CN110066753B - 植物乳杆菌dp189及其应用 - Google Patents

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Abstract

植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189及其应用，涉及功能性食品微生物领域。该菌株已于2019年3月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:M2019199。该菌株可提高抑郁大鼠的学习和记忆能力；提高抑郁大鼠脑源神经营养因子的水平；减少抑郁大鼠海马神经元的损伤和神经元细胞的凋亡；降低抑郁大鼠脑组织凋亡蛋白JUK2和Bcl‑2的含量；降低肠道疣微菌科的丰度，提高肠道乳杆菌的丰度，提高肠道菌群α‑多样性改善抑郁大鼠的肠道菌群紊乱；从而对抑郁/焦虑、自闭症、炎症性肠炎具有良好的预防和治疗作用。该菌株具有抗抑郁功能，可作为预防和治疗抑郁症、抗自闭症、抗炎症性肠炎的功能性益生菌，为临床干预和控制抑郁症等相关的精神类疾病提供新的思路。

Description

植物乳杆菌DP189及其应用
技术领域
本发明涉及功能性食品微生物技术领域，具体涉及一种植物乳杆菌DP189及其应用。
背景技术
世界卫生组织2017年公布数据显示，过去10年间全球受抑郁症影响的人数增加了18％，抑郁已经成为全球困扰人类生活水平和造成社会经济负担的重要疾病。我国随着经济的高速发展，人们生活和工作节奏显著的加快，伴随而来的心理、精神压力普遍增加，导致精神障碍患病率呈上升趋势。据卫生部统计，我国抑郁障碍患病率为3.59％，并且80％以上抑郁症患者没有接受规范治疗，导致病情反复发作。虽然通过服用抗抑郁药物能有效控制病情，但长期服用抗抑郁药物会产生依赖性，并伴有头痛、暴瘦、甲状腺功能改变、代谢综合症等严重的副作用。因此开发安全、有效的抗抑郁新产品具有十分重要的现实意义。
益生菌是一类对宿主机体有益的活的微生物，摄入一定剂量后可改善及预防疾病。大量研究表明，益生菌可以减少或预防肠道疾病的发展，如腹泻，炎症性肠病，肠易激综合征等，而40～50％的肠应激综合征患者伴有焦虑和抑郁等精神症状，有研究表明肠应激综合征患者给予益生菌干预后，在缓解肠道功能不适的同时抑郁行为有所减少，抑郁情绪得到改善，但其机理尚不清楚。或许益生菌是通过一种特殊的肠-脑轴来影响机体的大脑结构以及大脑相关疾病的发生，可见益生菌在改善人类情绪和促进心理健康方面具有巨大的潜力。
发明内容
本发明的目的是提供一种植物乳杆菌DP189及其应用。
本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：
本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189，已于2019年3月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M2019199。
本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189在制备抗抑郁产品、预防抑郁产品或治疗抑郁产品中的应用。
作为优选的实施方式，所述产品的功能包括(a1)至(a5)中的至少一项：
(a1)降低抑郁患者海马神经元的损伤；
(a2)提高脑组织中BDNF、cAMP蛋白的含量；
(a3)提高抑郁患者肠道微生物的菌群平衡；
(a4)降低海马神经元细胞的凋亡；
(a5)降低凋亡蛋白JUK2和Bcl-2的含量。
作为优选的实施方式，所述产品为食品、保健品或药品。
作为更优选的实施方式，所述食品为功能性食品、发酵果蔬、发酵乳制品、发酵豆制品、乳酪、含乳饮料或乳粉。
作为更优选的实施方式，所述药品为胶囊、粉剂、片剂、赋形剂或稀释剂。
作为更优选的实施方式，所述粉剂采用冷冻干燥工艺制备。
本发明还提供一种以植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189作为活性成份的产品。
作为优选的实施方式，该产品为抗抑郁产品、预防抑郁产品或治疗抑郁产品。
作为优选的实施方式，该产品的功能包括(a1)至(a5)中的至少一项：
(a1)降低抑郁患者海马神经元的损伤；
(a2)提高脑组织中BDNF、cAMP蛋白的含量；
(a3)提高抑郁患者肠道微生物的菌群平衡；
(a4)降低海马神经元细胞的凋亡；
(a5)降低凋亡蛋白JUK2和Bcl-2的含量。
本发明的有益效果是：
