CN110075164A - 桂花种子提取物的制备方法、桂花种子提取物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种桂花种子提取物的制备方法、桂花种子提取物及其应用,该桂花种子提取物的制备方法中采用渗漉提取的方式提取桂花种子中的特女贞苷,得到桂花种子提取物。本发明桂花种子提取物的制备方法中,采用渗漉浸提的方式可以避免对桂花种子中有效成分特女贞苷的破坏,该提取物用于制备抗心痹药物或保健品时,能够显著抑制家兔血小板凝集作用、提高心肌细胞的代谢率、提高抗炎活性、抑制血栓的形成,对于防治心痹疾病和开发新药具有重要十分的意义;同时该制备方法具有工艺简单、操作方便、成本低廉、对仪器要求不高、易于大规模生产等优点,能够最大程度的开发利用桂花种子的二次利用价值,有着较高的使用价值和应用前景。

Description

桂花种子提取物的制备方法、桂花种子提取物及其应用
技术领域
本发明属于中药技术领域,涉及一种桂花种子提取物的制备方法、桂花种子提取物及其应用。
背景技术
心痹,通心闭二字,即闭阻不通之义。心痹在《内经》中指心脉闭阻,气血不通引起的以心痛为主要症状的疾病。心痹心痛与现代医学阐述的风湿性心脏病、冠心病心绞痛具有相关性,其发病原因主要由于心脏冠脉血管硬化病变使其管腔狭窄导致心肌缺血损伤,心肌需氧量和供氧量平衡失调。临床表现为心绞痛和心肌梗塞。
冠心病心绞痛是由于冠脉硬化病变使其管腔狭窄60%以上,导致心肌缺血造成心肌需氧量和供氧量之间的不平衡所致。心肌梗塞则由于冠脉分枝的管腔严重的狭窄甚至完全闭塞,冠脉灌流停止所致。二者的病理基础都是心肌损伤。研究表明,引起心肌缺血的机制有多种,包括冠状动脉内粥样斑块和血栓形成、冠状动脉痉挛、心肌内小动脉病变等。目前,改善心肌缺血的方法主要包括扩张血管改善血流供应、降低心肌耗氧、提高心肌细胞代谢率以及抗血小板凝集。而经动物和临床实验显示有一定抗心肌缺血的药物有如下几类:硝酸酯类、钙拮抗剂、β受体阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂、冠状动脉扩张剂、特异性心率减慢药及中草药提取物等。
在研究心肌缺血时,除了使用整体动物模型外,用体外培养的心肌细胞进行试验评价也是目前常用的实验方法。通过构建心肌细胞缺氧/复氧损伤的模型,可以间接反映心脏缺血/再灌注损伤情况,模拟该病理生理过程。此外,血栓形成对心血管疾病中的影响已经得到了基础和临床研究的证实,而血小板活化聚集与血栓形成和发展密切相关:血小板活化聚集后,可导致血栓形成,血管痉挛,影响血液循环,产生缺血或梗阻,从而促进疾病的发生和发展。因此研究药物对血小板聚集功能、心肌细胞缺氧损伤保护、抗炎作用、抗血栓作用的影响,对于防治心痹疾病和开发新药具有重要十分的意义。
桂花Osmanthus fragrans(Thunb.)Lour.又名木犀,为我国的十大传统名花之一,既是著名的香料植物,也是优良的园林绿化树种。主要分布在南岭以北至秦岭淮河以南,北至山东半岛等地。目前,对桂花资源的报道多涉及桂花精油和浸膏成分的分析和开发方面,相关研究主要集中在桂花资源、品种、栽培、发育、芳香性等传统领域。而对桂花其它部位的研究报道很少,涉及非芳香性成分的化学及其药理活性方面信息十分有限。
桂花子为桂花的成熟果实。目前,我国五大主要桂花产区(广西桂林、湖北咸宁、四川新都、江苏苏州、浙江杭州、)可实现年产干花100万公斤,相应的桂花浸膏产量大于1000公斤。因此在丰富的桂花资源背景下,每年成熟季节会随之产生大量的桂花种子资源。而当前桂花种子的应用除了少数作为种质资源进行桂花育苗和栽培外,大多数都当做农业废弃物处理,造成了很大的浪费。
