CN109970837A - 一种利用高速逆流色谱法从细柱五加叶中分离制备三萜皂苷化合物的方法 - Google Patents

一种利用高速逆流色谱法从细柱五加叶中分离制备三萜皂苷化合物的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109970837A
CN109970837A CN201711500927.1A CN201711500927A CN109970837A CN 109970837 A CN109970837 A CN 109970837A CN 201711500927 A CN201711500927 A CN 201711500927A CN 109970837 A CN109970837 A CN 109970837A
Authority
CN
China
Prior art keywords
phase
acanthopanax gracilistylus
leaf
triterpene saponin
saponin compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201711500927.1A
Other languages
English (en)
Inventor
邹亲朋
戴玲
宋雄辉
刘向前
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Changsha Broad-Ocean Bio-Science Co ltd
Original Assignee
Changsha Broad-Ocean Bio-Science Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Changsha Broad-Ocean Bio-Science Co ltd filed Critical Changsha Broad-Ocean Bio-Science Co ltd
Priority to CN201711500927.1A priority Critical patent/CN109970837A/zh
Publication of CN109970837A publication Critical patent/CN109970837A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J63/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by expansion of only one ring by one or two atoms
    • C07J63/008—Expansion of ring D by one atom, e.g. D homo steroids

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种利用高速逆流色谱法从细柱五加叶中分离制备高纯度三萜皂苷化合物的方法。该方法用溶剂提取细柱五加叶得到细柱五加叶提取物浸膏，用低极性溶剂萃取除去色素后，依次用脂肪酸酯、正丁醇萃取，取正丁醇萃取物以体积比1‑4∶0.2‑0.8∶0.5‑1.5∶2‑5的脂肪酸酯∶脂肪醇∶甲醇∶水作为两相溶剂体系在高速逆流色谱仪上进行分离，得到五个三萜皂苷化合物acankoreoside B、acankoreoside D、acantrifoside A、acankoreoside A、acankoreoside C。本发明的三萜皂苷化合物分离制备方法具有提取率高，操作简单，溶剂用量少，无样品吸附、损失和污染，单体纯度高等优点。

Description

一种利用高速逆流色谱法从细柱五加叶中分离制备三萜皂苷 化合物的方法
技术领域
本发明涉及中药提取分离制备技术领域，尤其涉及一种利用高速逆流色谱法从细柱五加叶中分离制备三萜皂苷化合物的方法。
背景技术
细柱五加(Acanthopanax gracilistylus W.W.Smith)为五加科五加属植物，其根皮为其主要的药用部分，具有强筋壮骨、祛风除湿、利水消肿、补益肝肾、利水消肿之功效。经过近几十年科学工作者其根皮化学成分的研究，作为药用的细柱五加根皮含有紫丁香苷、β-谷甾醇、五加酸、刺五加苷B1、贝壳烯酸、胡萝卜苷、各种有机酸、色素、挥发油等成分。近年来，国内外正全方位开发该属植物，包括茎、叶和果实等，药理研究结果表明，细柱五加叶中丰富的羽扇豆烷型三萜类化合物可抑制脂多糖诱导的巨噬细胞 RAW264.7，炎症因子TNF-α、IL-1β、HMGB1的分泌，其三萜类化合物在抗炎药物、肝病药物等领域具有很好的开发前景，通过近10多年对细柱五加叶的系统研究，细柱五加叶中的化学成分已基本明晰，对细柱五加叶中三萜类化合物的纯化工艺研究、动物活性研究及药物系统开发是今后的主要研究方向。