本发明的一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189株，该菌株已于2019年3月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:M2019199。本发明的植物乳杆菌DP189可以提高抑郁大鼠的学习和记忆能力；提高抑郁大鼠脑源神经营养因子的水平；减少抑郁大鼠海马神经元的损伤和神经元细胞的凋亡；降低抑郁大鼠脑组织凋亡蛋白JUK2和Bcl-2的含量；降低肠道疣微菌科的丰度，提高肠道乳杆菌的丰度，提高肠道菌群α-多样性改善抑郁大鼠的肠道菌群紊乱；从而对抑郁/焦虑、自闭症、炎症性肠炎具有良好的预防和治疗作用。因此，本发明的植物乳杆菌DP189具有广阔的应用价值。
附图说明
图1为本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189对海马组织上清液中神经营养因子相关指标的影响。图1A为脑组织上清液中BDNF含量；图1B为脑组织上清液中ACTH含量；图1C为脑组织上清液中cAMP含量。
图2为各试验组海马CA1区神经元形态变化(HE染色，×200)。图2中，A：空白对照组；B：模型组；C：盐酸氟西汀组；D：DP189组。
图3为本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189对抑郁大鼠海马组织中脑神经营养因子相关蛋白表达的影响。
图4为基于OTU分布的PCoA分析。
图5为本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189对抑郁大鼠空间探索120s穿越站台次数影响。
图6为本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189对抑郁大鼠海马神经元凋亡的影响。图6中，A1：空白对照组，DAPI染色；A2：空白对照组，Tunel染色；B1：模型组，DAPI染色；B2：模型组，Tunel染色；C1：盐酸氟西汀组，DAPI染色；C2：盐酸氟西汀组，Tunel染色；D1：DP189组，DAPI染色；D2：DP189组，Tunel染色。
图7为海马神经元细胞凋亡率的变化。
图8为本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189对抑郁大鼠海马组织中神经元凋亡相关蛋白表达的影响。
具体实施方式
本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189，已于2019年3月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内(武汉大学保藏中心)，保藏编号为：CCTCC NO：M2019199。
本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189在制备抗抑郁产品中的应用。
本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189在制备预防抑郁产品中的应用。
本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189在制备治疗抑郁产品中的应用。
优选的，所说的产品的功能包括(a1)至(a5)中的至少一项：
(a1)降低抑郁患者海马神经元的损伤；
(a2)提高脑组织中BDNF、cAMP蛋白的含量；
(a3)提高抑郁患者肠道微生物的菌群平衡；
(a4)降低海马神经元细胞的凋亡；
(a5)降低凋亡蛋白JUK2和Bcl-2的含量。
优选的，所说的产品为食品、保健品或药品等，但不限于此。
更优选的，所说的食品为发酵果蔬、发酵乳制品、发酵豆制品、乳酪、含乳饮料、乳粉或其他食品，但不限于此。
更优选的，所说的所说的食品为功能性食品，例如功能性酸奶、功能性菌剂等。
优选的，所说的药品的剂型可以为胶囊、粉剂、片剂等，但不限于此。
优选的，所说的药品还可以是其他药学上可以接受的赋形剂或稀释剂等。
更优选的，所说的粉剂采用冷冻干燥工艺或其他工艺制备。
本发明提供一种以植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189作为活性成份的抗抑郁产品。
本发明提供一种以植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189作为活性成份的预防抑郁产品。
本发明提供一种以植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189作为活性成份的治疗抑郁产品。
优选的，所说的产品的功能包括(a1)至(a5)中的至少一项：
(a1)降低抑郁患者海马神经元的损伤；
(a2)提高脑组织中BDNF、cAMP蛋白的含量；
(a3)提高抑郁患者肠道微生物的菌群平衡；
(a4)降低海马神经元细胞的凋亡；
(a5)降低凋亡蛋白JUK2和Bcl-2的含量。
本发明提供的植物乳杆菌DP189具有抗抑郁功能，可作为预防和治疗抑郁症、抗自闭症、抗炎症性肠炎的功能性益生菌，为临床干预和控制抑郁症等相关的精神类疾病提供新的思路，具有良好的产业前景。