有关桂花的医药用途,现代药理活性方面仅涉及了对桂花芳香性成分抑菌作用及少量桂花黄酮的抗氧化活性。《本草纲目》载:“桂花生津、辟臭、化痰,治风火牙痛。”其根、花、果实均可入药。桂花子作为桂花的果实,成熟时采收,用温水浸泡后,晒干入药。《植物名实图考长编》记载桂花子用于治疗心痹痛。然而这仅是民间用药经验的积累,现代药学对桂花子的化学成分和心血管活性研究报道十分有限,因此桂花种子用于治疗心痹的物质基础和作用机制并不明确。
目前,特女贞苷主要从女贞子和桂花种子中获取得到。相关专利文献报道了从女贞子中制备特女贞苷的方法,如专利(CN102372754)公开了从女贞子中制备特女贞苷粗品和高纯度特女贞苷的方法,该方法依次采用大孔树脂、正相硅胶和反相硅胶技术制备了纯度达98%的特女贞苷;专利(CN101704857A)公开了运用萃取、大孔树脂和反相硅胶技术从女贞子中获得特女贞苷的方法;专利(CN101955504A)公开了采用高速逆流色谱法从女贞子中分离制备高纯度特女贞苷、女贞苦苷和齐墩果酸的方法;专利(CN106632544A)公开了一种特女贞苷对照品的制备方法,该专利技术中对特女贞苷醇提物采用中压制备柱结合纯水结晶技术获得特女贞苷对照品。上述从女贞子中获取特女贞苷的相关方法中虽然获得了高纯度的特女贞苷,但是或多或少存在操作步骤较多、制备流程长、制备仪器昂贵等问题;同时,虽然专利(CN106632544A)是通过两步获得特女贞苷单体,但是其第一步中压制备步骤中需要中压制备色谱仪,该仪器价格较贵,且不易于放大中试生产。另外,涉及从桂花种子中分离制备特女贞苷的方法也存在以下问题:采用的加热回流等提取方式容易破坏有效成分特女贞苷,不利于提高特女贞苷的纯度和收率。因此,开发出一种工艺简单、操作方便、成本低廉、对仪器要求不高、易于大规模生产的桂花种子提取物的制备方法,对于最大程度开发利用桂花种子这种废弃资源的二次利用价值具有十分重要的意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足,提供一种工艺简单、操作方便、成本低廉、对仪器要求不高、易于大规模生产的桂花种子提取物的制备方法及由该方法制得的桂花种子提取物和该桂花种子提取物的应用。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是:
一种桂花种子提取物的制备方法,采用渗漉提取的方式提取桂花种子中的特女贞苷,得到桂花种子提取物。
上述的制备方法,进一步改进的,所述制备方法包括以下步骤:
S1、将桂花种子与溶剂混合,得到混合物;
S2、将步骤S1中得到的混合物进行渗漉提取,收集渗漉液;
S3、去除步骤S2中得到的渗漉液中的溶剂,得到桂花种子提取物。
上述的制备方法,进一步改进的,所述步骤S1中,所述桂花种子与溶剂的质量体积比为1kg∶5L~1kg∶10L;所述溶剂为甲醇溶液、乙醇溶液、丙酮溶液、水中的任意一种。
上述的制备方法,进一步改进的,所述甲醇溶液的体积浓度为50%~95%;所述乙醇溶液的体积浓度为50%~95%;所述丙酮溶液的体积浓度为50%~95%。
上述的制备方法,进一步改进的,所述步骤S2中,所述渗漉提取的次数为2次~3次;单次所述渗漉提取的时间为6h~24h。
作为一个总的技术构思,本发明还提供了一种桂花种子提取物,所述桂花种子提取物由上述的制备方法制得。
作为一个总的技术构思,本发明还提供了一种上述的桂花种子提取物在制备抗心痹药物或保健品中的应用。
上述的应用,进一步改进的,将所述桂花种子提取物和药学上可接受的载体制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸、散剂、滴丸剂、汤剂、糖浆剂、合剂、煎膏剂或浸膏剂剂型的药物或保健品。
本发明中,桂花种子提取物中含有特女贞苷,其中特女贞苷的结构为:
与现有技术相比,本发明的优点在于:
(1)本发明提供了一种桂花种子提取物的制备方法,以桂花种子为原料,通过对桂花种子进行渗漉提取即可制备得到桂花种子提取物,其中通过采用渗漉浸提的方式可以避免对桂花种子中有效成分特女贞苷的破坏,这使得桂花种子提取物中的特女真苷能够完整保留下来,将其用于制备抗心痹药物或保健品时,能够显著抑制家兔血小板凝集作用、提高心肌细胞的代谢率、提高抗炎活性、抑制血栓的形成,对于防治心痹疾病和开发新药具有重要十分的意义。
