CN107184680A - 一种黄毛草莓和积雪草组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物制备技术领域，涉及一种由黄毛草莓和积雪草组成的组合物。本发明制备得到的黄毛草莓和积雪草组合物具有降血糖、降血脂、提高肝脏抗氧化能力、保护肝脏结构和功能的作用，可用于改善糖尿病引起的高血糖、体重减轻和“三多”症状；可用于降低血脂水平；可用于提高学习记忆能力，保护海马神经突触间的联系等症状，可用于保护听力、修复听力损伤的作用，具有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于药物制备技术领域，涉及黄毛草莓、积雪草组合物及其制备方法，及其在降低血糖、降低血脂、提高机体抗氧化能力、保护肝脏结构和功能及修复听力受损中的应用。
背景技术
黄毛草莓为蔷薇科草莓属植物，别名锈毛草莓、白草莓，生长在海拔700-3000m的山坡草地或沟边林下，分布于我国云南、广西、四川、贵州等地，有清热解毒、活血祛瘀的功效，具有较好的药用价值且资源丰富。据世界卫生组织报告，心血管疾病是全球的头号死因，严重威胁着人们的健康。心血管疾病包括糖尿病、高血脂等。糖尿病是一种由遗传或后天胰岛素分泌缺陷引起的以糖代谢紊乱及高血糖为特征的代谢性疾病。糖尿病患者伴随着血糖持续升高，体重急剧减轻，肝、肾、胰功能异常，另外，糖尿病患紊乱的代谢往往会产生大量氧自由基，造成其它并发症。高血脂是由脂肪代谢或运转异常造成血脂浓度异常的疾病，动脉内膜中沉积大量脂质会导致血管管腔变窄，血流减慢，堵塞动脉导致冠心病和脑血管疾病的产生。
发明内容
本发明的目的在于提供一种在黄毛草莓和积雪草组合物，用于降血糖、降血脂、提高肝脏抗氧化能力和保护肝脏的结构和功能、增强学习记忆能力、修复听力损伤。
本发明提供了一种黄毛草莓和积雪草组合物，其包括黄毛草莓和积雪草的乙醇浸提物；其中，所述组合物按黄毛草莓和积雪草的质量比为1：2-2：1浸提得到。
本发明还提供了一种黄毛草莓和积雪草组合物制备方法，包括以下步骤：
(1)将黄毛草莓和积雪草整株干燥后切碎，使用乙醇浸提，制备浸提物；
(2)将步骤(1)制备的浸提物蒸发后，过滤取上清，即得到所述黄毛草莓和积雪草组合物；
步骤(1)中，所述乙醇浓度为50％-95％；优选地，为75％。
步骤(1)中，所述黄毛草莓和积雪草的质量比为1：2-2：1；优选地，为1：1。
步骤(1)中，所述黄毛草莓和积雪草的总质量与乙醇的体积比为12-30g：400-700ml；优选地，为24g:500ml。
步骤(1)中，所述浸提的温度为18-25℃；优选地，为25℃。
步骤(1)中，所述浸提的时间为2-4小时；优选地，为3小时。
步骤(1)中，所述黄毛草莓、积雪草包括其植物的根、茎、叶。
步骤(2)中，所述蒸发可采用旋转蒸发仪蒸发。
步骤(2)中，所述蒸发的时间为1-2小时；优选地，为1.5小时。
步骤(2)中，所述蒸发的温度为35℃-45℃；优选地，为40℃。
步骤(2)中，所述黄毛草莓和积雪草组合物的生药浓度为0.8g/ml-1；其中，所述生药浓度是指制备得到的合剂原液浓度。
本发明还提出了一种黄毛草莓和积雪草组合物，其包括黄毛草莓和积雪草的乙醇浸提物。
本发明还提出了一种由上述制备方法制备得到的黄毛草莓和积雪草组合物，其包括黄毛草莓和积雪草的乙醇浸提物。
本发明还提供了将所述黄毛草莓和积雪草组合物用于制备降血糖的食品/保健品和药物中的应用。
本发明还提供了将所述黄毛草莓和积雪草组合物用于制备改善糖尿病引起的消瘦的食品/保健品和药物中的应用。
本发明还提供了将所述黄毛草莓和积雪草组合物用于制备改善糖尿病引起的“三多”症状的食品/保健品和药物中的应用。
本发明还提供了将所述黄毛草莓和积雪草组合物用于制备降血脂的食品/保健品和药物中的应用。
本发明还提供了将所述黄毛草莓和积雪草组合物用于制备提高肝脏抗氧化能力的食品/保健品和药物中的应用。
本发明还提供了将所述黄毛草莓和积雪草组合物用于制备保护肝脏的结构功能的食品/保健品和药物中的应用，尤其是用于保护高血脂患者的肝脏的结构和功能。
本发明还提供了将所述黄毛草莓和积雪草组合物用于制备增强学习记忆能力的食品/保健品和药物中的应用。
本发明还提供了将所述黄毛草莓和积雪草组合物用于制备保护海马神经元之间正常联系的食品/保健品和药物中的应用。
本发明还提供了将所述的黄毛草莓和积雪草组合物用于制备保护听力、修复听力损伤的食品/保健品和药物中的应用。
本发明研究表明，本发明黄毛草莓和积雪草组合物具有上述显著的有益效果，而单一的黄毛草莓或单一的积雪草并不具有前述功效。
