CN114652740B - 一种益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素药物组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素药物组合物及其应用,该药物组合物包括重量比为1.5~2:1:10~16的益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素。经药理实验证明该组合物能有效降低血糖同时有效抑制血栓,可用于制备糖尿病基础病合并血栓治疗药物,具有组方简单、活性成分含量高、安全有效等优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物组合物,具体的说是益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素药物组合物在制备预防和/或治疗糖尿病相关疾病和/或病症的药物中的应用。
背景技术
糖尿病患者没有明显的早期症状,还伴有多种不同并发症,可诱发微血管、大血管受损,同时也会对眼睛、足部、心、脑部等造成损害。糖尿病患者血浆中4项凝血纤溶指标含量明显高于非糖尿病患者,因此糖尿病患者血液存在高凝现象。糖尿病患者体内高胰岛素、高血糖、胰岛素抵抗等因素会使得糖尿病患者的内皮细胞比正常人更容易受到损害,从而导致功能紊乱,使得糖尿病患者更容易诱发血栓形成。血栓形成后可能会使糖尿病变得更严重,从而引起其他疾病。因此了解并针对糖尿病血栓并发症的发病机制,采取适当的防治措施,可减缓糖尿病血栓并发症的发生与发展,有效提高糖尿病患者的生存质量。
益母草具有活血化瘀、利尿消肿之疗效,主要的化合物有:生物碱类、黄酮类、二萜类、脂肪酸等。益母草碱是益母草的主要有效成分,研究结果显示其对子宫系统、心血管、神经系统、肾脏等都有保护作用,还对抗糖尿病有新用途。黄精是即可以作为药物也可以作为食物的多年生草本植物,现代医学表明,黄精的主要成分黄精多糖具有降血糖、调血脂、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、增强免疫等多重作用。桑叶中提取的生物碱1-脱氧野尻霉素具有良好的降血糖、降血脂、抗肿瘤、抗病毒和抗氧化的作用。
了解糖尿病引起血栓的相关原因,采取相应的治疗方法,能够缓解病情的发展,从而使糖尿病病人减轻身体负担。目前已知的抗血栓药物不良反应较多,因此需要寻找新型药物治疗糖尿病及血栓,中药在血栓治疗历程中具有重要的地位,活血化瘀是中医抗血栓的黄金治则。因此,在传统中医药理论的基础上,运用现代科学技术,开发一种有效成分明确、质量可控、毒副作用小的体现中药作用整体观的糖尿病用药具有重要意义。
发明内容
基于上述现有技术所存在的问题,本发明的目的在于提供一种益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素药物组合物及其应用。
为实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
一种益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素药物组合物,包括益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素,且益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素的重量比为1.5~2:1:10~16。
本发明上述药物组合物的特点在于:益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素药物组合物是在传统中医药理论基础上,运用现代科学技术获得的,组方简单、活性成分含量科学合理、安全有效。而且,该药物组合物经药效学试验研究具有降低血糖、预防和治疗高血糖基础病合并血栓的作用。
进一步地,所述药物组合物中益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素的重量比为1.875:1: 12.5。
