CN112843101A - 干巴菌在保护肝脏损伤中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抑制和减少化学性肝毒性物质所致肝组织与细胞损伤的方法。本发明采用干巴菌水提物来制备用于预防和/或减少和/或逆转肝组织与细胞损伤的药物。本发明干巴菌水提物制备方法简单,可进行工业化生产制备;所制备的水提物的活性良好,可应用于化学性肝损伤。
Description
技术领域
本发明涉及治疗和/或预防哺乳动物由化学性肝毒性物质所致肝组织与细胞损伤的方法。更具体地,本发明涉及通过干巴菌或其水提物的给药预防和/或减少和/或逆转肝组织与细胞损伤。
本申请受国家重点研发计划资助,课题编号:2018YFD0400201,课题名称:食用菌资源高效挖掘与特色加工原料数据库构建。
背景技术
肝脏是人体新陈代谢最重要的器官之一,许多因素如药物、毒物、乙醇等都可以诱导肝损伤。严重或持续的肝损伤将导致各种慢性肝病,直至肝衰竭。肝损伤可分为化学性肝损伤和免疫性肝损伤两大类,其中化学性肝损伤可由多种化学性肝毒性物质引起,包括四氯化碳、对乙酰氨基酚、乙醛等。其中,四氯化碳就是一种经典的亲肝毒物,可引起急性化学性肝损伤,研究中被广泛用于构建肝纤维化和肝硬化的动物模型。近年来,急性肝损伤的发病率逐年增加,各类肝病严重威胁着人类的健康,因此研究抗肝损伤的天然产物或药物,具有十分重要的意义。
干巴菌(Thelephora ganbajun),又称牛牙齿菌或对花菌,属于担子菌亚门(Basidiomycotina)层菌纲(Hymenomycetes)非褶菌目(Aphyllophorales)革菌科(Thelephoraceae)革菌属(Thelephora)的一类真菌,主要生长于亚热带云南松林或针阔混交林下,为云南特有珍稀野生菌。
干巴菌子实体一年生,丛生,呈扇状或莲座状瓣片,分枝叶片扇形,无菌盖和菌褶,枝端扁平呈花瓣状,密集丛生为蓬,形美似绣球花,全菌干燥革质。其花瓣状小枝互相交错,波状弯曲至扭曲,嫩时脆而易碎,老时柔韧,子实层生于瓣畔之下侧。夏秋季生于松林中地下,主要分布于云南600~2300米的松林下,与云南松等松属植物形成外生菌根。
同其它食用菌相比,干巴菌不仅具有香味浓郁、肉质脆嫩、嚼味无穷,味道鲜美的特点,还含有丰富的营养物质,如氨基酸、蛋白质、维生素、多糖等,营养保健价值高。有研究表明,干巴菌具有抗氧化、抗肿瘤、提高免疫力、延缓衰老等功效。
发明内容
本发明涉及治疗和/或预防哺乳动物由化学性肝毒性物质所致肝组织与细胞损伤的方法。本发明的发明人通过研究发现,干巴菌具有很高的预防和/或减少和/或逆转肝组织与细胞损伤的活性,从而完成了本发明。
本发明保护以下技术方案:
干巴菌在制备治疗或预防或逆转或减少肝组织与细胞损伤的药物或保健品中的用途。
根据本发明,干巴菌可采用本领域已知的制备工艺加工成适于制药的形式,包括但不限于:采用溶剂提取,以提取物为活性成分进行制药或制成保健品,在制药或制成保健品时任选进一步添加药学上可接受的辅料;整个菌体经冷冻干燥后磨成细粉,任选进一步添加药学上可接受的辅料进行制药或制成保健品。
根据本发明,所述的药品或保健品可以是液体制剂、固体制剂、半固体制剂,包括但不限于:口服液、片剂、颗粒剂、胶囊剂、膏剂等。
根据本发明,优选以干巴菌溶剂提取物为活性成分进行制药或制成保健品。所述溶剂提取物可以是溶剂提取液的形式,或者是溶剂提取液的浓缩液或稠膏,或者是将溶剂提取液浓缩干燥后得到的固体干物质。
进一步,本发明保护以下技术方案:
干巴菌的溶剂提取物在制备治疗或预防或逆转或减少肝组织与细胞损伤的药物或保健品中的用途。