高速逆流色谱是20世纪80年代发展起来的一种连续高效的液-液分配色谱技术。通过两相互不相溶的溶剂体系，在高速旋转的情况下，实现样品在两相中的分配。高速逆流色谱技术，有其独特的优势，它可以克服样品不可逆吸附、样品物质的稳定性、溶剂的浪费、制备时间过长、制备量不足的劣势，而且其应用极性范围很广的化合物的分离，在天然产物研究中发挥着重要作用。已有研究表明，HSCCC可用于三萜类化合物的分离，如桔梗皂苷、科罗索酸、积雪草酸、熊果酸、人参皂苷等的分离，但对HSCCC用于分离五加叶中羽扇豆烷型三萜皂苷类化合物的研究未见报道。基于HSCCC的特性和优点，HSCCC用于细柱五加叶中系列羽扇豆烷型化合物的分离，有望很好地解决现有分离工艺的不足，为其产业化生产提供一种新的方法。
目前细柱五加叶三萜皂苷化合物分离制备方法主要有组合色谱法，包括反复硅胶柱层析、ODS柱层析、 Sephadex-LH20柱色谱、制备薄层色谱、半制备高效液相色谱等方法，这些方法不仅操作复杂，溶剂用量大，而且在分离过程中有吸附、损失和污染等现象，使整个分离过程效率不高。利用高速逆流色谱法从细柱五加叶中同时分离制备多种三萜皂苷化合物的方法未见报道。
发明内容
针对以上问题，本发明的目的在于提供一种提取率高，操作简单，溶剂用量少，无样品吸附、损失和污染，单体纯度高的细柱五加叶三萜皂苷化合物的分离方法。
本发明采用如下技术方案：
本发明的细柱五加叶三萜皂苷化合物分离制备具体操作步骤如下：
(1)取细柱五加叶，用6-15倍体积的溶剂提取，静置，过滤，然后减压蒸馏回收溶剂得到细柱五加叶提取物浸膏；细柱五加叶提取物浸膏用水分散，经低极性溶剂萃取除去色素后依次用脂肪酸酯、正丁醇萃取，将正丁醇萃取物减压蒸馏回收溶剂得到三萜皂苷粗提物；
(2)高速逆流色谱法分离制备三萜皂苷化合物的两相溶剂系统由脂肪酸酯、脂肪醇、甲醇和水组成，四种组分体积比为1-4∶0.2-0.8∶0.5-1.5∶2-5，将该溶剂系统混合均匀静置后，分开上下相，超声20-40min，溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，以16-40ml/min的流速将上相泵入管路，待固定相充满整个管路后，停泵，启动主机，然后以1.5-3ml/min的流速泵入流动相，当上下相平衡时，记录固定相流出的体积，计算得到固定相的保留值，取步骤(1)制备的三萜皂苷粗提物，溶解于固定相中，进样，根据检测器检测谱图，收集各峰的组分，将各峰对应的收集液分别浓缩，干燥。
步骤(1)中，提取溶剂为甲醇、乙醇、水中的一种或多种。
步骤(1)中，低极性溶剂为石油醚或正己烷。
步骤(2)中，脂肪酸酯为乙酸乙酯、甲酸乙酯或乙酸甲酯。
步骤(2)中，两相溶剂系统采用乙酸乙酯、正丁醇、甲醇和水四种组分体积比为3∶0.3∶0.8∶4，临用前分开上下相，超声40min，以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，以25ml/min的流速将上相泵入管路，带固定相充满整个管路后，停泵，启动主机，把转速调到900r/min，然后以2ml/min的流速泵入流动相，进样量为20ml，紫外检测波长为210nm，根据紫外检测谱图，收集各峰的组分，将各峰对应的收集液分别浓缩，干燥。
本发明的优点如下：
本发明的分离制备方法具有提取率高，操作简单，溶剂用量少，无样品吸附、损失和污染，避免了萃取物在高温下热裂解，保护生理活性物质的活性等优点，本发明的分离制备方法可一次性分离得到五个三萜皂苷类化合物，经检测纯度均达98％以上。
附图说明
图1本发明分离制备三萜皂苷化合物的高速逆流色谱图
图2实施例1所得到的组分1对应化合物a的高效液相色谱图
图3实施例1所得到的组分2对应化合物b的高效液相色谱图
图4实施例1所得到的组分3对应化合物c的高效液相色谱图
图5实施例1所得到的组分4对应化合物d的高效液相色谱图
图6实施例1所得到的组分5对应化合物e的高效液相色谱图
具体实施方式
下面的实施例是对本发明的进一步详细描述。
实施例1
(1)细柱五加叶三萜皂苷粗提物的制备：
称取细柱五加叶，用8倍体积的甲醇提取，静置，过滤，然后在水浴中减压蒸馏回收溶剂，制得细柱五加叶提取物浸膏；细柱五加叶提取物浸膏用水分散，用石油醚萃取除去色素，然后依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，将正丁醇萃取物减压回收浓缩得到细柱五加叶三萜皂苷粗提物；
