CN110054702A

CN110054702A - 玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白及其编码基因和应用

Info

Publication number: CN110054702A
Application number: CN201910321167.0A
Authority: CN
Inventors: 姚斌; 柏映国; 罗会颖; 于心蕊; 陈家明; 涂涛; 孟昆; 王亚茹; 黄火清; 苏小运; 王苑; 师霞
Original assignee: Feed Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Institute of Animal Science of CAAS
Priority date: 2019-04-20
Filing date: 2019-04-20
Publication date: 2019-07-26
Anticipated expiration: 2039-04-20
Also published as: CN110054702B

Abstract

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白及其编码基因和应用。玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白，由玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101与木聚糖酶XYNB组成，所述玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述木聚糖酶XYNB的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明大幅度提高了玉米赤霉烯酮降解酶的表达量，酶活是ZHD101单独表达的2.2倍。

Description

玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白及其编码基因和应用

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白及其编码基因和应用。

背景技术

玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)，又称F-2毒素，其化学名为6-(10-羟基-6-氧基-十一碳烯基)β-雷锁酸内酯，是一种主要由禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、黄色镰刀菌(Fusarum culmorum)和克地镰刀菌(Fusarum crookwellense)等真菌产生的次级代谢产物，同时也是世界上污染范围最广的一种镰刀菌毒素。ZEN分子式为C₁₈H₂₃O，平均分子量为318Da，白色晶体，沸点为510.12℃，熔点为217.32℃，对热较稳定，120℃加热4h不被降解。ZEN不溶于水，可溶于碱性水溶液、乙醚、苯、氯仿、醇类和酸类等物质，微溶于石油醚。

目前，ZEN降解的常用方法主要有化学法、物理法和生物法。其中，化学方法主要有用酸碱处理或氧化剂处理等。物理方法包括吸附剂吸附、加热加压、微波处理破坏ZEN结构等。上述方法主要是通过破坏ZEN苯环结构、修饰基团或吸附作用吸附毒素，以减少或去除毒素，但这些方法不仅成本高，效率低，还会造成营养物质流失，甚至造成二次污染。生物法主要是微生物吸附和和微生物降解两种。微生物降解是通过微生物代谢所产生的一种或多种酶协作对毒素进行降解，条件温和，特异性强，不破坏原有营养成分且效率高，是一种环保、高效、实用性强的处理方法。基因zhd101已被证实具有降解玉米赤霉烯酮的能力，但其在外源表达系统的表达量较低，同时，玉米赤霉烯酮水解酶降解活性测定方法主要有HPLC、气相色谱法(GC法)、薄层色谱法(TCL法)、免疫亲和柱-高效液相色谱法(IAC-HPLC)、酶联免疫吸附法(ELISA)等，操作较复杂，耗费时间且成本高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白。

本发明的再一目的在于提供上述玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白的编码基因。

本发明的再一目的在于提供含有上述编码基因的重组表达载体。

本发明的再一目的在于提供含量有上述编码基因的重组菌株。

本发明的再一目的在于提供上述融合蛋白的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述融合蛋白的应用。

本发明的的再一目的在于提供快速测定玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101酶活的方法。

本发明的玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白，由玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101与木聚糖酶XYNB组成，所述玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，木聚糖酶XYNB的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

SEQ ID No.1：

MRTRSTISTPNGITWYYEQEGTGPDVVLVPDGLGECQMFDRSVSQIAAQGFRVTTFDMPGMSRSVKAPPETYTEVTAQKLASYVISVLDALDIKHATVWGCSSGASTVVALLLGYPDRIRNAMCHELPTKLLDHLSNTAVLEDEEISKILANVMLNDVSGGSEAWQAMGDEVHARLHKNYPVWARGYPRTIPPSAPVKDLEALRGKPLDWTVGAATPTESFFDNIVTATKAGVNIGLLPGMHFPYVSHPDVFAKYVVETTQKYL

其中，该酶包括265个氨基酸，蛋白理论分子量为30.7kDa，未预测到信号肽序列。

SEQ ID No.2：

VPHDSVAQRSDALHMLSERSTPSSTGENNGFYYSFWTDGGGDVTYTNGDAGAYTVEWSNVGNFVGGKGWNPGSAQDITYSGTFTPSGNGYLSVYGWTTDPLIEYYIVESYGDYNPGSGGTYKGTVTSDGSVYDIYTATRTNAASIQGTATFTQYWSVRQNKRVGGTVTTSNHFNAWAKLGMNLGTHNYQIVATEGYQSSGSSSITVQ