本发明的有益效果在于，本发明首次使用黄毛草莓和积雪草组合物用于治疗STZ诱导的糖尿病小鼠的降血糖作用及高血脂大鼠的降血脂作用，其中组合物制备方法操作简单。本发明方法制备的组合物对血糖升高、血脂升高具有显著的降低作用，本发明方法制备的组合物能明显提高肝脏抗氧化水平，降低氧自由基对机体的损伤。本发明方法制备的黄毛草莓组合物能显著改善肝组织损伤的情况，保护肝脏的结构和功能，且能保护海马神经元的结构和功能，增强学习记忆能力。本发明方法制备的组合物能明显恢复小鼠听力损伤。
附图说明
图1A为实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对糖尿病小鼠摄食量的影响,B为组合物对糖尿病小鼠饮水量的影响。
图2为实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对糖尿病小鼠口服葡萄糖耐糖量的影响(n＝10)。
图3A为实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对高血脂大鼠摄食的影响，B为组合物对高血脂大鼠饮水的影响。
图4为实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对大鼠肝组织结构的影响(HE染色病理切片)；A为正常组，B为高脂模型组，C为辛伐他汀组，D为高剂量组合物组。
图5为实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对肝脏线粒体、内质网数量及结构的影响(肝组织电镜结果)；A为正常组，B为高脂模型组，C为辛伐他汀组，D为高剂量组合物组。
图6为实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对糖尿病小鼠学习记忆的影响，A为逃避潜伏期，B为目标象限滞留时间百分比。
图7为实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对海马神经元的影响(海马组织电镜图)；A为正常组，B为模型组，C为高剂量组，D为二甲双胍组。
具体实施方式
结合以下具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明。实施本发明的过程、条件、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。
实施例1黄毛草莓和积雪草组合物的制备
黄毛草莓与积雪草整株(包括根、茎、叶)干燥后剪碎，各称取12g，75％乙醇500ml室温下浸提3h，转移至旋转蒸发仪中真空蒸煮后过滤取上清液，制成生药浓度为0.8g·ml-1的黄毛草莓和积雪草组合物。
实施例2STZ诱导的糖尿病小鼠(STZ小鼠)模型构建
120只小鼠适应性饲养一周后，随机选择10只作为正常组(对照组)。剩余小鼠以STZ诱导I型糖尿病模型，按40mg·kg-1剂量腹腔注射0.4％STZ-枸橼酸钠溶液。正常组腹腔注射等量蒸馏水。建模1周，小鼠禁食6h，通过血糖仪测定空腹血糖值，弃去空腹血糖低于15mmol·L-1或大于30mmol·L-1的小鼠，选取空腹血糖高于15mmol·L-1且低于30mmol·L-1的小鼠作为STZ诱导的糖尿病小鼠。将建模成功且血糖值接近且不具有显著差异的的小鼠平均分为模型组、二甲双胍组、低剂量组、高剂量组和黄毛草莓组。
实施例3高血脂大鼠模型建立
70只SD大鼠适应性饲养1周后，随机选择10只大鼠作为空白对照的正常组，饲喂普通饲料，剩余60只大鼠饲喂高脂饲料建立高血脂大鼠模型，所有大鼠自由饮水，20天后禁食不禁水12h，尾静脉取血测定血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C四种血脂指标。从中取建模效果较好(血脂水平明显高于正常组)且体质量、血脂指标接近且不具有显著差异的50只高血脂大鼠，平均分为5组，分别为高脂模型组、辛伐他汀组和黄毛草莓组合物低剂量组、高剂量组以及黄毛草莓组。
实施例4黄毛草莓和积雪草组合物对STZ小鼠空腹血糖的影响
实施例2的各组小鼠均按10mL·kg-1体积灌胃，正常组(对照组)和模型组灌胃蒸馏水，低剂量组和高剂量组分别灌胃0.4g·kg-1和0.8g·kg-1实施例1制备的黄毛草莓和积雪草组合物，二甲双胍组(阳性组)灌胃0.15g/kg-1二甲双胍，黄毛草莓组灌胃0.4g·kg-1黄毛草莓提取物，1次/d，共4周。每周测定小鼠血糖，禁食6h后尾静脉采血，测定空腹血糖。