进一步地,所述药物组合物中,药学上可接受的载体可采用各种形式。固体口服给药的情况下,合适的载体包括但不限于:稀释剂,例如淀粉、玉米淀粉、改性淀粉、乳糖、粉状纤维素、微晶纤维素、无水磷酸氢钙、磷酸三钙、甘露醇、山梨醇、糖、麦芽糊精等;另外,载体还可以为无菌水、生理盐水或葡萄糖水溶液;每一种载体必须是可接受的,能与药物组合物配方中的其他成分兼容并且对于病患无害。
进一步地,所述药物组合物可以制成适当的药物制剂形式,可口服施用,包括片剂、胶囊剂、颗粒剂等口服制剂。
本发明所述的益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素药物组合物可用于制备预防和/或治疗糖尿病相关疾病和/或病症的药物。进一步地,所述疾病和/或病症选自糖尿病或糖尿病合并血栓症,即本发明所述的药物组合物可用于制备糖尿病和/或糖尿病基础病合并血栓治疗药物。
进一步地,所述药物组合物的给药量为307.5-1230毫克/日。
本发明的组方依据,是在传统中医药的理论基础上,结合现代研究成果,进一步提取益母草、黄精和发酵桑叶的活性成分,并进行有机结合,从而可开发成一种有效成分含量高、质量可控、毒副作用小且能长期服用的治疗糖尿病基础病合并血栓疾病的中药新药。
益母草碱在抗糖尿病和血栓方面,已经有研究者在小鼠模型上进行了验证。益母草碱治疗糖尿病小鼠的效果:给药三周后测量小鼠空腹血糖,结果发现血糖降低,胰岛素浓度升高,通过Akt信号通路调节异常的葡萄糖代谢酶,也能降低炎症的发生,改善糖尿病症状,具有抗炎症活性,继而具有预防血栓的功效。分离益母草的有效成分,对家兔灌胃给药后进行分析,研究发现,不同提取物对于降低血液粘稠度、抗血小板凝聚的影响不同,益母草的生物碱类能显著降低血液黏度,浸膏部分也可以降低血液黏度,但是去除生物碱之后的浸膏则对血液黏度影响不大。
黄精的主要成分黄精多糖具有降血糖、调血脂等多重作用。相关研究通过建立心肌肥厚的大鼠模型,测定大鼠血液中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,发现黄精多糖具有抗氧化作用;通过建立小鼠炎症性肠病模型给与PSP治疗发现其对小鼠的抑制作用是通过抑制核因子-κB(NF--κB)通路,减少MDA、髓过氧化物酶(MPO)产生和增加SOD 含量实现的。对小鼠注射链脲佐菌素,探究黄精多糖降糖作用及血浆成分的变化,结果显示黄精多糖下调小鼠血糖和血清糖化血红蛋白浓度,具有较高的开发价值;黄精多糖还可以通过减轻胰岛细胞细胞凋亡保护胰岛细胞,从而降低体内血糖,抑制糖尿病。
桑叶具有开发为药物的潜质,桑叶中提取的生物碱1-脱氧野尻霉素具有良好的降血糖、降血脂、抗肿瘤、抗病毒和抗氧化的作用。通过对小鼠喂食脱氧野尻霉素,结果表明,脱氧野尻霉素实验组的小鼠与高脂饲料喂食的小鼠相比,血糖、胆固醇、胰岛素水平显著降低,脱氧野尻霉素能与α-葡萄糖苷酶结合,加速血糖的分解,起到降低脂肪肝的危害;Kimura用桑叶中分离出的生物碱对链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠进行分析,结果表明DNJ降糖效果好。基于目前已存在的研究都显示脱氧野尻霉素在医药行业的前景广阔,有关脱氧野尻霉素的研究会越来越受到各界学者的重视。
综上,本发明的有益效果体现在:
将益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素进行组方,组方简单、活性成分含量高、安全有效,优势互补,既能达到显著的降血糖效果,又能达到改善血栓的效果,且毒副作用小,有望成为治疗糖尿病基础病合并血栓等疾病长期治疗所需的药物。
附图说明
图1为不同浓度(药效学实验采用的益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素的重量比为 1.875:1:12.5)的药物组合物对苯肼诱发糖尿病斑马鱼血栓模型的影响,其中(A)为尾静脉血栓、(B)为心脏红细胞染色、(C)为心脏红细胞染色强度,图中:D为低浓度组,Z为中浓度组,G为高浓度组,Met+ASP为阳性药(二甲双胍+阿司匹林);