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
清洁级Wistar雄性大鼠：长春生物制品研究所。饲养环境：23±2℃，湿度50～75％，自由摄取基础饲料和纯净水。基础饲料：长春生物制品研究所。
乳杆菌选择性培养基(LBS琼脂)：青岛海博生物技术有限公司，货号HB0385-1。
固体MRS培养基：含蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L、KH2PO42g/L、乙酸钠5g/L、柠檬酸钠5g/L、MgSO4·7H2O 0.2g/L、MnSO4·4H2O 0.05g/L、吐温-801mL/L、琼脂15g/L、葡萄糖20g/L，余量为水；如无特殊说明，pH＝6.6。液体MRS培养基与固体MRS培养基的区别仅在于不加入琼脂。
皮质酮粉末：苏州多美隆生物科技有限公司。
盐酸氟西汀胶囊：苏州中化药品工业有限公司。
大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒：上海江莱生物科技有限公司，货号JL-F11187。
大鼠促肾上腺皮质激素(ACTH)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒：上海江莱生物科技有限公司，货号JL-F13969。
大鼠环磷酸腺苷(cAMP)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒：上海江莱生物科技有限公司，货号JL-F12087。
RIPA蛋白提取试剂盒：北京鼎国昌盛生物技术有限公司。
BCA蛋白定量试剂盒：北京鼎国昌盛生物技术有限公司。
单克隆抗体(BDNF、CREB、cAMP、MKK7、JUK2、Bcl-2、GAPDH)，英国Abcam公司。
山羊抗兔二抗：北京中杉金桥生物技术有限公司。
盐酸氟西汀溶液的制备方法：取盐酸氟西汀胶囊中的颗粒物，用0.5g/100ml羧甲基纤维素钠水溶液溶解。盐酸氟西汀的剂量以颗粒物计。
皮质酮溶液的制备方法：取皮质酮粉末，加0.1％DMSO和0.1％的吐温，用生理盐水溶解至40mg/kg的剂量。
实施例1、植物乳杆菌菌株的分离、鉴定和保藏
一、植物乳杆菌菌株的分离
2017年12月，从吉林省通化市收集新鲜腌制的酸菜样品放入运输培养基中，迅速置于冰盒内送至实验室进行菌株分离。将酸菜样品研磨、梯度稀释后，采用乳杆菌选择性培养基对样品中的乳杆菌进行分离，于37℃培养48h，挑取平板上的典型菌落(乳白色、圆形、边缘整齐、凸起、不透明、表面湿润光滑)，划线培养MRS固体培养基，分离得到纯菌落。纯培养的菌种接种到液体MRS培养基培养，然后加入60％甘油，-80℃冰箱保存。将其中1株乳杆菌命名为DP189。
二、菌株的鉴定
DP189的生理生化鉴定结果：革兰氏染色阳性，过氧化氢酶试验阴性，联苯胺试验阴性，吲哚试验阴性，乙酰甲基甲醇试验阳性；不水解淀粉，不液化明胶，不产生硫化氢，发酵葡萄糖产酸不产气；不运动的杆菌；在15℃和45℃能够生长，最适生长温度37～42℃；适宜pH为5.0～7.0；耐受6.5％NaCl；DP189在液体MRS培养基中呈均匀浑浊生长，久置菌体呈白色沉淀。
DP189的API 50CH(法国梅里埃公司)鉴定结果：能利用核糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、木糖、甘露糖、甘露醇、山梨醇、苦杏仁苷、熊果苷、N-乙酰-葡萄糖胺、七叶醇、柳醇、纤维二糖、菊糖、乳糖、蜜二糖、蔗糖、海藻糖、山梨糖、松三糖、棉籽糖、牻牛儿糖、葡萄糖酸盐；不能利用阿东醇、阿拉伯糖、糖原、卫矛醇、麦芽糖、肌醇、α-甲基-D-葡萄糖苷、α-甲基-D-甘露糖苷、淀粉、鼠李糖、木糖醇、D-松二糖、D-塔格糖、D-米苏糖、葡萄糖酸盐、D-阿拉伯糖醇、岩糖、L-阿拉伯糖醇、2-酮基-葡萄糖酸盐、5-酮基-葡萄糖酸盐。
16S rDNA序列同源性分析：提取DP189基因组DNA，利用乳杆菌引物(16sF：5＇-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3＇；16sR：5＇-AGAAAGGAGGTGATCCAGC-3＇)对其进行PCR扩增，将扩增产物送至生工生物工程(上海)股份有限公司测序，所获得的16s rDNA序列如序列表中的序列1所示。将16s rDNA序列通过BLAST程序在GenBank数据库中进行同源性比对分析，发现DP189与Lactobacillus plantarum CP-134(GenBank:MK601693.1)同源性达到99％。
根据以上结果，菌株DP189被鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。
三、菌株的保藏