(2)高速逆流色谱法分离制备三萜皂苷化合物：
两相溶剂系统采用正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水体积比为3∶0.3∶0.8∶4，将该溶剂系统混合均匀后静置，分开上下相，超声30min，其中溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，以30ml/min的流速将上相泵入管路，待固定相充满整个管路后，停泵，启动主机，把转速调到800r/min，然后以1.5ml/min的流速泵入流动相，当上下相平衡时，记录固定相流出的体积，计算得到固定相流出的体积，计算得到固定相的保留值，取步骤(1)制备的三萜皂苷粗提物，溶解于固定相中，进样量为20ml，以1.5ml/min的流速泵入流动相，紫外检测波长为210nm，根据检测器检测谱图，收集各峰的组分，依次命名为组分1、2、3、4、 5，将各峰对应的收集液分别浓缩，干燥。
(3)纯度检测
仪器：LC-10AT型高效液相色谱仪，SPD-10A型紫外可见检测器，CBM-10A型色谱工作站，色谱柱： Promosil C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液梯度洗脱，0→15min，78％A→70％ A，15→23min，70％A，21→35min，70％A→60％A，35→45min，60％A→78％A，45→50min，78％A；流速1ml/min；柱温：30℃；分析样品用0.45μm滤头过滤。
(4)三萜化合物结构鉴定
组分1 白色粉末；m.p.为200～201℃，Liebermann-Burchard反应和Molish反应均呈阳性，推测为三萜化合物或其皂苷。1H-NMR(400MHz，pyrindine-d5)如下，苷元：3.92(1H，brs，H-3)连接羟基碳上的质子，2.02(1H，m，H-9)，4.34(m，H-11)，3.13(1H，m，H-13)，3.42(1H，m，H-19)，3.69(1H，d，H-23a)，3.90(1H，d， H-23b)，1.29(3H，s，H-25)，1.26(3H，s，H-26)，1.00(3H，s，H-27)，烯氢质子：5.02(1H，H-29a)和5.23(1H，H-29b)， 2.02(3H，s，H-30)；5.98(1H，d，J＝7.9，H-1)，4.11(1H，m，H-2)，4.22(1H，m，H-3)，3.98(1H，m，H-4)，4.14(1H，m，H-5)，4.34(H-6)and 4.68(1H，m，H-6)；葡萄糖：4.96(1H，d，J＝8.0Hz，H-1)，3.92(1H，t，J＝9.7Hz，H-2)， 3.98(1H，m，H-3)，3.96(1H，t，J＝9.6Hz，H-4)，3.67(1H，d，J＝10.0Hz，H-5)，3,98(H-6)and4.22(H-6)；鼠李糖：6.03(1H，brs，H-1)，5.04(1H，brs，H-2)，4.35(1H，d，J＝9.6，H-3)，3.96(H-4)，5.04(H-5)and 2.04(3H，d，J＝6.0 Hz，H-6)。13C-NMR(125MHz，pyrindine-d5)：苷元δ：37.04(C-1)，27.51(C-2)，77.08(C-3)，40.97(C-4)，45.07(C-5)，19.13(C-6)，36.05(C-7)，42.89(C-8)，57.24(C-9)，39.92(C-10)，69.86(C-11)，39.14(C-12)，38.24(C-13)， 42.98(C-14)，31.04(C-15)，32.64(C-16)，58.06(C-17)，50.17(C-18)，48.01(C-19)，151.21(C-20)，30.80(C-21)， 37.00(C-22)，72.46(C-23)，19.02(C-24)，18.03(C-25)，18.03(C-26)，15.15(C-27)，174.25(C-28)，112.46(C-29)， 20.24(C-30)。葡萄糖碳信号：96.55(C-1)，75.24(C-2)，80.02(C-3)，70.78(C-4)，80.21(C-5)，70.12(C-6)；葡萄糖碳信号：100.14(C-1’)，75.04(C-2’)，77.18(C-3’)，77.57(C-4’)，80.02(C-5’)，60.55(C-6’)；鼠李糖碳信号： 100.02(C-1”)，69.89(C-2”)，72.87(C-3”)，73.46(C-4”)，69.48(C-5”)，20.20(C-6”)。根据以上数据确定，组分1所对应的化合物a为acankoreosideB，其结构式如下所示。
