CN108570116B - 黄绿卷毛菇多糖及制备方法和在防治糖尿病中的医用用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种黄绿卷毛菇多糖及制备方法和在防治糖尿病中的医用用途，以黄绿卷毛菇水提醇沉得到的粗多糖，经过去蛋白后得到的黄绿卷毛菇总糖，黄绿卷毛菇糖蛋白复合物，及黄绿卷毛菇多糖或纯化的均一多糖组分中的任一种或几种。并通过动物实验表明，本发明黄绿卷毛菇多糖能降低db/db小鼠体重的增长速度，降低糖尿病小鼠的空腹血糖，改善口服糖耐量，具有良好的降血脂、抗氧化及抗炎的活性。本发明所述黄绿卷毛菇多糖作为食药用菌资源中获得的一种天然产物，毒副作用小，同时还具有显著的抗氧化应激和抗炎作用，进而发挥抗Ⅱ型糖尿病及肾病并发症的作用，可用于开发安全有效的预防、改善或治疗Ⅱ型糖尿病及糖尿病引起的肾脏并发症的药物和保健品，具有极高的食用价值、药用价值和经济价值。
Description
技术领域
本发明公开一种黄绿卷毛菇多糖，同时提供了其制备方法；本发明进一步公开了黄绿卷毛菇多糖在防治糖尿病中的医用用途，可以用于制成防治Ⅱ型糖尿病和糖尿病肾病药物或保健品，属于中医制药技术领域。
背景技术
糖尿病(Diabetes Mellitus，DM) 是一种以持续高血糖及血脂等异常为主要特征的可累及全身组织和器官的慢性代谢紊乱疾病，目前对糖尿病肾病的治疗方案主要以严格控制血糖、血压、调节血脂和饮食干预等为主。虽然经过药物等方法治疗后，糖尿病及糖尿病肾病患者的病情得到相应的控制和缓解，但并不能完全恢复肾脏等组织细胞的损伤。因此，寻找新的安全有效的治疗药物和靶标显得尤为重要。近年来，天然产物的生物活性成为研究热点，因此，期望能够从大型真菌资源中挖掘出更加安全有效的抗糖尿病及其并发症的药物，以弥补目前治疗方法的不足。
本发明涉及的黄绿卷毛菇[Floccularia luteovirens (Alb. & Schwein.)Pouzar]，又名黄绿蜜环菌，黄蘑菇等，作为青藏高原真菌资源宝库中的极具代表性的食药用菌之一，不仅味道鲜美，还含有大量的多糖、蛋白质、氨基酸、挥发油、脂肪酸、黄酮、麦角甾醇、凝集素等多种营养活性成分，有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化等多种药理活性。目前，对于黄绿卷毛菇的研究主要集中在分类学、液体发酵条件及营养成分分析等方面，其化学成分以及药理作用研究仍然处于空白，缺少对其多糖的研究，另外，对于糖尿病肾病的治疗作用，尚未见报道。
发明内容
本发明公开一种黄绿卷毛菇多糖，可降低糖尿病小鼠的体重和空腹血糖,改善小鼠口服糖耐量，降低血脂，减少氧化应激状态及炎症因子的产生，进而达到治疗型糖尿病和肾脏保护的目的，整体动物模型试验证实其具有较强的防治实验性糖尿病及肾病并发症的作用，同时无毒副作用，弥补现有治疗药物产生毒副作用不足。
本发明公开一种黄绿卷毛菇多糖的制备方法，以黄绿卷毛菇水提醇沉得到的粗多糖，经过去蛋白后得到的黄绿卷毛菇总糖，黄绿卷毛菇糖蛋白复合物，及黄绿卷毛菇多糖或纯化的均一多糖组分中的任一种或几种。
本发明进一步公开了黄绿卷毛菇多糖在防治糖尿病中的医用用途，对糖尿病特别是Ⅱ型糖尿病的防治具有显著地疗效。可以制备预防、改善或治疗Ⅱ型糖尿病的药物或保健品。
本发明所述的一种黄绿卷毛菇多糖的制备方法，包括以下步骤：
将黄绿卷毛菇子实体置于干燥箱内，干燥至恒重，粉碎，过筛，采用传统的水提醇沉法，过筛粉末中加入10~60倍重量蒸馏水，于50~100℃温度下热水浸提1~6 h，5500r/min离心15min，提取2次，合并上清液，采用0.1% 的木瓜蛋白酶和Sevag试剂联用法去蛋白，透析，真空低温冷冻干燥48小时，得干燥粉末。采用硫酸-苯酚法对该多糖复合物进行含量测定，计算其多糖提取率为42.5%。
本发明所述的黄绿卷毛菇多糖来源于子实体、菌丝或发酵液。
本发明所述的黄绿卷毛菇多糖在制备预防、改善或治疗糖尿病的药物或保健品中的用途。
本发明所述的黄绿卷毛菇多糖在制备预防、改善或治疗Ⅱ型糖尿病的药物或保健品中的用途。
为达上述发明目的, 所述黄绿卷毛菇多糖可根据不同剂型的需要, 按照本领域熟知的常规技术加入常规的赋形剂、崩解剂、粘合剂等辅料制成片剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液等剂型或其他食品及药学上可行的形式。