本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189，已于2019年3月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内(武汉大学保藏中心)，保藏编号为：CCTCC NO：M2019199。
实施例2、植物乳杆菌DP189对海马神经营养通路的保护及抑制海马神经元的凋亡
一、菌悬液的制备
1、植物乳杆菌DP189(以下用DP189表示)接种于液体MRS培养基，37℃静置培养16h，4℃、6000rpm离心8min，收集菌体沉淀。
2、取步骤1得到的菌体沉淀，用无菌生理盐水悬浮，得到菌浓度为2×1010CFU/mL的DP189菌悬液。
二、分组处理
试验动物为清洁级Wistar雄性大鼠。
试验动物开始试验前进行连续3天的适应性饲养，然后随机分为4组，每组10只，处理如下：
对照组：连续21天每天灌胃一次生理盐水(单次单只的给予量为0.2mL)，22-27天Morris试验，随后处死试验动物；
模型组：连续21天每天注射皮质酮悬浮液(40mg/kg)，灌胃一次生理盐水(单次单只的给予量为0.2mL)，2次处理间隔6h，22-27天Morris试验，随后处死试验动物；
阳性药物组：连续21天每天注射皮质酮悬浮液(40mg/kg)，灌胃一次盐酸氟西汀溶液(单次给予盐酸氟西汀的剂量为10mg/kg体重，给予体积量为0.2mL)，2次处理间隔6h，22-27天Morris试验，随后处死试验动物；
DP189组：连续21天每天每天注射皮质酮悬浮液(40mg/kg)，灌胃一次步骤一制备的DP189菌悬液(单次给予量为5×109CFU/只)，2次处理间隔6h，22-27天Morris试验，随后处死试验动物。
三、对神经营养通路的保护作用
1、海马组织中神经营养因子相关生化指标的检测
处死试验动物后，冰袋上取出脑组织，剥离出海马组织，加入10倍体积的预冷的pH7.4、0.05M PBS缓冲液，匀浆，然后4℃、4000g/min离心20min，取上清液。采用ELISA试剂盒检测上清液中cAMP、BDNF、ACTH的含量。
大鼠经皮质酮诱导后，模型组大鼠与空白对照组相比，脑组织上清液中cAMP、BDNF含量显著降低，差异极显著(P<0.01)。用本发明的植物乳杆菌DP189干预抑郁大鼠3周后，大鼠海马组织上清液中神经营养因子的变化如图1所示(#与对照组比较，差异显著(P<0.05)，##与对照组比较，差异极显著(P<0.01)；*与模型组比较，差异显著(P<0.05)，**与模型组比较，差异极显著(P<0.01))。给予植物乳杆菌DP189干预后，脑组织海马上清液中cAMP和BDNF含量均大幅度提高，其中cAMP含量提高25％、BDNF含量提高14.4％，与模型组相比较差异显著(P<0.05)，而ACTH浓度有所下降，说明菌株DP189缓解了皮质酮诱导的抑郁症状。
2、DP189对海马CA1区神经元的保护作用
用本发明的植物乳杆菌DP189干预抑郁大鼠3周后，各试验组海马CA1区神经元的形态结构如图2所示。在光学显微镜下，正常对照组的海马CA1区锥体细胞层中的神经元是规则的、层次清晰、并且紧密排列，细胞核大并且呈现卵圆形、位于细胞的中央，具体结果见图2空白组。与空白组相比，其它应激组海马CA1区锥体细胞层神经元数量减少。抑郁模型组大鼠海马CA1区锥体神经元出现萎缩现象，排列不紧密，细胞间隙增大且形状不规则，三角形和梭形细胞数目增多，且神经元细胞着色深，见图2模型组。而给予植物乳杆菌DP189干预组大鼠海马CA1区锥体细胞与模型组相比数量增多，细胞排列紧密，且变性神经元的数量大幅度降低，见图2的DP189组。说明植物乳杆菌DP189可以有效的降低海马组织中神经元变形的趋势。
3、脑海马中脑神经营养因子通路相关蛋白指标的检测
用本发明的植物乳杆菌DP189干预抑郁大鼠3周后，各试验组大鼠海马组织神经营养通路的相关蛋白表达结果如图3所示(#与对照组比较，差异显著(P<0.05)，##与对照组比较，差异极显著(P<0.01)；*与模型组比较，差异显著(P<0.05)，**与模型组比较，差异极显著(P<0.01))。皮质酮直接作用于脑组织海马细胞，显著降低了神经营养通路的相关蛋白cAMP、CREB与BDNF的表达，与空白对照组相比差异极显著(P<0.01)。而给与植物乳杆菌DP189干预后，能够提高大鼠脑海马中cAMP、CREB与BDNF蛋白的表达量，与模型组相比差异显著(P<0.05/P<0.01)。这一结果表明植物乳杆菌DP189能够通过上调脑组织神经营养通路的相关蛋白的表达量，从而对抗皮质酮引起的抑郁损伤。
四、对抑郁大鼠肠道菌群的调节作用