组分2 白色粉末；m.p.为221～223℃，Liebermann-Burchard反应和Molish反应均呈阳性，推测为三萜化合物或其皂苷。1H-NMR(400MHz，pyrindine-d5)，该化合物还含有6.34(1H，d，7.9)、4.96(1H，d)、 5.86(1H，brs)三个糖端基质子。葡萄糖：4.96(1H，d，J＝8.0Hz，H-1)，3.92(1H，t，J＝9.7Hz，H-2)，3.98(1H，m，H-3)，4.25(1H，t，J＝9.6Hz，H-4)，4.04(1H，d，J＝10.0Hz，H-5)，3.96(H-6)and 4.05(H-6)；rha：6.02(1H，brs，H-1)， 5.05(1H，brs，H-2)，4.34(1H，d，J＝9.6，H-3)，4.05(H-4)，5.12(H-5)and 2.14(3H，d，J＝6.0Hz，H-6)。13C-NMR(125 MHz，pyrindine-d5)：苷元：32.46(C-1)，30.24(C-2)，72.55(C-3)，49.86C-4)，45.34(C-5)，19.78(C-6)，36.24(C-7)， 43.10(C-8)，60.24(C-9)，40.23(C-10)，69.78(C-11)，40.23(C-12)，40.21(C-13)，42.17(C-14)，29.85(C-15)， 31.57(C-16)，60.13(C-17)，50.24(C-18)，46.14(C-19)，149.87(C-20)，29.88(C-21)，36.78(C-22)，198.48(C-23)，20.05(C-24)，20.12(C-25)，18.04(C-26)，16.07(C-27)，180.35(C-28)，110.57(C-29)，20.12(C-30)；葡萄糖碳信号： 100.02(C-1)，81.21(C-2)，81.12(C-3)，69.13(C-4)，80.12(C-5)，70.11(C-6)；葡萄糖碳信号：102.48 (C-1’)，80.02(C-2’)，80.14(C-3’)，80.04(C-4’)，79.01(C-5’)，59.11(C-6’)；鼠李糖碳信号：100.08(C-1”)， 68.78(C-2”)，72.15(C-3”)，69.89(C-4”)，68.35(C-5”)，20.15(C-6”)。根据以上数据确定，组分2所对应的化合物b为acankoreoside D，其结构式如下所示。
组分3 白色粉末；m.p.为240～241℃，Liebermann-Burchard反应和Molish反应均呈阳性，推测为三萜化合物或其皂苷。1H-NMR(400MHz，pyrindine-d5)：2.10(1H，d，J＝11.0Hz，H-9)，4.01(1H，m，H-3) 和5.21(1H，m，H-11)为连接羟基碳的质子信号，3.01(1H，m，H-13)，3.25(1H，m，H-19)，0.98(3H，s，H-23)， 1.02(3H，s，H-24)，1.35(3H，s，H-25)，1.47(3H，s，H-26)，1.24(3H，s，H-27)，5.61(1H，brs，H-29a)，5.01(1H， brs，H-29b)，2.02(3H，s，H-30)；C-28-O-inner glc：5.84(1H，d，J＝7.9Hz，H-1)，3.94(1H，m，H-2)，4.04(1H，m， H-3)，3.89(1H，m，H-4)，3.58(1H，m，H-5)，3.96(H-6)，and 4.37(1H，d，J＝11.0Hz，H-6)；glc：5.02(1H，d，J＝ 8.0Hz，H-1)，4.13(1H，brs，H-2)，3.87(1H，m，H-3)，4.03(1H，t，J＝9.6Hz，H-4)，3.47(1H，d，J＝9.0Hz，H-5)，3.78(H-6)and 3.86(H-6)；rha：6.05(1H，brs，H-1)，4.37(1H，brs，H-2)，4.78(1H，d，J＝9.6，H-3)，3.83 (H-4)，4.95(H-5)and1.92(3H，d，J＝6.3Hz，H-6).13C-NMR(125MHz，pyrindine-d5)：苷元：35.23(C-1)， 28.94(C-2)，69.78(C-3)，40.12(C-4)，450.24(C-5)，20.05(C-6)，35.28(C-7)，42.85(C-8)，60.07(C-9)， 