实验结果如表1所示，实施例1制备的黄毛草莓和积雪草组合物能显著降低糖尿病小鼠空腹血糖值，且浓度越高效果越明显。结果表明黄毛草莓和积雪草组合物具有降低空腹血糖的作用。
表1实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对STZ小鼠空腹血糖值的影响(n＝10)
注：与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01
实施例5实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对STZ小鼠体重的影响
按实施例4中的实验方法灌胃，测定小鼠体重。
表2实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对STZ小鼠体重的影响(n＝10)
注：与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01
实施例6实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对STZ小鼠摄食、饮水影响
按实施例4中实验方法灌胃，每天测定小鼠饮水量和摄食量。
结果如图1所示，实施例1黄毛草莓和积雪草组合物能有效改善糖尿病小鼠体重减轻的症状，明显改善其饮水量和摄食量增多的症状。结果说明黄毛草莓组合物具有增高糖尿病小鼠体重，改善其多饮多食的作用。
实施例7实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对STZ小鼠OGTT的影响
末次给药后(实施例4灌胃4周结束后)1d，进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)。小鼠禁食5h，正常饮食1h后，给予2g·kg-葡萄糖溶液灌胃，分别于葡萄糖处理后0，30，60，120min测定血糖值。
实验结果如图2显示，葡萄糖处理30min后，模型组小鼠血糖持续升高，60min时，黄毛草莓和积雪草组合物能有效恢复小鼠血糖值，120min时，已接近自身水平。实验结果说明，实施例1黄毛草莓和积雪草组合物能有效修复和改善糖尿病小鼠葡萄糖耐糖量，结果说明黄毛草莓积雪草组合物具有明显的降血糖作用。
实施例8实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对STZ小鼠血脂及抗氧化能力的影响
实施例7中OGTT实验结束后，小鼠眼球采血，处死后立即取出肝组织，制成肝匀浆。全血于冰浴中静置15min，2000rpm离心20min，测定肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量，均按试剂盒说明书操作。
实验结果如表3所示，与正常组(对照组)相比，模型组SOD、CAT含量显著降低，MDA累积明显升高，说明其肝脏抗氧化水平显著降低，实施例1黄毛草莓和积雪草组合物能有效恢复糖尿病小鼠的血脂水平，同时可明显提高糖尿病小鼠肝脏抗氧化能力。
表3黄毛草莓和积雪草组合物对STZ小鼠血脂及肝脏抗氧化水平的影响(n＝10)
注：与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01
实施例9实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对高血脂大鼠体重的影响
实验灌胃期间，正常组(对照组)大鼠以普通饲料饲喂，模型组、辛伐他汀组和低剂量组、高剂量组和黄毛草莓组均继续以高脂饲料饲喂。各组均按10mL·kg-1体积灌胃，其中正常组和模型组灌胃蒸馏水，辛伐他汀组灌胃0.4mg·ml-1的辛伐他汀溶液，低剂量组、高剂量组分别灌胃0.4g·ml-1、0.8g·ml-1的黄毛草莓和积雪草组合物，黄毛草莓组灌胃0.4g·ml-1的黄毛草莓提取物，1次/d，共3周。灌胃期间每周测量一次体重。
实验结果如表4所示，与正常组(对照组)相比，模型组大鼠体重显著增加；实验结果表明，实施例1黄毛草莓和积雪草组合物能有效改善糖尿病大鼠体重加重的情况，且组合物浓度越高，效果越明显，说明组合物能有效降低高血脂体重。
表4实施例1黄毛草莓和积雪草黄毛草莓组合物对高血脂症大鼠体重的影响(n＝10)
注：与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01.
