CN104490993A - 一种制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法及其作为醛糖还原酶抑制剂的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法及该提取物作为醛糖还原酶抑制剂的应用，包括步骤粉碎、浸泡、提取和冷冻干燥，与传统热回流提取法相比，本发明采用的超声提取法有效成分破坏少，提取率高，提取时间短、能耗低。所得提取物具有良好的抗氧化及抑制醛糖还原酶的作用，对醛糖还原酶的抑制机理为反竞争性抑制，该提取物具有预防或治疗糖尿病并发症包括糖尿病肾病、糖尿病神经病变和糖尿病眼病等的前景。并且作为天然提取物，具有副作用小，安全性高，活性好，工艺简便等优点。

Description

一种制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法及其作为醛糖还原酶抑制剂的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法及制备的提取物作为醛糖还原酶抑制剂的应用。

背景技术

糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一组由多病因引起的以慢性高血糖为特征的终身性代谢性疾病。糖尿病本身不一定造成危害，但长期血糖增高，大血管、微血管受损并危及心、脑、肾、周围神经、眼睛、足等，据世界卫生组织统计，糖尿病并发症高达100多种，是目前已知并发症最多的一种疾病。为此预防糖尿病的并发症是至关重要的社会问题。

目前，糖尿病并发症的治疗依赖于对血糖的控制，然而，随着胰岛素等药物的使用，糖尿病患者的血糖水平虽可以得到很好的控制，但临床上仍有许多患者相继出现进展性的肾脏、神经、视网膜等损害。因此标准的抗糖尿病药物并不适合作为糖尿病并发症治疗的药物选择，迫切需要用于糖尿病并发症的药物和治疗方式。

多元醇通路(polyol pathway，PP)是机体葡萄糖代谢的重要途径之一，多元醇通路的参与是由高浓度葡萄糖诱导的多种器官损伤的机制。其中醛糖还原酶(aldose reductase，AR)是该通路的关键限速酶。已经认为高氧化应激是多元醇通路参与细胞损伤的机制之一，即DM患者受体内高糖环境影响，糖氧化的增加和PP等通路的激活，导致机体氧化和抗氧化失衡，活性氧自由基产生过多，造成对组织和细胞的损伤,最终导致糖尿病眼病、糖尿病肾病、糖尿病神经病变等多种DM并发症的发生。另一方面，AR活性的增强又可激活PP，造成大量代谢产物山梨醇在细胞内堆积，使细胞结构的完整性和功能受到影响，最终引发一系列病变。但是目前可供临床使用的醛糖还原酶抑制剂依然很少，且多由人工合成，有些已经由于临床试验存在问题而退出。可见，具有AR抑制活性的天然抗氧化物质，在DM及其并发症治疗方面具有潜在的应用价值，且具有高效低毒的优点。

青钱柳，又名摇钱树、麻柳，胡桃科，我国南方多省均有发现，多以零星分布。据《中国中药资源志要》记载，其树皮、树叶具有清热消肿和止痛等功能。青钱柳因含有大量生物活性物质而具有独特的保健和药用价值。但是其对AR的抑制作用以及通过干预氧化应激和抑制AR而用于糖尿病并发症的防治，在国内外均未见相关研究报道。本发明可进一步扩大青钱柳药材的开发和利用，同时也为糖尿病患者的健康提供新的保障，可产生良好的社会效益和可观的经济效益。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法，包括步骤：

1)粉碎：青钱柳叶70～80℃烘干，粉碎机粉碎，过筛；

2)浸泡：按照药材与水重量比为1:10～30加水浸泡过夜；

3)提取：将步骤2)的混合溶液，以400～600W功率超声处理30～50分钟，温度45～55℃；趁热用四层100～200目滤布过滤，再用布氏漏斗抽滤，收集滤液，加入1％～3％的活性炭脱色，减压浓缩；