39.78(C-10)，69.01(C-11)，40.15(C-12)，36.79(C-13)，42.17(C-14)，29.20(C-15)，30.11(C-16)，60.11(C-17)， 50.26(C-18)，43.44(C-19)，149.85(C-20)，29.85(C-21)，40.01(C-22)，29.82(C-23)，22.91(C-24)，20.34(C-25)， 20.04(C-26)，14.79(C-27)，178.90(C-28)，119.26(C-29)，20.16(C-30)；葡萄糖碳信号：100.03(C-1)，75.78 (C-2)，80.22(C-3)，69.99(C-4)，81.22(C-5)，70.17(C-6)；葡萄糖’碳信号：99.93(C-1’)，80.02 (C-2’)，82.21(C-3’)，81.08(C-4’)，80.14(C-5’)，60.48(C-6’)；鼠李糖碳信号：102.25(C-1”)，69.86(C-2”)，70.78(C-3”)，75.56(C-4”)，69.24(C-5”)，20.06(C-6”)。根据以上数据确定，组分1所对应的化合物c为 acantrifoside A，结构式如下所示。
组分4 白色粉末；m.p.为218～219℃，Liebermann-Burchard反应和Molish反应均呈阳性，推测为三萜化合物或其皂苷。1H-NMR(400MHz，pyrindine-d5)如下：苷元：羟基碳上的质子4.17(1H，brs，H-3)， 3.01(1H，m，H-13)，4.13(1H，m，H-19)，甲基信号为1.69(3H，s，H-30)、1.54(3H，s，H-24)、1.03(3H，s， H-25)、1.34(3H，s，H-26)，1.07(3H，s，H-27)，5.13(1H，brs，H-29a)和5.24(1H，brs，H-29b)为烯氢的质子信号；C-28-O-葡萄糖：5.98(1H，d，J＝7.9Hz，H-1)，3.89(m，H-2)，4.12(m，H-3)，4.25(m，H-4)，3.89(m，H-5)， 4.14(H-6)及5.21(1H，d，J＝9.8Hz，H-6)；葡萄糖’：5.07(1H，d，J＝7.9Hz，H-1’)，4.13(1H，t，J＝9.2Hz，H-2’)， 4.13(H-3’)，4.24(1H，t，J＝9.4Hz，H-4’)，3.76(1H，d，J＝9.2Hz，H-5’)，3.86(1H，d，J＝10.2Hz，H-6’)and 3.98(H-6’)；鼠李糖：6.01(1H，brs，H-1”)，5.11(1H，brs，H-2”)，4.44(1H，d，J＝9.0Hz，H-3”)，4.76(H-4”)， 5.17(H-5”)和甲基信号1.47(3H，d，J＝6.1Hz，H-6”)。13C-NMR(125MHz，pyrindine-d5)：苷元：180.34(C-23) 和165.43(C-28)羰基信号，32.12(C-1)，三个亚甲基信号：25.41(C-12)、27.34(C-2)、29.87(C-15)，72.85(C-3)，49.87(C-4)，46.79(C-5)，19.85(C-6)，35.67(C-7)，39.88(C-8)，49.86(C-9)，38.63(C-10)，19.91(C-11)， 27.41(C-12)，40.10(C-13)，42.35(C-14)，33.56(C-16)，58.07(C-17)，49.93(C-18)，46.23(C-19)，149.78(C-20)， 29.38(C-21)，38.14(C-22)，20.04(C-24)，三个甲基信号：20.06(C-30)、20.06(C-25)、21.12(C-26)， 22.34(C-27)，，109.78(C-29)；葡萄糖碳信号：100.04(C-1)，73.37(C-2)，80.01(C-3)，69.89(C-4)，80.03 (C-5)，70.12(C-6)；葡萄糖’碳信号：111.05(C-1’)，80.05(C-2’)，81.23(C-3’)，81.47(C-4’)，78.56 (C-5’)，59.83(C-6’)；鼠李糖碳信号：99.94(C-1”)，69.95(C-2”)，72.37(C-3”)，75.68(C-4”)，69.79(C-5”)， 20.15(C-6”)。根据以上数据确定，组分4所对应的化合物d为acankoreosideA，其结构式如下所示。