利用高通量宏基因组测序手段对各试验组大鼠肠道粪便进行了16s高通量测序，并进行了菌群多样性OTU分析，主成分PCA分析以及群落结构分析等。各组大鼠肠道菌群的丰度及多样性比较结果如表1所示。CHAO和ACE指数是用来估计物种总数的指标，Shannon指数是微生物多样性的指标。模型组大鼠CHAO与ACE均低于空白对照组，而DP189干预组CHAO与ACE均与高于模型组，且ACE指数与模型组相比差异极显著(P<0.01)，说明通过灌胃植物乳杆菌DP189后大鼠肠道中菌群的数量明显增加。对比Shannon指数，DP189组显著高于模型组，差异极显著(P<0.01)，说明DP189干预后提高了该组大鼠粪便中菌群的多样性。以上结果说明植物乳杆菌DP189通过增加肠道菌群数量与多样性来发挥调节肠道菌群的功能。
表1各组大鼠肠道菌群的丰度及多样性比较
组别 OTUs CHAO ACE Shannon
空白对照组 1397±82.71 2068.33±82.50<sup>*</sup> 2591.33±104.5<sup>**</sup> 4.95±0.19<sup>**</sup>
模型组 1314±105.01 1724.17±144.78<sup>#</sup> 1759.01±102.5<sup>##</sup> 4.26±0.13<sup>##</sup>
氟西汀组 1356±97.34 2001.33±159.01<sup>*</sup> 2515.37±201.02<sup>**</sup> 4.24±0.09<sup>##</sup>
DP189组 1360±97.11 1923.33±174.79 2291.33±223.18<sup>**</sup> 5.07±0.12<sup>**</sup>
表1中，#与对照组比较，差异显著(P<0.05)，##与对照组比较，差异极显著(P<0.01)；*与模型组比较，差异显著(P<0.05)，**与模型组比较，差异极显著(P<0.01)。
主成分分析PCoA结果如图4所示。空白对照组、DP189组和盐酸氟西汀组分布相对集中，而与模型组距离较远。因为在PCoA分析中，两点之间的距离越远表示两个样品的微生物群落差异越大。因此，PCoA分析结果表明，DP189组与空白组样本之间的微生物群落差异较小，与模型组差异较大，间接说明DP189组大鼠肠道内的菌群更接近与空白组。
表2各组大鼠肠道菌群科水平的物种相对丰度(％)
Figure BDA0002057248250000101
Figure BDA0002057248250000111
对各组大鼠肠道菌群科水平进行了分析，分析结果见表2。各组大鼠肠道菌群中主要以乳杆菌科(Lactobacillaceae)、毛螺菌科(Lachnospiraceae)、瘤胃菌科(Ruminococcaceae)、普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)和紫单孢菌科(Porphyromonadaceae)为主。给予植物乳杆菌DP189干预后，试验大鼠肠道菌群中的微生物丰度发生变化，与模型组相比，DP189组肠道内乳杆菌科(Lactobacillaceae)、拟杆菌科(Bacteroidaceae)等有益微生物丰度增加，同时，腹泻型IBS患者中优势菌群普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)的丰度显著受到抑制，表明通过灌胃植物乳杆菌DP189，促进了肠道有益菌的增殖，抑制有害菌的生长，起到调节肠道菌群平衡的功效。
五、对凋亡神经元的修复
1、DP189对抑郁大鼠学习能力的影响
水迷宫中大鼠的定向航行逃避潜伏期结果由表3可知，各组大鼠在寻找平台潜伏期的训练中表现不同，空白对照组大鼠随着训练天数的增加寻找平台的时间逐渐缩短，至第4天时，仅需21.91±3.87s即可爬到平台上，而模型组则需要47.99±3.72s，与空白对照组相比差异极显著(P<0.01)，说明模型组大鼠空间学习记忆功能受到严重损害导致潜伏期延长。而给予植物乳杆菌DP189干预组大鼠的潜伏期时间缩短至30.37±3.96s，与模型组相比差异极显著(P<0.01)，说明灌胃植物乳杆菌DP189显著提高了抑郁大鼠的学习能力。
表3各组大鼠定向航行逃避潜伏期时间
组别 模型组 空白对照组 盐酸氟西汀组 DP189组
第一天(s) 64.17±4.57<sup>##</sup> 49.84±3.48<sup>**</sup> 55.86±6.49 56.94±5.15
第二天(s) 57.18±3.83<sup>##</sup> 38.46±4.16<sup>**</sup> 49.37±3.53<sup>*##</sup> 48.32±4.18<sup>*#</sup>
第三天(s) 51.83±4.77<sup>##</sup> 29.37±3.36<sup>**</sup> 36.45±4.15<sup>**</sup> 39.77±4.15<sup>**#</sup>
第四天(s) 47.99±3.72<sup>##</sup> 21.91±3.87<sup>**</sup> 27.37±3.36<sup>**</sup> 30.37±3.96<sup>**#</sup>