根据本发明,用于提取所述溶剂提取物的溶剂可以是本领域常用的天然药物提取用溶剂,包括但不限于:醇类、醚类、酮类、水等。优选为醇类(例如C2-C6的醇)、水或者醇类的水溶液(例如C2-C6的醇的水溶液)。更优选为乙醇、水、或者50-90%的乙醇水溶液。从提取便利性和安全性角度出发,优选采用水。
本发明的一个优选实施方式是:干巴菌水提物在制备治疗或预防或逆转或减少肝组织与细胞损伤的药物或保健品中的用途。所述水提物可以是液体、浓缩液、稠膏或者固体形式。
根据本发明,所述干巴菌水提物的制备方法包括:
用水在80-110℃下浸提,取提取液;任选重复多次浸提;任选将提取液浓缩。
根据本发明,每次浸提时间为20-60分钟,例如可以是30-40分钟。
根据本发明,优选在90-100℃下浸提。
根据本发明,可以采用新鲜的干巴菌或者干燥的干巴菌进行浸提。本领域技术人员可以根据干巴菌的含水状况,调整浸提所用水量。对于干燥的干巴菌,每次浸提可以采用每克干巴菌加水10-50ml,例如25ml、30ml。
根据本发明,可采用本领域已知的浓缩方法进行浓缩,包括但不限于加热浓缩,减压蒸馏浓缩。
根据本发明,任选对提取液或浓缩后的提取液进行过滤。
在本发明的一个实施方式中,所述干巴菌水提物的制备方法包括:
(1)称取干巴菌,加蒸馏水加热至沸腾,保持微沸状态,浸提一段时间;
(2)采用与步骤(1)相同的方法进行多次浸提;
(3)将多次浸提获得的提取液合并,浓缩。
根据本发明,步骤(1)中,优选地,取干巴菌50-100g,加1000-3000ml蒸馏水加热至沸腾,保持微沸状态,浸提20-40min。在本发明的具体实施方式中,取干巴菌60g,洗净后,加1500ml蒸馏水加热至沸腾,保持微沸状态,浸提30min。
根据本发明,步骤(2)中,优选地,采用与步骤(1)相同的方法浸提2-6次,例如,浸提3次。
根据本发明,步骤(3)中,优选地,将多次浸提获得的提取液合并后进行加热浓缩。更优选地,将加热浓缩后的液体经多层纱布过滤。
根据本发明,优选地,将水提物进行浓缩,使每1ml水提物约相当于0.5-2g干巴菌干重量,即浓度为0.5-2g干巴菌干重量/ml,在本发明的具体实施方式中,浓度为0.8g干巴菌干重量/ml。
根据本发明,将所述干巴菌水提物施用于肝毒性化合物所致的受损肝组织与细胞可预防和/或减少和/或逆转所述肝组织与细胞损伤。
根据本发明,所述肝组织与细胞损伤是由化学性肝毒性物质引发的。
根据本发明,所述化学性肝毒性物质选自酒精、四氯化碳、对乙酰氨基酚、乙醛等。
根据本发明,所述肝组织与细胞损伤是中毒性肝炎、肝硬化和肝纤维化。
根据本发明,所述干巴菌水提物可以在药学上可接受的剂型中按照适宜的剂量给予人类患者,例如可以按照相当于每天500mg-3000mg干巴菌干重/kg体重的量给予。当口服给予干巴菌水提物时,可以将其加辅料配制成片剂、粉剂或口服液。还可以保护性或预防性地给予所述干巴菌水提物。
本发明通过实验对多种食用菌的活性进行了对比,所述食用菌包括:干巴菌、蛹虫草、黄金菇、红乳牛肝菌、红菇、绣球菌、桑黄、虎掌菌、真姬菇、猴头菇、鸡油菌、鸡腿菇、香菇等,从中筛选出对四氯化碳诱导的小鼠肝损伤具有显著保护作用的干巴菌。
本发明采用沸水浸提获得干巴菌水提物,然后进行分剂量组检测,采用组织病理切片、ALT以及LDH作为检测指标,验证了干巴菌水提物对小鼠肝损伤的保护作用。
本发明的干巴菌水提物的制备方法简单,可进行工业化生产制备;所制备的水提物的活性良好,可有效应用于化学性肝损伤的预防和治疗。
附图说明
图1:对照组小鼠肝组织病理切片图;
图2:四氯化碳模型组小鼠肝组织病理切片图;
图3:干巴菌水提物低剂量组(8g/kg·BW)小鼠肝组织病理切片图;
图4:干巴菌水提物中剂量组(16g/kg·BW)小鼠肝组织病理切片图;