组分5 白色粉末；m.p.为247～249℃。Liebermann-Burchard反应和Molish反应均呈阳性，推测为三萜化合物或其皂苷。1H-NMR(400MHz，CD3OD-d4)如下：苷元：有六个甲基信号为0.86(3H，s，H-27)，0.93 (3H，s，H-24)，0.94(3H，s，H-26)，1.03(3H，s，H-25)，1.04(3H，s，H-23)，1.25(3H，s，H-30)，两个连有羟基的质子为3.41(1H，brs，H-3)和3.42(1H，brs，H-11)，4.76(1H，brs，H-29b)和4.61(1H，brs，H-29a) 为烯氢的质子信号。C-28-O-葡萄糖：5.45(1H，d，J＝7.9Hz，H-1)，4.11(1H，d，J＝9.8Hz，H-6)，3.80(H-6)，3.43(m， H-5)，3.43(m，H-3)，3.41(m，H-4)，3.31(m，H-2)；葡萄糖′：4.40(1H，d，J＝7.9Hz，H-1′)，3.81(1H，H-6′)，3.66 (H-6′)，3.54(H-4′)，3.46(1H，H-3′)，3.44(1H，H-5′)，3.20(1H，H-2′)；鼠李糖：4.84(1H，brs，H-1)，3.97(H-5)，3.82 (1H，brs，H-3)，3.62(1H，H-2)，3.40(H-4)，1.27(3H，H-6)；C-3-O-葡萄糖：4.27(1H，brs，H-1″)，3.85(1H，d，J＝ 6.5Hz，H-5″)，3.66(1H，H-6″)，3.36(1H，H-3″)，3.28(1H，t，J＝9.5Hz，H-4″)，3.26(1H，H-2″)，3.21(1H， H-5″)。13C-NMR(125MHz，CD3OD-d4)：苷元：151.32(C-20)，110.75(C-29)，82.33(C-3)，70.69(C-11)， 57.89(C-17)，56.19(C-9)，50.91(C-5)，50.22(C-18)，48.17(C-19)，43.89(C-14)，4346(C-8)，40.24(C-10)， 38.38(C-12)，38.35(C-4)，38.21(C-17)，37.47(C-22)，36.62(C-1)，36.21(C-7)，32.86(C-16)，31.60(C-21)， 30.69(C-15)，29.65(C-23)，23.14(C-24)，22.12(C-19.62)，19.09(C-6)，17.84(C-26)，17.18(C-25)，15.06(C-27)； C-28-O-葡萄糖：95.30(C-1)，78.38(C-3)，77.72(C-5)，73.73(C-2)，71.03(C-4)，69.54(C-6)；葡萄糖′：104.4(C-1′)， 78.23(C-4′)，76.84(C-5′)，76.68(C-3′)，75.21(C-2′)，61.80(C-6′)；鼠李糖碳信号：102.93(C-1)，74.01(C-4)， 72.40(C-3)，72.15(C-2)，70.69(C-5)，17.84(C-6)；C-3-O-葡萄糖：101.59(C-1″)，79.67(C-3″)，78.06(C-5″)， 75.27(C-2″)，72.05(C-4″)，63.02(C-6″)。根据以上数据确定，组分5所对应的化合物e为acankoreoside C。结构式如下所示。
实施例2
(1)细柱五加叶三萜皂苷粗提物的制备：
称取细柱五加叶，用12倍体积的甲醇水溶液提取，静置，过滤，然后在水浴中减压蒸馏回收溶剂，制得细柱五加叶提取物浸膏；细柱五加叶提取物浸膏用水分散，用石油醚萃取除去色素，然后依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，将正丁醇萃取物减压回收浓缩得到细柱五加叶三萜皂苷粗提物；
(2)高速逆流色谱法分离制备三萜皂苷化合物：
两相溶剂系统采用正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水体积比为2.5∶0.6∶0.9∶3.5，将该溶剂系统混合均匀后静置，分开上下相，超声25min，其中溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，以35ml/min的流速将上相泵入管路，待固定相充满整个管路后，停泵，启动主机，把转速调到900r/min，然后以2ml/min的流速泵入流动相，当上下相平衡时，记录固定相流出的体积，计算得到固定相流出的体积，计算得到固定相的保留值，取步骤(1)制备的三萜皂苷粗提物，溶解于固定相中，进样量为20ml，以2ml/min的流速泵入流动相，紫外检测波长为210nm，根据检测器检测谱图，收集各峰的组分，将各峰对应的收集液分别浓缩，干燥。
实施例3
(1)细柱五加叶三萜皂苷粗提物的制备：