图2不同浓度的药物组合物对花生四烯酸诱发糖尿病斑马鱼血栓模型的影响,其中(A) 为尾静脉血栓、(B)为心脏红细胞染色、(C)为心脏红细胞染色强度,图中:D为低浓度组,Z为中浓度组,G为高浓度组,Met+ASP为阳性药(二甲双胍+阿司匹林);
图3不同浓度的药物组合物对普钠替尼诱发糖尿病斑马鱼血栓模型的影响,其中(A) 为尾静脉血栓、(B)为心脏红细胞染色、(C)为心脏红细胞染色强度,图中:D为低浓度组, Z为中浓度组,G为高浓度组,Met+ASP为阳性药(二甲双胍+阿司匹林);
图中,与阴性对照组比较,#p<0.01,##p<0.001,###p<0.0001;与模型组比较,*p >0.001,**p<0.001,***p<0.0001
具体实施方式
在本发明中所使用的术语,除非有另外说明,一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体的制备实施例,并参照数据进一步详细地描述本发明,应理解,这些实施例只是为了举例说明本发明,而非以任何方式限制本发明的范围。
在以下的实施例中,未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法,所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者,均在首次出现时标明,其后所用相同试剂如无特殊说明,均与首次标明的内容相同。
本发明中的益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素均为植物提取或合成半合成产品,其中:
脱氧野尻霉素提取方法包含但不仅限于桑树、百合科植物(枝,叶,根,茎,皮)、家蚕等昆虫以及链霉菌发酵物煎煮法、浸渍法、渗漉法、回流法、微波法、超声法、闪式法、酶法提取等,选用溶剂为水、不同浓度的乙醇和甲醇;脱氧野尻霉素合成法包括但不仅限于以L-山梨糖或D-葡萄糖为起始原料,以非葡萄糖、非山梨糖为原料,以微生物转化与化学合成结合的制备方法。
黄精多糖常提取方法包含但不仅限于溶剂提取法、闪式提取法、微波/超声波辅助提取法、酶提取法等。
益母草碱提取方法包含但不仅限于溶剂回流超声波和微波提取法;益母草碱合成包含但不仅限于:以丁香酸为原料,用氯甲酸乙酯对其活泼的碳基保护和酰化、路易斯酸催化条件下四氢呋喃开环、酰氯的醇解等反应制备羰基化产物(4-乙氧羰基-氧基-丁香酸-丁酯),用该盖布瑞尔成胺法制备益母草胺,最后与甲基异硫脲反应制成益母草碱。所得益母草碱为包含但不仅限于益母草碱或益母草碱盐酸盐或益母草碱硫酸盐等。
本实施例中益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素的具体来源如下:
益母草碱的合成方法参见文章“Six-step synthesis of Leonurine andtoxicity study on zebrafish”(Chinese Chemical Letters 28(2017)1172–1175)。
黄精多糖从黄精药材中提取,提取方法为:黄精药材干燥后粉碎,加入提取罐,按照料液比1g:15mL用30%乙醇溶液超声回流提取,提取温度65℃~100℃。提取液常规工艺除杂,浓缩,干燥即得。
脱氧野尻霉素自桑枝中提取,提取方法为:桑枝干燥粉碎,加入提取罐,按照料液比1 g:40mL用70%乙醇溶液超声提取,温度65℃、超声时间24min、超声功率480W。提取液常规工艺除杂,浓缩,干燥即得。
实施例1
本发明的益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素的药物组合物制备方法如下:称取益母草碱75g、黄精多糖50g、脱氧野尻霉素500g、淀粉290g、麦芽糊精45g、甘露醇40g,过100目筛混匀,加蒸馏水适量制软材,过18目筛制粒,45~60℃烘干后过16目筛整粒,灌装胶囊制成胶囊剂(1g/粒),或者压片制成片剂(1克/片),或者灌装制成颗粒剂(10g/包),制剂形式为颗粒剂或片剂或胶囊。
实施例2