图5:干巴菌水提物高剂量组(24g/kg·BW)小鼠肝组织病理切片图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步描述。需要说明的是,实施例不能作为对本发明保护范围的限制,本领域的技术人员理解,任何在本发明基础上所作的改进和变化都在本发明的保护范围之内。
以下实施例所用到的常规化学试剂均可商购获得。实施例中所用食用菌购自北京健旭康技术有限公司。
实施例1:食用菌水提物的制备
干巴菌水提物的制备方法包括:称取干燥干巴菌60g,洗净后,加1500ml蒸馏水加热至沸腾,保持微沸状态(100℃),浸提30min,倒出提取液;再加入1500ml蒸馏水,重复前述方法热提取。一共热提取3次,将3次提取的液体合并后进行加热浓缩,经四层纱布过滤后,制得75ml干巴菌水提液,每1ml水煎剂相当于0.8g蘑菇干重量,即浓度为0.8g/ml。水提液置于4℃冰箱中密封保存备用。
蛹虫草、黄金菇、红乳牛肝菌、红菇、绣球菌、桑黄、虎掌菌、真姬菇、猴头菇、鸡油菌、鸡腿菇、香菇等的水提物的制备方法与干巴菌水提物的制备方法相同。
实施例2:食用菌水提物对四氯化碳诱导肝损伤小鼠模型的保护效果分析
实验动物:SPF级ICR小鼠,雄性,体重18-22g,购自北京大学医学部实验动物科技部,实验动物使用许可证号:SCXK(京)2016-0010。饲养条件符合实验动物福利伦理委员会的要求,饲料从军事医学科学院实验动物中心处购买,自由饮水。动物饲养环境温度为22~24℃,湿度为40%~50%,明暗周期为12h/12h,自由通风。
实验方法:将小鼠随机分组,包括对照组、CCl4模型组、食用菌组。对照组和模型组给予去离子水0.5ml/d,食用菌组给予食用菌水提物(给药剂量按照每毫升水提物相当于多少克食用菌干重,表示为每公斤体重给多少克食用菌干重,即g/kg·BW),连续灌胃6天,末次给药1h后,除对照组外,其余各组腹腔注射1%四氯化碳油溶液0.1ml/10g。20h后对小鼠眼部取血,分离血清,用乳酸脱氢酶检测试剂盒和丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒测定血清中LDH和ALT的含量。实验数据以均数±标准差表示,采用SPSS 20.0统计软件对实验结果进行统计学分析,P<0.05表示差异有统计学意义。
实验结果:
表1食用菌水提物对小鼠血清ALT、LDH的影响(1%CCl4模型组)
表2食用菌水提物对小鼠血清ALT/LDH的影响(1%CCl4模型组)
注:与对照组比较,#表示P<0.05,##表示P<0.01;与模型组比较,*表示P<0.05,**表示P<0.01。
由表1和表2可见,与对照组相比,CCl4模型组的ALT值均增高(P<0.05),表明肝损伤模型建立成功。在众多食用菌水提物中,干巴菌水提物对降低四氯化碳导致的ALT和LDH升高的活性最强。
实施例3:干巴菌水提物对四氯化碳诱导肝损伤小鼠模型的保护效果分析
实验方法:25只小鼠随机分为5组,即干巴菌高、中、低剂量组,对照组和模型组,每组5只。
干巴菌水提物高、中、低剂量组给药量分别为24g/kg·BW、16g/kg·BW、8g/kg·BW,对照组和模型组给予去离子水0.5ml/d。连续灌胃6天,末次给药1h后,除对照组外,其余各组腹腔注射0.8%四氯化碳油溶液0.1ml/10g。20h后对小鼠眼部取血,分离血清,用乳酸脱氢酶检测试剂盒和丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒测定血清中LDH和ALT的含量;迅速摘取肝脏,测定重量后,取肝大叶的一部分于10%甲醛溶液固定,常规脱水、包埋、切片、HE染色后于显微镜下观察肝组织的形态。实验数据以均数±标准差表示,采用SPSS 20.0统计软件对实验结果进行统计学分析,P<0.05表示差异有统计学意义。