称取细柱五加叶，用10倍体积的乙醇水溶液提取，静置，过滤，然后在水浴中减压蒸馏回收溶剂，制得细柱五加叶提取物浸膏；细柱五加叶提取物浸膏用水分散，用石油醚萃取除去色素，然后依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，将正丁醇萃取物减压回收浓缩得到细柱五加叶三萜皂苷粗提物；
(2)高速逆流色谱法分离制备三萜皂苷化合物：
两相溶剂系统采用正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水体积比为3∶0.7∶1.2∶4.5，将该溶剂系统混合均匀后静置，分开上下相，超声35min，其中溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，以20ml/min的流速将上相泵入管路，待固定相充满整个管路后，停泵，启动主机，把转速调到945r/min，然后以1.5ml/min的流速泵入流动相，当上下相平衡时，记录固定相流出的体积，计算得到固定相流出的体积，计算得到固定相的保留值，取步骤(1)制备的三萜皂苷粗提物，溶解于固定相中，进样量为20ml，以1.5ml/min的流速泵入流动相，紫外检测波长为210nm，根据检测器检测谱图，收集各峰的组分，将各峰对应的收集液分别浓缩，干燥。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (5)

1.一种利用高速逆流色谱法从细柱五加叶中分离制备三萜皂苷化合物的方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下：
(1)取细柱五加叶，用6-15倍体积的溶剂提取，静置，过滤，然后减压蒸馏回收溶剂得到细柱五加叶提取物浸膏；细柱五加叶提取物浸膏用水分散，经低极性溶剂萃取除去色素后依次用脂肪酸酯、正丁醇萃取，将正丁醇萃取物减压蒸馏回收溶剂得到三萜皂苷粗提物；
(2)高速逆流色谱法分离制备三萜皂苷化合物的两相溶剂系统由脂肪酸酯、脂肪醇、甲醇和水组成，四种组分体积比为1-4∶0.2-0.8∶0.5-1.5∶2-5，将该溶剂系统混合均匀静置后，分开上下相，超声20-40min，溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，以16-40ml/min的流速将上相泵入管路，待固定相充满整个管路后，停泵，启动主机，然后以1.5-3ml/min的流速泵入流动相，当上下相平衡时，记录固定相流出的体积，计算得到固定相的保留值，取步骤(1)制备的三萜皂苷粗提物，溶解于固定相中，进样，根据检测器检测谱图，收集各峰的组分，将各峰对应的收集液分别浓缩，干燥。
2.如权利要求1所述的从细柱五加叶中分离制备三萜皂苷化合物的方法，其特征在于：步骤(1)中，提取溶剂为甲醇、乙醇、水中的一种或多种。
3.如权利要求1所述的从细柱五加叶中分离制备三萜皂苷化合物的方法，其特征在于：步骤(1)中，低极性溶剂为石油醚或正己烷。
4.如权利要求1所述的从细柱五加叶中分离制备三萜皂苷化合物的方法，其特征在于：步骤(2)中，脂肪酸酯为乙酸乙酯、甲酸乙酯或乙酸甲酯。
5.如权利要求1所述的从细柱五加叶中分离制备三萜皂苷化合物的方法，其特征在于：步骤(2)中，两相溶剂系统采用乙酸乙酯、正丁醇、甲醇和水四种组分体积比为3∶0.3∶0.8∶4，临用前分开上下相，超声40min，以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，以25ml/min的流速将上相泵入管路，带固定相充满整个管路后，停泵，启动主机，把转速调到900r/min，然后以2ml/min的流速泵入流动相，进样量为15ml，紫外检测波长为210nm，根据紫外检测谱图，收集各峰的组分，将各峰对应的收集液分别浓缩，干燥。
CN201711500927.1A 2017-12-28 2017-12-28 一种利用高速逆流色谱法从细柱五加叶中分离制备三萜皂苷化合物的方法 Pending CN109970837A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711500927.1A CN109970837A (zh) 2017-12-28 2017-12-28 一种利用高速逆流色谱法从细柱五加叶中分离制备三萜皂苷化合物的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711500927.1A CN109970837A (zh) 2017-12-28 2017-12-28 一种利用高速逆流色谱法从细柱五加叶中分离制备三萜皂苷化合物的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109970837A true CN109970837A (zh) 2019-07-05