本发明的益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素的药物组合物制备方法如下:称取益母草碱93.75g、黄精多糖50g、脱氧野尻霉素625g、淀粉175g、麦芽糊精30g、甘露醇26.25g,过100目筛混匀,加蒸馏水适量制软材,过18目筛制粒,45~60℃烘干后过16目筛整粒,灌装胶囊制成胶囊剂(1g/粒),或者压片制成片剂(1克/片),或者灌装制成颗粒剂(10g/包),制剂形式为颗粒剂或片剂或胶囊。
实施例3
本发明的益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素的药物组合物制备方法如下:称取益母草碱90g、黄精多糖45g、脱氧野尻霉素720g、淀粉90g、麦芽糊精30g、甘露醇20g,过100目筛混匀,加蒸馏水适量制软材,过18目筛制粒,45~60℃烘干后过16目筛整粒,灌装胶囊制成胶囊剂(1g/粒),或者压片制成片剂(1克/片),或者灌装制成颗粒剂(10g/包),制剂形式为颗粒剂或片剂或胶囊。
益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素的药物组合物具有治疗糖尿病、降低血糖以及改善血栓的作用,这些药理作用,通过以下药效学试验例得到证实(所用药物组合物为实施例2 所获得的药物组合物颗粒剂):
不含血栓造模剂的各给药组药物配置:称取适量药物组合物粉末,用胚胎培养水溶解。
含血栓造模剂的各给药组药物配置:称取适量药物组合物粉末,用不同的血栓造模剂溶解。
1、不同浓度的药物组合物对苯肼诱发糖尿病斑马鱼血栓模型的影响
苯肼(PH)诱导斑马鱼血栓模型的建立及药物干预:注射链脲佐菌素(STZ)后的斑马鱼胚胎培养至3dpf,挑选发育正常的胚胎,将其分到24孔板中,设置6个实验组,每组60~70 尾:即空白对照组(Control)、模型组(用1μmol/L苯肼处理,PH model)、阳性药组、联合给药高中低干预组。空白对照组和模型组用胚胎培养水,给药组用对应浓度的药液预处理6h。然后将模型组替换为1μmol/L PH,给药组替换为含PH 1μmol/L与对应浓度药液的培养水,之后28℃恒温培养箱培养24h,在4dpf取5尾用于尾静脉和心脏红细胞染色观察,取30尾用于斑马鱼总RNA提取,25尾用于斑马鱼组织糖含量测定。
与对照组比,PH模型组尾静脉血栓明显增加,心脏红细胞染色强度较少,提示建模成功;与PH模型组比,阳性药干预后尾静脉血栓减少明显,仍存在少量血栓,心脏红细胞染色强度显著增加,抑制血栓效率达68.38%;低浓度组尾静脉血栓较多,心脏红细胞染色强度较模型组增加,抑制血栓率为19.46%;中浓度组尾静脉形成量较模型组减少,心脏红细胞染色强度增加,抑制血栓率为32.23%;高浓度组尾静脉形成量较模型组明显减少,心脏红细胞染色强度显著增加,抑制血栓效率达51.23%。各剂量组抑制血栓效率分别为19.46%、32.23%、 51.23%,具有一定的剂量效应关系。
表1药物组合物对斑马鱼心脏红细胞染色(SI)的影响
2、不同浓度的药物组合物对花生四烯酸诱发糖尿病斑马鱼血栓模型的影响
花生四烯酸(AA)诱导斑马鱼血栓模型的建立及药物干预:注射链脲佐菌素(STZ)后的斑马鱼胚胎培养至3dpf,挑选发育正常的胚胎,将其分到24孔板中,设置6个实验组,每组60~70尾:即空白对照组(Control)、模型组(用80μmol/L花生四烯酸处理,AAmodel)、阳性药组、联合给药高中低干预组。空白对照组和模型组用胚胎培养水,给药组用对应浓度的药液预处理6h。然后空白对照组继续培养,将模型组替换为80μmol/LAA,给药组替换为含80μmol/LAA与对应浓度药液的培养水,之后28℃恒温培养箱培养1.5h,在3dpf取5 尾用于尾静脉和心脏红细胞染色观察,取30尾用于斑马鱼总RNA提取,25尾用于斑马鱼组织糖含量测定。