本发明提供了一种含有上述黄绿卷毛菇多糖活性成分的具有改善、防治Ⅱ型糖尿病及糖尿病肾病并发症的保健或功能性食品。
本发明进行了动物实验,实验结果表明,黄绿卷毛菇多糖对Ⅱ型糖尿病及糖尿病肾病有防治作用。动物实验结果证实,黄绿卷毛菇多糖可显著降低血糖和肾脏指数,改善db/db小鼠口服糖耐量,通过改善氧化应激状态和降低炎症因子的产生，表现出明显的防治糖尿病和肾脏保护的作用。进一步，所述的黄绿卷毛菇多糖可用于制备防治糖尿病及糖尿病肾病的药物或保健品。
本发明黄绿卷毛菇多糖在预防、改善或治疗Ⅱ型糖尿病的食品，保健品或药品中的应用，动物实验结果表明，预防、治疗Ⅱ型糖尿病及肾病并发症具有显著的效果，且本发明中黄绿卷毛菇多糖的制备方法成本低，提取工艺简单,效果明显，无毒副作用，既可食用又可药用，故可开发成安全有效地预防、改善或治疗型糖尿病的食品或药品。
本发明提供的抗糖尿病药物或保健品还可以是混合有其它与黄绿卷毛菇多糖配合使用对治疗糖尿病有积极作用的药物成分。
本发明提供的黄绿卷毛菇多糖制备抗糖尿病药物或保健品的用途，所制备而得的抗糖尿病药物或保健品，本领域技术人员可以加入稳定剂等，只要不影响黄绿卷毛菇多糖药效的发挥，所得的抗糖尿病药物或保健品均在本发明要求保护的范围内。
动物实验结果表明，黄绿卷毛菇多糖可以显著降低小鼠体重过速增长和空腹血糖，改善小鼠口服糖耐量，降低曲线下面积（AUC），能降低db/db小鼠体重的增长速度，显著降低总胆固醇水平，具有良好的降血脂作用，并且具有显著的抗氧化和抗炎活性，降低机体氧化应激及炎症造成的的肾脏损伤，具有良好的肾脏保护作用。
本发明的积极效果在于：提供了一种黄绿卷毛菇多糖，同时提供了该多糖的制备方法；本发明黄绿卷毛菇多糖可以用于制成防治糖尿病和糖尿病肾病药物或保健品；黄绿卷毛菇多糖作为食药用菌资源中获得的一种天然产物，毒副作用小，同时还具有显著的抗氧化应激和抗炎作用，进而发挥抗Ⅱ型糖尿病及肾病并发症的作用，可用于开发安全有效的预防、改善或治疗Ⅱ型糖尿病及糖尿病引起的肾脏并发症的药物和保健品，具有极高的食用价值、药用价值和经济价值。
附图说明
图 1为本发明黄绿卷毛菇多糖（FLPs）对糖尿病小鼠体重的影响；
图2 为本发明黄绿卷毛菇多糖(FLPs) 对糖尿病小鼠血糖的影响；
图3为本发明黄绿卷毛菇多糖（FLPs）对糖尿病小鼠口服糖耐量曲线下面积AUC的影响；
图4为本发明黄绿卷毛菇多糖（FLPs）对糖尿病小鼠血清总胆固醇的影响；
图5为本发明黄绿卷毛菇多糖（FLPs）对糖尿病小鼠血清高密度脂蛋白的影响；
图6为本发明黄绿卷毛菇多糖（FLPs）对糖尿病小鼠的抗氧化活性的影响；
图7为本发明黄绿卷毛菇多糖(FLPs) 对糖尿病小鼠的抗炎活性的影响。
具体实施方式
现结合实施例，对本发明做进一步具体说明，虽然实施例描述了本发明的具体实施方式，但是本领域的技术人员应当理解，这仅仅是举例说明，本发明的保护范围是由所附权利要求书限定的，本领域的技术人员在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式做出多种变更或修改，这些变更和修改均落入本发明的保护范围。
实施例1：
将黄绿卷毛菇子实体1kg置于干燥箱内，55℃干燥至恒重，粉碎，过筛，采用经典水提醇沉法，过筛粉末中加入10kg蒸馏水，于50℃温度下热水浸提1h，5500r/min离心15min，提取2次，合并上清液，采用0.1% 的木瓜蛋白酶和Sevag试剂联用法去蛋白，透析，真空低温冷冻干燥48小时，得干燥粉末，真空低温冷冻干燥48小时，得干燥粉末。
实施例2：
将5kg黄绿卷毛菇子实体置于干燥箱内，干燥至恒重，粉碎，过筛，采用传统的水提醇沉法，过筛粉末中加入40kg蒸馏水，于70℃温度下热水浸提4 h，5500r/min离心15min，提取2次，合并上清液，采用0.1% 的木瓜蛋白酶和Sevag试剂联用法去蛋白，透析，真空低温冷冻干燥48小时，得干燥粉末。
实施例3
将10kg黄绿卷毛菇子实体置于干燥箱内，干燥至恒重，粉碎，过筛，采用传统的水提醇沉法，过筛粉末中加入60kg蒸馏水，于100℃温度下热水浸提6 h，5500r/min离心15min，提取2次，合并上清液，采用0.1% 的木瓜蛋白酶和Sevag试剂联用法去蛋白，透析，真空低温冷冻干燥48小时，得干燥粉末。
