CN101961340A - 具栖冬青苷在制备用于治疗冠心病的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了具栖冬青苷在制备用于治疗冠心病药物中的应用。将治疗有效量的具栖冬青苷与药学上可接受的载体制成用于治疗冠心病的药物,该药物可以是滴丸剂、口服液、注射液、滴注剂、冻干粉、微囊剂、胶囊剂,或者是片剂。上述药物可以在临床上用于预防和治疗冠心病,心绞痛以及淤血内阻导致的胸痹、眩晕、气短、心悸、胸闷或痛等症状。
Description
本申请是2006年9月19日向中国国家知识产权局提交的题为“具栖冬青苷的制备方法及应用”,申请号为200610017186.7的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及心血管系统疾病的药物领域,具体地说,涉及具栖冬青苷在制备治疗冠心病的药物中的应用。
背景技术
救必应为冬青科植物冬青科冬青属植物铁冬青Ilex rotunda Thunb.的树皮,主产于广西、广东省,具有清热解毒,消肿止痛等功效。用于感冒,扁桃体炎,咽喉肿痛,急性胃肠炎,风湿骨痛;外用治跌打损伤,痈疖疮疡,外伤出血,烧烫伤。化学成分主要含三萜皂苷、黄酮苷、酚类、鞣质等,其皂苷类成分含量较高,约为7-8%。文东旭等(中草药,1991,22(6),246-248)从中分离出皂苷类成分具栖冬青苷(Pedunculoside),分子式为:C36H58O10。
结构式为:
近年来,文献(中药药理与临床,1998;14(4),22-24、中药材,1997;20(6),303-305)报道救必应醇提取物具有抗心律失常和保护缺血缺氧心肌作用。但由于救必应醇提物属粗制剂,确切的有效成分尚不清楚。庞小雄等(广东药学院学报,1997,13(2),103~104)报道具栖冬青苷的提取和分离方法,是将取救必应粉碎成粗粉,用95%乙醇回流三次,提取液浓缩至小体积,加入等量的蒸馏水,静置过夜,离心,沉淀物用适量水洗,干燥得粗品,粗品用氯仿回流除去脂溶性成分,残渣用50%乙醇加热处理,滤除不溶物,滤液放置,过滤,所得结晶经过硅胶柱层析,用氯仿∶甲醇∶水(72;1)下层洗脱,薄层层析检查,合并相同组份后,用50%乙醇重结晶得具栖冬青苷。
现有技术的不足是需用剧毒的氯仿脱脂并进行硅胶柱层析分离,产量小,周期长,成本高,操作复杂,工艺条件无法适应工业化生产需要。
发明内容
本发明要解决的技术问题是:研制治疗心律失常、心肌缺血、脑缺血等心脑血管系统疾病的有效成分具栖冬青苷,其制备方法,以及具栖冬青苷在制备治疗上述疾病的药物中的应用。
一种治疗冠心病疾病的具栖冬青苷,可用下述方法制备:
取救必应粗粉,用乙醇回流提取,合并提取液,浓缩至浸膏状,加水,加热,搅拌,静置过夜,离心,得沉淀物和上清液。沉淀物加50-95%乙醇回流提取,滤过,滤液浓缩,放置,滤过,沉淀物干燥,得一部分总皂苷,总皂苷加10-100倍的50-95%乙醇结晶,得一部分具栖冬青苷。上清液浓缩,放冷至室温,离心,沉淀物用适量水洗,干燥后用50-95%乙醇结晶,又制得另一部分具栖冬青苷。两次制得的具栖冬青苷合并,用10-100倍量的50-95%乙醇多次重结晶,得具栖冬青苷纯品。
所述具栖冬青苷,其制备方法为:取救必应粗粉,用2-10倍的50-95%乙醇回流提取三次,每次1-3小时,合并提取液,浓缩至浸膏状,加3-10倍的水,加热,搅拌,静置过夜,离心,得沉淀物和上清液。沉淀物加50-95%乙醇回流提取,滤过,滤液浓缩,放置,滤过,沉淀物干燥,得一部分总皂苷,总皂苷加10-100倍的50-95%乙醇结晶,得一部分具栖冬青苷。上清液浓缩至1/2-2倍体积,放冷至室温,离心,沉淀物用适量水洗三次,干燥,用10-100倍量的50-95%乙醇结晶,又制得另一部分具栖冬青苷粗晶,两次制得的具栖冬青苷合并,用10-100倍量的50-95%乙醇多次重结晶,得具栖冬青苷纯品。