4)冷冻干燥：-15～-25℃，-0.02kPa以下冷冻干燥，得棕褐色粉末,即为所述具有备抗氧化活性的青钱柳提取物，简称CP。

作为对上述技术方案的改进，所述步骤1)中，所述粉碎机粉碎具体为将干燥青钱柳叶粉碎后过40目筛。

作为对上述技术方案的改进，所述步骤2)中，药材与水重量比为1:20，加水浸泡10～14h。

作为优选的技术方案，所述步骤3)中，所述超声处理功率为600W，提取时间为40min，提取温度为50℃。

作为对上述技术方案的改进，所述步骤3)中，减压浓缩压力为-0.09～-0.11MPa，温度为60～70℃，浓缩至原体积1/10～1/12。

作为对上述技术方案的改进，所述步骤4)中，冷冻干燥具体为：-20℃，-0.01kPa。

作为对上述技术方案的改进，将所述制备的具有抗氧化活性的青钱柳提取物再次加水溶解后，75～80％醇浓度下，醇沉10～14h，抽滤，沉淀用无水乙醇洗涤，干燥即得具有抗氧化活性的青钱柳提取物多糖，简称CPP。

作为优选的技术方案，所述75～80％醇浓度是加质量浓度为95％的乙醇使醇浓度达到75～80％。

表1、青钱柳提取实验因素水平表

表2、L₉(3⁴)正交试验设计表及结果

由表2可知极差值反映的因子影响顺序为A(超声功率)＞C(料液比)＞B(超声时间)，超声功率对总提取影响显著。提取时间过长、料液比过大均会给后续工作增加强度，会降低工作效率，而对提取效率增加不显著。综合考虑，青钱柳提取物的最佳提取工艺为A3B2C2，即超声功率600W，料液比1:20，超声40min。按此条件进行提取制备的具有抗氧化活性的青钱柳提取物，简称CP得率为5.08％。

上述方法制备的青钱柳提取物中经苯酚-硫酸法测定含有多糖以重量百分比计为(47.93±0.98)％

以下是葡萄糖标准曲线的绘制方法及实验数据。

吸取葡萄糖对照品溶液(0.4mg/ml)0、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12ml，分别加入蒸馏水1.00、0.96、0.94、0.92、0.90、0.88mL，分别加6％苯酚溶液1.0mL，立即滴加浓硫酸5.0mL，45℃反应15min后，490nm处测定吸光度值。以吸光度对体系中葡萄糖对照品浓度进行线性回归，得回归方程y＝8.6143x+0.0168(r＝9998)，测得CP中多糖含量(47.93±0.98)％。

上述方法制备的青钱柳提取物中经福林酚比色法测定含有总多酚以重量百分比计为(3.83±0.23)％。

以下是没食子酸标准曲线的绘制方法及实验数据。

精密量取0.2mg/ml的没食子酸标准溶液0，20，50，100，150，200，250μl，加蒸馏水补足至250μl。加入福林酚试剂0.4ml，摇匀，静置1min，再加入10％碳酸钠试液0.4ml，蒸馏水4.0ml，摇匀，显色20min，在波长760nm处测定各管吸光度，以没食子酸对照品含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为y＝19.18x-0.0042(r＝0.9994)，测得CP中多酚含量(3.83±0.23)％。

本发明所要解决的另一技术问题是提供一种具有抗氧化活性的青钱柳提取物作为醛糖还原酶抑制剂的应用。

以下为表明青钱柳提取物(CP)体外抗氧化活性的实验数据。

总抗氧化力测定：

采用南京建成科技有限公司的总抗氧化能力(T-AOC)试剂盒，微孔板定量测定。反应原理为抗氧化物质使Fe³⁺还原为Fe²⁺，后者与菲林类物质形成稳固的络合物，通过比色测定。CP加水溶解后，以浓度(mg/ml)为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制还原力曲线，CP的总抗氧化能力测定结果见图1。

结果表明CP具有良好的抗氧化活性，虽不及维生素C，但可为从天然产物中分离纯化抗氧化活性物质提供基础。

对DPPH自由基、超氧阴离子和羟自由基清除能力测定

DPPH溶于无水乙醇使其终浓度为0.2mmol/L。CP加水溶解成系列浓度，反应时加入等体积的DPPH溶液，避光放置15min，立即在波长515nm下测定吸光度，计算清除率。