通过以下试验进一步证明本发明在预防、改善或治疗糖尿病中医用用途：
试验例1
本发明Ⅱ型糖尿病db/db小鼠模型中的药理作用研究：
动物：SPF级 db/db和db/m+小鼠，雄性，8周龄，共60只，购买于南京大学模式动物研究中心。实验动物自由摄食饮水，保持在23±1℃下12h光暗周期条件下饲养。
适应性喂养1周后，10只db/m+小鼠作为空白对照组，将血糖＞11.1 mmol/L 的db/db小鼠随机分为5组，包括模型组、阳性对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组10只，给药8周，每周测量体重和血糖，末次给药结束后测定小鼠口服糖耐量，具体给药情况如下：a. 模型组：等体积生理盐水灌胃，10只；b. 阳性对照组：0.10g/kg 盐酸二甲双胍（Met），灌胃给药，10只；
本发明实施例1
c. 低剂量组：100 mg/kg黄绿卷毛菇多糖溶液（FLPs），灌胃给药，10只；
本发明实施例2
d. 中剂量组：200 mg/kg黄绿卷毛菇多糖溶液（FLPs），灌胃给药，10只；
本发明实施例3
e. 高剂量组：400 mg/kg黄绿卷毛菇多糖溶液（FLPs），灌胃给药，10只。
f. 正常空白对照组：等体积生理盐水灌胃，10只。
实验小鼠给药8周后，于前一天禁食12h以上，不禁水，测量小鼠体重及空腹血糖值，各组大鼠给予2.0g/kg葡萄糖溶液灌胃，灌胃后分别于0min、30min、60min、90min、120min和240min，尾静脉取血，检测血糖值，应用梯形法计算血糖曲线下面积(AUC)： AUC=（0 min血糖值+30 min血糖值）*0.25+（30 min血糖值+60 min血糖值）*0.25+（60 min血糖值+120 min血糖值）*0.5。
试验结果表明：本发明黄绿卷毛菇多糖能够在一定程度上抑制小鼠体重过速增长，缓解db/db小鼠的肥胖症状；对db/db小鼠空腹血糖具有一定的控制和降低作用，并且可以改善糖尿病小鼠口服糖耐量，显著降低曲线下面积（AUC）（P＜0.05），结果参见图1图2和图3。
试验例2
本发明对糖尿病小鼠血脂的影响
应用ElISA试剂盒检测小鼠血清中总胆固醇（TC）和高密度脂蛋白（HDL-C）的水平。
实验结果表明，模型组小鼠高密度脂蛋白降低，总胆固醇升高，给药组可以显著降低总胆固醇水平，提高HDL-C的水平，但不具有显著性，结果参见图4和图5。
试验例3
本发明对糖尿病小鼠的抗氧化活性
应用ELISA试剂盒检测小鼠肾脏组织中谷胱甘肽过氧化物酶的活性。
实验结果表明，模型组较db/m+空白组GSH-Px水平显著下降（P<0.001），中剂量（200mg/kg）给药组可以显著提高其含量水平，进而增强自由基清除能力，结果参见图6。
试验例4
应用ELISA试剂盒检测小鼠肾脏组织中炎症因子IL-2的水平
实验结果表明，与空白对照组db/m+相比，模型组db/db小鼠肾脏组织中炎症因子IL-2含量显著增加（P<0.05），给药治疗后，炎症因子IL-2含量显著降低，结果参见图7。说明黄绿卷毛菇多糖对肾脏组织中部分炎症因子具有一定的抑制作用，缓解糖尿病肾病并发症的发展。
动物实验结果表明：黄绿卷毛菇多糖具有良好的体重改善及降血糖和降血脂作用，同时具有抗氧化，改善氧化应激状态的作用，对肾脏具有抗炎的作用，进而起到肾脏保护作用，缓解糖尿病肾病的发展。因此，黄绿卷毛菇多糖对Ⅱ型糖尿病及糖尿病肾病并发症具有良好的改善、缓解和治疗作用。
Claims (1)
1.一种黄绿卷毛菇多糖在制备预防、改善或治疗Ⅱ型糖尿病的药物中的用途；
上述的黄绿卷毛菇多糖是通过以下制备方法制备的：
将黄绿卷毛菇子实体置于干燥箱内，干燥至恒重，粉碎，过筛，采用传统的水提醇沉法，过筛粉末中加入10~60倍重量蒸馏水，于50~100℃温度下热水浸提1~6 h，5500r/min离心15min，提取2次，合并上清液，采用0.1% 的木瓜蛋白酶和Sevag试剂联用法去蛋白，透析，真空低温冷冻干燥48小时，得干燥粉末。
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