其中，该酶包括207个氨基酸，蛋白理论分子量为22.2kDa，未预测到信号肽序列。

本发明的玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白由玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101基因与木聚糖酶XYNB基因融合表达，所述玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101基因的核苷酸序列如SEQ IDNo.3所示：

atgagaactagatctactatttctactcctaacggtattacttggtactatgaacaagagggtactggtcctgatgttgttttggttccagatggtttgggtgaatgtcaaatgttcgatagatctgtttctcaaattgctgctcaaggttttagagttactactttcgatatgccaggaatgtctagatctgttaaggctccacctgaaacttacactgaggttactgctcaaaagttggcttcttacgttatctctgttttggatgctttggatatcaagcatgctactgtttggggttgttcttctggtgcttctactgttgttgctttgttgttgggttaccctgatagaattagaaacgctatgtgtcatgaattgccaactaagttgttggatcacttgtctaatactgctgttttggaggatgaagagatctctaagatcttggctaacgttatgttgaacgatgtttctggtggttctgaagcttggcaagctatgggagatgaggttcatgctagattgcacaagaattaccctgtttgggctagaggttatccaagaactattccaccttctgctcctgttaaggatttggaagctttgagaggtaaacctttggattggactgttggtgctgctactccaactgagtctttctttgataacatcgttactgctactaaagctggtgttaatattggtttgttgcctggtatgcattttccttatgtttctcacccagatgttttcgctaagtacgttgttgagactactcaaaaatatttgtaa

木聚糖酶XYNB基因的核苷酸序列SEQ ID No.4所示：

gttccacacgactctgttgctcaaagatccgatgccttgcacatgttgtctgagagatccactccatcttccaccggtgaaaacaacggtttctactactccttctggactgatggtggtggtgacgttacttacactaacggtgatgctggtgcttacactgttgagtggtctaacgttggtaacttcgtcggtggtaaaggttggaacccaggttctgctcaggacattacttactccggtactttcactccatccggtaacggttacttgtccgtttacggttggactactgacccactgatcgagtactacatcgttgaatcctacggtgactacaaccctggttctggtggtacttacaagggtactgttacttccgacggttccgtctacgatatctacactgctactagaactaacgccgcttccattcaaggtactgctactttcacccaatactggtccgtcagacagaacaagagagttggaggtactgtcaccacttccaaccactttaacgcttgggctaagctgggtatgaacttgggtactcacaactaccagatcgttgctaccgaaggttaccaatcttctggttcctcctccattactgttcaa

本发明还提供含有上述编码基因的重组表达载体，优选为pPICZ(α)A-xynb-linker-zhd101。

接头序列linker的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示：

Tctgcttcttccggtggtactactccaaccaccact

本发明还提供了包含上述融合基因的重组菌株，优选为毕赤酵母X33/xynb+zhd101。

本发明还提供上述融合蛋白的制备方法，其包括以下步骤：

(1)用包含编码玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白的基因的重组表达载体转化宿主细胞，得到重组菌株；

(2)培养重组菌株，诱导玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白表达；

(3)纯化玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白。

为了测定赤霉烯酮降解酶的性质，通过如硫酸铵沉淀，透析、超滤和层析的简单方法纯化赤霉烯酮降解酶。经过简单的净化，融合蛋白的纯度足以满足酶学性质测定的要求。

本发明还提供上述融合蛋白的应用，包括在生物质能源、食品工业和饲料工业等方面的应用。

本发明还提供快速测定玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101酶活的方法，包括以下步骤：

(1)获取由玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101与木聚糖酶XYNB组成的融合蛋白；

(2)测定木聚糖酶XYNB的酶活；

(3)利用线性公式计算玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101酶活。

本发明的有益效果：

本发明将来源于黑曲霉的酸性木聚糖酶XYNB和ZEN水解酶ZHD101在毕赤酵母中进行融合表达，不仅提高了两种酶的活性，使XYNB木聚糖酶活性与玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101酶活性呈线性化关系，大幅度提高了玉米赤霉烯酮降解酶的表达量，酶活是ZHD101单独表达的2.2倍。

附图说明

图1显示玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101酶活与木聚糖酶XYNB酶活的线性关系；

图2显示本发明的融合蛋白酶活与玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101酶活的比较情况；

图3显示本发明的SDS-PAGE结果。

具体实施方式

试验材料和试剂

1、菌株及载体：毕赤酵母X33。

2、酶类及其它生化试剂：内切酶、连接酶；

3、毕赤酵母培养基YPD(1％蛋白胨、0.5％酵母提取物、1％NaCl,pH自然)，BMGY(2％蛋白胨、1％酵母提取物、1％甘油、10％Yeast Nitrogen Base、0.1％生物素、pH自然)，BMMY(2％蛋白胨、1％酵母提取物、10％Yeast Nitrogen Base、0.1％生物素、1％甲醇、pH自然)。