超氧阴离子自由基和羟自由基能力清除能力均采用试剂盒检测。

结果表明，CP对这三种自由基都存在一定的抑制作用，其中对DPPH自由基和羟自由基的清除作用具有明显的优势。

以下为表明青钱柳提取物(CP)体外抑制醛糖还原酶(AR)活性的实验数据。

1、醛糖还原酶的制备：

取新鲜家兔晶状体两只放入离心管中，剪碎后加入预冷的蒸馏水1ml，冰浴下超声破碎至晶状体混悬液为白色乳浊状，4℃离心(l7465g×30min)，立即吸取无色透明的晶状体匀浆上清，4℃放置，24h内使用。

2、CP和CPP对醛糖还原酶的抑制作用测定：

反应在96孔酶标板上进行，体系总体积为100μl，按下表的体积加样，每组设3个复孔，依帕司他为阳性对照药物。以酶和底物作用后抑制辅酶代谢的能力表示酶活力，并且选择酶活力在60～70％的时间点来计算样品对醛糖还原酶的抑制率。CP和CPP加水溶解成系列浓度，按上述反应体系考察对AR的抑制作用。以浓度为横坐标，抑制率为纵坐标，绘制抑制曲线，见图2。

公式如下：酶活力(％)＝[(A_空白-A_对照)/(A_空白-A_校正)]×100％

抑制率(％)＝{[(A_药物-A_药物空白)-(A_对照-A_校正)]/(A_空白-A_对照)}×100％

表3 醛糖还原酶测定反应体系

由图2可见，CP和CPP对醛糖还原酶均有不同程度的抑制作用，其中CP的作用明显强于CPP，IC₅₀为0.15mg/ml，表明CP对AR有很好的抑制作用，但是其物质基础不以多糖类为主。

3、CP对醛糖还原酶抑制类型测定：

选择抑制作用较强的CP考察对醛糖还原酶的抑制类型。参照上述方法，可不设校正组和空白组，底物DL-甘油醛浓度依次为2.0，2.5，3.3，5.0和10mmol/L。在药物浓度分别为0.05mg/ml和0.1mg/ml时，记录每分钟NADPH吸光度值的降低，采用双倒数作图法，确定抑制剂的抑制类型为反竞争性抑制，即抑制剂通过与酶-底物复合物结合，抑制酶促反应的进行。

计算所得的米氏常数(K_m)和最大反应速度(V_max)见表4，可见随着抑制剂浓度的增加，K_m和V_max均逐渐减小，而V_max/K_m比值不变。

表4 酶反应动力学常数

以下为表明青钱柳提取物(CP)体内抗氧化及抑制醛糖还原酶作用的实验数据。

1、试样制备

青钱柳提取物加水溶解，配制成5mg/ml和10mg/ml浓度备用。

2、糖尿病大鼠模型制备

SPF级雄性Wistar大鼠，180～200g，适应性喂养1周。随机抽取12只为空白对照组，用普通饲料喂养。造模大鼠喂以高脂高糖饲料，第6周禁食12h后，STZ溶液35mg/kg左侧下腹部腹腔注射，空白组注射相同剂量的柠檬酸缓冲液。

3、分组与给药

将造模成功的大鼠随机分为模型对照组、CP高剂量组(0.1g/kg·d)、低剂量组(0.05g/kg·d)，每组12只。灌胃给药，空白组和模型组大鼠给予同剂量蒸馏水，连续给药8周。

4、指标检测

实验结束前，用代谢笼收集24h尿液，冷冻备用，记录24h饮水量。药物干预结束后，水合氯醛麻醉处理大鼠，取血，离心，分离血清，-20℃以下密封保存。立即剥离晶状体，照体外方法进行醛糖还原酶活性检测。

5、实验结果

5.1大鼠一般情况

实验期间，正常组生长良好，饮食与反应正常。模型组大鼠活动减少，精神萎靡，尾部糜烂，皮毛凌乱无光泽，体重减少。CP高、低剂量组大鼠治疗后上述情况均有所改善。

5.2糖尿病大鼠血糖和血清胰岛素的测定

表5 糖尿病大鼠血液、尿液指标检测结果(n＝12)

*：与空白组相比具有显著差异P＜0.01；**：与模型组相比具有显著差异P＜0.01。

5.3糖尿病大鼠肾功能指标的测定

由表6可见，糖尿病模型组大鼠肾脏增大，血肌酐(BUN)、尿素氮(Cr)、24h尿蛋白、尿糖均明显升高(P＜0.05)，提示糖尿病大鼠肾功能损伤的形成。给药组和模型组相比各项指标均得到不同程度的改善(P＜0.05)。