上述具栖冬青苷制备方法,其特征在于:用2-10倍的50-95%乙醇回流提取,提取液浓缩至浸膏,加水,离心,得沉淀物和上清液。沉淀物加50-95%乙醇回流提取,滤过,滤液浓缩,放置,滤过,沉淀物干燥,得一部分总皂苷,总皂苷加10-100倍的50-95%乙醇结晶,得一部分具栖冬青苷。上清液浓缩,离心,得沉淀物,干燥,用10-50倍量的50-95%乙醇结晶,又制得另一部分具栖冬青苷粗晶,两次制得的具栖冬青苷合并,用10-100倍量的50-95%乙醇多次重结晶,得具栖冬青苷纯品。其含量大于98.0%。
本发明还提供了具栖冬青苷在制备用于治疗冠心病的药物中的应用,其中,所述治疗冠心病的药物由治疗有效量的具栖冬青苷和药学上可接受的载体制备而成。
上述治疗冠心病的药物可以是治疗心绞痛型冠心病的药物、治疗心肌梗死型冠心病的药物、治疗无症状性心肌缺血型冠心病的药物、或者是治疗心律失常型冠心病的药物。
根据本发明提供的具栖冬青苷在制备用于治疗冠心病的药物中的应用,所采用的治疗冠心病的药物可以是滴丸剂、口服液、注射液、滴注剂、冻干粉、微囊剂、胶囊剂,或者是片剂。
根据本发明提供的具栖冬青苷在制备用于治疗冠心病的药物中的应用,当上述治疗冠心病的药物为注射液时,可通过以下步骤制备:取具栖冬青苷加入5-25%的聚乙二醇400溶液,水浴加热溶解后,放冷,用5-25%聚乙二醇400溶液稀释,制得所述注射液。在本发明提供的具体实施方式中,制备注射液的过程为:取所述具栖冬青苷160mg,加入5-25%聚乙二醇溶液500ml稀释,与80℃水浴加热使溶解,放冷,过滤,加入5-25%聚乙二醇溶液,而配成2000ml注射液。
根据本发明提供的具栖冬青苷在制备用于治疗冠心病的药物中的应用,当上述治疗冠心病的药物为滴丸时,可通过以下步骤制备:取聚乙二醇6000和/或聚乙二醇于90-100℃混合熔融,加入具栖冬青苷混合,制得所述滴丸。在本发明提供的一个具体实施方式中,制备滴丸的过程为:按重量比计,取聚乙二醇6000和/或聚乙二醇4000 1-4份,于90-100℃混合熔融后,加入具栖冬青苷原料1-2份混合,常规制成滴丸。
根据本发明提供的具栖冬青苷在制备用于治疗冠心病的药物中的应用,当上述治疗冠心病的药物为片剂时,可通过以下步骤制备:将具栖冬青苷、乳糖、淀粉、滑石粉制成颗粒,然后加入硬脂酸镁,混匀制得片剂。
根据本发明提供的具栖冬青苷的应用,所制得的药物可明显减轻犬冠脉前降支导致的心肌缺血程度和范围,降低心肌耗氧指数,并能明显对抗氯化钡诱导的大鼠抗心律失常,还可减少局灶性脑缺血大鼠的脑梗死面积,这些作用表明了其抗心律失常、心肌缺血、脑缺血作用显著。临床上用于预防和治疗冠心病,心绞痛以及淤血内阻之胸痹、眩晕、气短、心悸、胸闷或痛;中风、脑梗死等症状。
具体实施方式
下面将对本发明的发明目的、技术方案和有益效果作进一步详细的说明。
应该指出,以下详细说明都是例示性的,旨在对所要求的本发明提供进一步的说明。除非另有指明,本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