实施例1

1.扩增融合蛋白序列

采用PCR的方法扩增zhd101和xynb基因片段，通过重组试剂盒与载体pPICZ(α)A连接，获得重组质粒pPICZ(α)A-xynb-linker-zhd101，并转化毕赤酵母X33，获得重组毕赤酵母菌株X33/xynb-linker-zhd101。

PCR所用引物如下：

xynb-pPICZ(α)A:

F:5'-AGAGAGGCTGAAGCTGAATTCGTTCCACACGACTCTGTTGCTCAAAGATCC

R:5'-TGGTGGTTGGAGTAGTACCACCGGAAGAAGCAGATTGAACAGTAATGGAGGAGGA

zhd101-pPICZ(α)A

F:5'-GCTTCTTCCGGTGGTACTACTCCAACCACCACTATGAGAACTAGATCTACTATT

R:5'-TTCTAGAAAGCTGGCGGCCGCTTACAAATATTTTTGAGTAGTCTCAACAAC

pPICZ(α)A-xynb-linker-zhd101

F:5'-GAGACTACTCAAAAATATTTGTAAGCGGCCGCCAGCTTTCTAGAACAAAAA

R:5'-AGCAACAGAGTCGTGTGGAACGAATTCAGCTTCAGCCTCTCTTTTCTCGAG

其中xynb-pPICZ(α)AF与xynb-pPICZ(α)AR用于扩增xynb的片段，zhd101-pPICZ(α)AF与zhd101-pPICZ(α)AR用于扩增zhd101的载体片段，pPICZ(α)A-xynb-linker-zhd101F与pPICZ(α)A-xynb-linker-zhd101R用于扩增pPICZ(α)A-xynb-linker-zhd101的片段(Linker已设在引物中)。

扩增结束后，将PCR产物进行核酸电泳检测，zhd101和xynb条带大小分别为837bp和676bp(加引物)，pPICZ(α)A扩增条带大小为3595bp，分别回收纯化。

2.构建重组菌株X33(pPICZ(α)A-xynb-linker-zhd101)

将回收的xynb与zhd101基因片段重组连接，测序成功后将xynb+zhd101与载体pPICZ(α)A再进行重组连接，直接将重组产物产物转化大肠杆菌TransⅠ感受态。

待测序正确后，利用SacI将重组质粒pPICZ(α)A-xynb-linker-zhd101进行酶切，回收产物电击转化毕赤酵母感受态细胞X33进行诱导表达，得到重组表达菌株X33(pPICZ(α)A-xynb-linker-zhd101)。

3.融合蛋白的诱导表达

将得到的重组表达菌株X33(pPICZ(α)A-xynb-linker-zhd101)接种至YPD培养基中进行种子培养，200rpm，30℃培养24h后，以1％接种量转接至BMGY培养基中，200rpm，30℃培养48h，富集足够的菌体后收集菌体并加入到含有1％甲醇的BMMY培养基中进行诱导表达。

4.测定酶活

诱导表达后每12h取样分别对ZHD101及XYNB进行酶活的测定

ZHD101酶活的测定(ZEN由DMSO溶)

37℃反应0.5h，加入800μL DMSO终止反应。

终止反应后，通过HPLC检测对照组及实验组ZEN剩余峰面积。

酶活力单位(U)：在37℃，反应0.5h条件下，在1h内能转化1μgZEN的酶量。

酶活计算(每毫升酶液所含酶活力单位)：反应体系中ZEN初始含量*(对照组峰面积-实验组峰面积)/对照组峰面积*2*稀释倍数*10。

XYNB酶活测定：

(榉木由pH5.0缓冲液溶)。

50℃，反应10min，加入1.5mLDNS终止反应，吸光值540nm下读值。使用制作的吸光值与酶活力的标准曲线算出酶活力。

酶活力单位(U):在50℃，反应10min条件下，1min内能转化1μmol榉木的酶量。

结果如图1所示，R²＝0.9245(>0.9)，按照上述曲线拟合方程为Y＝18.2X-18.1，其中X为木聚糖酶的酶活，Y为ZHD101酶活。XYNB酶活与ZHD101酶活具有显著的线性化关系，因此，可在发酵过程中通过XYNB酶活表征ZHD101酶活。

将重组表达菌株X33(pPICZ(α)A-xynb-linker-zhd101)以及X33(pPICZ(α)A-zhd101)以相同接种量同时进行诱导表达，培养相同时间进行取样，测定ZHD101酶活。