表6 糖尿病大鼠肾功能指标检测结果(n＝12)

*：与空白组相比具有显著差异P＜0.01；**：与模型组相比具有显著差异P＜0.01。

5.4各组大鼠氧化应激指标测定

如表7所示，模型大鼠的氧化还原状态失衡，表现为T-AOC、SOD、CAT和GSH-Px水平降低，而MDA含量升高。青钱柳提取物能纠正氧化还原失衡状态，表现为高低剂量给药组对各项指标均呈现不同程度改善。

表7 大鼠血清氧化应激指标检测结果(n＝12)

*：与空白组相比具有显著差异P＜0.01；**与模型组相比具有显著差异P＜0.01。

5.5糖尿病大鼠晶状体AR活性检测

每只大鼠晶状体加入300μ预冷的蒸馏水，照体外方法制备酶粗提液，并进行酶活力检测，固定反应时间5min，结果见图4。

由图4可见，DM大鼠和空白对照组相比，晶状体AR活性明显增强，药物干预组酶活力减弱，说明CP对糖尿病大鼠晶状体AR活性有抑制作用。

由于采用了上述技术方案，一种制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法及其作为醛糖还原酶抑制剂的应用，体内外研究表明，该提取物具有良好的抗氧化及抑制醛糖还原酶的作用，对醛糖还原酶的抑制机理为反竞争性抑制，该提取物具有预防或治疗糖尿病并发症包括糖尿病肾病、糖尿病神经病变和糖尿病眼病等的前景。并且作为天然提取物，具有副作用小，安全性高，活性好，工艺简便等优点。

附图说明

图1为青钱柳提取物的总抗氧化能力测定结果曲线图；

图2为青钱柳提取物和青钱柳多糖对醛糖还原酶的抑制作用；

图3为青钱柳提取物对醛糖还原酶的抑制类型；

图4为青钱柳提取物对糖尿病模型大鼠晶状体醛糖还原酶活力的抑制作用，图中，*：与空白组相比有显著性差异P＜0.01；#：与模型组相比有显著性差异P＜0.01。

具体实施方式

下面结合实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

一种制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法，包括步骤：

1)粉碎：青钱柳叶70～80℃烘干，粉碎机粉碎，过筛；

2)浸泡：按照药材与水重量比为1:10～30加水浸泡过夜；

3)提取：将步骤2)的混合溶液，以400～600W功率超声处理30～50分钟，温度45～55℃；趁热用四层100～200目滤布过滤，再用布氏漏斗抽滤，收集滤液，加入1％～3％的活性炭脱色，减压浓缩；

4)冷冻干燥：-15～-25℃，-0.02kPa以下冷冻干燥，得棕褐色粉末,即为所述具有备抗氧化活性的青钱柳提取物。

所述步骤1)中，粉碎机粉碎具体为将干燥青钱柳叶粉碎后过40目筛。

所述步骤2)中，药材与水重量比为1:20，加水浸泡10～14h。

所述步骤3)中，所述超声处理功率为600W，提取时间为40min，提取温度为50℃。

所述步骤3)中，所述减压浓缩压力为-0.09～-0.11MPa，温度为60～70℃，浓缩至原体积1/10～1/12。

所述步骤4)中，冷冻干燥具体为：-20℃，-0.01kPa。

将所述制备的具有抗氧化活性的青钱柳提取物再次加水溶解后，75～80％醇浓度下，醇沉10～14h，抽滤，沉淀用无水乙醇洗涤，干燥即得具有抗氧化活性的青钱柳提取物多糖，简称CPP。

所述75～80％醇浓度是加质量浓度为95％的乙醇使醇浓度达到75～80％。

所述具有抗氧化活性的青钱柳提取物中多糖重量含量为(47.93±0.98)％。

所述具有抗氧化活性的青钱柳提取物中多酚重量含量为(3.83±0.23)％。

该方法制备的具有抗氧化活性的青钱柳提取物作为醛糖还原酶抑制剂的应用。

实施例1

一种制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法，包括步骤：

(1)粉碎：青钱柳叶70℃烘干，粉碎机粉碎，过40目筛；

(2)浸泡：按照药材与水重量比为1:10加水浸泡10h；

(3)提取：将步骤(2)的混合溶液，以400W功率超声处理30分钟，温度45℃；趁热用四层200目滤布过滤，再用布氏漏斗抽滤，收集滤液，加入1％-3％的活性炭脱色，减压浓缩；压力为-0.09MPa，温度为70℃，浓缩至原体积1/12。