Family

ID=67075866

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711500927.1A Pending CN109970837A (zh) 2017-12-28 2017-12-28 一种利用高速逆流色谱法从细柱五加叶中分离制备三萜皂苷化合物的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109970837A (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104003963A (zh) * 2014-05-30 2014-08-27 长沙高新技术产业开发区博海生物科技有限公司 一种川芎内酯的分离制备方法
CN107200767A (zh) * 2017-03-02 2017-09-26 长沙博海生物科技有限公司 一种降血糖活性成分科罗索酸的制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104003963A (zh) * 2014-05-30 2014-08-27 长沙高新技术产业开发区博海生物科技有限公司 一种川芎内酯的分离制备方法
CN107200767A (zh) * 2017-03-02 2017-09-26 长沙博海生物科技有限公司 一种降血糖活性成分科罗索酸的制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘向前 等: "细柱五加叶中羽扇豆烷型三萜成分", 《兰州大学学报(自然科学版)》 *
邹亲朋 等: "细柱五加叶甲醇提取物中的羽扇豆烷型三萜成分", 《兰州大学学报（自然科学版）》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105131077A (zh) 从破壁灵芝孢子粉中提取过氧麦角甾醇的方法
CN107200767A (zh) 一种降血糖活性成分科罗索酸的制备方法
CN106317148A (zh) 一种从蛹虫草中提取虫草素的方法
CN106317145B (zh) 紫甘蓝花色苷单体的分离纯化方法
CN102670680A (zh) 短柄五加总皂苷的提取方法
CN102260307A (zh) 一种特女贞苷的制备方法
CN105601693B (zh) 人参皂苷f1的制备及其抗肿瘤作用
CN106589050B (zh) 一种分离制备乳香单体的方法
CN100500689C (zh) 酸枣仁皂苷a和b的分离制备方法
CN108101954B (zh) 用动态轴向压缩柱分离纯化冷水七中三萜皂苷单体的方法
CN106831936B (zh) 采用中、高压制备液相法制备丹参酮iia和二氢丹参酮i的方法
CN109970837A (zh) 一种利用高速逆流色谱法从细柱五加叶中分离制备三萜皂苷化合物的方法
CN102532243B (zh) 一种同时制备野蔷薇苷和蔷薇苷化合物的方法
CN111718318B (zh) 一种基于逆流色谱分离皂角刺中黄酮单体的方法
CN109369382B (zh) 一种银杏酸类成分的制备方法
CN105085453B (zh) 一种利用高速逆流色谱法从马蔺子中分离制备低聚芪类化合物的方法
CN109810162A (zh) 一种利用高速逆流色谱法从细柱五加叶中分离制备三萜化合物的方法
CN107353296B (zh) 一种从东革阿里中提取活性蛋白和宽缨酮的方法
CN109912666A (zh) 一种从枳壳中同时提取高纯度柚皮苷与新橙皮苷的方法
CN114456138B (zh) 一种从佛手提取物中分离三种香豆素类化合物的方法
CN107074798B (zh) 红景天中提取草质素的方法
CN103965276A (zh) 从野马追中快速分离纯化单体化合物的方法
CN111718356B (zh) 一种分离制备墨旱莲单体的方法
CN103694098A (zh) 从马蔺子种皮中分离马蔺子甲素和马蔺子乙素的方法
CN112142636B (zh) 一种提取分离枸杞果实中玉米黄质及其棕榈酸酯色素单体的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190705

RJ01 Rejection of invention patent application after publication