(2)本发明桂花种子提取物的制备方法具有工艺简单、操作方便、成本低廉、对仪器要求不高、易于大规模生产等优点,能够最大程度的开发利用桂花种子的二次利用价值,有着较高的使用价值和应用前景。
具体实施方式
以下结合具体优选的实施例对本发明作进一步描述,但并不因此而限制本发明的保护范围。
以下实施例中所采用的材料和仪器均为市售。本发明的实施例中,若无特别说明,所采用的工艺为常规工艺,所采用的设备为常规设备,且所得数据均是三次以上试验的平均值。
实施例1:
一种桂花种子提取物的制备方法,包括以下步骤:
S1、取桂花种子5kg,去皮,粉碎,加入50L体积浓度为95%的乙醇溶液,混合均匀,得到混合物。
S2、将步骤S1中得到的混合物进行渗漉提取,具体为从渗漉器上方不断加入新鲜体积浓度为95%的乙醇溶液,同时于渗漉器下方出口处,收集渗漉液,每次收集25L。该步骤中,渗漉提取的次数为3次,单次渗漉提取的时间为12h。
S3、每次渗漉提取完成后,采用旋转蒸发仪于40℃,减压回收提取液中的乙醇,所得浓缩液合并,得到桂花种子提取物。
实施例2
桂花种子提取物单体抗心痹活性评价
以实施例1中制得的桂花种子提取物作为受试物,考察如下实验:
对ADP诱导家兔血小板聚集功能的影响
取体重2.5~3.0kg健康日本大耳白兔,耳缘静脉取血3mL(抗凝剂∶血=1∶9),立刻混匀,封口,500转/分离心10分钟,制备富集血小板血浆(PRP)。分离出PRP后,再离心(3000rpm/min,10min)制备贫血小板血浆(PPP)。取PRP放入300μL带磁珠的比试杯中,剩余血混匀,3000转/分,离心10分钟。取PPP放入300μL的比试杯中,用PRP调零后,取200μL PRP加入5μL等摩尔浓度的受试物DMSO(二甲基亚砜)溶液,溶剂对照组加等容积溶媒DMSO,温育2min后,以20μL 5mmol/L ADP为诱导剂,测定血小板聚集反应。(ADP的配制:用磷酸氢二钠磷酸二氢钠配制缓冲液(pH=7.4,2mg/mL)。t检验各组间差异的显著性。
对AA诱导家兔血小板聚集功能的影响
取体重2.5~3.0kg健康日本大耳白兔,耳缘静脉取血3mL(抗凝剂∶血=1∶9),立刻混匀,封口,500转/分离心10分钟,制备富集血小板血浆(PRP)。分离出PRP后,再离心(3000rpm/min,10min)制备贫血小板血浆(PPP)。取PRP放入300μL带磁珠的比试杯中,剩余血混匀,3000转/分,离心10分钟。取PPP放入300μL的比试杯中,用PRP调零后,取200μL PRP加入5μL等摩尔浓度的受试物DMSO溶液,溶剂对照组加等容积溶媒DMSO,温育2min后,以20umol/L AA为诱导剂,测定血小板聚集反应,t检验各组间差异的显著性。
对胶原诱导家兔血小板聚集功能的影响
取体重2.5~3.0kg健康日本大耳白兔,耳缘静脉取血3mL(抗凝剂∶血=1∶9),立刻混匀,封口,500转/分离心10分钟,制备富集血小板血浆(PRP)。分离出PRP后,再离心(3000rpm/min,10min)制备贫血小板血浆(PPP)。取PRP放入300μL带磁珠的比试杯中,剩余血混匀,3000转/分,离心10分钟。取PPP放入300μL的比试杯中,用PRP调零后,取200μL PRP加入5μL等摩尔浓度的受试物DMSO溶液,溶剂对照组加等容积溶媒DMSO,温育2min后,以1mg/mL胶原为诱导剂,测定血小板聚集反应,t检验各组间差异的显著性。三种诱导模型下,受试物的实验结果如下表所示:
表1桂花种子提取物对ADP诱导血小板聚集的影响
浓度(mg/mL) 最大聚集率(%) 抑制率(%)
空白 26.02±10.15
桂花种子提取物 2.8 17.41±4.38* 33.13