(4)冷冻干燥：-15℃，-0.01kPa下冷冻干燥，得棕褐色粉末,即为所述具有抗氧化活性的青钱柳提取物。

青钱柳提取物的得率为1.98％。

将所述制备的具有抗氧化活性的青钱柳提取物再次加水溶解后，75％醇浓度下，醇沉10，抽滤，沉淀用无水乙醇洗涤，干燥即得具有抗氧化活性的青钱柳提取物多糖。

所述75％醇浓度是加质量浓度为95％的乙醇使醇浓度达到75％。

所述具有抗氧化活性的青钱柳提取物中多糖重量含量为46.95％。

所述具有抗氧化活性的青钱柳提取物中多酚重量含量为3.6％。

该方法制备的具有抗氧化活性的青钱柳提取物作为醛糖还原酶抑制剂的应用。

实施例2

一种制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法，包括步骤：

(1)粉碎：青钱柳叶75℃烘干，粉碎机粉碎，过40目筛；

(2)浸泡：按照药材与水重量比为1:30加水浸泡12h；

(3)提取：将步骤(2)的混合溶液，以500W功率超声处理40分钟，温度50；趁热用四层200目滤布过滤，再用布氏漏斗抽滤，收集滤液，加入1％-3％的活性炭脱色，减压浓缩；压力为-0.09MPa，温度为70℃，浓缩至原体积1/10。

(4)冷冻干燥：-20℃，-0.01kPa下冷冻干燥，得棕褐色粉末,即为所述具有抗氧化活性的青钱柳提取物

青钱柳提取物的得率为5.04％。

将所述制备的具有抗氧化活性的青钱柳提取物再次加水溶解后，77％醇浓度下，醇沉12h，抽滤，沉淀用无水乙醇洗涤，干燥即得具有抗氧化活性的青钱柳提取物多糖。

所述77％醇浓度是加质量浓度为95％的乙醇使醇浓度达到77％。

所述具有抗氧化活性的青钱柳提取物中多糖重量含量为47.93％。

所述具有抗氧化活性的青钱柳提取物中多酚重量含量为3.83％。

该方法制备的具有抗氧化活性的青钱柳提取物作为醛糖还原酶抑制剂的应用。

实施例3

一种制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法，包括步骤：

(1)粉碎：青钱柳叶80℃烘干，粉碎机粉碎，过40目筛；

(2)浸泡：按照药材与水重量比为1:20加水浸泡14h；

(3)提取：将步骤(2)的混合溶液，以600W功率超声处理50分钟，温度55；趁热用四层200目滤布过滤，再用布氏漏斗抽滤，收集滤液，加入1％-3％的活性炭脱色，减压浓缩；压力为-0.09MPa，温度为70℃，浓缩至原体积1/10。

(4)冷冻干燥：-25℃，-0.01kPa下冷冻干燥，得棕褐色粉末,即为所述具有抗氧化活性的青钱柳提取物

青钱柳提取物的得率为5.24％。

将所述制备的具有抗氧化活性的青钱柳提取物再次加水溶解后，80％醇浓度下，醇沉14h，抽滤，沉淀用无水乙醇洗涤，干燥即得具有抗氧化活性的青钱柳提取物多糖。

所述80％醇浓度是加质量浓度为95％的乙醇使醇浓度达到80％。

所述具有抗氧化活性的青钱柳提取物中多糖重量含量为48.91％。

所述具有抗氧化活性的青钱柳提取物中多酚重量含量为4.06％。

该方法制备的具有抗氧化活性的青钱柳提取物作为醛糖还原酶抑制剂的应用。

实施例4

一种制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法，包括步骤：

(1)粉碎：青钱柳叶75℃烘干，粉碎机粉碎，过40目筛；

(2)浸泡：按照药材与水重量比为1:20加水浸泡14h；

(3)提取：将步骤(2)的混合溶液，以600W功率超声处理40分钟，温度50；趁热用四层200目滤布过滤，再用布氏漏斗抽滤，收集滤液，加入1％-3％的活性炭脱色，减压浓缩；压力为-0.09MPa，温度为70℃，浓缩至原体积1/10。