实施例1:取救必应粗粉2000g,用6倍的80%乙醇回流提取三次,分别提取2、1、1小时,过滤,滤液合并,浓缩至浸膏状,加水6000ml,水浴加热,搅拌,静置过夜,滤过,得沉淀物和滤液沉淀物加50-95%乙醇回流提取,滤过,滤液浓缩,放置,滤过,沉淀物干燥,得总皂苷,总皂苷加10-100倍的50-95%乙醇结晶,得一部分具栖冬青苷。滤液浓缩至1000ml,放冷至室温,滤过,沉淀物用适量水洗三次,干燥,用10-50倍量的50-95%乙醇结晶,又制得另一部分具栖冬青苷粗晶,两次制得的具栖冬青苷合并,用10-100倍量的50-95%乙醇多次重结晶,得具栖冬青苷纯品。收率3.85%,依法测定,含量为98.59%。
实施例2:
取实施例1的方法制备的具栖冬青苷,采取本技术领域公知的输液剂制备方法,制备成具栖冬青苷氯化钠注射液和具栖冬青苷葡萄糖注射液:具栖冬青苷40mg,氯化钠2.25g,制成具栖冬青苷氯化钠注射液,其规格为500ml,静脉注射,每次1瓶,每日一次;具栖冬青苷40mg,葡萄糖12.5g,制成具栖冬青苷葡萄糖注射液,其规格为500ml,静脉注射,每次1瓶,每日一次。
实施例3:取按实施例1的方法制备的具栖冬青苷20g,加适量的注射用水,用碳酸钠调PH值至7,搅拌溶解,再加相当于具栖冬青苷10-15%量注射用的甘露醇,除菌滤过,测定含量,分装1000支,20mg/支,封口,即得。静脉注射,每次40mg,每日一次。
实施例4:
取实施例1方法制备的具栖冬青苷300g、10%羟丙甲基纤维素32ml。采取本技术领域公知的胶囊制备方法,制成1000粒胶囊,每粒含具栖冬青苷300mg。口服,每次1粒,每日1次。
实施例5:取实施例1方法制备的具栖冬青苷300g、乳糖68g、淀粉60g、滑石粉20g。采取本技术领域公知的片剂制备方法,在适宜容器中混合所有组分,制成颗粒,再加入硬脂酸镁2g,混匀,用9/32时标准凹冲压片,制成1000片,(每片含具栖冬青苷300mg)。口服,每次1片,每日1次。
通过以下对具栖冬青苷的药理试验及结果的说明,进一步验证其在制药领域中的应用。
一、小鼠急性毒性实验
1.试验方法
将适应喂养3天的20只小鼠(雌雄各半)禁食12小时,不禁水,
受试物用蒸馏水配成小鼠能耐受的最大浓度,以小鼠能耐受的最大体积(0.4ml/10g)给小鼠一次灌胃,连续观察14天,记录动物的反应情况,以不产生死亡的最大剂量为最大耐受量。计算出总给药量,推算出相当于临床用量的倍数。
2.试验结果
以小鼠能耐受的最大浓度(33%),以小鼠能耐受的最大体积(0.4ml/10g)给小鼠2次/1日灌胃,连续观察14天,结果无一例死亡。
小鼠一次灌胃给予具栖冬青苷的最大耐受量为13.2g/kg。
二、大鼠长期毒性试验
1.方法大鼠灌胃给予具栖冬青苷300mg/kg、150mg/kg、75mg/kg,每天给药一次,每周给药6天,连续给药13周,对照组给予同体积溶媒(20ml/kg)。结果各给药组大鼠毛色光泽、体重增长正常。血液学、血清生化学检查显示各剂量组同对照组比较无差异。
2.结果
2.1对血液学指标的影响(表1)
大鼠口服给予具栖冬青苷,各组动物血液学指标(Hb,RBC,Ret,PT,TT,PLT)检查均在正常范围内,与对照组比较无差异。
2.2对血清各生化指标的影响(表2)
所测血清生化指标(包括AST,ALT,ALP,TP,ALB,BUN,T·CHO,GLU,Crea,T·BIL,TG,CK,NA,CL,K),各组动物指标均在正常范围内,与对照组比较无差异。
三、药效学实验
1.具栖冬青苷对心律失常的影响
1.1方法
取体重200±20克的大白鼠40只,随机分组,每组10只,雌雄各半,分为生理盐水组、具栖冬青苷大剂量组(100mg/kg)、具栖冬青苷中剂量组(50mg/kg)、具栖冬青苷小剂量组(25mg/kg)、利多卡因组(5mg/kg)。用10%水合氯醛麻醉,用心电图机描记用药前后的心电图变化。用氯化钡静脉注射(4mg/kg)诱发大鼠心律失常模型后,分别静脉注射药物或等量生理盐水,记录出现室性停搏数。结果见表3。