组间比较：#与对照组比较，差异显著(P<0.05)，##与对照组比较，差异极显著(P<0.01)；*与模型组比较，差异显著(P<0.05)，**与模型组比较，差异极显著(P<0.01)。
2、DP189对抑郁大鼠记忆能力的影响
第5天开展大鼠空间探索实验，用本发明的植物乳杆菌DP189干预抑郁大鼠3周后，大鼠空间探索120s穿越站台次数变化如图5所示(#与对照组比较，差异显著(P<0.05)，##与对照组比较，差异极显著(P<0.01)；*与模型组比较，差异显著(P<0.05)，**与模型组比较，差异极显著(P<0.01))。各试验组大鼠进水后便开始寻找平台，并且都显示出了对原始平台的记忆行为。2min内，模型组大鼠穿越站台的次数为4.17±1.0，而给予植物乳杆菌DP189干预后穿越站台次数上升至5.12±1.0，说明植物乳杆菌DP189提高了抑郁大鼠的记忆能力。
3、DP189对抑郁大鼠海马神经元凋亡细胞的影响
大鼠海马切片经Tunel染色在荧光显微镜下观察时，正常的神经元细胞核被DPAI染色后呈蓝色，而阳性凋亡细胞经Tunel染色后呈绿色。本研究利用Tunel染色检测海马神经元细胞凋亡的情况和细胞凋亡率如图6、图7所示(#与对照组比较，差异显著(P<0.05)，##与对照组比较，差异极显著(P<0.01)；*与模型组比较，差异显著(P<0.05)，**与模型组比较，差异极显著(P<0.01))。与对照组相比，抑郁大鼠海马神经元出现明显的凋亡现象，细胞凋亡率显著升高达到36.59±3.51％，与对照组相比差异极显著(P<0.01)；抑郁大鼠经盐酸氟西汀和植物乳杆菌DP189干预后，阳性凋亡细胞数量明显减少，细胞凋亡率显著降低，与模型组相比差异极显著(P<0.01)，说明植物乳杆菌DP189可降低抑郁症模型大鼠海马区的神经元凋亡。
4、脑海马中神经元凋亡通路相关蛋白指标的检测
JNK信号通路可被不同的刺激所激活，如炎症细胞因子和压力应激因子等，该通路在细胞生长、凋亡和应激等生理和病理过程中发挥重要作用。用本发明的植物乳杆菌DP189干预抑郁大鼠3周后，抑郁模型大鼠JUN信号通路相关蛋白的表达如图8所示(#与对照组比较，差异显著(P<0.05)，##与对照组比较，差异极显著(P<0.01)；*与模型组比较，差异显著(P<0.05)，**与模型组比较，差异极显著(P<0.01))。由于长期暴露在皮质酮压力下，有丝分裂原活化蛋白激酶MKK7的表达量增加，在此激酶的激活下，海马组织中凋亡蛋白JUK2和Bcl-2的表达量增加，但是给予植物乳杆菌DP189干预后能够降低凋亡蛋白MKK7、JUK2以及Bcl-2蛋白表达升高(P<0.01)，提示植物乳杆菌DP189能抑制JUK信号通路中相关蛋白的表达，从而抑制神经元细胞凋亡对脑组织神经造成的损伤。
本发明公开了一种植物乳杆菌DP189及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的产品进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
序列表
<110> 吉林省农业科学院
<120> 植物乳杆菌DP189及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1480
<212> DNA
<213> 植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)
<400> 1
atacatgcaa gtcgaacgaa ctctggtatt gattggtgct tgcatcatga tttacctttg 60
agtgagtggc gaactggtga gtaacacgtg ggaaacctgc ccagaagcgg gggataacac 120
ctggaaacag atgctaatac cgcataacaa cttggaccgc atggtccgag tttgaaagat 180
ggcttcggct atcacttttg gatggtcccg cggcgtatta gctagatggt ggggtaacgg 240
ctcaccatgg caatgatacg tagccgacct gagagggtaa tcggccacat tgggactgag 300
acacggccca aactcctacg ggaggcagca gtagggaatc ttccacaatg gacgaaagtc 360
tgatggagca acgccgcgtg agtgaagaag ggtttcggct cgtaaaactc tgttgttaaa 420
gaagaacata tctgagagta actgttcagg tattgacggt atttaaccag aaagccacgg 480
ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtaggtggca agcgttgtcc ggatttattg 540
ggcgtaaagc gagcgcaggc ggttttttaa gtctgatgtg aaagccttcg gctcaaccga 600
agaagtgcat cggaaactgg gaaacttgag tgcagaagag gacagtggaa ctccatgtgt 660
agcggtgaaa tgcgtagata tatggaagaa caccagtggc gaaggcggct gtctggtctg 720
taactgacgc tgaggctcga aagtatgggt agcaaacagg attagatacc ctggtagtcc 780
ataccgtaaa cgatgaatgc taagtgttgg agggtttccg cccttcagtg ctgcagctaa 840
cgcattaagc attccgcctg gggagtacgg ccgcaaggct gaaactcaaa ggaattgacg 900
ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gctacgcgaa gaaccttacc 960
aggtcttgac atactatgca aatctaagag attagacgtt cccttcgggg acatggatac 1020
aggtggtgca tggttgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga 1080
gcgcaaccct tattatcagt tgccagcatt aagttgggca ctctggtgag actgccggtg 1140
acaaaccgga ggaaggtggg gatgacgtca aatcatcatg ccccttatga cctgggctac 1200
acacgtgcta caatggatgg tacaacgagt tgcgaactcg cgagagtaag ctaatctctt 1260
aaagccattc tcagttcgga ttgtaggctg caactcgcct acatgaagtc ggaatcgcta 1320
gtaatcgcgg atcagcatgc cgcggtgaat acgttcccgg gccttgtaca caccgcccgt 1380
cacaccatga gagtttgtaa cacccaaagt cggtggggta accttttagg aaccagccgc 1440
ctaaggtggg acagatgatt agggtgaagt cgtaacaagg 1480

Claims (8)

1.植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189，其特征在于，该菌株已于2019年3月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M2019199。
2.如权利要求1所述的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189在制备预防抑郁药品或治疗抑郁药品中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药品的功能包括(a1)至(a5)中的至少一项：
(a1)降低抑郁患者海马神经元的损伤；
(a2)提高脑组织中BDNF、cAMP蛋白的含量；
(a3)提高抑郁患者肠道微生物的菌群平衡；
(a4)降低海马神经元细胞的凋亡；
(a5)降低凋亡蛋白JUK2和Bcl-2的含量。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药品为胶囊、粉剂或片剂。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述粉剂采用冷冻干燥工艺制备。
6.以权利要求1所述的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DP189作为活性成份的药品。
7.根据权利要求6所述的药品，其特征在于，该药品为预防抑郁药品或治疗抑郁药品。
8.根据权利要求6所述的药品，其特征在于，该药品的功能包括(a1)至(a5)中的至少一项：
(a1)降低抑郁患者海马神经元的损伤；
(a2)提高脑组织中BDNF、cAMP蛋白的含量；
(a3)提高抑郁患者肠道微生物的菌群平衡；
(a4)降低海马神经元细胞的凋亡；
(a5)降低凋亡蛋白JUK2和Bcl-2的含量。
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