(4)冷冻干燥：-25℃，-0.01kPa下冷冻干燥，得棕褐色粉末,即为所述具有抗氧化活性的青钱柳提取物

青钱柳提取物的得率为5.08％。

将所述制备的具有抗氧化活性的青钱柳提取物再次加水溶解后，80％醇浓度下，醇沉14h，抽滤，沉淀用无水乙醇洗涤，干燥即得具有抗氧化活性的青钱柳提取物多糖。

所述75～80％醇浓度是加质量浓度为95％的乙醇使醇浓度达到80％。

所述具有抗氧化活性的青钱柳提取物中多糖重量含量为47.93％。

所述具有抗氧化活性的青钱柳提取物中多酚重量含量为3.83％。

该方法制备的具有抗氧化活性的青钱柳提取物作为醛糖还原酶抑制剂的应用。

对比实施例1

采用传统的煎煮方法提取：准确称取实施例3步骤(1)的药材，按照药材与水重量比为1:20加水，煮沸50分钟，重复提取两次，抽滤，旋转蒸发浓缩滤液。-25℃，-0.01kPa下冷冻干燥，制备青钱柳提取物的得率为2.97％。

对比实施例2

采用传统的煎煮方法提取：准确称取实施例3步骤(1)的药材，按照药材与水重量比为1:20加水，煮沸100分钟，重复提取两次，抽滤，旋转蒸发浓缩滤液。-25℃，-0.01kPa下冷冻干燥，制备青钱柳提取物的得率为4.54％。

通过以上实施例和对比实施例比较可以得知：

如果不采用超声处理，可以看出制备的具有抗氧化活性的青钱柳提取物质量大大下降，而且耗时长，步骤繁琐。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

一切从本发明的构思出发，不经过创造性劳动所作出的结构变换均落在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法，其特征在于，包括步骤：

1)粉碎：青钱柳叶70～80℃烘干，粉碎机粉碎，过筛；

2)浸泡：按照药材与水重量比为1:10～30加水浸泡过夜；

3)提取：将步骤2)的混合溶液，以400～600W功率超声处理30～50分钟，温度45～55℃；趁热用四层100～200目滤布过滤，再用布氏漏斗抽滤，收集滤液，加入1％～3％的活性炭脱色，减压浓缩；

4)冷冻干燥：-15～-25℃，-0.02kPa以下冷冻干燥，得棕褐色粉末,即为所述具有备抗氧化活性的青钱柳提取物。

2.如权利要求1所述的制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法，其特征在于：所述步骤1)中，粉碎机粉碎具体为将干燥青钱柳叶粉碎后过40目筛。

3.如权利要求1所述的制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法，其特征在于：所述步骤2)中，药材与水重量比为1:20，加水浸泡10～14h。

4.如权利要求1所述的制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述超声处理功率为600W，提取时间为40min，提取温度为50℃。

5.如权利要求1所述的制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述减压浓缩压力为-0.09～-0.11MPa，温度为60～70℃，浓缩至原体积1/10～1/12。

6.如权利要求1所述的制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法，其特征在于：所述步骤4)中，冷冻干燥具体为：-20℃，-0.01kPa。

7.如权利要求1所述的制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法，其特征在于：将所述制备的具有抗氧化活性的青钱柳提取物再次加水溶解后，75～80％醇浓度下，醇沉10～14h，抽滤，沉淀用无水乙醇洗涤，干燥即得具有抗氧化活性的青钱柳提取物多糖。

8.如权利要求2所述的制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法，其特征在于：所述具有抗氧化活性的青钱柳提取物中多糖重量含量为(47.93±0.98)％。

9.如权利要求1所述的制备具有抗氧化活性的青钱柳提取物的方法，其特征在于：所述具有抗氧化活性的青钱柳提取物中多酚重量含量为(3.83±0.23)％。

10.如权利要求1所述的方法制备的具有抗氧化活性的青钱柳提取物作为醛糖还原酶抑制剂的应用。