实施例10实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对高血脂大鼠摄食、饮水的影响
实验操作同实施例9，灌胃期间，每日记录大鼠饮水和摄食。
实验结果如图3所示，其中A为实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对大鼠摄食量的影响，B图为组合物对大鼠饮水量的影响。与正常组(对照组)相比，模型组大鼠摄食和饮水量显著升高；实验结果表明，组合物能显著降低高血脂大鼠摄食和饮水量，且剂量越高，效果越明显。
实施例11实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对高血脂大鼠血脂的影响
实施例9中3周给药结束后，禁食不禁水12h，尾静脉取血，全血于4℃冰箱中静置15min后，3000rpm离心15min，吸取上清即得到血清。按试剂盒说明书操作测定血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C四种血脂指标。
实验结果如表5所示，与正常组(对照组)相比，高脂模型组大鼠血清中血脂含量明显升高；实验结果表明，实施例1黄毛草莓和积雪草组合物能显著降低血清中TC、TG、LDL-C含量，明显提高HDL-C含量，且浓度越高，效果越明显。
表5实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对高血脂大鼠血脂的影响(n＝10)
注：与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01.
实施例12实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对高血脂大鼠抗氧化水平的影响
实施例9中3周给药结束后禁食不禁水12h，处死小鼠后，立即取出肝脏组织，匀浆后按试剂盒说明书操作测定肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。
实验结果如表6所示，与正常组相比，高脂模型组SOD含量显著降低，说明其肝脏抗氧化水平显著降低；实验结果说明，实施例1黄毛草莓和积雪草组合物显著降低了MDA含量，明显提高了SOD活性，且剂量越高，效果越明显。结果说明，实施例1黄毛草莓和积雪草组合物具有显著提高肝脏的抗氧化能力。
表6实施例1黄毛草莓和积雪草黄毛草莓组合物对高血脂大鼠肝脏中MDA和SOD的影响(n＝10)
注：与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01.
实施例13实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对高血脂大鼠肝组织结构、肝细胞核、线粒体及内质网的影响
实施例9中，给药结束后，处死大鼠，立即取出肝脏并用10％甲醛固定，石蜡包埋、切片，常规HE染色，制成固定装片后进行观察石蜡切片。
结果如图4所示，模型组肝组织结构萎缩，空泡化明显，干细胞形态皱缩，实施例1黄毛草莓和积雪草组合物组肝组织结构清晰，少见肝细胞坏死，胞质内脂滴较少，结果说明，组合物对肝组织具有保护作用。
实施例9中，给药结束后，处死大鼠，立即取出肝脏叶边缘部分组织，切成1mm×1mm组织块，并用2.5％戊二醛固定，4℃冰箱保存备用，染色固定切片后透射电镜观察。
结果如图5所示，模型组细胞核固缩，线粒体肿胀，疏松，空泡化明显，粗面内质网数量减少且排列疏松；高剂量组合物组能细胞核形状完整，线粒体排列紧密，粗面内质网数量明显增多。
实施例14组合物对糖尿病小鼠学习记忆的影响
按实施例4灌胃后，将水迷宫分为四个象限，分别记为1、2、3、4，平台置于第4象限。将一直径为5cm的圆形平台置于第一象限中央。水箱子水刚好没过平台。实验第一天，将小鼠随机从一象限放入，以后每一天往前推一个象限。若小鼠在60S内找到平台，记录潜伏期，并使其在平台上停留10S后回到鼠笼；若在60S内找不到平台，则潜伏期为60S，同时需人工引导至平台停留10S后回到鼠笼。下一个起始位点重复上述实验直至完成当天所有4个象限，训练连续进行五天。
定向航行实验结束后，撤去实验期间的平台。将小鼠从平台对面象限放入，60S后取出小鼠放入鼠笼，记录小鼠目标象限滞留时间百分比、小鼠游泳路线图。
如图6A所示，模型组逃避潜伏期时间增长，组合物能显著降低小鼠潜伏期，且浓度越高，效果越明显。如图6B所示，组合物组小鼠目标象限滞留百分比明显上升，接近正常组(对照组)，实验结果说明，组合物能明显提高小鼠学习记忆能力。
实施例15组合物对STZ小鼠海马神经元的影响
实施例4灌胃结束后，处死小鼠，立即取出大脑海马组织，切成1mm×1mm组织块，并用2.5％戊二醛固定，4℃冰箱保存备用，染色固定切片后透射电镜观察。