结果如图2所示，融合蛋白中ZHD101的酶活在发酵过程中一直高于单独表达的ZHD101的酶活，诱导表达48h后，融合蛋白XYNB+ZHD01的ZHD101酶活高达983.77U，而单独表达的ZHD101酶活为448.02U，通过融合表达，酶活是ZHD101单独表达的2.2倍。

5.融合蛋白的纯化

将诱导表达后的菌液12000rpm,10min离心，收集上清进行浓缩，再用10mM磷酸氢二钠溶液(柠檬酸调pH至7.0)进行透析，然后将透析后的酶液进行离子交换层析，A液为10mM磷酸氢二钠溶液(柠檬酸调pH至7.0)，B液为A液加1M Nacl，纯化蛋白，收集洗脱液，进行SDS-PAGE。

结果如图3所示，根据ZHD101蛋白理论分子量为30.7kDa，XYNB蛋白理论分子量为22.2kDa，融合蛋白理论分子量大小约52.9kDa，图3显示纯化的融合蛋白条带大小与其理论分子量一致。

序列表

<110> 中国农业科学院饲料研究所

<120> 玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白及其编码基因和应用

<160> 5

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 264

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Met Arg Thr Arg Ser Thr Ile Ser Thr Pro Asn Gly Ile Thr Trp Tyr

1 5 10 15

Tyr Glu Gln Glu Gly Thr Gly Pro Asp Val Val Leu Val Pro Asp Gly

20 25 30

Leu Gly Glu Cys Gln Met Phe Asp Arg Ser Val Ser Gln Ile Ala Ala

35 40 45

Gln Gly Phe Arg Val Thr Thr Phe Asp Met Pro Gly Met Ser Arg Ser

50 55 60

Val Lys Ala Pro Pro Glu Thr Tyr Thr Glu Val Thr Ala Gln Lys Leu

65 70 75 80

Ala Ser Tyr Val Ile Ser Val Leu Asp Ala Leu Asp Ile Lys His Ala

85 90 95

Thr Val Trp Gly Cys Ser Ser Gly Ala Ser Thr Val Val Ala Leu Leu

100 105 110

Leu Gly Tyr Pro Asp Arg Ile Arg Asn Ala Met Cys His Glu Leu Pro

115 120 125

Thr Lys Leu Leu Asp His Leu Ser Asn Thr Ala Val Leu Glu Asp Glu

130 135 140

Glu Ile Ser Lys Ile Leu Ala Asn Val Met Leu Asn Asp Val Ser Gly

145 150 155 160

Gly Ser Glu Ala Trp Gln Ala Met Gly Asp Glu Val His Ala Arg Leu

165 170 175

His Lys Asn Tyr Pro Val Trp Ala Arg Gly Tyr Pro Arg Thr Ile Pro

180 185 190

Pro Ser Ala Pro Val Lys Asp Leu Glu Ala Leu Arg Gly Lys Pro Leu

195 200 205

Asp Trp Thr Val Gly Ala Ala Thr Pro Thr Glu Ser Phe Phe Asp Asn

210 215 220

Ile Val Thr Ala Thr Lys Ala Gly Val Asn Ile Gly Leu Leu Pro Gly

225 230 235 240

Met His Phe Pro Tyr Val Ser His Pro Asp Val Phe Ala Lys Tyr Val

245 250 255

Val Glu Thr Thr Gln Lys Tyr Leu

260

<210> 2

<211> 207

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Val Pro His Asp Ser Val Ala Gln Arg Ser Asp Ala Leu His Met Leu

