-14 Laboratoire Medidom S.A. Process for the preparation of rhein and its diacyl derivatives
CN1490298A (zh) * 2003-08-08 2004-04-21 北京天纯维通生物技术有限公司 芦荟大黄素及大黄酸的分离制备方法
WO2011099834A2 (es) * 2010-02-15 2011-08-18 Interquim, S.A. De C.V. Procedimiento para la purificación de diacereina cruda vía sal de potasio/dimetil formamida
CN103665065A (zh) * 2013-11-21 2014-03-26 中国科学院西北高原生物研究所 一种快速制备土大黄苷和丹叶大黄素的方法
CN104774150A (zh) * 2014-01-14 2015-07-15 北京万生药业有限责任公司 一种双醋瑞因晶体及其制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0928781A1 (en) * 1997-12-30 1999-07-14 Laboratoire Medidom S.A. Process for the preparation of rhein and its diacyl derivatives
CN1490298A (zh) * 2003-08-08 2004-04-21 北京天纯维通生物技术有限公司 芦荟大黄素及大黄酸的分离制备方法
WO2011099834A2 (es) * 2010-02-15 2011-08-18 Interquim, S.A. De C.V. Procedimiento para la purificación de diacereina cruda vía sal de potasio/dimetil formamida
CN103665065A (zh) * 2013-11-21 2014-03-26 中国科学院西北高原生物研究所 一种快速制备土大黄苷和丹叶大黄素的方法
CN104774150A (zh) * 2014-01-14 2015-07-15 北京万生药业有限责任公司 一种双醋瑞因晶体及其制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
应用高速逆流层析分离大黄羟基蒽醌甙元;蔡定国等;《中国医药工业杂志》;19991231;第21卷(第03期);第130-133页 *
高速逆流色谱对大黄蒽醌类成分的分离研究;袁萍等;《天然产物研究与开发》;20111231;第23卷(第04期);第739-733页 *

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