1.2结果
具栖冬青苷能使氯化钡诱导大鼠心律失常恢复正常,与生理盐水组比较P<0.01。
表3具栖冬青苷对大鼠心律失常的影响
*与生理盐水组比较P<0.01
2.具栖冬青苷抗心肌缺血作用
2.1.方法
2.1.1犬实验性心肌缺血模型制备
取成年健康杂种犬,体重10-15kg,静脉注射3%戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉,气管插管连接呼吸机,开胸暴露心脏,分离并结扎冠状动脉前降支根部,放置心外膜电极,经生物电放大器记录于八导生理记录仪,股动脉插管经压力换能器连接于八导生理记录仪。
2.1.2实验分组
实验分5组,每组6条犬,经十二指肠分别给予蒸馏水、具栖冬青苷大剂量40mg/kg、具栖冬青苷中剂量20mg/kg、具栖冬青苷小剂量10mg/kg、阳性药地奥心血康100mg/kg,给药体积为0.5ml/kg,手术完毕记录正常值后给药,记录给药后15、30、60、90、120、180分钟的各项参数,以各时间点心外膜心电图ST段升高值的总和(∑ST)作为心肌缺血程度指标,将心外膜心电图ST段升高值超过2mv的点定为缺血点,计算总缺血点数(NST),作为心肌缺血范围指标,同时记录HR及MBP,以血压和心率的乘积开方代表心肌耗氧量。结果见表4
2.2结果
2.2.1具栖冬青苷对犬心外膜心电图的影响
十二指肠给予具栖冬青苷,30min后使抬高的ST段明显下降,与给药前比较P<0.05,空白对照组的ST段虽有下降,但与给药前比较无显著性差异,见表4。十二指肠给予具栖冬青苷,90min后NST明显减少,与给药前比较P<0.05,空白对照组的NST虽有波动,但与给药前比较无显著性差异,见表5。
表4具栖冬青苷对犬心外膜心电图∑ST的影响(单位:mv)
*与给药前比较P<0.01 △与给药前比较P<0.05
表5具栖冬青苷对犬心外膜心电图NST的影响
*与给药前比较P<0.01
2.2.2具栖冬青苷对心肌耗氧指数的影响
给予心肌缺血的犬蒸馏水后,心肌耗氧指数增加(P<0.05),表明在急性心肌缺血状态下,心肌耗氧量增加,但十二指肠给予具栖冬青苷后,心肌耗氧指数增加未见增加,表明具栖冬青苷能明显抑制由于心肌缺血而造成的耗氧量的增加。见表6。
表6具栖冬青苷对心肌缺血犬心肌耗氧指数的影响
*与给药前比较P<0.01
3.具栖冬青苷对大鼠局灶性脑缺血的影响
3.1方法
3.1.1模型制备
取体重220-240g大白鼠,用10%水合氯醛麻醉,分离颈内动脉,将消毒胶线插入颈内动脉,缝合切口,3h后拔出线栓,待大鼠苏醒后给药。
3.1.2动物分组和给药
取造模成功大鼠80只,随机分组,每组20只,雌雄各半,分为生理盐水组、具栖冬青苷大剂量组(100mg/kg)、具栖冬青苷中剂量组(50mg/kg)、小剂量组(25mg/kg)、尼莫地平组(1mg/kg)。灌胃给药,连续7d,给药结束后检测脑组织含水量及脑梗死面积。
3.2结果
3.2.1具栖冬青苷对脑组织含水量的影响
对照组手术侧脑含水量明显高于其它组(P<0.05),而具栖冬青苷组和尼莫地平组脑两侧含水量差异无显著性。见表7。
表7具栖冬青苷对大鼠脑组织含水量的影响
*与对照组比较P<0.05
3.2.2具栖冬青苷对脑梗死面积的影响
各组动物均出现梗死灶,但具栖冬青苷组和尼莫地平组脑梗死面积显著降低,与对照组比较有显著差异(P<0.01)。见表8。
表8具栖冬青苷对大鼠脑梗死面积的影响
*与对照组比较P<0.01
四、结论