桂花种子提取物 1.4 18.55±0.92* 28.71
桂花种子提取物 0.7 22.25±0.42 14.68
丹参注射液 1.4 14.2±3.31** 37.16
与空白组相比*为P<0.05,**为P<0.01。
表2桂花种子提取物对胶原诱导血小板聚集的影响
浓度(mg/mL) 最大聚集率(%) 抑制率(%)
空白 26.02±10.15
桂花种子提取物 2.8 10.75±0.07** 58.68
桂花种子提取物 1.4 14.57±5.00* 44.02
桂花种子提取物 0.7 18.95±11.10 27.17
丹参注射液 1.4 20.2±6.98* 22.36
与空白组相比*为P<0.05,**为P<0.01。
表3不同受试物对AA诱导血小板聚集的影响
浓度(mg/mL) 最大聚集率(%) 抑制率(%)
空白 26.02±10.15
桂花种子提取物 2.8 12.77±6.16* 50.94
桂花种子提取物 1.4 19.33±7.44* 25.70
桂花种子提取物 0.7 21.53±5.91 17.24
丹参注射液 1.4 19.16±3.51* 26.38
与空白组相比*为P<0.05,**为P<0.01。
由上述结果可以看出,在ADP诱导的血小板凝集模型中,与空白组相比,中、高浓度下桂花种子提取物显示了显著的抑制作用。高浓度下桂花种子提取物的抑制率与阳性对照药丹参注射液接近;在胶原诱导模型下,与空白组相比,桂花种子提取物显示了显著的抑制家兔血小板凝集作用。高浓度下桂花种子提取物的血小板抑制率是丹参注射液的两倍。在花生四烯酸诱导模型中,高浓度下桂花种子提取物显示了比丹参注射液高的抑制率。中浓度下则显示接近丹参注射液的抑制效果。
实施例3
以实施例1中制得的桂花种子提取物作为受试物,考察它对大鼠体外心肌细胞缺氧损伤保护影响
乳鼠心肌细胞的培养
1-3d龄的Wistar乳鼠,采用75%(单位是v/v)乙醇浸泡消毒,取心尖部组织,剪碎,置于离心管中,用10mL、0.25%(单位是v/v)胰蛋白酶溶液,在恒温振荡器37℃水浴中消化10min,同时用吸管吹打组织2min使其自然沉淀。待沉淀完全后,取上清液至另一管中,加入2mL冷培养基终止消化,然后离心10min,弃去上清液,往沉淀中加入8mL D-Hanks液,最后用含20%(单位是v/v)胎牛血清的DMEM培养基,将心肌细胞沉淀混匀,制成细胞悬液置于培养瓶中。将培养瓶在二氧化碳培养箱中37℃培养,24h后换液并加入0.1mmol/L 5-溴-2’-脱氧尿苷抑制纤维细胞生长。
MTT法测定心肌细胞代谢率
取心肌细胞悬浮液,以100μL/孔加入96孔板中,培养24h后,用D-hanks液冲洗3次,分别加入含20%(v/v)胎牛血清的DMEM培养基和不含血清的DMEM培养基制成正常组和模型组。向密闭容器中充入N2,2h后将培养板于正常情况下培养1h后,加入5%(v/v)MTT(噻唑蓝)20μL/孔培养4h后弃去上清液,加入100μL/孔的DMSO,振荡3min后于酶标仪下测定570nm吸光度。
表4桂花种子提取物对心肌细胞代谢率的影响
浓度(mol/L) 吸光值(%)
正常组 -- 0.51±0.015
模型组 -- 0.29±0.042
桂花种子提取物 0.1 0.62±0.016<sup>##</sup>
桂花种子提取物 0.01 0.53±0.044<sup>##</sup>
桂花种子提取物 0.001 0.46±0.091<sup>#</sup>
丹参注射液 0.001 0.46±0.051
*P<0.05与正常组比;#P<0.05,##P<0.01与模型组比。
从上表可以看出,桂花种子提取物受试药能够显著提高心肌细胞的代谢率。其中,桂花种子提取物在高、中浓度下显示了比阳性药丹参注射液好的代谢率。
实施例4
以实施例1中制得的桂花种子提取物作为受试物,考察桂花种子提取物对斑马鱼抗炎活性评价
具体实施方式:
方法:采用3dpf(days post fertilization)健康巨噬细胞荧光转基因斑马鱼Tg(zlyz:EGFP)作为实验动物模型分别研究样品桂花种子提取物(5μg/mL,10μg/mL和50μg/mL)对斑马鱼炎症反应的影响。与斑马鱼共孵育24h后,用20μM的硫酸铜溶液分别处理各组斑马鱼。CuSO4避光处理斑马鱼1h后,在室温条件下利用4%(v/v)PFA(多聚甲醛)将各组斑马鱼固定。固定1h后,清除4%(v/v)PFA并使用PBST(磷酸盐吐温缓冲液)清洗斑马鱼。荧光显微镜下观察巨噬细胞炎症反应,计数神经丘周围巨噬细胞个数。判断样品是否具有抗炎活性。
斑马鱼胚胎获取
雌雄斑马鱼分开喂养,照明14h/黑暗10h交替进行,定时喂以人工颗粒状饵料和刚孵出的卤虫无节幼体(Artemia nauplii)。采卵时取健康性成熟的斑马鱼按雌雄1∶1的比例放入交配缸内,次日9-10时获得受精卵。对受精卵进行消毒和洗涤后移入斑马鱼胚胎培养用水(含5.0mM NaCl,0.17mM KCl,0.4mM CaCl2,0.16mM MgSO4)中,28℃下控光培养。
2种样品对斑马鱼炎症反应的影响
在受精卵发育3dpf(days post fertilization)时,在体视显微镜下挑选正常的斑马鱼胚胎,移入24孔培养板中,每孔8枚,每次每组两个重复孔,实验重复两次。分别加入不同浓度的桂花种子提取物(5μg/mL,10μg/mL和50μg/mL),加培养水至2.0mL。阳性对照组加入5μg/mL的吲哚美辛。然后加盖,分别将受试组与阳性对照组斑马鱼置于光照培养箱(28℃)让胚胎继续发育。2h后,用20μM的CuSO4溶液分别处理以上各组斑马鱼。另设空白对照组斑马鱼,此组斑马鱼发育3dpf时,置于光照培养箱(28℃)让胚胎继续发育。2h后此组斑马鱼不添加20μM的CuSO4溶液,继续在28℃条件下避光培养。观察:荧光显微镜下观察巨噬细胞炎症反应,计数神经丘周围巨噬细胞个数。利用Image Pro Plus软件统计样品对炎症反应的影响。实验数据用mean±SD表示,采用SPSS软件进行各组间方差分析,P<0.05为有显著性差异,P<0.01为有极显著性差异。
实验结果
模型组与空白对照组相比,巨噬细胞迁移数显著增多(P<0.05)。阳性药物组、桂花种子提取物5μg/mL组斑马鱼巨噬细胞迁移数与模型组相比显著下降(P<0.05)。
表5不同样品对斑马鱼巨噬细胞迁移个数的影响(mean±SD)
*表示与空白对照相比具有显著性差异(P<0.05),#表示与模型组相比具有显著性差异(P<0.05)。
实验结果发现受试物桂花种子提取物在浓度为5μg/mL剂量下,对斑马鱼幼鱼具有抗炎作用。
实施例5
以实施例1中制得的桂花种子提取物作为受试物,考察桂花种子提取物对斑马鱼抗血栓活性评价
具体实施方式
方法:采用3dpf(days post fertilization)健康AB系斑马鱼作为实验动物模型分别研究样品1(5μg/mL,10μg/mL和50μg/mL)时对斑马鱼血栓形成的影响。与斑马鱼共孵育48h后,用60μg/mL的三氯化铁分别处理各组斑马鱼。在显微镜下从加入三氯化铁开始,记录肠下静脉血管形成血栓的时间,判断样品是否具有抑制血栓形成活性。
斑马鱼胚胎获取
雌雄斑马鱼分开喂养,照明14h/黑暗10h交替进行,定时喂以人工颗粒状饵料和刚孵出的卤虫无节幼体(Artemia nauplii)。采卵时取健康性成熟的斑马鱼按雌雄1:1的比例放入交配缸内,次日9-10时获得受精卵。对受精卵进行消毒和洗涤后移入斑马鱼胚胎培养用水(含5.0mM NaCl,0.17mM KCl,0.4mM CaCl2,0.16mM MgSO4)中,28℃下控光培养。
2种样品对斑马鱼血栓形成的影响