与对照组比,AA模型组尾静脉血栓明显增加,而心脏红细胞染色强度明显减少,提示建模成功;与AA模型组比,阳性药干预后明显可见尾静脉血栓减少,心脏红细胞染色强度显著增加,抑制血栓效率达62.01%;低浓度组尾静脉血栓较多,心脏红细胞染色强度与模型组相比增加,抑制血栓率为25.03%;中浓度组尾静脉形成量较模型组相比减少不明显,心脏红细胞染色强度增加,抑制血栓率为33.58%;高浓度组血栓尾静脉形成量较模型组明显减少,心脏红细胞染色强度显著增加,抑制血栓效率达46.12%。各剂量组的抑制血栓效率分别为 25.03%、33.58%、46.12%,有一定的剂量效应关系。
表2药物组合物对斑马鱼心脏红细胞染色(SI)的影响
3、不同浓度的药物组合物对普钠替尼诱发糖尿病斑马鱼血栓模型的影响
普纳替尼(PT)诱导斑马鱼血栓模型的建立及药物干预:注射链脲佐菌素(STZ)后的斑马鱼胚胎培养至5dpf,挑选发育正常的胚胎,将其分到24孔板中,设置6个实验组,每组60~70尾:即空白对照组(Control)、模型组(用5mg/L普纳替尼处理,PT model)、阳性药组、联合给药高中低干预组。空白对照组用5mg/L普纳替尼与对应浓度药液的培养水共处理,之后28℃恒温培养箱培养18h,取5尾用于尾静脉和心脏红细胞染色观察,取30尾用于斑马鱼总RNA提取,25尾用于斑马鱼组织糖含量测定。
与对照组比,PT模型组尾静脉血栓增加非常明显,而心脏红细胞染色强度明显减少,提示建模成功;与PT模型组比,阳性药干预后尾静脉血栓减少明显,仅有较少的血栓且被斑马鱼自身黑色素遮挡,心脏红细胞染色强度显著增加,抑制血栓效率达69.36%;低浓度组尾静脉血栓较多,心脏红细胞染色强度增加较少,抑制血栓率仅有5.38%;中浓度组尾静脉形成量较模型组虽然有减少,但不明显,心脏红细胞染色强度增加,抑制血栓率为29.68%;高浓度组血栓尾静脉形成量较模型组明显减少,呈现不连续血流,心脏红细胞染色强度显著增加,抑制血栓效率达48.50%。各剂量组的抑制血栓效率分别为5.38%、29.68%、48.50%,有一定的剂量效应关系。
表3药物组合物对斑马鱼心脏红细胞染色(SI)的影响
4、不同浓度的药物组合物对斑马鱼组织糖含量的影响
从注射STZ当天算起以及造模血栓成功和给药后相应时间段,分别取斑马鱼幼鱼各30 条/组,加入200μL冰PBS后充分研磨,12000rpm、4℃,离心10min,再采用QuantiChromTMGlucoseAssay Kit葡萄糖测试盒进行测定。斑马鱼注射STZ后达到糖尿病状态,且在实验周期内,该模型较稳定。由表4中可以看出,组合物三种浓度可以降低不同血栓模型的斑马鱼组织糖含量,每个浓度之间降低组织糖含量的效果差距不大。
表4药物组合物对糖尿病斑马鱼组织糖含量的影响
注:表1~4中,与模型组比较,*p>0.001,**p<0.001,***p<0.0001。
Claims (5)
1.一种益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素药物组合物,其特征在于:所述药物组合物由益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素组成,且益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素的重量比为1.5~2:1:10~16。
2.如权利要求1所述的药物组合物,其特征在于:益母草碱、黄精多糖和脱氧野尻霉素的重量比为1.875:1:12.5。
3.如权利要求1或2所述的药物组合物,其特征在于:所述药物组合物制成胶囊剂、片剂或颗粒剂。
4.权利要求1-3中任意一项所述的药物组合物在制备预防和/或治疗糖尿病相关疾病和/或病症的药物中的应用,其特征在于,所述疾病和/或病症选自糖尿病或糖尿病合并血栓症。
5.权利要求1-3中任意一项所述的药物组合物在制备糖尿病和/或糖尿病基础病合并血栓治疗药物中的应用。
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PB01 | Publication | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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