本研究结果表明,具栖冬青苷毒性较低,可明显减轻犬冠脉前降支导致的心肌缺血程度和范围,降低心肌耗氧指数,并能明显对抗氯化钡诱导的大鼠抗心律失常,还可减少局灶性脑缺血大鼠的脑梗死面积,提示具栖冬青苷对脑缺血及心肌缺血具有一定的保护作用,本研究为临床应用提供了理论依据。
基于以上结果可以得出本发明的优点在于:
1.本发明具栖冬青苷的制备方法,不需使用有毒的有机溶剂及硅胶柱层析分离,产量大,周期长,成本低,工艺简单,适合工业化生产。
2.本发明对救必应发掘了新的医药用途,开拓了一个新的应用领域。
3.本发明的具栖冬青苷安全无毒,药理作用强,药效好,预示着有很好的药用前景。
4.本发明的产品制备工艺简单,未见毒副作用。既可做成口服制剂如片剂、滴丸、胶囊剂等口服制剂;也可做成注射制剂如粉针剂、滴注剂等。
5.本发明的产品制成的药物可明显减轻犬冠脉前降支导致的心肌缺血程度和范围,降低心肌耗氧指数,并能明显对抗氯化钡诱导的大鼠抗心律失常,还可减少局灶性脑缺血大鼠的脑梗死面积,这些作用表明了其抗心律失常、心肌缺血、脑缺血作用显著。临床上用于预防和治疗冠心病,心绞痛以及淤血内阻之胸痹、眩晕、气短、心悸、胸闷或痛;中风、脑梗死等。
以上说明仅为本发明的优选实施方式,并不用于限制本发明,对于本领域的技术人员来说,本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.具栖冬青苷在制备用于治疗冠心病的药物中的应用,其特征在于,所述治疗冠心病的药物由治疗有效量的所述具栖冬青苷和药学上可接受的载体制备而成。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述治疗冠心病的药物为治疗心绞痛型冠心病的药物。
3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述治疗冠心病的药物为治疗心肌梗死型冠心病的药物。
4.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述治疗冠心病的药物为治疗无症状性心肌缺血型冠心病的药物。
5.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述治疗冠心病的药物为治疗心律失常型冠心病的药物。
6.根据权利要求1-5任一项所述的应用,其特征在于,所述治疗冠心病的药物是滴丸剂、口服液、注射液、滴注剂、冻干粉、微囊剂、胶囊剂,或者是片剂。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,取所述具栖冬青苷加入5-25%的聚乙二醇400溶液,水浴加热溶解后,放冷,用5-25%聚乙二醇400溶液稀释,制得所述注射液。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,取所述具栖冬青苷160mg,加入5-25%聚乙二醇溶液500ml稀释,与80℃水浴加热使溶解,放冷,过滤,加入5-25%聚乙二醇溶液,配成2000ml所述注射液。
9.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,取聚乙二醇6000和/或聚乙二醇于90-100℃混合熔融,加入所述具栖冬青苷混合,制得所述滴丸。
10.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,将所述具栖冬青苷、乳糖、淀粉、滑石粉制成颗粒,然后加入硬脂酸镁,混匀制得所述片剂。
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