在受精卵发育3dpf时,在体视显微镜下挑选正常的斑马鱼胚胎,移入24孔培养板中,每孔10枚,每次每组两个重复孔,实验重复两次。加培养水至2.0mL,作为阳性对照组。分别加入不同浓度的样品1(5μg/mL,10μg/mL和50μg/mL),加培养水至2.0mL。置于光照培养箱(28℃)让胚胎继续发育。在48hpf时,用60μg/mL的三氯化铁分别处理各组斑马鱼。在显微镜下从加入三氯化铁开始,记录肠下静脉血管形成血栓的时间,判断样品是否具有抑制血栓形成的活性,并观察胚胎死亡或畸形情况。
实验结果
表6桂花种子提取物样品对斑马鱼血栓形成时间的影响
*表示与对照相比具有显著性差异(P<0.05)。
由表6发现,样品1浓度为50μg/mL时,血栓生成时间缩短,说明样品1在该浓度下,促进血栓形成,这可能与高浓度下造成的心包水肿等毒性现象有关。
由此可知,本发明制备方法制得的桂花种子提取物可用于开发新的抗心痹药物或保健品,具体为将桂花种子提取物和药学上可接受的载体制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸、散剂、滴丸剂、汤剂、糖浆剂、合剂、煎膏剂或浸膏剂剂型的药物或保健品。
以上实施例仅是本发明的优选实施方式,本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例。凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应该指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下的改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种桂花种子提取物的制备方法,其特征在于,采用渗漉提取的方式提取桂花种子中的特女贞苷,得到桂花种子提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:
S1、将桂花种子与溶剂混合,得到混合物;
S2、将步骤S1中得到的混合物进行渗漉提取,收集渗漉液;
S3、去除步骤S2中得到的渗漉液中的溶剂,得到桂花种子提取物。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤S1中,所述桂花种子与溶剂的质量体积比为1kg∶5L~1kg∶10L;所述溶剂为甲醇溶液、乙醇溶液、丙酮溶液、水中的任意一种。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述甲醇溶液的体积浓度为50%~95%;所述乙醇溶液的体积浓度为50%~95%;所述丙酮溶液的体积浓度为50%~95%。
5.根据权利要求2~4中任一项所述的制备方法,其特征在于,所述步骤S2中,所述渗漉提取的次数为2次~3次;单次所述渗漉提取的时间为6h~24h。
6.一种桂花种子提取物,其特征在于,所述桂花种子提取物由权利要求1~5中任一项所述的制备方法制得。
7.一种如权利要求6所述的桂花种子提取物在制备抗心痹药物或保健品中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,将所述桂花种子提取物和药学上可接受的载体制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸、散剂、滴丸剂、汤剂、糖浆剂、合剂、煎膏剂或浸膏剂剂型的药物或保健品。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN112941139A (zh) * 2019-12-10 2021-06-11 长沙学院 一种利用斑马鱼为模型评价栀子水提取物活性的方法

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李桂华等: "桂花种子环烯醚萜苷的提取工艺与抗血栓活性研究", 《中草药》 *

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