1 5 10 15

Ser Glu Arg Ser Thr Pro Ser Ser Thr Gly Glu Asn Asn Gly Phe Tyr

20 25 30

Tyr Ser Phe Trp Thr Asp Gly Gly Gly Asp Val Thr Tyr Thr Asn Gly

35 40 45

Asp Ala Gly Ala Tyr Thr Val Glu Trp Ser Asn Val Gly Asn Phe Val

50 55 60

Gly Gly Lys Gly Trp Asn Pro Gly Ser Ala Gln Asp Ile Thr Tyr Ser

65 70 75 80

Gly Thr Phe Thr Pro Ser Gly Asn Gly Tyr Leu Ser Val Tyr Gly Trp

85 90 95

Thr Thr Asp Pro Leu Ile Glu Tyr Tyr Ile Val Glu Ser Tyr Gly Asp

100 105 110

Tyr Asn Pro Gly Ser Gly Gly Thr Tyr Lys Gly Thr Val Thr Ser Asp

115 120 125

Gly Ser Val Tyr Asp Ile Tyr Thr Ala Thr Arg Thr Asn Ala Ala Ser

130 135 140

Ile Gln Gly Thr Ala Thr Phe Thr Gln Tyr Trp Ser Val Arg Gln Asn

145 150 155 160

Lys Arg Val Gly Gly Thr Val Thr Thr Ser Asn His Phe Asn Ala Trp

165 170 175

Ala Lys Leu Gly Met Asn Leu Gly Thr His Asn Tyr Gln Ile Val Ala

180 185 190

Thr Glu Gly Tyr Gln Ser Ser Gly Ser Ser Ser Ile Thr Val Gln

195 200 205

<210> 3

<211> 795

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

atgagaacta gatctactat ttctactcct aacggtatta cttggtacta tgaacaagag 60

ggtactggtc ctgatgttgt tttggttcca gatggtttgg gtgaatgtca aatgttcgat 120

agatctgttt ctcaaattgc tgctcaaggt tttagagtta ctactttcga tatgccagga 180

atgtctagat ctgttaaggc tccacctgaa acttacactg aggttactgc tcaaaagttg 240

gcttcttacg ttatctctgt tttggatgct ttggatatca agcatgctac tgtttggggt 300

tgttcttctg gtgcttctac tgttgttgct ttgttgttgg gttaccctga tagaattaga 360

aacgctatgt gtcatgaatt gccaactaag ttgttggatc acttgtctaa tactgctgtt 420

ttggaggatg aagagatctc taagatcttg gctaacgtta tgttgaacga tgtttctggt 480

ggttctgaag cttggcaagc tatgggagat gaggttcatg ctagattgca caagaattac 540

cctgtttggg ctagaggtta tccaagaact attccacctt ctgctcctgt taaggatttg 600

gaagctttga gaggtaaacc tttggattgg actgttggtg ctgctactcc aactgagtct 660

ttctttgata acatcgttac tgctactaaa gctggtgtta atattggttt gttgcctggt 720

atgcattttc cttatgtttc tcacccagat gttttcgcta agtacgttgt tgagactact 780

caaaaatatt tgtaa 795

<210> 4

<211> 621

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

gttccacacg actctgttgc tcaaagatcc gatgccttgc acatgttgtc tgagagatcc 60

actccatctt ccaccggtga aaacaacggt ttctactact ccttctggac tgatggtggt 120

ggtgacgtta cttacactaa cggtgatgct ggtgcttaca ctgttgagtg gtctaacgtt 180

ggtaacttcg tcggtggtaa aggttggaac ccaggttctg ctcaggacat tacttactcc 240

ggtactttca ctccatccgg taacggttac ttgtccgttt acggttggac tactgaccca 300

ctgatcgagt actacatcgt tgaatcctac ggtgactaca accctggttc tggtggtact 360

tacaagggta ctgttacttc cgacggttcc gtctacgata tctacactgc tactagaact 420

aacgccgctt ccattcaagg tactgctact ttcacccaat actggtccgt cagacagaac 480

aagagagttg gaggtactgt caccacttcc aaccacttta acgcttgggc taagctgggt 540

atgaacttgg gtactcacaa ctaccagatc gttgctaccg aaggttacca atcttctggt 600

tcctcctcca ttactgttca a 621

<210> 5

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

tctgcttctt ccggtggtac tactccaacc accact 36

Claims

1.玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白由玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101与木聚糖酶XYNB组成，所述玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101的氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示，所述木聚糖酶XYNB的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白基因，其特征在于，所述融合蛋白基因编码权利要求1所述的玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白。

3.根据权利要求2所述的玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白基因，其特征在于，所述玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白由玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101基因与木聚糖酶XYNB基因融合表达，所述玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101基因的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，木聚糖酶XYNB基因的核苷酸序列SEQ ID No.4所示。

4.根据权利要求2所述的玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白基因，其特征在于，玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101基因与木聚糖酶XYNB基因之间还连接有接头序列，接头序列的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

5.包含权利要求2所述的玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白基因的重组表达载体。

6.包含权利要求2所述的玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白基因的重组菌株。

7.制备权利要求1所述的玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(2)培养重组菌株，诱导玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白表达；

(3)纯化玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白。

8.权利要求1所述的玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白的应用。

9.权利要求1所述的玉米赤霉烯酮降解酶融合蛋白用于降解玉米赤霉烯酮的应用。

10.快速测定玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101酶活的方法，其特征在于，所述方法中包括以下步骤：

(1)获取权利要求1所述的由玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101与木聚糖酶XYNB组成的融合蛋白；

(2)测定木聚糖酶XYNB的酶活；

(3)利用线性公式计算玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101酶活。