实验结果:
(1)干巴菌水提物对血清ALT、LDH的影响
表3干巴菌水提物对血清ALT、LDH的影响
注:与对照组比较,#表示P<0.05,##表示P<0.01;与模型组比较,*表示P<0.05,**表示P<0.01。
由表3可见,与对照组相比,CCl4模型组的ALT、LDH值均增高(P<0.01),表明肝损伤模型建立成功。与模型组相比,各剂量组的ALT值均下降,中、高剂量组的差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);各剂量组的LDH值均下降,中、高剂量组与模型组相比,具有显著性差异(P<0.01)。各剂量组的ALT和LDH值均随着剂量的升高呈逐渐降低的趋势,具有剂量效应关系,证明干巴菌水提物对四氯化碳所致肝损伤有保护作用。
(2)肝组织病理变化:
由图1可见,对照组小鼠肝细胞结构组织正常,肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列,细胞核分布均匀,呈球形,肝小叶结构完整;
由图2可见,模型组小鼠肝组织损伤严重,肝细胞排列紊乱,气球样变,且中央静脉区有大量炎细胞浸润;
由图3-5可见,干巴菌各剂量组细胞排列较为整齐,中央静脉区有炎细胞浸润现象,有气球样变,但较模型组程度稍轻,且随着剂量的增加,肝损伤的程度逐渐减轻。
肝脏组织病理学检查是肝脏损伤或疾病明确诊断的金标准,通过肝脏切片可以观察到模型组以及给药组肝脏的病变性质和病变程度。以上实验结果说明干巴菌水提物对四氯化碳所致的肝损伤有良好的保护或改善效果。
上述说明详细描述了本发明的某些发明实施方式,但本发明并不限于上述实施方式,在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内,还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。
Claims (9)
1.干巴菌在制备用于治疗和/或预防和/或减少和/或逆转肝组织与细胞损伤的药物或保健品中的用途。
2.干巴菌溶剂提取物在制备用于治疗和/或预防和/或减少和/或逆转肝组织与细胞损伤的药物或保健品中的用途;
优选,所述溶剂提取物是水提物;
优选,所述水提物是液体、稠膏或者固体。
3.根据权利要求2所述的用途,其特征在于,所述干巴菌水提物的制备方法包括:用水在80-110℃下浸提,取提取液;任选重复多次浸提;任选将提取液浓缩;
优选,每次浸提时间为20-60分钟;
优选,在90-100℃下浸提。
4.根据权利要求3所述的用途,其特征在于,所述干巴菌水提物的制备方法包括:
(1)称取干巴菌,加蒸馏水加热至沸腾,保持微沸状态,浸提一段时间;
(2)采用与步骤(1)相同的方法进行多次浸提;
(3)将多次浸提获得的提取液合并,浓缩。
5.根据权利要求4所述的用途,其特征在于,步骤(1)中,浸提20-40min。
6.根据权利要求4或5所述的用途,其特征在于,步骤(2)中,采用与步骤(1)相同的方法浸提2-6次。
7.根据权利要求1-6任一项所述的用途,其特征在于:所述肝组织与细胞损伤由化学性肝毒性物质所致。
8.根据权利要求7所述的用途,其特征在于:所述化学性肝毒性物质选自四氯化碳、酒精、对乙酰氨基酚或乙醛中的一种或多种。
9.根据权利要求1-8任一项所述的用途,其特征在于:所述肝组织与细胞损伤选自中毒性肝炎、肝硬化或肝纤维化。
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