如图7所示，模型组海马神经元线粒体缺失，神经细胞突触数量减少，突触间膨大，肿胀、间隙增大，组合物组神经元胞体较大，线粒体数量明显增多，与周围神经元之间联系紧密，突触数量显著上升。结果显示，组合物能显著改善海马神经元间联系，具有保护海马神经元的作用。
实施例16听力损伤小鼠模型的构建
60只昆明小鼠适应性饲养一周后，随机选择10只作为正常组(对照组)，其余小鼠暴露于4～45kHZ，110dBSPL的白噪声中，每日暴露9h，共暴露10d，耳廓反射，即耳廓竖起以适应尖锐声音的现象消除后，将其随机分为模型组，盐酸氟桂利嗪组、黄毛草莓组、低剂量组、高剂量组。
实施例17黄毛草莓和积雪草复合物对小鼠听觉能力的影响
各组小鼠均按10mL·kg-1体积灌胃，正常组(对照组)和模型组灌胃蒸馏水，盐酸氟桂利嗪组灌胃1.5X10-3g·kg-1,低剂量组和高剂量组灌胃0.4g·kg-1和0.8g·kg-1实施例1制备的黄毛草莓和积雪草组合物，黄毛草莓组灌胃0.4g·kg-1黄毛草莓提取物。1次/d，共4周。灌胃结束后，测各组小鼠耳蜗电图(ECochG)，听性脑干反应(ABR)。
小鼠腹腔注射4mg/kg苯巴比妥钠液进行麻醉，采用YSSD-1000多功能诱发电位仪，刺激声为短波，声压级90dB，灵敏度6.2uv，带通频率100～1000HZ，进行ABR及ECochG实验。记录小鼠双耳各波潜伏期、波间期和复合动作电位(CAP)振幅变化。
对CAP振幅的影响结果如表7所示，与模型组相比，黄毛草莓和积雪草组合物(低剂量组和高剂量组)组CAP振幅明显上升。结果说明实施例1制备的黄毛草莓和积雪草组合物能显著恢复小鼠听力损伤，且浓度越高效果越明显。
对潜伏期和波间期的影响结果如表8所示，与模型组相比，黄毛草莓和积雪草组合物组(低剂量组和高剂量组)I、III波潜伏期和I-IV、I-V波间期均有显著恢复实施例1制备的黄毛草莓和积雪草组合物能明显改善听觉中枢功能。结果表明黄毛草莓和积雪草组合物对噪声性听力损伤具有治疗、修复作用。
表7实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对CAP振幅的影响(n＝10)
注：与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01
表8实施例1黄毛草莓和积雪草组合物对潜伏期和波间期的影响(n＝10)
注：与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01
本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。
Claims (13)
1.一种黄毛草莓和积雪草组合物，其包括黄毛草莓和积雪草的乙醇浸提物。
2.一种黄毛草莓和积雪草组合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将黄毛草莓和积雪草干燥后切碎，使用乙醇浸提，制备浸提物；
(2)将步骤(1)制备的浸提物蒸发后，过滤取上清，即得到所述黄毛草莓和积雪草组合物。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述乙醇浓度为50％-95％。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述黄毛草莓和积雪草的质量比为1：2-2：1。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述黄毛草莓和积雪草的总质量与乙醇的体积比为12-30g：400-700ml。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述浸提的温度为18-25℃；所述浸提的时间为2-4小时。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述蒸发的温度为35℃-45℃；所述蒸发的时间为1-2小时。
8.一种由权利要求2所述方法制备得到的黄毛草莓和积雪草组合物。
9.将权利要求1或8所述的黄毛草莓和积雪草组合物用于制备降血糖、改善糖尿病引起的消瘦、“三多”症状的食品/保健品和药物中的应用。
10.将权利要求1或8所述的黄毛草莓和积雪草组合物用于制备降血脂的食品/保健品和药物中的应用。
11.将权利要求1或8所述的黄毛草莓和积雪草组合物用于制备提高肝脏抗氧化能力、保护肝脏的结构功能的食品/保健品和药物中的应用。
12.将权利要求1或8所述的黄毛草莓和积雪草组合物用于制备增强学习记忆能力、保护海马神经元之间正常联系的食品/保健品和药物中的应用。
13.将权利要求1或8所述的黄毛草莓和积雪草组合物用于制备保护听力、修复听力损伤的食品/保健品和药物中的应用。
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
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Application publication date: 20170922 |